JPH09151199A - Ｈｔｌｖ−ｉペプチド抗原および分析法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】HTLV-Iの感染の診断に有用なペプチドを提供す
る。 【解決手段】 HTLV-Iエンベロープタンパク質gp46に由
来する、約80個を下まわるアミノ酸を有し、アミノ酸配
列：Leu-Leu-Val-Asp-Ala-Pro-Gly-Tyr-Asp-Pro-Ile-Tr
p-Phe-Leu-Asn-Thr-Glu-Pro-Ser-Gln-Leu-Pro-Pro-Thr-
Ala-Pro-Pro-Leu-Leu-Pro-His-Ser-Asn-Leu-Asp-His-Il
e-Leu-Glu-Pro-Serを含むペプチドからなる群から選択
される、ペプチド抗原。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、一般に、ヒトＴ細
胞白血病ウイルスＩ型（HTLV-I）に関し、さらに詳細に
は、HTLV-Iに感染した個体に存在する抗HTLV-I抗体に対
して免疫反応性を有する組換え体ペプチド抗原に関す
る。

【０００２】（参考文献） Huynh，T.V.ら、”DNA Cloning.Volume１”D.M.Glover
編、ワシントンD.C.：IRLプレス、1985（チャプター2） Maniatis，T.ら、Molecular Cloning：A Laboratory Ma
nual，Cold Spring Harbor Laboratory（1982） Matsushita，S.ら、Proc Natl Acad Sci（USA），83：2
672（1986） Miyoshi，I.ら、Nature，294：770（1981） Poiesz，B.J.ら、Proc Natl Acad Sci（USA），77：741
5（1980） Popovic，M.ら、Science，219：856（1983） Seiki，M.ら、Proc Natl Acad Sci（USA)，80：3618（1
983）

【０００３】

【従来の技術】ヒトＴ細胞白血病ウイルス（HTLV）は、
３種類の既知のメンバーの一群のＴ細胞レトロウイルス
である。HTLV I型（HTLV-I）は、インビトロで形質転換
活性を有し、病因論的に、成人Ｔ細胞白血病と関連があ
る。この成人Ｔ細胞白血病は、世界のいくつかの地域に
固有なものとして知られている。HTLV-IIはインビトロ
で形質転換能を有する、他のレトロウイスルであり、毛
様細胞性白血病にかかった患者のＴ細胞変種から単離さ
れている。HTLV-IIIは、リンパ節症関連ウイルスとも呼
ばれ、現在ではヒト免疫不全症ウイルス（HIV）として
知られ、ある種のＴ細胞に対して溶解性を有し、病因論
的には後天性免疫不全症候群（AIDS) に関連している。
HTLV-IおよびHTLV-IIとは異なり、HTLV-IIIは、インビ
トロでの形質転換活性を有していないことが知られてい
る。

【０００４】HTLV-Iに対して反応性を有するモノクロー
ナル抗体（Mab）が、すでに報告されている（Matsushit
a）。0.5αと呼ばれるその抗体は、HTLV-Iに感染したＴ
細胞の細胞膜に結合し、補体の存在下で細胞溶解を起こ
すIgG₁ Mabである。電気ブロット法による研究により、
このMabはHTLV-Iの主要エンベロープタンパクと反応す
ることが示されている（Matsushita）。このタンパクは
gp46と呼ばれており、env遺伝子産物の外膜の成分であ
る。プロウイルスHTLV-Iのゲノムが単離され、その全体
の配列が決定されている（Seiki）。競合阻害結合分析
法を用いると、成人Ｔ細胞白血病の15名の患者のうちの
15名が、粉砕されたHTLV-IビリオンにこのMabが結合す
るのを阻止する抗体を有することが観察された（Matsus
hita）。この抗体は、HTLV-IIもしくはHTLV-IIIのビリ
オン、または感染細胞には結合しないようである。

【０００５】上記の研究は、HTLV-I感染症の診断に抗HT
LV-I抗体を用いる可能性を示しているが、この方法には
２つの大きな欠点がある。第１に、分析システムが比較
的面倒であり、HTLV-Iビリオン、感染細胞、もしくは分
画されたgp46タンパクの起源と；競合結合分析法フォー
マットに組み合わせた抗HTLV-I Mabとの両者が必要であ
る。第２に、全ビリオンまたはその分画されたタンパク
でさえも、１を超える数のエピトープ特異的抗HTLV-I抗
体と反応するようであり、そのため、この試験法の感度
と特異性とが低下する。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】従って、Ｔ細胞白血病
に感染した患者を含むHTLV-Iに感染したすべての患者に
存在することが知られている抗体と免疫反応性であり、
HTLV-I感染症のある段階の病状を特異的に示す１または
それ以上のHTLV-Iペプチド抗原を提供することは、HTLV
-I感染症を診断するのに有用である。このような抗原
は、HTLV-I感染症の病状を示す抗体を迅速に測定するた
めの、単純な固相抗体結合分析法もしくは均一系抗体結
合分析法に使用され得る。本発明のひとつの一般的な目
的は、HTLV-I関連Ｔ細胞白血病にかかっている患者に存
在する抗HTLV-I抗体に特異的なHTLV-Iペプチド抗原を提
供することにある。

【０００７】本発明の他の目的は、そのような抗原を用
いる、簡単かつ迅速で比較的安価な免疫分析法を提供す
ることにある。

【０００８】

【発明を解決するための手段】本発明には、(a)HTLV-I
エンベロープタンパクgp46由来で、(b)Ｔ細胞白血病の
個体中に存在する抗HTLV-I抗体と免疫反応性の組換え体
ペプチド抗原が含まれる。この抗原はグリコシル化され
ておらず、そして、好ましくは、次のアミノ酸配列：Le
u-Leu-Val-Asp-Ala-Pro-Gly-Tyr-Asp-Pro-Ile-Trp-Phe-
Leu-Asn-Thr-Glu-Pro-Ser-Gln-Leu-Pro-Pro-Thr-Ala-Pr
o-Pro-Leu-Leu-Pro-His-Ser-Asn-Leu-Asp-His-Ile-Leu-
Glu-Pro-Serを含む。

