JPH09133671A

JPH09133671A - 残留塩素量を判定する方法、残留塩素量を判定するキット及び酸化物検出用キット

Info

Publication number: JPH09133671A
Application number: JP23397696A
Authority: JP
Inventors: Noriyasu Kuzuhara; 憲康葛原; 稔 ▲高▼田; Minoru Takada; Masayuki Numama; 雅之沼間
Original assignee: Konica Minolta Inc
Current assignee: Konica Minolta Inc
Priority date: 1995-09-05
Filing date: 1996-09-04
Publication date: 1997-05-20

Abstract

(57)【要約】（修正有）【課題】色素の沈澱の発生を抑制して、発色後時間が
経過しても被検液中の酸化剤の濃度、特に残留塩素濃度
を判定することが出来る残留塩素量を判定する方法及び
残留塩素量を判定するキット及び酸化剤検出用キットの
提供。【解決手段】ベンジジン指示薬２又はその塩を含有す
る溶液と被検液を混合して生成する色素の色相により、
被検液中の残留塩素量を判定する残留塩素量を判定する
方法。ベンジジン指示薬２又はその塩を含有する溶液と被検液
を混合して生成する色素の色相により、被検液中の残留
塩素量を判定する方法において、ベンジジン指示薬又は
その塩の濃度を変化させることによって、生成する色素
の色相変化が生じる残留塩素の濃度領域を変化させる残
留塩素量を判定する方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はベンジジン、テトラ
アルキルベンジジン、特に３，３′，５，５′−テトラ
メチルベンジジン（ＴＭＢ）、及びＮ−スルホアルキル
−３，３′，５，５′−テトラメチルベンジジン（ＳＡ
−ＴＭＢ）を用いた残留塩素量を判定する方法、残留塩
素量を判定するキット及び酸化物検出用キットに関する
ものである。

【０００２】

【従来の技術】残留塩素とは、塩素剤が水に溶けて生成
する次亜塩素酸及びこれがアンモニアと結合して生じる
クロロアミンをいい、前者を遊離残留塩素、後者を結合
残留塩素、両者を併せて残留塩素という。これらの定量
法としては、例えばｏ−トリジン比色法、又はジエチル
−ｐ−フェニレンジアンモニウム（ＤＰＤ）比色法の他
に、濃度が比較的高い場合にはヨウ素滴定法が用いられ
る。

【０００３】ＴＭＢ及びＳＡ−ＴＭＢなどのベンジジン
は、例えばエンザイムリンクドイムノソルベントアッセ
イ（ＥＬＩＳＡ）においてペルオキシダーゼ活性の定量
にしばしば用いられる発色基質である（例えば、ホラン
ドら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，第３０巻、３２９９〜
３３０２頁，特開昭６１−５２３００号等）。ＥＬＩＳ
Ａにおいては通常例えば生体中に存在する微量な物質を
測定するために該物質に対する抗体などの結合性物質を
担体と呼ばれるビーズ又はプレートの穴（ウェル）に固
定化し、当該物質を含む液を反応させて結合させた後、
更にペルオキシダーゼ標識された当該物質に結合性を有
する第二の物質（例えば抗体）を反応し結合させた後、
過酸化水素存在下でＴＭＢを添加すると、ペルオキシダ
ーゼの作用により過酸化水素が酸素を生じその結果ＴＭ
Ｂが酸化されて発色すると言う原理により、発色体の吸
光度と当該物質濃度との相関関係が得られることを利用
している。

【０００４】即ち、ＴＭＢ、ＳＡ−ＴＭＢなどのベンジ
ジンはペルオキシダーゼ存在下で過酸化水素を測定する
ために用いられる。

【０００５】ｏ−トリジン、又はＤＰＤ比色法について
は、ＪＩＳＫ０１０２によれば、何れも例えば各濃度の
クロム酸カリウム−ニクロム酸カリウム溶液の黄色、又
は各濃度の１−（４−メチルベンゼンスルホンアミド）
−７−（２−メチルフェニルアゾ）−８−ヒドロキシ−
３，６−ナフタレンスルホン酸二ナトリウムの桃色の残
留塩素標準液と、被検液とｏ−トリジン又はＤＰＤとの
混合により生じた色素の比色により被検液中の残留塩素
濃度を定量する。

【０００６】この方法によれば、非常に高感度に正確に
残留塩素濃度を定量することが可能であるが多数の濃度
の残留塩素標準比色液（例えば０．０１ｍｇ／ｌ〜０．
０１ｍｇ／ｌ刻みで２０本）を調製しなければならず、
この標準液も色素の退色が免れないため長期間の保存が
出来ず要時調製が必要となる。また、調製時に沈殿が出
た場合にはやり直す必要があるなど非常に煩雑なもので
ある。

【０００７】一方、比較的高濃度の残留塩素測定にはヨ
ウ素滴定法が用いられるが、この方法の場合もＪＩＳＫ
０１０２によれば、ヨウ化カリウム溶液と残留塩素の被
検液を混合し遊離したヨウ素をチオ硫酸ナトリウム溶液
で滴定し溶液の黄色が薄くなってから指示薬としてでん
ぷん溶液を加え生じたヨウ素でんぷんの青い色が消える
まで滴定して、滴定に要したチオ硫酸ナトリウム溶液量
を用いて一定の計算式から残留塩素濃度を算出すること
ができる。しかしながら、この場合も滴定操作を必要と
する点で非常に煩雑であることに変わりはない。

【０００８】残留塩素の測定が望まれる場合としては様
々な状況が考えられるが、例えば食品製造業において液
状の食品の製造加工工程で製造ライン等のパイプ、タン
クなどの殺菌洗浄時に次亜塩素酸溶液を用いた場合に、
洗浄終了後当該溶液をきれいに洗い流す必要があるわけ
であるがこのようなルーチンの工程管理に於いて上記の
ような煩雑かつ緻密な検査は実施するのは極めて困難で
あり、結果的にいわば当業者の勘に依存するところとな
ってしまう可能性がある。

【０００９】ＴＭＢの発色については、分析対象物存在
下で２つの連続する発色が起こることが特公平２−２５
１５２号に開示されている。ここで開示されている二つ
の連続する発色とは、青色の第一の種、続いて褐色の第
二の種とされており、この青色の第一の種は一時的なも
のである傾向を示し、最後には褐色に変化する、即ち時
間の経過により青色が続いて褐色に変化することを示し
ている。また、分析濃度が高いほどこの現象が生じやす
いことが記載されている。しかし上記特許は、発色につ
いては第一及び第二の種（青色及び褐色）の存在を開示
するにとどまり、該特許の発明者らの関心は専ら青色の
発色をいかに維持するかに注がれており、唯一、時間的
に連続して生ずるとされる褐色の色素については好まし
くないものとして記載されているに過ぎない。その点
で、ＴＭＢと酸化剤とのモル比により変化する色相の関
係を捉えて開示したものではない。

