JPH10140154A

JPH10140154A - 抗酸化剤

Info

Publication number: JPH10140154A
Application number: JP8296015A
Authority: JP
Inventors: Hideyuki Yamada; 英幸山田; Yorikiyo Fuwa; 順清不破; Masakazu Nomura; 正和野村
Original assignee: Seiren Co Ltd
Current assignee: Seiren Co Ltd
Priority date: 1996-11-08
Filing date: 1996-11-08
Publication date: 1998-05-26
Anticipated expiration: 2016-11-08
Also published as: JP3610358B2

Abstract

(57)【要約】【課題】水溶性で、安定性及び安全性が高く、すぐれ
た過酸化脂質抑制効果を有する抗酸化剤を提供する。【解決手段】セリシンを有効成分とする抗酸化剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、例えば、食品、化
粧品、医薬品等の分野に於いて利用可能な新規抗酸化剤
に関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、医学や生化学等の分野の研究によ
ると、心筋梗塞、動脈硬化、糖尿病、癌、脳卒中などの
生活習慣病（成人病）や、シミ、ソバカス、ニキビ、湿
疹などの皮膚障害の原因の少なくとも一部は、生体内で
生成、蓄積される過酸化脂質に起因しているといわれて
いる。このような問題を解消するものとして、従来、植
物、海産物、微生物等の天然物中から抽出された抗酸化
剤や化学的に合成された抗酸化剤が知られている。例え
ば、天然抗酸化物質として、ビタミンＥ（トコフェロー
ル）、ビタミンＣ（Ｌ−アスコルビン酸）、または生体
内の酵素であるＳＯＤ（スーパーオキシドディスムター
ゼ）様物質が抗酸化剤として利用されている。また、合
成抗酸化物質として、ＢＨＡ（ブチルヒドロキシアニソ
ール）、ＢＨＴ（ブチルヒドロキシトルエン）等のフェ
ノール系誘導体が抗酸化剤として知られている。

【０００３】しかしながら、天然の抗酸化剤の場合、例
えばＳＯＤは精製が困難であるため著しく高価であり、
酵素系タンパク質であることから、加熱によって失活す
る欠点もある。他の抗酸化性タンパク質も知られている
が、いずれもこのＳＯＤと同様の欠点がある。また、合
成抗酸化剤は、安全性の面で問題があり、特にＢＨＡに
は発癌性が疑われている。また、食用の場合、使用量・
使用範囲を制限されているものが多い。通常、天然・合
成の抗酸化剤の多くは脂溶性であり、天然抗酸化剤の場
合、例えばビタミンＥやβ−カロチンは生体内で優れた
過酸化脂質抑制効果を有するが、水に溶けにくいため適
用範囲が制限されるという問題がある。水溶性の天然の
抗酸化剤は限られており、例えばビタミンＣ、グルタチ
オン、尿酸、およびＳＯＤなどがある。しかしながら、
ビタミンＣとグルタチオンは、金属イオンの存在下でプ
ロオキシダント（酸化促進剤）として作用する場合があ
り、条件によっては脂肪の過酸化をむしろ促進する欠点
がある。尿酸は水溶性ではあるが水に溶けにくく、生体
内で蓄積すると痛風や腎結石の原因ともなる。さらに、
ビタミンＣに匹敵する高い過酸化脂質抑制効果を有する
天然の水溶性抗酸化剤は、ほとんど見つけられていない
という問題もあった。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、水溶
性で、熱を加えても失活せず、人体に対し安全で、ビタ
ミンＣに匹敵する過酸化脂質抑制効果を有する新規抗酸
化剤を提供することにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は、セリシンを有
効成分とする抗酸化剤である。本発明で用いるセリシン
としては、繭又は生糸から抽出した高純度のセリシン
（加水分解物を含む）が好ましく用いられる。非加水分
解物としてのセリシンは、繭又は生糸から一般的に行わ
れる抽出方法で得ることができる。例えば以下のように
して純度９０％以上の高精製度の単一タンパク質の状態
で抽出できる。即ち、繭又は生糸に含有されるセリシン
を、水によって抽出し、例えば後述の（１），（２）の
いずれかの方法で回収する。またセリシンの加水分解物
は、繭又は生糸から一般的に行われる抽出方法で得るこ
とができる。例えば以下のようにして純度９０％以上の
高精製度のタンパク質（ペプチド）の状態で抽出でき
る。即ち、繭又は生糸に含有されるセリシンを、酸、ア
ルカリ、あるいは酵素によって部分加水分解して抽出し
てから、例えば次の（１），（２）のいずれかの方法で
回収する。（１）メタノール、エタノール、ジオキサン等の水溶
性有機溶媒を混合してセリシンを析出させた後、これを
濾別乾燥して、セリシンを粉体として得る。（２）特開平４−２０２４３５号公報に提案されてい
るように、限外濾過膜、あるいは逆浸透膜に付した後、
乾燥することによりセリシン粉体を得る。かくして得た非加水分解物又は加水分解物としてのセリ
シンは抗酸化剤としての使用意図に応じて粉末状、水溶
液状等適宜の形態で用いられる。

