JPH09508640A

JPH09508640A - 造影剤におけるまたは造影剤に関する改良

Info

Publication number: JPH09508640A
Application number: JP7521084A
Authority: JP
Inventors: ドウグスター，ハーラル; フオス，ペル・アントーニウス; クラーヴエネス，ヨー; ロングヴエー，ポール; スクートヴエアイト，ローアル; ソールベルグ，ヤーン; スカールアエウクルスト，インゲル・レアイドウン・フイーエル
Original assignee: ニユコメド・イメージング・アクシエセルカペト
Priority date: 1994-02-15
Filing date: 1995-02-15
Publication date: 1997-09-02
Also published as: NO963381L; NO963381D0; IL112657A; AU1668795A; EP0744960A1; US6274120B1; GB9402867D0; ZA951232B; IL112657A0; WO1995021631A1

Abstract

(57)【要約】非ポリマー性および非重合性壁形成物質により封入された気体または気体先駆物質を含有する微小粒子状造影剤は驚くべき構造結合性および安定性を示す容易に特徴づけられる物質である。

Description

【発明の詳細な説明】造影剤におけるまたは造影剤に関する改良本発明は新規な造影剤、特に画像診断に使用される新規な気体含有および気体発生造影剤、並びにそれらの製造法および使用に関する。超音波画像化は例えば血管系の研究、特にカルジオグラフィーでの血管系、および組織の微小血管系の研究において潜在的に有用な診断手段となることはよく知られている。そのようにして得られる音響画像を強調するために、固体粒子の懸濁液、乳化液体粒子、気泡および封入気体または液体を含む様々な造影剤が提案されている。容易に圧縮可能な低密度の造影剤はそれらが発生する音響後方錯乱の点から特に有効であることが一般に受け入れられており、そのため気体を含有する系や気体を発生する系の製造に対してかなり関心が集まっている。気体含有造影剤はまた、磁気共鳴(MR)画像化において、例えばMR信号強度を低減するよう作用する感受性造影剤として有効であることが知られている。酸素含有造影剤はまた、潜在的に有用な常磁性MR造影剤である。さらに、Ｘ線画像化の分野において、二酸化炭素のような気体はネガチブの経口造影剤として使用されうることが観察されている。生理学的に許容しうる物質の心臓内注射によりインビボで発生する遊離の気泡に関する初期の研究はエコーカルジオグラフィーの造影剤としてのこのような泡の潜在的な有効性を証明している。しかしながら、このような技術は遊離の泡の短い寿命のため、実施がきびしく制限される。したがって、例えば乳化剤、油、増粘剤または糖を使用して、あるいは例えば多孔性の気体含有微小粒子としてまたは封入微小気泡として気体またはその先駆物質を様々な系に同伴または封入することにより、エコーカルジオグラフィーや他の超音波研究において気泡を安定化する方法に関心が集まっている。微小泡を含有する超音波造影剤に関する以前の提案はいつも微小泡のためポリマー封入コーチングの使用を必要としていた。例えばWO-A-8002365は大体において、非毒性かつ非抗原の有機分子からなる耐融合性封入膜を有する微小泡の使用を示唆しており、実際は封入材料としてゼラチンの使用だけを開示している。そのように封入された微小泡は封入コーチングが極端に薄いため、エコーカルジオグラフィーに使用するのに好ましい寸法（１〜10μm）において十分な安定性を示さないことがわかった。 US-A-4774958は変性タンパク質、例えばヒト血清アルブミン中への封入により安定化された微小泡分散液の使用を開示している。このような系は例えば２〜５ μmの大きさの微小泡系の製造を可能にするが、まだ左心および心筋層を有効に可視化できない。このようなタンパク質−誘導薬剤の使用はまた、潜在的なアレルギー誘発反応に関する問題を引き起こすことがある。 EP-A-0327490およびWO-A-8906978はとりわけ、遊離または結合形態の気体または揮発性液体（すなわち、６０℃以下の沸点を有する）を含有する微小粒子状のアミロースまたは生分解性合成ポリマーからなる超音波造影剤を開示している。代表的な生分解性合成ポリマーはヒドロキシ炭酸のポリエステル、ポリアルキルシアノアクリレート、ポリアミノ酸、ポリアミド、ポリアクリル化糖およびポリオルトエステルなどである。重合アルデヒドをベースにした同様の生分解性微小粒子状ポリマーはEP-A-044 1468に記載されており、他方、微小粒子状ポリ（アミノ酸）−ポリ（環状イミド）誘導体をベースにした系はEP-A-0458079、US-A-5137928、US-A-5190982、US-A -5205287およびUS-A-5229469に記載されている。 EP-A-0458745は封入材料が、変形性で弾性の、好ましくは生分解性の界面付着ポリマー、例えば多糖、ポリアミノ酸、ポリラクチド、ポリグリコリド、ラクチド／ラクトンコポリマー、ポリペプチド、タンパク質、ポリオルトエステル、ポリジオキサノン、ポリ−β−アミノケトン、ポリホスファゼン、ポリ無水物およびポリ（アルキルシアノアクリレート）である。空気または気体を充填した微小中空球を開示している。微小中空球は通常、その後蒸発させられる揮発性液体の小滴の周囲にポリマーを付着させる乳化法により製造される。このような方法は一般に、乳濁液を安定にするため、ポリオキシエチレングリコールまたはポリオキシプロピレングリコールのようなポリオキシアルキレン化合物と共に界面活性剤、例えばレシチン、脂肪酸またはそのエステルを使用する。一般にポリマー系造影剤は被験体からの最終的な排除または被験体による吸収を容易にするため、望ましくは生分解性であるべきであると考えられている。そのため、多くの場合、その中のエステル、アミドまたはウレタン基のインビボでの酵素的加水分解に対する感受性の結果として生分解性であるポリエステル、ポリ無水物、ポリカーボネート、ポリアミドおよびポリウレタンのようなポリマーを使用することが提案されている。 WO-A-9317718には、ポリマー中に式（Ｉ）（式中、R¹およびR²はそれぞれ水素原子または炭素に結合した一価有機基であるか、またはR¹およびR²は一緒になって炭素に結合した二価有機基を形成し、そしてｍおよびｎは同一または異なって、それぞれ０または１である）のメチレンジエステル単位が存在するためインビボで高い制御可能なレベルの生分解性を示すポリマー系造影剤が記載されている。このような単位は通常のエステラーゼ酵素により特に迅速に分解されるが、酵素の不在下で比較的安定である。すべての上記の封入微小泡造影剤において、微小泡を封入する材料は本質的にポリマーからなるが、少量の他の材料も存在しうる。したがって、例えばEP-A-0 458745は脂肪、ろう、高分子量の炭化水素、リン脂質および可塑剤のような添加剤を例えば20重量％までの量でポリマー壁に混入できることを示唆している。しかしながら、明らかにこれまでは、例えば十分な構造的一体性を達成して造影剤に十分な安定性を付与するため、ポリマー性封入材料を使用することが必要であると考えられていた。例外的に、WO-A-9401140はコレステロールのような脂質可溶性または水不溶性のビルダーを含有する水性乳濁液を凍結乾燥することにより製造される、超音波診断用微小気泡含有造影剤を開示している。しかしながら、これらの造影剤はまた、石油エーテルのような非極性液体を相当な割合で含有する必要がある。