JPH09509161A

JPH09509161A - ポリラクチド被覆ミクロスフィアの状態にある薬物類、ワクチン類及びホルモン類

Info

Publication number: JPH09509161A
Application number: JP7521481A
Authority: JP
Inventors: モデイ，パンカイ
Original assignee: モデイ，パンカイ
Priority date: 1994-02-17
Filing date: 1995-02-14
Publication date: 1997-09-16
Also published as: EP0744940A1; CA2180424C; ATE173160T1; CA2180424A1; DE69505949D1; WO1995022318A1; EP0744940B1; AU1702395A; DK0744940T3; DE69505949T2

Abstract

(57)【要約】種々の薬物類、ワクチン類又はホルモン類との使用のための制御された徐放性調製物が、ミクロスフィアの形状で生成される。該薬物、ワクチン又はホルモン、例えばウシのソマトロピン、肝炎ワクチン、はポリマーマトリックス中に懸濁される。該ポリマーマトリックスは、例えばでんぷん、架橋でんぷん、フィコル(ficoll)、ポリスクロース、ポリビニルアルコール、ゼラチン、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル−エチルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、酢酸セルロース、アルギン酸ナトリウム、無水ポリマレイン酸エステル類、ポリオルソエステル類、ポリエチレンイミン、ポリエチレングリコール、メトキシポリエチレングリコール、エトキシポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリ（１，３ビス（ｐ−カルボキシフェノシキ）プロパン−コ−無水セバシン酸、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノアセテート、ポリオキシエチレン及びポリオキシプロピレンのブロック共重合体類から選ばれた、少なくとも２種類の水溶性の生分解可能なポリマー類から生成される。該ミクロスフィアは（ｄ，ｌラクチド−グリコリド）共重合体によりコートされる。該コーティングは該ミクロスフィアに、酵素による分解に対してより抵抗性を与える。

Description

【発明の詳細な説明】ポリラクチド被覆ミクロスフィアの状態にある薬物類、ワクチン類及びホルモン類本発明は、ヒトを含む、動物で使用するための薬物類、ワクチン類及びホルモン類の投与のための、改善された送達システムに関する。背景多数の薬物類及びホルモン類、例えば大部分の、ペプチド及び蛋白質からなる薬物は、投与部位において分解されやすいことが知られている。更に数種の蛋白質及びペプチドからなる薬物類は非常に短いインビボの半減期を有する。その結果、望ましい治療を達成するためには複数の注射又は複数の経口投与が必要である。これらの薬物の治療効果を、制御された徐放性の送達システムを使用することにより、増強させることが望ましい。錠剤又はカプセル剤により、制御された放出をもたらす試みがなされて来た。しかしこれらのどの方法も完全に満足するものではない。多数の感染症に対する感作に適した抗原の確認について、集中的な努力が費やされてきた。しかし、これらのワクチン類の効果は、抗原類の早急な分解及びそれらの非常に短いインビボの半減期のために、しばしば低い。胃腸の表面に局在する急性の感染症によりそれらの病理生理学的効果をもたらす生物体に関して、有効な予防接種法の必要性は特に緊急である。しかし、胃腸管のパイヤー斑において適切な局所濃度を達成するためには大量投与が必要とされて来た。従って、アジュバント類を必要とせずに免疫を高めそして経口投与により有効であるようなワクチンの送達システムを提供する必要がある。本発明は、従来の方法よりも経費効率が良く、そして前記の効能の欠点を軽減するような送達システムを提供することを目的としている。本発明は注射用及び経口ワクチン類に適しているが、経口投与が好ましい。薬物、ワクチン又はホルモンは時々本明細書中で、活性成分として言及される。ワクチンはまた本明細書において抗原としても言及されるかも知れない。発明の開示従って本発明は、それらの中で、薬物、ワクチン又はホルモンがポリマーマトリックス中に懸濁されている、生分解性ポリマーのミクロスフィアからなる、制御された徐放性調製物を提供し、該ポリマーマトリックスは少なくとも２種の水溶性の、生分解可能なポリマー類から生成され、そして該ミクロスフィア類は（ｄ，ｌラクチド−グリコリド）共重合体でコートされている。