JPH0920674A - 喉炎症起因菌に対する抗菌活性および溶血毒阻害活性を有する口腔用製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 喉炎症起因菌（溶血性連鎖球菌）に対する抗
菌活性および本菌種の産生する溶血毒阻害活性を有する
口腔用製剤を提供する。 【構成】 カリン果実を５０〜１００％低級アルコール
水溶液、アセトン、酢酸エチルまたはｎ−ヘキサン或い
はこれらの２種以上の混合溶媒で抽出したエキス、また
はこのエキスから抽出したトリテルペン誘導体を含有し
てなる口腔用製剤。 【効果】 本発明製剤は、副作用の心配がなく、喉炎症
起因菌である溶血性連鎖球菌（ストレプトコッカス・ビ
オゲネス）に対する抗菌活性および本菌種の産生する溶
血毒（ストレプトリジンＯ）阻害活性を有しており、喉
の炎症および化膿性疾患等種々の感染症に対して有効に
作用するので食品への添加使用等広範な利用に供するこ
とができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、喉炎症起因菌（溶血性
連鎖球菌）に対する抗菌活性および本菌種の産生する溶
血毒阻害活性を有する口腔用製剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】溶血性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ：ストレプトコッカス・ピオ
ゲネス）は、ヒトの口腔内や咽頭などに分布する通性嫌
気性グラム陽性球菌である。本菌は、連鎖球菌の中で最
も病原性が強く、粘膜では咽頭炎、扁桃炎、中耳炎等を
起こし、皮膚では種々の化膿性炎症を引き起こすことが
知られており、いずれも咽頭もしくは扁桃腺において増
殖する。

【０００３】本菌の病原性因子として、溶血毒（ストレ
プトリジンＯ）、ディック毒素、ストレプトキナーゼ、
ＤＮＡ分解酵素、ヒアルロニダーゼ等が知られており、
咽頭炎、扁桃炎、気管支炎等の呼吸器系疾患の病因的役
割を果たしている。

【０００４】これらの呼吸器系疾患を予防および治療す
るためには、病巣において本菌類の生育を阻害すること
や、菌の病原性因子を抑制することが重要であることは
いうまでもない。

【０００５】菌の抑制という観点では、本菌類に対して
有効な抗菌性物質の応用が効果的である。従来では、ペ
ニシリン系、セフェム系、セファロスポリン系の抗生物
質が用いられていたが、これらは作用が強力である反
面、耐性菌の出現、副作用等から日常的な利用に適して
いるとはいえない。

【０００６】従って、日常的な利用に適する本菌類に有
効な抗菌性物質としては、果実、野菜、その他の日常食
用に供されている天然物由来のものが好適である。この
ようなものの例として従来、カリン果実が注目されてい
る。

【０００７】特開昭５９−１８７７６９号公報および特
開平２−３１２５６５号公報は、それぞれ健康増進目的
で、カリンを蜂蜜で抽出した果汁乃至エキスを利用する
ことを開示しているが、対象物は蜂蜜で抽出された物に
限られており、しかもその効果については甚だ抽象的で
ある。

【０００８】また、いずれも本出願人の出願による特開
昭６２−６１５３８号公報および特開昭６２−２２８２
３０号公報は、カリンの溶剤抽出エキスにＳｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓおよびＳｔａｐｈｙｌｏ
ｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓに対する抗菌作用があるこ
とを開示しているが、ストレプトコッカス・ピオゲネス
に対する抗菌活性は明らかにされていない。

