JPH09508097A

JPH09508097A - 虚血再灌流傷害における保護剤としての酸化窒素放出化合物の使用

Info

Publication number: JPH09508097A
Application number: JP7513345A
Authority: JP
Inventors: エイ．、ジュニアウィンク、デイヴィッド; ビー．ミッチェル、ジェイムズ; ラッソー、アンジェロ; スィー．クリシュナ、マラリ; ハンバウアー、インゲボルグ; ビー．グリシャム、マシュー; ニールグランジャー、ダニエル
Original assignee: US Department of Health and Human Services; Louisiana State University and Agricultural and Mechanical College
Current assignee: US Department of Health and Human Services; Louisiana State University and Agricultural and Mechanical College
Priority date: 1993-11-02
Filing date: 1994-10-31
Publication date: 1997-08-19
Also published as: CA2175467A1; EP0726768B1; DK0726768T3; ATE192922T1; EP0726768A1; US5789447A; GR3034099T3; ES2149338T3; AU8130094A; PT726768E; WO1995012394A1; DE69424560D1; AU704173B2; DE69424560T2

Abstract

(57)【要約】本発明は、酸素の存在を必要とすることなしに生理条件下で酸化窒素を自発的に放出する酸化窒素含有化合物の投与によって、標的細胞／組織に該酸化窒素化合物が運ばれる、虚血再灌流傷害に関係する酸素フリーラジカル起因の組織損傷の治療方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】虚血再灌流傷害における保護剤としての酸化窒素放出化合物の使用発明の技術分野本発明は、虚血再灌流傷害における酸素フリーラジカル介在組織損傷を和らげる為に、酸素の存在を必要とせずに、生理条件下で自発的に酸化窒素を放出する酸化窒素含有化合物を用いる方法に関する。発明の背景超酸化物や過酸化物のような酸素フリーラジカルは、多くの疾病的・変性的状態の発生に関与している(Ames et al.，PNAS USA，78，6858-6862(1981)；Halli well et al.，FEBS，307，108-112(1992); Halliwell et al.，Arch．Biochem． Biophys. ，246，501-514(1986); Halliwell et al.，Biochem．J.，219，1-14(1 984); Minotti et al.，J．Biol．Chem.，262，1098-1104(1987))。例えば、酸素介在の生物学的損傷は、炎症、虚血再灌流傷害、発作、リウマチ様関節炎、アテローム性動脈硬化、癌及び老化にかかわるメカニズムである。酸素介在の生物学的損傷の化学は、例えば、フェントン型(Fenton-type)中間物、すなわち過酸化物と金属とのコンビネーションを生成するハーバーバイス（Haber-weiss）サイクルを関与している。Ｏ₂＋Ｆｅ²⁺−−Ｏ₂ ^-＋Ｆｅ³⁺ Ｏ₂ ^-＋Ｆｅ²⁺−−Ｈ₂O₂＋Ｆｅ³⁺ Ｆｅ²⁺＋Ｈ₂O₂−−酸化剤酸化剤＋生物学的分子−−損傷（Minotti et al．(1987)，同上; Halliwell et al．(1992)，同上）哺乳類（Mi tchell et al.，Biochem.，29，2802-2807(1990)）及び細菌(Imlay et al.，Sci ence ，240，640-642(1988)）の細胞培養物の研究は、主な細胞毒性作用剤が過酸化物であり(Mitchell et al.，同上)、その主要な起源は、ヒポキサンチン（ＨＸ）及びキサンチンオキシダーゼ（ＸＯ）を含む超酸化物及び過酸化物の生成の細胞外機構であることを示した。虚血及び再灌流に曝された組織の生体内顕微鏡研究は、後毛細管静脈内での蛋白質の流出の増加及び白血球の接着及び遊走の増加に特徴付けられる急性の炎症反応(Oliver et al.，Inflammation，15，331-346(1991); Lehr et al.，J．Cli n．Invest. ，87，2036-2041(1991); Messmer et al.，Adv．Exp．Med．Biol.，2 42 ，95（1988）及びYasahara et al.，Am．J．Physiol.，261，H1626-H1629(199 1))を示した。ＮＯが血小板の凝集を阻害し（Rubanyi et al.，Biochem．Biophy s．Res．Comm. ，181，1392-1397(1991)）、血小板の内皮細胞の単層への接着を減少させる（Radomski et al.，Lancet.，2，1057-1058(1987)）ことが明らかにされている。後毛細管静脈内の白血球−内皮細胞間の接着性相互作用はＮＯによって阻害され(Kubes et al.，PNAS USA，88，4651-4655(1991))、ＮＯ産生の阻害はネコ小腸内の微小血管の透過性を増加させる（Kubes et al.，Am．J．Physi ol. ，262(Heart Circ．Physio．31)，H611-H615(1992a)）。ＮＯはまた前炎症メディエータで処理したラット冠状動脈（Filep et al.，Br．J．Pharmacol.，108 ，323-326(1993)）及び腸（Hut-cheson et al.，Br．J．Pharmacol.，101，815- 820(1990)）の循環における蛋白質の溢出を調整すると報告されている。加えて、心筋の虚血及び再灌流後の基礎ＮＯ放出(basalNO release)の減少はネコ冠状動脈内皮への好中球の接着を促進することも明らかにされている。全器官の研究で、虚血後の組織内で好中球が蓄積すること（Romson et al.，Circulation，67 ，1016-1023(1983); Simpson et al.，J．Clin．Invest.，81，624-629(1988); Smith et al.，Am．J．Physiol.，256，H789-H793(1989); Entman et al.，FASE B J. ，5，2529-2537(1991)）、好中球抗血清によって好中球減少症を引き起こした動物で虚血再灌流が引き起こす血管傷害が減少すること（Simpson et al.，同上; Hernandez et al.，Am．J．Physiol.，253，H699-H703(1987); Carden et a l.，Circ．Res.，66，1436 -1444(1990)）及び白血球の接着を防ぐモノクローナル抗体によって、再灌流が引き起こす血管漏出が減少すること（Hernandez et al.，同上; Carden et al. ，同上; Adkins et al.，J．Appl．Physiol.，69，2012-2018(1990)）を実証され、これら全てが白血球が虚血再灌流によって引き起こされる毛細血管の機能不全のメディエータとしての役割を担うことを示唆している。そのような研究はまた、白血球−内皮細胞接着が虚血再灌流によって引き起こされる組織傷害の発病における律速段階かもしれないという認識を導き出した。一般に、粘膜及び毛細血管系の虚血及び再灌流は、粘膜透過率の上昇、白血球−内皮細胞の接着、血管透過率の上昇、血小板の凝集及び血管血栓症をもたらす（Siegfried et al.，Am ．J．Physiol. ，263(Heart Circ．Physiol.32)，H771-H777(1992); Kubes，Am． J．Physiol. ，262(Gastrointest．Liver Physiol．25)，G1138-G1142(1992b)及びKubes，et al.，(1992a)，同上）。虚血再灌流によって生じる内皮の機能不全及び実質組織の傷害が保護効果を及ぼすことが知られている薬剤を用いて再検査された（Lefer et al.，Annu．Rev．Pharmacol．Toxicol，31，71-90(1993)）。高濃度のＮＯは、虚血再灌流傷害における細胞毒性のある作用剤（Beckman，N ature ，345，27-28(1990)）及び神経毒性のある作用剤（Dawson et al.，PNAS U SA ，88，7797-7801(1991)）になるのではないかと示唆されてきた。ＮＯは、内因性ヒポキサンチン／キサンチンオキシダーゼによって産生される超酸化物あるいは過酸化物と反応し、ペルオキシ硝酸塩アニオンＯＯＮＯ^-（Beckman，同上）を形成する、そしてそれは、虚血再灌流傷害（Beckman，同上）及び脂質の過剰酸化（Radi et al.，Arch．Biochem．Biophys.，288，481-487(1991)）におけるメディエータ、またマクロファージによって産生される細胞毒性を持つ主な作用剤になる（Beckman et al.，PNAS USA，87，1620-1624(1990)）と考えられている。酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）阻害剤が脳皮質内のインビボでの虚血再灌流における組織損傷を増加させること、酸化窒素が脳や心臓での虚血再灌流事の間の損傷を防いでいるという証拠に基づいて、ＮＯが細胞保護作用剤としてもまた機能できることが示唆されている（Johnson et al.，Critical Care Medicine，19 ，242-252(1991); Morikawa et al.，Am．J．Physiol.，263，H1632-H1635(1992 ); Masini et al.，Aqents and Actions，33，53-56(1991); Siegfried et al. ，J．Pharm．Expt．Ther.，260，668-675(1992); Gambassi et al.，Pharmcol． Res. ，25，11-12(1992)及びLinz et．al.，J．Mol．Cell Cardiol.，24，909-91 9(1992)）。１ｍＭもの高濃度のＮＯに曝された初代神経細胞培養物には悪影響がない（Hanbauer et al.，Neuroreports，3，409-412(1992); Kiedrowsky et a l.，Mol．Pharmacol.，41，779-784(1992)）。ニトログリセリンやニトロプルシド等のＮＯ産生化合物の投与がＮＭＤＡ受容体介在神経障害を減じることが述べられている（米国特許第５，２３４，９５６号）。しかしながら、そのような化合物は、自発的に対して代謝的なＮＯの放出及び遅い放出速度といった不利な点を有している（Lipton et al.，Nature，364，626-63(1993)）。ニトローネＤＭＰＯは酸化窒素シンターゼ阻害剤Ｌ−Ｎ−ニトロアルギニンよりもより効率よく神経細胞死を減ずる（Lafon-Cazal et al.，Nature，364，535(1993)）ものとして示されている。虚血再灌流傷害（Woditschet al.，Am．J．Physiol.，263，H1 390-H1396(1992); Jaescheke et al.，Life Sciences，50，1797-1804(1992)あるいは癌ネクローシス因子（tumor necrosis factor (TNF))が仲介性の細胞毒性（Fast et al.,J．Leukoc．Biol.，52，255-261(1992)))に関連した病理学的な影響においてＮＯは存在するが、最低限の役割しか果たさないということが更なる研究からも示されている。実際、ＮＯが毒素として考えられる生物学的な現象の多くは活性酸素種の産生と同時に生じている。例えば免疫応答及び虚血再灌流傷害である。活性酸素の代謝物や顆粒球の活性化は虚血再灌流誘起毛細血管の傷害に関係している（Granger,Am．J．Physiol.，255，H1269-H1275(1988)）。これらの報告を考慮して、酸化窒素及びニトロプルシドナトリウムやＳＩＮ− １等のニトロ血管拡張剤が虚血再灌流傷害からの保護に用いることができると提案されている（Aoki et al.，Am．J．Physiol.，258(Gastrointest．Liver Phys iol．21)，G275-G281(1990); Kubes et al.，Gastroenterology，104，(4 Suppl .)，Abstract 728(1993); Andrews et al.，Gastroenterology，104(4 Suppl.) ，Abstract A33(1993); Masini,同上; Masini et al.，Int．Arch．Allergy App l．Immunol. ，94，257-258(1991)及びJohnson,同上）。酸化窒素の保護的役割は、酸化窒素がフェントン型酸化を絶つことができたという実験によって立証されている(Kanner et al.，Arch．Biochem．Biophys., 289，130-136(1991))。インビボで酸化窒素を供給する試みでは、高濃度の酸化窒素が気体相で投与された。しかしながら、そのような方法は肺の組織に損傷を与え、血液中の酸素ヘモグロビンの拡散−制御された酸化反応等の種々の化学反応による酸化窒素の崩壊をもたらしてしまう。酸化窒素ガス、あるいは酸素の存在下あるいは非存在下で自発的にＮＯを放出しない酸化窒素含有化合物を利用する、虚血再灌流に関連した酸素フリーラジカル介在組織損傷を治療する方法に固有の欠点に鑑みて、本発明の目的は他の方法の欠点を克服する、酸素フリーラジカル介在の組織損傷を治療する方法を提供することである。これに関連した目的は、虚血再灌流によって傷害を受ける危険のあるあるいは受けた細胞に酸化窒素を運ぶ方法を提供することである。本発明の他の目的は、酸素の存在下あるいは非存在下、生理条件で自発的にＮＯを放出する作用剤、特に水溶性作用剤を用いて虚血再灌流によって傷害を受ける危険のある、あるいは傷害を受けた細胞に酸化窒素を運ぶ方法を提供することである。