JPH08502048A

JPH08502048A - 後生動物寄生体プロテアーゼ阻害剤

Info

Publication number: JPH08502048A
Application number: JP6508279A
Authority: JP
Inventors: アーレンクランツコーエン、フレッド; ホブソンマッケロウ、ジェイムス; サンヤングリン、クリスティーン; ジョンローセンタール、フィリップ; ロメルケンヨン、ジョージ; リー、ツェ
Original assignee: THE REGENTS OF THE UNIVERSITY OF CARIFORNIA
Current assignee: THE REGENTS OF THE UNIVERSITY OF CARIFORNIA
Priority date: 1992-09-11
Filing date: 1993-09-13
Publication date: 1996-03-05
Also published as: ATE229331T1; ES2183817T3; AU4923093A; EP0752813B1; DE69332567D1; DK0752813T3; PT752813E; WO1994006280A1; US5610192A; OA10132A; EP0752813A4; DE69332567T2; EP0752813A1

Abstract

(57)【要約】後生動物寄生体プロテアーゼの酵素作用を阻害することにより、後生動物寄生体に感染した患者を処置する組成物および方法。これらの組成物および方法は、住血吸虫症、マラリアおよび他の感染性疾患の処置に特に有用性を有する。組成物は、後生動物寄生体プロテアーゼのＳ２サブサイトとＳ１およびＳ１′サブサイトの少なくとも１つとに結合する特定の構造要素を含む少なくとも１つの後生動物プロテアーゼ阻害剤を含む。本発明のプロテアーゼ阻害剤は、一般に少なくとも２つのホモ芳香族またはヘテロ芳香族環系を含み、それぞれは１〜３の環を含み、適切なリンカーによって互いに連結されている。後生動物寄生体に感染した患者の処置は、後生動物寄生体のプロテアーゼを阻害しこれにより寄生体を殺すのに有効な量で、少なくとも１つの後生動物プロテアーゼ阻害剤を含む組成物を投与することを伴う。

Description

【発明の詳細な説明】後生動物寄生体プロテアーゼ阻害剤発明の背景この発明は、一般にある種の感染性疾患の処置に有用な組成物および方法に関する。更に詳しくは、この発明は、マラリアのシステインプロテアーゼのようなプロテアーゼを阻害する組成物に関する。これらのプロテアーゼを阻害する化合物は、マラリア、住血吸虫症および他の感染性疾患の予防および処置に有用である。この発明は、ＤＡＲＰＡ（国防総省）により与えられた約定番号ＭＤＡ９７２ −９１−Ｊ−１０１３、および熱帯病についての研究および研修（ＴＤＲ）のためのＵＮＤＰ／世界銀行／ＷＨＯ特別プログラムにより与えられた授与番号８９０４９９の下で、政府支援によってなされたものである。政府は、この発明において所定の権利を有する。プロテアーゼは、蛋白質の代謝回転、血液凝固、補体活性化、ホルモン過程およびガン細胞の侵入を含む多くの重要な生物学的過程に関与している。このため、これらはしばしば、薬剤の設計および発見のための標的として選択される。ある種のプロテアーゼは寄生生物の生活環において非常に重要な役割を果たすことから、これらはある種の感染性疾患についての魅力的な薬剤設計の標的となっている。住血吸虫症（ビルハルツ住血吸虫症）は、一般にヒト宿主の消化管および肝臓の静脈内で生活する住血吸虫（schistosomes,blood flukes）によって引起こされる寄生性疾患である。成体の寄生虫は２０年に至るまで生存することができる。メスの成体寄生虫は毎日数千の卵を放出し、これらはしばしば肝臓、脳および肺のような組織を移動経路とし、そこでこれらは、その周囲に体が疑似的に炎症や瘢痕組織を形成することにより、相当な障害を引起こす。卵の大半が膀胱または消化管の壁を通過する。一旦外に出ると、これらは孵化して水生の巻貝に感染する。寄生体は巻貝の内部で増殖し、数千の有尾幼虫が発生し、これらは巻貝を出て自由に泳ぎ回り、その生活環を完結させる宿主を探す。マラリアは、プラスモディウム（Plasmodium）属の原生動物によって引起こされる他の周知の感染性疾患であり、感染した蚊に噛まれることによって伝染される。最も悪性のヒトマラリア病原体である熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium fal ciparum）による感染が原因で、毎年１００万人が死亡すると見積られている。従来開発された種類の抗マラリア薬剤の中で最も価値のあるものは、クロロキンおよびメフロキンのようなキノリン含有化合物であり、クロロキンは、予防および治癒の両者に特に有効であった。マラリアの処置および制御における深刻な問題は、これらの公知の抗マラリア薬剤に対する熱帯熱マラリア原虫の集団の抵抗力が増加を続けていることである。更に、多剤耐性に関する報告によれば、新規な治療法を検索することは特に急務である。よって、抗マラリア性の能力を有する新しい化合物を同定する大きな必要性が依然として存在している。栄養型（トロフォゾイト）の段階で、寄生体は赤血球細胞（erythrocytes）に感染し、そこで無性的に繁殖する。それぞれの無性サイクルの完結時点で、赤血球細胞が溶解し、分裂小体（メロゾイト）が放出され、これが新たな赤血球細胞に侵入する。溶解と再感染のこのサイクルが、マラリアの主要な臨床顕在症候の原因である。大半の抗マラリア剤は血液の殺シゾント剤であり、これらは生活環の赤血球細胞内の段階の間にある寄生体に対して活性を有する。スルホンおよびスルホンアミドがジヒドロ葉酸の合成を阻害する一方で、ビグアニドおよびジアミノピリミジンはテトラヒドロ葉酸の合成を阻害する。これらの抗マラリア剤の機構は、核酸を合成する寄生体の能力を妨害することを伴うことが知られているが［Bruce- Chwatt，L．J.，Essential Malariology（Wiley、ニューヨーク（1985））］、キノリン含有化合物の作用の機構は、なお今日まで驚く程つかまえどころのないものである。最近の研究により、キノリン誘導体は、ヘムポリメラーゼの解毒活性を妨害することにより作用することの強い証拠が提供されている［SlaterとCe rami，Nature 355，167（1992）］。赤血球の相にある間に、寄生体はアミノ酸の主たる供給源としてのヘモグロビンを分解する。Rosenthalと共同研究者は、寄生体のアミノ酸の主要な供給源であるヘモグロビンの分解に関与する非常に重要なシステインプロテアーゼを同定した［Rosenthal，P．J.ら、J．Clin．Invest．82，1560（1988）］。培養の際にシステインプロテアーゼ阻害剤（例えば、Ｅ−６４およびＺ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ −ＦＭＫ）を用いてこの酵素をブロックすることにより、寄生体の更なる生育および発育が抑えられる［Rosenthal，P．J.ら、Mol．Biochem．Parasitol．35，1 77（1989）］。ヒト（そして恐らく大半の他の哺乳動物）は類似するヘモグロビナーゼを有していないため、このプロテアーゼを阻害することにより（単独でまたは確立された療法と組合せて）、マラリアの処置のための魅力的な戦略が提供される。更に、他の後生動物寄生体に存在する類似するプロテアーゼを阻害することにより、このような寄生体に感染したヒトおよび動物患者の処置のための潜在的に価値のある技術が同様に提供されよう。本発明の目的は、マラリアの処置のための組成物および方法を提供することである。本発明の更なる目的は、後生動物寄生体によって引起こされる他の感染性疾患の処置に有用な組成物および方法を提供することである。発明の要旨本発明によれば、後生動物寄生体の酵素作用を阻害することにより、後生動物寄生体に感染した患者を処置するための組成物および方法が提供される。これらの組成物および方法は、住血吸虫症、マラリアおよび他の感染性疾患の処置において特に有用性を有する。組成物は、後生動物寄生体プロテアーゼのＳ２サブサイトとＳ１およびＳ１′サブサイトの少なくとも１つとに結合する特定の構造要素を含む少なくとも１つの後生動物プロテアーゼ阻害剤（後記特定する）を含む。