今般、最も驚くべきことに、本発明者らは、封入微小泡を含有する有効な造影剤は気体またはその先駆物質を封入するための広範囲の非ポリマー性壁形成物質 (wall-forming materials)を使用して製造することができることを見い出した。このような造影剤がポリマー系造影剤より有意な利点を有し、特により簡単に、より経済的に製造することができ、より簡単に特徴づけることができるということ、また例えばより小さなサイズおよび／または高い生分解性の非ポリマー性分子のため、それらが投与された患者の体内からより容易に排除することができるということは理解されよう。内因性である、または内因性物質に対して生分解性である材料の選択もまた有利である。したがって、本発明の一態様によれば、非ポリマー性および非重合性の壁形成物質により封入された気体または気体先駆物質を含有する微小粒子状造影剤が提供される。本明細書で使用される「非ポリマー性」なる用語は壁形成物質がポリマーのように多数の頭−尾結合繰り返し単位を含有せず、重合法により得られないことを意味する。したがって、壁形成物質は最も一般には例えば正確な融点、単一のクロマトグラフィー移動度など、および単分散の分子量（すなわち1.0の多分散指数を有する；これは重量平均分子量と数平均分子量の比として定義される）により明示されるように、明確に定義された特徴づけることのできる分子からなるが、本発明はまた、例えば明らかに、天然に存在する混合物を含む、そのような物質の構成混合物からなる造影剤を包含することは理解されよう。これらの特性は生成物が典型的に異なる鎖長の分子の様々な混合物からなり、そのため融点範囲、多数のクロマトグラフィー移動度および分子量範囲（例えば1.0より大きい多分散指数により明示される）により特徴づけられる重合法によって得られた物質のものと対照をなす。「非重合性」なる用語は封入材料が例えば本発明の造影剤の製造および保存の間に使用されるような条件下で重合しないことを意味する。封入材料は好都合には低分子量を有し、例えば100〜6000の範囲である。分子量は材料の融点および溶解性が適当な温度において、また例えば下記のような適当な加工条件下で微小粒子の生成を可能にするようなものであることは理解されよう。必要な壁形成性を示すために、封入材料は通常の保存および取り扱い温度において固体または半固体であるべきであり、そのため材料は有利には少なくとも40 ℃の融点を有することは理解されよう。多くの場合、このような材料は皮膜形成性を示し、それは分子内に親水性および親油性領域が存在することにより材料が幾らか両親媒性を有するため高められうる。親水性は例えばカルボキシ、ケト、ヒドロキシまたはアミノのような特定の親水性基から、そして／または水素結合に関与することのできる基、例えばエステル化カルボキシ基のカルボニル部分の存在により誘導されうる。例えば下記のような方法により本発明の造影剤の製造を容易にするため、封入材料は望ましくは水より油に対して大きい溶解性を有する。さらに、封入材料およびインビボで生じるその分解生成物は生理学的に許容しうるものでなければならず、内因性であるか、または場合により例えばエステル、アミドまたはウレタン基のような不安定な結合に関わる加水分解的、酵素的または他の代謝的反応の結果としてのより小さい分子への分解後に、容易に排除可能なものであるべきである。本発明の造影剤は例えば脂肪酸、例えばパルミチン酸、ステアリン酸またはベヘン酸のような10〜50個の炭素原子、例えば10〜30個の炭素原子を含有する親油性の飽和または不飽和脂肪族カルボン酸およびそのエステル、例えばアルキルエステル、例えばペンタエリトリトール、エチレングリコールまたはグリセリルエステルのようなポリヒドロキシアルキルエステル；脂肪アルコールおよび脂肪アミン、例えば10〜50個の炭素原子、例えば10〜30個の炭素原子を含有する親油性の飽和または不飽和脂肪族のアルコールおよびアミン、およびこれらのアルコールまたはアミンと、例えばモノ−、ジ−またはトリ−カルボン酸、例えば場合によりヒドロキシル化される酢酸、アジピン酸およびコハク酸のような低級アルカン酸とのエステルまたはアミド；親油性のアルデヒドおよびケトン；親油性の糖誘導体、例えば親油性のエーテル、より好ましくはエステル基を含有するもの；コール酸およびその誘導体（例えばエステル）；コレステロールおよびその誘導体；脂肪族および芳香族炭化水素、例えばミネラルワックス；疎水性に変性された親水性化合物、例えば１個以上の親油性基（例えば脂肪族鎖のようなヒドロカルビル基）を含有して分子が疎水性になるように変性されたＸ線造影剤のような親水性化合物；並びに他の生体許容性で脂肪可溶性物質、例えばトコフェロールまたはチオクト酸およびその誘導体のような抗酸化剤を含む、上記の要件を満たす広範囲の壁形成物質を包含する。１分子あたり１個以上のメチレンジエステル単位（例えば上記式(Ｉ)）を有する壁形成物質を含有する造影剤はそれらがインビボで分解してより小さく、より容易に排除可能な分子を生成することが簡単であるため、本発明の有用な態様である。このような単位はまた、望ましい両親媒性を壁形成物質に付与する。何れの生体許容性気体も本発明の造影剤に使用することができる。本明細書で使用される「気体」なる用語は37℃で気体状態の物質を意味する。代表的な気体は空気、窒素、酸素、水素、亜酸化窒素、二酸化炭素、ヘリウム、アルゴン、並びにメタンおよびアセチレンのような低分子量の炭化水素である。六フッ化硫黄、十フッ化二硫黄、四フッ化炭素のような低分子量のフッ素化化合物、並びにペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタンおよびペルフルオロペンタンのようなペルフルオロアルカンは特に重要である。気体は微小泡の中で遊離形態であるかまたは含有する物質の中に閉じ込められたものであるかまたは同伴されたものであることができる。本発明の造影剤は超音波、MRおよびＸ線画像化などの様々な画像診断法において使用されうる。超音波画像診断やMR画像化における、例えば感受性造影剤としてのこれらの使用は本発明の好ましい特徴を構成する。エコーカルジオグラフィーのような超音波法において、肺系統の自由な通過を可能にし、約0.1〜15 MHzの好ましい画像化振動数との共鳴を達成するためには、0.1〜10μm、例えば１〜７μmの平均サイズを有する微小粒子を使用することが好都合である。しかしながら、例えば500μmまでの平均サイズを有する、実質的により大きな粒子または泡は他の用途、例えば胃腸の画像化、あるいは子宮または卵管の研究において有用である。本発明の造影剤は投与法に応じて適当な方法で、例えば注射用滅菌水のような注射可能な媒質中の懸濁液として製造することができる。このような製剤は所望により生体適合性添加剤、例えばトコフェロールまたはチオクト酸のような抗酸化剤を含有してもよい。本発明の造影剤は好都合な方法、例えばWO-A-9317718に記載されているものと同様の方法により製造することができる。壁または膜により封入される物質の代表的な製造法はまた、P．D．Deasy，Marcel Dekker Inc.，New York(1984年)の「微小封入および関連の薬剤プロセス」のような文献に記載されている。したがって、例えば本発明の造影剤はポリマー分野のものと同様の乳化法により製造することができる。典型的には、このような方法は（ｉ）親水性および疎水性相からなり、壁形成物質が分散相中に優先的に溶解するか、または各相間の界面に分布する乳濁液を生成し、そして(ii)乳濁液から所望の造影剤を単離することを包含する。乳濁液は好ましくは、一方または両方の相に溶解した１種以上の乳化剤もまた含有する。