【０００９】本発明の他の態様では、この抗原は、好ま
しくは、Ｔ細胞白血病の個体を含むHTLV-Iに感染した個
体の血清中に存在する抗体と免疫反応性である。

【００１０】本発明にはまた、被検個体中のHTLV-I感染
症を検出するシステムと方法とが含まれる。その方法を
実施する際には、上記のタイプの抗原を、被検個体由来
の血清と反応させ、次いで結合した抗体の存在が試験さ
れる。その分析システムは固相式であってもよく均一系
であってもよい。上記固相式においては、抗原が固体支
持体に保持されており、上記均一系においては、抗原が
レポーターと結合し、抗原に結合する抗体がレポーター
シグナル（これが検出される）を変化させる。さらに他
の態様においては、本発明には、Ｔ細胞白血病に対して
個体を免疫化するワクチンが含まれる。このワクチン
は、薬学的に受容され得るアジュバント中に上記のタイ
プの組換え体ペプチドを含有している。

【００１１】

【発明の実施の形態】本発明の上記およびその他の目的
と特徴は、本発明の下記の詳細な説明を添付図面を参照
して読めばより充分に理解されるであろう。上記図面の
Ａにおいては、HTLV-Iゲノムの一部分が示され、Ｂにお
いては、本発明の３種のペプチド抗原をコードするヌク
レオチド配列に対応するゲノムの拡大領域（expanded r
egions）が示され、そしてＣにおいては、この３種のペ
プチド抗原の遺伝子配列とそれに対応するアミノ酸配列
とが示されている。

【００１２】Ｉ．HTLV-Iペプチド抗原の調製 この項では、HTLV-I関連Ｔ細胞白血病の個体に見出され
る抗HTLV-I抗体と免疫反応性を有するHTLV-Iペプチド抗
原の調製について述べる。この抗原は、適切な発現ベク
ターにクローン化され次に免疫反応性ペプチドの発現に
ついて抗体で選択された、長さが100〜300塩基対のラン
ダムHTLV-I遺伝子配列を用いて調製される。

【００１３】Ａ．HTLV-Iゲノムライブラリー HTLV-Iのゲノムライブラリーは、HTLV-Iプロウイルスゲ
ノムを含有する細胞DNAから、従来の方法で調製され
る。二本鎖DNAは、HTLV-Iウイルスに感染していること
が知られている患者から単離されたＴ細胞または既知の
細胞系を含む、HTLV-I感染細胞から調製される。上記既
知の細胞系としては、例えば、HUT102-B2（Poiesz）、M
T-2（Miyoshi）、およびMJ-腫瘍（Popovic）細胞（これ
らはすべてHTLV-Iウイルスを産生することが知られてい
る。）がある。ウイルスのゲノムがこれらの細胞の宿主
DNAに組み込まれている。HTLV-Iゲノムを含有する細胞
系の調製法は前記文献に詳細に記載されている。

【００１４】上記細胞系由来の全宿主ゲノムDNAは、15
〜20キロ塩基の大きさの範囲の部分消化断片を産生する
条件下で、HaeIIIまたはAluＩのようなフリークエント
カッター（frequent cutter）で部分的に消化され、得
られた消化産物を、例えば、スクロース勾配遠心分離法
で分画して15〜20キロ塩基の断片が単離される。得られ
た断片は、次いで適切なクローニングベクター、好まし
くは15〜20キロ塩基の挿入物を有効に組み込むことがで
きるファージのクローニングベクターにクローン化され
る。好ましい方法においては、単離された断片は、EcoR
Iメチラーゼで処理され、次にそれらの末端に、標準条
件下（Maniatis）で、EcoRIリンカーが連結され、次い
で、唯一のEcoRI挿入部位を有するλシャロン4aのよう
なファージベクターにクローン化される。

【００１５】得られたクローン化ゲノム断片は、全コピ
ーHTLV-Iゲノムの、選択された配列に相補的はプローブ
でスクリーニングされる。選択された配列のための、放
射能標識された合成オリゴヌクレオチドプローブの調製
法と同様に、HTLV-Iの配列も公知である（Seiki）。さ
らに、特定の配列の合成オリゴヌクレオチドは、Synthe
tic Genetics，Inc.(カリフォルニア州、サンジエゴ）
により提供されるような商業的サービスにより調製され
得る。このようなオリゴヌクレオチドプローブを用い
て、HTLV-I配列を含む分子クローンは、標準的なハイブ
リダイゼーション法（Maniatis，322頁）によって、上
記ライブラリーから単離される。このクローンは、ま
ず、制限部位分析法により分析され、全ウイルスゲノム
配列が存在することが確認される。その存在は、組み込
まれたウイルスゲノムに隣接する長い直接末端重複部分
の存在により示される。同定された分子クローンは、適
切なエンドヌクレアーゼで消化され、全コピーウイルス
ゲノムが放出される。この目的のために好ましいエンド
ヌクレアーゼはSacＩであり、これは長い末端重複部分
（LTR）中のウイルスゲノムを、ウイルスのコード配列
のどちらかの末端を切断するが、内部切断を起こさな
い。クローンのHTLV-Iゲノムが、３番目の内部SacＩ部
位を有する変異体である場合には、適切な制限酵素を選
択することにより、全長のゲノムが単離される。精製し
た全コピー配列は、約9.5キロ塩基の断片である。ある
いは、env遺伝子配列だけを示すゲノムの断片を精製す
ることにより発現ライブラリーが調製され得る。

【００１６】あるいは、全コピーHTLV-I二本鎖DNAを含
有するクローニングベクターが報告されており（Seik
i）、実施例Ｉに示すように、その研究者から直接入手
することができる。

【００１７】所望のHTLV-Iゲノムライブラリーを調製す
るために、全コピーHTLV-I挿入物を、例えばSacＩで完
全消化することによって、上記クローニングベクターか
ら切出して、実施例Ｉに述べるようにして、9.5キロ塩
基の断片が単離される。単離された全コピー断片は消化
されて、DNA断片、好ましくは主として約100から300塩
基対の間の大きさのランダム断片が調製される。実施例
は、このような断片のDNアーゼ消化法による調製が述べ
られている。約30から100の間のアミノ酸からなるペプ
チド抗原を得ることが望ましいので、消化断片はサイズ
分画を行うのが好ましく、例えば、ゲル電気泳動法によ
って約100から300塩基対の間の大きさの範囲の断片が選
択される。