１つの態様において、該ポリマー類はでんぷん、架橋でんぷん、フィコル(fic oll)、ポリスクロース、ポリビニルアルコール、ゼラチン、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル−エチルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、酢酸セルロース、アルギン酸ナトリウム、無水ポリマレイン酸エステル類、ポリオルソエステル類、ポリエチレンイミン、ポリエチレングリコール、メトキシポリエチレングリコール、エトキシポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリ（１，３ビス（ｐ−カルボキシフェノシキ）プロパン−コ−無水セバシン酸、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノアセテート、ポリオキシエチレン及びポリオキシプロピレンのブロック共重合体類からなる群から選ばれる。適切なポリオルソエステルの例は、３，９−ビス（メチレン）−２，４，８，１０−テトラオキサスピロ［５，５］ウンデカン／１，６ヘキサンジオールポリ（オルソエステル）である。２種のポリマー類の重量比は２０：８０から８０：２０に範囲内にあることが好ましい。もう１種類の態様において、該ポリマーマトリックスは、でんぷん及びフィコル、でんぷん及びポリスクロース、でんぷん及びポリビニルアルコール、でんぷん及びゼラチン、でんぷん及びヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース及びヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン及びヒドロキシエチルセルロース、ゼラチン及びポリビニルアルコール、ポリスクロース及びポリビニルアルコール、並びにカルボキシメチルセルロースナトリウム及びアルギン酸ナトリウムから選択される。該ポリマーマトリックスがでんぷん及びフィコルを含んでなる場合、でんぷん対フィコルの好ましい重量比は、好ましくは８５：１５から６０：４０で、より好ましくは７５：２５から６５：３５である。該ポリマーマトリックスがでんぷん及びポリビニルアルコールを含んでなる場合は、でんぷん対ポリビニルアルコールの好ましい重量比は３５：６５から６５：３５の範囲に、より好ましくは、４０：６０から６０：４０の範囲にある。約５０：５０のでんぷん対ポリビニルアルコールの比を有するミクロスフィアは約１０日間に渡る活性成分の放出に適している。でんぷんは比較的早急に分解する傾向をもち、ポリビニルアルコールはミクロスフィアに硬度を与える傾向があり、酵素による分解に対してより抵抗性を与える。ワクチン類の場合、ポリビニルアルコールはまた、酵素によるそして蛋白分解による分解に対して安定性を与える傾向がある。ポリスクロース及びポリビニルアルコールに対しては同様な比率が適切である。該ポリマーマトリックスがセルロース類の内の１種類及びフィコルを含んでなる場合は、該セルロース対フィコルの好ましい重量比は８０：２０から６５：３５の範囲内にある。セルロース類、例えばヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル−エチルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、酢酸セルロース、は柔らかく安定なミクロスフィアを与える傾向がある。具体的な（ｄ，ｌラクチド−グリコリド）共重合体の選択は、大部分、該ミクロスフィアがどの位の期間、活性成分を放出する目的をもつかに依存する。例えば、約８０％の乳酸及び２０％のグリコール酸からなる、（ｄ，ｌラクチド−グリコリド）共重合体は非常に安定であり、そして数週間に渡る活性成分の放出に適切なミクロスフィアを提供するであろう。５０％の乳酸及び５０％のグリコール酸からなる（ｄ，ｌラクチド−グリコリド）共重合体は安定でそして、数日間に渡り活性成分を放出するのに適切なミクロスフィアを提供するであろう。２０％の乳酸及び８０％のグリコール酸からなる（ｄ，ｌラクチド−グリコリド）共重合体は比較的容易に分解しそして、１−２日間に渡り活性成分を放出するのに適切なミクロスフィアを提供するであろう。該コーティングはミクロスフィアに、酵素による分解に対し、より抵抗性を与える。もう１つの態様において、該活性成分は、ウシのソマトロピン、（時々ＢＳＴと称される），エストロゲン類、アンドロゲン類、インスリン、インスリン成長因子類（時々ＩＧＦと称される）、インターロイキン−Ｉ、インターロイキン− II及びサイトカイン類(cytokins)からなる群から選ばれる。３種類のこれらのサイトカイン類はインターフェロン−β，インターフェロン−γ及びタフトシンである。