JPH09509830A

JPH09509830A - キシラナーゼを用いる植物物質の処理

Info

Publication number: JPH09509830A
Application number: JP7522639A
Authority: JP
Inventors: セイェルスゴールズヤコブセン，ティナ; ピーターヘルド−ハンセン，ハンス; ベンクコフォド，レーネ; バゲール，クリスチャン; ミュラーツェ，アネット
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 1994-03-02
Filing date: 1995-02-24
Publication date: 1997-10-07
Also published as: WO1995023514A1; KR970701500A; US5874274A; DE69533473T2; CN1144457A; ATE275343T1; ES2229237T3; AU696360B2; AU1755095A; DE69533473D1; EP0746206A1; EP0746206B1; CA2184591A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、植物物質の粘度を減少する方法に関し、この方法はｉ）添加されるタンパク質１mg当たり0.06以上のWSPSおよび／又はii）添加されるタンパク質１mg当たり15以上のWSPU、および／又はiii）タンパク質１mg当たり 0.053FVRU以上の比活性を有するキシラナーゼを用いて該植物物質を処理することを含んでなる。更に、本発明はタンパク質物質、例えば小麦を個々の有用な成分に分離するためのキシラナーゼ調製品の使用並びにそのような粘度減少又は分離のためのプロセスに関する。

Description

【発明の詳細な説明】キシラナーゼを用いる植物物質の処理発明の分野本発明は、植物物質の粘度を減少するためおよび植物物質、例えば小麦を個々の有用成分に分離するためのキシラナーゼ調製品の使用並びにそのような粘度減又は分離方法に関する。発明の背景小麦は、湿式微粉砕プロセスで回収できるグルテンおよびデンプンの価値ある成分を含有する。生命に欠くことのできないグルテンは、主要産物であり、一方高品質Ａ−デンプンおよび低品質Ｂ−デンプンは価値ある副産物である。残余繊維および可溶性固体は、更に副産物である。商業的に入手可能なトリコデルマレセイセルラーゼ酵素調製品、Spezyme(商標 )CP（ゲネルコール、米国）は粘度の低下並びに小麦およびとうもろこしデンプン加工の改良のために提案された。 Weegels 等（1992）は、小麦分離方法において酵素（セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、リパーゼおよびプロテアーゼ／アミラーゼ）の使用を記載する。次のように結論している；すなわちセルラーゼおよびヘミセルラーゼは、小麦の加工性を改善しそしてグルテンおよびデンプンの収率を増大する。用いられたヘミセルラーゼは、アミラーゼおよびプロテアーゼ活性を含む意義ある副活性を有するキシラナーゼ調製品であった。以下の内容は公知である：すなわち、キシラナーゼは小麦粉および他の植物由来物質を多くの異なる分解産物に分解し得る。菌類種アスペルギルスアワモリの菌株から精製されたキシラナーゼは、多くの文献に記載されており、例えば Kormelink等（1993）は３種のＡ．アワモリエンド−キシラナーゼの物理化学的および動力学的性質を開示している。米ぬか、オートスペルト、小麦粉、カラマツ材；およびカバノキ材を含む種々の植物物質の酵素分解におけるそのようなＡ．アワモリキシラナーゼの使用によって得られる分解産物は、特に、Kormelink et al.，(1991)，Kormelink et al.，(1992)，J.M.Kormel ink and A.G.J．Voragen (1993)，Gruppen et al.,（1992）、および Gruppen e t al，Symposium October 1993によって記載されている。 Voragen et al.，(1992)および Gruppen et al.,（1993ａおよび1993ｂ）は、Ａ．アワモリエンド−キシラナーゼによる小麦粉から単離した水抽出性および水非抽出性アラビノキシラン抽出物の分解を開示する。後者の文献は、小麦粉の焼き上げにおける２種のＡ．アワモリキシラナーゼの使用を開示する。 Shei et al.,（1985）およびFournier et al.,（1985）は、Ａ．ニガーから単離したエンドキシラナーゼの精製および特性を記載している。前記文献のいずれもキシラナーゼが小麦の分離に使用できることは言及しておらず、又は該目的に対する特定の使用のキシラナーゼの選択がいかになされるかについて言及していない。非デンプン多糖類の分解におけるエンドキシラナーゼの使用を開示しそしてViё tor et al.,（1993）はビール醸造方法中麦芽汁の粘度の減少におけるエンドキシラナーゼの使用を開示する。本発明の目的は、植物物質の粘度を改良するためおよび植物物質を望ましい成分に分離するための改良された方法を提供することにある。図面の簡単な説明図１は、他の酵素と組合わせたキシラナーゼIIの比粘度を示す。図２は、湿式微粉砕小麦分離方法における原理を示す。図３は、ブロイラー（Broilers）中小麦のAMEnを示す。 BF⁺＝Bio −Feed（商標）・プラス XylII＝キシラナーゼII 本発明において、WSPU（水溶性ペントソン単位）は、水溶性ペントサンに関しタンパク質１ｇ当たりキシラナーゼ調製品の活性として定義されそしてWIPU（水不溶性単位）は、タンパク質１mg当たり水不活性ペントサンに関する活性として定義され、ここで活性は還元糖として測定される。それぞれ、可溶性および不溶性ペントサンの生成は、以下の物質および方法の節において記載されている。例４において、WSPUおよびWIPUを測定する分析が記載される。WSPSは添加されるタンパク質１mg当たりWSPUとWIPU間の比であり、ここで生成物は Kjelclahlに従って測定される、本発明の物質および方法の節参照のこと。本発明において、語句「添加されるタンパク質」は、キシラン分解活性を含んでなるタンパク質であることが意図され、これは酵素が製造された発酵ブロスから回収され、これは引き続き本発明の目的に用いられる。