【００１８】ゲノム消化断片は、適切なクローニングベ
クターであって、好ましくは適切な宿主中でコードされ
たペプチドを発現できる発現ベクターに挿入される。１
つの好ましい発現ベクターはλgt11であり、このベクタ
ーは、β−ガラクトシダーゼ遺伝子の翻訳終止コドンの
53塩基対上流に、唯一のEcoRI挿入部位を有する。した
がって、この挿入された配列は、β−ガラクトシダーゼ
遺伝子のＮ末端部の大部分、その非相同ペプチド、およ
びβ−ガラクトシダーゼ遺伝子のＣ末端領域の少なくと
も一部分を含有するβ−ガラクトシダーゼ融合タンパク
として発現される。またこのベクターは、例えば32℃の
許容温度でウイルスの溶原化を起こし、例えば42℃の高
温ではウイルスが溶解するに至る、温度感受性レプレッ
サー(cI857) を産生する。このベクターの利点は次の通
りである：(1)高効率での組換え体の生成；(2)許容温度
では宿主細胞の増殖に基づいて溶原化した宿主細胞を選
択でき、非許容温度ではこのような選択ができないとい
う性能；および(3)組換え体融合タンパクの高レベルの
産生。さらに、非相同の挿入物を有するファージは、不
活性β−ガラクトシダーゼ酵素を産生するので、挿入物
を有するファージは、β−ガラクトシダーゼ呈色基質反
応で容易に同定することができる。

【００１９】発現ベクターに挿入するために、ウイルス
消化断片は、従来の方法により、EcoRIリンカーのよう
な選択された制限部位リンカーを含むように、必要に応
じて修飾される。実施例Ｉは消化断片をλgt11中にクロ
ーン化する方法を例示しており、この方法には、断片の
平滑末端化、EcoRIリンカーの付加、およびこの断片をE
coRIで切断されたλgt11と連結させる工程が含まれる。
得られたウイルスゲノムライブラリーをチェックし、比
較的大きな（代表的な）ライブラリーが産生されている
ことが確認される。この確認は、λgt11ベクターの場合
には、適切な細菌宿主を感染させて、その細菌をプレー
トし、次いで、β−ガラクトシダーゼ活性の損失につい
てプラークを検査することによって実施され得る。実施
例Ｉに記載の方法を用いると、約60％のプラークが酵素
活性の損失を示した。酵素活性の損失を示すバックグラ
ウンドファージのレベルは、実施例Ｉに見られるように
比較的低い。

【００２０】Ｂ．ペプチド抗原の発現 上記で形成されたゲノムライブラリーは、問題のヒト抗
HTLV-I抗体と免疫反応性を有するペプチド抗原（融合タ
ンパクとして発現される）を調製するためにスクリーニ
ングされる。HTLV-I感染症を診断するのに特に重要な１
つの抗体は、0.5α抗体であり、これは前記のようにHTL
V-I感染症に関連するＴ細胞白血病の患者に存在してい
る。この抗体は、EBVで形質転換されたＢリンパ球細胞
系〔ATCC寄託番号HB8755（実施例II参照）〕で産生さ
れ、HTLV-Iのgp46エンベロープタンパクと反応すること
が示されている（Matsushita）。この細胞系は、HTLV-I
に感染した患者に由来するヒトＢ細胞クローンであり、
Epstein-Barrウイルスで永久増殖性となっている。この
細胞系は、メリーランド20852ロックビル、パークロー
ンドライブ12301のアメリカンタイプカルチャーコレク
ションに寄託されている。 好ましいスクリーニング法
では、ファージライブラリーベクターが感染した宿主細
胞を上記のようにプレートし、次にこのプレートをニト
ロセルロースフィルターでブロットし、細胞で産生され
た組換え体抗原をフィルターに転移させる。次にそのフ
ィルターを、抗HTLV-I抗体と反応させ、洗浄して未反応
の抗体を除去し、レポーターで標識された抗ヒト抗体と
反応させる。その結果この抗体は、抗HTLV-I抗体を介し
てサンドイッチ形でフィルターに結合する。

【００２１】典型的には、問題の組換え体抗原の産生に
よって同定されるファージプラークは，抗体反応性タン
パクの産生について，比較的低密度で再試験される。実
施例IIに記載のスクリーニング法がその例である。免疫
反応性組換え体抗原を産生したいくつかの組換え体ファ
ージのクローンをこの方法で同定した。

【００２２】上記のようにして同定された１種もしくは
それ以上のライブラリーベクターは、塩基対配列決定法
で分析して、HTLV-Iゲノム内のペプチドをコードする領
域の位置を決定するのが好ましい。非相同挿入物（必要
に応じて、融合タンパクの隣接コード配列を含む）を選
択されたライブラリーのベクターから切り出して、切り
出された断片を精製し配列決定する方法は、実施例III
に述べるような公知の方法で一般に行われる。0.5α抗
体に対して免疫反応性であることが見い出され、３種の
ペプチドのコード配列が図面に示されている。この３種
の非相同配列は、HTLV-Iの公知の配列（Seiki）と一致
した。実施例IIIにおいてより充分に考察されている
が、全配列が、HTLV-Iのエンベロープタンパクgp46をコ
ードする遺伝子中のHTLV-Iゲノムの5565〜5895の塩基対
（図のＡ部分）の範囲内に入り、5664および5790の塩基
対の間（図のＢ部分）に重複コード配列（図中、２つの
矢印で示す）を有する。図から分かるように、Ｃ部分の
重複配列が、下記のアミノ酸配列を有する41のアミノ酸
ペプチドの抗原をコードしている：Leu-Leu-Val-Asp-Al
a-Pro-Gly-Tyr-Asp-Pro-Ile-Trp-Phe-Leu-Asn-Thr-Glu-
Pro-Ser-Gln-Leu-Pro-Pro-Thr-Ala-Pro-Pro-Leu-Leu-Pr
o-His-Ser-Asn-Leu-Asp-His-Ile-Leu-Glu-Pro-Ser。

【００２３】さらに一般的に、この発明のペプチドは、
(a)HTLV-Iエンベロープタンパクgp46から誘導され、か
つ(b)Ｔ細胞白血病の個体に存在する抗HTLV-I抗体と免
疫反応性である。ここで、“〜由来の”という用語は、
その組換え体ペプチドの合成が、ここで同定された5664
から5790の塩基対間の、HTLV-Iエンベロープタンパクgp
46をコードする領域の大部分と、コドンの配列が実質的
に同一のコード配列によって行われることを意味する。