ウシの乳の産生を増加させるための好ましいホルモンはＢＳＴである。もう１つの態様において、抗原は、ＭＭＲ（おたふくかぜ、はしか及び風疹）ワクチン、チフスワクチン、Ａ型肝炎ワクチン、Ｂ型肝炎ワクチン、単純庖疹ウイルス、細菌性トキソイド類、コレラトキシンＢ−サブユニット、インフルエンザワクチンウイルス、百日咳ワクチンウイルス、痘疹ウイルス、アデノウイルス、カナリア痘疹、ポリオワクチンウイルス、マラリヤワクチンウイルス、カルメットゲラン桿菌（ＢＣＧ）、肺炎桿菌、ＨＩＶ膜糖蛋白類及びサイトカイン類からなる群から選ばれる。細菌性トキソイド類の例は、破傷風、ジフテリア、シュードモナスＡ、ヒト結核菌である。ＨＩＶ膜糖蛋白類の例は、ＡＩＤＳワクチン類に対するｇｐ１２０及びｇｐ１６０である。該調製物は、注射用形態にすることができるが、好ましくは経口形態にある。本発明はまた、生分解可能なポリマーマトリックス中に懸濁された薬物、ワクチン又はホルモンのミクロスフィアを含んでなる、制御された徐放性調製物の製法を提供し、前記製法はａ）少なくとも２種類の、水溶性で生分解可能なポリマー類の水溶液を生成し、それにホルモン、ワクチン又は薬物の活性成分を添加すること、ｂ）該溶液及び活性成分を乳化媒体と混合して、ホモジナイズさせた微小液体粒子の懸濁液を生成すること、ｃ）該微小液体粒子懸濁液及び溶媒を撹拌しながら、前記のホモジナイズさせた微小液体粒子懸濁液を、低濃度の第１の界面活性剤を含有する第１の有機溶媒に緩徐に添加し、これによりミクロスフィアを沈澱させること、ｄ）該ミクロスフィアを第１の溶媒から分離させ、そして低濃度の第２の界面活性剤を含有する第２の有機溶媒中の（ｄ，ｌラクチド−グリコリド）共重合体の溶液を添加すること、並びにｅ）該溶媒を緩徐に蒸発させて、被覆ミクロスフィアを残すこと、の段階を含んでなる。段階ｂ）は室温以下で実施することができるが、−５℃から１０℃の温度が好ましく、０℃から５℃の範囲の温度がより好ましい。これらの温度範囲は該懸濁液を容易に生成するためにより適切である。第１の有機溶媒は第２の有機溶媒と同一でも又は異なってもよい。好ましい第１の溶媒はアセトンであり、好ましい第２の溶媒はアセトンとクロロホルムの混合物である。同様に第１の界面活性剤は第２の界面活性剤と同一でも異なってもよい。好ましい界面活性剤類はソルビトール無水物類の脂肪酸の部分エステル類のポリオキシエチレン誘導体類であり、それらのうちの幾つかはTweenの商品名で販売されている。界面活性剤の好ましい濃度は溶媒の２から３％v/vである。より高い濃度においては、最終ミクロスフィアの形状が不規則になる傾向がある。１つの態様において、該ポリマー類は、でんぷん、架橋でんぷん、フィコル(f icoll)、ポリスクロース、ポリビニルアルコール、ゼラチン、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル−エチルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、酢酸セルロース、アルギン酸ナトリウム、無水ポリマレイン酸エステル類、ポリオルソエステル類、ポリエチレンイミン、ポリエチレングリコール、メトキシポリエチレングリコール、エトキシポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリ（１，３ビス（ｐ−カルボキシフェノシキ）プロパン−コ−無水セバシン酸、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノアセテート、ポリオキシエチレン及びポリオキシプロピレンのブロック共重合体類からなる群から選ばれる。２種類のポリマー類の重量比は２０：８０から８０：２０の範囲に、より好ましくは４０：６０か６０：４０の範囲にあることが好ましい。該ポリマーマトリックスがでんぷん及びフィコルを含んでなる場合、でんぷん対フィコルの好ましい重量比は、好ましくは８５：１５から６０：４０であり、より好ましくは、７５：２５から６５．３５である。該ポリマーマトリックスがでんぷん及びポリビニルアルコールを含んでなる場合は、でんぷん対ポリビニルアルコールの好ましい重量比は３５：６５から６５：３５の範囲に、より好ましくは４０：６０から６０：４０の範囲にある。約５０：５０の、でんぷん対ポリビニルアルコールの比を有するミクロスフィアは、約１０日間に渡る活性成分の放出に適する。同様な比率がポリスクロース及びポリビニルアルコールに対して適切である。該ポリマーマトリックスがセルロース類のうちの１種類及びフィコルを含んでなる場合、該セルロース対フィコルの好ましい重量比は８０：２０から６５：３５の範囲にある。前述のように、セルロース類、例えば、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル−エチルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、酢酸セルロース、は柔らかく安定なミクロスフィアを与える傾向がある。