JPH09224653A - バニリン高生産性酵母 - Google Patents
バニリン高生産性酵母Info
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- JPH09224653A JPH09224653A JP6161096A JP6161096A JPH09224653A JP H09224653 A JPH09224653 A JP H09224653A JP 6161096 A JP6161096 A JP 6161096A JP 6161096 A JP6161096 A JP 6161096A JP H09224653 A JPH09224653 A JP H09224653A
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- Japan
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- vanillin
- yeast
- producing
- strain
- cerevisiae
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 酒類製造、特にワイン製造の分野において、
その製造工程の簡略化、新商品開発への応用が期待され
るバニリン高生産性酵母の提供。 【解決手段】 サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃ
ｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）に属する
酵母を変異処理し、通常では生育できない濃度のバニリ
ンを含む培地で生育できるようになったバニリン耐性株
を分離するか、または同じく変異処理し、増殖阻害が起
こる濃度のバニリンを含む培地で増殖の遅いバニリン感
受性株を分離して得られたバニリン耐性変異株および感
受性変異株からバニリン高生産性酵母を分離する。
その製造工程の簡略化、新商品開発への応用が期待され
るバニリン高生産性酵母の提供。 【解決手段】 サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃ
ｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）に属する
酵母を変異処理し、通常では生育できない濃度のバニリ
ンを含む培地で生育できるようになったバニリン耐性株
を分離するか、または同じく変異処理し、増殖阻害が起
こる濃度のバニリンを含む培地で増殖の遅いバニリン感
受性株を分離して得られたバニリン耐性変異株および感
受性変異株からバニリン高生産性酵母を分離する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は酒類製造に関する新
規な酵母変異株、それら酵母の育種方法およびそれら酵
母を用いた酒類の製造方法に関する。さらに詳細にはバ
ニリン高生産能を有するサッカロマイセス・セレビシエ
（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａ
ｅ）に属する酵母変異株、それら酵母の育種方法および
それら酵母を用いた酒類、特にワインの製造方法に関す
る。
規な酵母変異株、それら酵母の育種方法およびそれら酵
母を用いた酒類の製造方法に関する。さらに詳細にはバ
ニリン高生産能を有するサッカロマイセス・セレビシエ
（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａ
ｅ）に属する酵母変異株、それら酵母の育種方法および
それら酵母を用いた酒類、特にワインの製造方法に関す
る。
【０００２】
【発明の背景】酒類の香気成分はその品質を決定する重
要な要因の一つであり、それらのあるものは酒類製造に
用いられる酵母サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃ
ｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）により
発酵期間中に生成され、またあるものは発酵後の貯蔵の
段階で生成される。特に樽を用いて貯蔵した場合、特有
の芳香（樽香）が生じ、その香気の主成分の一つがバニ
リンであることが知られている。そのため発酵期間中に
バニリンを著量生産することができれば、樽貯蔵の省略
あるいは貯蔵期間の短縮など、製造工程が簡略化できる
可能性がある。また一方で酒類の商品開発に際しては、
特徴ある品質の商品が望まれている。香気成分に特徴を
有するものもその一つであり、これらの商品を生産する
ために特定の香気成分を生産する能力を高めた酵母の開