【００２４】大規模生産用には、組換え体タンパクを精
製するために、選択されたクローンが用いられる。大規
模生産は、すでに報告されている次のような各種の方法
のうちのひとつを用いて実施される：(a)E.coliのよう
な適切な宿主を、選択されたλgt11組換え体で溶原化
し、(b)生成した形質導入細胞を高レベルの非相同ペプ
チドが得られる条件下で培養し、(c)溶解細胞から組換
え体抗原を生成する方法。

【００２５】上記λgt11クローニングベクターを含む好
ましい方法では, 高産生性のE.coli宿主BNN103を、選択
されたライブラリーファージに感染させ、そして、２枚
のプレートにレプリカプレートする。これらプレートの
１枚を、32℃で培養すると、この温度ではウイルスの溶
原化が起こる。他方のプレートを42℃で培養すると、感
染しているファージが溶菌状態になるので細胞の増殖が
阻止される。従って、低温では増殖するが高温では増殖
しない細胞は、溶原化が成功していると考えられる。

【００２６】溶原化された宿主細胞は、次に、ウイルス
挿入物を含有する融合タンパクを大量に生産するのに好
都合な液体培養条件下で培養され、次いで急速凍結によ
って溶菌して所望の融合タンパクを放出させる。これら
の方法は、以下の実施例IVおよびＶで詳述する。

【００２７】Ｃ．ペプチドの精製 組換え体ペプチドは、示差沈澱法、分子ふるいクロマト
グラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、焦点電気
泳動法、ゲル電気泳動法およびアフィニティークロマト
グラフィーを含む標準的なタンパク精製法で精製され得
る。上記のようにして調製したβ−ガラクトシダーゼ融
合タンパクのような融合タンパクの場合には、タンパク
単離法は、天然タンパクの単離に用いる方法のなかから
選択して適用され得る。したがって、β−ガラクトシダ
ーゼ融合タンパクを単離するには、そのタンパクは、そ
の表面に抗β−ガラクトシダーゼ抗体を結合させて有す
る固体支持体上を、細胞溶解物質を通過させることによ
る、簡単なアフィニティークロマトグラフィーによって
容易に単離され得る。この方法は、そのウイルスペプチ
ドの配列を図面に示してあるMTA4/Bβ−ガラクトシダー
ゼ融合タンパクの精製を行う実施例VIで用いられてい
る。

【００２８】II. 有用性 この項では、本発明の抗原ペプチドの、HTLV-I感染症を
診断する用途, およびHTLV-I感染症に対する強力なワク
チンとしての用途について述べる。

【００２９】Ａ．診断上の用途 ペプチド抗原の３種の基本的な診断上の用途について述
べる。第１図の用途は、ペプチドによる、補体を介する
抗体依存性細胞溶解の阻害に基づくものである。この方
法では、被検個体由来の血清が、補体の保存（preserv
e）下でHTLV-Iに感染したＴ細胞クローンと反応する。
抗HTLV-I抗体の存在は、例えばトリパンブルー色素排除
法で判断する細胞溶解によって証明される。細胞溶解が
観察された場合には、HTLV-Iペプチドに対する抗HTLV-I
抗体の特異性が、まず血清を過剰のペプチドと反応さ
せ、次にその血清を補体の存在下で細胞と混合すること
によって証明される。抗体の特異性は、細胞溶解が顕著
に減少することによって示される。この方法は実施例VI
Iに記載されている。またこの方法は、血清をペプチド
の増加量について滴定し、次に、細胞溶解の程度につい
て顕著な効果が最初に観察された場合にそのペプチドの
濃度を測定することにより、被分析物である血清中の抗
体力価を定量するのに利用できる。

【００３０】第２の一般的分析法は固相免疫分析法であ
る。この方法では、表面に結合したペプチドを有する固
相試薬を、抗体を試薬上のペプチドの結合させる条件下
で、被分析物である血清と反応させる。固相試薬を洗浄
して未結合の血清成分を除いた後、この試薬をレポータ
ーで標識した抗ヒト抗体と反応させて、リポーターを、
固相支持体に結合した抗HTLV-I抗体の量に比例して該試
薬に結合させる。この試薬を再び洗浄して、未結合の標
識抗体を除き、そして、試薬と結合したレポーターの量
を測定する。典型的には、実施例VIIIに記載した系のよ
うに、レポーターは、適切な螢光分析もしくは比色分析
用基質の存在下で固相試薬をインキュベートすることに
よって検出される酵素である。

【００３１】上記分析法で用いられる固相面を有する試
薬は、タンパク物質を、ポリマービーズ、浸漬スティッ
クまたはフィルター材のような固体支持材料に結合させ
る公知の方法で製造される。一般にこれらの結合法に
は、タンパクを支持体（例えば、実施例VIIIに述べるフ
ィルター支持体) に非特異的に吸着させる方法、または
タンパクを、代表的には遊離のアミン基を介して固体支
持体上の化学反応性基、例えば活性化されたカルボキシ
ル基、水酸基もしくはアルデヒド基に共有結合させる方
法がある。

【００３２】第３の一般的な分析法は均一系分析法であ
る。この方法では、固体支持体に結合している抗体は、
反応媒体中である種の変化を起こし、その変化はその媒
体中で直接検出することができる。既知の一般のタイプ
の均一系分析法には次の方法が包含される：(a)スピン
標識レポーター法；この方法では、抗原に結合する抗体
が、レポーターの移動度の変化で検出される（スピン分
裂のピークの幅が広くなる）；(b)螢光レポーター法；
この方法では、結合は螢光効率の変化で検出される；
(e)酵素レポーター法；この方法では、抗体の結合は酵
素／基質の相互作用で行われる；および(d)リポソーム
結合レポーター法；この方法では、結合によって、リポ
ソームが溶解して封入されたレポーターが放出される。
これらの方法をこの発明のペプチドに適用する際には、
均一系分析法の試薬の通常の製造法が利用される。

【００３３】上記の３種の一般的な各分析法では、試験
個体由来の血清を抗体と反応させ、結合した抗体の存在
について抗原の試験が行われる。第１の分析法では、試
験は、抗体が、ペプチドに結合するときに、抗体を介す
る細胞溶解が減少するのを観察することによって行われ
る。固相分析法では、試験は、標識抗ヒト抗体を、被検
体に結合させ、そして、個体支持体に結合したレポータ
ーの量を測定して行われる。第３の検定法では、試験
は、均一系分析法の試薬に結合する抗体の作用を観察す
ることによって行われる。