もう１つの態様において、該ポリマーマトリックスは、でんぷん及びフィコル、でんぷん及びポリスクロース、でんぷん及びポリビニルアルコール、でんぷん及びゼラチン、でんぷん及びヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース及びヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン及びヒドロキシエチルセルロース、ゼラチン及びポリビニルアルコール、ポリスクロース及びポリビニルアルコール、並びにカルボキシメチルセルロースナトリウム及びアルギン酸ナトリウムから選択される。もう１つの態様において、該活性成分は、ウシのソマトロピン、（時々ＢＳＴと称される），エストロゲン類、アンドロゲン類、インスリン、インスリン成長因子類（時々ＩＧＦと称される）、インターロイキン−Ｉ、インターロイキン− II及びサイトカイン類から選ばれる。３種類のこれらのサイトカイン類はインターフェロン−β，インターフェロン−γ及びタフトシンである。ウシの牛乳の産生を増加させるための好ましいホルモンはＢＳＴである。もう１つの態様において、該抗原はＭＭＲ（おたふくかぜ、はしか及び風疹）ワクチン、チフスワクチン、Ａ型肝炎ワクチン、Ｂ型肝炎ワクチン、単純庖疹ウイルス、細菌性トキソイド類、コレラトキシンＢ−サブユニット、インフルエンザワクチンウイルス、百日咳ワクチンウイルス、痘疹ウイルス、アデノウイルス、カナリア痘疹、ポリオワクチンウイルス、マラリヤワクチンウイルス、カルメットゲラン桿菌（ＢＣＧ）、肺炎桿菌、ＨＩＶ膜糖蛋白類及びサイトカイン類から選ばれる。細菌性トキソイド類の例は、破傷風、ジフテリア、シュードモナスＡ、ヒト結核菌である。ＨＩＶ膜糖蛋白類の例は、ＡＩＤＳワクチン類に対するｇｐ１２０及びｇｐ１６０である。製法の第１段階において、該マトリックスに使用されることを意図されるポリマー類を水に添加して水溶液を生成し、薬物、ワクチン又はホルモンを該溶液に添加する。この混合物を撹拌し、次いで乳化媒体、例えばトウモロコシ油、ナタネ油、植物油と混合する。乳化媒体の量は該ポリマー溶液の量よりも多いことが好ましい。例えば、ポリマー溶液の４倍もの量の乳化媒体が存在する可能性がある。前述のように、該混合物及び乳化媒体は室温より低い温度で、そして好ましくは−５℃から１０℃の間で、特には約０℃から約５℃で保存することが好ましい。該ポリマー、水、乳化媒体及び薬物、ワクチン又はホルモンを、粗製の前乳化物が生成されるまで、撹拌又はそうでなければ混合する。該前乳化物を更にホモジナイズすると、例えば高速度混合により、微小液体粒子の懸濁液が生成される。実験室では、このような高速度の混合は音波処理により実施することができる。商業的な製造においては、高速度ブレンダー又はタービンミキサーが好まれるであろう。第３段階において、該微小液体粒子懸濁液を、好ましくは高速度で撹拌しながら、低濃度の界面活性剤、例えば約２％v/vのTween^(R)８０界面活性剤を含有する、大量の、アセトンのような有機溶媒中に緩徐に注入する。Tween界面活性剤は米国のAtlas Chemical Industriesから市販されている。該ポリマーマトリックス中の薬物、ワクチン又はホルモンのミクロスフィアは沈澱する。該界面活性剤の目的は、ミクロスフィア大の粒子をもたらす、ポリマーマトリックスのアグロメレーションを予防することである。該沈澱物の粒子の大きさは１００nmから１００μmの次元に、より具体的には１０nmから１０μmの範囲にある。第４段階において、第２の界面活性剤を含有する第２の有機溶媒中の該共重合体の溶液中に、該ミクロスフィアを移動させることにより、（ｄ，ｌラクチド− グリコリド）共重合体で、該ミクロスフィアを更にコートさせる。例えば、該ミクロスフィアを、１％v/vのTween^(R)８０を含有する１：１のアセトン／クロロホルム混合物中（ｄ，ｌラクチド−グリコリド）共重合体の２％溶液に添加することができる。最後の段階において、第２の溶媒及び残りの第１の溶媒を蒸発により除去し、（ｄ，ｌラクチド−グリコリド）共重合体のコーティングが該ミクロスフィアの表面上に残る。該蒸発過程を補助するために軽度の真空を使用することができる。次いで該ミクロスフィアを経口用形態又は注射用形態に製造することができる。経口用形態が好ましい。明らかに、薬物又はホルモンの量及び種類は、必要な治療又は感作及び治療されるヒト又は動物に依存する。ホルモン類及び薬物類に対して、該微小カプセル化の利点は、それが、蛋白分解性の又は酵素による分解に対して防御することにより、多数のペプチド及び蛋白質からなる薬物類又はホルモン類のインビボの半減期を増加させることである。