従ってWSPS，WSPUおよびFVRU値を与えられた酵素について定義されるものとして評価するとき、語句「 mgタンパク質」は発酵ブロスから回収されるとき酵素に関係したmgタンパク質を言及しそして不活性な又は添加される非キシラン不活タンパク質は言及しない。以下の内容が理解されるであろう；すなわち本発明の目的に対し使用されるべきキシラナーゼ調製品は、従来技術のキシラナーゼおよびセルラーゼと比較してmgタンパク質当たり実質的にキシラン分解活性を有する。このことは、本発明のキシラナーゼ調製品の驚くべき低用量（mgタンパク質で）を用いることにより、実質的粘度減少（比較度と表わされる）および小麦分離能力のそれぞれが得られる。本発明で用いられるべき酵素は、好ましくは単成分酵素でありこれは典型的には、高度に純粋な形（すなわちキシラン分解活性と比較して好ましくない副活性の相当に低い量を含んでなる）で組換えDNA 工学を用い高純度で典型的に製造される。 FVRUは、添加されるmgタンパク質当たり、WO92／03540 に記載される如くバシラスプミラスDSM6124 により生産されたキシラナーゼの標準酵素調製品の比粘度に関する酵素の比粘度として定義される。該酵素は、以下の開示においてＢ．プミラスキシラナーゼと称される。Ｂ．プミラス調製品の比粘度は添加されるmgＢ．プミラスキシラナーゼタンパク質に関して測定される。比粘度は例１で記載される如く測定される。前記特定のキシラナーゼは小麦の分離において特にその使用が意図される。従って、本発明者らは小麦の分離における良好な性能は、水溶性小麦ペントサンを非常にすみやかに分解しそして水不要性小麦ペントサンを極めて遅い速度で分解する。理論に制限されることなく、次のように信じられる；すなわち小麦の分離における良好な性能は粘性の水溶性ペントサンの分解によりもたらされる。不溶性ペントサンの低分解は、本発明で特定したキシラナーゼにより得られる粘度減少において重要である；何故なら可容化不溶性ペンタサンは粘度を増加するであろうから。別の面において、本発明は植物物質を対象成分に分離する方法および植物物質の粘度を修正する方法に関し、これらの方法において前記の如きキシラナーゼ調製品が用いられる。発明の詳細な開示キシラナーゼ調製品前記の開示から理解されるように、本発明の目的に対し用いられるべきキシラナーゼ調製品の活性（WSPS又はWSPUを用いて定義される如き）は、重要であると考えられる。本発明の目的に対し用いられるべきキシラナーゼ調製品は、0.06以上のより高い添加されるタンパク質１mg当たりWSPSを有するものであることが好ましい。好ましくは添加されるWSPSはタンパク質１mg当たり0.06ないし多くて10.0の範囲内であり、より好ましくはタンパク質１mg当たり少なくとも 0.7ないし多くて 8.0 であり、更により好ましくはタンパク質１mg当たり 0.9〜6.0 であり、特にタンパク質１mg当たり少なくとも 1.5〜4.0 であり、および／又は添加されるタンパク質１mg当たり15以上、例えば25以上のWSPUである。好ましくは、添加されるタンパク質１mg当たりWSPUは少なくとも 100〜多くて150,000 、より好ましくは少なくとも 130〜多くて120,000 、例えば少なくとも 160〜多くて100,000 、より好ましくは少なくとも 300〜多くて90,000でありそして更に好ましくは少なくとも20,000〜多くて58,000、でありおよび／又は好ましくはタンパク質１mg当たり少なくとも 0.053FVRUの比活性である。好ましくは比活性は 0.053〜3.0 FVRU／ mgタンパク質の範囲内にあり、例えば0.4，0.5、又は 0.6〜3.0 FVRU／mgタンパク質、より好ましくは 0.1〜2.0 FVRU／mgタンパク質、更に好ましくは 0.4〜1. 0 FVRU／mgタンパク質の範囲内にある。キシラナーゼは多くの菌類種、特にアスペルギルス種、例えばＡ．ニガー、Ａ．アワモリ、Ａ．アクレアタスおよびＡ．アリゼ、トリコデルマ例えばＴ．レセイ又はＴ．ハルジアウム、ペニシリウム、例えばＰ．カメンベルティ、フサリアム、例えばＦ．オキシスポラム、およびフミコラ、例えばＨ．ラヌギノサ、およびＨ．インソレンスにおいて見出されてきた。キシラナーゼは細菌種、例えば属バシラス、例えばＢ．プミラスにおいて見出された。本発明に対し使用されるキシラナーゼ調製品は、ａ）当業者に公知の方法でキシラナーゼ生産生物体からキシラナーゼ調製品を単離し、引き続き、ｂ）それが本発明の目的に適当であるか否かを評価するために本発明で記載した如きキシラナーゼのWSPS，WSPUおよび／又はFVRU活性を試験することを含んでなる方法によって提供される。ａ）において言及されたキシラナーゼ生産生物体は、キシラナーゼの天然の生産体又は対象のキシラナーゼをコードする DNAで形質転換された生物体であってよい。以下の内容が見出された：すなわち菌類種Ａ．アクレアス(aculeatus)、特に菌株CBS 101.43は本発明の目的に対し特に有効なキシラナーゼを生産する。該キシラナーゼは、本発明の開示においてキシラナーゼII（又はXyl II）と称されそして更に本出願で引用された WO 94／21785 に記載されている。例４において、多数の従来技術のキシラナーゼのWSPSおよびWSPU値はそれぞれキシラナーゼIIのそれと共に掲げられている。更に、これらの酵素の小麦分離の効果（FVRUとして現わされる）が示される。これらの従来技術のキシラナーゼのいずれも、本発明で記載したキシラナーゼIIのそれと匹敵し得る小麦分離効果を示す。キシラナーゼIIをコードする DNA配列は、 WO 94／21785 に示されそして対応するアミノ酸配列は配列番号５に示される。次のように考えられている；すなわちキシラナーゼIIに相同性を示すキシラナーゼは、キシラナーゼIIと類似の活性パターンを有しそして本発明に対し有用である。従って、特に好ましい態様において本発明で用いられるべきキシラナーゼは、ｉ）が国際公開（WO）94／21785 の配列番号２によって示される DNA配列又はキシラナーゼIIの同族体をコードするその類似体によってコードされ、 ii）WO94／21785 の配列番号５で示されるアミノ酸配列又はその類似体の配列を含んでなり、および／又は iii）アスペルギルスアクレタス、CBS 101.43から由来する精製キシラナーゼに対して生起した抗体と免疫学的に反応性である、キシラナーゼである。