【００３４】Ｂ．ペプチドのワクチン 本発明のペプチド抗原は、ワクチンとしても用いられ
得、細胞毒性の抗HLTV-I抗体を誘発する。ここでは、0.
5αモノクローナル抗体が、補体の存在下で、HTLV-Iウ
イルスに感染したＴ細胞に対して細胞毒性になることに
留意することが大切である。このペプチドは、適切な担
体／アジュバンドによって製剤化され、細胞毒性抗HTLV
-I抗体の有意な力価が血清中に検出されるまで、所定の
間隔をおいて注射される。このワクチンは、初期のHTLV
-I感染症に対して、抗体を介する細胞毒性によって防御
を行う。

【００３５】上記の説明から、本発明により、いかに種
々の目的と特徴が達成されるかが理解されるであろう。
本発明のペプチド抗原は、成人のＴ細胞白血病の症状を
示す抗HTLV-I抗体と特異的に反応するので、Ｔ細胞白血
病の迅速で安価な分析法に用いられる。同時に、このペ
プチド抗原は、既存の0.5αモノクローナル抗体によっ
て行われる細胞毒性抗体反応を誘発する。

【００３６】下記の実施例は、本発明の種々の態様を例
示するが、本発明の範囲を限定するものではない。

【００３７】

【実施例】

（材料）以下の実施例で使用された材料は、次の通りで
あった。

【００３８】酵素：DNアーゼＩおよびアルカリホスファ
ターゼをBoehringer Mannheim Biochemicals（BMB、イ
ンディアナ州、インディアナポリス）より得た。EcoR
I、EcoRIメチラーゼ、DNAリガーゼおよびポリメラーゼ
ＩをNew England Biolabs（NEB、マサチューセッツ州、
ベヴァリー）より得た。RNアーゼをSigma（ミズーリ
州、セントルイス）より得た。

【００３９】他の試薬：EcoRIリンカーをNEBより得た。
そしてニトロブルーテトラゾリウム（NBT）、5-ブロモ-
4-クロロ-3-インドリルホスフェート（BCIP）、5-ブロ
モ-4-クロロ-3-インドリル-β-D-ガラクトピラノシド
（X-gal）、およびイソプロピルβ-D-チオガラクトピラ
ノシド（IPTG）をSigmaから得た。

【００４０】（実施例Ｉ） （HTLV-Iゲノムライブラリーの調製） （ゲノム材料のライブラリーソース）：HTLV-Iゲノムに
由来する全コピーDNA挿入物を含有するバクテリオファ
ージを合衆国国立衛生研究所のthe Laboratoryof Tumor
Cell Biology（メリーランド州、ベテスダ）のDr.R.C.
GalloおよびDr.F.Wong-Staalより得た。バクテリオファ
ージをSacIで完全に消化し、ウイルスゲノム挿入物を放
出させた。消化された材料を標準10％アガロースゲルで
電気泳動にかけ、電気溶離によって得られた9.5キロ塩
基の断片をエタノール沈澱前に、フェノール／クロロホ
ルムで抽出した。

【００４１】DNA消化：精製ゲノムDNAを標準消化バッフ
ァー（0.5M Tris HCl，pH7.5；１mg/ml BSA；l0mM MnCl
₂）に懸濁し、約１mg/mlの濃度とし、室温で約５分間DN
アーゼＩで消化した。これらの反応条件は、較正のため
に前もって研究で決定され、主として100〜300塩基対の
断片を製造するのに必要なインキュベートの時間が決定
された。上記消化物を、エタノール沈澱前に、フェノー
ル／クロロホルムで抽出した。

【００４２】EcoRIリンカーの付加：上記のゲノム断片
を、標準条件（Huynh）下でDNA PolＩで平滑末端にし、
次いでフェノール／クロロホルムで抽出し、エタノール
で沈澱させた。平滑末端にされた材料を標準条件下でEc
oRIリンカーで連結し（Maniatis，pp396，397）、その
後、EcoRIで消化し、余剰のリンカー末端を取り除い
た。これをその後、アガロースゲル分画し、非連結リン
カーを取り除き、サイズ選択を行った（以下を参照）。

【００４３】（サイズ選択）：上記の工程で得られた断
片をΦX174/HaeIIIおよびλ/HindIIIサイズマーカーを
用いて、1.2％アガロースゲル電気泳動（５〜10V/cm）
で分析した。l00〜300bpの画分をNA45ストリップ（Schl
eicherおよびSchuell）に溶出し、その後、溶離溶液
（１M NaCl，50mM アルギニン，pH9.0）で1.5mlマイク
ロチューブに入れ、30〜60分間67℃でインキュベートし
た。DNA（溶液中に存在する）を、フェノール／クロロ
ホルムで抽出し、エタノールで沈澱させた。ペレット
を、20μl TE（0.01M Tris HCl，pH7.5，0.001M EDTA）
中に再び懸濁させた。

【００４４】（λgtllへの連結およびインビトロでのパ
ッケージ）λgtllファージベクター（Huynh）を、Prome
ga Biotec（ウィスコンシン州マジソン）より得た。こ
のクローニングベクターは、β−ガラクトシダーゼ翻訳
終止コドンの53塩基対上流に唯一のEcoRIクローニング
部位を持つ。上記のゲノム断片を、0.5〜1.0μgのEcoRI
-切断gtll、0.5〜３μlの上記HTLV-Iゲノム断片、0.5μ
lのリガーゼ（200単位）および蒸留水５μlを混合する
ことで、EcoRI部位に導入した。混合物を、標準方法（M
aniatis，pp.256-268）により、一晩、14℃でインキュ
ベートし、インビトロパッケージを行った。

【００４５】パッケージされたファージは、DNAX（カリ
フォルニア州パロアルト）のDr.Kevin Mooreより得たE.
Coli，KM392株を感染させるのに、使用された。また
は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ATCC＃
37197）より入手可能なE.Coli，Y1090株も使用され得
る。感染したバクテリアをプレートし、生じたコロニー
を、標準X-gal基質プラークアッセイ方法（Maniatis）
を用いて、X-galの存在下でβ−ガラクトシダーゼ活性-
-（クリアープラーク）の欠失を検査した。下記の表１
に、EcoRI末端HTLV-I断片（列１）の挿入で得られた組
換え体（クリアー）プラークの数を示す。EcoRIリンカ
ーの対照（列２）およびバックグラウンドを持たない対
照（列３）も、実施された。

