JPH0933526A - 免疫学的検査キット - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 簡単、迅速に且つ高感度で複数の被検物質の
検出を同一基材上で同時に行い得る免疫学的検査キット
を提供する。 【構成】 吸水性基材１上に被検物質と結合しうる複数
の第１免疫体を異なった位置に固定化してなる固定相
２，３と、着色粒子に被検物質と結合しうる第２免疫体
を結合した標識免疫体を水との接触によって脱離可能に
含有させた標識相４を形成している。標識相の一端側か
ら被検液を吸収させることによって被検物質が固定相に
吸着して着色判定することができる。ヒトヘモグロビン
とヒトトランフフェリンの同時検出に効果的である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は簡単、迅速に且つ高精度
で複数の被検物質の検出を同一基材上で同時に行い得る
免疫学的検査キットに関するものである。

【０００２】

【従来の技術】血清、尿などの体液に含まれる種々の成
分や薬物の検出および測定は、臨床上極めて重要であっ
て、従来、種々の方法によって行われている。かかる方
法として、代表的には体液中の被検物質である抗原また
は抗体と、これらに対する特異的結合性を有する抗体ま
たは抗原を利用する免疫学的検査法が知られており、な
かでも酵素などで標識した抗体や抗原などの標識免疫体
を用いる免疫学的検査法が、その高感度性および検査試
薬の安定性から広く用いられている。

【０００３】さらに近年、より簡便、迅速にこれらの測
定を行う方法として、次のような方法が特開平５−３１
２８０６号公報に提案されている。つまり、吸水性基材
上に被検物質と結合しうる免疫体を固定化した固定相
と、上記被検物質と結合しうる標識免疫体を水との接触
によって前記基材から脱離しうるように含有させた標識
相とを、特定の間隔をおいて設けてなる試薬の前記標識
相側の一端から被検液を吸収させる。そして、標識相の
標識免疫体を脱離させ、被検物質と結合させて標識免疫
体−被検物質複合体を形成させ、次いで、この複合体が
前記固定相にて固定化免疫体と結合する。固定相にて結
合した標識免疫体を測定することにより、被検液中の被
検物質を測定することができる。所謂、免疫クロマトグ
ラフ法である。標識免疫体に用いる標識材としては、コ
ロイド状金属粒子、酵素、蛍光物質、燐光物質、色素、
または酵素、蛍光物質、燐光物質、色素などを結合もし
くは含有させた水分散型高分子重合体粒子などが用いら
れる。特に、蛍燐光物質、色素（染料や顔料など）で着
色した水分散型高分子重合体粒子に免疫体を物理吸着に
より結合した標識免疫体は、測定感度が高く、簡便なこ
とから広く用いられている。

【０００４】一方、このような方法に用いる着色粒子と
しては、特開平５−１０９５０号公報に特定の表面負荷
電量を有する合成高分子ラテックスが開示されている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、従来の
ように水分散型高分子重合体粒子に物理吸着によって免
疫体を結合させた標識免疫体を、前記免疫クロマトグラ
フ法に用いた場合、測定精度（再現性）が悪く、また、
検査に使用するまで長期保存したときに感度が低下する
などの問題点が見られる。

【０００６】また、上記従来のものは被検液中に検出し
たい被検物質が複数種含まれている場合には、同時検出
をすることができないので各被検物質用の検査キットを
用いる必要があり、測定に時間がかかったり、手間もか
かるものである。

【０００７】本発明は上記問題点を解決するためになさ
れたものであって、簡単、迅速に且つ高精度で複数の被
検物質の検出を同一基材上で同時に行い得る免疫検査キ
ットを提供することを目的とする。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは従来からの
免疫クロマトグラフ法において、被検液中の異なる複数
種の被検物質を結合することができる第１免疫体を吸水
性基材上に固定してなる固定相と、被検液中に異なる複
数種の被検物質と結合することができる第２免疫体を着
色粒子に結合してなる標識免疫体を水との接触によって
脱離可能な状態で吸水性基材上に含有させた標識相を用
いる。そして、固定相を吸水性基材上の異なる位置に固
定化することによって、被検液中の複数の被検物質を同
時に検出するという上記目的が達成できることを見い出
し、本発明を完成するに至った。