発もその手段の一つとなる。以上のことから樽香の主成
分の一つであるバニリンを生産する能力を高めた酵母菌
株の育種は酒類の製造分野において製造工程の簡略化あ
るいは新商品開発への貢献が期待される。
要な要因の一つであり、それらのあるものは酒類製造に
用いられる酵母サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃ
ｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）により
発酵期間中に生成され、またあるものは発酵後の貯蔵の
段階で生成される。特に樽を用いて貯蔵した場合、特有
の芳香（樽香）が生じ、その香気の主成分の一つがバニ
リンであることが知られている。そのため発酵期間中に
バニリンを著量生産することができれば、樽貯蔵の省略
あるいは貯蔵期間の短縮など、製造工程が簡略化できる
可能性がある。また一方で酒類の商品開発に際しては、
特徴ある品質の商品が望まれている。香気成分に特徴を
有するものもその一つであり、これらの商品を生産する
ために特定の香気成分を生産する能力を高めた酵母の開
発もその手段の一つとなる。以上のことから樽香の主成
分の一つであるバニリンを生産する能力を高めた酵母菌
株の育種は酒類の製造分野において製造工程の簡略化あ
るいは新商品開発への貢献が期待される。
【０００３】
【従来の技術】酒類製造用酵母に対して種々の香気成分
を高める試みは既に報告されている。特開昭６２−６６
６９号公報には香気成分としてイソアミルアルコールお
よび酢酸イソアミルを、特開平３−９４６７０号公報に
は香気成分としてβ−フェネチルアルコールおよび酢酸
β−フェネチルをそれぞれ多量に生成する酵母変異株が
報告されているが、バニリンを生産する能力を高めた酵
母変異株を得る目的で酵母を育種した例はない。
を高める試みは既に報告されている。特開昭６２−６６
６９号公報には香気成分としてイソアミルアルコールお
よび酢酸イソアミルを、特開平３−９４６７０号公報に
は香気成分としてβ−フェネチルアルコールおよび酢酸
β−フェネチルをそれぞれ多量に生成する酵母変異株が
報告されているが、バニリンを生産する能力を高めた酵
母変異株を得る目的で酵母を育種した例はない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、サッカロマ
イセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃ
ｅｒｅｖｉｓｉａｅ）に属するバニリン高生産性の酵母
変異株およびそれら酵母変異株の育種方法ならびにそれ
ら酵母の変異株を用いた酒類の新規な製造方法を提供す
るものである。
イセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃ
ｅｒｅｖｉｓｉａｅ）に属するバニリン高生産性の酵母
変異株およびそれら酵母変異株の育種方法ならびにそれ
ら酵母の変異株を用いた酒類の新規な製造方法を提供す
るものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するため、鋭意研究を進めた結果、従来の酵母に
比べ著しく多量のバニリンを生産する酵母変異株を分離
できる二つの育種方法を開発し、これらの方法で得られ
た酵母変異株の使用により、香気に優れた特徴をもつ酒
類の製造に成功したものである。
を解決するため、鋭意研究を進めた結果、従来の酵母に
比べ著しく多量のバニリンを生産する酵母変異株を分離
できる二つの育種方法を開発し、これらの方法で得られ
た酵母変異株の使用により、香気に優れた特徴をもつ酒
類の製造に成功したものである。
【０００６】本発明のバニリン高生産性酵母を分離育種
する第一の方法は、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓ
ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）に
属する酵母を変異処理し、通常の酵母では生育できない
濃度、すなわち約８ｍＭ以上のバニリンを含む培地中で
生育できるバニリン耐性株を分離し、さらに耐性変異株
の中からバニリン高生産性変異株を分離するものであ
る。具体的には親株の酵母を変異処理した後、バニリン
を８〜２０ｍＭ含む固体培地に接種し、約２５℃で約１
０日間培養し、生じたコロニーのうち、生育の良好なバ
ニリン耐性変異株を分離する。これらの分離株を液体培
地に接種５〜１０日間培養して培養液中のバニリンを定
量することにより、バニリン耐性であり、バニリン高生
産性の酵母変異株を取得できる。
する第一の方法は、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓ
ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）に
属する酵母を変異処理し、通常の酵母では生育できない
濃度、すなわち約８ｍＭ以上のバニリンを含む培地中で
生育できるバニリン耐性株を分離し、さらに耐性変異株
の中からバニリン高生産性変異株を分離するものであ
る。具体的には親株の酵母を変異処理した後、バニリン
を８〜２０ｍＭ含む固体培地に接種し、約２５℃で約１
０日間培養し、生じたコロニーのうち、生育の良好なバ
ニリン耐性変異株を分離する。これらの分離株を液体培
地に接種５〜１０日間培養して培養液中のバニリンを定
量することにより、バニリン耐性であり、バニリン高生
産性の酵母変異株を取得できる。
【０００７】第二の方法は、同じく変異処理した酵母
を、増殖阻害の起こる濃度のバニリンを含む培地中で培
養し、増殖の遅いバニリン感受性変異株を分離し、さら
に感受性株の中からバニリン高生産性変異株を分離する
ものである。具体的には、親株の酵母を変異処理した
後、バニリンを含まない固体培地に接種し、約２５℃で
約１日間培養し、コロニーを形成させる。次にバニリン
を５〜７ｍＭ含む固体培地を調製し、これにレプリカし
て、さらに約２５℃で約１〜２日間培養する。バニリン
含有培地でコロニー形成の遅い変異株を取得し、さらに
バニリン含有培地で継代培養して増殖の遅いバニリン感
受性変異株を分離する。これらの分離株を液体培地に接
種５〜１０日間培養して培養液中のバニリンを定量する
ことにより、バニリン感受性であり、バニリン高生産性
の酵母変異株を取得できる。
を、増殖阻害の起こる濃度のバニリンを含む培地中で培
養し、増殖の遅いバニリン感受性変異株を分離し、さら
に感受性株の中からバニリン高生産性変異株を分離する
ものである。具体的には、親株の酵母を変異処理した
後、バニリンを含まない固体培地に接種し、約２５℃で
約１日間培養し、コロニーを形成させる。次にバニリン
を５〜７ｍＭ含む固体培地を調製し、これにレプリカし
て、さらに約２５℃で約１〜２日間培養する。バニリン
含有培地でコロニー形成の遅い変異株を取得し、さらに
バニリン含有培地で継代培養して増殖の遅いバニリン感
受性変異株を分離する。これらの分離株を液体培地に接
種５〜１０日間培養して培養液中のバニリンを定量する
ことにより、バニリン感受性であり、バニリン高生産性
の酵母変異株を取得できる。
【０００８】いずれの方法においても酵母の変異手段と
しては、紫外線、放射線を照射する物理的手法、エチル
メタンスルホン酸、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニ
トロソグアニジン、４−ニトロソキノリン、ブロモウラ
シル、亜硝酸、アクリジン系化合物、ウレタンなどの変
異剤溶液に接触させる化学的手法のいずれの手法も使用
できる。
しては、紫外線、放射線を照射する物理的手法、エチル
メタンスルホン酸、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニ
トロソグアニジン、４−ニトロソキノリン、ブロモウラ
シル、亜硝酸、アクリジン系化合物、ウレタンなどの変
異剤溶液に接触させる化学的手法のいずれの手法も使用
できる。
【０００９】また、変異処理にかける親株となる酵母
は、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏ
ｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）に属する酵母であ
ればよく、ワイン酵母、清酒酵母、焼酎酵母、ビール酵
母などいずれの酵母でも樽香を有するバニリン高生産性
酵母変異株を得ることができる。
は、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏ
ｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）に属する酵母であ
ればよく、ワイン酵母、清酒酵母、焼酎酵母、ビール酵
母などいずれの酵母でも樽香を有するバニリン高生産性
酵母変異株を得ることができる。
【００１０】このようにして得られるバニリン高生産性
酵母を例示すれば、例えばバニリン耐性を有する変異株
として、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａ
ｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）Ｙ−７６７株
が挙げられる。本株はワイン酵母Ｋ−１株（ラルモンド
社製）を親株として、エチルメタンスルホン酸処理によ
り得られたバニリン耐性株であり、平成８年１月１１日