【００４６】

【表１】

【００４７】表１からわかるように、約50％のファージ
プラークが、酵素（組換え体）の欠失を示した。EcoRI
リンカーが存在するもしくはしないバックグラウンドレ
ベルは、15％未満であった。

【００４８】プラークの約60％が、酵素活性の欠失を示
した。ファージ材料は、約10⁶プラーク形成ユニット（p
fu)/mlを含有していた。

【００４９】(実施例II） （gp46コード挿入物のスクリーニング） モノクローナル抗体：ヒト細胞系（ATCC HB8755）に由
来する精製した0.5α抗体を、合衆国国立衛生研究所のt
he National cancer Institute（メリーランド州、ベテ
スダ）のDr.Samuel Broaderより得た。アルカリホスフ
ァターゼと結合した状態で誘導された（covalently der
ivatized with alkaline phosphatase）マウス抗ヒトIg
G抗体を、Promega Biotec（ウィスコンシン州、マジソ
ン）から得た。

【００５０】組換え体gp46の同定：実施例１からの約10
⁴pfuのファージストックで感染したKM392細胞の一面の
コロニー（lawn of KM392 cells）を、150mmプレートで
調製し、37℃で約５〜８時間にわたりインキュベート
し、表返した。ローンに、ニトロセルロースシートを敷
き、プラークから紙へ分泌されたHTLV-I組換え体タンパ
クを転移させた。プレートおよびフィルターは、対応す
るプレートおよびフィルター位置にあわせるために、印
を付けた。

【００５１】フィルターを、TBSTバッファー（l0mM Tri
s，pH8.0，150mM NaCl，0.05％ Tween20）で２回洗浄
し、AIB（１％ゼラチンを含むTBSTバッファー）でブロ
ックし、TBSTで再び洗浄し、0.5αモノクローナル抗体
（AIBで１〜２μg/mlに希釈；12〜15ml/プレート）を加
えた後、一晩、インキュベートした。TBSTでシートを２
回洗浄し、その後、酵素標識抗ヒト抗体と接触させ、0.
5α抗体で認識される抗原を含むフィルター部位に標識
抗体を付着させた。最終洗浄の後、フィルターを、５ml
のアルカリホスファターゼバッファー（l00mM Tris，pH
9.5，l00mM NaCl，5mM MgCl₂）中の16μl BCIP（５℃に
維持された50mg/mlのストック溶液）と混合した33μl N
BT（５℃に維持された50mg/mlのストック溶液）を含有
する基質媒体中で発色させた。抗原産生点（0.5ｘ抗体
で認識される）では、紫色が現れた。

【００５２】二次プレーティング：前記工程で決定され
た抗原産生領域を、82mmプレートに、約100〜200pfuで
再びプレートした。上記工程、つまり、まず、５〜８時
間インキュベートし、NBT/BCIPによる発色の工程を、0.
5α抗体と反応し得る抗原を分泌するプラークを同定す
るために、繰り返した。同定されたプラークを、取り上
げ、ファージバッファーで溶出した（Maniatis，p.44
3）。抗体反応性ペプチドを分泌する組換え体ファージ
プラークのうちの３つを、実施例IIIの方法による配列
決定のために選択した。対応する感染したファージは、
MTA4、MTA1およびMTA5と命名された。

【００５３】（実施例III） （ファージ精製およびDNA抽出）ファージMTA4、MTA1お
よびMTA5を、感染したE.coli Y1088バクテリアのプレー
ト培養物より単離した。これらの細胞は、ATCC（ATCC＃
31195）より入手可能である。プレートで生産された物
質を、低速遠心分離法によりバクテリア破砕物より精製
し、上清をSW27チューブに注いだ。RNアーゼおよびDNア
ーゼを１mg/mlのストック溶液から各１mg/mlの濃度でそ
れぞれ加えた。試料を37℃で30分間インキュベートし、
20％ m.w.8000 PEG，5.8g NaCl，2.0g MgS0₄・7H₂O，１
M TrisCl，pH7.5，および２％ゼラチンを含むポリエチ
レングリコール（PEG）溶液を等容量加えた。試料を１
時間水浴に置き、ファージ粒子を沈澱させ、その後、４
℃で約20分間10ｋで遠心分離により単離した。

【００５４】上清をデカンテーションによって除き、ペ
レットを0.6ml PDBバッファー（5.8g NaCl，2.0g MgS0₄
・７H₂O，50ml 1M TrisCl，pH7.5，および５ml ２％ゼ
ラチン）中に再び懸濁させ、1.5mlのポリプロピレンマ
イクロチューブに移した。５μl l0％ SDS，５μl 0.5M
EDTA，および2.5μlプロティナーゼK（20mg/ml）を加
え、試料を15分間50℃でインキュベートした。

【００５５】洗浄剤および酵素処理された材料を、等量
のフェノール／クロロホルムで抽出し、遠心分離して相
の分離を確実にした。水相を新しいチューブに移し、抽
出／遠心分離工程をクロロホルムとイソアミルアルコー
ルとの混合物を用いて繰り返した。等容量のイソプロパ
ノールを加え、試料を数回逆にして混合し、-70℃で20
分間冷却した。試料を５分間遠心分離にかけ、上清をデ
カンテショーンで除いた。ペレットを70％エタノール中
で洗浄し、37℃ヒートブロックで簡単に乾燥し、l00μl
TEバッファー，pH7.5に再び懸濁させた。

【００５６】単離したファージDNAをKpnIおよびSacIで
消化し、その後、KpnI/SacIで切断したプラスミドベク
ターpGEM-3（Promega Biotec）と結合させ、所望の挿入
物を有するプラスミド組換え体を単離した。HTLV-I挿入
物を、その後、標準ジデオキシ配列決定法を用い、EcoR
I挿入部位に隣接するλgtll配列の前後のプライマーを
用いて配列決定した。