本発明のプロテアーゼ阻害剤は、一般に少なくとも２つのホモ芳香族またはヘテロ芳香族環系を含み、それぞれは適切なリンカーによって互いに連結された１〜３の環を含む。本発明の組成物は、例えば栄養型のシステインプロテアーゼの作用を阻害するのに有用であり、これによりヒトのマラリアを引起こす病原体のための主たるアミノ酸の供給源であるヘモグロビンの分解を防止する。本発明の方法は、後生動物寄生体のプロテアーゼを阻害するのに有効な量で後生動物プロテアーゼ阻害剤の少なくとも１つを、後生動物寄生体に感染した患者に投与し、これにより寄生体を殺すことを含む。図面の簡単な説明この発明は、添付図面を参照して更に理解することができる。ここで、図１は、マラリアのシステインプロテアーゼに対するシュウ酸ビス［（２−ヒドロキシル−１−ナフチルメチレン）−ヒドラジド］についてのＩＣ₅₀曲線であり、図２は、シュウ酸ビス［（２−ヒドロキシル−１−ナフチルメチレン）−ヒドラジド］による³Ｈヒポキサンチンの寄生体の取込みの阻害を示すものであり、図３は、栄養型のシステインプロテアーゼの活性部位に格納されたシュウ酸ビス［（２−ヒドロキシ−１−ナフチルメチレン）−ヒドラジド］の概略図であり、図４は、シュウ酸ビス［（２−ヒドロキシル−１−ナフチルメチレン）−ヒドラジド］による、赤血球細胞に侵入する寄生体の能力の阻害を示すものである。発明の詳細な説明本発明に従い、後生動物プロテアーゼ阻害剤（後記特定する）の少なくとも１つの有効量を含む、後生動物寄生体プロテアーゼの酵素作用を阻害する組成物および方法が提供される。これらの組成物は、住血吸虫症、マラリアおよび他の感染性疾患の予防および処置に有用性を有する。マラリアの場合、この発明の組成物は、栄養型のシステインプロテアーゼを阻害する。住血吸虫症においては、この発明の組成物によって阻害される酵素は、成体のシステンプロテアーゼ（または「ヘモグロビナーゼ」）である。本発明の阻害剤は、後生動物寄生体、Plasmodium falciparum（熱帯熱マラリア原虫、マラリアを引起こす）、Schistosoma mansoni（マンソン住血吸虫、住血吸虫症を引起こす）、およびTrypanosoma cruzi（クルーズ・トリパノゾーマ、シャガス病を引起こす）に対して特に有用性を有する。更に、本発明による組成物によって、以下の後生動物寄生体に特異的なプロテアーゼを阻害することもできる：Giardia lamblia（ランブル鞭毛虫）、Entoemeba histolytica、Cryp tospiridium spp.、Leishmania spp.、Brugia spp.、Wuchereria spp.、Onchoce rca spp.、Strongyloides spp.、Coccidia、Haemanchus spp.、Ostertagia spp. 、Trichomonas spp.、Dirofilaria spp.、Toxocara spp.、Naegleria spp.、Pne umocystis carinii、Ascaris spp.、他のTrypanosoma spp.、他のSchistosome s pp.、他のPlasmodium spp.、Babesia spp.、Theileria spp.、Anisakis、および Isospora beli 。モデルの後生動物プロテアーゼであるマラリアのシステインプロテアーゼについての構造は、Sutcliffeと共同研究者の手法［Sutcliffe，M．J.ら、Protein E ngineering 1，377（1987）、Sutcliffe，M．J.ら、Protein Engineering 1，38 5（1987）］に従う類似性モデル化の基礎として、パパインおよびアクチニジンの配列情報およびＸ線構造を使用して開発した。プロテアーゼのモデル構造は、潜在的なリガンドの検索の際の標的受容体として使用した。ＤＯＣＫ３．０は、与えられた受容体の可能なリガンドについて、小さい分子のデータベースを検索するための自動的な方法である［Meng，E．C．ら、J．Comp．Chem．13，505（19 92）］。ＤＯＣＫ３．０を使用して、約５６．０００の市販の小さい分子のファイン・ケミカルズ・ディレクトリ（Fine Chemicals Directory）を検索した。最良の形状相補性のスコアを有する２２００分子、および最良の力場スコア（見積られた相互作用エネルギー）を有する２２００分子を蓄えた。この結果得られた４４００の化合物を、分子ディスプレイソフトウェア、ミダス・プラス（Midas Plus）［Ferrin，Tら、J．Mol．Graphics 6，13（1988）］を使用して、活性部位に関して視覚的に検索した。これらのリストから多様な群の化合物を選択する努力を行った。マラリアのシステインプロテアーゼに対する最初の試験のために、３１の化合物を最終的に選択し、これらの化合物から、酵素系に対する実験的試験によって多数の潜在的な阻害剤を同定した。これは、酵素の三次元構造のモデルに対する非ペプチド分子の、コンピュータを使用した結合を用いた最初の成功した試みとなった。潜在的に有用な阻害剤として最初に考慮した化合物の内、シュウ酸ビス−［（２−ヒドロキシル−１−ナフチルメチレン）−ヒドラジド］およびＮ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシ−１−ナフチルメチレン）ヒドラゾンを、プロテアーゼの最良の阻害剤として同定した。基質Ｚ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＭＣに対する酵素阻害についてのＮ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシ−１−ナフチルメチレン）ヒドラゾンのＩＣ₅₀は５μＭだった。同じ検定におけるシュウ酸ビス−［（２−ヒドロキシ− １−ナフチルメチレン）−ヒドラジド］のＩＣ₅₀は６μＭだったが（図１）、更に重要なことには、この化合物は、Plasmodiumの生存性の標準的な尺度であるヒポキサンチンの取込み（図２）により判断したのと略同一の濃度で、培養した寄生体を殺す。更なる構造／活性の研究のための基礎としてシュウ酸ビス−［（２ −ヒドロキシ−１−ナフチルメチレン）−ヒドラジド］を選択し、化合物１４３Ａと命名した。パパイン様のシステインプロテアーゼは、７アミノ酸までを収容し得る活性部位を内蔵することが既に示されている［BergerとSchechter、Phil．Trans．RoyS oc．Ser．B 257，249（1970）］。文献の命名法では、活性部位は、触媒部位Ｓ１から開始してＳｎへとアミノ末端に向けて、またＳ１′からＳｎ′へとカルボキシル末端に向けて連続的に番号付けされている。Ｓ２、Ｓ１およびＳ１′サブサイトは、結合のために最も重要であると考えられている。シュウ酸ビス−［（２−ヒドロキシル−１−ナフチルメチレン）−ヒドラジド］は剛性で対称的な分子であるため、この化合物を活性部位に配向させるのに本質的に２つの方法がある。両者の場合において、この化合物は、一方のナフトール基がＳ２特異性ポケットに嵌まり、他方がＳ１′ポケットのトリプトファン１７７のインドール環に積重ねられて、マラリアのシステインプロテアーゼの活性部位の割れ目に対して定置する。推定される結合モードを図３に示す。この配向は、化合物の酵素との相互作用を最大にするものとして説明のために選択したものであり、それぞれのヒドロキシル基は、酵素の適切な残基（それぞれＳｅｒ１６０およびＧ１ｎ１９）に対して水素結合の距離以内にある。代替的に、水平軸線を介して化合物を１８０°回転させることができるが、ヒドロキシル基は酵素と相互作用せず、これらは恐らく溶剤の水分子と相互作用する。ＤＯＣＫ３．０によって与えられたシュウ酸ビス−［（２−ヒドロキシル−１ −ナフチルメチレン）−ヒドラジド］の元のリガンド座標を、準経験的な分子力場の制約に従うリガンド結合長さ、結合角度または捩れ角度の内部変化を伴うことなく、リガンドの回転および移行によって最適化し、この分子について剛性の本体を最小化した複合体を得た。シュウ酸ビス−［（２−ヒドロキシル−１−ナフチルメチレン）−ヒドラジド］の剛性を本体の最小化した複合体から出発し、次にプロテアーゼモデルの標的サブサイトに対する結合に有効であると決定された芳香族環系における大きさ、組成および置換基のパターンを変化させることにより、Ｓ２およびＳ１′サブサイトの容量限界を探索した。