本発明のさらなる目的は、制御された予測可能な方法でそのような運搬を提供することである。本発明のこれらの及びその他の目的や長所は、発明の他の特徴同様、ここに述べる発明の記載から明らかになるだろう。発明の概要本発明は、移植、外傷、炎症、卒中、発作、リウマチ様関節炎、アテローム性動脈硬化症、癌、痴呆、糖尿病、高血圧発症、潰瘍、狼瘡、鎌状赤血球貧血、虚血性腸疾患、肺塞栓症、ボール症候群(Ball's syndrome)、膵炎、心臓発作及び老化に関係するものをはじめとする、虚血再灌流傷害と関係がある酸素フリーラジカル介在組織損傷の治療方法を提供する。当該方法では、酸化窒素含有化合物を投与することによって、酸化窒素は、制御されかつ予測できる方法で、標的細胞に運ばれる。酸化窒素含有化合物は、酸素の存在下又は非存在下、生理条件で酸化窒素を自発的に放出する。図面の簡単な説明図１Ａは、酸化窒素放出化合物の存在下及び非存在下でヒポキサンチン／キサンチンオキシターゼに曝した細胞の、時間（分）に対する生存割合の対数グラフである。図１Ｂは、ＤＥＡ／ＮＯ分解生成物の存在下及び非存在下で過酸化水素に曝した細胞の、時間（分）に対する生存割合の対数グラフである。図２Ａは、酸化窒素放出化合物の存在下及び非存在下で過酸化水素に１時間曝した細胞の、過酸化水素の濃度（μＭ）に対する生存割合の対数グラフである。図２Ｂは、酸化窒素放出化合物の分解生成物の存在下及び非存在下での細胞の、過酸化水素の濃度（μＭ）に対する生存割合の対数グラフである。図３は、酸化窒素放出化合物の存在下及び非存在下での腹側の中脳細胞について、過酸化水素の濃度（μＭ）に対する³Ｈ−ドパミン濃度（ｐｍｏｌ）のグラフである。図４Ａ−Ｃは、それぞれ２０分間虚血及び３０分間再灌流した時の、１００μ ｍあたりの接着した白血球数、フィールドあたりの遊走した白血球数及びアルブミン漏洩％に対するＮＯ供与体及びＮＯ合成阻害剤の棒グラフで、１０分間及び３０分間再灌流データを示した。図５Ａ及びＢは、それぞれ１００μｍあたりの接着した白血球、フィールドあたりの遊走した白血球に対するアルブミン漏洩％のグラフである。図６は、５分間あたりの白血球−血小板凝集物に対する化合物の棒グラフである。図７は、顆粒減少したマスト細胞％に対する化合物の棒グラフである。図８は、虚血再灌流（Ｉ／Ｒ）前後の頸動脈及び上方腸間膜静脈（ＳＭＶ）に対する亜硝酸塩／硝酸塩の濃度（μＭ）の棒グラフである。図９は、コントロール、未処理、ＳｐＮＯ処理及びＳＩＮ−１処理動物の時間（分）に対する⁵¹Ｃｒ−ＥＤＴＡクリアランス（ｍｌ／分×１００ｇ）の棒グラフである。図１０は、コントロール、未処理、ＳｐＮＯ処理及びＳＩＮ−１処理動物の時間（分）に対する吸水率（ｍｌ／分×１００ｇ）のグラフである。図１１は、コントロール、未処理、ＳｐＮＯ処理及びＳＩＮ−１処理動物の時間（分）に対するリンパ流量（ｍｌ／分×１００ｇ）の棒グラフである。図１２は、コントロール、未処理、ＳｐＮＯ処理及びＳＩＮ−１処理動物の時間（分）に対するリンパ蛋白クリアランス（ｍｌ／分×１００ｇ）の棒グラフである。図１３は、コントロール、未処理、ＳｐＮＯ処理及びＳＩＮ−１処理動物の時間（分）に対するｍｍＨｇの棒グラフである。好ましい実施態様の詳細な説明驚いたことに、生理条件下で酸素の存在を必要とせずにＮＯを自発的に放出する酸化窒素含有化合物を、虚血再灌流傷害に関連する、酸素フリーラジカル介在組織損傷を治療するために用いることができることが発見された。即ち本発明は、虚血再灌流傷害に関連する、酸素フリーラジカルが介在する組織損傷の治療方法を提供する。本発明の方法によれば、酸化窒素含有化合物を、虚血再灌流傷害を受ける危険があるか、又は虚血再灌流傷害を受けている哺乳動物に対して、虚血再灌流傷害に関連する酸素フリーラジカル介在組織損傷を治療するために充分な量を投与する。本発明の方法で用いられる酸化窒素含有化合物は、生理条件下にて酸素の存在下あるいは非存在下で、酸化窒素を自発的に放出する。本発明に従えば、二量化した酸化窒素の一連のアミン誘導体（ＮＯＮＯ塩、NO NOates）が特に有用である。ＮＯＮＯ塩は、生理条件下にて予想可能な態様で酸化窒素を放出することが明らかとなっている（Maragos et al.，J．Med．Chem., 34，3242-3247(1991)）。ＮＯＮＯ塩の半減期は１分から数日の範囲に及びうる（Hrabie et al.，J．Org．Chem.，58，1472-1476(1993)）ので、溶液中において特徴的に長い半減期を有する点で、スペルミジンやスペルミン等の化合物よりも有利である。ＮＯＮＯ塩は、細胞性塞栓（Maragos et al.，Cancer Res.，53 ，564-568(1993)）、細胞毒性、変異原性（Wink et al., Science，254, 1001-1 003(1991)）、神経細胞培養物中における、酸化窒素が介在するドーパミンの放出及び酸化窒素が介在する血小板凝集の抑制（Keefer et al.,in Biologyof Nit ric Oxide，2，Enzymology，Biochemistry，Immunology 、Moncada et al.編，Po rtland Press，Chapel Hill，NC，p.153-156，(1992)）の種々の研究に用いられている。大動脈輪細片の血管弛緩は、ＮＯＮＯ塩からの酸化窒素の放出濃度と直線的に相関することが明らかになった（Maragos et al.，同上）。ＮＯＮＯ塩が、心臓血管傷害及び高血圧の治療に効果的であることも明らかにされており(米国特許第4,954,526号、第5,155,137号及び第5,212,204号及びWO 93/07114)、癌の化学治療にも効果的であることが示唆されている(Maragos et al.，Cancer Re s .，53, 564-568(1993))。他の生物医学の応用において、ＮＯＮＯ塩の潜在的な有用性もまた示唆されている（Maragos et al.，J．Med．Chem.，34, 3242-3247 （1991）；Keeferetal.，同上）。ＮＯＮＯ塩の幾つかのタイプが本発明の方法で有用である。哺乳動物で虚血再灌流傷害に関連する酸素フリーラジカル介在組織損傷を治療するための有用なＮＯＮＯ塩のひとつのタイプは、次の式 [R₁N(R₂)N(NO)O]_yX （式Ｉ）（式中、Ｒ₁及びＲ₂は同一又は異なって、水素、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル、Ｃ₃− Ｃ₁₀アリール、Ｃ₄−Ｃ₁₀窒素含有ヘテロ環状ラジカル(heterocyclic nitrogen- containing radical)、Ｃ₁−Ｃ₃アルキルで置換されたＣ₃−Ｃ₁₀アリール及びＣ₃ −Ｃ₁₀シクロアルキルからなる群より選ばれ、Ｒ基のどちらか一方又は両方とも１−３個の置換基により置換されていてもよく、その置換基は同一又は異なって、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ₁−Ｃ₈アルコキシ、アミノ、アミド、ホルミル、カルボキシ及びニトロからなる群より選ばれ、ただしＲ₁及びＲ₂の両方が水素原子である場合を除き、Ｘは医薬上許容されるカチオン、医薬上許容される金属中心又はＣ₁−Ｃ₈アルキル、アシル及びアミドからなる群より選ばれる医薬上許容される有機基であり、Ｙは１から３であり、Ｘの原子価と一致する）で表されるＮＯＮＯ塩であり、これは、酸素フリーラジカル介在組織損傷を治療するのに充分である。 “Ｃ₁−Ｃ₈アルキル”という用語は、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、２−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、アミル、イソアミル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル等の１〜８個の炭素を有する分岐状及び直鎖炭化水素ラジカルを言う。“Ｃ₃−Ｃ₁₀アリール”という用語は、例えば、フェニル、ナフチル等の３〜１０個の炭素を有する芳香族環状炭化水素ラジカルを言い、“ Ｃ₄−Ｃ₁₀窒素含有ヘテロ環状ラジカル”という用語は、例えば、ピロリル、ピリジニル、キノリニル、イソキノリニル等のラジカルを言う。同様に、“Ｃ₃− Ｃ₁₀シクロアルキル”は、例えば、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル等の３〜１０個の炭素を有する非芳香族環状炭化水素ラジカルを言う。“ハロ”及び“ハロゲン”という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を包含する。他の用語は、その語について当業者が通常用いている意味である。ここで用いられている“医薬上許容されるカチオン”という用語は、哺乳動物に生物学的に適合できるあらゆるカチオンを意味し、イソプロピルアンモニウムカチオン等のアルキルアンモニウムカチオン、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルキル金属、カルシウム、バリウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属が包含される。選択されるカチオンの唯一の必須特性は、哺乳動物に対し生物学的に不適合でないということである。ここで用いられている“医薬上許容される金属中心”という用語は、上記式のＹ個の有機基のそれぞれに存在する１つ又はそれ以上の非金属原子と配位結合した原子価１〜３の中心金属イオンを意味する。ここで用いられている“中心金属イオン”としては、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルキル金属、カルシウム、マグネシウム、バリウム等のアルキル土類金属、鉄、銅、ニッケル、亜鉛等を包含する遷移金属、アルミニウム等を包含するIII族金属及びランタニド系列金属より選ばれる生物学的に許容される金属イオンが包含される。選択される中心金属イオンの主要な必要条件とは、哺乳動物に対し生物学的に適合性があるということだけである。ここで用いられている“医薬上許容される有機基”という用語は、上記式の化合物の有機基に共有結合して、エーテル及びその他の誘導体を形成する生物学的に許容される有機基のことを言う。許容される有機基としては、低級アルキル、アシル、アミド等が例示される。本発明の方法において有用である酸化窒素放出化合物の他のタイプとしては、以下の式II、III及びIVで表される酸化窒素放出ＮＯＮＯ塩が例示される。（式中、ｂ及びｄは独立して０又は１であり、ｘ、ｙ及びｚは独立して２〜１２であり、Ｒ₁−Ｒ₈は独立して水素、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₂直鎖又は分岐状アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニル又は２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルであり、Ｒ₉は水素又はＣ₁−Ｃ₁₂直鎖又は分岐状アルキルであり、Ｂは、であり、ｆは０〜１２、ただしＢが置換されたピペラジン部位の場合、ｆは２〜１２であり、ｇは２〜６である） −Ｎ₂Ｏ₂ ^-基はの構造を有する。式II及びIIIの化合物のうちで好ましいものは、Ｒ₁−Ｒ₇が独立して水素、Ｃ₃ −Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₂直鎖又は分岐状アルキル、ベンジル又はアセチルである化合物であり、より好ましい化合物としては、Ｒ₁−Ｒ₇が独立して水素原子、メチル、エチル、ベンジル又はアセチルであり、ｘ、ｙ及びｚが２〜４である化合物である。最も好ましい化合物としては、Ｒ₁−Ｒ₇が独立して水素、メチル、ベンジル又はアセチルであり、ｘ、ｙ及びｚが２〜４である化合物である。式IVの化合物のうちで好ましいものとしては、Ｒ₈がＣ₅−Ｃ₆シクロアルキル、Ｃ₁−Ｃ₄直鎖又は分岐状アルキル、ベンジル又はアセチルである化合物である。より好ましい化合物としては、Ｒ₈がメチル、エチル、ベンジル又はアセチルであり、最も好ましい化合物としては、Ｒ₈がメチル又はアセチルである化合物である。式Ｉ−IVの酸化窒素放出化合物の他に、式Ｖ、VI、VII及びVIIIの下記の酸化窒素放出化合物が以下に示すように本発明の方法で有用である。（式中、米国特許第5,212,204号に記載されているように、式中、Ｊは有機又は無機部位で、好ましくは炭素原子を介してＮ₂Ｏ₂ ^-基の窒素と結合していない部位であり、Ｍ^+xは医薬上許容されるカチオンであり、ｘはカチオンの原子価であり、ａは１又は２であり、ｂ及びｃは結果的に中性化合物となる最も小さい整数であり、好ましくは該化合物はアラノシン又はドパスチンの塩ではない）（式中、米国特許第5,039,705号に記載されているように、Ｒ₁及びＲ₂は独立して直鎖又は分岐状Ｃ₁−Ｃ₁₂アルキル基及びベンジル基よりなる群から選ばれ、あるいはＲ₁及びＲ₂が窒素原子と共に結合して、ヘテロ環状基、好ましくはピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノ又はモルホリノ基を形成し、Ｍ^+xは医薬上許容されるカチオンであり、ｘはカチオンの原子価である） K[(M)^x'_x(L)_y(R¹R²N-N₂O₂)_z] 式（ＶＩＩ）（式中、1992年３月27日出願の米国特許出願No.07/858,885に記載されているように、Ｍは医薬上許容される金属、又はｘが少なくとも２の場合、２つの異なった医薬上許容される金属の混合物であり、Ｌは(R¹R²N-N₂O₂)とは異なった配位子であり、少なくとも１つの金属に結合し、Ｒ₁及びＲ₂はそれぞれ有機部位であり、同一又は異なってもよく、ｘは１から１０までの整数であり、ｘ’は金属Ｍの形式的な酸化状態(formal oxdation state)を示し、１から６までの整数であり、ｙは１から１８までの整数であり、ｙが少なくとも２の場合、配位子Ｌは同一又は異なってもよく、ｚは１から２０までの整数であり、Ｋは必要な程度まで化合物を中性にする医薬上許容されるカウンターイオンである）（式中、1992年９月22日出願の米国特許出願No．