本発明において、語句「同族体」は、（５×SSC 中プレソーキングおよび５× SSC の溶液、５×Denhardt's溶液、50mMリン酸ナトリウム、 pH6.8および50μｇの変性音波処理ウシ胸腺DNA 中約40℃で１時間予備ハイブリッド形成、ついで50 μCi 32-p-dCTP標識プロープを加えた同溶液中約40℃で18時間ハイブリッド形成しついで２×SSC 、 0.2％ SDS中40℃で30分３回洗浄するような）一定の特異的条件下キシラナーゼIIをコードする DNA配列の基礎にして作成したオリゴヌクレオチドプロープとハイブリッド形成する DNA配列によってコードされるキシラナーゼ活性（本発明に定義されるWSPS，WSPUおよび／又はFVRUによる）を示すポリペプチドを示すことが意図される。より特異的には、語句は WO 94／21785 の配列番号２で示される DNA配列又はその実質的部分の少なくとも70％相同性、例えば少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％又は WO 94／21785 の配列番号２の DNA配列又はキシラナーゼ活性を有するポリペプチドをコードするその実質的部分の少なくとも95％相同性である DNA配列を言及することが意図される。語句は WO 94／21785 の DNA配列配列番号２の修飾を含むことが意図され、例えばヌクレオチド置換であり、これはキシラナーゼの別のアミノ酸配列を（生じないが、しかし DNA構築体が導入される宿主生物体のコドン使用に相当する、あるいは又ヌクレオチド置換であり、これは異なるアミノ酸配列を生ぜずそして従っておそらく天然酵素とは異なる性質を有するキシラナーゼ変異体を生じるかもしれない異なるタンパク質製造であろう。可能な修飾の他の例は、配列への１以上のコドンの挿入、配列の一方端に１以上のコドンの添加、又は配列の一方端で又は配列内で１以上のコドンの欠失である。本発明で特定されるキシラナーゼIIの同族体は、キシラナーゼ活性が本発明で定義されている限り、多数の異なるアミノ酸残基を含んでなる。キシラナーゼIIの生産およびその特徴は、本発明で含まれる WO94／21785 で示される開示から明らかである。本発明で用いられるべきキシラナーゼ調製品は、適当な技術を用い対象の微生物から得られる。例えば、キシラナーゼ調製品は、微生物の発酵次いで当業者に公知方法による酵素の単離により得られるがしかし、より好ましくは、当業者に公知の組換えDNA 工学による。そのような方法は通常対象のキシラナーゼをコードする DNA配列を発現しかつ有する組換え体 DNAベクターで形質転換された宿主細胞を、酵素の発現を許容する条件下培養基内で培養し次いで培養物から酵素を回収することを含んでなる。本発明の範囲内において、酵素調製品は先に特定したキシラナーゼ特徴ａ）− ｃ）を有する微生物に由来した単成分酵素（すなわち実質的に副作用なし）から調製される。本発明のキシラナーゼは、成分酵素を単離後、WSPS，WSPUおよびFV RU値を測定することによって同定される。用いるべきキシラナーゼをコードする DNA配列は、あらゆる起源、例えばcDNA配列、ゲノム配列、合成配列、又はこれらの任意の組合わせであってよい。本発明の同時に適したキシラナーゼの調製は、 WO 94／21785 に詳しくのべられている。キシラナーゼが小麦の分離のための本発明方法（又はデンプンが製造される他の方法）において用いられるとき、キシラナーゼ調製品は実質的にアミラーゼを含まないことが好ましく、存在するアミラーゼ活性は製造されるべきデンプンを分解する可能性がある。対応して、キシラナーゼがタンパク質の生産において、例えばグルテンが生産される本発明の小麦分離方法において使用されるとき、キシラナーゼ調製品は実質的にプロテアーゼを有しないことが好ましく、この後者の酵素は生産されるべきグルテンを害するであろう。アミラーゼおよびプロテアーゼ活性は公知方法により除去できる。１つの例はトレオー失活でありこれはアスペルギルスオリゼにおいて生産されるキシラナーゼIIに関連して特に有利であり、何故ならキシラナーゼIIは一般にアミラーゼおよび該宿主細胞により生産されるプロテアーゼよりはより熱安定性である。以下の内容が見出された；すなわち本発明の植物物質分離で得られるキシラナーゼ活性は、キシラナーゼがセルラーゼと共に用いられるとき相当に改善され得る。従って、本発明で用いられるべきキシラナーゼ調製品は、セルラーゼを含んでなる。セルラーゼは好ましくは、例えば線状菌類（例えば、アスペルギルス、トリコデルマ、フミコラ、フサリアム）の菌株から由来する微生物起源のものである。本発明の目的に適当なセルラーゼの特異的例には、Ｈ．インソレンスから由来するエンド−グルカナーゼ（エンド−グルカナーゼＩ）および更に WO 91／17 244 中の図14のアミノ酸配列により特定されたエンドグルカナーゼおよび WO 91 ／17243 で記載の43kD Ｈ．インソレンスエンドグルカナーゼが含まれる。本発明で記載のキシラナーゼと組合せて使用できる商業的に入手可能なセルラーゼ調製品には、Celluclast(商標)(ノボノルディスクＡ／Ｓより入手可能) 、S pezyme(商標)CP（ジェネンカ、米国よ入手可能）が含まれる。植物物質分離方法キシランを含んでなる植物物質（例えば軟木および硬木）は本発明に従って処理できるけれども、植物物質は科Poaceae(Syn：Graminaceae)から由来しそして特に穀物例えば小麦、ライ麦、大麦、又はからす麦から製造される。植物物質は加えて植物又は果実起源であってもよく、例えばトウモロコシ、米、モロコシの外皮、又は果実の外皮から製造される。植物物質は前記の植物の任意の組合せから製造できそして加えて非植物物質を含んでいてもよい。本発明に従って処理すべき植物物質は、任意の適当な形であってよい。以下に更に説明するように、植物物質は好都合には連続プロセスを可能とするポンプ操作可能分散液又は溶液の形態であってよい。この分散液は、通常、乾燥粉砕物質、特に平均粒径50−100 μｍの小麦を水と混合することによって作成される。本発明に従って加工されるべき今日好ましい植物物質は、小麦である。本発明方法により、小麦はグルテン、デンプンおよび繊維分画に分離される。そのように製造されたグルテンは、例えば粉に添加されその焼成特性を改善するか、又は肉、朝食穀物およびペットフードの如き製品の栄養上の価値を改善するために用いられる。デンプンは、例えばシロップ生産に対し、製紙産業において、例えばペーパーコーティングにおいてそして繊維産業において用いられる。