【００１０】従って、酸化剤の濃度に依存して青色、緑
色、黄色、オレンジ色又は赤色という安定した発色を呈
することについてはなんら開示されたものではなく、又
示唆されたものでもない。

【００１１】また、ＴＭＢには検出試薬中のＴＭＢの濃
度が高い場合には、発色後の色素（特に青色の場合が著
しい）が一定時間放置しておく場合に沈殿を生じやすく
なるという問題がある。特開昭６２−１８２６５９号で
は特定のアニオン類が生じた色素は特に不溶化させやす
いことを積極的に利用して、当該不溶化した色素を免疫
組織染色等の生物学的物質を視覚化させるために用いる
ことが開示されている。

【００１２】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、ベン
ジジン及びその誘導体が酸化剤、特に残留塩素と共存す
ることによりその量に応じて生成する色素の色相に変化
が生ずることを利用して、簡便な操作で、且つ発色した
色の色相を観察することによって被検液中の残留塩素濃
度を測定することができる残留塩素量を判定する方法、
残留塩素量を判定するキット及び酸化物検出用キットを
提供することにある。更に、本発明の目的はベンジジン
及びその誘導体と酸化剤、特に残留塩素が共存すること
により生成する色素の沈澱の発生を抑制することができ
る残留塩素量を判定する方法、残留塩素量を判定するキ
ット及び酸化物検出用キットを提供することにある。

【００１３】

【課題を解決するための手段】本発明の上記目的は、以
下の構成により達成される。

【００１４】１．ベンジジン指示薬又はその塩を含有す
る溶液と被検液を混合して生成する色素の色相により、
被検液中の残留塩素量を判定することを特徴とする残留
塩素量を判定する方法。

【００１５】２．ベンジジン指示薬又はその塩を含有す
る溶液と被検液を混合して生成する色素の色相により、
被検液中の残留塩素量を判定する方法であって、ベンジ
ジン指示薬又はその塩の濃度を変化させることによっ
て、生成する色素の色相変化が生じる残留塩素の濃度領
域を変化させることを特徴とする残留塩素量を判定する
方法。

【００１６】３．ベンジジン指示薬がテトラアルキルベ
ンジジンであることを特徴とする前記１又は２に記載の
残留塩素量を判定する方法。

【００１７】４．テトラアルキルベンジジンが３，
３′，５，５′−テトラメチルベンジジンであることを
特徴とする前記３に記載の残留塩素量を判定する方法。

【００１８】５．テトラアルキルベンジジンが下記一般
式Ｉで表される３，３′，５，５′−テトラアルキルベ
ンジジンのスルホアルキル誘導体である前記３に記載の
残留塩素量を判定する方法。

【００１９】

【化５】

【００２０】式中Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｒ₄は同一又は異なっ
ても良く、各々炭素原子数１乃至６の直鎖アルキル基を
表し、Ｒ₅，Ｒ₆は水素原子又は次式II：−（ＣＨ₂）ｎ
ＳＯ₃Ｈ（式中、ｎは１乃至６の整数を表す。）で表さ
れるスルホアルキル基を表し、かつ少なくともＲ₅、Ｒ₆
の何れか一方は該スルホアルキル基を表すものであり、
更に該スルホアルキル基はヒドロキシル基の少なくとも
１個により置換されていてもよい。

【００２１】６．前記色相が青色、緑色、黄色、オレン
ジ色、赤色又はこれらの中間色の何れかであることを特
徴とする前記４に記載の残留塩素量を判定する方法。

【００２２】７．前記色相が青緑色、黄色、オレンジ
色、赤色又はこれらの中間色の何れかであることを特徴
とする前記５に記載の残留塩素量を判定する方法。

【００２３】８．ベンジジン指示薬又はその塩を含有す
る溶液と被検液を混合して生成する色素の色相により、
被検液中の残留塩素量を判定するキット。

【００２４】９．ベンジジン指示薬又はその塩を希釈で
きる溶液を含んでなる、ベンジジン指示薬又はその塩を
含有する溶液と被検液を混合して生成する色素の色相に
より被検液中の残留塩素量を判定するキット。

【００２５】１０．ベンジジン指示薬又はその塩を含有
する溶液と被検液を混合して生成する色素の色相によ
り、被検液中の残留塩素量を判定するキットであって、
ベンジジン指示薬又はその塩を含有する溶液の複数の希
釈倍率及び／又は濃度と被検液中の様々な残留塩素含有
量の組み合わせによって観察される標準的な発色の色相
名及び／又は発色の色相見本を含む被検液中の残留塩素
量を判定するキット。

【００２６】１１．ベンジジン指示薬がテトラアルキル
ベンジジンであることを特徴とする前記８〜１０の何れ
か１項に記載の残留塩素量を判定するキット。

【００２７】１２．テトラアルキルベンジジンが３，
３′，５，５′−テトラメチルベンジジンであることを
特徴とする前記１１に記載の残留塩素量を判定するキッ
ト。

【００２８】１３．テトラアルキルベンジジンが前記一
般式Ｉで表される３，３′，５，５′−テトラアルキル
ベンジジンのスルホアルキル誘導体であること特徴とす
る前記１１に記載の残留塩素量を判定するキット。

【００２９】１４．ベンジジン指示薬又はその塩及び一
般式（１）〜（４）から選ばれる化合物を少なくとも１
種含有する溶液と被検液を混合して生成する色素の色相
により、被検液中の残留塩素量を判定することを特徴と
する残留塩素量を判定する方法。

【００３０】

【化６】

【００３１】式中、Ｗ₁は、−ＮＯ₂，−ＣＮ，−ＣＨ
Ｏ，−ＣＯＲ₇（Ｒ₇は置換、無置換のアルキル基、又は
水素原子）の何れかであって、Ｘ₁，Ｙ₁，Ｚ₁は、それ
ぞれ、−ＮＲ₈Ｒ₉（Ｒ₈，Ｒ₉は置換、無置換のアルキル
基、又は水素原子）、−ＯＲ₁₀（Ｒ₁₀は置換、無置換の
アルキル基、又は水素原子）、−Ｒ₁₁（Ｒ₁₁は置換、無
置換の炭素数１から４の低級アルキル基）、−Ｃｌ，−
Ｆ，−Ｉ，−Ｈから選ばれる原子、基であり、Ｘ₁，
Ｙ₁，Ｚ₁のうち少なくとも一つは水素原子以外である。