07/950,637に記載されているように、Ｒ₁及びＲ₂は独立して、Ｃ₁−Ｃ₁₂直鎖状アルキル、アルコキシ又はアシルオキシで置換されたＣ₁−Ｃ₁₂直鎖状アルキル、ヒドロキシ又はハロ置換されたＣ₂−Ｃ₁₂直鎖状アルキル、Ｃ₃−Ｃ₁₂分岐状アルキル、ヒドロキシ、ハロ、アルコキシ又はアシルオキシで置換されたＣ₃−Ｃ₁₂分岐状アルキル、Ｃ₃−Ｃ₁₂直鎖状オレフィン及びＣ₃−Ｃ₁₂分岐状オレフィン、これらは置換されていないか、又はヒドロキシ、アルコキシ、アシルオキシ、ハロ又はベンジルで置換されている、から選ばれ、あるいはＲ₁及びＲ₂が窒素と共に結合しヘテロ環状基、好ましくはピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノ又はモルホリノ基を形成し、Ｒ₃ は、置換されていないか、又はヒドロキシ、ハロ、アシルオキシ又はアルコキシで置換されているＣ₁−Ｃ₁₂直鎖状アルキル及びＣ₃−Ｃ₁₂分岐状アルキル、置換されていないか、又はハロ、アルコキシ、アシルオキシ又はヒドロキシで置換されているＣ₂−Ｃ₁₂直鎖状アルキル又はＣ₃−Ｃ₁₂分岐状オレフィン、置換されていないか又は置換されているＣ₁−Ｃ₁₂アシル、スルホニル及びカルボキサミドより選ばれる基、あるいは式-(CH₂)_n-ON=N(O)NR₁R₂（式中、ｎは２〜８の整数であり、Ｒ₁及びＲ₂は上記に定義した通り）で表される基であり、ただし、Ｒ₁、Ｒ₂及びＲ₃はヘテロ原子にハロ又はヒドロキシ置換基αを含まない）上記に記載の酸化窒素放出化合物に加えて、生理条件下にてＮＯを自発的に放出し、酸素の存在を必要としない他の酸化窒素放出化合物を、本発明の方法で用いることができる。これらの化合物として、式Ｏ＝Ｎ−Ｓ−Ｒ（式中、ＲはＣ₁ −Ｃ₈アルキル、Ｃ₃−Ｃ₁₀アリール、Ｃ₄−Ｃ₁₀窒素含有ヘテロ環状ラジカル、Ｃ₁−Ｃ₃アルキルで置換されているＣ₃−Ｃ₁₀アリール及びＣ₃−Ｃ₁₀シクロアルキルからなる群より選ばれる。Ｒ基は１〜３個の置換基により置換されてもよく、その置換基は同一又は異なっていてもよく、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ₁−Ｃ₈アルコキシ、アミノ、アミド、ホルミル、カルボキシ及びニトロからなる群より選ばれる）で表されるＳ−ニトロソ付加物が挙げられる。好ましいＳ−ニトロソ付加物として、ペプチドと蛋白質、特にＳ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシルアミン（ＳＮＡＰ）のＳ−ニトロソ付加物が例示される（Morley et al.,J.Cardiovasc ．Pharmacol .,21, 670-676(1993); Feelisch, J．Cardiovasc．Pharmacol.，17 ，S25-S33(1991); Stamler et al.，PNAS(USA)，89，7674-7677(1992)；及びSta mler et al.,PNAS(USA)，89，444-448(1992))。Ｓ−ニトロソ細胞特異的抗体の付加物及び受容体配位子の認識配列を模倣したＳ−ニトロソペプチドの付加物を使用することにより、このような付加物は細胞標的法（cell-targeting methods）の利点をもたらす。本発明の方法で用いられる化合物は、生理溶液中でよく溶解し、酵素転換を必要とせずに自発的にＮＯを放出することが特徴である。ＮＯの放出、特に放出速度は求核部位の選択により制御でき、酸素の存在と無関係であり、明らかに毒性をもつ副産物を伴わない。本発明の方法で用いられる化合物は、当業界で公知の方法に従って合成されうる。適切なアミンを適当な商業的供給者から入手し、適当な条件下で酸化窒素と反応させて、所望の化合物を得るのが好ましい。適当な商業的供給者として、就中、Aldrich Chemical Co.，ミルウォーキー、ウィスコンシンが挙げられる。一旦適当なアミンを合成するか、又は他の方法で（例えば、商業的供給者から）入手したならば、該アミンと酸化窒素とを反応させて本発明で用いる化合物を得てもよい。例えば、Drago et al.，J．Am．Chem．Soc., 83, 1819-1822（1961 ）の方法のうちのひとつは、適当な一級アミンと一酸化窒素とを反応させるのに用いられる。Garrido et al.，J．Org．Chem., 49, 2021-2023（1984）に従ってあるジアミンを調製してもよい。Bergeron，Accts．Chem．Res., 19, 105-113（ 1986）に従ってあるトリアミンを調製してもよい。Bergeron，J．Org．Chem., 5 3, 3108-3111（1988）はまた、テトラアミンを調製するために用いてもよい種々の方法を記載する。Carboni et al.，Tet．Let., 29, 1279-1282（1988）は、ジ −、トリ−及びテトラアミンの調製に関する技術を開示する。合成に用いてもよい他の方法が、米国特許第4,954,526号及び第5,155,137号に記載されている。一旦適当なアミンを製造するか、又は商業的に入手したら、酸化窒素と反応させて本発明の方法で用いられる酸化窒素含有化合物のうちのひとつを製造することができる。好適な方法が、例えば、米国特許第4,954,526号及び第5,155,137号に開示されている。酸化窒素と反応させるアミンの幾つかが、余分の窒素、酸素又は他のヘテロ原子を包含する場合、このような原子が酸化窒素と反応を防ぐために適当な保護基を用いてもよい。保護されたヘテロ原子はアミンと酸化窒素とのドラゴ反応の後、脱保護される。このような保護／脱保護剤及びこれらを用いる方法は、業界で公知である。一旦所望の酸化窒素付加物を調製すれば、所望ならその医薬上許容される塩を調製することができる。例えば、該化合物のカリウム塩は、該化合物をエタノール又は同様の溶液中で水酸化カリウムと反応させることにより調製することができる。あるいは、就中、ナトリウム、カルシウム及びマグネシウム塩を調製することもできる。酸化窒素放出化合物は、様々な形態、例えば化合物それ自体あるいはその医薬上許容される塩及び誘導体の形態で本発明の方法に用いられる。化合物は単独で、あるいはひとつ又はそれ以上の他の酸化窒素放出化合物／その誘導体、あるいは他の活性化合物と適切に混合して用いられる。しかしながら、その塩又は誘導体は化合物を不安定にしたり、水に不溶としたりあるいは意図する服用量で毒性をもたらしたりするものであってはならないということを理解すべきである。ペプチド及び蛋白質のＳ−ニトロソ付加物は、先行技術に記載しているように容易に形成される。例えば、Stamler et al.，（同上）の２つの論文を参照。酸化窒素放出化合物はまた、米国特許出願No.．07/935,565に記載されているように、ポリマーマトリックスに組み込まれうる。ポリマーマトリックスへＮ₂Ｏ₂ ^- 官能基が取り込まれることによって、生物学的標的部位に特異的に適用できるポリマー結合酸化窒素／求核性付加組成物（adduct composition）ができる。ポリマー結合付加物の部位特異的適用により、酸化窒素を放出するＮ₂Ｏ₂ ^-官能基の作用の選択性が増大する。仮に、ポリマーに付着しているＮ₂Ｏ₂ ^-官能基が必然的に局在化するなら、酸化窒素放出効果はその官能基が接触する組織に集中するであろう。仮にポリマーが可溶性であるなら、例えば、標的組織に付着することによって、あるいは標的組織に特異的な抗体の誘導によって、その作用の選択性はまだ調整できる。同様に、重要な受容体の配位子の認識配列を模倣した小さなペプチドにＮ₂Ｏ₂ ^-基を付着させることにより、核酸中の標的配列との部位特異的相互作用が可能なオリゴヌクレオチドへの付着の場合と同様な、酸化窒素放出の局在化した集中効果を与える。加えて、ポリマーマトリックスへＮ₂Ｏ₂ ^-官能基を組み込むことによって、酸化窒素／求核性付加物が酸化窒素を比較的早く放出する傾向を減らすことができる。これは、Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基による酸化窒素の放出を延ばし、所望する生物学的効果を得るための効率的な投薬を可能にするので、頻繁な投薬を減らすことができる。特定の理論にしばられているのではないが、本発明のポリマー結合酸化窒素／求核性付加組成物中における酸化窒素放出が長く続くことは、該組成物の物理的構造及び静電効果のためと信じられている。つまり、仮にポリマーが不溶性固体なら、粒子表面近傍のＮ₂Ｏ₂ ^-基は早く放出されるが、より深部に埋まっているＮ₂Ｏ₂ ^-基は立体的に遮蔽され、酸化窒素が媒体に到達するためにより多くの時間及び／又はエネルギーを必要とすると信じられている。意外なことにＮ₂Ｏ₂ ^- 官能基の付近にある正電荷の増加によって、酸化窒素発生の半減期も増大させる傾向にあることが見出された。この速度遅延の機構は単に反発静電相互作用、つまりＮ₂Ｏ₂ ^-基の付近にあるＨ⁺反発正電荷の数が増加すると、Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基に対して正電荷にチャージされたＨ⁺イオンの攻撃が抑制され、Ｈ⁺触媒による分解速度が遅くなることに由来するかもしれない。例えば、酸化窒素と反応して、酸化窒素を放出するＮ₂Ｏ₂ ^-官能基を形成できるアミノ基をポリマー支持体に付着させることによって、酸化窒素でとても徹底的とはいえない処理をすると、部分的に変換した構造体が作られ、この構造体は、水に曝した後に、正電荷にチャージされたアンモニウム中心を多く含み、そしてこのアンモニウム中心はＮ₂Ｏ₂ ^- 基を取り囲み、酸化窒素を放出するＮ₂Ｏ₂ ^-官能基からの酸化窒素の損失を起こすことができるＨ⁺イオンの接近を静電的に抑制する。ポリマーに結合される、酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基は、一般的に、水性の環境に接すると、自発的に水性の環境において酸化窒素を放出することができる。即ち、当該官能基は、グリセリルトリニトレート及びニトロプルシドナトリウムに要求されるような酸化還元反応や電子移動による活性化を必要としない。本発明に関して有用な酸化窒素／求核剤複合体の中には、特定の方法による活性化が必要なものも確かにあるが、それは問題の特定細胞の近傍で酸化窒素放出Ｘ〔Ｎ（Ｏ）ＮＯ〕^-基を遊離するために必要な場合のみである。例として、陰イオン性〔Ｎ（Ｏ）ＮＯ〕^-官能基への保護基の共有結合は、代謝的に保護基を除去し得る器官にその分子が到達するまで、酸化窒素放出が遅延する手段を提供する。例えば、問題の細胞や組織に特異的な酵素により、選択的に切断される保護基を選択することにより、目的の効果が最大限に奏するように酸化窒素／求核剤複合体の作用の目標を定めることができる。本発明のポリマー結合酸化窒素放出組成物は、水溶液中で酸化窒素を放出することができ、そのような化合物は、生理条件下で酸化窒素を放出するのが好ましい。ポリマーに結合する酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂官能基は、好ましくは酸化窒素／求核剤付加物、例えば酸化窒素と求核剤との複合体、最も好ましくは陰イオン部位Ｘ〔Ｎ（Ｏ）ＮＯ〕^-（式中、Ｘは任意の適当な求核剤残基を示す。）を含む酸化窒素／求核剤複合体である。求核剤残基は、好ましくは式Ｉの残基であり、第一アミン（例えば（ＣＨ₃）₂ＣＨＮＨ〔Ｎ（Ｏ）ＮＯ〕ＮａにおけるＸ＝（ＣＨ₃ ）₂ＣＨＮＨ）、第二アミン（例えば（ＣＨ₃ＣＨ₂）₂Ｎ〔Ｎ（Ｏ）ＮＯ）ＮａにおけるＸ＝（ＣＨ₃ＣＨ₂）₂Ｎ）、ポリアミン（例えば両性イオンＨ₂Ｎ（ＣＨ₂ ）₃ＮＨ₂ ⁺（ＣＨ₂）₄Ｎ〔Ｎ（Ｏ）ＮＯ〕^-（ＣＨ₂）₃ＮＨ₂におけるＸ＝スペルミンもしくは両性イオンＣＨ₃ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ〔Ｎ（Ｏ）ＮＯ〕^-ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ ＮＨ₃ ⁺におけるＸ＝３−（ｎ−プロピルアミノ）プロピルアミン）、又はこれらの誘導体等がある。このような酸化窒素／求核剤複合体は安定な固体であり、酸化窒素を予測可能な速度で生物学的に使用可能な形で送ることができる。ポリマーに結合する求核剤残基は、複合体が安定な化合物であっても、亜硫酸の残基（例えばＮＨ₄Ｏ₃Ｓ〔Ｎ（Ｏ）ＮＯ〕ＮＨ₄におけるＸ＝ＳＯ₃）のようなものでないことが好ましい。その理由は、苛酷な非生理条件下においてのみ、当該残基は水性の環境において酸化窒素を放出し得るからである。ポリマーに結合する、他の適当な酸化窒素／求核剤残基としては、上記の式II −式VIIIで表されるものが例示される。ポリマーＮＯＮＯ塩を調製するために、広範な如何なるポリマーも使用可能である。選択されるポリマーは、ただ、生物学的に許容し得るものであればよい。本発明において適当に使用し得るポリマーを例示すれば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリビニリデンジフルオライド、ポリビニルクロライド等のポリオレフィン、ポリエチレンイミン等のポリオレフィン誘導体、ポリエーテル、ポリエステル、ナイロン等のポリアミド、ポリウレタン、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、抗体及び核酸等の生体高分子、スターバーストデンドリマー（starburst dendrimers）等が挙げられる。本発明で適切に使用し得るポリマーの物理的構造的特徴は、限定的に重要であるものではなく、むしろ最終的な用途に依存する。本発明のポリマー結合している酸化窒素／求核剤付加物の組成物が局所的、皮膚的、経皮的又は同様の使用を意図する場合には、当該組成物が生体分解性である必要がないことは、当業者であれば理解されるであろう。摂取のようないくつかの使用においては、ポリマー結合組成物のポリマーが生理環境下においてゆっくりと溶解すること、又は生物分解性であることが望ましい。上記化合物を含めた、Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基を有する酸化窒素放出複合体は、多数の異なる方法によりポリマー支持体に結合し得る。例えば、上記化合物は、化合物をポリマーとともに共沈させることにより、当該ポリマーに結合し得る。共沈は、例えば、ポリマーと酸化窒素／求核剤化合物とを可溶化し、溶媒を蒸発させることからなる。あるいは、酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基は、上記の式を有する当該タイプの酸化窒素／求核剤複合体を、その場でポリマー上に形成することにより、ポリマーに結合し得る。Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基は、ポリマーのバックボーン（backbone）の原子に結合するか、ポリマーバックボーンにぶらさがっている基に結合するか、あるいは単にポリマーマトリックスに補足されるだけでもよい。Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基がポリマーバックボーンにある場合は、将来の放出のために酸化窒素に結合すべく、酸化窒素と反応し得る部位(site)をバックボーンにもつ。例えば、ポリマーがポリエチレンイミンの場合、該ポリマーは、酸化窒素と反応して窒素原子でＮ₂Ｏ₂ ^- 官能基を形成する求核窒素原子をバックボーンにもつ。Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基がポリマーバックボーンにぶらさがっている場合、ポリマーは、酸化窒素と反応してＮ₂ Ｏ₂ ^-官能基を形成し得る適当な求核剤残基を含むか、あるいは当該求核剤残基で誘導体とされている。このように、適当な求核剤残基を含むポリマー又は適当に誘導体とされたポリマーと酸化窒素との反応は、ポリマー結合酸化窒素放出Ｎ₂ Ｏ₂ ^-官能基を提供する。ポリマー結合酸化窒素放出Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基を形成するために、Ｎ₂Ｏ₂ ^-官能基が形成されるべきポリマー上の部位の近くのポリマーに対して、純電荷を与えるのが一般的に好ましい。得られたポリマー結合酸化窒素放出化合物は、その後、以下に記載されるようにして投与してもよく、あるいは例えば虚血再灌流傷害の部位又はその近くに移植するために移植組織に形成されてもよい。本発明の方法は、科学的、研究的な目的のためにインビトロで利用され得る。しかし、本発明方法はインビボでの適用が特に有用であり、虚血再灌流傷害に関連して、酸素フリーラジカルが介在する組織傷害の治療等に適用される。“治療 ”は、酸素フリーラジカルが介在する組織損傷の発生を抑制すること、その場合、虚血再灌流が発生する前に本発明の方法を使用する、加えて酸素フリーラジカルが介在する組織損傷がさらに起こるのを防ぐ、その場合、虚血再灌流が既に始まっていることを意味する。本法は、反応性酸素種を遮断することにより、あるいは反応性酸素種の生成を阻止する金属ニトロシル複合体を形成することにより、酸素フリーラジカル介在組織損傷を治療するという目的を達成すると考える。ＮＯは損傷組織の血流を増加させ、それにより酸化(oxigenation)を増大させるとも考えられる。従って本発明の方法は、予防及び治療の両方の利点を有する。虚血再灌流傷害の危険があるかあるいは当該傷害を有する哺乳動物、特にヒトに対して、上述の酸化窒素放出化合物、又は医薬上許容されるそれらの塩もしくは誘導体、又はポリマーのーもしくはそれ以上のある量を、単独又は一もしくはそれ以上の他の医薬上活性な化合物とともに、酸素フリーラジカル介在組織損傷を処置するのに十分な医薬上許容される組成物の形で投与することも本発明の範囲内である。酸化窒素放出化合物又はポリマーは、哺乳動物、特にヒトが、ただちに虚血再灌流傷害となる危険性があると、又は虚血再灌流傷害を悟り始めたとなれば、可能な限り早く投与することが好ましい。おおかたの場合、酸化窒素放出化合物は、傷害発生から約１５分〜約６０分以内に、即ち傷害発生の前後の適切な時期に投与されることが望まれる。虚血再灌流の発生が予測可能な場合、例えば移植を伴う場合、当該化合物又はポリマーは必要と認められれば直ちに投与されるべきである。そのような場合、酸化窒素放出化合物を、虚血再濯流の発生前の約１５分以内に投与することが望まれる。虚血再灌流傷害が既に始まった場合、当該化合物又はポリマーは、虚血再灌流の発生後、可能な限り早く投与すべきである。そのような場合、酸化窒素放出化合物は、虚血再灌流の発生後、約１５分〜約６０分以内に投与されることが望まれる。酸素フリーラジカルが介在する組織損傷の治療の期間は、部分的には、使用する特定の酸化窒素放出化合物又はポリマー、投与量、投与方法、予期される又は理解された酸素フリーラジカルが介在する組織損傷の原因と程度に依存する。本発明の方法は、虚血再灌流に関連する、あるいはそれにより特徴付けられる全ての状態や病態に関連する、酸素フリーラジカル介在組織傷害の治療に有用である。ここで、他に乏血（hypoemia）として知られている虚血は、局所化された組織貧血の領域であって、その領域へ流れる動脈血流の閉塞に起因するものであり、再灌流とは、その虚血領域への血流の復元をいう。そのような状態及び病態の例として、例えば移植、外傷、炎症、卒中、発作、リウマチ様関節炎、アテローム性動脈硬化症、癌、痴呆、糖尿病、高血圧発症、潰瘍、狼瘡、鎌状赤血球貧血、虚血性腸疾患、肺塞栓症、ボール症候群、膵炎、心臓発作及び老化等が挙げられる。従って、「虚血再灌流」という語句の使用は、これら及び虚血再灌流を含む他の状態を包含するものである。本発明の方法において有用な酸化窒素放出化合物を哺乳動物に投与する適当な方法が利用し得ることは、当業者であれば理解できるであろう。ある特定の化合物を投与するために一を超える投与経路を用いることができる。ある特定の投与経路がもう一つの投与経路よりも、より迅速により効果的に反応し得る。従って、記載された方法は例示に過ぎず、何ら限定するものではない。本発明に従って動物、特にヒトに投与する量は、適当な時間枠にて動物に対して、所望の作用、即ち、酸素フリーラジカルを介在する組織損傷の治療を奏するのに十分なものとすべきである。用いられるある特定化合物の強度（即ち、酸化窒素放出能力）、動物の年齢、種、状態又は病態、及び体重を含む様々な要因に、加えて虚血再灌流傷害にまさに罹ろうとするか、あるいは現実に罹った細胞や組織の量に、投与量が依存することは当業者であれば理解することであろう。用量の大きさもまた、投与経路、タイミング、投与頻度により、加えてある特定化合物の投与に伴うかもしれない悪い副作用の存在、特質及び程度、及び所望とする生理学的効果により決定されるであろう。種々の状態や病態、特に慢性状態や病態が複数の投与を含む長期の治療を必要とするかもしれないことは、当業者であれば理解することであろう。当業者に知られた、常套的に見出されている範囲決定技術により、適当な服用量及び投与管理法が決定される。一般的に、治療はその化合物の最適量よりも少ない量で始める。その後、その条件での最適な効果に達するまで用量を少量ずつ足して増加させる。本発明の方法では、典型的には、一又はそれ以上の上記化合物又はポリマーを約０．１mg／kg体重〜約１００mg／kg体重投与する。本発明はまた、医薬上許容する担体、及び酸素フリーラジカル介在組織損傷を処置するのに十分な量の酸化窒素含有化合物を含む医薬組成物をも提供する。担体は、常套的に使用されているどのようなものでもよく、溶解性、本発明の化合物との反応性の欠如等の物理化学的考察、及び投与経路にのみに限定される。本発明の方法の化合物は、以下に記載する医薬組成物に加えて、シクロデキストリン包接複合体やリポソーム等の包接複合体として形成してもよいということは当業者には明らかであろう。本発明の医薬組成物において使用される医薬上許容される酸付加塩としては、塩酸、臭酸、リン酸、メタリン酸、硝酸及び硫酸のような鉱酸並びに酒石酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルクロン酸、コハク酸及びアリールスルホン酸（例えば、ｐ−トルエンスルホン酸）のような有機酸から誘導されるものが例示される。ここに記載の医薬上許容される賦形剤、例えば、ビヒクル、アジュバント、担体もしくは希釈剤は、当業者にとって周知であり、かつ一般に容易に入手可能なものである。医薬上許容される担体は、該活性化合物に対して化学的に不活性で、使用条件下で有害な副作用又は毒性を有しないものが好ましい。賦形剤の選択は、幾分は該特定の化合物、又該組成物の投与に用いられる特定の方法によって決定される。従って、本発明の医薬組成物には非常に多様な適切な処方がある。経口、エアロゾル、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、直腸内及び膣内投与用の以下の処方は単なる例示であり、これらに何ら限定されない。注射可能な処方は、好ましい処方の中でも本発明の方法に適合している。注射可能な組成物用の効果的な医薬担体の要件、当業者には周知のことである〔薬学及び調剤の実際（Pharmaceutics and Pharmacy Practice），Ｊ．Ｂ．リッピンコット・カンパニー，フィラデルフィア，ペンシルベニア、バンカーとチャルマーズ編，第２３８〜２５０頁，（１９８２年），及び注射剤に関するＡＳＨＰハンドブック（ASHP Handbook on Injectable Drugs），トイセル，第４版，第６２２〜６３０頁，（１９８６年）参照〕。このような注射可能な組成物は静脈内又は局所的、即ち虚血再灌流傷害部位もしくはその付近に投与することが好ましい。局所用の処方は当業者にとって周知であり、本発明に関しては、放射線防御としての皮膚及び毛髪への適用に適している。経口投与に適した処方は、（ａ）希釈剤（例えば、水、生理食塩水又はオレンジジュース）に溶解した有効量の化合物のような溶液；（ｂ）予め決められた量の活性成分を固形物又は顆粒としてそれぞれ含むカプセル剤、小袋（sachet）、錠剤、のど飴（lozenge）及びトローチ剤；（ｃ）散財；（ｄ）適当な液体に懸濁した懸濁液；及び（ｅ）適当な乳化剤からなりうる。液体処方は水及びアルコール（例えば、エタノール、ベンジルアルコール、及びポリエチレングリコール）のような希釈剤を含んでいてもよく、医薬上許容される界面活性剤、懸濁化剤及び乳化剤をともに有していてもいなくてもよい。カプセル型は普通の硬もしくは軟外殻のゼラチンタイプのもので、例えば、界面活性剤、滑沢剤及び不活性なフィラー（例えば、乳糖、ショ糖、リン酸カルシウム及びトウモロコシでんぷん）を含む。錠剤は、乳糖、ショ糖、マンニトール、トウモロコシでんぷん、ジャガイモでんぷん、アルギン酸、微結晶セルロース、アカシア、ゲラチン、グア(g uar)ガム、コロイドシリコンジオキシド、クロスカルメロース（croscarmellose ）ナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、及び他の賦形剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、崩壊剤、湿潤剤、保存剤、矯臭剤、及び薬理学的に適合し得る賦形剤の一又はそれ以上を含んでいてもよい。喉飴（lozenges）は、臭いを有する活性成分、通常、ショ糖及びアカシア又はトラガントを含み、同様に香剤は、ゼラチン及びグリセリン等の不活性基剤又はショ糖及びアカシア中に含まれた活性成分を含み、活性成分に加えて当業界で知られた賦形剤を含む乳剤、ゲル剤等で構成される。本発明の化合物又はポリマーは、単独で又は他の適当な組成物と組み合わせて、吸入により投与されるエアロゾール処方に調製され得る。これらエアロゾール処方は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素等の加圧された許容し得る噴射剤中に置かれる。それらはネブライザー又はアトマイザーに入るような非圧製剤の医薬に調製される。そのようなスプレー製剤は粘膜に噴霧するために用いられる。非経口適用に適切な製剤としては、抗酸化剤、緩衝液、制菌剤及び製剤を投薬を受ける者の血液と等張にするための溶質を含有する水性及び非水性の等張性無菌注射溶液、懸濁化剤、溶解補助剤、糊料、安定化剤及び保存剤を含有する水性及び非水性の無菌の懸濁液が包含される。化合物は、医薬上許容できる石鹸あるいは洗浄剤のような界面活性剤、ペクチンのような懸濁化剤、カルボマー類、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースあるいはカルボキシメチルセルロース、あるいは乳化剤及び他の医薬上のアジュバントを添加してあるいは非添加で、水、生理食塩水、水性デキストロース及び関連砂糖溶液、エタノール、イソプロパノールあるいはヘキサデシルアルコール等のアルコール、ポリピレングリコールあるいはポリエチレングリコールのようなグリコール類、ジメチルスルホキシド、２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールのようなグリセロールケタール類、ポリ（エチレングリコール）４００のようなエーテル類、油、脂肪酸、脂肪酸エステルあるいはグリセライド、あるいはアセチル化脂肪酸グリセライドを含有する無菌の液体あるいは液体の混合物等の医薬的担体において生理的に許容できる希釈液中で投与してもよい。非経口製剤に用いられる油には石油、動物、植物あるいは合成油が包含される。油の具体的な例として、落花生油、大豆油、胡麻油、綿実油、トウモロコシ油、オリーブ油、ワセリン及び鉱油が包含される。非経口製剤に用いられる好適な脂肪酸にはオレイン酸、ステアリン酸及びイソステアリン酸が包含される。オレイン酸エチル及びミリスチン酸イソプロピルは好適な脂肪酸エステルの例である。非経口製剤に用いられる適切な石鹸には脂肪アルカリ金属、アンモニウム及びトリエタノールアミン塩が包含され、適切な洗浄剤には（ａ）例えば、ハロゲン化ジメチルジアルキルアンモニウム及びハロゲン化アルキルピリジニウムのような陽イオン洗浄剤、（ｂ）例えば、アルキル、アリール及びオレフィンスルフォン酸エステル類、アルキル、オレフィ、エーテル及びモノグリセライド硫酸エステル類及びスルホこはく酸エステル類のような陰イオン洗浄剤、（ｃ）例えば、脂肪アミンオキサイド類、脂肪酸アルカノールアミド類及びポリオキシエチレンポリプロピレン共重合体の様な非イオン洗浄剤、（ｄ）例えば、アルキル−β− アミノプロピオン酸エステル類及び２−アルキル−イミダゾリン第４級アンモニウム塩類のような両性洗浄剤及び（ｅ）それらの混合物が包含される。非経口製剤には典型的には、約０．５から２５重量％の活性成分を溶液中に含む。保存剤及び緩衝液を用いてもよい。注射部位での刺激を最小限にする、あるいは無くすためにはそのような組成物に１つないしはそれ以上の約１２から約１７の親水親油バランス（ＨＬＢ）を有する非イオン性界面活性剤を含有してもよい。