繊維分画は、例えば動物飼料に用いて用いられる。以下において、植物物質を分離するための本発明方法は、小麦の分離を参照して記載される。しかし、次のように理解されるであろう；すなわち、前記の植物物質の他のタイプのいずれかの分離は、類似のタイプの方法並びに与えられた植物物質の分離に対してどのタイプのプロセスを選定すべきかを知っている当業者により行なわれるであろう；注例えば“Starch Production technology”,J.A.R adley 編を参照。図２において小麦分離方法を説明するフローシートを示す。本発明方法は、公知のあらゆる工学的小麦分離方法により行うことができる。しかし、いわゆるバタープロセス（又は湿式微粉砕プロセス）を用いることが今日好ましく、ここにおいて出発物質は分離されるべき小麦の希釈ポンプ操作可能な分散液である。通常、分散液は小麦粉および水から作成される。分散液の乾燥物質含量は、30〜50％の範囲内である。２つの主なタイプのバタープロセス（ba tter processes）が公知である１：ヒドロクローンプロセス（hydroclone proce ss）とデカンタープロセス（decanter process）である。これらのプロセスは、水の消費が比較的少ない点で有利である。ヒドロサイクローンプロセス（hydrocyclone process）において、粉を先ず水と混合し練り粉を作り、次いでこれを更に希釈しそしてグルテンが固まる撹拌集塊タンクに通す。小量のグルテン固よりおよびデンプンを有する分散体を、ヒドロサイクローンのセットにポンプで送り、ここで遠心分離が起こる。グルテンと “Ｂ”−デンプンの最も軽い分画は、ヒドロクローンと共に頂部を出てそしてグルテンはスクリーンにより“Ｂ”−デンプンから分離される。ヒドロクローンからの底流は主に“Ａ”−デンプンから成り、一方ペントサン（又は繊維）は、両方の分画において見出される。分画は更に一連の洗浄／濃縮工程により更に洗浄化される。デカンタープロセスは、少なくとも１つの主な点においてすなわちグルテンが固まるときにおいてヒドロサイクロンプロセスと異なる。デカンタープロセスにおいて、次の内容は重要である；すなわちバター（batter）の濃度はグルテンが二相又は三相デカンター中で分離する前により大きな塊を形成するのを避けるように保持される。分離する前に、混合された粉／水分散体をホモジナイザー内をポンプで通す−このホモジナイザーはグルテンの固より開始および分離前分散の追加の希釈の生起を開始する高せん断力を有する特別なピン微粉砕機である。二相デカンターの場合において底流はむしろ洗浄な“Ａ”−デンプンを含有しそしてオーバーフローはグルテン、“Ｂ”−デンプンおよびペントサンを含有する。三相デカンターに対し、“Ａ”−デンプンに加えて二相は、幾分“Ｂ”−デンプンを有するグルテンを有しそして一つの相は“Ｂ”−デンプンおよびペントサンを有するグルテンを有する。本発明で特定したキシラナーゼが、小麦の分離に用いられるとき、ドウ(dough )の混合および均質化の改善された能力、改善された分離能力、（蒸発および乾燥時にエネルギーの消費を減少する）ペントサン分画における減少せしめられた粘度およびデカンター上の減少せしめられたアンペア消費を得ることが可能である。更に、高純度の目的生成物が達成されそしてプロセス時間は、減少せしめられた粘度により可能となった増加せしめられた流動性のために減少できる植物物質の分離プロセスは、pH３〜８、例えばpH４〜７、特にpH5.5 〜6.5 の範囲内で通常行なわれる。典型的には、濃度は15〜50℃、例えば35〜45℃である。小麦分離プロセスにおいて、本発明に係る分離は通常40℃の温度で１〜５内で達成される。幾つかの目的に対し、キシラナーゼと先にもう一つの酵素を用いることが有利である。例えば、以下の内容に見出された；すなわち本発明で特定したキシラナーゼおよびセルラーゼの組合された使用は相乗効果を有する。適当なタイプのセルラーゼは“セルラーゼ調製品”と表題をつけた節において前記されている。セルラーゼは、粉１kg当たり０−30,000EGU 、好ましくは粉１kg当たり 200−5000 EGU に相当する量で用いられる。粘度減少前記の如く、本発明で特定したキシラナーゼ調製品は、植物物質の粘度を減少するため用いられる。粘度減少は、増加せしめられた小麦粉の流動性が得られる点において、例えば連続小麦分離プロセスにおいて重要である。更に粘度減少は、食品又は飼料の製造および醸造において重要である、Vissev et al.，Xylans and Xylanases，（1991）参照。醸造本発明で記載するキシラナーゼは、醸造プロセスにおいて麦芽汁の粘度を減少するため特に有用であることが企図される。キシラナーゼは、大麦およびモロコシから造られた麦芽汁に関連して用いられそして醸造に対し好都合に用いられるペントサナーセと同様に用いられる、例えばViёtor et al.,（1993）およびEP2 27159参照。飼料製造されるべき飼料は、前記の植物物質、例えば穀物、そして特に小麦および／又は大麦に通常基づく。キシラナーゼは植物物質中に含まれるアラビノ−キシランを分解しこれにより動物飼料のエネルギー含有および他の栄養成分の改善された全体的利用が得られる。更に、特にブロイラーに関する限り、乳びがゆの粘度は減少するであろう。減少せしめられた粘度は、おそらく基質に対する内因性の酵素のより良き接近のため又は消化産物の増加せしめられた分散性（これは増加せしめられた吸収をもたらす）のため飼料の消化能に対する重要性が企図される。加えて、分解は強化剤をより入手可能性容易によることにより腸管微生物フローラを安定化させるのに役立つ。製造されるべき飼料は、例えばブロイラー、ライニングヘンス(laying hens) および小腸に対する飼料である。キシラナーゼは飼料１kg当たり５−2000、好ましくは飼料１kg当たり20−1000FXU の如き適当な用量で飼料内に配合される。β−グルカンおよび他の穀物成分の調製本発明で開示されたキシラナーゼ調製品は、例えば非デンプン多糖類中に存在するアラビノキシランの分解によりβ−グルカンの製造に対し特に有用であると考えられる。β−グルカンは、ガム又は増量剤（分解される形で）として使用できる。更に、前記より、キシラナーゼ調製品は、デンプン、特に小麦デンプンおよびグルテンの製造において使用できる。物質および方法小麦粉から可溶性ペントサン(WSP)の製造 100kgの普通小麦粉を 300kgの冷水中に懸濁した。