付で工業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ
−１５３８８として寄託されている。またバニリン感受
性変異株としては、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓ
ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）Ｙ
−７６８株が挙げられる。本株はワイン酵母Ｋ−１株
（ラルモンド社製）を親株として、エチルメタンスルホ
ン酸処理により得られたバニリン感受性株であり、平成
８年１月１１日付で工業技術院生命工学工業技術研究所
にＦＥＲＭ Ｐ−１５３８９として寄託されている。
酵母を例示すれば、例えばバニリン耐性を有する変異株
として、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａ
ｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）Ｙ−７６７株
が挙げられる。本株はワイン酵母Ｋ−１株（ラルモンド
社製）を親株として、エチルメタンスルホン酸処理によ
り得られたバニリン耐性株であり、平成８年１月１１日
付で工業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ
−１５３８８として寄託されている。またバニリン感受
性変異株としては、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓ
ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）Ｙ
−７６８株が挙げられる。本株はワイン酵母Ｋ−１株
（ラルモンド社製）を親株として、エチルメタンスルホ
ン酸処理により得られたバニリン感受性株であり、平成
８年１月１１日付で工業技術院生命工学工業技術研究所
にＦＥＲＭ Ｐ−１５３８９として寄託されている。
【００１１】これらのバニリン高生産性酵母を用いて、
ワイン、清酒、焼酎、ビールなどを製造するには従来一
般的に行われている製造方法に従って行えばよく、樽香
を有する特徴的な製品を製造することができる。
ワイン、清酒、焼酎、ビールなどを製造するには従来一
般的に行われている製造方法に従って行えばよく、樽香
を有する特徴的な製品を製造することができる。
【００１２】
【実施例】以下、本発明を実施例によってさらに詳細に
説明する。
説明する。
【００１３】参考例１ バニリンによる増殖阻害濃度の
測定 通常の酵母におけるバニリンによる増殖阻害濃度を調べ
るため、ワイン酵母Ｋ−１株（ラルモンド社製）を用い
て試験を行った。まずＹＭ液体培地（グルコース１．０
％、酵母エキス０．３％、麦芽エキス０．３％、ペプト
ン０．５％、ｐＨ３．５）１０ｍｌにワイン酵母Ｋ−１
株を一白金耳接種し、２５℃にて１日間振とう培養し
た。得られた培養液を約１０4倍に希釈し、バニリンを
０〜８ｍＭ含むＹＭ寒天培地（グルコース１．０％、酵
母エキス０．３％、麦芽エキス０．３％、ペプトン０．
５％、寒天２．０％、ｐＨ３．５）に各々菌数が約１０
3個／プレートとなるよう塗布した。これを２５℃で３
日間培養し、コロニーの生育度を評価した。
測定 通常の酵母におけるバニリンによる増殖阻害濃度を調べ
るため、ワイン酵母Ｋ−１株（ラルモンド社製）を用い
て試験を行った。まずＹＭ液体培地（グルコース１．０
％、酵母エキス０．３％、麦芽エキス０．３％、ペプト
ン０．５％、ｐＨ３．５）１０ｍｌにワイン酵母Ｋ−１
株を一白金耳接種し、２５℃にて１日間振とう培養し
た。得られた培養液を約１０4倍に希釈し、バニリンを
０〜８ｍＭ含むＹＭ寒天培地（グルコース１．０％、酵
母エキス０．３％、麦芽エキス０．３％、ペプトン０．
５％、寒天２．０％、ｐＨ３．５）に各々菌数が約１０
3個／プレートとなるよう塗布した。これを２５℃で３
日間培養し、コロニーの生育度を評価した。
【００１４】
【表１】
【００１５】表１に示したとおりバニリン濃度が６ｍＭ
に達すると増殖阻害活性が認められ、８ｍＭでは全く増
殖が認められなかった。
に達すると増殖阻害活性が認められ、８ｍＭでは全く増
殖が認められなかった。
【００１６】実施例１ バニリン耐性株の取得 ＹＭ液体培地１０ｍｌにワイン酵母Ｋ−１株を一白金耳
接種し、２５℃にて１日間振とう培養した。得られた培
養液を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分）して集菌
し、１／３０Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）にて２回洗