【０００９】即ち、本発明による免疫学的検査キット
は、吸水性基材上に、被検物質と結合しうる第１免疫体
を固定化した固定相と、着色粒子に前記被検物質と結合
しうる第２免疫体を結合した標識免疫体を水との接触に
よって前記基材から脱離しうるように含有させた標識相
とを設けてなり、前記標識相側の一端から被検液を吸収
させ、被検物質と標識免疫体との複合体を前記固定相に
て第１免疫体に結合させる免疫学的検査キットであっ
て、前記固定相が被検液中に含まれる複数種の被検物質
とそれぞれ結合しうる複数の第１免疫体を吸水性基材上
の異なる位置に固定化してなることを特徴とするもので
ある。

【００１０】本発明において、第１免疫体および第２免
疫体は被検物質（例えば、抗原または抗体）と特異的に
結合しうる物質であり、抗体または抗原が挙げられる
（ここで、抗原としてはタンパク質やペプチド、ハプテ
ンなどが含まれる）。免疫体は測定すべき被検物質に応
じて、サンドイッチ法などで用いられる公知のものを適
宜選択すればよい。例えば、被検物質が抗原の場合に
は、対応する抗体を免疫体として用いることができる。
この場合、固定相に固定化する第１免疫体と標識免疫体
として用いる第２免疫体には、同一の抗体を用いてもよ
いし、異なる抗原決定基を認識する二種の抗体を用いて
もよい。免疫体としてモノクローナル抗体を使用しても
よい。また、抗体を被検物質とする場合には、対応する
抗原を免疫体として用いることができる。この場合、第
１免疫体および第２免疫体として、対応する抗原と被検
物質である抗体に対する抗抗体（抗免疫グロブリン抗
体）の組み合わせを用いてもよい。

【００１１】本発明において用いる吸水性基材は、被検
物質を含有する被検液、例えば、血清や血液、尿、便、
唾液などを吸収できるもの、あるいはこれらを緩衝液に
よって希釈してなる希釈液を吸収するものであれば特に
限定されない。本発明においては、被検液中の被検物質
が標識免疫体や固定相の第１免疫体と充分な反応を行う
ための時間を確保できるような吸水性基材が用いられ
る。吸水性基材が吸水性に劣る場合には、後述するよう
に被検液が標識相および固定相に到達するのに長時間を
要し、その結果、迅速な測定を行うことができない。一
方、吸水性基材の吸水性があまりに高すぎる場合には、
被検液中の被検物質が標識免疫体や固定相の第１免疫体
と充分な反応を行うための必要な時間が不足するので、
正確な測定を行うことが困難となる。好ましい具体例と
しては、例えば不織布、濾紙、ガラス繊維布、ガラスフ
ィルター、ニトロセルロースフィルター、多孔質材料な
どが挙げられる。これらの基材は適度な吸水速度を有す
ると共に、着色粒子が凝集して発色した際の目視確認性
に優れるものである。

【００１２】以上の点を考慮すると、本発明における吸
水性基材の吸水性の程度は、５ｍｍ幅の短冊状に裁断し
た吸水性基材の片端部を水に浸漬し、１分間経過後の吸
水距離が０．５〜５ｃｍ程度のものが好ましい。

【００１３】また、これらの基材の吸水性を調整するた
めに、基材の表面に親水性重合体を被覆し、あるいは含
浸させることもできる。さらに、本発明においては吸水
性基材として同一材料からなる基材を用いてもよいし、
あるいは異種の材料からなるものを任意の接着手段によ
って接合して得た連続した基材を用いることもできる。

【００１４】本発明において、吸水性基材の形状は、被
検液を展開できる形状であれば特に限定されるものでは
なく、例えば、矩形のシート状（片状）やロッド状など
が好ましい。