同時に、リンカーの長さを変化させ、環系の間の最適の間隔を見出した。この様式で、Ｓ２およびＳ１′サブサイトに結合するプロテアーゼ阻害剤について、最適の環系およびスペーサーの長さを本発明により決定した。加えて、Ｓ２およびＳ１′サブサイトへの結合には有用であるが、これらのサブサイトを架橋するのに適切であろうものより短いリンカーによって連結された阻害剤に特徴的な芳香族環系を含む化合物も、後生動物寄生体プロテアーゼを阻害するのに有効であることを本発明により更に決定した。これらのより短い化合物を用いるモデル化の検討により、シュウ酸ビス−［（２−ヒドロキシル−１− ナフチルメチレン）−ヒドラジド］に基く阻害剤の場合と同様に、芳香族環系の１つがＳ２サブサイトに結合することが示される。ただし、Ｓ１′サブサイトと相互作用する代りに、より短い化合物の第２の芳香族環系は、Ｓ１サブサイトに結合する。これらのより短い化合物は、対応するアルデヒドとヒドラジンとの１工程の縮合で合成できることから特に興味深い。更に、より短い阻害剤に第３の芳香族環系を導入することによって、酵素の標的部位の３つのポケットの全て（Ｓ１、Ｓ１およびＳ１′サブサイト）に嵌まる化合物を構築することが可能である。このような構造／活性の検討に基いて、次の一般構造を有する広範な種類の後生動物寄生体プロテアーゼ阻害剤を、本発明による特定の有用性のものとして同定した：Ａ−Ｘ−Ｂ式中、Ａは、Ｓ２サブサイトに結合する１〜３の環を含む置換または未置換のホモ芳香族またはヘテロ芳香族環系であり、Ｂは、Ｓ１またはＳ１′サブサイトに結合する１〜３の環を含む置換または未置換のホモ芳香族またはヘテロ芳香族環系であり、Ｘは、実質的に平面的で線状の配列を含み、長さにして４〜８の原子の骨格を有するリンカーである。本発明による第１の好適な種類の阻害剤では、ＢはＳ１′サブサイトに結合し、Ｘは長さにして６〜８原子の骨格を有するリンカーである。本発明による第２の好適な種類の阻害剤ては、ＢはＳ１サブサイトに結合し、Ｘは長さにして約４原子の骨格を有するリンカーである。この第２の好適な種類の好適なサブクラスでは、Ｂは−Ｂ′−Ｘ′−Ｂ′′の構造を有し、式中Ｂ′はＳ１サブサイトに結合する芳香族環系であり、Ｂ′′はＳ１′サブサイトに結合する芳香族環系であり、Ｘ′は直接結合または長さにして１〜３の原子の骨格を有するリンカーである。環系Ａは、好ましくは後生動物寄生体プロテアーゼのＳ２サブサイトに親和力を有する一環または二環のホモ芳香族（例えばフェニル、１−ナフチル、２− ナフチル等）またはヘテロ芳香族基である。環系Ａは未置換とすることができるが、好ましくは環系Ａは、側鎖と疎水性の特徴部分との間、側鎖およびポリペプチド骨格要素と水素結合のための供与体および受容体部位との間、並びに側鎖とＳ２サブサイトの静電相互作用特性のための一定の形式の電荷との間の相互作用を介してＳ２サブサイトにおける結合を妨害せず、実際には促進し得るような少なくとも１つの非妨害性の置換基（後記特定する）を担持するものとする。環系Ａの特に好適な種類は、１以上のヒドロキシル基によって置換されたものである。ヒドロキシル基は、サブサイトに対する結合を促進するのに特に有効であると考えられるためである。３までのヒドロキシル置換基を有する基が、Ｓ２サブサイトについて良好な親和力を示した。適切なＡの系の特定の例には、限定されるものではないが、次のものが含まれる：フェニル、１−ナフチル、１−イソキノリル、１−フタラジニル、３−クマリニル、９−フェナンスリル、および１−キノリル。繰返すが、これらの環系の全ては、後記特定するように未置換とするか、または１以上の非妨害性の置換基により置換することができる。フェニルの系の内、意図する特定の態様には、限定されるものではないが、次のものが含まれる：１−ヒドロキシフェニル、２，３−ジヒドロキシフェニル、１，２，３−トリヒドロキシフェニル、および３− ジ−（低級アルキル）−アミノフェニル。環系Ａとして特に好適なのは１−ナフチルである：未置換の１−ナフチル基に加えて、以下の置換された１−ナフチルの系が、本発明の範囲内の阻害剤において特に有用であることが見出されている：Ｒ¹＝ＯＨ、Ｒ³＝ＯＨ、Ｒ¹＝低級アルコキシ（例えば−ＯＣＨ₃）、Ｒ³＝低級アルコキシ（例えば−ＯＣＨ₃）、Ｒ³＝低級アルキル（例えば−ＣＨ₃）、Ｒ³＝ジ−（低級アルキル）−アミノ（例えば−Ｎ（ＣＨ₃）₂）、Ｒ⁴＝ＮＯ₂、Ｒ⁷＝ＣＯＯＨ、Ｒ¹，Ｒ³＝ＯＨ、Ｒ¹，Ｒ²＝ＯＨ、Ｒ²，Ｒ⁷＝ＯＨ、Ｒ¹，Ｒ⁵＝ＯＨ、Ｒ³，Ｒ⁶＝ＯＨ、Ｒ¹，Ｒ⁷＝ＯＨ、Ｒ³，Ｒ⁵＝ＯＨ、Ｒ¹，Ｒ⁴＝ＯＨ、Ｒ¹，Ｒ⁶＝ＯＨ、Ｒ¹＝ＯＨ、Ｒ⁵＝ＮＯ₂およびＲ¹＝ＯＨ、Ｒ⁵＝Ｂｒ。環系Ｂとして使用するための特定の構造の選択は、阻害剤がＳ１′サブサイト（すなわち長いリンカーを含む阻害剤）またはＳ１サブサイト（すなわち短いリンカーを含む阻害剤）のいずれをブロックするために使用するよう設計されているかにある程度依存する。一般に、Ｓ１′サブサイトに対する結合のためには、一環系よりも二環系（例えば、群Ａとしての使用について記載されているようなもの）の方が有効であることが決定されている。加えて、ヘテロ原子（Ｏ、Ｎ）および／または荷電した原子を有する複素環系（特にキノリン）を含む置換基を担持する環系が好適である。一方、Ｓ１サブサイトに対する結合に使用するためには、一環系および二環系は本質的に等しく有効である。Ｓ１サブサイトに対する結合に使用するためには、以下の多環系が好適であり、繰返すがそのそれぞれは未置換とするか、または１以上の非妨害性の置換基（後記特定する）により置換することができる：１−ナフチル、２−ナフチル、２ −キノリル、３−キノリル、６−クマリニル、２−クロモニル（４−オキソ−１，４−クロメン−２−イル）。特に好適なのは多数の置換された２−ナフチルの系であり、限定されるものではないが次のものが含まれる：３−ヒドロキシ−２ −ナフチル、３−（低級アルコキシ）−２−ナフチル、５−ヒドロキシ−２−ナフチル、および４，７−ジブロモ−２−ナフチル。加えて、Ｓ１サブサイトに対する結合にはフェニルおよび置換されたフェニル基も有用である。Ｓ２およびＳ１サブサイトに対する結合に有用として先に記載した多環系（特に二環系）は、ここではＳ１′サブサイトに対する結合のためにも好適である。先に示したように、リンカーＸの選択は、特定の阻害剤が標的とする特定のサブサイトに依存する。Ｓ２およびＳ１′サブサイトに向けられた阻害剤については、６〜８の原子から構成される骨格を含むリンカーが特に好適であるが、Ｓ２およびＳ１サブサイトに向けられた阻害剤については、４つの原子から構成される骨格を含むリンカーが特に有用である。全ての場合において、骨格は炭素に加えて１以上のヘテロ原子（Ｎ、Ｏ、Ｓ等）を含むことができる。更に、特に適切なリンカーは、骨格内（例えば−Ｃ＝Ｃ−、−Ｃ＝Ｎ−等）またはその外部（例えば−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−等）の多重結合によって誘導される相対的に平面的な性質を有する。最も好適なのは、延長された多重結合の実質的に共役した系、および相対的に平面的な配置を維持する傾向のある共有されていない電子対（例えばＯ、Ｎ、Ｓ等）を有するヘテロ原子が存在するリンカーである。しかしながら、骨格が脂環式基（例えば１，３−または１，４−シクロヘキシル）を含むリンカーも、本発明の範囲内として企図する。これらのリンカーは、１以上の非妨害性の基（後記特定する）により置換することもできる。骨格が４つの原子から構成される適切なリンカーの例は、次のものを含む（リンカー骨格を構成する原子は太字で示す）：式中、Ｒは水素または低級アルキルである、式中、Ｒは水素または低級アルキルである、式中、Ｒは水素または低級アルキルであり、Ｒ′は水素または低級アルキルであり、ＹはＯまたはＳである、式中、Ｒは水素または低級アルキルであり、Ｒ′は水素または低級アルキルであり、ＹはＯまたはＳである。列記した構造の内では最初のものが、適切なアルドヒドとヒドラジドとの反応による、この構造を含む化合物の合成の容易性の観点から特に好適である。Ｓ２およびＳ１′サブサイトを標的とする阻害剤で使用するためには、その骨格が６〜８の原子を含むリンカーが特に適切である。