浄した。これを２％グルコースを含む１／３０Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）１０ｍｌに懸濁し、エチルメタン
スルホン酸０．３ｍｌを添加して３０℃で５０分間ゆっ
くり振とうして変異処理を行った。変異処理後の生存率
は、９８％であった。処理した菌体を０．２Ｍチオ硫酸
ナトリウム１０ｍｌで１回、滅菌水１０ｍｌで２回洗浄
した後、１０ｍｌの滅菌水に懸濁し、その５００μｌ
（菌数約１．６×１０7個／ｍｌ）を、８ｍＭのバニリ
ンを含むＹＭ寒天培地１９枚へ各々塗布し、２５℃にて
１０日間培養した。出現したコロニーをさらに８ｍＭの
バニリンを含むＹＭ寒天培地に植継ぎ、生育の良好なも
の１７株をバニリン耐性変異株として取得した。
接種し、２５℃にて１日間振とう培養した。得られた培
養液を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分）して集菌
し、１／３０Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）にて２回洗
浄した。これを２％グルコースを含む１／３０Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）１０ｍｌに懸濁し、エチルメタン
スルホン酸０．３ｍｌを添加して３０℃で５０分間ゆっ
くり振とうして変異処理を行った。変異処理後の生存率
は、９８％であった。処理した菌体を０．２Ｍチオ硫酸
ナトリウム１０ｍｌで１回、滅菌水１０ｍｌで２回洗浄
した後、１０ｍｌの滅菌水に懸濁し、その５００μｌ
（菌数約１．６×１０7個／ｍｌ）を、８ｍＭのバニリ
ンを含むＹＭ寒天培地１９枚へ各々塗布し、２５℃にて
１０日間培養した。出現したコロニーをさらに８ｍＭの
バニリンを含むＹＭ寒天培地に植継ぎ、生育の良好なも
の１７株をバニリン耐性変異株として取得した。
【００１７】実施例２ バニリン感受性株の取得 ＹＭ液体培地１０ｍｌにワイン酵母Ｋ−１株を一白金耳
接種し、２５℃にて１日間振とう培養した。得られた培
養液を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分）して集菌
し、１／３０Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）にて２回洗
浄した。これを２％グルコースを含む１／３０Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）１０ｍｌに懸濁し、エチルメタン
スルホン酸０．３ｍｌを添加して３０℃で５０分間ゆっ
くり振とうして変異処理を行った。変異処理後の生存率
は、９８％であった。処理した菌体を０．２Ｍチオ硫酸
ナトリウム１０ｍｌで１回、滅菌水１０ｍｌで２回洗浄
した後、１０ｍｌの滅菌水に懸濁し、その５００μｌ
（菌数約１．６×１０7個／ｍｌ）を、１００ｍｌ三角
フラスコに入れたＹＭ液体培地５０ｍｌに接種し、２５
℃にて１日間ゆるやかに振とう培養した。得られた培養
液をＹＭ寒天培地９１枚へ菌数が１０3個／プレートと
なるよう各々塗布し、２５℃にて１日間培養した。これ
らの培地上で出現したコロニーを６ｍＭのバニリンを含
むＹＭ寒天培地にレプリカしてさらに２５℃で１．５日
間培養した。両寒天培地上のコロニーを比較し、６ｍＭ
のバニリンを含むＹＭ寒天培地上でコロニー形成の遅い
ものを取得し、さらにこれを６ｍＭのバニリンを含むＹ
Ｍ寒天培地に植継ぎ、増殖の遅い１９株をバニリン感受
性変異株として取得した。
接種し、２５℃にて１日間振とう培養した。得られた培
養液を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分）して集菌
し、１／３０Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）にて２回洗
浄した。これを２％グルコースを含む１／３０Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）１０ｍｌに懸濁し、エチルメタン
スルホン酸０．３ｍｌを添加して３０℃で５０分間ゆっ
くり振とうして変異処理を行った。変異処理後の生存率
は、９８％であった。処理した菌体を０．２Ｍチオ硫酸
ナトリウム１０ｍｌで１回、滅菌水１０ｍｌで２回洗浄
した後、１０ｍｌの滅菌水に懸濁し、その５００μｌ
（菌数約１．６×１０7個／ｍｌ）を、１００ｍｌ三角
フラスコに入れたＹＭ液体培地５０ｍｌに接種し、２５
℃にて１日間ゆるやかに振とう培養した。得られた培養
液をＹＭ寒天培地９１枚へ菌数が１０3個／プレートと
なるよう各々塗布し、２５℃にて１日間培養した。これ
らの培地上で出現したコロニーを６ｍＭのバニリンを含
むＹＭ寒天培地にレプリカしてさらに２５℃で１．５日