【００１５】本発明における標識免疫体としては、着色
粒子に被検物質と結合することができる第２免疫体を結
合したものを用いる。ここで用いる着色粒子としては、
肉眼で着色が検出可能なものであれば制限はなく、例え
ば金、銀、銅などの金属からなるコロイド粒子、スダン
ブルーやスダンレッドＩＶ、スダンＩＩＩ、オイルオレ
ンジ、キニザリングリーンなどに代表される顔料や染料
などでラテックスを着色した着色ラテックスなどを用い
ることができる。目視確認性の点からは、金コロイドや
青色や赤色、緑色、オレンジ色に着色した着色ラテック
スを用いることが好ましく、さらに好ましくは青色や赤
色などで着色した水分散型高分子重合体粒子からなる着
色ラテックスを用いることが分散安定性や被検物質の検
出感度の調整し易さなどの点から望ましい。

【００１６】上記着色粒子の粒径としては保存安定性や
調製しやすさの点から、０．０１〜３μｍ、好ましくは
０．０５〜０．５μｍの範囲とする。粒径があまりに小
さすぎると、１粒子当りの着色の程度が少ないので、固
定相に結合しても発色の程度が悪く、目視確認性に劣る
ようになる。また、粒径が大きすぎると、着色粒子が僅
かに凝集しただけで吸水性基材に目詰まりを起こして吸
水性を低下させたり、非特異発色を起こしたりすること
がある。

【００１７】このような着色粒子に第２免疫体を結合す
る方法としては、従来からよく知られている方法、例え
ば共有結合法や物理吸着法、イオン結合法などを用いる
ことができるが、結合後の免疫体の脱離がなく安定であ
る点から共有結合法を採用することが好ましい。本発明
においては被検液中の複数の被検物質を検出するため
に、対応する複数の免疫体をそれぞれ別の着色粒子に結
合させるが、個の際に用いる着色粒子は同一色であって
も異なった色であってもよい。

【００１８】本発明において上記のような着色粒子−第
２免疫体からなる標識免疫体が被検液と接触したときに
水との接触によって吸水性基材から脱離しうるように、
標識免疫体を吸水性基材に含有させる。含有方法として
は、例えば標識免疫体の溶液を吸水性基材に塗布したの
ち、適当な条件にて乾燥させる。乾燥の一態様として凍
結乾燥させることもできる。その他の方法としては、水
溶性重合体あるいはサッカロースの溶液中に標識免疫体
を分散させ、この分散液を吸水性基材に塗布したのち、
乾燥させる方法を挙げることができる。この方法は、本
発明品を調製するのに有利な方法である。被検液と接触
したときに、水溶性重合体またはサッカロースが容易に
水溶化し、標識免疫体が速やかに基材から脱離して被検
物質と反応する。また、水溶性重合体あるいはサッカロ
ースの濃度を調整することによって、適当な粘度の溶液
を得ることができるので、吸水性基材の所定の領域に標
識免疫体を含有させるのが容易であるのみならず、乾燥
に際して標識免疫体の凝集や変性が生じにくく、さら
に、乾燥後に標識免疫体が吸水性基材から脱離しにくい
からである。

【００１９】上記のようにして用いる水溶性重合体とし
ては、例えばポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコ
ール、ポリエチレングリコール、セルロースエーテル
（例えば、メチルセルロース、エチルセルロース、カル
ボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロー
ス、オキシエチルセルロース、シアンエチルセルロース
など）、ゼラチンなどが好ましく用いられる。

【００２０】次に、本発明において第１免疫体を吸水性
基材上に固定化する方法（固定相の作製方法）も、特に
限定されるものではないが、従来から知られている物理
吸着法や共有結合法によるのが好適であり、特に、免疫
体が基材から脱離しにくい共有結合法によるのが好まし
い。吸水性基材が上記共有結合法のための官能基を有し
ないときは、例えば適宜の官能基を有する重合体を基材
にし、その吸水性を阻害しない程度に付着させる。ま
た、第１免疫体および親水性重合体を含む溶液を吸水性
基材に塗布したのち、上記親水性重合体を凝固させる凝
固溶剤に浸漬することで固定相を作製することもでき
る。上記親水性重合体としては、ヒドロキプロピルメチ
ルセルロース、ポリビニルアルコール、ヒドロキシエチ
ルセルロースなどが用いられる。上記凝固溶剤としては
アセトン、エタノール、メタノール、エーテルなどを用
いることができる。