【００３２】

【化７】

【００３３】式中、Ｘ₂，Ｙ₂，Ｚ₂は、それぞれ、−Ｎ
Ｒ₁₂Ｒ₁₃（Ｒ₁₂，Ｒ₁₃は置換、無置換のアルキル基、又
は水素原子）、−ＯＲ₁₄（Ｒ₁₄は置換、無置換のアルキ
ル基、又は水素原子）、−Ｒ₁₅（Ｒ₁₅は置換、無置換の
炭素数１から４の低級アルキル基）、−Ｃｌ，−Ｆ，−
Ｉ，−Ｈから選ばれる原子、基であり、Ｘ₂，Ｙ₂，Ｚ₂
のうち少なくとも一つは水素原子以外である。

【００３４】

【化８】

【００３５】式中、Ｘ₃は、−ＮＲ₁₆Ｒ₁₇（Ｒ₁₆，Ｒ₁₇
は置換、無置換のアルキル基、アルケニル基、アルキニ
ル基、置換、無置換のフェニル基、置換、無置換のヘテ
ロ環残基又は水素原子）、−ＯＲ₁₈（Ｒ₁₈は置換、無置
換アルキル基、又は水素原子）、−Ｒ₁₉（Ｒ₁₉は置換、
無置換の炭素数１から４の低級アルキル基）、−Ｃｌ，
−Ｆ，−Ｉ，−Ｈから選ばれる原子、基であり、Ｙ
₃は、置換、無置換のアルキル基、置換、無置換のアル
ケニル基、置換、無置換のアルキニル基、置換、無置換
のフェニル基、置換、無置換のヘテロ環残基、−ＮＲ₂₀
Ｒ₂₁（Ｒ₂₀，Ｒ₂₁は置換、無置換のアルキル基、又は水
素原子）、置換、無置換のアルキルチオ基、置換、無置
換のフェニルチオ基、−ＯＲ₂₂（Ｒ₂₂は置換、無置換の
アルキル基、又は水素原子）、−Ｒ₂₃（Ｒ₂₃は置換、無
置換の炭素数１から４の低級アルキル基）、−Ｃｌ，−
Ｆ，−Ｉ，−Ｈから選ばれる原子、基である。Ｚ₃はヒ
ドロキシル基、置換、無置換のアルコキシル基、置換、
無置換のアルキル基、置換、無置換のシクロアルキル基
である。

【００３６】一般式（４）Ｘ₄−ＣＯＣＨ₂ＣＯ−Ｙ₄ 式中、Ｘ₄，Ｙ₄は、それぞれ、置換、無置換のアルキル
基、置換、無置換のアルコキシル基、フェニル基、ヒド
ロキシル基又はアミノ基で置換されたフェニル基、−Ｎ
Ｒ₂₄Ｒ₂₅（Ｒ₂₄，Ｒ₂₅は置換、無置換のアルキル基、又
は水素原子）から選ばれる基である。

【００３７】１５．ベンジジン指示薬又はその塩及び上
記一般式（１）乃至（４）から選ばれる化合物を少なく
とも１種類含有する溶液と被検液を混合して生成する色
素の色相により、被検液中の残留塩素量を判定する方法
であって、ベンジジン指示薬又はその塩の濃度を変化さ
せることによって、生成する色素の色相変化が生じる残
留塩素の濃度領域を変化させることを特徴とする残留塩
素量を判定する方法。

【００３８】１６．ベンジジン指示薬がテトラアルキル
ベンジジンであることを特徴とする前記１４又は１５に
記載の残留塩素量を判定する方法。

【００３９】１７．テトラアルキルベンジジンが３，
３′，５，５′−テトラメチルベンジジンであることを
特徴とする前記１６に記載の残留塩素量を判定する方
法。

【００４０】１８．テトラアルキルベンジジンが前記一
般式Ｉで表される３，３′，５，５′−テトラアルキル
ベンジジンのスルホアルキル誘導体であることを特徴と
する前記１６に記載の残留塩素量を判定する方法。

【００４１】１９．ベンジジン指示薬又はその塩及び前
記一般式（１）乃至（４）から選ばれる化合物を少なく
とも１種含有する溶液と被検液を混合して生成する色素
の色相により、被検液中の残留塩素量を判定するキッ
ト。

【００４２】２０．ベンジジン指示薬又はその塩を希釈
できる溶液を含んでなる、ベンジジン指示薬又はその塩
及び上記一般式（１）乃至（４）から選ばれる化合物を
少なくとも１種含有する溶液と被検液を混合して生成す
る色素の色相により被検液中の残留塩素量を判定するキ
ット。

【００４３】２１．ベンジジン指示薬又はその塩及び上
記一般式（１）乃至（４）から選ばれる化合物を少なく
とも１種含有する溶液と被検液を混合して生成する色素
の色相により、被検液中の残留塩素量を判定するキット
であって、発色溶液の複数の希釈倍率及び／又は濃度と
被検液中の様々な残留塩素含有量の組み合わせによって
観察される標準的な発色の色相名及び／又は発色の色相
見本を含む被検液中の残留塩素量を判定するキット。

【００４４】２２．ベンジジン指示薬がテトラアルキル
ベンジジンであることを特徴とする前記１９〜２１の何
れか１項に記載の残留塩素量を判定するキット。

【００４５】２３．テトラアルキルベンジジンが３，
３′，５，５′−テトラメチルベンジジンであることを
特徴とする前記２２に記載の残留塩素量を判定するキッ
ト。

【００４６】２４．テトラアルキルベンジジンが前記一
般式Ｉで表される３，３′，５，５′−テトラアルキル
ベンジジンのスルホアルキル誘導体であることを特徴と
する前記２２に記載の残留塩素量を判定するキット。

【００４７】２５．予め指示薬が分注され、密封された
容器が複数個収納箱に収納されていることを特徴とする
酸化物検出用キット。

【００４８】２６．前記指示薬がベンジジン指示薬及び
その塩であることを特徴とする前記２５に記載の酸化物
検出用キット。

【００４９】２７．前記指示薬がパラフェニレンジアミ
ン誘導体であることを特徴とする前記２５に記載の酸化
物検出用キット。

【００５０】２８．前記一般式（１）〜（４）から選ば
れる化合物の少なくとも１種を前記容器に含有している
ことを特徴とする前記２５、２６又は２７に記載の酸化
物検出用キット。