単一または多数の乳濁液を生成することができ、代表的な多重乳化法はWO-A-9317718に記載されている。壁形成物質は特定の形態の乳化工程に適当な親液性を有するよう選択されうる。したがって、例えば水中油形の乳濁液を使用する工程において油溶性の壁形成物質を選択することが有利である。水中油形乳濁液を使用して、物質が溶解速度を遅くして水の存在下での微小粒子生成を可能にするのに十分な引力による相互作用を示す水溶性の壁形成物質を製造することもできる。また、油中水形乳濁液および油溶性の壁形成物質を使用して同様のアプローチを行うことができる。乳濁液は例えばかきまぜ、超音波処理、撹拌（好ましくは高速撹拌）または他の形態の混合（例えば高剪断混合）、膜乳化、高電圧均質化または高圧均質化のような慣用の方法により製造することができる。壁形成物質は有利には分散相となるものに予め溶解されうる。上記したように、有利には１種以上の乳化剤が乳濁液の一方または両方の相に溶解され、好ましくは少なくとも１種の乳化剤が連続相に溶解される。撹拌速度のような要因は最終的に生成した封入微小泡の大きさに影響を及ぼし、したがって例えばより速い撹拌はより小さい微小泡を与える傾向があることは理解されよう。使用それる乳化剤の量は広範に変わりうるが、典型的には重量基準で壁形成物質の量に等しいか、またはそれを越える。所望により、乳化補助物質のような添加剤、例えばタンパク質、炭水化物、多糖または他の親水性ポリマーのような粘度増強剤もまた使用することができる。別法として、適当な非プロトン性有機溶媒（例えばジメチルスルホキシドのようなスルホキシド、テトラヒドロフランのような環状エーテル、またはジメチルホルムアミドのようなN,N−ジ置換アミド）中における壁形成物質の溶液を水相と（例えば高速撹拌機を使用して）混合して壁形成物質を沈殿させ、それを集め、凍結乾燥して所望の造影剤を得ることができる。水相は有利にはポリビニルアルコールまたはポロキサマー（例えばプルロニック）のようなポリマー性物質を含有する。このような方法は上記のEP-A-0458079に記載されている。別の方法は適当な非プロトン性溶媒中における壁形成物質の溶液を液状窒素中に注入することからなり、溶液は所望によりヒドロキシプロピルセルロースのような添加剤もまた含有する。あるいは、壁形成物質は適当な溶媒に溶解するか、または例えば水中油形、油中水形もしくは多数の乳濁液に分散し、そして例えば EP-A-0514970 に記載されているように、溶液または乳濁液噴霧乾燥することができる。例えばこの技術分野で知られているようなコアセルベーション法もまた、本発明の造影剤の製造に使用することができる。原則として、何れの乳化剤も本発明の造影剤の製造に使用することができる。しかしながら、本発明者らはそのようにして得られる造影剤の安定性がポリマー性乳化剤により、例えば微小粒子の凝集する傾向がより小さいまたは最小であると共に、気体含量の保持が長持ちすることから明らかであるように高められるため、ポリマー性乳化剤を選択することは有利であることを見い出した。このようなポリマー性乳化剤の例としてはポリビニルアルコール、タンパク質（例えばゼラチン、ヒトまたはブタの血清アルブミンのようなアルブミンおよびナトリウムカゼイネートのようなカゼイン塩）、多糖（例えば変性キトサン；親油性化スターチおよび可溶性還元アミロースを含む変性スターチ；ヘパリンおよびアラビアゴムのようなゴム）、交互に親水性および疎水性ブロックからなるブロックコポリマー（例えばB246(117753-68-1)のようなポリヒドロキシステアレート−ポリエチレンオキシドブロックコポリマー；テトロニクスおよびプルロニックF38、F 68、F77、F88、F127、L44、L64、P84またはP123のようなポロキサマーまたはそのペルフルオロ化誘導体を含むポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー）、ソルビトールのような六価アルコールの部分脂肪酸エステルのポリオキシエチル化誘導体（例えばツィーン40、60または80のようなツィーン型界面活性剤）、ポリビニルピロリドン（例えばコリドン）、ポリオキシエチレンアルコールの脂肪アルコールエーテル（例えばブリジ52または99のようなブリジ型界面活性剤）、脂肪酸のポリエチレングリコールエステル（例えばクレマファーRH40のようなクレマファー型界面活性剤）、アトラスG-1702(PEG-6ソルビタン蜜ろう)およびアトラスG-1726（PEG-2 0ソルビタン蜜ろう）のようなポリエチレングリコール−ソルビタン−蜜ろう界面活性剤、および上記のポリエチレングリコール含有化合物の何れかのペルフルオロ化誘導体が挙げられる。理論的考察に束縛されることを望まないが、このようなポリマー性乳化剤は特に壁形成物質と適合し、また例えば本発明の造影剤において封入材料の外部コーチングとして存在しうる。そのようにしてそれらは例えば造影剤の分散性および安定性を高め、例えば静電または他の相互作用による凝集傾向を抑制することができる。このような造影剤において、乳化剤の役割は乳化補助剤および／または安定剤としてであり、壁形成物質として作用しないことは理解されよう。本発明の造影剤を製造するための乳化工程において使用される水と混和しない溶媒は乳化工程で使用される温度において液体であり、それは有利には後の段階でその除去を容易にする蒸気圧を有するよう選択されうることは理解されよう。代表的な溶媒は例えば16個までの炭素原子を含有する脂肪族、脂環式および芳香脂肪族炭化水素、例えばｎ−オクタン、シクロオクタン、ジメチルシクロヘキサン、エチルシクロヘキサン、メチルヘプタン、エチルヘキサン、トルエン、キシレン、ナフタレンまたはカンフェンもしくはリモネンのようなテルペン、テルペノイドまたはイソプレノイド；フレオン、塩化メチレン、クロロホルム、四塩化炭素または臭化メチルのようなハロアルカン；エチルまたはプロピルアセテート、ブチルホルメート、プロピルもしくはイソプロピルブチレートまたはイソブチレートのようなエステル；並びに適当なエーテルおよび乳化工程で使用される温度において液体であり、適当な溶解性を有する他の物質である。本発明の造影剤の製造において、壁形成物質を乳濁液の油相および水相の界面に付着させることが望ましい場合、このような付着は例えば温度、pH、溶媒の性質または溶質濃度のような変性パラメーターにより引き起こすことができる。したがって、例えば乳濁液の温度を下げることによりpH変化により、壁形成物質のための非溶媒を加えることにより、または少なくとも有機溶媒の少なくとも部分的な除去により（例えばEP-A-0458745に記載されているように、好ましくは混入されるのが望ましい気体の雰囲気下で蒸発または凍結乾燥により）、壁形成物質を沈殿させることができる。気体先駆物質を含有する造影剤を製造することが望ましい場合、例えば、先駆物質は好都合には乳化前に、水と混和しない有機溶媒に溶解されうる。例えば、気体先駆物質は例えば熱的にまたはpH変化により引き起こされる分解の結果として、あるいは酵素的分解の結果として、患者に投与される気体を生成するよう反応する化合物であってよい。したがって、例えば非毒性有機炭酸塩および重炭酸塩、例えばアルギニン炭酸塩および式RO・CO・OM（式中、Ｒは有機基であり、そしてＭは生理学的に許容しうるカチオンである）の化合物はアミノマロネートのような化合物のように、血流中で優勢なpH条件下で二酸化炭素を生成する。一般に、造影剤は好都合な方法により、例えば蒸発、凍結乾燥または噴霧乾燥のような方法を使用する溶媒除去により単離することができる。このような方法は所望により造影剤に混入される気体の雰囲気下で、所望により減圧下で行うことができる。