【００２１】本発明における固定相は上記のようにして
吸水性基材上に複数の第１免疫体を固定化したものであ
るが、被検液の吸液によって標識相側から移動してきた
第２免疫体固定化着色粒子を固定相で捕捉して各被検物
質毎に発色させるためには、各第１免疫体は少なくとも
１ｍｍ以上、好ましくは５ｍｍ以上の間隔を設けて吸水
性基材上に固定化することが各発色が混じり合わないの
で望ましい。

【００２２】また、本発明においては上記固定相と標識
相の間の距離は、１〜６ｃｍ、好ましくは３〜４ｃｍ程
度とする。距離があまりに遠すぎると、固定相まで被検
液が到達しなかったり、発色感度が強すぎたり、測定に
時間がかかったりするという問題点を生じる恐れがあり
好ましくない。一方、距離が近すぎると固定相での発色
が均一でなく、まばらになったり、発色感度が低すぎる
という問題が生じる恐れがある。

【００２３】本発明の免疫学的検査キットを用いて免疫
学的検査を行うには、まず標識相の一端から検査すべき
被検液を吸収させる。被検液は吸水性基材中を移動して
標識相に到達し、標識免疫体を基材から脱離させる。こ
のとき被検液中に含まれる複数の被検物質は各標識免疫
体と結合し、標識免疫体と被検物質との複合体をそれぞ
れ形成する。

【００２４】次いで、形成された複合体は被検液の移動
と共に吸水性基材中を移動し、固定相に到達する。固定
相では移動してきた複合体は固定相に固定された第１免
疫体とさらに結合し、新たに標識免疫体（着色粒子−第
２免疫体）−被検物質−第１免疫体からなる標識免疫複
合体を形成して、固定相上に固定化結合される。このよ
うに固定相に固定化されることによって、標識免疫体を
構成する着色粒子は一箇所に集合、凝集し、明らかな発
色となり被検物質の存在を目視確認できるのである。本
発明では固定相には複数の被検物質に対応する第１免疫
体をそれぞれ異なった位置に固定しているので、一度に
複数の被検物質の存在を確認することができるのであ
る。

【００２５】本発明の免疫学的検査キットは以上のよう
な構成からなるので、ヒトヘモグロビンやヒトトランス
フェリンを糞便中の血液マーカーとして検出して便潜血
検査を行ったり、尿中の微量アルブミンやトランスフェ
リンを検出して糖尿病性腎症の診断を行ったりすること
ができる。

【００２６】

【実施例】以下に本発明の実施例を挙げ、さらに具体的
に説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定され
るものではない。

【００２７】実施例１１）標識免疫体Ａの作製 スチレン５０ｇ、アクリル酸０．５ｇ、トリエチレング
リコールジメタクリレート０．２ｇ、蒸留水４４０ｇか
らなる混合液を窒素ガス雰囲気下で７５℃に維持、撹拌
しながら、重合開始剤としての過硫酸カリウム０．２５
ｇを蒸留水１０ｇに溶解した水溶液を加え、１０時間重
合を行った。その結果、平均粒径０．２２μｍの水分散
型高分子重合体粒子の水分散液を得た。得られた水分散
液をアルカリ性水溶液（１Ｎ−水酸化ナトリウム水溶
液）、酸性水溶液（１Ｎ−塩酸）、蒸留水の順に遠心洗
浄して、固形分濃度１０重量％の水分散型高分子重合体
粒子の水分散液を調製した。