【００５１】以下、本発明を更に詳細に述べる。

【００５２】ベンジジン指示薬又はその塩について説明
する。

【００５３】先ず本発明に好ましく用いられる前記一般
式Ｉで表されるベンジジン指示薬化合物について説明す
る。

【００５４】一般式ＩにおいてＲ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｒ₄は同
一又は異なっても良く、各々炭素原子数１乃至６の直鎖
アルキル基を表し、Ｒ₅，Ｒ₆は水素原子又は次式II：−
（ＣＨ₂）ｎＳＯ₃Ｈ（式中、ｎは１乃至６の整数を表
す。）で表されるスルホアルキル基を表し、かつ少なく
ともＲ₅，Ｒ₆の何れか一方は該スルホアルキル基を表す
ものであり、更に該スルホアルキル基はヒドロキシル基
の少なくとも１個により置換されてもよい。塩としては
通常の酸が用いられ、例えば塩酸塩、硫酸塩、クエン酸
塩等が挙げられる。

【００５５】以下に本発明に好ましく用いられるベンジ
ジン指示薬の具体的化合物を挙げるが本発明はこれらに
限定されるものではない。

【００５６】Ｎ−（２−スルホエチル）−３，３′，
５，５′−テトラメチルベンジジン、Ｎ−（３−スルホ
プロピル）−３，３′，５，５′−テトラメチルベンジ
ジン、Ｎ−（４−スルホブチル）−３，３′，５，５′
−テトラメチルベンジジン、Ｎ−（３−スルホプロピ
ル）−３，３′，５，５′−テトラエチルベンジジン、
Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，
３′，５，５′−テトラメチルベンジジン、Ｎ，Ｎ′−
ビス（２−スルホエチル）−３，３′，５，５′−テト
ラメチルベンジジン、Ｎ，Ｎ′−ビス（３−スルホプロ
ピル）−３，３′，５，５′−テトラメチルベンジジ
ン、Ｎ，Ｎ′−ビス（４−スルホブチル）−３，３′，
５，５′−テトラメチルベンジジン、Ｎ，Ｎ′−ビス
（３−スルホプロピル）−３，３′，５，５′−テトラ
エチルベンジジン、Ｎ，Ｎ′−ビス（２−ヒドロキシ−
２−スルホエチル）−３，３′，５，５′−テトラメチ
ルベンジジン、Ｎ，Ｎ′−ビス（２−ヒドロキシ−３−
スルホプロピル）−３，３′，５，５′−テトラメチル
ベンジジン。

【００５７】ベンジジン指示薬の塩としては、上記具体
的化合物の塩酸塩、硫酸塩、クエン酸塩が挙げられる。

【００５８】前記一般式ＩにおいてＲ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｒ₄
が全てメチル基、Ｒ₅，Ｒ₆が水素原子の場合が３，
３′，５，５′−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）で
あり、Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｒ₄が全てメチル基、Ｒ₅がスル
ホアルキル基、Ｒ₆が水素原子の場合がＮ−スルホアル
キル−３，３′，５，５′−テトラメチルベンジジン
（ＳＡ−ＴＭＢ）であり本発明において好ましい。特に
ＴＭＢが好ましい。

【００５９】本発明における具体的な態様として、ＴＭ
Ｂを例にとって説明すると、例えば、まずＴＭＢを溶解
可能な少量の液に溶解する。この溶媒はＴＭＢを溶解す
ることが出来れば、例えばジメチルスルホキシド（ＤＭ
ＳＯ）のような非プロトン性の有機溶媒、ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）、低級アルコール類のようなプロト
ン性の有機溶媒であってもよく、また、酸性の水溶液で
あってもよい。好ましくはｐＨ２．０程度の希塩酸など
のうすい鉱酸の水溶液を用いることが出来る。

【００６０】これを緩衝液に一定量添加して残留塩素検
出試薬を調製することが出来る。この場合、ｐＨはＴＭ
Ｂが析出しない領域で用いることが出来るが、好ましく
は３から７であり、更に好ましくは４から５であり、最
も好ましくは４．６から５．０である。ここで用いられ
る緩衝系としては、特に制限されるものではないが、マ
ロン酸、フタル酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、β−
アラニン、ジメチルグルタル酸、アスパラギン酸、バル
ビツール酸、安息香酸、コハク酸、シュウ酸、酢酸、リ
ンゴ酸、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸、マ
レイン酸などの緩衝剤を用いることが出来る。ここへ残
留塩素を含有する溶液、例えば、次亜塩素酸溶液を水で
適当倍に希釈したものを検出試薬の１／１０量添加する
ことにより、次亜塩素酸濃度の低い試料から高い試料へ
順に、青色、緑色、黄色、オレンジ色、赤色又はこれら
の中間色に呈色する。

【００６１】更に詳しくは、各色についてそれぞれに次
亜塩素酸濃度に応じて呈色の濃度が正の相関を示してい
る。特に、青色（ＴＭＢ濃度に対して次亜塩素酸濃度が
相対的に低い領域）及びオレンジ色又は赤色（ＴＭＢ濃
度に対して次亜塩素酸濃度が相対的に高い領域）につい
ての各色の濃度の変化の情報は、次亜塩素酸濃度の判定
に於いて有益である。

【００６２】色相の変化が生ずる次亜塩素酸濃度領域
は、検出試薬中のＴＭＢの濃度を変化させることによっ
て動かすことが出来る。即ち、検出試薬中のＴＭＢの濃
度を低下させることにより色相の変化が発生する次亜塩
素酸の濃度領域は低濃度側に移行し、逆にＴＭＢの濃度
を上昇させることにより色相の変化が発生する次亜塩素
酸の濃度領域は高濃度側に移行させることが出来る。

【００６３】即ち、この色相の変化を観察することによ
れば、後述の実施例において示されるように、検出試薬
中のＴＭＢの濃度を変化させることにより次亜塩素酸の
濃度は例えば、１０〜２００ｍｇ／ｌの濃度域の判定も
可能であるし、５００〜２０００ｍｇ／ｌの濃度域の判
定も可能である。また、検出感度については、検出試薬
に対して添加する被検液の量を相対的に増加させること
により、当然に被検液中の残留塩素濃度の検出感度を数
倍に向上させることは可能である。この場合検出試薬液
と被検液の混合によるｐＨ変動により、例えばＴＭＢが
析出してくることなどの考えられる弊害を回避すべく、
必要に応じて検出試薬の緩衝液濃度を上昇させるなど、
緩衝能力を高めておけばよい。