間培養した。両寒天培地上のコロニーを比較し、６ｍＭ
のバニリンを含むＹＭ寒天培地上でコロニー形成の遅い
ものを取得し、さらにこれを６ｍＭのバニリンを含むＹ
Ｍ寒天培地に植継ぎ、増殖の遅い１９株をバニリン感受
性変異株として取得した。
【００１８】実施例３ バニリン高生産性株の選抜 実施例１および実施例２において取得されたバニリン耐
性株１７株およびバニリン感受性株１９株の各株をそれ
ぞれ試験管に入れたＹＭ液体培地５ｍｌに一白金耳接種
し、２５℃にて１日間培養した。得られた培養液全量を
１００ｍｌ瓶に入れたブドウ濃縮果汁（白；２０°Ｂｒ
ｉｘ；Ｆｒｅｅ−ＳＯ2＝２１．３ｐｐｍ；ｐＨ３．
６；リン酸二アンモニウム０．１％、ビタミンミックス
５ｐｐｍ、酒石酸０．０５％を添加）４５ｍｌに添加
し、２０℃にて７日間発酵させ、得られたワインを官能
検査した。その結果、「樽香様の香りがある」と評価さ
れたものが、バニリン耐性株１７株中１株、バニリン感
受性株１９株中３株あった。これらの株により得られた
ワイン中のバニリン濃度を下記の分析方法により測定し
た。結果を表２に示す。
性株１７株およびバニリン感受性株１９株の各株をそれ
ぞれ試験管に入れたＹＭ液体培地５ｍｌに一白金耳接種
し、２５℃にて１日間培養した。得られた培養液全量を
１００ｍｌ瓶に入れたブドウ濃縮果汁（白；２０°Ｂｒ
ｉｘ；Ｆｒｅｅ−ＳＯ2＝２１．３ｐｐｍ；ｐＨ３．
６；リン酸二アンモニウム０．１％、ビタミンミックス
５ｐｐｍ、酒石酸０．０５％を添加）４５ｍｌに添加
し、２０℃にて７日間発酵させ、得られたワインを官能
検査した。その結果、「樽香様の香りがある」と評価さ
れたものが、バニリン耐性株１７株中１株、バニリン感
受性株１９株中３株あった。これらの株により得られた
ワイン中のバニリン濃度を下記の分析方法により測定し
た。結果を表２に示す。
【００１９】
【表２】
【００２０】表２に示したように親株に比べ、２０倍以
上のバニリンを生産する変異株が、バニリン耐性変異株
および感受性変異株について各々１株得られた。本発明
者らは、バニリン耐性変異株のｒ−１２株をサッカロマ
イセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃ
ｅｒｅｖｉｓｉａｅ）Ｙ−７６７株、バニリン感受性変
異株のｓ−１２株をサッカロマイセス・セレビシエ（Ｓ
ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）Ｙ
−７６８株と命名し、工業技術院生命工学工業技術研究
所に寄託した。
上のバニリンを生産する変異株が、バニリン耐性変異株
および感受性変異株について各々１株得られた。本発明
者らは、バニリン耐性変異株のｒ−１２株をサッカロマ
イセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃ
ｅｒｅｖｉｓｉａｅ）Ｙ−７６７株、バニリン感受性変
異株のｓ−１２株をサッカロマイセス・セレビシエ（Ｓ
ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）Ｙ
−７６８株と命名し、工業技術院生命工学工業技術研究
所に寄託した。
【００２１】なお、ワイン中のバニリンの定量は以下の
とおり行った。すなわち、試料１０ｍｌに１／３０Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７．０）２０ｍｌを加え、さらに水酸
化ナトリウム水溶液にてｐＨ７．０に調整した。これを
Ｃ１８ Ｓｅｐ−ｐａｋ カートリッジ（ウオーターズ
社製）に通液し、バニリンを吸着させた。１／３０Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７．０）４ｍｌで洗浄後、メタノール
２ｍｌで溶出し、高速液体クロマトグラフィー用分析試
料を調製した。これを下記の条件で分析し、バニリンを
定量した。この時バニリンの保持時間は約１７分であっ
た。下記の％は容量％を示す。
とおり行った。すなわち、試料１０ｍｌに１／３０Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７．０）２０ｍｌを加え、さらに水酸
化ナトリウム水溶液にてｐＨ７．０に調整した。これを
Ｃ１８ Ｓｅｐ−ｐａｋ カートリッジ（ウオーターズ
社製）に通液し、バニリンを吸着させた。１／３０Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７．０）４ｍｌで洗浄後、メタノール
２ｍｌで溶出し、高速液体クロマトグラフィー用分析試
料を調製した。これを下記の条件で分析し、バニリンを
定量した。この時バニリンの保持時間は約１７分であっ
た。下記の％は容量％を示す。