意図する構造は次のものを含む：式中、Ｒは水素または低級アルキルであり、Ｒ′は水素または低級アルキルである、式中、Ｒ、Ｒ′およびＲ′′は、水素および低級アルキルから独立に選択する、または式中、シクロヘキシル基は未置換とするか、または１以上の非妨害性の置換基（後記特定する）により置換するものとする、式中、ＲおよびＲ′は、水素および低級アルキルから独立に選択する。勿論、必要な数の原子を有し、実質的に平面的な性質を示す骨格を含む他の構造は、当業者に直ちに明らかであろうし、本発明により使用するために適切なものとして企図する。先に銘記したように、両者の環系ＡおよびＢ並びにリンカーＸは、適切には１以上の非妨害性の置換基を担持することができる。本発明の目的のためには、非妨害性の置換基は、立体的および／または電子的な因子によって酵素の活性部位に対する環構造の結合を妨害しないものとして特定され、幾つかの場合では、特定の非妨害性の置換基の存在は、活性部位の近傍におけるこれらの置換基と酵素の構造要素との間の相互作用によって結合を促進すると考えられる。大半の場合、可能な置換基について主として考慮すべきことは立体的なものであり、大半の部分について、相対的に嵩高い置換基は、本発明の阻害剤で使用するには特に好適ではない。適切な非妨害性の置換基には、限定されるものではないが、次のものが含まれる：保護されたヒドロキシル（すなわち、当業界で認識されている適切な保護基により保護されたヒドロキシル基）を含むヒドロキシル、低級アルキル、低級アルコキシ、アミノ、モノ−およびジ−（低級アルキル）−アミノ、− ＣＯＯＨおよび−ＣＯＯＲ′（式中Ｒ′は低級アルキルまたはアリールである）、−ＮＯ₂、ハロゲン（特にＣｌ、ＦおよびＢｒ）、アリール（特にフェニルおよびベンジル）、およびアリーロキシ（特にフェノキシおよびベンジロキシ）。本発明の目的のためには、低級アルキルとは、１〜５、好ましくは１〜３の炭素原子のアルキル基を意図する。本発明の組成物および方法で使用するのに適切な特定の阻害剤には、幾分詳細に検討された多数の一般的な種類の化合物が含まれる。Ｘが４つの原子の骨格を有するこのような種類の化合物の１つは次のような一般式を有する：式中、置換のパターンは、有利には表１に記載したものから選択する。Ｘが同様に４つの原子の骨格を有し、後生動物寄生体プロテアーゼの阻害剤として特に有用性を有する他の種類の化合物は、次の一般式を有する：式中、置換のパターンは、有利には表２に記載したものから選択する。Ｘが４つの原子の骨格を有し、本発明により使用するための阻害剤として特に有用性を有する更に他の種類の化合物は次の一般式を有する：式中、置換のパターンは、有利には表３に示す通りである。Ｘが４つの原子の骨格を有する以下の更なる阻害剤の例は、環系Ａ、環系ＢおよびリンカーＸとして用いることのできる構造の範囲を例示するものである。勿論、ここに示した以外の類似する環系および置換パターンは、示した構造に等価なものとして当業者によって直ちに認識されようし、したがって同様に本発明の範囲内として企図するものである。以下の構造は、Ｘが６〜８の炭素原子の骨格を有する阻害剤を例示するものである。再度繰返すが、これらの例は、環系Ａ、環系ＢおよびリンカーＸとして用いることのできる構造の範囲の単なる例示として見るべきである。ここに示した以外の類似する環系および置換パターンを、本発明の範囲内として企図する。最後に、次の構造により、Ｓ２、Ｓ１およびＳ１′サブサイトに結合するよう設計した一般式の阻害剤を例示する：Ａ−Ｘ−Ｂ′−Ｘ′−Ｂ′′ これらの構造において、Ｘ′は次のように例示される：環対環の直接結合、単一原子の骨格のリンカー（例えば−ＣＨ₂−）、および二原子の骨格のリンカー（例えば−ＣＨ₂−Ｏ−および−Ｎ＝Ｎ−）。前記特定したような他のＸ′リンカーは、これらの例示的な構造から容易に明らかな置換基とし得る。先の構造について示したように、これらの例は、環系Ａ、環系ＢおよびリンカーＸとして用い得る構造の範囲の単なる例示として見るべきであって、再度繰返すが、ここに示した以外の類似する環系および置換パターンを本発明の範囲内として企図する。本発明により用いる阻害剤の多くは公知の化合物であるか（その幾つかは市販されている）、または従来公知かつ／または市販されている化合物からそれ自体公知の様式で容易に調製することができる。以下の一般的な図式は、幾つかの特に有利な合成経路を説明するものであり、代替的な合成は、合成有機化学の当業者に勿論容易に明らかであろう。本発明の範囲内の対称的なビス−ヒドラジドおよびビス−ヒドラゾン（すなわち、環系Ａと環系Ｂとが同一である化合物）の合成は、次のようにして容易に行うことができる：これらの図解において、明確化のために両者の環系を「Ａ」と表現する。対応するアルデヒドは、市販されているか、適切な反応図式（例えば、適切に置換された前駆体をｎ−ブチルリチウムおよびＤＭＦを用いて処理する）によって市販の材料から容易に調製することができる。以下の図式は、非対称的なビス−ヒドラジドの合成のための好適な方法を説明するものである。示した図式によれば環系Ｂを最初に導入しているが、環系Ａを同様に最初に申し分なく導入し得ることは勿論明らかである。以下の図式は、非対称的なビス−ヒドラゾンの合成のための好適な方法を説明するものである。再度繰返すが、示した図式によれば環系Ｂを最初に導入しているが、環系Ａを同様に最初に導入し得ることは勿論明らかである。先に銘記したように、リンカーＸが長さにして４の原子の骨格を有する幾つかの種類の阻害剤は、アルデヒドとヒドラジンまたはヒドラゾンとの１工程の縮合によって合成することができるため、特に興味深い。以下の図式はこの種の縮合を説明するものである：以下の２つの図式は、特定の複素環Ａの系を含む阻害剤の合成を説明するものである：類似性により、所望の置換パターンを有する種々の異なる複素環系を、適切なヒドラジドを用いる反応のために調製することができる。最後に、以下の２つの図式は、環系Ａ、Ｂ′およびＢ′′を含む阻害剤の合成のための好適な手法を説明するものである：再度繰返すが、適切な前駆体を選択することにより、他の環系Ａ、Ｂ′およびＢ′′を類似する様式で結合させることができることは当業者に容易に明らかであろう。本発明の組成物および方法で用いる阻害剤は、典型的には適切なキャリヤまたはアジュバントと組合せて投与する。ここでは阻害剤は水溶液（例えば緩衝塩類溶液）で投与するのが好適であるが、他の適切な賦形剤およびアジュバントが当業者に容易に明らかであろう。この発明の組成物は、広範な種類の公知の投与経路により投与することができる（例えば、経口、静脈内、皮下等）。阻害剤は、適切には１日当り患者の体重キログラム当り約０．０１〜約１０μＭ、好ましくは約０．０１〜１μＭの投与量で投与する。勿論、当業者によって理解されるように、ここに記載する１以上の特定の阻害剤を含む本発明の組成物を用いるいずれかの与えられた寄生体感染の処置のための最適の投与量は、経験的に容易に決定することができる。本発明により有効であると決定された阻害剤は、マラリアのプロテアーゼおよび他の進化的に関連する後生動物寄生体プロテアーゼに対して驚くべき特異性を示す。これらの後生動物寄生体プロテアーゼは、特にそれぞれの酵素の活性部位の化学的環境に関して、寄生体の宿主（すなわち哺乳動物）に認められるプロテアーゼとは別個である。哺乳動物のプロテアーゼおよび後生動物寄生体のプロテアーゼにおける対応するサブサイトの間の有意な相異の観点では、本発明の阻害剤は、一般に宿主の必須のプロテアーゼの活性を阻害しない。例えば、マラリアの酵素は、位置１３３にアスパラギンを有し、これがＳ２サブサイトにおける結合の特異性を決定する残基となるが、他の大半の非寄生体のシステインプロテアーゼについては、この残基は分岐した疎水性のものであるかまたはアラニンである傾向がある。本発明による阻害剤とアスパラギンとの間の特異的な相互作用により、特異性および効力の両者が増加する。他の変調する残基は、マラリアの酵素における位置２０５のグルタミン酸である。Ｓ２結合ポケットの基部に位置する側鎖ロータマー（rotamer）は、Ｓ２における相互作用の性状に依存して変化すると推定される。置換基が疎水性である場合、グルタミン酸はＳ２ポケットから離れて指向し、恐らく溶剤と相互作用するが、置換基が塩基性である場合は、グルタミン酸はＳ２ポケットに向かって指向し、陽性の電荷との決定的な相互作用を与えると考えられる。よってこの相互作用を活用する阻害剤（すなわち、環系の一部としてかつ／または置換パターンによって、環系Ａが幾分かの塩基性の特性を有するもの）は特に興味深い。