【０００６】食品、食品添加物、化粧品、外用薬、医薬
品等に従来の抗酸化剤と同様に添加されうる。例えば食
品、食品添加物、化粧品、外用薬等におけるセリシンの
添加量は通常０．１〜５０重量％、好ましくは０．５〜
５重量％程度である。セリシンは毒性がなくまた水溶性
にも優れるため多量に添加ないし摂取しても特段の問題
は生じない。化粧料や外用薬における剤型としてはクリ
ーム、乳液、ファウンデーション、パック、ローション
状、ゲル状、溶液状、スティック状等がある。またこれ
らには適宜の成分、例えば油剤、保湿剤、増粘剤、防腐
剤、乳化剤、顔料、ｐＨ調製剤、他の薬効成分、紫外線
吸収剤、香料等を配合しうる。また医薬品として経口投
与することもできる。この場合の投与量も特に制限され
ないが前記した生活習慣病においては例えば１０〜１０
００ｍｇ／日程度が投与される。次に、本発明を実施例
により具体的に説明する。

【０００７】

【実施例】

〔実施例１〕生糸からなる絹織物１Ｋｇを、水５０Ｌ
（リットル）中で９５℃にて２時間処理し、セリシンを
抽出した。得られた抽出液を平均孔径０．２μｍのフィ
ルターで濾過し、凝集物を除去した後、濾液を逆浸透膜
により脱塩し、濃度０．２％の無色透明のセリシン水溶
液を得た。この水溶液をエバポレーターを用いてセリシ
ン濃度約２％にまで濃縮した後、凍結乾燥を行って、純
度９５％以上、平均分子量１００，０００のセリシン粉
体（以下、セリシンＨ）１００ｇを得た。

【０００８】〔実施例２〕生糸からなる絹織物１Ｋｇ
を、０．２％炭酸ナトリウム水（ｐＨ１１〜１２）５０
Ｌ中で９５℃にて２時間処理し、セリシン加水分解物を
抽出した。得られた抽出液を平均孔径０．２μｍのフィ
ルターで濾過し、凝集物を除去した後、濾液を逆浸透膜
により脱塩し、濃度０．２％の無色透明のセリシン加水
分解物抽出液を得た。この抽出液をエバポレーターを用
いてセリシン濃度約２％にまで濃縮した後、凍結乾燥を
行って、純度９０％以上、平均分子量２０，０００のセ
リシン加水分解物粉体（以下、セリシンＬ）１００ｇを
得た。