【００２２】 機器：ＬＣ−１０（島津製作所社製） カラム：Ｍｉｃｒｏｓｏｒｂ Ｃ１８ Ｓｈｏｒｔ−Ｏｎｅｓ ＨＰＬＣ ｃｏｌｕｍｎ（ＲＡＩＮＩＮ社製） 移動相：溶液Ａ・・・０．４％リン酸 溶液Ｂ・・・アセトニトリル−溶液Ａ（８０：２０） 溶出：０〜５分 ・・・溶液Ａ１００％ ５〜２０分・・・溶液Ａ８５％＋溶液Ｂ１５％ 温度：４０℃ 流速：１．０ｍｌ／ｍｌ 試料量：１０μｌ
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｎ 1/16 Ｃ１２Ｒ 1:865）
Claims (6)
- 【請求項１】 サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃ
ｃｈｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）に属するバ
ニリン高生産性酵母 - 【請求項２】 バニリン耐性を有する請求項１記載のバ
ニリン高生産性酵母 - 【請求項３】 バニリン感受性を有する請求項１記載の
バニリン高生産性酵母 - 【請求項４】 サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃ
ｃｈｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）に属する酵
母を変異処理し、通常では生育できない濃度のバニリン
を含む培地で生育できるようになったバニリン耐性株を
分離し、さらに耐性変異株からバニリン高生産性酵母を
分離する請求項１または請求項２記載のバニリン高生産
性酵母の分離育種方法 - 【請求項５】 サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃ
ｃｈｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）に属する酵
母を変異処理し、増殖阻害が起こる濃度のバニリンを含
む培地で増殖の遅いバニリン感受性株を分離し、さらに
感受性変異株からバニリン高生産性酵母を分離する請求
項１または請求項３記載のバニリン高生産性酵母の分離
育種方法 - 【請求項６】 請求項１〜３記載のバニリン高生産性酵
母を用いて発酵することを特徴とする酒類の製造方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6161096A JPH09224653A (ja) | 1996-02-26 | 1996-02-26 | バニリン高生産性酵母 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6161096A JPH09224653A (ja) | 1996-02-26 | 1996-02-26 | バニリン高生産性酵母 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09224653A true JPH09224653A (ja) | 1997-09-02 |
Family
ID=13176114
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6161096A Pending JPH09224653A (ja) | 1996-02-26 | 1996-02-26 | バニリン高生産性酵母 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09224653A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112921049A (zh) * | 2021-02-06 | 2021-06-08 | 石河子大学 | 一种用于生产香草醛的基因片段、酿酒酵母工程菌及其构建方法 |
-
1996
- 1996-02-26 JP JP6161096A patent/JPH09224653A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112921049A (zh) * | 2021-02-06 | 2021-06-08 | 石河子大学 | 一种用于生产香草醛的基因片段、酿酒酵母工程菌及其构建方法 |
| CN112921049B (zh) * | 2021-02-06 | 2024-01-23 | 石河子大学 | 一种用于生产香草醛的基因片段、酿酒酵母工程菌及其构建方法 |
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|---|---|---|---|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20040113 |