そのような製剤中の界面活性剤の量は典型的には重量で約５から約１５重量％の範囲である。適切な界面活性剤としては、ソルビタンモノオレイン酸エステルのようなポリエチレンソルビタン脂肪酸エステル類及びプロピレンオキサイドとプロピレングリコールとの縮合によって生成される疎水性基剤とのエチレンオキサイドとの高分子量の付加物が挙げられる。この非経口製剤は１単位又は複数単位のアンプル及びバイアルのような密閉された容器で供せられ、注射には使用直前に、例えば水のような無菌の液体賦形剤を添加するだけでよいフリーズドライ（凍結乾燥）した状態で保存され得る。即席注射溶液及び懸濁液は以前に述べた種類の無菌の粉末剤、顆粒剤及び錠剤から調整され得る。さらに、本発明の方法で有用な化合物及びポリマーは乳化基剤あるいは水溶性基剤のような種々の基剤と混合して坐剤に作られる。膣内投与に適切な製剤として、活性成分に加えて適切であると知られている担体を含有する膣坐剤、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、パスタ剤、泡剤あるいはスプレー剤がある。以下の実施例によって本発明をさらに説明するが、これらは、当然ながら、なんら本発明の範囲を限定するように解釈されるべきではない。実施例１この実施例は、生理条件下で、酸素の存在を必要とせずに、酸化窒素を自発的に放出する、酸化窒素含有化合物による、チャイニーズハムスターＶ７９の繊維芽細胞における、過酸化物が介在する細胞毒性の治療について記述する。チャイニーズハムスターＶ７９の肺の繊維芽細胞を、１０％ウシ胎児の血清と抗生物質を加えたＦ１２培地で培養した。８５−９５％平板効率のクローンアッセイによって生存している細胞を評価した。指数関数的に成長する細胞の保存種をトリプシン処理し、すすぎ、多くの１００ｃｍ²ペトリ皿上に播き（７×１０⁵ 細胞／皿）、実験手順に先立って３７℃で１６時間インキュベートした。過酸化水素又はＨＸ／ＸＯに曝されたＶ７９細胞は、虚血再灌流のような症状における反応性酸素種の研究に良好なモデルであることが示されている（ミッチェルら、同上、ゲルバンら、PNAS USA，88巻，4680-4684頁(1991)）。Ｖ７９細胞を過酸化水素に曝すと、用量依存性の細胞毒性を起こすことが示されている（ミッチェルら、同上）。ＨＸ／ＸＯに起因する細胞毒性は、超酸化物であるジスムターゼの添加によって治療されなかった。一方、カタラーゼを添加すると細胞毒性は治療された。このことは、過酸化水素が主要な毒物であることを示している（ミッチェルら、同上）。ＨＸ及びＸＯは、ベーリンガーコーポレーション（インディアナポリス、インディアナ州）から購入した。亜硝酸塩、ジエチルアミン、スルフィンアミド、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＥＴＡＰＡＣ）及びＮ−（１−ナフチル）エチレンジアミン・２塩酸塩（ＮＥＤＤ）は、アルドリッチ（ミルウォーキー、ウィスコンシン州）から購入した。シトシン−β−Ｄ−アラビノフラノサイド及びフェリシトクロームｃは、シグマ（セントルイス、ミズーリ州）から購入した。ＤＥＡ／ＮＯ及びＳＰＥＲ／ＮＯは前述のように合成した（マラゴスら、J．Med ．Chem .，34巻，3242-3247頁(1991)）。指数関数的に成長するチャイニーズハムスターＶ７９の繊維芽細胞の培養物は、いろいろな時間、ＨＸ／ＸＯ（ＨＸの最終濃度は０．５ｍＭ；０．０８単位／ｍｌのＸＯを使用した。）に曝すか（図１Ａ）、あるいは１時間種々の濃度の過酸化水素に曝した（図１Ｂ）。ＨＸ／ＸＯ又は過酸化水素の添加の直前に、同様に培養物に、ＤＥＡ／ＮＯ、ＳＰＥＲ／ＮＯ、亜硝酸塩、又はジエチルアミン（最終濃度は１ｍＭ）を添加した。さらに、１ｍＭＤＥＡ／ＮＯを細胞が存在していない培地に添加し、３７℃で１時間又は１６時間インキュベートし、次いで、ＮＯを放出したＤＥＡ／ＮＯの作用を評価するために、過酸化水素の添加直前に添加した。処理後、細胞単層をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で２回すすぎ、トリプシン処理し、カウントし、肉眼観察できるコロニーの形成のために３つに播いた。決められた容量を３つに播き、実験を最低２回繰り返した。プレートを７日間インキュベートし、コロニーをメタノール／酢酸（３：１）で固定し、クリスタルバイオレットで染色してカウントした。５０を超える細胞を含有するコロニーを記録した。ＸＯの活性を、２つの異なったアッセイにより、１ｍＭＤＥＡ／ＮＯの非存在下又は存在下でモニターした。フェロシトクロームｃに対するフェリシトクロームｃの超酸化物に起因する還元は、５５０ｎｍで分光測光的にモニターされた（フリドビッチ、Handbook of Method for Oxygen Radical Research, 213-215頁、(1985)）。反応は５０μＭＤＥＴＡＰＡＣを含有する、通気したリン酸緩衝液（ｐＨ７．８、５０ｍＭ）１ｍｌ中で行われた。ＨＸは２．５ｍＭに、フェリシトクロームｃは２０μＭに維持された。反応はＸＯ（最終濃度は０．２単位／ｍｌ）の添加で始められた。ＤＥＡ／ＮＯ１ｍｌの非存在下及び存在下におけるＸＯの活性は、フェリシトクロームｃが存在しないこと以外は同様の条件下で、３０５ｎｍで、１０分間、分光測定的に尿酸の生成を測定することにより直接モニターされた。全ての酵素アッセイ及び化学反応は３７℃で行われた。１ｍＭ過酸化水素の１０ｍＭリン酸緩衝液の嫌気性溶液（ｐＨ７．４）を１ｍＭＮＯと混合した。硝酸塩／亜硝酸塩の急速な形成（＜１０００ｓ）は、停止フロー（stopped-flow）技術（ウインクら、Chem．Res．Toxicol.,６巻，２３〜２７頁(1991)）を用いても２１０ｎｍでは観察されなかった。加えて、次にアゾ染料を形成するＮＥＤＤとのジアゾ化を伴う、ＮＯ／Ｏ₂反応の中間体による、嫌気性溶液（１００ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７．４）中でのスルフィンアミドのニトロソ化は、１ｍＭ過酸化水素の存在下では阻害されなかった。即ち、過酸化水素によるＮＯの消費はこれらの条件では重要ではなかった。ＤＥＡ／ＮＯの分解速度は、１ｍＭ過酸化水素の存在によって影響されなかった。同様に、過酸化水素は、Ｉ₃ ^-の生成によって測定される（ホチャナデール、J．Phys．Chem.，56巻，587-594頁(1952)）が、ＤＥＡ／ＮＯ又はＤＥＡ／ＮＯ分解反応の中間体によって消費されなかった。図１Ａは、時間（分）に対する生存割合の対数のグラフであり、線は、酸化窒素放出化合物の非存在下（コントロール、○）、１．０ｍＭ（▲）及び１ｍＭ（ ●）のＤＥＡ／ＮＯの存在下、及び1ｍＭＳＰＥＲ／ＮＯ（■）の存在下での、ハイポキサンチン／キサンチンオキシダーゼへの細胞の暴露を表す。図１Ａは、酸化窒素放出化合物の非存在下で、種々の時間の間隔をおいて、Ｖ７９細胞をＨＸ／ＸＯに曝すと、細胞致死となることを示している。０．１ｍＭＤＥＡ／ＮＯは、ＨＸ／ＸＯ生成超酸化物ラジカルに対してどうにか保護したが、１ｍＭのＤＥＡ／ＮＯは、ハイポキサンチン／キサンチンオキシダーゼから発生する超酸化物に起因する細胞致死から有意に保護した。従って、これらの結果は、過酸化水素が介在する細胞毒性が、ＮＯ発生化合物の存在によって防止され得るということを明確に示している。ＳＰＥＲ／ＮＯ（１ｍＭ）は、ＤＥＡ／ＮＯよりも４０倍遅くＮＯを放出するが、これもまた、ＤＥＡ／ＮＯよりも程度は低かったが、ＨＸ／ＸＯに起因する細胞毒性からＶ７９細胞を保護した。ＳＰＥＲ／ＮＯから放出されるＮＯの量がＤＥＡ／ＮＯから放出されるＮＯの量よりも少なければ、これらの複合体から放出されるＮＯが保護しているということを示唆している。哺乳動物細胞においてもう１つの可能性のある毒剤は、過酸化亜硝酸アニオン（ＯＯＮＯ^-）であり、これはＸＯ及びＮＯから発生するＯ₂ ^-の存在で形成されると考えられる（ベックマン、J．Dev．Physiol.，15巻，53-59頁(1991);ズーら、Arch．Biochem．Biophys.，298巻，452-457頁(1992);イシュロポウロスら、Ar ch．Biochem．Biophys .，298巻，431-437頁(1992);及びベックマンら(1990),同上）。ＮＯ及びＯ₂の反応速度定数は、生成物が強い酸化剤（ＯＯＮＯ^-）であると、５．６×１０⁷Ｍ^-1Ｓ^-1であると報告されている（サランら、Free Radic．R es．Commun. ，10巻，221-226頁(1990)）。ＯＯＮＯ^-は生理的ｐＨで急速に硝酸塩に変換するが、このアニオンはＮＯの毒性作用を増大させるのに重大な役割を果たすと推測されてきた。ＤＥＡ／ＮＯがフェリシトクロームｃのＯ₂ ^-還元を消滅させることは、ＮＯがＯ₂ ^-を除去して過酸化亜硝酸アニオンを形成することにより説明され得る。しかし、上記の条件下で形成されうるどんな過酸化亜硝酸アニオンも、図１Ａに示されるように細胞毒性を誘導しない。前もってＨＸ／ＸＯでインキュベートした、ＤＥＡ／ＮＯ（１ｍＭ）単独及びその分解物であるジエチルアミン（１ｍＭ）及び亜硝酸塩（１ｍＭ）は、超酸化物の生成（シトクロームｃの還元）あるいは尿酸の生成によって測定されるようなＸＯ活性阻害を示さなかった。図１Ｂは、時間（分）に対する生存割合の対数グラフであり、線は、ＤＥＡ／ＮＯ分解物の非存在下（コントロール、○）及び存在下（ジエチルアミン（■）及び亜硝酸塩（●））での、過酸化水素への細胞の暴露を表す。図１Ｂは、ＤＥＡ／ＮＯの分解物が、過酸化水素又はＨＸ／ＸＯに起因する細胞毒性から細胞を保護しなかったことを示している。また、３０５ｎｍにおけるＵＶ吸収の変化をモニターすると、尿酸生成はＤＥＡ／ＮＯの存在により阻害されないことを示した。従って、基質転換は可逆的にも不可逆的にも阻害されない。しかし、ＤＥＡ／ＮＯの存在は、ＳＯＤ感受性フェリシトクロームｃの還元を阻害した。このことは、酸素を還元して超酸化物を形成することが阻害されるか、あるいはＮＯが、ＨＸ／ＸＯを発生する超酸化物を除去して、過酸化亜硝酸アニオン、これはそれから急速に硝酸塩に変換する、を形成するということを示唆している。図２Ａは、１時間暴露した時の過酸化水素濃度（μＭ）に対する生存割合の対数グラフであり、線は、コントロール（○）、１ｍＭＤＥＡ／ＮＯ（●）、１時間放出した１ｍＭＤＥＡ／ＮＯ（□）、及び１６時間放出した１ｍＭＤＥＡ／ＮＯ（▲）を表す。図２Ａは、１ｍＭＤＥＡ／ＮＯが、過酸化水素細胞毒性からほぼ完全に保護したことを示す。ＮＯを放出する１ｍＭＤＥＡ／ＮＯ溶液に、過酸化水素の添加前に１時間曝されたＶ７９細胞は、穏やかな保護しか示さず、過酸化水素の添加直前に添加したＤＥＡ／ＮＯほど効果的ではなかった。しかし、過酸化水素添加前に、培地で１６時間インキュベートした１ｍＭＤＥＡ／ＮＯは、過酸化水素の細胞毒性を強めた。同様に、過酸化水素で１時間処理され、続いて１ｍＭＤＥＡ／ＮＯで１時間処理された細胞は、酸素のフリーラジカルが介在する組織の損傷を治療しなかった。図２Ｂは、過酸化水素濃度（μＭ）に対する生存割合の対数グラフであり、線は、コントロール（○）、ジエチルアミン（■）及び亜硝酸塩（●）を表す。図２Ｂは、ジエチルアミン（１ｍＭ）は過酸化水素細胞毒性に影響を及ぼさないが、亜硝酸（１ｍＭ）は過酸化水素細胞毒性を強化させたことを示している。しかし生体内ではごく少量の亜硝酸が生成し、それは急速に体から排出される。化学的なコントロールは、ＤＥＡ／ＮＯの分解によるＮＯの形成速度が、過酸化水素の存在によって変わらないことが立証された。換言すれば、過酸化水素はＤＥＡ／ＮＯの存在下で消費されなかった。これらの結果は、ＤＥＡ／ＮＯの分解は、過酸化水素あるいはＨＸ／ＸＯを消費せず、ＸＯ基質転換に影響を与えなかったこと、及びＮＯ生成化合物が細胞保護に介在し、保護するために、過酸化水素に曝されている間存在するにちがいないことを示している。実施例２この実施例は、生理条件下で、酸素の存在を必要とせず、自発的に酸化窒素を放出する酸化窒素含有化合物による腹側の中脳細胞(ventral mesencephaliccell )におけるニューロン機能の、過酸化物が介在する損傷からの保護を記述する。腹側の外皮の中脳は、妊娠１４日目の胎児（正確に時間計測の妊娠したスプリーグドウリー系ラット；ジビック−ミラー、アリソンパーク、ペンシルベニア州）から滅菌条件下で切断し、完全培地中に機械的に引き離した。培養培地は、改質された最小必須培地と６ｍｇ／ｍｌＤ−グルコース、２ｍＭグルタミン、０．５Ｕ／ｍｌペニシリンＧ、０．５ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン（すべてギブコから購入、グランドアイランド、ニュヨーク州）及び１５％ウマ血清（ヘイクロン、ローガン、ユタ州）を加えたＦ−１２栄養培地の１：１の混合物から構成されていた。細胞を４００００細胞／ｃｍ²の密度でポリ−Ｄ−リジン（１５μｇ／ｍｌ）及びラミニン（１０μｇ／ｍｌ）で前もってコートされたマルチウェルプレートに播いた（コスター）。細胞は３７℃で空気９５％とＣＯ₂５％からなりＨ₂ Ｏで飽和した大気中で５〜７日維持された。培養から５日目に１μＭシトシン− β−Ｄ−アラビノフラノサイドを添加してグリア細胞の成長を阻害した。ドーパミン作用性のニューロンによるドーパミンの取り込みを次のように測定した。各ウェルの細胞を、６ｍｇ／ｍｌのグルコースを含有するＰＢＳ１ｍｌで３回洗浄し、その後、６ｍｇ／ｍｌＤ−グルコース、５０μＭアスコルビン酸及び５×１０^-8Ｍ［³Ｈ］ドーパミン（ＮＥＮ、ボストン、マサチューセッツ州、４５μＣｉ／ｍｍｏｌの比活性）を含有するダルベッコの改変必須培地（クオリティー、バイオロジカルインク、ファーミンガム、マサチューセッツ州）を添加し、３７℃で１５分間インキュベートした。インキュベーション溶液を吸引し、そして６ｍｇ／ｍｌＤ−グルコースを含有する氷冷のＰＢＳで細胞を３回洗浄することにより、［³Ｈ］ドーパミンの取り込みを終了させた。等量の０．２ＮＮａＯＨと０．０２％トリトンＸ−１００を含有する０．２ＮＨＣｌでウェルを洗浄することにより細胞を除去した。細胞における細胞内残余放射能は、シンチレーション分光器により測定した。従って、腹側の中脳細胞の培養物は、１００μＭＤＥＡ／ＮＯの存在下及び非存在下で１００μＭＨ₂Ｏ₂に１時間曝され、そしてそのドーパミンを取り込む能力を評価した。図３は、Ｈ₂Ｏ₂濃度（［Ｈ₂Ｏ₂］μＭ）に対する³Ｈ−ドーパミン濃度（ｐｍｏｌ［³Ｈ−ＤＡ］）のグラフであり、線は、ＤＥＡ／ＮＯの存在下（■）及び非存在下（▲）での、腹側の中脳細胞の培養物によるドーパミンの取り込みを表す。