そのようにして得られる造影剤は乾燥形態で保存および輸送することができ、その状態でこれらはいつまでも安定であり、投与前に適当な液状担体（例えば注射用滅菌水、生理的食塩水またはリン酸塩緩衝液）と混合される。このようにして、注射されるまたは別のやり方で投与される造影剤の濃度は用途の明確な特徴に応じて変わりうる。造影剤はまた、特に封入膜の多孔性が比較的低い場合、このような担体中の懸濁液として保存することができる。以下の実施例により本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されない。〔実施例〕実施例１壁形成物質および乳化剤の合成 a）メチレンビス（16−ヘキサデカノイルオキシヘキサデカノエート）メチレンビス（16−ヒドロキシヘキサデカノエート）（1.0ミリモル）および塩化パルミトイル(7.0ミリモル)の混合物をジエチルエーテル（10ml）中で24時間還流し、溶媒を蒸発させた。残留物を最初にヘキサン／クロロホルム（２：１）、次にクロロホルムで溶離するシリカゲルフラッシュカラム上で精製した。収率88％。白色の固体。 ¹H NMR(CDCl₃)：δ 0.88(6H，t，J 6.7Hz)，1.2-1.4(92H，m)，1.5-1.7(12H， m)，2.28(4H，t，J 7,5Hz)，2.35(4H，t，J 7.6Hz)，4.05(4H，t，J 6.7Hz)，5. 75(2H，s)。¹³C NMR(CDCl₃)：δ 14.11， 22.70，24.64，25.06，25.97，28,70，29.04，29.19，29.25，29.29，29.38，29 .47，29.50，29.56，29.62，29.67，29.70，29.71，31.94，34.00，34.43，64.3 9，79.06，172.59，173.97。 b）メチレン（16−ヘキサデカノイルオキシヘキサデカノエート）（16′−ヒドロキシヘキサデカノエート）メチレンビス（16−ヒドロキシヘキサデカノエート）（1.0ミリモル）および塩化パルミトイル(1.0ミリモル）の混合物をジエチルエーテル（10ml）中で24時間還流し、溶媒を蒸発させた。残留物を溶離剤として塩化メチレン／アセトニトリル（95：５）を使用し、シリカゲルを通して繰り返し濾過することにより精製した。収率38％。白色の固体。 ¹H NMR(CDCl₃)：δ 0.88(3H，t，J 6.7Hz)，1.2-1.4(69H，m)，1.5-1.7(10H， m)，2.29(2H，t，J 7.5Hz)，2.35(4H，t，J 7.6Hz)，3.64(2H，t，J 6.6Hz)，4. 05(2H，t，J 6.7Hz)，5.75(2H，s)。¹³C NMR(CDCl₃)：δ 14.12，22.71，24.64 ，25.06，25.77，25.97，28.70，29.04，29.19，29.24，29.25，29.30，29.38， 29.46，29.50，29.56，29.60，29.61，29.63，29,64，29.66，29.67，29.70，29 .71，31.95，32.85，34.01，34.44，63.09，64.41，79,06，172.51，174.01。 c）メチレン（16−ヘキサデカノイルオキシヘキサデカノエート）（16′−ヒドロキシヘキサデカノエート）と塩化アジポイルの反応生成物メチレン(16−ヘキサデカノイルオキシヘキサデカノエート)(16′−ヒドロキシヘキサデカノエート)（1.0ミリモル）および塩化アジポイル（0.5ミリモル）の溶液をキシレン／トリクロロエチレン（４：１、20ml）中、減圧下(150ミリバール)、60℃で16時間還流し、溶媒を蒸発させた。粗生成物を溶離剤として塩化メチレン／アセトニトリル（97：３）を使用するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。収率74 ％。白色の固体。 ¹H NMR(CDCl₃)：δ 0.88(6H，t，J 6.7Hz)，1.2-1.4(136H，m)，1.5-1.7(24H ，m)，2.28(4H，t，J 7,5Hz)，2.35(12H，t，J 7.6Hz)，4.05(8H，t，J 6.7Hz) ，5.74(4H，s)。¹³C NMR(CDCl₃)：δ 14.12，22.71，24.48，24.64，25.06，25. 95，25.97，28.68，28.70，29.01，29.19，29.25，29.30，29.38，29.47，29.50 ，29.56，29.62，29.67，29.70，29.72，31.95，33.98，34.00，34.43，64.40， 64.56，79.06，172.49，173.41，173.98。 d）メチレンビス（16−ヘキサデカノイルオキシメトキシカルボニルオキシヘキサデカノエートｉ）メチレンビス（16−クロロメトキシカルボニルオキシヘキサデカノエート）クロロメチルクロロホルメート（0.93g、7.2ミリモル）を塩化メチレン（80ml ）中におけるメチレンビス（16−ヒドロキシヘキサデカノエート）（2.0g、3.6 ミリモル）の氷冷溶液に加えた。ピリジン(0.57g、7.2ミリモル)を加え、反応混合物を０℃で15分間、室温で４時間撹拌した。反応混合物を塩酸（１Ｍ、50ml）飽和重炭酸ナトリウム水溶液(50ml)、水(50ml)で洗浄し、乾燥（MgSO₄）した。溶媒を蒸発させ、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ／塩化メチレン）により精製した。収率84％。 ¹H NMR(200MHz，CDCl₃)：δ 1.25(m，44H)，1.72(m，8H)，2.31(t，4H)，4.20 (t，4H)，5.72(m，6H)。 ii）メチレンビス（１６−ヘキサデカノイルオキシメトキシカルボニルオキシヘキサデカノエート）カリウムｔ−ブトキシド(0.784g、7.0ミリモル)をN,N−ジメチルホルムアミド (100ml)中におけるパルミチン酸(1.80g、7.0ミリモル)の溶液に加え、得られた懸濁液にN,N−ジメチルホルムアミド(10ml)中のメチレンビス(16-クロロメトキシカルボニルオキシヘキサデカノエート)(2.6g、3.5ミリモル)、次に18−クラウン−６(0.１g)を加えた。反応混合物を室温で２日間撹拌した。反応混合物を濾過し、溶媒を減圧下で除去した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ／塩化メチレン）により精製した。収率19％。 ¹H NMR(300MHz，CDCl₃):δ 0.86(m，6H)，1.23(m，12H)，1.62(m，9211)，2.3 3(m，8H)，4.16(m，4H)，5.73(m，6H)。 e）１−（オクタデシルオキシカルボニルオキシ）エチル５−アセトアミド−３ −（Ｎ−メチルアセトアミド）-2,4,6−トリヨードベンゼンカルボキシレートｉ）１−クロロエチルオクタデシルカルボネート１−クロロエチルクロロホルメート（7.15g、50ミリモル）および１−オクタデカノール（13.53g、50ミリモル）をクロロホルム(100ml)中、０℃で懸濁した。温度を10℃以下に保ちながらピリジン（3.96g、50ミリモル）を20分間にわたって滴加した。室温で24時間撹拌した後、反応混合物を１Ｎ塩酸で４回、飽和重炭酸ナトリウム溶液で１回、最後に水で２回洗浄した。有機溶液を硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除去した。収量19g。 