【００６４】ＴＭＢと残留塩素量と発色後の色相の関係
については、例えば、ＴＭＢを少量のｐＨ２．０の塩酸
の水溶液に溶解したものを０．１Ｍクエン酸−０．１Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ４．８）に加えて作成したものを用
いた場合、残量塩素中のＴＭＢに対する活性塩素のモル
比（活性塩素／ＴＭＢ）が約３．０以下（値が０の場合
が除く）で青色、２．０〜６で緑色、３．５〜４０で黄
色、４．５以上でオレンジ色又は赤色、という傾向を示
す。

【００６５】色相の変化は、モル比を変化させることが
重要なのでＴＭＢの濃度を変化させて、定量の被検液を
入れても、ＴＭＢの濃度を一定にして、被検液の量を変
化させても良い。

【００６６】ここで各色相のモル比の値が重複している
が、これは例えばＴＭＢ濃度の低い検出試薬液を用いた
場合、同該モル比が２未満（０であることはない）で青
色、２以上、５未満（０であることはない）で緑色、５
以上、２０未満で黄色、２０以上で赤色であり、例えば
ＴＭＢ濃度の高い検出試薬液を用いた場合には、同該モ
ル比が３未満（０であることはない）で青色、３以上、
６未満で緑色、６以上、１１未満で黄色、１１以上で赤
色であるというように、ＴＭＢ濃度に依存して、色相変
化の起こる境界の該モル比が異なることを意味するもの
であり、１種類の検出試薬において同一のモル比で複数
種類の色相を示す可能性をあらわしているものではな
い。

【００６７】特に、色相変化による判定が行いやすいＴ
ＭＢ濃度である１０〜５０ｍｇ／ｌの領域では当該モル
比が３．０未満で青色、３．０以上６．０未満で緑色、
６．０以上１０．０未満で黄色、１０．０以上で赤色で
ある。ただし、この関係は当該反応液の組成により影響
を受ける可能性のあるものである。

【００６８】また、色相の変化により判定する方法を用
いない場合には、比較的高濃度のＴＭＢを含む検出試薬
を用いて青い色の濃度の差異による判定方法を用いるこ
とが出来る。更に、前述の色相の変化によって判定する
方法においても、特に色相の変化が発生する領域よりも
低濃度の次亜塩素酸の濃度の領域では、青い色の濃度の
差異により次亜塩素酸濃度を判定することを併用するこ
とは、検出対象の残留塩素濃度の測定可能領域を著しく
拡大可能にする。

【００６９】後述の実施例にて開示するように、例え
ば、比較的高濃度である３３μｇ／ｍｌのＴＭＢを含有
する検出試薬を用いた場合、色相の変化により判定する
方法における測定可能な残留塩素濃度領域が２００〜１
０００ｍｇ／ｌの場合、青色の濃度即ち明度の差異も併
用することにより、測定可能な残留塩素濃度領域は２〜
１０００ｍｇ／ｌとなり著しく向上する。このことは、
残留塩素濃度が全く未知の被検液の残留塩素濃度判定に
おいて特に有用である。即ち、１次検査として未知の残
留塩素の濃度被検液を検査して、色相変化による判定が
測定可能な残留塩素濃度領域をはずれた場合に、未知の
残留塩素濃度の被検液により発色した色素（例えば青
色）の明度から被検液中の残留塩素濃度のおおよその該
濃度域が推定できるので、次にその推定した残留塩素濃
度領域を色相変化により判定可能な検出試薬液（例えば
前述のように検出試薬中のＴＭＢの濃度調整により設定
できる）を用いることにより判定することができる。

【００７０】これは、被検液について無駄な希釈系列を
作成し、多数の試験を行うという煩雑さから試験者を開
放することに大いに寄与するものである。

【００７１】検出試薬液に被検液を添加した後は、発色
は速やかに進行するため、発色むらを防止すべく軽く反
応液を振る又は撹拌することにより均一な色相を呈した
時点ですぐに観察することもできるし、生成した色素は
少なくとも数時間は安定に存在するので例えば１時間後
に観察することもできる。

【００７２】また、ＴＭＢには検出試薬中のＴＭＢの濃
度が高い場合には、発色後の色素（特に青色の場合が著
しい）が一定時間放置しておく場合に沈殿を生じやすく
なるという問題がある。特開昭６２−１８２６５９号で
は特定のアニオン類が生じた色素を特に不溶化させやす
いことを積極的に利用して、当該不溶化した色素を免疫
組織染色等の生物学的物質を視覚化させるために用いる
ことが開示されている。

【００７３】しかしながら、本発明における発色後の色
素の不溶化（沈殿生成）は、本発明の目的のためにはむ
しろ有害となりうるものである。溶解度を極端に低下さ
せる因子がない限り通常、発色後判定を行うに十分な一
定時間経過まではこのような沈殿は観察されないが、時
間の経過に伴い色素の不溶化（特に高濃度の青色の色素
において起こりやすい）が認められることがある。

【００７４】この点を改善すべく鋭意研究した結果、特
定の特徴を有する芳香族化合物、特定のジカルボニル化
合物、又は、ベンツイミダゾール類を添加することによ
り沈殿生成を抑制しうることを見いだした。

【００７５】その結果これらの化合物を共存させること
により、例えば２４時間経過後においても沈澱の影響を
抑制して残留色素の判定を可能にした。特に青色発色領
域における発色濃度の差による目視判定又は吸光度測定
による定量を可能にした。

【００７６】次に本発明の一般式（１）〜（４）で表さ
れる化合物について説明する。

【００７７】一般式（１）においてＷ₁は、−ＮＯ₂，−
ＣＮ，−ＣＨＯ，−ＣＯＲ₇（Ｒ₇は置換、無置換のアル
キル基、又は水素原子）の何れかであって、−Ｘ₁，−
Ｙ₁，−Ｚ₁は、それぞれ、−ＮＲ₈Ｒ₉（Ｒ₈，Ｒ₉は置
換、無置換のアルキル基、又は水素原子）、−ＯＲ
₁₀（Ｒ₁₀は置換、無置換のアルキル基、又は水素原
子）、−Ｒ₁₁（Ｒ₁₁は置換、無置換の炭素数１から４の
低級アルキル基）、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｉ、−Ｈから選ば
れる原子、基であり、Ｘ₁，Ｙ₁，Ｚ₁のうち少なくとも
一つは水素原子以外である。