もう１つの利点は、長期間にわたる、制御された様態での活性成分の放出の結果として、それらの治療効果が増強される可能性があることである。その他の利点は、それらが経口形態で、胃腸管を通過する時の該活性成分の分解を予防することである。ワクチン類に対しては、該微小カプセル化の利点は、それがＨＩＶの、小さな、合成の又は組み替えのペプチド類のような、弱い抗原類の能力を増強することである。その他の利点は、それが免疫反応の速度、強度及び持続性を増強することである。更にその他の利点は、それが抗体の貧欲性、特有性、量、同型像及び亜綱を変化させることである。更にそれは、防御に必要な抗原の量を減少させ、それにより経費を減少させ、ワクチン類の生物学的利用性を高める。更にワクチンのミクロスフィア形態は水性ワクチンよりも効果的である。ＢＳＴを含む、本発明のミクロスフィア調製物類は、ウシの牛乳産生を増加させるために使用することができる。通常、該調製物はウシの飼料と混合され、従って経口で摂取されるであろう。このような組成物類は、天然又は組み替えＢＳＴの継続した放出の結果、長時間、例えば約３０日間に渡り、ＢＳＴの高い血中濃度を与えることができる。本発明はポリマーマトリックス中にその他の成長ホルモン類、例えばエストロゲン類、アンドロゲン類、インスリン、ＩＧＦ、インターロイキン−Ｉ及びインターロイキン-II、を取り込むために使用することができる。骨粗しょう症、糖尿病及び多発性硬化症のような疾患の治療に使用される、インターフェロン−β 及びインターフェロン−γのような、サイトカイン類もまた本発明から利益を得ることができる。これらすべての成分が動物、例えばヒトによる摂取に適さねばならないことは、当業者には理解されるであろう。このことは、もちろん、本明細書に記載の、名称を上げられた化学群の文字どおりの範囲内に入る、毒性の成分は選択されないことを意味する。本発明は下記の、限定を与えない実施例により具体的に示される。実施例Ｉでんぷん０．１gをジメチルスルホシキド（ＤＭＳＯ）１mlに溶解させ、この溶液に、水１mlに溶解させたエチルヒドロキシセルロース０．５g及びミオグロビン蛋白０．１gを添加した。該溶液を撹拌すると均一な溶液が得られた。この溶液に、０℃で植物油１０mlを添加し、生成された混合物を音波粉砕すると、微小液体粒子の懸濁液が生成された。該微小液体粒子懸濁液を、２％v/vのTween^(R ⁾ ８０界面活性剤を含有するアセトン２００mlに緩徐に添加した。ミクロスフィアを該アセトンから沈澱させた。該アセトンをデカント除去し、ミクロスフィアを乾燥させた。該ミクロスフィアのサンプル０．１gを採取し、蒸留水３mlに懸濁させた。この懸濁液をＵＶセルに移した。２８０nm波長におけるミオグロビン蛋白の吸収を１２０日間に渡り観察し、ミオグロビン放出の百分率を計算した。結果を表Ｉに示す。これは長期間に渡るミオグロビンの緩徐な放出を示す。実施例２ミオグロビン蛋白を、蛍光化させたヒト血清アルブミン（ＦＨＳＡ）で置き換えたことを除いて、実施例Ｉの実験を繰り返した。動物において通常は使用されないが、放出の特徴を示すために、本実験でＦＨＳＡを使用した。動物の薬物類及びホルモン類は同様な様態で反応することが期待される。ＦＨＳＡの吸収を９０日間に渡り３９０nm波長において監視し、放出ＦＨＳＡの百分率を計算した。結果を表IIに示す。これはＦＨＳＡの緩徐なそして殆ど完全な放出を示す。実施例III でんぷん０．５gをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１mlに溶解させ、この溶液に、水１ml中に溶解させた、エチルヒドロキシセルロース０．５g及び蛍光化ヒト血清アルブミン（ＦＨＳＡ）０．１gを添加した。該溶液を撹拌すると均一な溶液が得られた。この溶液に、０℃で植物油１０mlを添加し、生成された混合物を音波粉砕すると微小液体粒子の懸濁液が生成された。該微小液体粒子懸濁液を、２％v/vTween^(R)８０界面活性剤含有のアセトン２００mlに緩徐に添加した。ミクロスフィアをアセトンから沈澱させた。該アセトンをデカント除去して、該ミクロスフィアを乾燥させた。該ミクロスフィアのサンプル０．１gを採取して、蒸留水３mlに懸濁させた。この懸濁液をＵＶセルに移した。３９０nm波長におけるＦＨＳＡの吸収を９０日間観察した。該吸収は放出ＦＨＳＡの量を示す。結果を表IIIに示す。表IIIはＦＨＳＡの緩徐な放出を示す。実施例IV 該蛍光化ヒト血清アルブミン（ＦＨＳＡ）をミオグロビン蛋白で置き換えたことを除いて、実施例IIIの実験を繰り返した。ミオグロビン蛋白の吸収を１２０日間にわたり、２８０nm波長において監視した。結果を表IVに示す。これはミオグロビン蛋白の緩徐なそして安定した放出を示す。