ii）１−（オクタデシルオキシカルボニルオキシ）エチル５−アセトアミド− ３−（Ｎ−メチルアセトアミド）2,4,6−トリヨド−ベンゼンカルボキシレート１−クロロエチルオクタデシルカーボネート(7.54g、20ミリモル)を室温で乾燥N,N−ジメチルホルムアミド中におけるカリウム５−アセトアミド−３−（Ｎ −メチルアセトアミド）−2,4,6−トリヨードベンゼンカルボキシレート（15.99 g、24ミリモル）および沃化カリウム（0.33g、２ミリモル）の溶液に加えた。50 ℃で18時間撹拌した後、溶媒を減圧下で除去した。残留物をクロロホルム（200m l）中で懸濁し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で３回、最後に水で２回洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を減圧下で除去した。収量18.6g。生成物をさらにフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル60、クロロホルム／アセトニトリル85：15）により精製した。 ¹H NMR(DMSO-d₆): δ 0.852(CH ₂CH ₃)，1.236(CH₂)，1.639(CHCH ₃)，1.657(COO CH ₂CH ₂)，1.670(N(CH₃)COCH ₃)，2.051(NCOCH ₃)，2.965(NCH₃)，4.154(COOCH₂)， 6.971(CHCH ₃)，10.103(NH)。 f）メチレンビス〔３−（2,3−ジヘキサデカノイルオキシプロポキシカルボニル）プロピオネート〕ｉ）３−（2,3−ジヘキサデカノイルオキシプロポキシカルボニル）プロピオン酸ジパルミチン(1,2−ジパルミトイルグリセロール)(3.00g、5.27ミリモル)、無水コハク酸（1.00g、10.0ミリモル）およびN,N-ジメチル−４−アミノピリジン（50mg、0.41ミリモル）を窒素雰囲気下、テトラヒドロフラン(30ml)およびN,N −ジメチルホルムアミド(10ml)に溶解した。次に、トリエチルアミン(2.5ml)を加え、得られた溶液を周囲温度で２日間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、白色の固体残留物をクロロホルム(150ml)に再溶解した。溶液を１％塩酸水溶液（10ml）およびブライン（２×50ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、最後に濃縮して5.80gの白色の固体を得、それをさらに精製することなく次の反応に使用した。 ¹H NMR(300MHz，CDCl₃): δ 0.85-0.90(m，6H)，1.20-1.35(m，48H)，1.55-1. 65(m，4H)，2.30(dd，J₁=7.6，J₂=2.5Hz，2H)，2.32(dd，J₁=7.4，J₂=2.3Hz，2H )，2.62-2.70(m，4H)，4.14(dd，J₁=12.1，J₂=5.9Hz，1H)，4.18(dd，J₁=12.1， J₂=5.9Hz，1H)，4.29(dd，J₁=9.0，J₂=4.4Hz，1H)，4.33(dd，J₁=9.0，J₂=4.4Hz ，1H)，5.23-5.30(m，1H)。¹³C NMR（300MHz，CDCl₃): δ14.121，22.720，24,8 90，24.917，28.716，28.756，29.110，29.156，29.310，29.397，29.517，29.5 30，29.697，29.731，31.961，34.077，34.211，62.058，62.673，68.802，171, 620，172.956，173.349，177.162。 ii）メチレンビス〔３−（2,3−ジヘキサデカノイルオキシプロポキシカルボニル）プロピオネート〕 1,8−ジアザビシクロ〔5.4.0〕ウンデカ−７−エン(633mg、4.158ミリモル)を窒素雰囲気下、乾燥塩化メチレンおよびN,N−ジメチルホルムアミド(40ml、１：１)中における上記（a）からの３−（2,3−ジヘキサデカノイルオキシプロポキシカルボニル）プロピオン酸（2.65g、3.96ミリモル）の溶液に加えた。溶液を1 5分間撹拌した後、ジヨードメタン（530mg、1.980ミリモル）を加えた。得られた溶液を周囲温度で４日間撹拌し、溶媒を減圧下で蒸発させ、固体残留物を塩化メチレン(200ml)に再溶解した。溶液を１％塩酸水溶液（１×25ml）およびブライン（３×50ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮し、そして薄層クロマトグラフィー分析により示されるような２つの生成物および幾らかの残留する出発物質を含む2.80gの黄色がかったろう状の固体を得た。粗製混合物をシリカカラムおよび石油エーテル中の酢酸エチルの濃度を段階的に増加する勾配溶離剤を使用する中圧クロマトグラフィーにより精製して1.07gの表題化合物を白色の固体として得た。 ¹H NMR(300MHz，CDCl₃): δ 0.88(t，J=7.2Hz，12H)，1.26(m，96H)，1.61(m ，8H)，2.30(dd，J₁=7.7，J₂=3.2Hz，4H)，2.32(dd，J₁=7.4，J₂=3.7Hz，4H)，2 .65-2.69(m，8H)，4.14(dd，J₁=11.8，J₂=3.0Hz，2H)，4.17(dd，J₁=11.2，J₂=2 .95Hz，2H)，4.27-4.34(m，4H)，5.23-5.29(m，2H)，5.77(s，2H)。¹³C NMR（30 0MHz，CDCl₃)：δ 14.114，22.714，24.890，24.910，28.556，28.756，29.116 ，29.156，29.303，29.317，29.390，29.517，29.530，29.657，29.671，29.691 ，29.731，31.954，34.057，34.197，62.018，62.719，68.775，79.444，170.85 8，171.440，172.849，173.209。 g）メチレンビス〔16−（15−（16−ヒドロキシヘキサデカノイルオキシメトキシカルボニル）ペンタデシルオキシカルボニルエチレンカルボニルオキシ）ヘキサデカノエート〕ｉ）メチレンビス〔16−（カルボキシエチレンカルボニルオキシ）ヘキサデカノエート〕メチレンビス（16−ヒドロキシヘキサデカノエート）（5.5g、10ミリモル）、無水コハク酸（2.2g、22ミリモル）およびN,N−ジメチル−４−アミノピリジン（2.5g、20ミリモル）をN,N−ジメチルホルムアミド(100ml)に溶解し、撹拌しながら16時間50℃に加熱した。N,N−ジメチルホルムアミドを真空下で蒸発させ、残留物をクロロホルム／メタノール（99：１）に溶解し、そして溶解剤を用いて短シリカカラムを通して濾過した。生成物を石油エーテルで洗浄し、濾過し、真空乾燥した。収量６g（7 8％）。白色の固体。 ¹H NMR(CDCl₃): δ 1.23-1.30(m，42H)，1.60-1.64(m，8H)，2.32-2.37(t，4H )，2.62-2.69(m，10H)，4.06-4.09(t，4H)，5.75(s，2H)，10-11(m，2H)。 ii）メチレンビス〔16−（15−（16−ヒドロキシヘキサデカノイルオキシメトキシカルボニル）ペンタデシルオキシカルボニルエチレンカルボニルオキシ）ヘキサデカノエート〕上記（a）からのメチレンビス〔16−（カルボキシエチレンカルボニルオキシ）ヘキサデカノエート〕（380mg、0.5ミリモル）、メチレンビス〔16−ヒドロキシヘキサデカノエート）（600mg、1.1ミリモル）、Ｎ−エチル−N′−３−（３ −ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（200mg、1.05ミリモル）およびN,N−ジメチル−４−アミノピリジン(50mg)を25mlのN,N−ジメチルホルムアミドに溶解し、45℃で16時間撹拌した。