【０００９】〔試験例１〕（１）ラット脳ホモジネート液の調製冷凍保存したラット脳１ｇに０．０７５Ｍのリン酸緩衝
液（ｐＨ７．５）を９ｍｌ加え、氷冷下でホモジナイズ
した（以下、ホモジネート液）。（２）生体内過酸化脂質抑制試験このホモジネート液０．５ｍｌに、それぞれセリシンＬ
とセリシンＨを含む０．０７５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７．５）を３．５ｍｌ加え、３７℃で２時間インキュベ
ートした。このときのそれぞれのセリシンの最終濃度は
０．０２〜０．５％とした。インキュベーション直前と
２時間のインキュベーション後のそれぞれ０．５ｍｌを
採取し、ＴＢＡ（Ｔｈｉｏｂａｒｂｉｔｕｒｉｃａｃ
ｉｄ）法によって過酸化脂質量の指標であるＴＢＡＲＳ
（Ｔｈｉｏｂａｒｂｉｔｕｒｉｃａｃｉｄｒｅａｃｔ
ｉｖｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）を測定した。セリシン
の抗酸化能は、セリシンを添加しない場合のＴＢＡＲＳ
量とセリシンを添加した場合のＴＢＡＲＳ量から次の式
１によって計算し、インキュベーションによる過酸化脂
質増加の抑制率として表した。本試験例と以下に示す試
験例２〜５ではいずれの場合も、３回試験を繰り返し、
得られた値の平均値で結果を示した。式１抑制率（％）＝（１−Ａ／Ｂ）×１００Ａ：過酸化脂質抑制剤（抗酸化剤）を添加したときのＴ
ＢＡＲＳ量の増加値Ｂ：過酸化脂質抑制剤（抗酸化剤）を添加しないときの
ＴＢＡＲＳ量の増加値

【００１０】ＴＢＡ法試料０．５ｍｌに８％トリクロル酢酸溶液２．５ｍｌと
０．６７％チオバルビツール酸溶液２．０ｍｌを加え、
十分に混和した後、沸騰水浴中で１５分間加熱した。つ
いで、２０００ｘｇで１０分間遠心分離を行った後、そ
の上澄み液の５３５ｎｍにおける吸光度を測定し、ＴＢ
ＡＲＳ量を求めた。標準として１，１，３，３−テトラ
エトキシプロパンを用いた。

【００１１】表１抑制率（％）濃度セリシンＬセリシンＨ０．０２％９１２０．０５％１８２７０．１％５５２００．３％１００５４０．５％９５９５表１のようにセリシンＬ、セリシンＨの両方で抗酸化能
が存在することが確認された。この結果より、いずれの
分子量のセリシンでも抗酸化能が存在することが確認さ
れた。

【００１２】〔試験例２〕（１）ラット脳ホモジネート液の調製試験例１と同様に行った。（２）生体内過酸化脂質抑制試験ホモジネート液０．５ｍｌに、それぞれセリシンＬ、ア
スコルビン酸（ビタミンＣ）、牛血清アルブミンを含む
０．０７５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）を３．５ｍｌ
加え、３７℃で２時間インキュベートした。セリシン
Ｌ、アスコルビン酸、およびアルブミンの最終濃度は
０．０１％〜１．０％とした。インキュベート後に試験
例１と同様にＴＢＡ法によってＴＢＡＲＳ量を測定し、
それぞれ添加物の抗酸化能を求めた。表２濃度セリシンＬアスコルビン酸アルブミン０．０１％３ −３９ −６０．０５％１３３９ −４０．１％８６８７ −１２０．５％９６９７２０１．０％９７９６３０表２のように、セリシンの抗酸化能のレベルは、強力な
抗酸化能を持つといわれるビタミンＣに匹敵するもので
あることが確認された。また、ビタミンＣの場合は０．
０１％の低い濃度域では、酸化を促進する欠点が見られ
たが、セリシンの場合は、このような現象は見られなか
った。

【００１３】〔試験例３〕（１）ラット脳ホモジネート液の調製試験例１と同様に行った。（２）生体内過酸化脂質抑制試験ホモジネート液０．５ｍｌにそれぞれセリシンＬとセリ
シンＨを含む０．０７５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）
を３．５ｍｌ加え、３７℃で２時間インキュベートし
た。また、予めセリシンＬとセリシンＨを含む０．０７
５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）を２時間沸騰水浴中で
加熱した物３．５ｍｌをホモジネート液０．５ｍｌに加
え、３７℃で２時間インキュベートした。セリシンの最
終濃度は０．５％とした。試験例１と同様にＴＢＡ法に
よってＴＢＡＲＳ量を測定し、過酸化脂質増加の抑制率
を求めた。表３抑制率（％）０．５％非加熱セリシンＬ９９０．５％加熱セリシンＬ９９０．５％非加熱セリシンＨ８５０．５％加熱セリシンＨ７８セリシンＬ、セリシンＨを２時間沸騰水浴中で加熱した
後、抗酸化能を測定しても、加熱する前の抗酸化能と殆
ど変化がなかった。この結果より、セリシンの抗酸化能
は、加熱によっても失活しないことが分かった。