図３は、過酸化水素が、ＤＥＡ／ＮＯの非存在下で、細胞のドーパミンを取り込む能力を有意に減少させたが、ＤＥＡ／ＮＯの存在下では過酸化水素に曝された細胞は、ドーパミンを取り込む能力のほぼ1００％を維持していたということを示している。別の研究では、細胞を７日間培養し、次いで１００μＭＤＥＡ／ＮＯの非存在下又は存在下で、５０μＭ又は１００μＭ過酸化水素に６０分間細胞を曝すか、あるいはＨＸ／ＸＯ０．０４単位／ｍｌに５分間又は１０分間細胞を曝した。細胞を６ｇ／ｌＤ−グルコースを含有するＰＢＳで洗浄し、培養培地を添加し、そして細胞を１８時間インキュベートした。細胞（グループあたり４５００００細胞／ウェルが６ウェル）の［³Ｈ］ドーパミンを取り込む能力を測定した。これらの細胞を上述のＶ７９細胞の１／１０倍の過酸化水素又はＨＸ／ＸＯに曝した。その結果を表１に示す。表Ｉに示すように、１００μＭＤＥＡ／ＮＯを過酸化水素又はＨＸ／ＸＯとともに添加した時、完全な保護が観察された。放射能標識されたドーパミンの取り込みは、神経突起生存の測定として使用され得るので、ＮＯは、反応性酸素種に起因する損傷からニューロンを保護することが推論できる。細胞を１時間過酸化水素に曝した時、神経突起に静脈瘤が形成され、身体が腫れた。５分程度の短い間ＨＸ／ＸＯに曝すことは、中脳神経突起における類似の形態学的変化を引き出した。逆に、１００μＭＤＥＡ／ＮＯに１時間曝された細胞は形態学的変化を生じなかった。即ち、ＤＥＡ／ＮＯ処理した細胞は非処理細胞と類似していた。１００ｕＭＤＥＡ／ＮＯの存在下、過酸化水素又はＨＸ／ＸＯに曝された細胞は、神経突起及び身体に異常を示さなかった。実施例３この実施例は、酸化窒素の分泌の放出による、再灌流誘導性の白血球の癒着の開始と微小血管の透過性について述べる。各々体重２００−２５０ｇのSprague-Dawley雄性ラットを精製された実験用規定食で飼育し、各実験に先立って２４時間絶食させた。これらの動物は、始めにペントバルビタール（６５ｍｇ／ｋｇ体重）で麻酔し、それからその後の実験中の呼吸を促進するために気管切開が行われた。右頸動脈にカニューレを挿入し、頸動脈のカニューレにつながれたStatham P23A圧トランスデューサー（Oxnard ，CA）により動脈系圧力を測定した。体血圧と脈拍をGrass physiologic record ed(Grass Instrument)により連続的に記録した。また、左頸静脈と上腸間膜動脈に薬物投与のためカニューレを挿入した。ラットを背仰位にて、調節性プレキシガラス顕微鏡台に置き、顕微鏡観察のために、上述したように（Asako et al.，Gastroenterology，103, 146-152(1992) ;Kurose et al.，Circ．Res.，in press(1993)）、腸間膜を調製した。手短に言えば、腸間膜を非蛍光カバーガラスの上に伸ばして、２ｃｍ²の組織断片の観察に備えた。露出された腸壁をサランラップ（Dow Chemical Co.）で覆い、腸間膜を、５％ＣＯ₂と９０％Ｎ₂の混合物で泡立てた重炭酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４，３７℃）で洗浄した。この腸間膜の微小循環の観察には４０倍の対物レンズ（Fluor，Nikon）付き倒立顕微鏡(TMD-2S，Diaphoto，Nikon，Tokyo，Japan)を用いた。この腸間膜は１２Ｖ−１００Ｗの直流で安定化された光源により徹照した。顕微鏡にはめこまれたビデオカメラ（VK-C150,日立、茨城、東京）が像をカラーモニター（PVM-2030 ,ソニー、東京、日本）上に写し、これらの像はビデオカセットレコード（NV895 0,パナソニック、東京、日本）を用いて記録された。ビデオ・タイムーデートジェネレーター（WJ810,パナソニック）が時間、日付及びストップウォッチ機能をモニター上に写した。直径が２５〜３５μｍで、長さが１５０μｍ以上の一本の細静脈が試験のために選択された。細静脈径（ＤＶ）を、ビデオカリパス（Microcirculation Resea chInstitute，Texas A&M University，College Station，TX）を用いて、オンライン又はオフラインのいずれかで測定した。赤血球中心線速度（ＶＲＢＣ）を、細静脈内で、光学ドッパー速度計(Microcirculation Reseach Institute，Texas A&M University，College Station，TX)を用いて測定した。この速度計は、赤血球でコートされた回転ガラス盤に対して目盛りが付けられた。細静脈血流は、円柱の幾何図形を仮定して、平均赤血球速度（Ｖ_mean＝中心線速度／１．６；Da vis,Microvasc．Res.，34，223-230(1987)）と微小血管の断面の積から計算された。壁ずれ速度（wall shear rate）（γ）はニュートン定義に基づいて計算した。γ＝８（Ｖ_mean／Ｄ）癒着白血球数は、ビデオテープ画像の再生中にオフラインで数えた。１個の白血球が、もし３０秒又はそれ以上の間静止したままであれば、細静脈内皮に癒着したとみなした（Granger et al.，Am，J．Physiol.，257，G683-G688(1989)）。癒着細胞は、細静脈の長さ１００μｍあたりの数で表した。遊走白血球の数もビデオテープ画像の再生中にオフラインで測定した。実験開始時に腸間膜に存在するどの介在白血球も、実験過程で累積した総白血球数より引いた。白血球遊走は細静脈を囲む視野あたりの数値で表した。後毛細管細静脈内に見られる血小板 −白血球凝集物を定量し、５分の間に細静脈内の固定点を横切る凝集物の数で表した。ラットの腸間膜の微小血管床のマスト細胞を、０．１％トルイジンブルーを用いて視覚化した。正常マスト細胞と脱顆粒したマスト細胞の数を数え、脱顆粒したマスト細胞のパーセンテージを計算した。腸間膜静脈に交差するアルブミンの漏出は、各実験より１５分前に５０ｍｇ／ｋｇのＦＩＴＣ−標識ウシアルブミン(Sigma Chemical Co.，St．Louis，MO)の静脈内投与を行うことにより定量した（Kurose et al.,同上）。蛍光強度（４２０−４９０ｎｍの励起波長；５２０ｎｍの発光波長）を、強化シリコンターゲットカメラ（C-2400-08,浜松フォトニックス、静岡、日本）を用いて検出した。試験下の細静脈の３断片内のＦＩＴＣ−アルブミンの蛍光強度（Ｉｖ）と、細静脈周囲の間質領域の３つの隣接領域内のＦＩＴＣ−アルブミンの蛍光強度（Ｉｉ）を、ＦＩＴＣ−アルブミンの投与後の様々な時間で、コンピューター補助デジタルイメージングプロセッサー（Macintosh，Apple Co.）を用いて測定した。血管アルブミン漏出指数は、再灌流相の間の特定時間に、Ｉｉ：Ｉｖ比から決定した。オンラインで測定されたパラメーターが全て定常状態になった後、腸間膜標品からの画像を１０分間ビデオテープに記録した。その後直ちに、上腸間膜動脈を、ポリエチレンの管で作られた係蹄で結紮した。腸間膜動脈を、０分間か（疑虚血）、２０分間虚血にした。虚血期の後、結紮を静かに解いた。いくつかの実験において、ニトロプルシドナトリウム（ＳＮＰ、１００μＭ、Sigma Chemical）、スペルミン−ＮＯ（ＳｐＮＯ、１００μＭ）、ＳＩＮ−１（１００μｍ）、スペルミン（Ｓｐ、１００μＭ、Sigma Chemical）あるいはＮＧ−ニトロ−Ｌ−アルギニンメチルエステル（Ｌ−ＮＡＭＥ、１００μＭ、Sigma Chemical）を洗浄液に加え、同じプロトコールを用い、ＮＯ供与体である、スペルミン−ＮＯとＳＩＮ−１は、Naional Institutes of Health，Bethesda，MDから入手した。亜硝酸と硝酸の血漿レベルは、グリーンらの方法(Anal．Biocham.，126,131-1 38(1982))と、山田らの方法（Gastroenterology，104, 759-771(1993)）の変法により測定した。手短に言えば、蒸留水４００μｌをヘパリン加血漿１００μｌに加えた。３０％ＺｎＳＯ₄を２５μｌ加えると蛋白質が沈殿した。ＺｎＳＯ₄を加えてから５分後、遠心分離により沈殿を除去した。上清５００マイクロリットルをE-coli由来の硝酸還元酵素２５μｌ、２．５ＭＨＥＰＥＳ２０μｌ及び３Ｍギ酸アンモニウム（ｐＨ７．４）５０μｌに加え、還元酵素とともに３７℃ 、１時間インキュベートして、硝酸を亜硝酸に還元した（Bartholomew, Food C hem．Toxicol. ，22，541-543(1984)。インキュベートされた試料中の亜硝酸を、 Stuehrらの方法(Sartor et al., Gastronterology，89，587-595(1985))により、Griess試薬（１％サルファニルアミド／０．１％ナフチルエチレンジアミンンジヒドロクロライド／２．５％Ｈ₃ＰＯ₄）を使用して定量した。亜硝酸濃度を、亜硝酸ナトリウム(Sigma Chmical)を基準として、標準曲線から算出した。このデータを、標準統計分析すなわち、ワンウェイ分散分析とScheff's（ポスト −ホック）テストを用いて分析した。数値はすべて６匹のラットからの平均±標準誤差として報告され、統計危険率をｐ＜０．５で算定した。未処理の（コントロール）ラットでは、腸間膜細静脈の赤血球速度と壁ずれ速度は、コントロール条件下で、各々３．１２±０．１８ｍｍ／ｓｅｃ、５３５± ６ｓｅｃ^-1であった。上腸間膜動脈（ＳＭＡ）を閉鎖している間、血流は腸間膜細静脈内で止まっていた。２０分間までの虚血期は、有意で持続的な再灌流に関係していた。すなわち赤血球速度（１．９４±０．１３ｍｍ／ｓｅｃ）と壁ずれ速度（３２８±１６ｓｅｃ^-1）は、ＳＭＡ閉塞の開放に続いて正常な数値に回復した。より長い間隔の虚血（＞３０ｍｉｎ）は、ＳＭＡ閉塞の開放の後には、血流は有意な程度までには起こらず、同様の再灌流応答は起こらなかった。結果として、白血球−内皮細胞癒着とアルブミン漏出の測定は、２０分間虚血に晒された腸間膜細静脈内でしか得られなかった。ＮＯ供与体、すなわち、ＳＮＰ，ＳｐＮＯ，ＳＩＮ−１は、ただしＳＰやＬ−ＮＡＭＥではない、細胞灌流後の赤血球速度と壁ずれ速度の減少を逆転させた。これらのデータは、表ＩＩ中に要約されている。図４Ａ−Ｃは、それぞれＮＯ供与体及びＮＯ合成インヒビター対１００μｌあたりの癒着白血球数、視野ごとの遊走白血球、及びアルブミン漏出％の棒グラフである。各々２０分間虚血と３０分間再灌流に対してであり、１０分間と３０分間のデータを示す。誤差バーは、平均からの標準偏差を示す。癒着白血球と遊走白血球の数は、再灌流の１０分後に有意に増加し、その後漸増した。２０分間の偽虚血と３０分間の再灌流に曝された動物においては、白血球癒着は１００μｍあたり２．６±０．８であり、これは視野ごとに１．４±０．７の遊走白血球を伴い、アルブミン漏出指数は８．３±１．６％であった。２０分間の虚血と３０分間の再灌流に曝された腸間膜の標品において得られた対応数値は各々、１００ μｍあたり１８．４±１．０、視野ごとに８．８±０．８、及び４８．１±４．０％であった。しかし、ＳＰ−あるいはＬ−ＮＡＭＥを与えられた動物においては、白血球癒着の有意な変化は表れなかった（図４Ａ参照）。白血球遊走の減少における有効性の類似パターン（図４Ｂ）が、異なるＮＯ供与体について観察された。すなわち、ＳＮＰ，ＳｐＮＯ及びＳＩＮ−１は、遊走白血球を、２９−５７％、６４−７１％、６８−７５％減少させ、一方、ＳＰ−とＬ−ＮＡＭＥは効果がなかった。図４Ｃは、虚血再灌流により誘導されたアルブミン漏出における多量の増加が、再灌流後１０分及び３０分の両方で、ＳＮＰ（４６−６３％）、ＳｐＮＯ（７０％）、ＳＩＮ−１（６０−７１％）によって有意に減らされたことを示している。ＳＰ−及びＬ−ＮＡＭＥは、虚血再灌流誘導アルブミン漏出には効果がなかった。図５Ａ及びＢは、各々、アルブミン漏出％対１００μｍ当たりの癒着白血球及び視野ごとの遊走白血球のグラフである。図５は、癒着白血球（図５Ａ）数及び遊走白血球（図５Ｂ）数における、一本の細静脈内の虚血再灌流誘導アルブミン漏出の依存性を示している。数値はすべて、図４で示された３０分数値に由来している。アルブミン漏出は、白血球癒着（ｒ＝０．８００，ｐ＜０．０５）と白血球遊走（ｒ＝０．７４６，ｐ＜０．０５）の両方と非常に相関関係があった。白血球癒着／遊走の高いレベルを示す細静脈の領域においては、癒着／遊走を殆どあるいは全く示さない領域よりも、アルブミン漏出が多かった。図６は、５分あたりの化合物対白血球−血小板凝集物の棒グラフである。誤差バーは、平均からの標準偏差を表す。図６には、虚血再灌流誘導の白血球−血小板凝集物形成におけるＮＯ供与体の効果が要約されている。凝集物は、コントロール条件間は全く観察されなかったにもかかわらず、２０分間虚血と３０分間再灌流に曝された細静脈内では、５分間あたり１２．２±１．４の凝集物が観察された。ＳＮＰ、ＳｐＮＯ、ＳＩＮ−１のいずれかで処理した動物では凝集物の形成が減少したが、ＳＰ−又はＬ−ＮＡＭＥで処理したものでは減少しなかった。図７は、化合物対％脱顆粒マスト細胞のグラフである。誤差バーは、平均からの標準偏差を示す。図７には、微小血管マスト細胞の虚血再灌流誘導脱顆粒におけるＮＯ供与体の効果が要約されている。脱顆粒されたマスト細胞は、再灌流から３０分後のコントロールラットの後毛細管細静脈に沿って観察されたマスト細胞全体の５％未満であった。脱顆粒されたマスト細胞は、２０分虚血、次いで３０分再灌流の後に、約３５％に増加した。ＳＮＰ、ＳｐＮＯ及びＳＩＮ−１は、微小血管マスト細胞の虚血再灌流誘導脱顆粒を有意に阻害したが、一方ＳＰ−又はＬ−ＮＡＭＥ単独では効果がなかった。図８は、虚血再灌流（Ｉ／Ｒ）前後の、頸動脈及び上腸間膜静脈（ＳＭＶ）に対する亜硝酸／硝酸濃度（μＭ）の棒グラフである。誤差バーは、平均からの標準偏差を示す。上腸間膜における亜硝酸と硝酸の濃度は、２５．８２±１．７６ μｍｏｌｅであった。虚血再灌流後、亜硝酸及び硝酸の濃度は、１５．６７±２．７３μｍｏｌｅに減少した。しかし、頸動脈内の亜硝酸及び硝酸の濃度は、虚血再灌流後の有為な変化を示さなかった（前：２０．３４±４．２１；後：１５．５１±１．７９）。実施例４この実施例は、小腸の移植を受けたネコの、低体温虚血の間の粘膜と微小血管系とに対する酸化窒素含有化合物の効果を証明する。ドナーのネコは１８−２４時間絶食させ、約７５ｍｇのケタミンハイドロクロライドと０．５ｍｇのマレイン酸アセプロマジンの筋注により麻酔し、次いで右頸静脈にカニューレを通してペントバルビタールの静注を行った。