この発明は、記載する実施例を参照してより良く理解されようが、これらは説明の目的のみを意図するものであって、ここに添付する請求の範囲で特定されるものとしての本発明の範囲を如何なる意味においても限定するものと解釈すべきではない。実施例以下の実施例において、融点はトーマス（Thomas）のキャピラリー融点装置により測定し、訂正していないものである。プロトンおよびカーボンＮＭＲスペクトルは、ＧＥＱＥ−３００装置によりＤＭＳＯ−ｄ⁶中でそれぞれ３００および７５ＭＨｚで得た。マススペクトル（ＭＳ）は、ヒューレット・パッカード（He wltee-Packard）５８９０ＡＧＣを備えたＶＧ−７０質量分析計により記録した。文献の手順［Morgan，G．T．とVining，D．C.，J．Chem．Soc 119，177（1921 ）］により、対応する市販のジヒドロキシナフタレンから調製したジヒドロキシナフトアルデヒド以外は、全てのアルデヒドおよびヒドラジドは市販されているものから得た。２−ヒドロキシ−１−ナフトアルデヒドは、ＥｔＯＨ／Ｈ₂Ｏ（８：２、ｖ／ｖ）から再結晶した。実施例１２−ヒドロキシ−１−ナフトアルデヒドアジン（Ｉ７３Ａ）の合成アルデヒドとヒドラジンとの縮合のための一般的な手順において、メタノール（２０ｍＬ）中のアルデヒド（１ｍｍｏｌ）の溶液に対し、対応するヒドラジンまたはアシルヒドラジン（１ｍｍｏｌ）を１回分として添加した。この結果得られた混合物を６５℃で３時間加熱した。大半の場合、１０分後に沈殿物が観察された。沈殿物をろ過し、温メタノール（５０ｍＬ）で洗浄し、真空中（２ｍｍＨｇ）で乾燥させた。必要に応じて、適切な溶剤を使用する再結晶化によって更に精製を行った。この一般的な手順の後に、２−ヒドロキシ−１−ナフトアルデヒドとヒドラジンとの縮合により、黄色の固体として２−ヒドロキシ−１−ナフトアルデヒドアジン（９８％）が得られた：ｍｐ＞３００℃（分解）；¹ＨＮＭＲｄ 12.90（br s，2H），9.99（s，2H），8.64（d，2H，J=8.7 Hz），8.03（ｄ，2H，J=9.0 Hz），7.92（d，2H，J=7.8 Hz），7.61（t，2H，J=7.6 Hz），7.44 （t，2H，J=7.4 Hz），7.28（d，2H，J=8.7 Hz）；ＨＲＭＳ、Ｃ₂₂Ｈ₁₆Ｎ₂Ｏ₂についての計算値：340.1212、実測値：340.1195；分析結果（Ｃ₂₂Ｈ₁₆Ｎ₂Ｏ₂）Ｃ，Ｈ，Ｎ。実施例２シュウ酸ビス〔（２−ヒドロキシ−１−フェニルメチレン）ヒドラジド〕（Ｉ７５Ａ）の合成実施例１の一般的な手順の後に、サリチル酸アルデヒドとシュウ酸ジヒドラジトとの縮合により、白色の固体が得られた（９７％）：ｍｐ＞３００℃；¹ＨＮＭＲ d 12.65（s，2H），11.00（s，2H），8.79（s，2H），7.54（d，2H，J=7. 5 Hz），7.32（t，2H，J=7.6 Hz），6.91（m，4H）；¹³ＣＮＭＲ d 157.58，15 5.83，151.07，131.99，129.36，119.44，118.59，116.45；ＨＲＭＳ、Ｃ₁₆Ｈ₁₄ Ｎ₄Ｏ₄についての計算値：326.1015、実測値：326.0997；分析結果（Ｃ₁₆Ｈ₁₄Ｎ₄ Ｏ₄）Ｃ，Ｈ，Ｎ。実施例３シュウ酸ビス〔（９−フェナンスリルメチレン）ヒドラジド〕（Ｉ７７Ａ）の合成実施例１の一般的な手順の後に、フェナンスレン−９−カルボキシアルデヒドとシュウ酸ジヒドラジドとの縮合により、白色の固体が得られた（９７％）：ｍｐ＞３００℃；ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｅ495.4 （Ｍ＋Ｈ）⁺；分析結果（Ｃ₃₂Ｈ₂₂Ｎ₄ Ｏ₂）Ｃ，Ｈ，Ｎ。実施例４３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸（２−ヒドロキシ−１−ナフチルメチレン）ヒドラジド（Ｉ９３Ａ）の合成実施例１の一般的な手順の後に、２−ヒドロキシ−１−ナフトアルデヒドと３ −ヒドロキシ−２−ナフトエ酸ヒドラジトとの縮合により、白色の固体が得られた（９７％）：ｍｐ＞３００℃；¹ＨＮＭＲ d 12.70（s，1H），12.25（br s， 1H），11.37（br s，1H），9.58（s，1H），8.52（s，1H），8.33（d，1H，J=8. 7 Hz），7.94（d，2H，J=8.7 Hz），7.89（d，1H，J=8.1Hz），7.78（d，1H，J= 8.4 Hz），7.58（t，1H, J=7.6 Hz），7.52（t，1H，J=7.5 Hz），7.41（m，2H ），7.37（s，1H），7.25（d，1H，J=9.0 Hz）；¹³ＣＮＭＲｄ 163.05，158.12 ，153.88，147.57，135.94，132.90，131.68，130.62，128.90，128.68，128.33 ，127.79，127.73，126.81，125.85，123.86，123.54，120.98，119.84，118.87 ，110.62，108.61；ＨＲＭＳ、Ｃ₂₂Ｈ₁₆Ｎ₂Ｏ₃についての計算値：356.1161、実測値：356.1151；分析結果（Ｃ₂₂Ｈ₁₆Ｎ₂Ｏ₃）Ｃ，Ｈ，Ｎ。実施例５ビス〔（２−ヒドロキシ−１−ナフチルメチレン）カルボヒドラジド〕（Ｉ９７Ａ）の合成実施例１の一般的な手順の後に、２−ヒドロキシ−１−ナフトアルデヒドとカルボヒドラジトとの縮合により、白色の固体が得られた（９７％）：ｍｐ＞２８５℃（分解）；¹ＨＮＭＲｄ11.90（br s，2H），11.05（s，2H），9.23（s，2 H），8.33（d，2H，J=8.4 Hz），7.88（d，2H，J=9.0 Hz），7.87（d，2H，J=7. 8 Hz），7.59（t，2H，J=7.6 Hz），7.38（t，2H，J=7.5 Hz），7.22（d，2H，J =9.0 Hz）；¹³ＣＮＭＲｄ 156.71，151.56，143.24，131.88，131.50，128.72 ，127.87，127.56，123.35，121.58，118.61，109.40；ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｅ399. 0 （Ｍ＋Ｈ）⁺；分析結果（Ｃ₂₃Ｈ₁₈Ｎ₄ Ｏ₃ 0.3 Ｈ₂ Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。実施例６シュウ酸ビス〔（３−インドリルメチレン）ヒドラジド〕（Ｉ１３５Ａ）の合成実施例１の一般的な手順の後に、インドール−３−カルボアルデヒドとシュウ酸ジヒドラジトとの縮合により、白色の固体が得られた（９７％）：ｍｐ＞２８５℃（分解）；¹ＨＮＭＲｄ 11.93（br s，2H），11.66（s，2H），8.77（s，2 H），8.28（d，2H，J=7.5 Hz），7.84（d，2H，J=2.1 Hz），7.46（d，2H，J=7. 8 Hz），7.16（m，4H）；¹³ＣＮＭＲｄ 156.01，147.85，137.09，131.13，124 .37，122.77，121.93，120.63，111.95，111.48；ＨＲＭＳ、Ｃ₂₀Ｈ₁₆Ｎ₆ Ｏ₂についての計算値：372.1341、実測値：372.1335；分析結果（Ｃ₂₀Ｈ₁₆Ｎ₆ Ｏ₂ 0. 3 Ｈ₂Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。実施例７３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸（２，３−ジヒドロキシ−１−ナフチルメチレン）ヒドラジド（ＩＩＩ４１Ａ）の合成実施例１の一般的な手順の後に、２，３−ジヒドロキシ−１−ナフトアルデヒドと３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸ヒドラジトとの縮合により、黄色の結晶が生成した（１８％）［ジオキサン／Ｈ₂Ｏ（１：１、ｖ／ｖ）から再結晶した］：ｍｐ＞２８５℃；¹ＨＮＭＲｄ 13.16(br s，1H），12.27（br s，1H），11.3 0（br s，1H），9.74（br s，1H），9.57（s，1H），8.53（s，1H），8.17（d， 1H，J=8.2 Hz），7.95（d，1H，J=8.2 Hz），7.79（d，1H，J=8.0 Hz），7.70（ d，1H，J=7.7 Hz），7.54（t，1H，J=7.4 Hz），7.42-7.25（m，5H）；ＨＲＭＳ、Ｃ₂₂Ｈ₁₆Ｎ₂Ｏ₄についての計算値：372.1110、実測値：372.1103；分析結果（Ｃ₂₂Ｈ₁₆Ｎ₂Ｏ₄Ｈ₂Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。