実施例ＶＨＳＡを蛍光化させなかった点を除いて実施例IIIと同様に、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）のミクロスフィアを生成させた。該ミクロスフィア５０mgをＢａｌｂ−Ｃマウスに経口的に胃管投与した。該マウスから定期的な間隔をおいて採血し、該血液サンプルを遠心分離して血漿を単離させた。該血漿をＥＬＩＳＡ法を使用して分析し、抗体力価（ＩｇＧ）値を算定した。結果を表Ｖに示す。実施例VI ＨＳＡを蛍光化せず、ヒドロキシエチルセルロースをポリビニルアルコールで置き換えたことを除いて、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）ミクロスフィアを実施例IIIと同様に生成させた。該ミクロスフィア５０mgをＢａｌｂ−Ｃマウスに経口胃管投与した。該マウスから定期的に採血し、血液サンプルを遠心分離して血漿を単離した。該血漿をＥＬＩＳＡ法を使用して分析し、抗体力価（ＩｇＧ）値を算定した。結果を表VIに示す。実施例VII でんぷん０．１gをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）０．２mlに溶解させ、この溶液に、水１ml中に溶解されたエチルヒドロキシセルロース０．５g及びブロモフェノール青染料０．０５１gを添加した。該溶液を撹拌すると均一な溶液が生成された。この溶液に、０℃で植物油１０mlを添加し、生成された混合物を音波粉砕すると、微小液体粒子懸濁液が生成された。該微小液体粒子懸濁液を、２％v/vTween^(R)８０界面活性剤含有のアセトン２００mlに緩徐に添加した。ミクロスフィアをアセトンから沈澱させた。該アセトンをデカント除去し、ミクロスフィアを乾燥させた。該ミクロスフィアを更に、約８００００の分子量をもつ、ポリ（ラクチド−コ −グリコリド）共重合体（７５：２５のラクチド：グリコリド比）でコートさせた。そのコーティングは、１％v/vTween^(R)８０を含有する１：１アセトン／クロロホルム混合物中の、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）共重合体の２％溶液中に該ミクロスフィアを移動させることにより実施した。該アセトン及びクロロホルムを蒸発除去すると、（ｄ，ｌラクチド−グリコリド）共重合体のコーティングが該ミクロスフィアの表面上に残された。該蒸発過程を補助するために軽度の真空を使用した。コートされたミクロスフィア０．１gを水３mlに懸濁させ、表VIIに示すように、放出の特性について評価した。この実験は該コーティングがインビボの状態におけるミクロスフィアの早期の分解を予防したことを示している。従ってそれはこのようにコートされたミクロスフィアがペプチド類／蛋白質類の持続性の放出をもたらすであろうことを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 38/28 9051−4ＣＡ６１Ｋ 37/26 39/00 9051−4Ｃ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＬ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．薬物、ワクチン又はホルモンがポリマーマトリックス中に懸濁されている、生分解可能なポリマーのミクロスフィアを含んでなる、制御された徐放性調製物であって、前記ポリマーマトリックスが少なくとも２種の、水溶性で生分解可能なポリマー類から生成され、そして前記ミクロスフィアが（ｄ，ｌラクチド−グリコリド）共重合体により被覆されている調製物。２．前記ポリマー類が、でんぷん、架橋でんぷん、フィコル(ficoll)、ポリスクロース、ポリビニルアルコール、ゼラチン、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル −エチルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、酢酸セルロース、アルギン酸ナトリウム、無水ポリマレイン酸エステル類、ポリオルソエステル類、ポリエチレンイミン、ポリエチレングリコール、メトキシポリエチレングリコール、エトキシポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリ（１，３ビス（ｐ−カルボキシフェノシキ）プロパン−コ−無水セバシン酸、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノアセテート、ポリオキシエチレン及びポリオキシプロピレンのブロック共重合体類からなる群から選ばれる、請求の範囲第１項に記載の調製物。３．前記の２個のポリマー類の重量比が２０：８０から８０：２０の範囲内にある、請求の範囲第１項に記載の調製物。４．