【００２８】一方、スダンブルー（東京化成社製）０．
２ｇをトルエン２０ｍｌに溶解し、さらにドデシル硫酸
ナトリウム０．２ｇおよび蒸留水１００ｍｌを加え、超
音波分散機で乳化分散させて着色液を得た。得られた着
色液に前記にて調製した固形分濃度１０重量％の水分散
型高分子重合体粒子の水分散液を３０ｍｌ添加し、室温
下で２４時間撹拌した。

【００２９】次いで、エバポレータによってトルエンを
留去したのち、０．０１Ｍ硼酸緩衝液（ｐＨ７．５）に
て遠心洗浄を行い、固形分濃度が５重量％となるように
調整した。

【００３０】この溶液５０ｍｌに、１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
水溶液（濃度１０ｍｇ／ｍｌ）５ｍｌ、および０．０３
Ｍ ｍ−キシレンジアミン水溶液５０ｍｌを加え、室温
下で５時間反応させた。この液を７５℃で５時間加熱処
理したのち、前記と同じ硼酸緩衝液にて遠心洗浄を行
い、固形分濃度が１重量％となるように調整し、スダン
ブルーにて着色されキシレンジアミンをスペーサとする
着色粒子の水分散液を調製した。

【００３１】この水分散液１０ｍｌにグルタルアルデヒ
ド水溶液（濃度０．１ｍｇ／ｍｌ）１ｍｌを加え、室温
下で２時間反応させたのち、前記と同じ硼酸緩衝液にて
遠心洗浄し、固形分濃度が１重量％となるように調整し
た。

【００３２】次に、この分散液１０ｍｌに抗ヒトヘモグ
ロビン抗体（ウサギＩｇＧ、濃度１０ｍｇ／ｍｌ）２ｍ
ｌを加え、１０℃にて２４時間撹拌した。そして、前記
と同じ硼酸緩衝液を用いて遠心洗浄し、固形分濃度を１
重量％となるように再分散させ、共有結合法にて抗体を
結合させた標識免疫体Ａを作製した。

【００３３】２）標識免疫体Ｂの作製 スダンレッドＩＶ（東京化成社製）０．２ｇをトルエン
２０ｍｌに溶解し、さらにドデシル硫酸ナトリウム０．
２ｇおよび蒸留水１００ｍｌを加え、超音波分散機で乳
化分散させて着色液を得た。得られた着色液に前記標識
免疫体Ａの作製の項にて調製した固形分濃度１０重量％
の水分散型高分子重合体粒子の水分散液を２０ｍｌ添加
し、室温下で２４時間撹拌した。

【００３４】次いで、エバポレータによってトルエンを
留去したのち、０．０１Ｍ硼酸緩衝液（ｐＨ７．５）に
て遠心洗浄を行い、固形分濃度が５重量％となるように
調整した。

【００３５】この溶液５０ｍｌに、１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
水溶液（濃度１０ｍｇ／ｍｌ）５ｍｌ、および０．０３
Ｍ ｍ−キシレンジアミン水溶液５０ｍｌを加え、室温
下で５時間反応させた。この液を７５℃で５時間加熱処
理したのち、前記と同じ硼酸緩衝液にて遠心洗浄を行
い、固形分濃度が１重量％となるように調整し、スダン
レッドＩＶにて着色されキシレンジアミンをスペーサと
する着色粒子の水分散液を調製した。

【００３６】この水分散液１０ｍｌにグルタルアルデヒ
ド水溶液（濃度０．１ｍｇ／ｍｌ）１ｍｌを加え、室温
下で２時間反応させたのち、前記と同じ硼酸緩衝液にて
遠心洗浄し、固形分濃度が１重量％となるように調整し
た。

【００３７】次に、この分散液１０ｍｌに抗ヒトトラン
スフェリン抗体（ウサギＩｇＧ、濃度１０ｍｇ／ｍｌ）
２ｍｌを加え、１０℃にて２４時間撹拌した。そして、
前記と同じ硼酸緩衝液を用いて遠心洗浄し、固形分濃度
を１重量％となるように再分散させ、共有結合法にて抗
体を結合させた標識免疫体Ｂを作製した。