実施例８３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸（２，４−ジヒドロキシ−１−ナフチルメチレン）ヒドラジド（ＩＩＩ４３Ａ）の合成実施例１の一般的な手順の後に、２，４−ジヒドロキシ−１−ナフトアルデヒドと３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸ヒドラジドとの縮合により、黄色の結晶が生成した（８３％）［ＤＭＳＯ／Ｈ₂Ｏ（８：２、ｖ／ｖ）から再結晶した］：ｍｐ＞２８０℃（分解）；¹ＨＮＭＲｄ 12.42（br s，1H），11.65（s，1H）， 10 .96（br s，1H），10.59（s，1H），8.99（s，1H），8.07（s，1H），7.77（d， 1H，J=8.4 Hz），7.67（d，1H，J=8.4 Hz），7.48（d，1H，J=8.1 Hz），7.32（ d，1H，J=8.4 Hz），7.13（t，1H，J=7.5 Hz），7.06（t，1H，J=7.5 Hz），6.9 1（s，1H），6.90（m，2H）；¹³ＣＮＭＲｄ 162.92，160.47，157.70，154.20 ，148.22，135.97，132.99，130.33，128.72，128.33，(2C)，126.84，125.92， 123.91，122.94，122.55，120.80，120.32，119.66，110.70，101.38，100.49；ＨＲＭＳ、Ｃ₂₂Ｈ₁₆Ｎ₂Ｏ₄についての計算値：372.1110、実測値：372.1095；分析結果（Ｃ₂₂Ｈ₁₆Ｎ₂Ｏ₄ ２ＤＭＳＯＨ₂Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。実施例９３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸（２，７−ジヒドロキシ−１−ナフチルメチレン）ヒドラジド（ＩＩＩ４５Ａ）の合成実施例１の一般的な手順の後に、２，７−ジヒドロキシ−１−ナフトアルデヒドと３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸ヒドラジドとの縮合により、黄色の結晶が生成した（８３％）［ＤＭＳＯ／Ｈ₂Ｏ（８：２、ｖ／ｖ）から再結晶した］：ｍｐ２２５℃（分解）；¹ＨＮＭＲｄ 12.75（s，1H），12.24（s，1H），11.27 （s，1H），9.93（s，1H），9.40（s，1H），8.50（s，1H），7.95（d，1H，J=8 .1 Hz），7.80（d，2H，J=8.7 Hz），7.73（d，1H，J=8.7 Hz），7.54（t，1H， J=7.5 Hz），7.39（t，1H，J=7.5 Hz），7.37（s，1H），6.98（d，2H，J=8.7 H z）；ＨＲＭＳ、Ｃ₂₂Ｈ₁₆Ｎ₂Ｏ₄についての計算値：372.1110、実測値：372.109 9；分析結果（Ｃ₂₂Ｈ₁₆Ｎ₂ Ｏ₄ 1.4 ＤＭＳＯ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。実施例１０３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸（２，６−ジヒドロキシ−１−ナフチルメチレン）ヒドラジド（ＩＩＩ７９Ａ）の合成実施例１の一般的な手順の後に、２，６−ジヒドロキシ−１−ナフトアルデヒドと３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸ヒドラジドとの縮合により、黄色の固体が生成した（７２％）：ｍｐ＞２８０℃；¹ＨＮＭＲｄ 11.89（s，1H），11.75（ br,s，1H），10.90（br s，1H），9.14（s，1H），9.03（s，1H），8.06（s，1H ），7.75（d，1H，J=9.0 Hz），7.48（d，1H，J=8.4 Hz），7.33（d，1H，J=8.4 Hz），7.28（d，1H，J=9.0 Hz），7.07（t，1H，J=7.6 Hz），6.92（t，1H，J= 7.4 Hz），6. 75-6.67（m，3H），6.90（m，2H）；¹³ＣＮＭＲｄ 163.06，155.90，153.93，1 53.44，147.82，135.94，131.34，130.57，129.35，128.69，128.34，126.81，1 25.87，125.66，123.88，122.58，119.86，119.68，119.04，110.62，110.45，1 08.82；ＨＲＭＳ、Ｃ₂₂Ｈ₁₆Ｎ₂ Ｏ₄についての計算値：372.1110、実測値：372. 1095；分析結果（Ｃ₂₂Ｈ₁₆Ｎ₂ Ｏ₄ 0.4 Ｈ₂Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。実施例１１３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸（１−ナフチルメチレン）ヒドラジド（ＩＩＩ９３Ａ）の合成実施例１の一般的な手順の後に、１−ナフトアルデヒドと３−ヒドロキシ−２ −ナフトエ酸ヒドラジドとの縮合により、淡い黄色の固体が得られた（７６％）：ｍｐ２１４℃；¹ＨＮＭＲｄ 11.73（br，s，1H），11.05（br，s，1H），8.7 2（s，1H），8.52（d，1H，J=8.4 Hz），8.13（s，1H），7.60-6.80（m，11H）；¹³ＣＮＭＲｄ 164.00，154.31，148.56，135.99，133.57，130.80，130.40， 130.30，129.48，128.81，128.78，128.29，128.12，127.37，126.85，126.31， 125.89，125.54，124.39，123.84，120.13，110.75；ＨＲＭＳ、Ｃ₂₂Ｈ₁₆Ｎ₂ Ｏ₂ についての計算値：340.1212、実測値：340.1208；分析結果（Ｃ₂₂Ｈ₁₆Ｎ₂ Ｏ₂ ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。実施例１２３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸（２−ヒドロキシ−１−フェニルメチレン）ヒドラジド（ＩＩＩ１０７Ａ）の合成実施例１の一般的な手順の後に、サリチル酸アルデヒドと３−ヒドロキシ−２ −ナフトエ酸ヒドラジドとの縮合により、淡い黄色の固体が得られた（９４％）：ｍｐ＞２８５℃；¹ＨＮＭＲｄ 11.69（br，s，1H），10.97（br，s，1H），1 0.79（s，1H），8.24（s，1H），8.02（s，1H），7.45（d，1H，J=8.1 Hz），7. 31（d，1H,J=8.1 Hz），7.12（dd，1H,J=7.8，0.9 Hz），7.05（t，1H，J=7.5 H z），6.89（s，1H），6.86（m，2H），6.51（d，1H，J=8.1 Hz），6.48（t，1H ，J=7.5Hz）：¹³ＣＮＭＲｄ 163.62，157.54，154.08，148.83，135.94，131.6 4，130.37，129.49，128.70，128.33，126.79，125.89，123.86，119.99，119.4 4，118.68，116.48，110.63；ＨＲＭＳ、Ｃ₁₈Ｈ₁₄Ｎ₂ Ｏ₃についての計算値：30 6.1004、実測値：306.0977；分析結果（Ｃ₁₈Ｈ₁₄Ｎ₂ Ｏ₃）Ｃ，Ｈ，Ｎ。実施例１３サリチル酸（２−ヒドロキシ−１−ナフチルメチレン）ヒドラジド（ＩＩＩ１０９Ａ）の合成実施例１の一般的な手順の後に、２−ヒドロキシ−１−ナフトアルデヒドとサリチル酸ヒドラジドとの縮合により、淡い黄色の固体が生成した（７４％）：ｍｐ２６５℃；¹ＨＮＭＲｄ 12.32（s，1H），11.65（br，s，1H），11.36（br s ，1H），9.09（s，1H），7.84（d，1H，J=7.5 Hz），7.43（m，3H），7.13（t， 1H，J=6.0 Hz），7.01（t，1H, J=6.6 Hz）,6.83（t，1H，J=6.9 Hz），6.77（d ，1H，J=8.4 Hz），6.57（m，2H）；¹³ＣＮＭＲｄ 163.72，158.58，157.88，1 47.40，133.75，132.63，131.42，128.64，128.49，127.53，127.44，123.27，1 20.65，118.87，118.61，117.04，115.35，108.32，；ＨＲＭＳ、Ｃ₁₈Ｈ₁₄Ｎ₂ Ｏ₃についての計算値：306.1004、実測値：306.0985；分析結果（Ｃ₁₈Ｈ₁₄Ｎ₂ Ｏ₃）Ｃ，Ｈ，Ｎ。