前記ポリマーマトリックスがでんぷん及びフィコル、でんぷん及びポリスクロース、でんぷん及びポリビニルアルコール、でんぷん及びゼラチン、でんぷん及びヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース及びヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン及びヒドロキシエチルセルロース、ゼラチン及びポリビニルアルコール、ポリスクロース及びポリビニルアルコール、並びにカルボキシメチルセルロースナトリウム及びアルギン酸ナトリウムから選択される、請求の範囲第３項に記載の調製物。５．前記ポリマーマトリックスがでんぷん及びフィコルを含んでなり、そしてでんぷん対フィコルの重量比が８５：１５から６０：４０である、請求の範囲第４項に記載の調製物。６．前記重量比が７５：２５から６５：３５である、請求の範囲第５項に記載の調製物。７．前記ポリマーマトリックスがでんぷん及びポリビニルアルコールを含んでなり、そしてでんぷん対ポリビニルアルコールの重量比が３５：６５から６５：３５の範囲にある、請求の範囲第４項に記載の調製物。８．前記重量比が４０：６０から６０：４０である、請求の範囲第７項に記載の調製物。９．前記ポリマーマトリックスがポリスクロース及びポリビニルアルコールを含んでなり、そしてポリスクロース対ポリビニルアルコールの重量比が３５：６５から６５：３５である、請求の範囲第４項に記載の調製物。１０．前記ポリマーマトリックスがフィコル並びに、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル−エチルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び酢酸セルロースからなる群から選ばれた１種類のセルロース、を含んでなり、そして該セルロース対フィコルの重量比が８０：２０から６５：３５の範囲にある、請求の範囲第４項に記載の調製物。１１．前記活性成分がウシのソマトロピン、エストロゲン類、アンドロゲン類、インスリン、インスリン成長因子類、インターロイキン−Ｉ、インターロイキン −II及びサイトカイン類からなる群から選ばれる、請求の範囲第１項又は第２項に記載の調製物。１２．前記活性成分が、ＭＭＲ（おたふくかぜ、はしか及び風疹）ワクチン、チフスワクチン、Ａ型肝炎ワクチン、Ｂ型肝炎ワクチン、単純庖疹ウイルス、細菌性トキソイド類、コレラトキシンＢ−サブユニット、インフルエンザワクチンウイルス、百日咳ワクチンウイルス、痘疹ウイルス、アデノウイルス、カナリア痘疹、ポリオワクチンウイルス、マラリヤワクチンウイルス、カルメットゲラン桿菌（ＢＣＧ）、肺炎桿菌、及びＨＩＶ膜糖蛋白類からなる群から選ばれる、請求の範囲第１項又は第２項に記載の調製物。１３．生分解可能なポリマーマトリックスポリマー中に懸濁されている薬物、ワクチン又はホルモンのミクロスフィアを含んでなる、制御された徐放調製物の製法であって、ａ）少なくとも２種類の水溶性の生分解可能なポリマー類の水溶液を生成し、そしてそれにホルモン、ワクチン又は薬物の活性成分を添加すること、ｂ）前記溶液及び活性成分を乳化性媒体と混合してホモジナイズされた微小液体粒子懸濁液を生成すること、ｃ）前記微小液体粒子懸濁液及び溶媒を撹拌しながら、低濃度の第１の界面活性剤を含有する第１の有機溶媒に、前記のホモジナイズされた微小液体粒子懸濁液を緩徐に添加し、それによりミクロスフィアを沈澱させること、ｄ）第１の溶媒から前記ミクロスフィアを分離し、低濃度の第２の界面活性剤を含有する第２の有機溶媒中の（ｄ，ｌラクチド−グリコリド）共重合体の溶液を添加すること、並びにｅ）前記溶媒を緩徐に蒸発させ、コートされたミクロスフィアを残すこと、の段階を含んでなる製法。１４．段階ａ）において使用されたポリマー類が、でんぷん、架橋でんぷん、フィコル、ポリスクロース、ポリビニルアルコール、ゼラチン、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル−エチルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、酢酸セルロース、アルギン酸ナトリウム、無水ポリマレイン酸エステル類、ポリオルソエステル類、ポリエチレンイミン、ポリエチレングリコール、メトキシポリエチレングリコール、エトキシポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリ（１，３ビス（ｐ−カルボキシフェノシキ）プロパン−コ−無水セバシン酸、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノアセテート、ポリオキシエチレン及びポリオキシプロピレンのブロック共重合体類からなる群から選ばれる、請求の範囲第１３項に記載の方法。１５．