【００３８】３）固定相および標識相の作製（本発明品
の作製、図１および図２参照） 抗ヒトヘモグロビン抗体（ウサギＩｇＧ）を、０．１Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）にて希釈し、ヒドロキシプ
ロピルメチルセルロース３重量％を含み、最終濃度０．
５ｍｇ／ｍｌの水溶液となるように調製した。

【００３９】この水溶液をガラスフィルター（東洋ろ紙
社製、ＧＡ５５、５×１００ｍｍ）の一端から１．５ｃ
ｍの箇所に１０μｌ塗布して固定相Ａを作製した。

【００４０】また、抗ヒトトランスフェリン抗体（ウサ
ギＩｇＧ）を、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に
て希釈し、ヒドロキシプロピルメチルセルロース３重量
％を含み、最終濃度２ｍｇ／ｍｌの水溶液となるように
調製した。

【００４１】この水溶液を上記固定相Ａを形成したガラ
スフィルターに、同じ一端から２ｃｍの箇所に１０μｌ
塗布して固定相Ｂを形成した。

【００４２】固定相Ｂを形成したのち、直ちにこのガラ
スフィルターをアセトン中に浸漬して室温下で３時間放
置し、アセトン中から取り出した。そして、アセトンを
自然蒸発させて抗ヒトヘモグロビン抗体、および抗ヒト
トランスフェリン抗体を吸水性基材上にそれぞれ固定化
した固定相を作製した。

【００４３】一方、５重量％ポリビニルピロリドン（粘
度平均分子量２５０００）水溶液１ｍｌに、前記１）お
よび２）にて調製した標識免疫体ＡおよびＢを、それぞ
れ０．１ｍｌ加えて充分に混合したのち、この溶液１０
μｌを上記にて固定相を形成したガラスフィルターの固
定相の位置から４０〜５０ｍｍの位置に塗布し、これを
デシケータ内で２日間乾燥して、固定相（２箇所）およ
び標識相（１箇所）をガラスフィルター上に形成した本
発明の免疫学的検査キットを得た。

【００４４】４）ヒトヘモグロビンおよびヒトトランス
フェリンの検出 被検物質としてのヒトヘモグロビン抗原およびヒトトラ
ンスフェリン抗原を生理食塩水に溶解して濃度調整を行
い、これを糞便中に混合して検体を調製した。

【００４５】次いで、上記のようにして調製した検体
（糞便）１０ｍｇを０．２Ｍ−塩化アンモニウム緩衝液
（ｐＨ７．５）２ｍｌに溶解させて被検液とし、この被
検液を上記にて得た本発明品の標識相側の一端からガラ
スフィルターに吸収させて、１０分後の固定相の発色を
目視にて観察した。

【００４６】その結果を下記表１に示す。

【００４７】

【表１】

【００４８】実施例２１）標識免疫体Ａの作製 免疫体として抗ヒトヘモグロビン抗体の代わりに抗ヒト
アルブミン抗体（ウサギＩｇＧ、濃度１０ｍｇ／ｍｌ）
を用いた以外は、実施例１と同様の手順および使用量で
標識免疫体Ａを作製した。

【００４９】２）標識免疫体Ｂの作製 前記実施例１における標識免疫体Ｂと同じ。

【００５０】３）固定相および標識相の作製（本発明品
の作製） 抗ヒトアルブミン抗体（ウサギＩｇＧ）を、０．１Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７．４）にて希釈し、ヒドロキシプロ
ピルメチルセルロース３重量％を含み、最終濃度０．５
ｍｇ／ｍｌの水溶液となるように調製した。

【００５１】この水溶液を実施例１と同様にしてガラス
フィルター（東洋ろ紙社製、ＧＡ５５、５×１００ｍ
ｍ）の一端から１．５ｃｍの箇所に１０μｌ塗布して固
定相Ａを作製した。

【００５２】また、抗ヒトトランスフェリン抗体（ウサ
ギＩｇＧ）を、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に
て希釈し、ヒドロキシプロピルメチルセルロース３重量
％を含み、最終濃度２ｍｇ／ｍｌの水溶液となるように
調製した。