ネコには、気管切開終了後、ハーバードレスピレーターを用いて機械呼吸させた。正中線開腹術を行って、結腸を除去し、遠位回腸の１０−２０ｇの断片を分離した。流入用と流出用のゴム製カニューレを取り付け、固定した。小腸の残りを切除し、術野から除去した。そして、１００００ユニットのヘパリンを経静脈的に投与した。腸間膜茎における大リンパ管にカニューレを挿入し、４−０シルク結紮糸で固定した。小腸検体の内腔を、５０ｃｍＨ₂Ｏで冷乳酸加リンガー液２００−３００ｍｌで洗浄した。上腸間膜動脈及び静脈の両方にカニューレを挿入し、動脈を３５ｃｍＨ₂Ｏで冷乳酸加リンガー液１００ｍｌで洗浄した。近位腸間膜茎を結紮し、収穫した断片を取りプレキシガラス台に置き、冷乳酸加リンガー液で湿らせた。採取した小腸を湿った密封プレキシガラス室に置き、４℃で６時間冷却した。レシピエントの手術は、開腹術まで、ドナーモデルに対する方法と同一であった。この点で、両腎動脈をシルク４−０結紮糸で結紮し、⁵¹Ｃｒ−ＥＤＴＡ（ニューイングランドヌクレアー、ボストン、ＭＡ）の腎性排泄を予防した。⁵¹Ｃｒ −ＥＤＴＡは、腸粘膜における微妙な変化を検査するために広く使用されている。ＥＤＴＡは、分子量３５９の小分子量分子で、静脈投与後そのクロムキレートは細胞外コンパーメントに迅速に平衡化する。この分子の血液から内腔への運動の律速バリアーは腸粘膜の上皮細胞単層で、これはまた、微小血管の内皮細胞層における変化には依存しない(Kubes(1992), supra; Crissinger et al., J．Int ern．Med．Suppl., 1，145-154(1990))。ヘパリン（１００００ユニット）を静脈投与し、大静脈及び大動脈にシラスティックカニューレを挿入した。開腹術の切開部を、フロープローブ／Statham 23 Aトランスデューサーが設置できるように開いた下面と共に閉じ、動脈循環を形成した。静脈循環にも圧トランスデューサーを封入した。Ｇｒａｓｓ生理記録装置を、腸断片を再灌流してすぐに使用して、動脈圧、静脈圧、及び毛細血管圧をモニターした。毛細血管圧は、前述した静脈閉鎖技術（Granger et al.，Am． J Physiol. ，244，G341-344(1983)）を用いて測定した。ドナーの腸断片を、蒸発水の損失を最小限にするために透明なプラスチックのカバーで覆い、その間赤外線加熱灯と温度計を用いて温度を３８−４０℃に保った。腸移植片の再灌流では、内腔を温乳酸加リンガー液（３８℃）を、速度１．０ｍｌ／ｍｉｎで灌流し、一方排出液は１２０分間中５分間隔で集めた。機能良好な移植片を決定する際に、約２０−３０分後に５００μＣｉの⁵¹Ｃｒ−ＥＤＴＡを静脈投与した。投与後３０分おくと、⁵¹Ｃｒ−ＥＤＴＡは組織中で平衡化したことが認められた。内腔の全５分灌流試料を、３７００ｒｐｍ、４℃で２０分間遠心分離した。上清液をとって、計量した上清液の⁵¹Ｃｒ−ＥＤＴＡを、ＬＫＢＣｏｍｐｕＧａｍｍａ分光計(model 1282，LKB Instruments，Gathersburg，MD) 内で測定した。⁵¹Ｃｒ−ＥＤＴＡクリアランスを次式に従って計算し、ｍｌ／ｍｉｎ／１００ｇ組織重量で表した。リンパ流と濃度は、カニューレ挿入腸リンパ管により、再灌流の間１５分毎に得た。２００μｌ目盛りのピペットを用いて、リンパ流（Ｊ_L）を観察した。リンパ液蛋白質濃度（Ｃ_L）と、血漿（Ｃ_P）蛋白質濃度を、アメリカン光学屈折計 (American Optical Refractometer)を用いて測定した。採取過程の間の血管洗浄に先立ち、Ｃ_L、Ｃ_P、及びＪ_Lのコントロール数値を得た。算出された腸の数値はすべて、組織１００ｇごとに標準化した。リンパ液蛋白質クリアランスは、次式を用いて算出した。リンパ液蛋白質クリアランス＝（Ｃ_LＱ_L／Ｃ_P）該動物を３つの違うグループに分けた。第１のグループは治療介入を受けず、コントロールグループと６時間の低温虚血に曝されたグループに分けた。コントロールグループは、単にそのままでコントロール数値のためだけの腸検体を含み、虚血や乳酸加リンガー液による内腔洗浄を行わなかった。第２のグループは、未処理の低温虚血グループと同一の方法を経た。しかし、腸内腔を、０．１ｍｍｏｌスペルミンＮＯを含む乳酸加リンガー液で洗浄した。内腔灌流液として０．１ｍｍｏｌのスペルミンＮＯの新鮮溶液を、３９分の短い半減期に従って３０分毎に用いた（Maragos et al.，J．Med．Chem.，34(11)324 4-3249(1991)）。灌流液は、モニターされた温水浴中で３８℃に保った。第２のグループのサブグルーブは比較対照対スペルミンとして乳酸加リンガー液中の０．１ｍｍｏｌスペルミンベース(Sigma)を使用することを除くと、同一の実験工程を要する。第３のグループは、３０分ごとに内腔灌流液として０．５ｍｍｏｌＳＩＮ−１を含む乳酸加リンガー液を使用したこと以外、６時間未処理低温虚血グループと同一である。光感受性ＳＩＮ−１溶液をアルミホイルで覆い、温水浴中で３８℃ に保った。通常の統計的手法を用いて、独立ｔ−検査を行った。統計数値はすべて、平均 ±Ｓ．Ｄ．として、ｐ＜０．０５で検討した。１２０分の再灌流の間、内腔の⁵¹Ｃｒ−ＥＤＴＡクリアランス（ｍｌ／ｍｉｎ ×１００ｇ）に対する腸血液を測定した。血液から内腔へのクリアランスは、粘膜透過性の測定である。図９は、１２０分間の間の１５分ごとの⁵¹Ｃｒ−ＥＤＴＡクリアランス（ｍｌ／ｍｉｎ×１００ｇ）対時間（分）の棒グラフで、これは、コントロール、未処理、ＳｐＮＯ−処理及びＳＩＮ−１−処理を含む６時間の低温虚血テスト動物における⁵¹Ｃｒ−ＥＤＴＡクリアランスを示す。誤差バーは平均±Ｓ．Ｄ．を表す。図９は、スペルミンＮＯ及びＳＩＮ−１で処理した上記動物で粘膜透過性が減少したことを示す。スペルミンＮＯを用いると７５及び９０分で、ＳＩＮ−１については６０分と９０分で、⁵¹Ｃｒ−ＥＤＴＡにおける統計的に有為な減少が認められた。粘膜バリアー傷害に続き、水分吸収は虚血再灌流に伴い普通は減少する。図１０は、コントロール動物、未処理動物、ＳｐＮＯ処理動物、及びＳＩＮ−１処理動物についての水分吸収（ｍｌ／ｍｉｎ×１００ｇ）対時間（分）の棒グラフである。誤差バーは、平均±Ｓ．Ｄ．を示す。図１０は、未処理動物と対照的に、スペルミンＮＯで処理した動物は、１２０分の再灌流の間に水分吸収が有意に増加したことを示す。ＳＩＮ−１投与は、９０分と１２０分において、水分吸収を有意に増加させた。血管透過性の他の測定は、リンパ流とリンパ液蛋白質クリアランスである。図１１と１２は、各々、コントロール動物、未処理動物、ＳｐＮＯ処理動物、及びＳＩＮ−１処理動物についてのリンパ流とリンパ液蛋白質クリアランス（ｍｌ／ｍｉｎ×１００ｇ）対時間（分）の棒グラフである。誤差バーは、平均±Ｓ．Ｄ．を示す。ＳｐＮＯ処理動物で、リンパ流が増加したことが観察された。この増加したリンパ流は、増加したリンパ液蛋白質クリアランスを伴ったが、それは血管透過性の測定の１つである。毛細血管圧も測定した。図１３は、コントロール動物、未処理動物、ＳｐＮＯ処理動物、及びＳＩＮ−１処理動物についてのｍｍＨｇ対時間（分）の棒グラフである。誤差バーは、平均±Ｓ．Ｄ．を示す。ＳｐＮＯ処理動物で、増加したリンパ流とをリンパ液蛋白質クリアランスに平行する毛細血管圧における有意な上昇が観察された。ＳＩＮ−１処理動物については、毛細血管圧における有意な変化は観察されなかった。しかし総血管抵抗は、再灌流を通して、すべてのグループについてほぼ同等であった。ここに挙げた刊行物、特許、特許出願をはじめとする全ての参考文献は、各々個々の文書が言及によって組み込まれるために個々にそして具体的に述べられ、ここに完全に明らかにされたと同程度に、ここに言及することで組み入れられるものである。この発明は、好ましい実施例を強調して述べられてきたが、当業者には好ましい実施例が変更されうることは明白である。本発明は、ここで特別に記載された以外の方法でも実施されうる。従って本発明は、記載されているクレームの精神と範囲に包含されるすべての変法を含むものである。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年１１月１３日【補正内容】（式中、米国特許第5,039,705号に記載されているように、Ｒ₁及びＲ₂は独立して直鎖又は分岐状Ｃ₁−Ｃ₁₂アルキル基及びベンジル基よりなる群から選ばれ、ただしα炭素上で分岐は起こってない、あるいはＲ₁及びＲ₂が窒素原子と共に結合して、ヘテロ環状基、好ましくはピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノ又はモルホリノ基を形成し、Ｍ^+xは医薬上許容されるカチオンであり、ｘはカチオンの原子価である） K[(M)^x'_x(L)_y(R¹R²N-N₂O₂)_z] 式（ＶＩＩ）（式中、1992年３月27日出願の米国特許出願No.07/858,885に記載されているように、Ｍは医薬上許容される金属、又はｘが少なくとも２の場合、２つの異なった医薬上許容される金属の混合物であり、Ｌは(R¹R²N-N₂O₂)とは異なった配位子であり、少なくとも１つの金属に結合し、Ｒ₁及びＲ₂はそれぞれ有機部位であり、同一又は異なってもよく、（ただし、Ｍが銅の時、ｘは１、Ｌは金属でｙは１）、ｘは１から１０までの整数であり）、ｘ’は金属Ｍの形式的な酸化状態（fo rmal oxdation state）を示し、１から６までの整数であり、ｙは１から１８までの整数であり、ｙが少なくとも２の場合、配位子Ｌは同一又は異なってもよく、ｚは１から２０までの整数であり、Ｋは必要な程度まで化合物を中性にする医薬上許容されるカウンターイオンである）（式中、1992年９月22日出願の米国特許出願No．07/950,637に記載されているように、Ｒ₁及びＲ₂は独立して、Ｃ₁−Ｃ₁₂直鎖状アルキル、アルコキシ又はアシルオキシで置換されたＣ₁−Ｃ₁₂直鎖状アルキル、ヒドロキシ又はハロ置換されたＣ₂−Ｃ₁₂直鎖状アルキル、Ｃ₃−Ｃ₁₂分岐状アルキル、ヒドロキシ、ハロ、アルコキシ又はアシルオキシで置換されたＣ₃−Ｃ₁₂分岐状アルキル、Ｃ₃−Ｃ₁₂直鎖状オレフィン及びＣ₃−Ｃ₁₂分岐状オレフィン、これらは置換されていない請求の範囲１．（補正後）哺乳動物における虚血再灌流傷害に関係する、酸素フリーラジカル起因の組織損傷を治療するための、治療量の、生理条件下で酸化窒素を自発的に放出する酸化窒素含有化合物（該化合物の機能には、酸化還元反応又は電子伝達による酵素変換や活性化、或いは酸素を必要としない）の使用。２．（補正後）化合物が、式： [R₁N(R₂)N(NO)O]_yX 〔式中、Ｒ₁及びＲ₂は同一又は異なって、水素、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル、Ｃ₃−Ｃ₁₀ アリール、Ｃ₄−Ｃ₁₀窒素含有ヘテロ環状ラジカル、Ｃ₁−Ｃ₃アルキルで置換されたＣ₃−Ｃ₁₀アリール及びＣ₃−Ｃ₁₀シクロアルキルからなる群から選ばれ、ここでＲ基は一方又は両方共、１〜３個の置換基で置換されていてもよく、該置換基は同一又は異なっていてもよく、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ₁−Ｃ₈アルコキシ、アミノ、アミド、ホルミル、カルボキシ及びニトロからなる群から選ばれ、但し、Ｒ₁及びＲ₂は共に水素でなく、Ｘは薬理学上許容しうるカチオン、医薬上許容される金属中心、又はＣ₁−Ｃ₈アルキル、アシル及びアミドからなる群から選ばれる医薬上許容される有機基を示し、Ｙは１〜３を示し、Ｘの原子価と一致する〕で表される化合物である請求の範囲第１項記載の酸化窒素含有化合物の治療量の使用。３．（補正後）化合物が、式：〔式中、ｂ及びｄは独立して０又は１；ｘ、ｙ及びｚは独立して２〜１２：及びＲ₁〜Ｒ₅は独立して、水素、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₂直鎖又は分岐状アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニル又は２，２，２−トリクロロ−ｔ −ブトキシカロボニルを示す〕で表される化合物である請求の範囲第１項記載の酸化窒素含有化合物の治療量の使用。４．（補正後）化合物が、式：〔式中、Ｒ₆及びＲ₇は独立して、水素、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₂直鎖又は分岐状アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニル又は２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルを示し、Ｂはを示し、ｆは０〜１２を示し、但しＢが置換されたピペラジン部位であるとき、ｆは２〜１２を示す〕で表される化合物である請求の範囲第１項記載の酸化窒素含有化合物の治療量の使用。５．（補正後）化合物が、式：〔式中、Ｒ₈は水素、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₂直鎖又は分岐状アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ −トルイル、ｔ−ブトキシカルボニル又は２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニル；Ｒ₉は水素又はＣ₁−Ｃ₁₂直鎖又は分岐状アルキル；及びｇは２〜６を示す〕で表される化合物である請求の範囲第１項記載の酸化窒素含有化合物の治療量の使用。６．（補正後）化合物が、式Ｏ＝Ｎ−Ｓ−Ｒ（式中、ＲはＣ₁−Ｃ₈アルキル、Ｃ₃ −Ｃ₁₀アリール、Ｃ₄−Ｃ₁₀窒素含有ヘテロ環状ラジカル、Ｃ₁−Ｃ₃アルキルで置換されたＣ₃−Ｃ₁₀アリール及びＣ₃−Ｃ₁₀シクロアルキルからなる群から選ばれ、ここでＲ基は１〜３個の置換基で置換されていてもよく、該置換基は同一又は異なっていてもよく、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ₁−Ｃ₈アルコキシ、アミノ、アミド、ホルミル、カルボキシ及びニトロからなる群から選ばれる）で表される化合物である請求の範囲第１項記載の酸化窒素含有化合物の治療量の使用。７．（補正後）化合物が、ペプチド又は蛋白質のＳ−ニトロソ付加物である請求の範囲第１項記載の酸化窒素含有化合物の治療量の使用。８．（補正後）Ｓ−ニトロソ付加物がＳ−ニトロソ−Ｎ−アセチル−ペニシラミンである請求の範囲第７項記載の酸化窒素含有化合物の治療量の使用。