実施例１４栄養型のシステインプロテアーゼ阻害剤の検討文献に記載されたように［Rosenthal，P．J．ら、Mol．Biochem．Parasitol． 35，177（1989）］、蛍光生成基質Ｚ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＭＣを用いて酵素活性を測定した。反応緩衝液（０．１Ｍ酢酸ナトリウム中、１０ｍＭジチオスレイトール（ｄｉｔｈｏｔｈｒｅｉｔａｌ）、ｐＨ５．５）および適切な濃度の阻害剤を用い、室温で３０分間栄養型の抽出物をインキュベートした。その後Ｚ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（５０μＭ最終濃度）を添加し、３０秒間に渡って連続的に蛍光を測定した（３８０ｎｍの励起、４６０ｎｍの吸光度）。それぞれの阻害剤の濃度について、時間に対する蛍光の傾きを多連の検定で対照のものと比較し、阻害剤濃度に対する％対照活性のプロットからＩＣ₅₀を決定した。結果を図１に示すが、図中、点は８つの検定の平均であり、誤差のバーはサンプルの標準偏差である。本発明による阻害剤のＩＣ₅₀の値を表４に記載する。実施例１５寄生体の代謝の尺度としての³Ｈ−ヒポキサンチン取込みに対するシュウ酸ビス〔（２−ヒドロキシ−１−ナフチルメチレン）ヒドラジド）〕の効果 Desjardinsらの方法［Antimicrob．Agents Chemother．16，710-718（1979）］を改変したものに基き、³Ｈ−ヒポキサンチンの取込みを測定した。同調した生活環段階（ring-stage）のP．falciparum寄生体のミクロウェル内の培養物を、ＤＭＳＯ中の阻害剤（１０％最終濃度）により４時間インキュベートした。³ Ｈ−ヒポキサンチンを添加し（１μＣｉ／ミクロウェル培養）、培養物を更に３６時間維持した。その後細胞を回収し、エタノールで洗浄して乾燥させたガラス繊維フィルター上に付着させた。シンチレーションカウントによって³Ｈ−ヒポキサンチンの取込みを定量した。それぞれの阻害剤濃度での取込みを対照の場合と比較し、阻害剤濃度に対する％対照の取込みのプロットからＩＣ₅₀を決定した。結果を図２に示す。実施例１６赤血球細胞を侵食する寄生体の能力に対するシュウ酸ビス［（２−ヒドロキシ− １−ナフチルメチレン）ヒドラジド］の効果ＲＰＭＩ１６４０培地（１０％ヒト血清、ヒポキサンチンおよびゲンタマイシンを補填したギブソ（Gibso））で４％の赤血球容積率として、タイプＯ＋ヒト赤血球（アメリカ赤十字社）によりPlasmodium falciparum のＦＣＲ３株を維持した。非同調感染細胞を５００ｇで５分間遠心分離し、上澄を吸引した。ソルビトール（ｄＨ２０中５％）をペレットに滴下し、室温で７分間インキュベートした。混合物を再度遠心分離し、同調環（synchronous rings）としたペレットをＲＰＭＩ培地に再懸濁した。１２時間後に培地を取替えた。可能性のある阻害剤を適切な濃度でＤＭＳＯ中に溶解した。ウェル当り１μｌのサンプル（阻害剤）と４９μｌのヒト血清を含まないＲＰＭＩ培地（不完全培地）とを、９６ウェルのプレートにプレート処理した。陰性対照として、１μｌのＤＭＳＯと４９μｌの不完全培地とを使用した。陽性対照として、不完全培地中で１０μｇ／ｌとした５０μｌのヘパリンを使用した。ソルビトール処理後２４〜２７時間の時点で、栄養型の段階の同調した寄生体を、３％の赤血球容積率で３．０％〜４．５％の寄生虫血として培養し、この培養物の１５０μｌをそれぞれのウェルに分画した。摂氏４０度で２６〜２８時間プレートをインキュベートし、寄生体を分裂体（シゾント）に発育させ、分裂小体（メロゾイト）に分裂させ、侵食させることを試みた。インキュベートの後、沈降した細胞の上の上澄を除去した。それぞれのウェルについて、約２μｌの細胞を塗抹標本のために使用し、約３μｌを寄生虫血のフロー・サイトメトリ測定（流動細胞光度測定）のために使用した。それぞれのウェルについて、２ｍｌの０．０１％グルタルアルデヒドを含有する培養チューブ中で室温にて少なくとも１時間インキュベートすることにより、約３μｌの細胞を固定した。チューブを２５０ｇで５分間遠心分離し、上澄を吸引し、細胞をダルベッコ（Dulbeco's）のＰＢＳに再懸濁し、グルタルアルデヒドを濯ぎ落した。チューブを再度遠心分離し、ＰＢＳを吸引し、細胞を０．０５ｍｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウムに再懸濁し、寄生体ＤＮＡの蛍光を発生させた。チューブを光から遮蔽し、ヨウ化プロピジウム中で室温にて一夜インキュベートした。それぞれのサンプルについて、２０，０００の細胞をＦＡＣＳフロー・サイトメーターにより分析し、感染細胞の蛍光のより大きい強度に基いて寄生虫血を測定した。図４に記載する％阻害は、１００％から差引いた陰性対照に対するサンプル寄生虫血の比率である。本発明による特定の阻害剤について、この検定で求められたものとして、ＩＣ₅₀を表５に記載する。実施例１７他の寄生体由来の重要なシステインプロテアーゼの阻害プロテアーゼの基質、Ｎ−ＣＢＺ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−７−ＡＭＣの保存溶液（２５μＭ）および１０ｍＭの阻害剤をＤＭＳＯ中で調製した。ジチオスレイトールの保存溶液（１Ｍ）を１０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ６中で調製した。プロテアーゼの検定では、反応当り一定量、すなわち２７μｇの精製したプロテアーゼ、３．３ｍＭのＤＤＴおよび３３μＭのプロテアーゼ基質を含むものとした。使用したプロテアーゼ阻害剤の濃度範囲は１０ｎＭ〜１００μＭとした。酢酸ナトリウム緩衝液（１００ｍＭ、ｐＨ５．５）を、反応当り１．５ｍｌの最終容量で添加した。分光光度計内で、４６０ｎｍの吸光度の変化を測定した。結果を表６に記載する。表６他の寄生体のシステインプロテアーゼ、およびヒトカテプシンＢに対する阻害剤のＩＣ₅₀ 化合物 T．cruzi S．mansoni ヒトクルザインヘモグロビナーゼカテプシンＢ（Cruzain）１４８Ａ１３ μＭ阻害なし阻害なしＩＩＩ４３Ａ９．０μＭ９．３μＭ阻害なしＩＩＩ７９Ａ２４ μＭ７．６μＭ阻害なしＩＩＩ１０９Ａ２１ μＭ２．９μＭ阻害なし

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 31/35 9454−4Ｃ 31/36 9454−4Ｃ 31/40 9454−4Ｃ 31/47 9454−4Ｃ 31/495 9454−4ＣＣ０７Ｃ 233/09 9547−4Ｈ 233/56 9547−4Ｈ 281/06 9451−4Ｈ 335/04 7106−4ＨＣ０７Ｄ 237/34 8615−4Ｃ 307/68 8217−4Ｃ 317/60 9454−4Ｃ 471/06 7602−4Ｃ // Ｃ０７Ｃ 243/30 8829−4Ｈ 251/18 8829−4Ｈ 251/86 8829−4Ｈ 251/88 8829−4ＨＣ０７Ｄ 209/14 8217−4Ｃ 209/80 8217−4Ｃ 215/12 7019−4Ｃ 215/22 7019−4Ｃ 215/38 7019−4Ｃ 217/02 7019−4Ｃ 217/22 7019−4Ｃ 311/80 9360−4Ｃ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＶＮ (72)発明者マッケロウ、ジェイムスホブソンアメリカ合衆国 94117 カリフォルニア州サンフランシスコスタンヤンストリート 1146 (72)発明者リン、クリスティーンサンヤングアメリカ合衆国 94122 カリフォルニア州サンフランシスコナンバー303 ワンハンドレッドアンドセブンティスアベニュ 1421 (72)発明者ローセンタール、フィリップジョンアメリカ合衆国 94946 ニカシオルーカスバレーロード 6505 (72)発明者ケンヨン、ジョージロメルアメリカ合衆国 94114 カリフォルニア州サンフランシスコマウンテンスプリングアベニュ 85 (72)発明者リー、ツェアメリカ合衆国 94118 カリフォルニア州サンフランシスコナンバー303 アーグエロブルバード 721