【００５３】この水溶液を上記固定相Ａを形成したガラ
スフィルターに、同じ一端から２ｃｍの箇所に１０μｌ
塗布して固定相Ｂを形成した。

【００５４】固定相Ｂを形成したのち、直ちにこのガラ
スフィルターをアセトン中に浸漬して室温下で３時間放
置し、アセトン中から取り出した。そして、アセトンを
自然蒸発させて抗ヒトヘモグロビン抗体、および抗ヒト
トランスフェリン抗体を吸水性基材上にそれぞれ固定化
した固定相を作製した。

【００５５】一方、標識相の形成方法は前記実施例１と
同様に行った。

【００５６】４）ヒトアルブミンおよびヒトトランスフ
ェリンの検出 被検物質としてのヒトアルブミン抗原およびヒトトラン
スフェリン抗原を尿に溶解し、濃度調整を行い検体を調
製した。

【００５７】次いで、上記のようにして調製した検体
（尿）２ｍｌを被検液とし、上記にて得た本発明品の標
識相側の一端からガラスフィルターに吸収させて、１０
分後の固定相の発色を目視にて観察した。その結果を下
記表２に示す。

【００５８】

【表２】

【００５９】比較例１ 実施例１にて調製した標識免疫体を別々のガラスフィル
ター（吸水性基材）上に塗布して標識相を形成した。形
成位置は実施例１と同じ位置とした。

【００６０】一方、固定相は上記標識相と反対側の一端
から１．５ｃｍの位置に実施例１と同様にして塗布して
形成した。

【００６１】また、被検液として、ヒトヘモグロビンま
たはヒトトランスフェリンを含有する糞便溶液を実施例
１と同様にして調製し、これを上記のようにして別々に
作製したガラスフィルター（標識相および固定相を形
成）を用いて被検液（糞便）中のヒトヘモグロビンおよ
びヒトトランスフェリンの検出を行った。

【００６２】結果を表３に示す。

【００６３】

【表３】

【００６４】

【発明の効果】本発明の免疫学的検査キットは、上記各
実施例および比較例の結果からも明らかなように、複数
の被検物質を含む検体（被検液）であっても、簡便に同
時分析することができ、それぞれ別々に分析する場合と
同程度の精度で検出することができるものである。ま
た、判定は発色によって行うことができるので、目視確
認により定性的または半定性的な分析ができると共に、
光学機器を利用することによって定量的分析も可能とな
るのである。

【図面の簡単な説明】

【図１】 本発明の免疫学的検査キットの一実例を示す
平面図である。

【図２】 図１に示す免疫学的検査キットのＸ−Ｘ’断
面図である。

【符号の説明】

１ 吸水性基材 ２ 固定相Ａ ３ 固定相Ｂ ４ 標識相

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 吸水性基材上に、被検物質と結合しうる
   第１免疫体を固定化した固定相と、着色粒子に前記被検
   物質と結合しうる第２免疫体を結合した標識免疫体を水
   との接触によって前記基材から脱離しうるように含有さ
   せた標識相とを設けてなり、前記標識相側の一端から被
   検液を吸収させ、被検物質と標識免疫体との複合体を前
   記固定相にて第１免疫体に結合させる免疫学的検査キッ
   トであって、前記固定相が被検液中に含まれる複数種の
   被検物質とそれぞれ結合しうる複数の第１免疫体を吸水
   性基材上の異なる位置に固定化してなることを特徴とす
   る免疫学的検査キット。
2. 【請求項２】 着色粒子に共有結合を介して第２免疫体
   が結合されている請求項１記載の免疫学的検査キット。
3. 【請求項３】 吸水性基材が矩形状である請求項１記載
   の免疫学的検査キット。
4. 【請求項４】 固定相が吸水性基材中の被検液の移動方
   向に直交するように帯状に固定化されているか、または
   スポット状に固定化されている請求項３記載の免疫学的
   検査キット。