【００７８】一般式（２）においてＸ₂，Ｙ₂，Ｚ₂は、
それぞれ、−ＮＲ₁₂Ｒ₁₃（Ｒ₁₂，Ｒ₁₃は置換、無置換の
アルキル基、又は水素原子）、−ＯＲ₁₄（Ｒ₁₄は置換、
無置換のアルキル基、又は水素原子）、−Ｒ₁₅（Ｒ₁₅は
置換、無置換の炭素数１から４の低級アルキル基）、−
Ｃｌ，−Ｆ，−Ｉ，−Ｈから選ばれる原子、基であり、
Ｘ₂，Ｙ₂，Ｚ₂のうち少なくとも一つは水素原子以外で
ある。

【００７９】一般式（３）においてＸ₃は、−ＮＲ₁₆Ｒ
₁₇（Ｒ₁₆，Ｒ₁₇は置換、無置換のアルキル基、アルケニ
ル基、アルキニル基、置換、無置換のフェニル基、置
換、無置換のヘテロ環残基又は水素原子）、−ＯＲ
₁₈（Ｒ₁₈は置換、無置換のアルキル基、又は水素原
子）、−Ｒ₁₉（Ｒ₁₉は置換、無置換の炭素数１から４の
低級アルキル基）、−Ｃｌ，−Ｆ，−Ｉ，−Ｈから選ば
れる原子、基であり、Ｙ₃は、置換、無置換のアルキル
基、置換、無置換のアルケニル基、置換、無置換のアル
キニル基、置換、無置換のフェニル基、置換、無置換の
ヘテロ環残基、ＮＲ₂₀Ｒ₂₁（Ｒ₂₀，Ｒ₂₁はアルキル基、
又は水素原子）、置換、無置換のアルキルチオ基、置
換、無置換のフェニルチオ基、−ＯＲ₂₂（Ｒ₂₂は置換、
無置換のアルキル基、又は水素原子）、Ｒ₂₃（Ｒ₂₃は置
換、無置換の炭素数１から４の低級アルキル基）、−Ｃ
ｌ，−Ｆ，−Ｉ，−Ｈから選ばれる原子、基である。Ｚ
₃はヒドロキシル基、置換、無置換のアルコキシル基、
置換、無置換のアルキル基、置換、無置換のシクロアル
キル基である。

【００８０】Ｘ₃，Ｙ₃における置換、無置換のヘテロ環
残基としては、例えばピリジン、チオフェン、フラン、
テトヒドロピラン等のヘテロ環残基が挙げられる。

【００８１】上記置換基としては、例えばヒドロキシ
基、アミノ基、ニトリル基、スルホン酸基等が挙げられ
る。

【００８２】一般式（４）Ｘ₄−ＣＯＣＨ₂ＣＯ−Ｙ₄ 一般式（４）においてＸ₄，Ｙ₄は、それぞれ、置換、無
置換のアルキル基、置換、無置換のアルコキシル基、置
換、無置換のフェニル基、−ＮＲ₂₄Ｒ₂₅（Ｒ₂₄，Ｒ₂₅は
置換、無置換のアルキル基、又は水素原子）から選ばれ
る基である。

【００８３】以下に本発明一般式（１）〜（４）で表さ
れる具体的化合物を挙げるが本発明はこれらに限定され
るものではない。

【００８４】

【化９】

【００８５】

【化１０】

【００８６】

【化１１】

【００８７】

【化１２】

【００８８】

【化１３】

【００８９】これらは、前記ＴＭＢ溶液中に発色反応時
に共存していればどのような形で共存させても良く、例
えばＴＭＢを含む試験液と上記本発明の化合物を含む試
験液と別々の包装がされ、検査時に混合するものであっ
ても、予め混合された状態で供給されても良い。上記本
発明の化合物を共存させる量は、好ましくはＴＭＢに対
してモル比で０．０１以上であり、更に好ましくは０．
１以上、最も好ましくは１以上である。過剰量添加する
ことは本発明に於いてなんら避けるべきものではない
が、該化合物自身の溶解性その他当該化合物のみの添加
により生じる問題は考慮すべきである。

【００９０】ＳＡ−ＴＭＢにおいても同様にして残留塩
素、特に次亜塩素酸の濃度の判定が可能である。この場
合注意することはＴＭＢで見られた青色の発色に替えて
青緑色の発色が見られることである。即ち、残留塩素の
濃度の低い方から青緑色、黄色、オレンジ色、赤色又は
これらの中間色に呈色する。その他の性質、即ち発色色
素の濃度依存性等に関してはＴＭＢの場合と同様の性質
を持つため、色相のみ、濃度差のみ、色相と濃度差の併
用により残留塩素の濃度の判定が可能である。

【００９１】また、ＴＭＢに代表されるテトラアルキル
ベンジジンの場合と同様にＳＡ−ＴＭＢにおいても濃度
が高い場合に沈殿を生じやすくなる点を、有機溶媒を一
定濃度（通常５％以上）添加するという方法の他に、前
述した特定の特徴を有する芳香族化合物、特定のジカル
ボニル化合物又は前述したベンツイミダゾール類を添加
することにより又極微量の添加によっても沈殿生成を抑
制しうることを見いだした。

【００９２】その結果これらの化合物を共存させること
により、例えば２４時間経過後においても特に青色発色
領域における発色濃度の差による目視判定又は吸光度測
定による定量を可能にした。

【００９３】更に、本発明はベンジジン、好ましくはテ
トラアルキルベンジジン、特に好ましくは３，３′，
５，５′−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）及びＮ−
スルホアルキル−３，３′，５，５′−テトラメチルベ
ンジジン（ＳＡ−ＴＭＢ）を用いた残留塩素量の測定キ
ットに関するものである。

【００９４】本発明の残留塩素量を判定するキットは、
ベンジジン指示薬が分注された容器を複数個収納箱に収
納していることが残留塩素測定のための最低限の構成と
なるが、該キットには更に、例えば被検液を一定量はか
りとることの出来るスポイト又はその代用物、発色後の
色相又は明度の判定を容易にする比較対象用の色見本
（カラースケール）を付属することにより、更に使用勝
手を向上させることが可能である。なお、色見本は色素
の溶液、又はゲル状のものであってもよいが例えば紙な
どにカラー印刷されたものを用いれば使用勝手は更に向
上する。