N,N−ジメチルホルムアミドを真空下で蒸発させ、残留物をクロロホルムに溶解し、溶離剤としてジクロロメタン／メタノールを使用するシリカKG60上のカラムクロマトグラフィーにより精製した。収量100mg(10％)。白色の固体。 ¹H NMR(CDCl₃): δ 1.25(m，132H)，1.59-1.65(m，24H)，2.32-2.37(t，12H) ，2.61(s，8H)，3.63(t，4H)，4.05-4.09(t，8H)，5.74(s，6H)。 h）２−ヘキサデシルマロン酸ジヘキサデシルエステル 1,8−ジアザビシクロ〔5.4.0〕ウンデカ−７−エン(1,5-5)(4.567 g、30ミリモル）および１−ヨードヘキサデカン（10.570g、30ミリモル）をN,N −ジメチルホルムアミド(75ml)中における２−ヘキサデシルマロン酸の溶液に加えた。室温で22時間撹拌した後、沈殿物を濾過し、N,N−ジメチルホルムアミドで洗浄した。生成物を溶離剤としてクロロホルム／ヘキサンを使用するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。収率52％。 ¹H NMR(300MHz，CDCl₃): δ 0.88(t，9H)，1.26(m，80H)，1.62(m，4H)，1.88 (m，2H)，3.31(t，1H)，4.15(m，4H)。FAB-MS: 799.7(M+Na)。 i） 2,2−ジヘキサデシルマロン酸ジヘキサデシルエステル水素化ナトリウム(72mg、３ミリモル)をアルゴン雰囲気下でテトラヒドロフラン（45ml）中における２−ヘキサデシルマロン酸ジヘキサデシルエステル（2.33 g、３ミリモル）の冷却（氷／水）溶液に少しずつ加え、得られた混合物を周囲温度で30分間撹拌した。溶媒を蒸発させ、固体残留物をN,N−ジメチルホルムアミド(45ml)に再溶解した。N,N−ジメチルホルムアミド(20ml)中における１−ヨードヘキサデカン（1.06g、３ミリモル）の溶液を加え、撹拌を室温で24時間続けた。pHを２Ｎ HClで約５に調整した後、水（75ml）を反応混合物に加えた。混合物をクロロホルム（３×75ml）で抽出し、クロロホルム相を水（３×75ml）で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除去した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル60、クロロホルム／ヘキサン）により精製した。収率66％。 ¹H NMR(300MHz，CDCl₃): δ 0.88(t，12H)，1.26(m，108H)，1.60(m，4H)，1. 85(m，4H)，4.09(t，4H)。FAB-MS: 1024(M+Na)。 j）３−ヘキサデシルオキシカルボニル−３−ヒドロキシペンタン二酸ジヘキサデシルエステル 1,8−ジアザビシクロ〔5.4.0〕ウンデカ−７−エン(1,5-5)(4.567g、30ミリモル)を室温でN,N−ジメチルホルムアミド(50ml)中におけるクエン酸(1.924g、10 ミリモル）の溶液に加えた。１−ヨードヘキサデカン(10.57g、30ミリモル）を加え、得られた混合物を50℃で21時間撹拌した。沈殿した生成物を濾過し、N,N −ジメチルホルムアミドで洗浄し、粗生成物を溶離剤としてクロロホルム／ヘキサンを使用するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。収率83％。 ¹H NMR(300MHz，CDCl₃): δ 0.88(t，9H)，1.26(m，78H)，1.60(m，6H)，2.84 (q，4H)，4.07(t，4H)，4.13(s，1H)，4.20(t，2H)。FAB-MS: 887.6(M+Na)。 k）メチレンビス−16−〔３−（2,3−ビス−ヘキサデカノイルオキシプロポキシカルボニル）プロパノイルオキシ〕ヘキサデカノエートコハク酸2,3−ビス−ヘキサデカノイルオキシプロピルモノエステル（1.30g、 1.94ミリモル）およびメチレンビス−16−ヒドロキシヘキサデカノエート（515m g、0.925ミリモル）およびトリフェニルホスフィン(510mg、1.94ミリモル)を窒素雰囲気下でテトラヒドロフラン（25ml）に溶解した。得られた溶液にジエチルジアゾジカルボキシレート（トルエン中の38〜40％溶液として；930μl、1.94ミリモル）を加えた。得られた反応混合物を周囲温度で24時間撹拌し、次に濃縮乾固した。残留する固体をトルエン／塩化メチレン（５：２）に再溶解し、シリカゲルの短カラムの口に装入し、石油エーテル中の酢酸エチル量を増加（０〜40％）して勾配溶離し、そして溶媒を蒸発させ1.43gの表題化合物（83％）を白色の固体として得た（融点47℃）。 ¹H NMR(300MHz，CDCl₃): δ 0.88(t，12H)，1.26(m，140H)，1.62(m，16H)，2 .28-2.38(m，12H)，2.61-2.65(m，8H)，4.08(t，J=7Hz，4H)，4.14(dd，J₁=12Hz ，J₂=6Hz，2H)，4.18(dd，J₁=12Hz，J₂=6Hz，2H)，4.29(dd，J₁=12Hz，J₂=4.5Hz ，2H)，4.32(dd，J₁=12，J₂=4.5Hz，2H)，5.23-5.32(m，2H)，5.74(s，2H)。¹³C NMR（300MHz，CDCl₃): δ 14.12，22.71，24.64，24.87，24.90，25.91，28,62 ，28.94，29.00，29.04，29.10，29.14，29.25，29.30，29.38，29.48，29.50， 29.52，29.56，29.62，29.64，29.68，29.72，31.95，34.00，34.06，34.20，62 .04，62.58，65.00，68.79，76.63，77.05，77.47，79.05，171.83，172.11，17 2.48，172.87，173.24。 PD-MS: 1881(M-H+23(Na))，1603(M-H+23(Na)-255)，906(奇数電子フラグメント H)，651(偶数電子フラグメント)。MALDI-MS: 1897(M+39(K))，1881(M+23(Na) 。 1）エチリデンビス（16−アセトキシヘキサデカノエート）ｉ）エチリデンビス（16−ヒドロキシヘキサデカノエート） 1,8−ジアザビシクロ〔5.4.0〕ウンデカ−７−エン(1,5-5)(2.74g、0.018モル )をジメチルホルムアミド（150ml）中の16−ヒドロキシヘキサデカン酸(4.90g、 0.018モル)に加えた。５分後、撹拌しながら沃化エチリデン(2.54g、0.009モル) を加え、混合物を40℃で３日間撹拌し続けた。反応混合物を20℃に冷却し、沈殿が完了（２時間）した後、沈殿物を濾過により単離した。生成物を活性炭で処理し、ジクロロメタンから２回再結晶して1.03（20％）の表題化合物を得た。示差走査熱量計は融解開始温度が88.93℃であることを示した。 ¹H NMR(200MHz，CDCl₃): δ 1.25(s，44H，CH₂)，1.45(d，3H，CH ₃CH)，1.56( m，8H，CH₂)，2.30(t，4H，CH₂CO)，3.63(t，4H，2×CH₂O)，6.86(q，1H，CHCH₃ )。¹³C NMR(50MHz，CDCl₃): δ20.86，25.91，26.98，30.22，30.44，30.67，30 .84，34.00，35.30，64.00，89.00，171.77(C=O)。 