【００１４】〔試験例４〕（１）ラット脳ホモジネート液の調製試験例１と同様に行った。（２）生体内過酸化脂質抑制試験ホモジネート液０．５ｍｌにセリシンを含むリン酸緩衝
液（ｐＨ７．５）を３．５ｍｌ加え、３７℃で２時間イ
ンキュベートした。セリシンＬの最終濃度は０．１％あ
るいは０．２５％とした。インキュベート後に０．５ｍ
ｌ採取し、これに２．５ｍｌのエチルエーテル／エタノ
ール（１：３，ｖ／ｖ）を加えて、１分間激しく振とう
した。ついで、１０００ｘｇで５分間遠心分離し、上層
の２３４ｎｍにおける吸光度を測定して過酸化脂質量
（共役ジエン）の指標とした。ここでも〔試験例１〕と
同様にセリシンの抗酸化能を過酸化脂質増加の抑制率
（％）として表した。表４抑制率（％）０．１％セリシンＬ８００．２５％セリシンＬ８６試験例１〜３ではＴＢＡＲＳを過酸化脂質量の指標とし
たが、試験例４では共役ジエンを過酸化脂質の指標とし
た。これら異なる指標両者においても、セリシンには、
強力な抗酸化能が存在することが確認された。

【００１５】〔試験例５〕１６０μＭアラキドン酸、１
５０μＭＦｅＣｌ₃，１．０ｍＭアスコルビン酸ナト
リウムおよび０．３％セリシンを含む１００ｍＭ炭酸緩
衝液（ｐＨ７．４）１ｍｌを３７℃で１時間インキュベ
ートした。インキュベート後、トリクロル酢酸とチオバ
ルビツール酸混合液（１５％トリクロル酢酸、０．３７
５％チオバルビツール酸および０．２５Ｎ塩酸を含む）
を２ｍｌ加えよく攪拌した。ついで、０．１％牛血清ア
ルブミンを１ｍｌ加え、沸騰水浴中で１５分間加熱し
た。ついで遠心分離した後、上澄み液の５３５ｎｍの吸
光度を測定し、ＴＢＡＲＳ量を求めた。標準として１，
１，３，３−テトラエトキシプロパンを用いた。本試験
でもセリシンを添加しない場合との比較からセリシンの
抗酸化能を示した。表５抑制率（％）０．３％セリシンＬ９３０．３％セリシンＨ９５試験例１〜４は生体成分系を用いた例であるが、試験例
５は純粋な化合物からなる系を実験系として用いた例で
ある。これら異なる実験系を用いた場合においても、セ
リシンには抗酸化能が存在することが確認された。試験
例４および試験例５の結果より、セリシンの抗酸化能の
存在は、より信頼性の高いものであり、特定の実験系で
のみ見られる現象ではないことを示唆している。

【００１６】

【発明の効果】本発明の抗酸化剤は、水溶性であるため
油脂含量の低い製品にも用いることができ、しかもビタ
ミンＣに見られる低濃度域での過酸化脂質促進作用が無
く高い過酸化脂質抑制効果を持つ。また、本発明の抗酸
化剤は天然物由来のタンパク質系抗酸化剤としての特性
をもち、生体内ではプロテアーゼにより容易に加水分解
されるので、蓄積性が無く高い安全性を有し、食品、化
粧品、医薬品などの分野で、広く抗酸化剤として利用で
きるものであり、しかも、加熱処理を行っても抗酸化能
が不活性化しないという特徴がある。更に、本発明の抗
酸化剤は、繭又は生糸の溶媒抽出物から、容易にしかも
単一のタンパク質としては高い純度で抽出できるため、
安価に得られ、しかも水溶液の色が無色透明であるの
で、消色する必要が無く、複雑な処理工程を必要としな
いという大きな利点がある。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 38/00 ＡＤＡＡ６１Ｋ 47/42 Ｚ 47/42 37/02 ＡＤＡ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】セリシンを有効成分とする抗酸化剤。
【請求項２】セリシンが繭又は生糸から抽出した天然
セリシンである請求項１記載の抗酸化剤。
【請求項３】セリシンが天然セリシンの加水分解物で
ある請求項１記載の抗酸化剤。