【００９５】本発明のベンジジン、好ましくはテトラア
ルキルベンジジン、特に好ましくは３，３′，５，５′
−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）及びＮ−スルホア
ルキル−３，３′，５，５′−テトラメチルベンジジン
（ＳＡ−ＴＭＢ）を用いたキットの場合としては、例え
ば、まずＴＭＢを溶解可能な溶媒に溶解する。この溶媒
はＴＭＢを溶解することが出来れば、例えばジメチルス
ルホキシド（ＤＭＳＯ）のような非プロトン性の有機溶
媒、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、低級アルコール
類のようなプロトン性の有機溶媒であってもよく、ま
た、酸性の水溶液であってもよい。好ましくはｐＨ２．
０程度の希塩酸などのうすい鉱酸の水溶液を用いること
が出来る。例えば、ＴＭＢ５ｍｇをｐＨ２．０の希塩酸
１ｍｌに溶解することができる。

【００９６】これを緩衝液に一定量添加して残留塩素検
出キットを調製することが出来る。この場合、ｐＨはＴ
ＭＢが析出しない領域で用いることが出来るが、好まし
くは３から７であり、更に好ましくは４から５であり、
最も好ましくは４．６から５．０である。ここで用いら
れる緩衝系としては、特に制限されるものではないが、
マロン酸、フタル酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、β
−アラニン、ジメチルグルタル酸、アスパラギン酸、バ
ルビツール酸、安息香酸、コハク酸、シュウ酸、酢酸、
リンゴ酸、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸、
マレイン酸などの緩衝剤を用いることが出来る。当該キ
ットの具体的な使用方法としては、ここへ残留塩素溶
液、例えば次亜塩素酸水溶液を水で適当倍に希釈したも
のを検出試薬の１／１０量添加することにより生じる、
次亜塩素酸濃度の低い試料から高い試料へ順に、青色、
緑色、黄色、オレンジ色、又は赤色という呈色を観察す
ることにより被検液の残留塩素量を判定することが出来
る。各色についてそれぞれに次亜塩素酸濃度に応じて呈
色の濃度が正の相関を示しており、特に、青色及びオレ
ンジ色又は赤色についての各色の濃度の変化の情報は、
次亜塩素酸濃度の判定に於いて有益である。

【００９７】また、本発明は、検出試薬及び、該検出試
薬を希釈するための溶液からなる残留塩素量を判定する
キットに関するものである。残留塩素を含む被検液の残
留塩素濃度測定可能領域、特に色相の変化により判定可
能な残留塩素濃度の領域は、該キットの検出試薬液中の
ＴＭＢ濃度を変化させることにより変動させることがで
きる。即ち、検出試薬中のＴＭＢの濃度を低下させるこ
とにより色相の変化が発生する判定可能な残留塩素濃度
の領域は低濃度側に移行し、逆にＴＭＢの濃度を上昇さ
せることにより色相の変化が発生する該領域は高濃度側
に移行させることが出来るが、その関係は前述の通りで
ある。

【００９８】従って、上記キットの構成に加えられた適
当な希釈用溶液により検出試薬中のＴＭＢ濃度を変化さ
せることにより、被検液中の残留塩素濃度に応じて適切
な色相変化を与えるキットを調製することが可能であ
る。前記希釈用溶液は、ＴＭＢの発色反応に影響を与え
ないものであればどのようなものでも差し支えないが、
好ましくはＴＭＢの溶解されている緩衝溶液、又は蒸留
水である。ここで示されるＴＭＢの溶解されている緩衝
溶液には当然に生成した色素の沈殿を抑制するための前
述の添加試薬が含まれていてもよく、好ましい態様とし
ては、ＴＭＢを溶解した溶液に検出試薬が含有されてい
る場合には該試薬を同一濃度含有したものを用い、検出
試薬が含有されていない場合には該試薬を含有しない緩
衝液を用いることがあげられる。ＳＡ−ＴＭＢにおいて
も、ＴＭＢの場合と同様の構成のキットである。

【００９９】更に、本発明は予め指示薬が分注され、密
封された容器が複数個収納箱に収納された酸化物検出用
キットである。

【０１００】収納箱は通常の公知の箱で良いが、複数の
容器が、固定されて収納されるものが好ましい。

【０１０１】上記キットは、例えば、予め指示薬が容器
に分注され、密封された該容器が複数個収納されたケー
ス（図１（ａ））、色見本（カラースケール）（図１
（ｂ））及び分注機（被検液用）より構成される。

【０１０２】指示薬としては特に限定されないが、前記
に記載したベンジジン指示薬又はその塩〔例えばテトラ
アルキルベンジジン（例えばテトラメチルベンジジン
（ＴＭＢ）、前記一般式Ｉで表される化合物のスルホア
ルキル誘導体、オルトトリジン（ＯＴ）〕、パラフェニ
レンジアミン誘導体（例えば、Ｎ，Ｎ−ジエチルパラフ
ェニレンジアミン（ＤＰＤ））等が挙げられる。これら
の中で特に好ましいものはテトラメチルベンジジン（Ｔ
ＭＢ）、オルトトリジン（ＯＴ）、Ｎ，Ｎ−ジエチルパ
ラフェニレンジアミン（ＤＰＤ）である。

【０１０３】上記指示薬に使用される溶媒、緩衝液の種
類、量は前述したＴＭＢと同様である。

【０１０４】また、本キットは前記一般式（１）〜
（４）から選ばれる少なくとも１種の化合物を上記容器
に含有してることが、指示薬と被検液と反応して得られ
る色素の沈殿防止のために好ましい。指示薬に対する該
一般式（１）〜（４）から選ばれる化合物の量等は前述
したＴＭＢの場合と同様である。

【０１０５】本発明は予め指示薬が容器に分注され、密
封された該容器に含有されていることを特徴とするが、
指示薬を精度よく分注することがポイントである。

【０１０６】本発明で指示薬を精度よく分注するとは、
分注誤差が±４％以内であることをいう。

【０１０７】指示薬の分注方法としては、精密ピペット
（例えば、ＦＨ−１０Ｓ：（株）ヒラサワ）で、又は精
密天秤（例えば、ＡＴ２５０メトラー社製）で指示薬を
計りとり精度良く分注することができる。

【０１０８】指示薬の分注量は、本発明においては、通
常１ｍｌ〜５ｍｌで、２ｍｌが好ましい。

【０１０９】本発明の密封された容器はいかなる形状で
も良いが、使い勝手及びケースに収納する点からして、
例えば試験管のような形状が好ましい。

【０１１０】容器の材質の物性は、吸水性の点では０．
０１〜０．０６％が好ましく、ガス透過性の点ではＣＯ
₂：５０〜９００ｃｃ／１００ｍ²／ｍｍ／２４ｈｒ．ａ
ｔｍ、２５℃、Ｏ₂：５０〜３５０ｃｃ／１００ｍ²／２
４ｈｒ．ａｔｍ、２５℃が好ましく、具体的には例えば
ポリスチレン等が挙げられる。