ii）エチリデンビス−（16−アセトキシヘキサデカノエート）エチリデンビス−16−ヒドロキシヘキサデカノエート（911mg、1.74ミリモル）およびN,N−ジメチル−４−アミノピリジン（32mg）をテトラヒドロフラン（2 5ml）に溶解し、次に窒素雰囲気下でシリンジを通してトリエチルアミン（0.6ml ）および無水酢酸(1ml)を連続的に加えた。反応混合物を２時間撹拌した後、塩化メチレンで希釈し、そして塩酸（１％）、飽和重炭酸ナトリウム水溶液および水で連続的に洗浄した。有機相を乾燥し、溶媒を蒸発させ、固体残留物を24時間にわたって真空乾燥して1.07g（94％）の表題化合物を白色の固体として得た（融点58℃）。 ¹H NMR(300MHz，CDCl₃): δ 1.26(m，44H)，1.46(d，J=5.5Hz，3H)，1.56-1.6 7(m，8H)，2.04(s，6H)，2.27-2.33(m，4H)，4.05(t,J=6.7Hz，4H)，6.86(q，J= 5.5Hz，1H)。¹³C NMR(300MHz，CDCl₃): δ 19.58，21.01，24.68，25.93，28.64 ，29.02，29.26，29.28，29.47，29,54，29.59，29.61，29.65，34.13，64.66， 76.62，77.04，77.47，88.31，171.19，171.73。 m）エチリデンビス−（16−ヘキサデカノイルオキシヘキサデカノエート）エチリデンビス−16−ヒドロキシヘキサデカノエート(570m、1ミリモル)を25m lのジクロロメタンに溶解した。トリエチルアミン(276μl、２ミリモル)を撹拌しながら加えた。ジクロロメタン(25ml)に溶解した塩化パルミトイル（600μl、２ミリモル）を撹拌しながら滴加した。反応混合物を一晩撹拌し、溶媒を真空下で蒸発させた。残留物をジクロロメタンに溶解し、シリカを充填したガラスカラム上のクロマトグラフィーで処理した。生成物をヘキサン／ジクロロメタン（１：２）で溶離した。収量900mg（85％）。 ¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ 0.91-0.85(6H m)，1.37-1.23(91H，m)，1.47-1.4 5(3H，d)，1.67-1.55(12H，m)，2.33-2.26(8H，m)，4.08-4.03(4H，t)，6.89-6. 84(1H，t)。 n）メチレンビス−（16−アセトキシヘキサデカノエート）メチレンビス−16−ヒドロキシヘキサデカノエート（2.0g、3.47ミリモル）およびN,N−ジメチル−４−アミノピリジン(50mg)をテトラヒドロフラン（25mg）に溶解し、次に窒素雰囲気下でシリンジを通してトリエチルアミン（1.2ml）および無水酢酸(２ml)を連続的に加えた。反応混合物を２時間撹拌した後、塩化メチレンで希釈し、そして塩酸（１％）、飽和重炭酸ナトリウム水溶液および水で連続的に洗浄した。有機相を乾燥し、溶媒を蒸発させ、固体残留物を24時間にわたって真空乾燥して2.06g（90％）の表題化合物を白色の固体として得た。 ¹H NMR(300MHz，CDCl₃): δ 1.26(m，44H)，1.56-1.68(m，8H)，2.04(s，6H) ，2.35(t，J=7.5Hz，4H)，4.05(t，J=6.7Hz，4H)，5.74(s，2H)。¹³C NMR(300MH z，CDCl₃)：δ21.00，24.64，25.94， 28.64，29.03，29.24，29.28，29.46，29.54，29.59，29.60，29.65，29.66，34 .00，64.66，76.62，77.04，77.47，79.06，171.18，172.49。 o）メチレンビス−16−〔３−（2,3−ビス−ヘキサデカノイルオキシプロポキシカルボニル）プロパノイルオキシ〕ドデカノエートコハク酸2,3−ビス−ヘキサデカノイルオキシプロピルモノエステル（324mg、 0.485ミリモル）およびメチレンビス−12−ヒドロキシドデカノエート（135mg、 0.304ミリモル）およびトリフェニルホスフィン（127mg、0.485ミリモル）を窒素雰囲気下でテトラヒドロフラン（５ml）に溶解した。得られた溶液に、ジエチルジアゾジカルボキシレートをトルエン中の38〜40％溶液(233μl、0.485ミリモル)として加えた。得られた反応混合物を周囲温度で24時間撹拌し、次に濃縮乾固した。残留する固体をメチレン／石油エーテル（４：１）に再溶解し、シリカゲルの短カラムの口に装入し、石油エーテル中の酢酸エチル量を増加（０〜40％）して勾配溶離し、そして溶媒を蒸発させて283mg（67％）の表題化合物を白色の固体として得た。 ¹H NMR(300MHz，CDCl₃): δ 0.88(t，12H)，1.26(m，124H)，1.55-1.67(m，16 H)，2.27-2.38(m，12H)，2.61-2.65(m，8H)，4.08(t，J=7Hz，4H)，4.14(dd，J₁ =12Hz，J₂=6Hz，2H)，4.18(dd，J₁=12Hz，J₂=6Hz，2H)，4.29(dd，J₁=12Hz，J₂= 4.5Hz，2H)，4.32(dd，J₁=12Hz，J₂=4.5Hz，2H)，5.23-5.32(m，2H)，5.74(s，2 H)。¹³CNMR(300MHz，CDCl₃)：δ 14.13，22.71，24.62，24.88，24.90，25.90， 28,60，28.93，29.00，29.03，29.10，29.14，29.23， 29.26，29.30，29.38，29.42，29.51，29.68，29.72，31.95，33.98，34.06，34 .20，62.04，62.57，64.98，68.78，76.63，77.06，77.48，79.06，171.84，172 .11，172.46，172.87，173.24。 p） PEG 10000メチルエーテル16−ヘキサデカノイルヘキサデカノエート PEG 10000メチルエーテル（7.500g、0.75ミリモル）をトルエン（140ml）に溶解し、ピリジン(0.107g、1.35ミリモル)を加えた。溶液を60℃に加熱し、トルエン（10ml）に溶解した16−ヘキサデカノイルオキシヘキサデカノイルクロライド（0.595g、1.12ミリモル）を滴加した。混合物を加熱還流し、３日間還流しながら撹拌した後、混合物を室温まで冷却し、ヘキサン中で沈殿させた。濾過した後、沈殿物をヘキサンで洗浄し、乾燥した。クロロホルム中の５％メタノールで溶離するシリカカラム上のフラッシュクロマトグラフィーにより、5.39g（68％）の表題化合物を得た。 ¹H NMR(300MHz，CDCl₃): δ 0.84(t，CH₃)，1.21(s(br)，CH₃)，1.55-1.60(m ，CH₂)，2.20-2.35(m，CH₂CO)，3.34(s，CH₃O)，3.61(s，OCH₂CH₂O)，4.01(t，C OOCH ₂CH ₂O)，4.18(t，COOCH ₂CH₂O)。¹³CNMR(75MHz，CDCl₂): δ13.94，22.48，2 4.70，24.82，25.73，28.94，29.05，29.14，29.26，29.33，29.39，29.45，31. 71，34.00，58.84，63.14，68.99，69.36，69.86，69.97，70.01，70.36，70.74 ，70.82，70.86，71.72，77.10，173.62，173.80。実施例２気体充填微小粒子の製造一般手順トルエン中における壁形成物質の溶液を製造した。