９．（補正後）化合物が、式：〔式中、Ｊは有機又は無機部位を、Ｍ^+xは医薬上許容されるカチオン（ｘはカチオンの原子価を示す）を、ａは１又は２を、ｂ及びｃは中性化合物をもたらす最小整数を示す〕で表される化合物である請求の範囲第１項記載の酸化窒素含有化合物の治療量の使用。１０．（補正後）化合物が、式：〔式中、Ｒ₁及びＲ₂は独立して、直鎖又は分岐状Ｃ₁−Ｃ₁₂アルキル基及びベンジル基からなる群から選ばれるか、又はＲ₁及びＲ₂が窒素原子と共に結合して複素環基を形成し、Ｍ^+xは医薬上許容されるカチオン、ｘは該カチオンの原子価を示す〕で表される化合物である請求の範囲第１項記載の酸化窒素含有化合物の治療量の使用。１１．（補正後）化合物が、式： K[(M)^x'_x(L)_y(R¹R²N-N₂O₂)_z] 〔式中、Ｍは医薬上許容される金属、又はｘが少なくとも２である場合は２つの異なる医薬上許容される金属の混合物を示し、ＬはＣ₁−Ｃ₂₀アルコキシ、Ｃ₁− Ｃ₂₀カルボキシレート、Ｃ₁−Ｃ₂₀アルコールアミン、Ｃ₁−Ｃ₂₀アルキルアミン、Ｃ₁−Ｃ₂₀エーテル、Ｃ₁−Ｃ₂₀エステル、Ｃ₁−Ｃ₂₀アミド、硫黄もしくはリン含有配位子、置換された上記誘導体、ハロゲン化物、アンモニア、アコ、ヒドロキシ及びオキソ配位子からなる群から選ばれる、少なくとも１つの金属に結合する配位子を示し、Ｒ¹及びＲ²は同一又は異なっていてもよく、低級アルキル、アリール及びアリールアルキルからなる群から選ばれ、ｘは１〜１０の整数を示し、ｘ’は金属Ｍの形式的な酸化状態を示し、１〜６の整数を示し、ｙは１〜１８の整数を示し、ｙが少なくとも２である場合は配位子Ｌは同一又は異なっていてもよく、ｚは１〜２０の整数を示し、Ｋは化合物を中性にする医薬上許容されるカウンターイオンを示す〕で表される化合物である請求の範囲第１項記載の酸化窒素含有化合物の治療量の使用。１２．（補正後）化合物が、式：〔式中、Ｒ₁及びＲ₂は独立して、Ｃ₁−Ｃ₁₂直鎖状アルキル、アルコキシ又はアシルオキシで置換されたＣ₁−Ｃ₁₂直鎖状アルキル、ヒドロキシ又はハロゲンで置換されたＣ₂−Ｃ₁₂直鎖状アルキル、Ｃ₃−Ｃ₁₂分岐状アルキル、ヒドロキシ、ハロゲン、アルコキシ又はアシルオキシで置換されたＣ₃−Ｃ₁₂分岐状アルキル、非置換或いはヒドロキシ、アルコキシ、アシルオキシ、ハロゲン又はベンジルで置換されたＣ₃−Ｃ₁₂直鎖状オレフィン及びＣ₃−Ｃ₁₂分岐状オレフィンから選ばれるか、又はＲ₁及びＲ₂が窒素原子と共に結合して複素環基を形成すし、Ｒ₃ は非置換或いはヒドロキシ、ハロ、アシルオキシ又はアルコキシで置換されたＣ₁ −Ｃ₁₂直鎖状及びＣ₃−Ｃ₁₂分岐状アルキル、非置換或いはハロゲン、アルコキシ、アシルオキシ又はヒドロキシで置換されたＣ₂−Ｃ₁₂直鎖状又はＣ₂−Ｃ₁₂分岐状オレフィン、非置換又は置換Ｃ₁−Ｃ₁₂アシル、スルホニル及びカルボキサミドから選ばれる基を示すか、Ｒ₃は式-(CH₂)_n-ON=N(O)NR₁R₂（式中、ｎは２〜８の整数を示し、Ｒ₁及びＲ₂は前記と同義である）で表される基であり、但し、Ｒ₁、Ｒ₂及びＲ₃は複素原子にハロゲン又はヒドロキシ置換基αを有さない〕で表される化合物である請求の範囲第１項記載の酸化窒素含有化合物の治療量の使用。１３．（補正後）化合物がポリマーに結合している請求の範囲第１項記載の酸化窒素含有化合物の治療量の使用。１４．（補正後）虚血再灌流傷害が、移植、外傷、炎症、卒中、発作、リウマチ様関節炎、アテローム性動脈硬化症、癌、痴呆、糖尿病、高血圧発症、潰瘍、狼瘡、鎌状赤血球貧血、虚血性腸疾患、肺塞栓症、ボール症候群、膵炎、心臓発作及び老化からなる群から選ばれる状態又は疾患に関係する請求の範囲第１項記載の酸化窒素含有化合物の治療量の使用。１５．（補正後）化合物が、静脈注射及び局所注射からなる群から選ばれる注射方法によって投与される請求の範囲第１項記載の酸化窒素含有化合物の治療量の使用。１６．（補正後）哺乳動物における虚血再灌流傷害の発症に関係する、酸素フリーラジカル起因の組織損傷を予防するための、予防量の、生理的条件下で酸化窒素を自発的に放出する酸化窒素含有化合物（該化合物の機能には、酸化還元反応又は電子伝達による酵素変換や活性化、或いは酸素を必要としない）の使用。１７．（補正後）虚血再灌流傷害が、移植、外傷、炎症、卒中、発作、リウマチ様関節炎、アテローム性動脈硬化症、癌、痴呆、糖尿病、高血圧発症、潰瘍、狼瘡、鎌状赤血球貧血、虚血性腸疾患、肺塞栓症、ボール症候群、膵炎、心臓発作及び老化からなる群から選ばれる状態又は疾患に関係する請求の範囲第１６項記載の酸化窒素含有化合物の予防量の使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 31/195 ＡＢＮ 9455−4ＣＡ６１Ｋ 31/195 ＡＢＮ 31/215 ＡＢＸ 9455−4Ｃ 31/215 ＡＢＸ 31/44 ＡＢＣ 9454−4Ｃ 31/44 ＡＢＣＡＢＹ 9454−4ＣＡＢＹＡＣＤ 9454−4ＣＡＣＤＡＣＪ 9454−4ＣＡＣＪＡＧＺ 9454−4ＣＡＧＺ 31/445 ＡＢＵ 9454−4Ｃ 31/445 ＡＢＵ 31/495 ＡＤＰ 9454−4Ｃ 31/495 ＡＤＰ 38/00 ＡＣＬ 8615−4Ｃ 45/00 ＡＡＭ 45/00 ＡＡＭ 9451−4ＨＣ０７Ｃ 283/02 Ｃ０７Ｃ 283/02 9164−4ＣＣ０７Ｄ 213/42 Ｃ０７Ｄ 213/42 9284−4Ｃ 211/98 // Ｃ０７Ｄ 211/98 9051−4Ｃ 271/06 271/06 9283−4Ｃ 295/22 Ａ 295/22 9051−4ＣＡ６１Ｋ 37/02 ＡＣＬ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ウィンク、デイヴィッドエイ．、ジュニアアメリカ合衆国、メリーランド州 21742、ヘイガースタウン、ウェストマグノリア、116 (72)発明者ミッチェル、ジェイムズビー. アメリカ合衆国、メリーランド州 20872、ダマスカス、スウィープステイクスロード、10516 (72)発明者ラッソー、アンジェロアメリカ合衆国、メリーランド州 20817、ベセスダ、ノースフィールドロード、 5501 (72)発明者クリシュナ、マラリスィー. アメリカ合衆国、メリーランド州 20855、ダーウッド、インディアンヒルズテラス、15941 (72)発明者ハンバウアー、インゲボルグアメリカ合衆国、メリーランド州 20815、チェヴィチェース、ブルックサイドドライヴ、6001 (72)発明者グリシャム、マシュービー. アメリカ合衆国、ルイジアナ州 71105 シュレヴポート、タンパウェイ、7628 (72)発明者グランジャー、ダニエルニールアメリカ合衆国、ルイジアナ州 71118、シュレヴポート、チェイスウェルズ、 2108

Claims

【特許請求の範囲】１．酸素の存在下又は非存在下、生理条件下で酸化窒素を自発的に放出する酸化窒素含有化合物を、虚血再灌流傷害を有する哺乳動物に、酸素フリーラジカル起因の組織損傷から保護するのに十分な治療量を投与することからなる、哺乳動物における虚血再灌流傷害と関係がある酸素フリーラジカル起因の組織損傷を治療する方法。２．化合物が、式： [R₁N(R₂)N(NO)O]_yX 〔式中、Ｒ₁及びＲ₂は同一又は異なって、水素、Ｃ₁−Ｃ₈アルキル、Ｃ₃−Ｃ₁₀ アリール、Ｃ₄−Ｃ₁₀窒素含有ヘテロ環状ラジカル、Ｃ₁−Ｃ₃アルキルで置換されたＣ₃−Ｃ₁₀アリール及びＣ₃−Ｃ₁₀シクロアルキルからなる群から選ばれ、ここでＲ基は一方又は両方共１〜３個の置換基で置換されていてもよく、該置換基は同一又は異なっていてもよく、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ₁−Ｃ₈アルコキシ、アミノ、アミド、ホルミル、カルボキシ及びニトロからなる群から選ばれ、但し、Ｒ₁ 及びＲ₂は共に水素でなく、Ｘは医薬上許容されるカチオン、医薬上許容される金属中心、又はＣ₁−Ｃ₈アルキル、アシル及びアミドからなる群から選ばれる医薬上許容される有機基を示し、Ｙは１〜３を示し、Ｘの原子価と一致する〕で表される化合物である請求の範囲第１項記載の方法。３．化合物が、式：〔式中、ｂ及びｄは独立して０又は１；ｘ、ｙ及びｚは独立して２〜１２；及びＲ₁〜Ｒ₅は独立して、水素、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₂直鎖又は分岐状アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニル又は２，２，２−トリクロロ−ｔ −ブトキシカルボニルを示す〕で表される化合物である請求の範囲第１項記載の方法。４．化合物が、式：〔式中、Ｒ₆及びＲ₇は独立して、水素、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₂直鎖又は分岐状アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルイル、ｔ−ブトキシカルボニル又は２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルを示し、Ｂはを示し、ｆは０〜１２を示し、但しＢが置換されたピペラジン部位であるとき、ｆは２〜１２を示す〕で表される化合物である請求の範囲第１項記載の方法。５．化合物が、式：〔式中、Ｒ₈は水素、Ｃ₃−Ｃ₈シクロアルキル、Ｃ₁−Ｃ₁₂直鎖又は分岐状アルキル、ベンジル、ベンゾイル、フタロイル、アセチル、トリフルオロアセチル、ｐ −トルイル、ｔ−ブトキシカルボニル又は２，２，２−トリクロロ−ｔ−ブトキシカルボニルを；Ｒ₉は水素又はＣ₁−Ｃ₁₂直鎖又は分岐状アルキルを；及びｇは２〜６を示す〕で表される化合物である請求の範囲第１項記載の方法。６．化合物が、式Ｏ＝Ｎ−Ｓ−Ｒ（式中、ＲはＣ₁−Ｃ₈アルキル、Ｃ₃−Ｃ₁₀アリール、Ｃ₄−Ｃ₁₀窒素含有ヘテロ環状ラジカル、Ｃ₁−Ｃ₃アルキルで置換されたＣ₃−Ｃ₁₀アリール、及びＣ₃−Ｃ₁₀シクロアルキルからなる群から選ばれ、ここでＲ基は、１〜３個の置換基で置換されていてもよく、該置換基は同一又は異なっていてもよく、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ₁−Ｃ₈アルコキシ、アミノ、アミド、ホルミル、カルボキシ及びニトロからなる群から選ばれる）で表される化合物である請求の範囲第１項記載の方法。７．化合物が、ペプチド又は蛋白質のＳ−ニトロソ付加物である請求の範囲第１項記載の方法。８．Ｓ−ニトロソ付加物がＳ−ニトロソ−Ｎ−アセチル−ペニシラミンである請求の範囲第７項記載の方法。９．化合物が、式：〔式中、Ｊは有機又は無機部位を、Ｍ^+xは医薬上許容されるカチオン（ここで、ｘは陽イオンの原子価を示す）を、ａは１又は２を、ｂ及びｃは中性化合物をもたらす最小整数を示す〕で表される化合物である請求の範囲第１項記載の方法。１０．化合物が、式：〔式中、Ｒ₁及びＲ₂は独立して、直鎖又は分岐状Ｃ₁−Ｃ₁₂アルキル基及びベンジル基からなる群から選ばれるか、又はＲ₁及びＲ₂が窒素原子と共に結合して複素環基を形成し、Ｍ^+xは医薬上許容されるカチオンを、ｘは該カチオンの原子価を示す〕で表される化合物である請求の範囲第１項記載の方法。１１．化合物が、式： K[(M)^x'_x(L)_y(R¹R²N-N₂O₂)_z] 〔式中、Ｍは医薬上許容される金属、又はｘが少なくとも２である場合は２つの異なる医薬上許容される金属の混合物を示し、Ｌは(R¹R²N-N₂O₂)と異なる配位子を示し、少なくとも１つの金属に結合し、Ｒ¹及びＲ²は各々有機部位を示し、同一又は異なっていてもよく、ｘは１〜１０の整数を示し、ｘ’は金属Ｍの形式的な酸化状態を示し、１〜６の整数を示し、ｙは１〜１８の整数を示し、ｙが少なくとも２である場合は配位子Ｌは同一又は異なっていてもよく、ｚは１〜２０の整数を示し、Ｋは必要な程度に化合物を中性にする医薬上許容されるカウンターイオンを示す〕で表される化合物である請求の範囲第１項記載の方法。１２．化合物が、式：〔式中、Ｒ₁及びＲ₂は独立して、Ｃ₁−Ｃ₁₂直鎖状アルキル、アルコキシ又はアシルオキシで置換されたＣ₁−Ｃ₁₂直鎖状アルキル、ヒドロキシ又はハロゲンで置換されたＣ₂−Ｃ₁₂直鎖状アルキル、Ｃ₃−Ｃ₁₂分岐状アルキル、ヒドロキシ、ハロ、アルコキシ又はアシルオキシで置換されたＣ₃−Ｃ₁₂分岐状アルキル、非置換或いはヒドロキシ、アルコキシ、アシルオキシ、ハロゲン又はベンジルで置換されたＣ₃−Ｃ₁₂直鎖状オレフィン及びＣ₃−Ｃ₁₂分岐状オレフィンから選ばれるか、又はＲ₁及びＲ₂が窒素原子と共に結合して複素環基を形成するか、Ｒ₃は非置換或いはヒドロキシ、ハロ、アシルオキシ又はアルコキシで置換されたＣ₁ −Ｃ₁₂直鎖及びＣ₃−Ｃ₁₂分岐状アルキル、非置換或いはハロゲン、アルコキシ、アシルオキシ又はヒドロキシで置換されたＣ₂−Ｃ₁₂鎖状又はＣ₂−Ｃ₁₂分岐状オレフィン、非置換又は置換Ｃ₁−Ｃ₁₂アシル、スルホニル及びカルボキサミドから選ばれる基を示すか、式-(CH₂)_n-ON=N(O)NR₁R₂（式中、ｎは２〜８の整数を示し、Ｒ₁及びＲ₂は前記と同義である）で表される基であり、但し、Ｒ₁、Ｒ₂及びＲ₃は複素原子にハロゲン又はヒドロキシ置換基αを有しない〕で表される化合物である請求の範囲第１項記載の方法。１３．化合物がポリマーに結合している請求の範囲第１項記載の方法。１４．虚血再灌流傷害が、移植、外傷、炎症、卒中、発作、リウマチ様関節炎、アテローム性動脈硬化症、癌、痴呆、糖尿病、高血圧発症、潰瘍、狼瘡、鎌状赤血球貧血、虚血性腸疾患、肺塞栓症、ボール症候群、膵炎、心臓発作及び老化からなる群から選ばれる状態又は疾患に関係する請求の範囲第１項記載の方法。１５．化合物が、静脈注射及び局所注射からなる群から選ばれる注射方法によって投与される請求の範囲第１項記載の方法。１６．すぐに虚血再灌流傷害になる危険性のある哺乳動物に、酸素の存在下又は非存在下、生理条件下で酸化窒素を自発的に放出する酸化窒素含有化合物を、酸素フリーラジカル起因の組織損傷を防ぐのに十分な予防量を投与することからなる、哺乳動物における虚血再灌流傷害の発症に関係する酸素フリーラジカル起因の組織損傷の予防方法。１７．虚血再灌流傷害が、移植、外傷、炎症、卒中、発作、リウマチ様関節炎、アテローム性動脈硬化症、癌、痴呆、糖尿病、高血圧発症、潰瘍、狼瘡、鎌状赤血球貧血、虚血性腸疾患、肺塞栓症、ボール症候群、膵炎、心臓発作及び老化からなる群から選ばれる状態又は疾患に関係する請求の範囲第１６項記載の方法。