段階ａ）において使用された２種類のポリマー類の重量比が２０：８０から８０：２０の範囲内にある、請求の範囲第１３項に記載の方法。１６．前記ポリマーマトリックスがでんぷん及びフィコル、でんぷん及びポリスクロース、でんぷん及びポリビニルアルコール、でんぷん及びゼラチン、でんぷん及びヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース及びヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン及びヒドロキシエチルセルロース、ゼラチン及びポリビニルアルコール、ポリスクロース及びポリビニルアルコール、並びにカルボキシメチルセルロースナトリウム及びアルギン酸ナトリウムから選択される、請求の範囲第１５項に記載の方法。１７．前記ポリマーマトリックスがでんぷん及びフィコルを含んでなりそしてでんぷん対フィコルの重量比が８５：１５から６０：４０である、請求の範囲第１６項に記載の方法。１８．前記重量比が７５：２５から６５：３５である、請求の範囲第１７項に記載の方法。１９．前記ポリマーマトリックスが、でんぷん及びポリビニルアルコールを含んでなり、そしてでんぷん対ポリビニルアルコールの重量比が３５：６５から６５：３５の範囲内にある、請求の範囲第１６項に記載の方法。２０．前記重量比が４０：６０から６０：４０である、請求の範囲第１９項に記載の方法。２１．前記ポリマーマトリックスがポリスクロース及びポリビニルアルコールを含んでなり、そしてポリスクロース対ポリビニルアルコールの重量比が３５：６５から６５：３５である、請求の範囲第１６項に記載の方法。２２．前記ポリマーマトリックスがフィコル並びに、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル−エチルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び酢酸セルロースからなる群から選ばれる１種類のセルロースを含んでなり、そして該セルロース対フィコルの重量比が８０：２０から６５：３５の範囲にある、請求の範囲第１６項に記載の方法。２３．前記活性成分がウシのソマトロピン、エストロゲン類、アンドロゲン類、インスリン、インスリン成長因子類、インターロイキン−Ｉ、インターロイキン −II及びサイトカイン類から選ばれる、請求の範囲第１３項又は第１４項に記載の方法。２４．前記活性成分がＭＭＲ（おたふくかぜ、はしか及び風疹）ワクチン、チフスワクチン、Ａ型肝炎ワクチン、Ｂ型肝炎ワクチン、単純庖疹ウイルス、細菌性トキソイド類、コレラトキシンＢ−サブユニット、インフルエンザワクチンウイルス、百日咳ワクチンウイルス、痘疹ウイルス、アデノウイルス、カナリア痘疹、ポリオワクチンウイルス、マラリヤワクチンウイルス、カルメットゲラン桿菌（ＢＣＧ）、肺炎桿菌及びＨＩＶ膜糖蛋白類から選ばれる、請求の範囲第１３項又は第１４項に記載の方法。２５．制御された徐放調製物が動物又はヒトに投与される、動物又はヒトの治療法であって、その際該調製物は、動物への投与に適切な薬物、ワクチン又はホルモンが、ポリマーマトリックス中に懸濁されている、生分解可能なポリマーのミクロスフィアを含んでなり、該ポリマーマトリックスは少なくとも２種類の水溶性の生分解可能なポリマー類から生成され、そして前記ミクロスフィアは（ｄ，ｌラクチド−グリコリド）共重合体でコートされている。２６．ウシの牛乳産生の増加が、ウシのソマトロピンの制御された放出により助長される、請求の範囲第２５項に記載の治療方法であって、前記のウシのソマトロピンは生分解可能なポリマーのミクロスフィアの形状で投与され、そして、でんぷん、架橋でんぷん、フィコル、ポリスクロース、ポリビニルアルコール、ゼラチン、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル−エチルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、酢酸セルロース、アルギン酸ナトリウム、無水ポリマレイン酸エステル類、ポリオルソエステル類、ポリエチレンイミン、ポリエチレングリコール、メトキシポリエチレングリコール、エトキシポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリ（１，３ビス（ｐ−カルボキシフェノシキ）プロパン−コ−無水セバシン酸、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノアセテート、ポリオキシエチレン及びポリオキシプロピレンのブロック共重合体類からなる群から選ばれた、少なくとも２種類の水溶性の生分解可能なポリマー類から生成されるポリマーマトリックス中に懸濁されており、そして前記ミクロスフィアは（ｄ，ｌラクチド−グリコリド）共重合体によりコートされているような治療方法。