１時間撹拌後、デカンターを用いスラッジを除去した。生成上澄みを次いで酵素処理に委ねデンプンおよびタンパク質を除去した。pHを 6.5そして濃度を90℃に調節後、最後に２％（d.m. の）のTermamyl(商標)120Ｌを90分撹拌しなから加え、次いで３％（d.m.の）のA MG(商標)300Ｌを用い pH4.6そして60℃で 120分間同様に処理しデンプン分画を加水分解した。最後に、上澄みを１％（d.m.の）の Alcalase(商標)2.4Ｌを用い、 pH8.0および55℃で 120分間一定撹拌下で処理した。デンプンおよびタンパク質を加水分解後、生成物を、ザイトフィルター（Seltfilter）Ｋ250 を用いフィルタープレス上で濾過し残留不溶性物質を除去し、そして10,000MWカットオフ膜を用い上澄みを限外濾過し、デンプンおよびタンパク質加水分解物からの生成物を除去した。レテンテート (retentate)を０°BRIXに達するまで更にダイアフィルトレートにかけた。生成物をルワ（Luwa）蒸発器で蒸発により濃縮し最後に凍結乾燥した。小麦粉から不溶性ペントサン(WIP)の製造 150kg の普通大麦粉を 450kgの冷水に懸濁した。懸濁液を60℃に加熱し次いで 600ｇの Termamyl(商標)120Ｌを添加した。95℃に加熱後、デンプン分画のゲル化が生じ、懸濁液を60℃に冷却し 180分間連続加水分解を行った。NaOHを用いpH を 8.0に調節後、 300ｇの Alcalase(商標)2.4Ｌを加えた。一定撹拌下タンパク質の加水分解中、NaOHで砕きながらpHを 7.5〜8.0 に維持した。加水分解を 120 分間維持した。沈殿物を遠心分離後回収し、水で１回洗浄し次いで更に残留可溶性物質を除くために冷水を用い35μｍ篩上で洗った。生成した不溶性物質に、20 ｌまでの水を加え、60℃に加熱しそしてNaOHでpHを 8.0に調節後、 100ｇの Alc alase(商標)2.4Ｌを加えた。加水分解およびNaOH−滴定を、更にpH降下が認められなくなるまで継続した。次いで物質を全ての可溶性物質が除去されるまで35μ ｍ篩上で再び洗いそして最後に凍結乾燥した。本発明で用いられるべきキシラナーゼの活性を、可溶性ペントサン（インキュベーション後25倍に希釈）および不溶性ペントサン（インキュベーション後５倍に希釈）から還元糖の放出により測定した。前記の如く製造した 0.5％の水溶性又は水不溶性ペントサンを、 0.1Ｍシトラート／ホスファート(pH6.0)中に溶解又は懸濁させた。基質と酵素を混合する前又は混合中に、基質を氷上に保持する。インキュベーションを40℃で15分間行う。しかる後、酵素を 100℃ で５分間変性させる。サンプルを冷却すると、可溶性ペントサン溶液を25倍に希釈しこの間不溶性溶液を５倍に希釈する。次いで、還元糖を、マイクロタイタープレート内で、0.15ｇのパラヒドロキシ安息香酸ヒドラジド（シグマＨ−9882）、0.50ｇのカリウム−ナトリウムタルトレート（メルク8087）および10.0mlまでの２％NaOH溶液を含んでなる PHBAH試薬と反応させることにより測定する。ブランクの結果を減じる。キシロースを標準として用いる。還元糖を用いWSPUおよび WSPSを測定する。タンパク質分析−ゲルダール（Kjeldahl）分析は、テカターダイゲスター（Tecator Digestor）および蒸留ユニットタイプ1003を用いて行った。破壊（テカターゲイゲスター）分析すべきサンプルを、液体サンプル約 1.5ｇに対しそして凍結乾燥サンプル約 0.1ｇに対し、ケルダール管に移した。サンプルに以下のａ）〜ｃ）を加える：ａ） 3.0mlの硫酸（conc．H₂SO₄）ｂ） 1.5mlの過酸化水素（32％ H₂O₂）ｃ）１ケールタッブ（kjeltab）（Se＋K₂SO₄）もしもサンプルが化学薬品の添加後発泡する場合、サンプルは翌日まで破壊されない。通常の環境下、サンプルを10分後に破壊ブロック内に置く。ブロック温度を 370℃に設定する。サンプルが澄明又はわずかに黄色である場合、該サンプルを除く。破壊は、サンプルの組成に従って通常１／２−１時間起こる。サンプルを約20分間室温で冷却する。次いでそれらを蒸留のために用意しておく。蒸留（テカター蒸留ユニットタイプ1003）サンプルを、ケールダール指示薬（Ａ： 100mlの96％アルコール中0.12ｇのメチレンブルおよびＢ： 100mlの96％アルコール中 0.1 25ｇのメチレンレッド、ＡおよびＢは１Ａ：２Ｂの割合で混合されている）を含有する25mlの２％ホウ酸中で蒸留する。破壊サンプルを32.5％NaOHと混合する。アンモニアを２％ホウ酸中に蒸留し次いでこれをpHが4.85に達するまで 0.1Ｎ H Clで砕く。エンド−グルカナーゼ活性(EGU)の測定分析方法酵ブロスを pH6.0で CMCについて振動粘度計により分析する。より特異的には、 0.1Ｍホスファート緩衝液(pH6.0)中34.0ｇ／ｌ CMC(Blanose Aqualon)を含有する基質を調製する。分析すべき酵素サンプルを同緩衝液に溶解する。14mlの基質溶液および 0.5mlの酵素溶液を混合し次いで40℃に温度設定した振動粘度計（例えばSofraser（フランス）から入手可能なMIVI3000）に移す。エンドグルカゴン単位(EGU)を、サンプルの粘度と標準酵素溶液の粘度間の比として測定する。キシラナーゼ活性(FXU)の測定エンド−キシラナーゼ活性を分析により測定し、ここにおいてキシラナーゼサンプルを pH6.0でレマゾール−キシラン基質（レマゾール・ブリリアントブルーＲ、フルカで染色された４−Ｏ−メチル−Ｄ−グルクロノ−Ｄ−キシラ）と共にインキュベートする。インキュベーションを50℃で30分間行う。非破壊染色基質のバックグラウンドをエタノールにより沈殿する。上澄み中の残存青色を 585 nmで分光分度的に測定しそしてエンドキシラナーゼ活性に比例する。サンプルのエンドキシラナーゼ活性を、酵素標準に対して測定する。分析は更に出版物 AF293.6／１−GB（ノボノルディスクＡ／Ｓ、デンマークより要求により入手可能）に記載されている。エンド−グルカナーゼ単位(ECU)の測定 ECU(エンドセルロース単位)を、標準酵素に対し相対的に測定する。エンドセルロースは、カルボキシメチルセルロース、 CMCを分解する。生じた粘度の減少を CMC振動粘度計（例えば、Sofraser（フランス）から入手可能なMI VI3000）により測定する。