Claims

【特許請求の範囲】１．後生動物寄生体に感染した患者を処置するための方法であって、寄生体を殺すのに有効な量の次の一般式の少なくとも１つの後生動物プロテアーゼ阻害剤を投与することを含む前記方法：Ａ−Ｘ−Ｂ式中、Ａは、後生動物プロテアーゼのＳ２サブサイトに結合する１〜３の環を含む置換または未置換のホモ芳香族またはヘテロ芳香族環系であり、Ｂは、後生動物プロテアーゼのＳ１またはＳ１′サブサイトに結合する１〜３の環を含む置換または未置換のホモ芳香族またはヘテロ芳香族環系であり、Ｘは、実質的に平面的で線状の配列を含み、長さにして４〜８の原子の骨格を有するリンカーである。２．後生動物寄生体が、Plasmodium falciparum、Schistosoma mansoni、Tryp anosoma cruzi、Giardia lamblia、Entoemeba histolytica、Cryptospiridium s pp.、Leishmania spp.、Brugia spp.、Wuchereria spp.、Onchocerca spp.、Str ongyloides spp.、Coccidia、Haemanchus spp.、Ostertagia spp.、Trichomonas spp.、Dirofilaria spp.、Toxocara spp.、Naegleria spp.、Pneumocystis car inii、Ascaris spp.、他のTrypanosoma spp.、他のSchistosome spp.、他のPlas modium spp.、Babesia spp.、Theileria spp.、Anisakis、およびIsospora beli よりなる群から選択される請求項１記載の方法。３．１日当り患者の体重キログラム当り約０．０１〜約１０μＭの投与量で、後生動物プロテアーゼ阻害剤を投与する請求項１記載の方法。４．１日当り患者の体重キログラム当り約０．０１〜約１μＭの投与量で、後生動物プロテアーゼ阻害剤を投与する請求項３記載の方法。５．Ａが、フェニル、１−ナフチル、１−イソキノリル、１−フタラジニル、３−クマリニル、９−フェナンスリルおよび１−キノリルよりなる群から選択される請求項１記載の方法。６．Ｂが、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、１−イソキノリル、１− フタラジニル、３−クマリニル、９−フェナンスリル、１−キノリル、２−キノリル、３−キノリル、６−クマリニルおよび２−クロモニルよりなる群から選択される請求項１記載の方法。７．Ｘが次のものよりなる群から選択される請求項１記載の方法：式中、Ｒは水素または低級アルキルである、式中、Ｒは水素または低級アルキルである、式中、Ｒは水素または低級アルキルであり、Ｒ′は水素または低級アルキルであり、ＹはＯまたはＳである、式中、Ｒは水素または低級アルキルであり、Ｒ′は水素または低級アルキルであり、ＹはＯまたはＳである、式中、Ｒは水素または低級アルキルであり、Ｒ′は水素または低級アルキルである、式中、Ｒ、Ｒ′およびＲ′′は、水素および低級アルキルから独立に選択する、および式中、シクロヘキシル基は未置換とするか、または置換されたものとする、式中、ＲおよびＲ′は、水素および低級アルキルから独立に選択する。８．Ａ、ＢおよびＸの少なくとも１つが、ヒドロキシル、低級アルキル、低級アルコキシ、アミノ、モノ−およびジ−（低級アルキル）−アミノ、−ＮＯ₂、ハロゲン、アリール、アリーロキシ、−ＣＯＯＨ、およびＲ′が低級アルキルまたはアリールである−ＣＯＯＲ′よりなる群から選択される少なくとも１つの置換基によって置換された請求項１記載の方法。９．Ａが未置換または置換された１−ナフチルであり、Ｂが未置換または置換された２−ナフチルまたはフェニルである請求項１記載の方法。１０．Ｘが次のものであり、式中、Ｒは水素または低級アルキルであり、Ｒ′は水素または低級アルキルであり、ＹはＯまたはＳである請求項１記載の方法。１１．後生動物寄生体に感染した患者を処置するための組成物であって、適切なキャリヤまたは賦形剤と、寄生体を殺すのに有効な量の次の一般式の少なくとも１つの後生動物プロテアーゼ阻害剤とを含む前記組成物：Ａ−Ｘ−Ｂ式中、Ａは、後生動物プロテアーゼのＳ２サブサイトに結合する１〜３の環を含む置換または未置換のホモ芳香族またはヘテロ芳香族環系であり、Ｂは、後生動物プロテアーゼのＳ１またはＳ１′サブサイトに結合する１〜３の環を含む置換または未置換のホモ芳香族またはヘテロ芳香族環系であり、Ｘは、実質的に平面的で線状の配列を含み、長さにして４〜８の原子の骨格を有するリンカーである。１２．後生動物寄生体が、Plasmodium falciparum、Schistosoma mansoni、Tr ypanosoma cruzi、Giardia lamblia、Entoemeba histolytica、Cryptospiridium spp.、Leishmania spp.、Brugia spp.、Wuchereria spp.、Onchocercaspp.、St rongyloides spp.、Coccidia、Haemanchus spp.、Ostertagia spp.、Trichomona s spp.、Dirofilaria spp.、Toxocara spp.、Naegleria spp.、Pneumocystis ca rinii、Ascaris spp.、他のTrypanosoma spp.、他のSchistosomespp.、他のPlas modium spp.、Babesia spp.、Theileria spp.、Anisakis、およびIsospora beli よりなる群から選択される請求項１１記載の組成物。１３．１日当り患者の体重キログラム当り約０．０１〜約１０μＭを与えるのに十分な量で、後生動物プロテアーゼ阻害剤が存在する投与ユニット形態である請求項１１記載の組成物。１４．１日当り患者の体重キログラム当り約０．０１〜約１μＭを与えるのに十分な量で、後生動物プロテアーゼ阻害剤が存在する投与ユニット形態である請求項１３記載の組成物。１５．Ａが、フェニル、１−ナフチル、１−イソキノリル、１−フタラジニル、３−クマリニル、９−フェナンスリルおよび１−キノリルよりなる群から選択される請求項１１記載の組成物。１６．Ｂが、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、１−イソキノリル、１ −フタラジニル、３−クマリニル、９−フェナンスリル、１−キノリル、２−キノリル、３−キノリル、６−クマリニルおよび２−クロモニルよりなる群から選択される請求項１１記載の組成物。１７．Ｘが次のものよりなる群から選択される請求項１１記載の組成物：式中、Ｒは水素または低級アルキルである、式中、Ｒは水素または低級アルキルである、式中、Ｒは水素または低級アルキルであり、Ｒ′は水素または低級アルキルであり、ＹはＯまたはＳである、式中、Ｒは水素または低級アルキルであり、Ｒ′は水素または低級アルキルであり、ＹはＯまたはＳである、式中、Ｒは水素または低級アルキルであり、Ｒ′は水素または低級アルキルである、式中、Ｒ、Ｒ′およびＲ′′は、水素および低級アルキルから独立に選択する、および式中、シクロヘキシル基は未置換とするか、または置換されたものとする、式中、ＲおよびＲ′は、水素および低級アルキルから独立に選択する。１８．Ａ、ＢおよびＸの少なくとも１つが、ヒドロキシル、低級アルキル、低級アルコキシ、アミノ、モノ−およびジ−（低級アルキル）−アミノ、−ＮＯ₂ 、ハロゲン、アリール、アリーロキシ、−ＣＯＯＨ、およびＲ′が低級アルキルまたはアリールである−ＣＯＯＲ′よりなる群から選択される少なくとも１つの置換基によって置換された請求項１１記載の組成物。１９．Ａが未置換または置換された１−ナフチルであり、Ｂが未置換または置換された２−ナフチルまたはフェニルである請求項１１記載の組成物。２０．Ｘが次のものであり、式中、Ｒは水素または低級アルキルであり、Ｒ′は水素または低級アルキルであり、ＹはＯまたはＳである請求項１１記載の組成物。