こり溶液を界面活性剤を含有する３倍量の水に加え、高速回転子−固定子ミキサー(8000〜250 00rpm，68〜240秒間)を用いて混合した。得られた乳濁液をメタノール／ドライアイス浴を使用して凍結させ、そして凍結乾燥して白色の粉末を得た。実施例３音響的特性決定（インビトロ）実施例２からの凍結乾燥試料を実験室用振盪機で適当な時間振盪することによりＱ水または0.9％塩化ナトリウム溶液に再び分散させた。光学顕微鏡を使用して粒子を目視検査した。パルス反対法の3.5MHz広帯域変換器、または1.5〜８MHzの範囲をカバーする中心振動数が３．５および５MHzの２個の変換器を使用して、水性マトリックス中で異なる濃度の懸濁液の超音波透過率を測定することにより懸濁液の音響効果を得た。水性溶媒系を対照として使用し、そして開始懸濁液を担体液体で段階的に希釈することにより測定を行った。信号が0.1db／cm未満の音響減衰量となるまで測定を行った。実施例４音響的特性決定（インビボ）一般手順実施例２のようにして製造した乾燥微小粒子粉末を実験室用振盪機で12〜16時間振盪することにより滅菌0.9％（重量／重量）塩化ナトリウム水溶液に再び分散させた。分散液をチンチラウサギの耳の静脈に注射し、そして超音波プローブを直接、動動脈および下の大静脈に配置するドップラー法を使用して、それれらのコントラスト効果を測定した。信号の高さ（ドップラー単位）および持続時間（秒）を記録した。得られた信号の高さは有意であり、分散液についてインビボで強い超音波コントラスト効果を示した。長期の信号持続時間は良好なインビボの安定性を確実にした。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９６年２月２１日【補正内容】請求の範囲１．非ポリマー性および非重合性の壁形成物質により封入された気体または気体先駆物質を含有する微小粒子状造影剤。２．壁形成物質は脂肪酸およびそのエステル、脂肪アルコールおよびそのエステル、脂肪アミンおよびそのアミド、親油性アルデヒドおよびケトン、糖の親油性誘導体、コール酸およびその誘導体、コレステロールおよびその誘導体、脂肪族および芳香族炭化水素、疎水性に変性されたＸ線造影剤、並びに生体適合性の脂肪可溶性抗酸化剤から選択される請求項１記載の造影剤。３．壁形成物質は式（式中、R¹およびR²はそれぞれ水素原子または炭素−結合一価有機基であるか、あるいはR¹およびR²は一緒になって炭素−結合二価有機基を形成し、そしてｍおよびｎはそれぞれ０および１から選択される）のメチレンジエステル単位を１個以上含有する請求項１記載の造影剤。４．壁形成物質はR¹およびR²が水素原子およびメチル基から選択され、そしてｎおよびｍが共に０である式（Ｉ）のメチレンジエステル単位を１個以上含有する請求項３記載の造影剤。５．さらにポリマー性乳化剤を含有する請求項１〜４の何れかの項記載の造影剤。６．ポリマー性乳化剤はポリビニルアルコール、タンパク質、多糖、交互に親水性および疎水性ブロックからなるブロックコポリマー、六価アルコールの部分脂肪酸エステルのポリオキシエチル化誘導体、ポリビニルピロリドン、ポリオキシエチレンアルコールの脂肪アルコールエーテル、脂肪酸のポリエチレングリコールエステル、ポリエチレングリコール−ソルビタン−蜜ろう界面活性剤、および上記ポリエチレングリコール含有化合物の何れかのペルフルオロ化誘導体から選択される請求項５記載の造影剤。７．ポリマー性乳化剤はヒト血清アルブミンである請求項６記載の造影剤。８．画像診断における請求項１〜７の何れかの項記載の造影剤の使用。９．超音波画像診断における請求項１〜７の何れかの項記載の造影剤の使用。 10．磁気共鳴画像化における請求項１〜７の何れかの項記載の造影剤の使用。 11．ヒトまたはヒトでない動物の体の強調画像を発生する方法であって、前記体に請求項１〜７の何れかの項記載の造影剤を投与し、前記体の少なくとも一部の超音波または磁気共鳴画像を発生することからなる前記方法。 12．(ｉ) 親水性および疎水性相からなり、壁形成物質が分散相中または各相間の界面で優先的に溶解する乳濁液を生成し、そして (ii) 前記乳濁液から所望の造影剤を単離することからなる請求項１記載の造影剤の製造法。 13．少なくとも１種の乳化剤の存在下で行われる請求項12記載の方法。 14．前記乳化剤はポリマー性乳化剤である請求項13記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＶＮ (72)発明者クラーヴエネス，ヨーノールウエー国エン−1166 オスロ．ミツトオーセン５ (72)発明者ロングヴエー，ポールノールウエー国エン−1450 ネソツドタンゲン．ホーヴデンスヴエアイ11 (72)発明者スクートヴエアイト，ローアルノールウエー国エン−0191 オスロ．シユヴエアイガールツガーテ 48ベー (72)発明者ソールベルグ，ヤーンノールウエー国エン−1343 エイクスマルカ．スド−フオツソム43 (72)発明者アエウクルスト，インゲル・レアイドウン・フイーエルスカールノールウエー国エン−3400 リーエル．ストツケヴン５

Claims

【特許請求の範囲】１．非ポリマー性および非重合性の壁形成物質により封入された気体または気体先駆物質を含有する微小粒子状造影剤。２．壁形成物質は脂肪酸およびそのエステル、脂肪アルコールおよびそのエステル、脂肪アミンおよびそのアミド、親油性アルデヒドおよびケトン、糖の親油性誘導体、コール酸およびその誘導体、コレステロールおよびその誘導体、脂肪族および芳香族炭化水素、疎水性に変性されたＸ線造影剤、並びに生体適合性の脂肪可溶性抗酸化剤から選択される請求項１記載の造影剤。３．式（式中、R¹およびR²はそれぞれ水素原子または炭素−結合一価有機基であるか、あるいはR¹およびR²は一緒になって炭素−結合二価有機基を形成し、そしてｍおよびｎはそれぞれ０および１から選択される）のメチレンジエステル単位を１個以上含有する請求項１記載の造影剤。４．壁形成物質はR1およびR2が水素原子およびメチル基から選択され、そしてｎおよびｍが共に０である式（Ｉ）のメチレンジエステル単位を１個以上含有する請求項３記載の造影剤。５．さらにポリマー性乳化剤を含有する請求項１〜４の何れかの項記載の造影剤。６．ポリマー性乳化剤はポリビニルアルコール、タンパク質、多糖、交互に親水性および疎水性ブロックからなるブロックコポリマー、六価アルコールの部分脂肪酸エステルのポリオキシエチル化誘導体、ポリビニルピロリドン、ポリオキシエチレンアルコールの脂肪アルコールエーテル、脂肪酸のポリエチレングリコールエステル、ポリエチレングリコール−ソルビタン−蜜ろう界面活性剤、および上記ポリエチレングリコール含有化合物の何れかのペルフルオロ化誘導体から選択される請求項５記載の造影剤。７．ポリマー性乳化剤はヒト血清アルブミンである請求項６記載の造影剤。８．画像診断における請求項１〜７の何れかの項記載の造影剤の使用。９．超音波画像診断における請求項１〜７の何れかの項記載の造影剤の使用。 10．磁気共鳴画像化における請求項１〜７の何れかの項記載の造影剤の使用。 11．ヒトまたはヒトでない動物の体の強調画像を発生する方法であって、前記体に請求項１〜７の何れかの項記載の造影剤を投与し、前記体の少なくとも一部の超音波または磁気共鳴画像を発生することからなる前記方法。 12．(ｉ) 親水性および疎水性相からなり、壁形成物質が分散相中または各相間の界面で優先的に溶解する乳濁液を生成し、そして (ii) 前記乳化剤から所望の造影剤を単離することからなる請求項１記載の造影剤の製造法。 13．少なくとも１種の乳化剤の存在下で行われる請求項12記載の方法。 14．前記乳化剤はポリマー性乳化剤である請求項13記載の方法。