調製した基質溶液は、 pH7.5の 0.1Ｍホスフェート緩衝液中35ｇ／ｌのCMC（B lanose Aqualon）を含有する。分析すべき酵素サンプルを同緩衝液に溶解する。 0.15mlの標準酵素溶液又は未知の酵素サンプルを10mlの試験管に装入する。40 ℃に予備加熱した５mlの CMC基質溶液を加える。一緒にした溶液を完全に混合し、30分間インキュベートし次いで粘度計内に入れる。この方法は AF302／１−Ｇ（要求によりノボノルディスクから入手可能）に記載されている。小麦粉次の例で用いられる小麦粉は、次の成分を有していた：実施例例１小麦粉の粘度減少種々のキシラナーゼを、前記の如きフクタ小麦粉におけるそれらの粘度減少能力に対し試験した。試験したキシラナーゼは、ゼネンカ（米国）から入手可能なSpezyme(商標)CP ；Ｈ．インソレンスキシラナーゼ(WO 92／17573 の例２で記載の如く製造される )；キシラナーゼ１粉末（(WO 94／21785 で記載される)キシラナーゼＩを出発物質として用い、固体液体分離、濃縮および凍結乾燥で標準法により製造される）；キシラナーゼII(W0 94／21785 で記載の如く製造)；および WO 92／03540 で記載の如くＢ．プミラス菌株 DSM6124により生産されるキシラナーゼ（以下、Ｂ．プミラスキシラナーゼと称す）であった。粘度減少を次の方法で測定した： 100ｇの小麦粉を正確に釈量する。35℃に保持した 120mlの脱イオン水に、前記酵素を加えた。酵素を次の如く用いた： Spezyme(商標)CP：8.5FXU(3.4mgのタンパク質に相当する) キシラナーゼＩ粉末：28.3FXU(0.19mgの酵素タンパク質および0. 24mgのタンパク質に相当する) キシラナーゼII：7.5FXU（0.19mgの酵素タンパク質および0.25mg のタンパク質に相当する）Ｈ．インソレンスキシラナーゼ：82.2FXU（2.2mgの酵素タンパク質および22.3mgのタンパク質に相当する）Ｂ．プミラスキシラナーゼ：21FXU（0.2mgのタンパク質に相当する）ブランクサンプルを対照（酵素添加なし）として用いる。小麦粉および水を30 秒間手で撹拌し次いで正確に30秒間ブレンダー(ワーリング、商業上の実験用ブレンダー、ストルラーズ、調整 0FF１−７、底部にローター (４枚羽))用い７（最大速度）で混合する。液体を、粘度計（プログラムできるレオメーター、モル DV−111 、ブルックフィールド、スピンネル25、測定管は38℃に温度設定されている）の測定管に注入するのに30秒要する。 40rpmでの粘度を15秒毎に４分間測定する。パーセント単位のサンプルの平均粘度／ブランクの平均粘度として表わされる比粘度を粘度減少の尺度として用いる。平均粘度は、60秒後そして測定終了までに達したレベルの平均である。最も低い比粘度が、キシラナーゼIIを用いて見出された。少ない程度ではあったが、他のキシラナーゼ (キシラナーゼＩ、Spezyme(商標)CP)が比粘度を低下させることが見出された。Ｈ．インソレンスキシラナーゼは、この用量で粘度を増加させることが見出された。例として、前記用量は、キシラナーゼIIに対し69％、キシラナーゼＩに対し78％、Spezyme( 商標)CPに対し87％そしてＨ．インソレンスキシラナーゼに対し 128％の比粘度をもたらした（0.63FVRU／mgタンパク質、 0.044FVRU／mgタンパク質、 0.053FV RU／mgタンパク質および 0.012FVRU／mgタンパク質に相当する）。例２例１で述べた酵素の小麦分離能力は、遠心分離試験により評価した。試験は例１で言及した小麦粉について行った。小麦粉および水を例１で記載した手順に従って混合した。ブレンディング後、 10mlのバター（batter）を4332ｇで５分間遠心分離した (Megafuge 1.0 Heraeus Sepatech)。デンプンは底部属で見出され、ついでグルテン、スラッジおよび流出水層が頂部に見出された。分離は流出水の％として表わされる。より高い％はより良い分離を示す。キシラナーゼIIが最高の挙動を示すことが確認された。例として小麦粉の流出水はブランクサンプル10に対し14％、Spezyme(商標)CPに対し21％、キシラナーゼＩに対し22％そしてキシラナーゼIIに対し23％であった。例３別の酵素と組み合わせたキシラナーゼIIによる粘度減少種々のキシラナーゼを、キシラナーゼIIと組み合せた時それらの粘度減少能力について測定した前にのべたフクタ(Fakta)小麦粉を用いた。試験したキシラナーゼは、Celluclast（商標）CCN3035(ノボノルディスクＡ／Ｓから入手可能)；エンドグルカナーゼＩ、 WO 91／17244 の図14で示されるアミノ酸配列を含んでなりそして該文献で記載される如く製造されるＨ．インソレンスセルラーゼ；43kDエンド−グルカナーゼ、 WO 91／17243 で記載される如く記載されそして製造されたＨ．インソレンスセルラーゼ；Ｈ．インリレンスキシラナーゼ(WO 92／17573 の例２で記載される如く製造される)；キシラナーゼＩ粉末（前記の如く同定）およびＢ．プミラスキシラナーゼ（前記の如く同定）。各酵素をキシラナーゼIIと組み合わせて用いそしてSpezyme(商標)CPと比較した。粘度減少を例１で記載の如く測定した。酵素用量は次の如くであった： Celluclast（商標）：16EGU（0.024mlに相当する） Endoglucanase Ｉ：26.5ECU(0.0053mlに相当する) 43kDエンド−グルカナーゼ：101ECU(0.017mlに相当する) Ｈ．インソレンスキシラナーゼ：82.2FXU（2.2mgの酵素タンパク質および22.3mgのタンパク質に相当する）キシラナーゼＩ粉末：28.3FXU(0.19mgの酵素タンパク質および0. 24mgのタンパク質に相当する) Ｂ．プミラスキシラナーゼ：21FXU（0.024mlおよび 0.2mgのタンパク質に相当する） Spezyme(商標)CP：8.5FXU(0.024mlおよび 3.4mgのタンパク質に相当する）図１からキシラナーゼIIが粘度を減少すると同様のレベルに他の酵素が粘度を減少しないことが明らかである。更に、粘度の著るしい減少が、キシラナーゼII を特にエンドグルカナーゼＩおよび43kDセルラーゼを組み合わされるときに見られる。キシラナーゼIIもまた、Celluclast（商標）について見られる如く存在する多成分酵素と組み合わせることができる。図１において薄いカラムはキシラナーゼを組み合わされた酵素の観察結果を示す。