【０００９】さらに、特公昭６３−２６０８３号公報お
よび特開平１−２９０６１９号公報は、天然に広く存在
するといわれるオレアノール酸等の五環性酸性トリテル
ペン化合物に抗う蝕作用、即ちＳ．ｍｕｔａｎｓに対す
る特異的抗菌作用があることを開示しているが、カリン
果実にオレアノール酸他の特定の五環性酸性トリテルペ
ン化合物が含まれていることおよびこれらのものにスト
レプトコッカス・ピオゲネスに対する抗菌活性があるこ
とは開示していない。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】本発明者等は、天然物
の溶媒抽出物を試料とし、ストレプトコッカス・ピオゲ
ネスに対する抗菌活性および本菌の産生する溶血毒（ス
トレプトリジンＯ）阻害活性を指標としてスクリーニン
グを行った結果、カリン果実の溶媒抽出物にそれらの効
果があることを見出し、本発明を完成させるに至った。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明は、カリン果実を
５０〜１００％低級アルコール水溶液、アセトン、酢酸
エチルまたはｎ−ヘキサン或いはこれらの２種以上の混
合溶媒で抽出したエキスおよびこのエキスより得られる
トリテルペン誘導体を含有してなり、喉炎症起因菌（溶
血性連鎖球菌）に対する抗菌活性および本菌種の産生す
る溶血毒阻害活性を有する口腔用製剤である。

【００１２】本発明口腔用製剤の原料となるカリン（Ｃ
ｈａｅｎｏｍｅｌｅｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｃｙｄｏｎ
ｉｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｐｓｅｕｄｏｃｙｄｏｎｉｓ
ｓｉｎｅｎｓｉｓ）は、バラ科、中国原産の植物で世
界各地で栽培されている落葉の高木であり、その果実は
食品素材として用いられる他、漢方で木瓜（モッカ）と
呼ばれ、焼酎で薬用酒としたものが鎮咳、去痰の目的で
用いられている。しかしながらその有効成分は不明であ
り、またどのような作用機作により鎮咳、去痰の効果を
発現するのかも不明である。

【００１３】本発明口腔用製剤は、以下のようにしてカ
リン果実より抽出製造することができる。

【００１４】先ず、カリン果実をそのまま或いは乾燥さ
せた後、適当な手段で機械的に粉砕し、これに５０〜１
００％低級アルコール水溶液、好ましくはエタノール水
溶液、アセトン、酢酸エチルまたはｎ−ヘキサン或いは
これらの２種以上の混合溶媒を充分量適用して抽出操作
を行う。これらの溶媒は市販されている通常のものを使
用すればよく、また混合溶媒は、これらの２種以上を任
意に選択し、任意の混合割合で混合して使用すればよ
い。抽出操作は、粉砕したカリン果実を、常温で前記溶
媒に適当時間浸漬する方法によってもよいが、好ましく
は５０〜１００℃の温度で１〜５時間、一層好ましくは
約３時間かけて加熱還流する方法で行う。

【００１５】次に、このようにして得られる抽出液を、
減圧濃縮することにより本発明口腔用製剤が得られる。

【００１６】このようにして得られた組成物を、さらに
カラムクロマトグラフィーに付し、分離精製を行う。用
いるカラムクロマトグラフィーは任意であり、吸着クロ
マトグラフィー、分配クロマトグラフィー、或いは高速
液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー等の
技法を用いればよい。また、用いる展開液はメタノール
等の低級アルコール、これの水溶液、アセトン、酢酸エ
チルまたはｎ−ヘキサン等でよい。得られる分離精製物
は、本発明のもう一つの口腔用製剤を構成するトリテル
ペン誘導体である。

【００１７】本発明にかかるトリテルペン誘導体は、次
の構造を有している。

【００１８】

【化５】

【００１９】

【化６】

【００２０】

【化７】

【００２１】

【化８】

【００２２】本発明口腔用製剤では、これらの誘導体の
いずれか１以上を有効成分として使用する。

【００２３】このようにして得られる溶媒抽出組成物お
よびトリテルペン誘導体である本発明口腔用製剤は、広
範な用途に用いることができるが、特にその香り、呈味
性が優れ、安全性が高いことを考慮すれば、チューイン
ガム、キャンディ、錠菓、含そう剤などに配合して日常
的な利用に供することもできる。このような用途に供す
る場合、本発明口腔用製剤を、製品中に０．０１〜１０
重量％の割合で含有するように添加すれば好適である。

【００２４】以下、本発明の実施例、試験例および応用
例を挙げて説明する。

【００２５】

【実施例】実施例１ カリン乾燥果実粉砕物１ｋｇに５０％エタノール５リッ
トルを加え、１００℃の温度で３時間加熱還流抽出を行
った。得られた抽出液を濾過し、濾液を減圧下、濃縮
し、溶媒を除去することにより、酸味および芳香を有す
る赤褐色の固形物である本発明製剤３２４ｇを得た。