【００５７】図は、試験された３つの融合ペプチドのそ
れぞれについて、コード配列、および上記の方法によっ
て形成された融合タンパクの一部分であり、上記コード
配列に対応するアミノ酸配列を示す。３つの各挿入配列
で与えられたβ-gal遺伝子の末端Ｇ塩基および隣接する
env遺伝子のCC塩基は、GCC（Ala）コドンを生じ、通
常、３つの全てのHTLV-I env挿入物においてそのコドン
位置で生じるSerコドンを置換する。示されるように、M
TA4の挿入物は、HTLV-Iコード領域の5565塩基から5790
塩基まで延びている225塩基対配列を含み、これは、gp4
6配列の129から203位のアミノ酸（74個のアミノ酸）に
対応する。MTA1挿入物は、HTLV-1コード領域の5664塩基
から5807塩基まで延びている143塩基対配列を含み、こ
れは、gp46配列の162から209位のアミノ酸（47個のアミ
ノ酸）に対応する。MTA5ファージの挿人物もまた、5664
塩基で始まり、5895塩基まで延びている。この231塩基
対配列は、gp46タンパクの162から239位のアミノ酸（77
個のアミノ酸）をカバーする。

【００５８】5664から5790の挿入物の重なりの領域は、
天然のgp46タンパクの161から203位のアミノ酸の41アミ
ノ酸配列を含む。３つのペプチドのアミノ酸の数は、中
断された5'末端Serコドン（転写された組換え体コード
配列においては、Alaコドンによって置換されている）
を含むが、3'末端の中和されたコドン（組換え体ペプチ
ドにおいては、翻訳されない）を含まずに計算される。
従って、ここに開示されるペプチドは、(a)長さが約80
個を下まわるアミノ酸であり、そして(b)ATCC番号HB875
5で特徴つけられる細胞系によって製造される抗ヒトHTL
V-I抗体と免疫反応性のアミノ酸配列： Leu-Leu-Val-A
sp-Ala-Pro-Gly-Tyr-Asp-Pro-Ile-Trp-Phe-Leu-Asn-Thr
-Glu-Pro-Ser-Gln-Leu-Pro-Pro-Thr-Ala-Pro-Pro-Leu-L
eu-Pro-His-Ser-Asn-Leu-Asp-His-Ile-Leu-Glu-Pro-Ser
によって形成される免疫原性の領域を含む。

【００５９】（実施例IV） （溶原菌の構築）E.coli C600株を、スタンフォード大
学（カリフォルニア州、スタンフォード）のDr.R.Davis
より得た。または、E.coli Y1089（ATCC＃37196）も使
用し得る。一晩培養し、飽和した１mlの細胞培養物を、
実施例IIIの３つのファージのひとつで感染させた。上
記感染は、一晩培養したバクテリア培養物50μlに、溶
出したプラークストックを10μl吸着させることにより
行った。感染バクテリアを、LB寒天プレート（Maniati
s，p.440）にまき、32℃でインキュベートした。個々の
コロニーを、無菌つまようじでつまみ上げ、２つの別々
のプレートの対応するグリッドに付与した。プレートの
一方を32℃でインキュベートし、他方を42℃でインキュ
ベートした。低い方の温度で増殖した（ファージレプレ
ッサータンパクの存在で産生された溶原状態を示した）
が、高い方の温度では（細胞溶解のため）増殖しなかっ
た細胞は、溶原性であると推定された。３つの各ファー
ジのタイプから多くの溶原性のコロニーが見い出され
た。

【００６０】（実施例Ｖ） （溶原菌からの組換え体抗原の誘導）本実施例は、MTA4
ファージを用いて実施例IVで調製されたλgtll溶原菌か
らHTLV-Iエピトープを含む組換え体タンパクの誘導を説
明する。上記で示されるように、抗原は、ファージβ-g
alタンパクのＮ末端部分を含むβ−ガラクトシダーゼ融
合タンパクの形で製造される。

【００６１】スーパーブロスを、35gバクトトリプト
ン、２gバクトイーストエクストラクト、５g NaClおよ
び５ml １N NaOHを、１ｌの蒸留水中に含有させて調製
した。500mlのスーパーブロスに、上記の実施例で調製
された一晩培養したE.coli λgtll溶原菌の飽和培養物
を１：100で接種した。この培養物を、激しくエアレー
ションを行ないながらＡ₆₀₀が、約0.4〜0.5となるまで
培養した。

【００６２】タンパクの製造を最大にするために、培養
物の温度を43〜44℃に上げた。そのことにより、温度感
受性のβ−ガラクトシダーゼリプレッサー遺伝子が不活
性化された。温度を、65℃の水槽中でエアレーションを
行いながら15分間にわたり43℃に維持した。さらにタン
パクの製造を増加させるために、IPTGをブロスに加え
た。このIPTGは、拮抗的にβ-galリプレッサーに結合す
ることでβ−ガラクトシダーゼ発現を誘発する。培養物
を、約１時間38℃のシェーカーに戻した。細胞をその
後、37℃で15分間6,000ｘgでペレット化し、溶解バッフ
ァー（10mM Tris，pH7.4，２％ TritonX-100，１％ apr
otinin，50μg PMSF）中に再懸濁し、そして、その後す
ぐに、液体Ｎ₂に投入した。溶解は、冷凍試料の解凍で
完了した。

【００６３】（実施例VI） （融合タンパクの精製）前記実施例で得られた細胞溶解
物を解凍し、37℃に暖めた。10μlのDNアーゼ（１μg/m
l）を加え、混合物を粘性が減少するまでインキュベー
トした。溶解物を氷で急冷し、マイクロフュージ中で５
分間４℃にて清澄化し、Sepharose 4B（Pharmacia）に
結合した抗β−ガラクトシダーゼの６mlのカラムに負荷
した。カラムを１〜２時間平衡化し、７容量（カラム容
積量）のTXバッファー（10mM Tris，pH8.0，２％ Trito
n X-100，50μg/ml PMSF）で洗浄し、5mM 3.5−ジヨー
ドサリチル酸を含むTXバッファー２容量で洗浄した。融
合タンパクをその後、35mM3.5−ジヨードサリチル酸を
含むTXバッファーでカラムから溶離した。タンパクの大
部分は、最初の３〜４容量で溶離され、除去は、実質的
に７容量で完了した。

【００６４】溶離試料を脱塩し、Amiconフィルター（マ
サチューセッツ州Danvers）を用いて濃縮した。

【００６５】（実施例VII） （補体を媒介する細胞溶解の阻害）HUT102-B2細胞をDr.
R.C.Gallo，LTCB，NIHから得た。これは、HTLV-Iを製造
することが知られている長期培養Ｔ−細胞系である。