１＝キシラナーゼII ２＝キシラナーゼII ３＝Specyme(商標)CP ４＝43kDエンドグルカナーゼ５＝Ｈ．インソレンスキシラナーゼ６＝エンドグルカナーゼＩ７＝キシラナーゼＩ粉末８＝セルクラスト（商標）９＝Ｂ．プミラスキシラナーゼ例４ WSPSおよびWSPUの測定に際し、ケールダールに従って測定される添加された酵素のタンパク質含量および還元糖を同様に光に測定され記載された如く製造された水不溶性(WIP)および可溶性ペントサン(WSP)に対する酵素の活性を測定しなければならない。多数の調製品に対するWSPSおよびWSPU値は次の如くであった： WSPUは小麦粉１kg当たり１mgのタンパク質当たりの WSPに対する活性でありそしてWSPSは小麦粉１kg当たり１mgのタンパク質当たり割合 WSP／WIP である。明らかなように、キシラナーゼは著るしく高いWSPUおよびWSPSを示しこれはタンパク質添加に比較して高い割合で水溶性ペントサンの分解および不溶性ペントサンにおいて低分解を反映する。例５動物飼料中のキシラナーゼの使用ブロイラー鶏に、酵素入り又は酵素なしの実験用食餌を６週間与えた。食餌は最初の３週間81％の小麦および最後の３週間は84.5％の小麦を含んでいた。それらを３回の処理に分けた；最初の６週間に対し各処理は各々においてブロイラーについて12回の反復を含んでおり、最後の６週間について各々において５匹の鶏について６回の反復を含んでいる。処理は酵素なしの対照を含んでおりそして次の酵素処理を含んでいる：400FXU／kg飼料 Bio−Feed（商標）Plus(BF＋)（ノボノルディスクＡ／Ｓから入手可能）および400FXU／kg飼料キシラナーゼII。両方の酵素を WO 94／12645 に記載される方法に従ってCT粒質的として配合した。質量増加および飼料消費を測定しそして飼料変換比(FCR)を０〜３および３〜６週間計算した。更に、ジェジュナル(jejunal)およびイリール(ileal)粘度を、ブルックフィールド LVTDV−II粘度計を用い、腸内容物からの上澄みについて測定した。結果は次表から明らかである。表１および表２から明らかなように、 FCRは３週および６週後の双方で、酵素を受けとったグループにおいてより低い。双方の場合において、キシラナーゼは BF＋よりもより良い。これは主にこのグループにおいて動物のより良い成長のためである。ジェジュナル粘度に関し、キシラナーゼIIはBF＋および対照の双方に比較してより低い粘度を有する。これはまたイリール粘度に対してもそうである。対照およびキシラナーゼIIの双方は、３週後よりも６週後の方がより低い粘度を与え、一方これはBF＋に対してはあてはまらない。従って、次のように思われる：すなわちキシラナーゼIIはBF＋よりも最後の３週間中より良く作用するが、このことはまた６週目に13Ｆ＋に比較してキシラナーゼIIの比較的より低い FCRにより示される。従って、この実験は同じ FXU基準でBF＋よりもより良い飼料変換を与える、すなわちより滋養物がキシラナーゼ IIを用いて入手可能である。これは、部分的にキシラナーゼIIグループにおけるより低いイリール粘度によるものであろう。例６動物飼料におけるキシラナーゼIIの代謝可能エネルギー小麦のAME(見掛けの代謝可能エネルギー)に関するキシラナーゼII（100FXU／k gおよび200FXU／kg）の影響を、ヨーロッパ参照例（Bourdillon et al.,（1990 ）により測定し次いでノボノルディスクのＡ／Ｓからの商業製品 Bio−Feed（商標）Plus(400FXU／kg)(BF＋)と比較した。AMEn−値は、Ｎ−保持力に対し矯正された飼料中の代謝可能エネルギーを表わす。商業上のふ化所から提供される、加令した雄のロースブロイダー鶏を用いた。１日から16日まで、鶏に商業上のスターター食餌を与えた。16日目に鶏を個々に秤量した。重すぎるか又は軽すぎる体重の鶏をすてそして残りを鳥かごに割り当てた。16日から23日まで、鶏を鳥かごに割り当てた。残りの追跡は、Bourdill on et al.,（1990）同上に従い24日から28日までインビトロで行った。追跡は、レプリカ当たり４匹のブロイラー鶏について５回の反復による９回処理を含んだ。基礎食餌は、56％のモロコシ、32.5％の大豆ミル、６％の動物脂肪、１％大豆油および５％無機物、ビタミン、微量元素およびアミノ酸を含んでいた。実験において、基礎食餌の半分量の食餌を小麦と交換した。鶏に任意摂取の90％レベルでマッシュ（mash）として食餌を与えた。AMEnの測定鶏の排せつ物を毎日定量的に集めた。飼料および凍結乾燥排せつ物のサンプルを脂肪、総エネルギー（GE）および窒素に対して分析した。食餌の AME含量を、それらの各排せつ物／飼料割合並びにそれらの対応する総エネルギー（GE）含量から計算した。ゼロに対するＮ−保持力に対する矯正（AM En）は、 34.36kJ／ｇ保護されたＮのエネルギー当量を用いて行なった。脂肪消化能を、食餌および凍結乾燥排せつ物の脂肪抽出により測定した。測定されたAMEnを図３に示す。図３から明らかなように、キシラナーゼIIを加えた基礎食餌の補足物は、 Bio −Feed(商標)(BF＋)に比較して代謝可能エネルギーの著るしい改善をもたらした。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ１２Ｃ 7/00 9548−4ＢＣ１２Ｃ 7/00 Ｃ１２Ｎ 9/24 8827−4ＢＣ１２Ｎ 9/24 //(Ｃ１２Ｎ 9/24 Ｃ１２Ｒ 1:66） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者コフォド，レーネベンクデンマーク国，デーコー−2880 バグスバエルトノボアレ（番地なし），ノボノルディスクアクティーゼルスカブ (72)発明者バゲール，クリスチャンデンマーク国，デーコー−2880 バグスバエルトノボアレ（番地なし），ノボノルディスクアクティーゼルスカブ (72)発明者ミュラーツェ，アネットデンマーク国，デーコー−2880 バグスバエルトノボアレ（番地なし），ノボノルディスクアクティーゼルスカブ

Claims