【００２６】実施例２ カリン乾燥果実粉砕物１ｋｇに１００％エタノール５リ
ットルを加え、８０℃の温度で３時間加熱還流抽出を行
った。得られた抽出液を濾過し、濾液を減圧下、濃縮
し、溶媒を除去することにより、酸味および芳香を有す
る赤褐色の固形物である本発明製剤７７ｇを得た。

【００２７】実施例３ カリン乾燥果実粉砕物１ｋｇにアセトン５リットルを加
え、８０℃の温度で３時間加熱還流抽出を行った。得ら
れた抽出液を濾過し、濾液を減圧下、濃縮し、溶媒を除
去することにより、酸味および芳香を有する赤褐色の固
形物である本発明製剤４５ｇを得た。

【００２８】実施例４ カリン乾燥果実粉砕物１ｋｇに酢酸エチル５リットルを
加え、８０℃の温度で３時間加熱還流抽出を行った。得
られた抽出液を濾過し、濾液を減圧下、濃縮し、溶媒を
除去することにより、酸味および芳香を有する赤褐色の
固形物である本発明製剤３５ｇを得た。

【００２９】実施例５ カリン乾燥果実粉砕物１ｋｇにｎ−ヘキサン５リットル
を加え、８０℃の温度で３時間加熱還流抽出を行った。
得られた抽出液を濾過し、濾液を減圧下、濃縮して溶媒
を除去することにより酸味および芳香を有する淡緑色の
固形物である本発明製剤５ｇを得た。

【００３０】実施例６ 生食用カリン果実の粉砕物１ｋｇに５０％エタノール３
リットルおよびアセトン２リットルの混合溶媒を加え、
１００℃の温度で３時間加熱還流抽出を行った。得られ
た抽出液を濾過し、濾液を減圧下、濃縮して溶媒を除去
することにより、酸味および芳香を有する赤褐色の固形
物である本発明製剤２８０ｇを得た。

【００３１】実施例７ 生食用カリン果実の粉砕物１ｋｇに１００％エタノール
３リットルおよび酢酸エチル２リットルの混合溶媒を加
え、８０℃の温度で３時間加熱還流抽出を行った。得ら
れた抽出液を濾過し、濾液を減圧下、濃縮して溶媒を除
去することにより、酸味および芳香を有する赤褐色の固
形物である本発明製剤８２ｇを得た。

【００３２】実施例８ 生食用カリン果実の粉砕物１ｋｇに１００％エタノール
３リットルおよびｎ−ヘキサン２リットルの混合溶媒を
加え、８０℃の温度で３時間加熱還流抽出を行った。得
られた抽出液を濾過し、濾液を減圧下、濃縮して溶媒を
除去することにより、酸味および芳香を有する赤褐色の
固形物である本発明製剤７２ｇを得た。

【００３３】実施例９ カリン乾燥果実粉砕物１ｋｇにアセトン３リットルおよ
び酢酸エチル２リットルの混合溶媒を加え、８０℃の温
度で３時間加熱還流抽出を行った。得られた抽出液を濾
過し、濾液を減圧下、濃縮して溶媒を除去することによ
り、酸味および芳香を有する赤褐色の固形物である本発
明製剤５８ｇを得た。

【００３４】実施例１０ カリン乾燥果実粉砕物１ｋｇにアセトン３リットルおよ
びｎ−ヘキサン２リットルの混合溶媒を加え、８０℃の
温度で３時間加熱還流抽出を行った。得られた抽出液を
濾過し、濾液を減圧下、濃縮して溶媒を除去することに
より、酸味および芳香を有する赤褐色の固形物である本
発明製剤４２ｇを得た。

【００３５】実施例１１ カリン乾燥果実粉砕物１ｋｇに酢酸エチル３リットルお
よびｎ−ヘキサン２リットルの混合溶媒を加え、８０℃
の温度で３時間加熱還流抽出を行った。得られた抽出液
を濾過し、濾液を減圧下、濃縮して溶媒を除去すること
により、酸味および芳香を有する赤褐色の固形物である
本発明製剤３５ｇを得た。