【００６６】0.5α抗体（約５μg/ml IgG）もしくはア
イソタイプの、適合したヒトIgGの対照を、MTA4組換え
体ペプチドもしくは無関係な組換え体とともに30分間、
室温でプレインキュベートした。50μlのこれらの混合
物を、その後、96ウェルマイクロタイタープレート中の
５x10⁵のHUT102B2に加え、室温で30分間インキュベート
した。ウェル当り、30μlのウサギの補体を加え、37℃
で１時間インキュベートした。細胞の生存を、顕微鏡観
察で決定した。細胞溶解は、MTA4ペプチド抗原の添加で
明らかに阻止されたが、無関係な組換え体ペプチド抗原
とのプレインキュベーションでは、阻止されなかった。
組換え体抗原もしくは無関係な組換え体ペプチド抗原と
のプレインキュベーション後の、アイソタイプの対応ヒ
トIgGは、HUT102-82生存に効果はなかった。

【００６７】（実施例VIII） （固相アッセイ）精製MTA4ペプチド抗原を実施例IVの様
に調製し、ニトロセルロースフィルターにドットブロッ
トした。次いで、これをＴ細胞白血病の患者（HTLV-I感
染の６人の患者）の血清抗体のアッセイに用いた。各場
合とも、被検個体からの0.1mlの様々な血清希釈溶液
を、１：100から１：50,000の範囲で、フィルターに加
え、30分間室温で反応させた。フィルターをその後、TB
STバッファー（実施例II）で２回洗浄し、実施例IIの様
にアルカリホスファターゼと結合した抗ヒト抗体ととも
にインキュベートした。抗体の存在は、実施例IIと同様
に、NBTおよびBCIPでの発色で決定された。

【００６８】本発明を、特定の実施態様、構築方法およ
び使用について説明してきたが、本発明から逸脱するこ
となく、様々な変化および改変がなされ得ることは、当
業者には明らかである。

【００６９】

【発明の効果】

(a)HTLV-Iエンベロープタンパクgp46由来で、(b)Ｔ細胞
白血病の個体中に存在する抗HTLV-I抗体と免疫反応性の
組換え体ペプチド抗原が提供される。この抗原はグリコ
シル化されておらず、HTLV-Iに感染した個体の血清中に
存在する抗体と免疫反応性であり、診断薬として優れて
いる。

【図面の簡単な説明】

【図１】３つの融合ペプチドのそれぞれについて、コー
ド配列、および対応するアミノ酸配列を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｐ 21/02 9162−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (71)出願人 595124907 505 Ｐｅｎｏｂｓｃｏｔ Ｄｒｉｖｅ, Ｒｅｄｗｏｏｄ Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏ ｒｎｉａ 94063 Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａ ｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 HTLV-Iエンベロープタンパク質gp46に由
   来する、約80個を下まわるアミノ酸を有し、アミノ酸配
   列：Leu-Leu-Val-Asp-Ala-Pro-Gly-Tyr-Asp-Pro-Ile-Tr
   p-Phe-Leu-Asn-Thr-Glu-Pro-Ser-Gln-Leu-Pro-Pro-Thr-
   Ala-Pro-Pro-Leu-Leu-Pro-His-Ser-Asn-Leu-Asp-His-Il
   e-Leu-Glu-Pro-Serを含むペプチドからなる群から選択
   される、ペプチド抗原。
2. 【請求項２】 前記アミノ酸配列の41個のアミノ酸を有
   する、請求項１に記載のペプチド抗原。
3. 【請求項３】 組換え融合タンパク質の一部である、請
   求項１に記載のペプチド抗原。
4. 【請求項４】 被検個体のHTLV-I感染症を検出する方法
   であって、該方法は次の工程を包含する：被検個体由来
   の血清と、HTLV-Iエンベロープタンパク質gp46に由来す
   る、約80個を下まわるアミノ酸を有し、アミノ酸配列：
   Leu-Leu-Val-Asp-Ala-Pro-Gly-Tyr-Asp-Pro-Ile-Trp-Ph
   e-Leu-Asn-Thr-Glu-Pro-Ser-Gln-Leu-Pro-Pro-Thr-Ala-
   Pro-Pro-Leu-Leu-Pro-His-Ser-Asn-Leu-Asp-His-Ile-Le
   u-Glu-Pro-Serを含むペプチドからなる群から選択され
   る、ペプチド抗原と反応させる工程、および結合した抗
   体の存在について抗原を試験する工程。
5. 【請求項５】 請求項４に記載の方法であって、前記提
   供された抗原が固体支持体に付着し、前記反応がそのよ
   うな血清と支持体との接触を包含し、前記試験が支持体
   および結合した抗体とレポーター標識抗ヒト抗体との反
   応を包含する、方法。
6. 【請求項６】 HTLV-Iに対する抗体の存在を確かめるた
   めのキットであって、該キットは、その表面にペプチド
   抗原が結合した固体支持体、およびレポーター標識抗ヒ
   ト抗体とを含有し、 該ペプチド抗原は、HTLV-Iエンベロープタンパク質gp46
   に由来する、約80個を下まわるアミノ酸を有し、アミノ
   酸配列：Leu-Leu-Val-Asp-Ala-Pro-Gly-Tyr-Asp-Pro-Il
   e-Trp-Phe-Leu-Asn-Thr-Glu-Pro-Ser-Gln-Leu-Pro-Pro-
   Thr-Ala-Pro-Pro-Leu-Leu-Pro-His-Ser-Asn-Leu-Asp-Hi
   s-Ile-Leu-Glu-Pro-Serを含むペプチドからなる群から
   選択される。
7. 【請求項７】 Ｔ細胞白血病に対して個体を免疫化する
   ワクチンであって、該ワクチンは、薬理学的に受容され
   得るアジュバンド中に組換え体ペプチドを有し、該ペプ
   チドは、HTLV-Iエンベロープタンパク質gp46に由来し、
   約80個を下まわるアミノ酸を有する、アミノ酸配列：Le
   u-Leu-Val-Asp-Ala-Pro-Gly-Tyr-Asp-Pro-Ile-Trp-Phe-
   Leu-Asn-Thr-Glu-Pro-Ser-Gln-Leu-Pro-Pro-Thr-Ala-Pr
   o-Pro-Leu-Leu-Pro-His-Ser-Asn-Leu-Asp-His-Ile-Leu-
   Glu-Pro-Serを含むペプチドからなる群から選択され
   る。