【特許請求の範囲】１．植物物質の粘度を減少する方法であって、ｉ）添加されるタンパク質１mg当たり0.06以上のWSPSおよび／又は ii）添加されるタンパク質１mg当たり15以上のWSPU、および／又は iii）タンパク質１mg当たり 0.053FVRU以上の比活性を有するキシラナーゼを用いて該植物物質を処理することを含んでなる前記方法。２．キシラナーゼ処理が、３〜８の範囲内のpHおよび／又は15〜50℃の範囲内の温度で行なわれる、請求の範囲第１項記載の方法。３．植物物質を個々の成分に分離する方法であって、ｉ）添加されるタンパク質１mg当たり0.06以上のWSPSおよび／又は ii）添加されるタンパク質１mg当たり15以上のWSPU、および／又は iii）タンパク質１mg当たり 0.053FVRU以上の比活性を有するキシラナーゼを用いて該植物物質を処理することを含んでなる、前記方法。４．植物が穀物、例えば小麦、大麦、ライ麦、からす麦およびモロコシの類である、請求の範囲第１〜３項のいずれか１項に記載の方法。５．穀物が小麦である、請求の範囲第４項記載の方法。６．小麦をデンプン含有およびタンパク質含有成分に分離する、請求の範囲第３〜５項のいずれか１項に記載の方法。７．穀物が“Ａ”−タイプデンプン、“Ｂ”−デンプンおよび／又はグルテンに分離される小麦である、請求の範囲第６項記載の方法。８．キシラナーゼが微生物起源である、請求の範囲第１〜７項のいずれか１項に記載の方法。９．キシラナーゼが線状菌類又は酵母から由来する、請求の範囲第７項記載の方法。 10．キシラナーゼが、アスペルギルス、トリコデルマ、ペニシリウム、フサリウム又はフミコラの菌株から由来する、請求の範囲第９項記載の方法。 11．キシラナーゼが、アスペルギルスの菌株、特にアスペルギルスアクレタス、アスペルギルスアワモリ、アスペルギルスニガー又はアスペルギルスオリゼの菌株から由来する、請求の範囲第10項記載の方法。 12．キシラナーゼが、アスペルギルスアクレタス、 CBS101.43の DNAライブラリーから単離された DNA配列によりコードされる、請求の範囲第11項記載の方法。 13．キシラナーゼが、ｉ）国際公開（WO）94／21785 の配列番号２によって示される DNA配列又はキシラナーゼIIの同族体をコードするその類似体によってコードされ、および／又は ii） WO 94／21785 の配列番号５で示されるアミノ酸配列又はその類似体の配列を含んでなり、および／又は iii）アスペルギルスアクレタス、 CBS101.43から由来する精製キシラナーゼに対して生起した抗体と免疫学的に反応性である、請求の範囲第12項記載の方法。 14．少なくとも 10.000EGU／FVRUの比活性を有するセルラーゼ含有調製品が、キシラナーゼと組合わされて用いられる、請求の範囲第１〜13項のいずれか１項に記載の方法。 15．セルラーゼ含有調製品が、微生物起源である、請求の範囲第14項記載の方法。 16．セルラーゼ含有調製品が、線状菌類又は酵母から由来する、請求の範囲第 15項記載の方法。 17．セルラーゼ含有調製品が、トリコデルマ、アスペルギルス、又はフミコラからの菌株から由来する、請求の範囲第16項記載の方法。 18．ｉ）添加されるタンパク質１mg当たり0.06以上のWSPSおよび／又は ii）添加されるタンパク質１mg当たり15以上のWSPU、および／又は iii）タンパク質１mg当たり 0.053FVRU以上の比活性を有するキシラナーゼをを含んでなる調製品。 19．キシラナーゼが微生物起源である、請求の範囲第18項に記載の調製品。 20．キシラナーゼが線状菌類又は酵母から由来する、請求の範囲第19項記載の調製品。 21．キシラナーゼが、アスペルギルス、トリコデルマ、ペニシリウム、フサリウム又はフミコラの菌株から由来する、請求の範囲第20項記載の調製品。 22．キシラナーゼが、アスペルギルスの菌株、特にアスペルギルスアクレタス、アスペルギルスニガー又はアスペルギルスオリゼの菌株から由来する、請求の範囲第21項記載の調製品。 23．キシラナーゼが、アスペルギルスアクレタス、 CBS101.43の DNAライブラリーから単離された DNA配列によりコードされる、請求の範囲第22項記載の調製品。 24．キシラナーゼが、ｉ）配列番号２によって示される DNA配列又はキシラナーゼIIの同族体をコードするその類似体によってコードされ、 ii）配列番号５で示されるアミノ酸配列又はその類似体の配列を含んでなり、および／又は iii）アスペルギルスアクレタス、 CBS101.43から由来する精製キシラナーゼに対して生起した抗体と免疫学的に反応性である、請求の範囲第23項記載の調製品。 25．キシラナーゼが単離された単一成分酵素から調製される、請求の範囲第18 〜24項のいずれか１項に記載の調製品。 26．キシラナーゼが、 WO 94／21785 のキシラナーゼIIである、請求の範囲第 18〜25項のいずれか１項に記載の調製品。 27．キシラナーゼが、 WO 94／21785 のキシラナーゼＩである、請求の範囲第 18〜25項のいずれか１項に記載の調製品。 28．キシラナーゼが、キシラナーゼＩ粉末である、請求の範囲第27項記載の調製品。 29．少なくとも 10.000EGU／FVRUの比活性を有するセルラーゼ調製品を含んでなる、請求の範囲第18〜28項のいずれか１項に記載の調製品。 30．植物物質の粘度を減少するための請求の範囲第18〜28項のいずれか１項に記載の調製品の使用。 31．穀物成分の分離のための請求の範囲第18〜29項のいずれか１項に記載の調製品の使用。 32．穀物が小麦、大麦、ライ麦、からす麦およびモロコシの類を含む、請求の範囲第31項記載の使用。 33．穀物が小麦である、請求の範囲第32項記載の使用。 34．穀物をデンプン含有およびタンパク質含有成分に分離する、請求の範囲第 31又は33項記載の使用。 35．穀物が、“Ａ”−デンプン、“Ｂ”−デンプンおよび／又はグルテンに分離される小麦である、請求の範囲第34項記載の使用。 36．β−グルカンの調製のための、請求の範囲第18〜29項のいずれか１項に記載の調製品の使用。 37．醸造のための、請求の範囲第18〜29項のいずれか１項に記載の調製品の使用。 38．動物の飼料の製造のための、請求の範囲第18〜29項のいずれか１項に記載の調製品の使用。 39．動物の飼料の粘度を減少するため、請求の範囲第38項記載の使用。 40．動物の飼料の消化性を改良するため、請求の範囲第38又は39項に記載の使用。 41．動物の飼料の代謝エネルギーを改善するため、請求の範囲第38又は39項記載の使用。 42．動物の飼料が鶏の飼料である、請求の範囲第38〜41項のいずれか１項に記載の使用。 43．動物の飼料が豚の飼料である、請求の範囲第38〜41項のいずれか１項に記載の使用。