【００３６】実施例１２ カリン乾燥果実粉砕物１ｋｇに１００％エタノール１リ
ットル、アセトン１リットル、酢酸エチル１リットルお
よびｎ−ヘキサン２リットルの混合溶媒を加え、８０℃
の温度で３時間加熱還流抽出を行った。得られた抽出液
を濾過し、濾液を減圧下、濃縮して溶媒を除去すること
により、酸味および芳香を有する赤褐色の固形物である
本発明製剤６３ｇを得た。

【００３７】実施例１３ 実施例２で得られた本発明製剤の６０ｇに水を加えて分
散させた後、酢酸エチルで分配し、酢酸エチル可溶画分
（１７．１ｇ）を得た。

【００３８】この酢酸エチル可溶画分をシリカゲル（ワ
コーゲルＣ−２００、和光純薬）１ｋｇを充填したカラ
ムに吸着させた。このカラムをｎ−ヘキサン酢酸エチル
（１０：１〜１：１）にて溶出させ、分画を行った。Ｔ
ＣＬプレート（６０Ｆ２５４、メルク）を用いてｎ−ヘ
キサン−酢酸エチル（２：１）で展開した時、Ｒｆ値
０．２〜０．５付近に１０％硫酸により青または紫色の
スポットを呈する画分を集めた。

【００３９】この画分を高速液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）用のオクタデシルシラノール型（ＯＤＳ）
分取カラム（センシュー科学）を用いて、メタノール−
水（９０：１０〜１００：０）で溶出させ、２０５ナノ
メータのＵＶ吸収をモニターしながら各ピークを分取す
る。

【００４０】それぞれのピークはさらにＨＰＬＣ用ＯＤ
Ｓカラムを用いてアセトニトリル−水（９５：５〜１０
０：０）、メタノール−水（９０：１０〜１００：０）
で繰り返し精製することにより、本発明製剤である４種
類の無色結晶性化合物１（２８５０ｍｇ）、化合物２
（２５０ｍｇ）、化合物３（２５ｍｇ）、化合物４（２
５ｍｇ）を得た。

【００４１】これらの化合物について、融点、マススペ
クトル、赤外線吸収スペクトル、核磁気共鳴スペクトル
により分析した結果、前記化合物１〜４はオレアノール
酸、３−アセチルオレアノール酸、エリスロジオールお
よびウバオール等のトリテルペン誘導体であることを確
認した。

【００４２】試験例１ 実施例１〜５および１３で示した方法により調製した本
発明製剤の溶血性連鎖球菌、黄色ブドウ球菌およびう蝕
原因菌に対する抗菌活性を以下の方法により試験した。

【００４３】試験方法 １）供試菌株、使用培地および培養条件

【００４４】

【表１】

【００４５】２）抗菌活性試験法 各菌株をそれぞれの培地および培養条件で２４時間培養
し、菌を充分に生育させる。９６穴平底マイクロプレー
トを用い、各ウエル中で試料溶液（１００μｌ）の２倍
希釈系列を調製する。２倍濃度で調製した培地に各々の
菌を接種し、その１００μｌを各ウエルに添加する。２
４時間培養した後、マイクロプレートリーダーを用いて
各ウエルの濁度（５５０ｎｍ）を測定し、菌の生育を判
定し、その最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を求める。

【００４６】試験結果 試験結果を表２に示す。本発明製品（実施例１〜５およ
び化合物１〜４）は、黄色ブドウ球菌やう蝕原因菌に対
しても抗菌活性を示すが、溶血性連鎖球菌に対する抗菌
活性は、さらに強いものである。カリンの水や３０％エ
タノール抽出物では本発明製品のような抗菌活性はみら
れなかったことから、カリンを抽出する場合のエタノー
ル濃度は、５０％以上でなくてはならないことが明らか
である。

【００４７】

【表２】

【００４８】試験例２ 実施例１〜５および１３で示した方法により調製した本
発明製剤の溶血毒（ストレプトリジンＯ）阻害活性を以
下の方法により試験した。

【００４９】試験方法 ウサギ脱繊維血液２５ｍｌを緩衝食塩水（ｐＨ６．５）
で３回洗浄（３０００ｒｐｍ×１０分間）し、赤血球を
集める。緩衝食塩水で２００ｍｌに希釈し、ウサギ赤血
球浮遊液とする。試料規定量をエタノールに溶解してか
ら、さらに緩衝食塩水に溶解し（エタノール２％）、試
料溶液とする。試料溶液６００μｌとストレプトリジン
Ｏ（栄研）水溶液（１結合力価）３００μｌを１３ｍｍ
径の試験管中で混合し、３７℃で３０分反応させる。ウ
サギ赤血球浮遊液３００μｌを添加し、３７℃で４５分
間反応させる。反応終了後、１５００ｒｐｍで１分間遠
心分離し、上清の溶血度合を肉眼で判定する。判定基準
は次のようにした。

【００５０】判定基準 −：溶血のみられないもの、
＋：不完全溶血、＋＋：完全溶血

【００５１】試験結果 試験結果を表３に示す。本発明製剤（実施例１〜５およ
び化合物１〜４）は、溶血毒阻害活性を示し、１０００
μｇ／ｍｌ濃度では、いずれの試料でも溶血を完全に阻
害した。１００μｇ／ｍｌ濃度においても阻害活性を示
し、完全溶血を起こすものはみられなかった。抗菌活性
と同様に、カリンの水や３０％エタノール抽出物では本
発明製剤のような溶血毒阻害活性はみられなかったこと
から、カリンを抽出する場合のエタノール濃度は、５０
％以上でなくてはならないことが明らかである。

【００５２】

【表３】

【００５３】応用例 実施例１、２および１３で示した方法により調製した本
発明製剤を用いて、次の処方によりチューインガム、キ
ャンディ、錠菓、含そう剤を製造した。

【００５４】

【００５５】

【００５６】

【００５７】

【００５８】

【発明の効果】本発明口腔用製剤は、喉炎症起因菌であ
る溶血性連鎖球菌（ストレプトコッカス・ピオゲネス）
に対して特異的に強い生育阻害効果を有するばかりでな
く、本菌種の産生する溶血毒（ストレプトリジンＯ）に
対する阻害効果を併せ有しており、喉の炎症および化膿
性疾患を始め種々の感染症に対して有効に作用する。

【００５９】本発明口腔用製剤の原料であるカリンは食
用素材や薬用酒として用いられており、その安全性につ
いては問題がないので本発明口腔用製剤の安全性にも問
題がなく、従って抗生物質を応用した場合にみられる副
作用等の心配はないと認識される。

【００６０】本発明口腔用製剤は、副作用等の心配はな
く、香り、呈味性が優れているので食品への添加使用
等、広範な利用に供することが可能な汎用性の高いもの
である。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｊ 1/00 Ｃ０７Ｊ 1/00 // Ａ２３Ｇ 3/30 Ａ２３Ｇ 3/30 Ａ２３Ｌ 1/30 Ａ２３Ｌ 1/30 Ｂ

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 カリン果実を５０〜１００％低級アルコ
   ール水溶液、アセトン、酢酸エチルまたはｎ−ヘキサン
   或いはこれらの２種以上の混合溶媒で抽出したエキスを
   含有してなり、喉炎症起因菌（溶血性連鎖球菌）に対す
   る抗菌活性および本菌種の産生する溶血毒阻害活性を有
   することを特徴とする口腔用製剤。
2. 【請求項２】 低級アルコール水溶液がエチルアルコー
   ル水溶液であることを特徴とする請求項１に記載の口腔
   用製剤。
3. 【請求項３】 次に示すトリテルペン誘導体 【化１】 【化２】 【化３】 【化４】 のいずれか１以上を有効成分としてなり、喉炎症起因菌
   （溶血性連鎖球菌）に対する抗菌活性および本菌種の産
   生する溶血毒阻害活性を有することを特徴とする口腔用
   製剤。