【０１１１】本発明の容器を密封するふたの形状として
はいかなる形状でも良いが、栓、シール状が好ましく、
特にシール状がより好ましい。

【０１１２】ふたの材質の物性は、例えばポリエチレ
ン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニルポリ塩化ビニリデ
ン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリエステル、ポリ
エチレンテレフタレート等ポリマーの場合、引っ張り強
さの点で１．１〜２．２ｋｇ／ｃｍ²、破断伸びの点で
１０〜６００％、引裂強さの点で１．１〜２５ｋｇ／ｍ
ｍ²が好ましい。

【０１１３】アルミ箔の場合は引っ張り強さの点で１０
〜９０Ｎ／ｍｍ²、破断伸びの点で２〜４５％、引裂強
さの点で５〜６０ｋｇ／ｍｍ²が好ましい。

【０１１４】上記ふたの吸水性は０〜９％が好ましく、
ガス透過性はＣＯ₂：１．５〜２７００ｃｃ／１００ｍ²
／ｍｍ／２４ｈｒ．ａｔｍ、２５℃、Ｏ₂：２０〜２０
００ｃｃ／１００ｍ²／２４ｈｒ．ａｔｍ、２５℃が好
ましい。

【０１１５】ふたの容器へのシール方法としては熱、電
磁波、超音波、レーザー光及び接着剤でシールでき、
熱、電磁波、超音波、レーザー光でシールする場合通
常、１５０〜２８０℃で１秒〜５秒でふたを容器にシー
ルでき、接着剤の場合は、平板接着であれば通常、加重
２ｋｇ／ｃｍ²でシールできる。

【０１１６】本発明の場合、密封性及び生産性の観点か
ら熱及びレーザー光でシールするのが好ましい。

【０１１７】本発明の酸化物検出用キットのふたと容器
の構成は、ふたはアルミ箔とポリマー（例えばポリエチ
レン等）を張り合わせた複合体シート（図２、図３）で
あり、容器はポリスチレン製試験管（図１、図２）であ
ることが好ましい。

【０１１８】また、アルミ箔とポリマーを張り合わせた
複合体シートは、被検液（酸化物）を分注する汎用分注
機に使用されているチップにより破断されなければなら
なく、ポリマーの厚みは、１μｍ〜１０μｍであること
が好ましく、アルミ箔の厚みは５μｍ〜５０μｍである
ことが好ましい。

【０１１９】シールされたアルミシートを破断する時の
加重は、汎用分注機の例えば２００μｌ用チップの場合
５０ｇ／ｍ²以上、水漏れ等を考慮すると２００ｇ／ｍ²
以上であれば充分である。アルミシートとしては例え
ば、昭和アルミニウム（株）製（図３）のものがある。

【０１２０】また、上記ポリスチレン製試験管の厚み
は、通常２００μｍ〜２０００μｍ、好ましくは６００
μｍ〜１３００μｍである。

【０１２１】本発明の酸化物検出用キットは酸化物であ
ればどれにも利用できるが、残留塩素量検出に適してい
る。

【０１２２】次に、本発明の予め指示薬が容器に分注さ
れ、密封された該容器が複数個収納された酸化物検出用
キットを図を用いて説明する。

【０１２３】本発明の一例を示す酸化物検出用キット構
成（図１）は、次の構成である。すなわち、図１（ａ）
は本発明の指示薬（試薬：２ｍｌ）２が容器（試験管：
１２φ×７５ｍｍ）１に分注され、アルミシート（図３
に示す）３で密封された容器１から構成されている。そ
の他に、恒温槽（ブロックヒーターなど、温度が６０℃
に安定設定できるもの）、分光光度計（波長４５０ｎｍ
の吸光度が測定可能のもの）、カラーメーター（図１
（ｂ））、標準カラースケール（図１（ｃ））、試験管
立て及び分注機５を用意する。

【０１２４】本キットの場合カラーメーター（図１
（ｂ））、標準カラースケール（図１（ｃ））がセット
されている。図１（ｂ）、図１（ｃ）において１ａは標
準カラースケール、１ｂはライト、１ｃは比色窓、１ｄ
は標準カラースケールホルダー、１ｅは試験管ホルダ
ー、１ｆは酸化物量表示、１ｇは比色の度合を示すもの
である。

【０１２５】キット操作法容器１を図２に示す方向に手で持ち、予め被検液を１０
０μｌ分注した市販の分注機５を用いチップ４で加重７
０ｇ／ｍ²をかけアルミシート３を破断し被検液（酸化
物）１００μｌを容器１中の試薬に注入させ、軽く振と
うして混ぜる。次いでそれぞれ容器を室温で１０秒〜１
０分間放置し、カラーメーターにて発色度合をブランク
と比較する。このとき、カラーメーターには標準カラー
スケールを予め用意しておき、これと比較することによ
り酸化物の検出が可能である。

【０１２６】また、分光光度計を用いて、４５０ｎｍ波
長の吸光度を測定する事により、予め求めておいた酸化
物量（例えば塩素検量線）から、被検液（酸化物）の酸
化物量を正確に測定することができる。

【０１２７】図３は本発明の好適な一例を示すアルミシ
ート（昭和アルミニウム（株）製）の断面図を示す。１
０は保護層、１１はアルミ箔層、１２はドライ層、１３
は本発明の容器に上記のアルミシートを熱でシールでき
るホットメルト層である。

【０１２８】

【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明す
るが、本発明の態様はこれに限定されない。

【０１２９】実施例１（ＴＭＢを用いた残留塩素濃度判
定試薬の調製）ＴＭＢ（アルドリッチ社製）１０ｍｇにｐＨ２．０の塩
酸水溶液２ｍｌを加えてよく撹拌して溶解し、ＴＭＢ溶
液をつくった。一方、０．１Ｍクエン酸−０．１Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ４．８）（以下ＣＰ緩衝液という）をつ
くった。このＣＰ緩衝液１ｍｌに対しＴＭＢ溶液を２０
μｌの割合で添加して（沈殿を生じないようＴＭＢ溶液
２０μｌに対してＣＰ緩衝液１ｍｌを加えた。）撹拌
し、検出試薬Ａを調製した。また、別途調製した検出試
薬ＡとＣＰ緩衝液を容積比１：２で混合してＴＭＢ濃度
が検出試薬Ａの３倍希釈液となる検出試薬Ｂを調製し
た。

【０１３０】更に同様にしてＴＭＢ濃度が順次３倍希釈
になるように検出試薬Ｃ（検出試薬Ａの９倍希釈）、検
出試薬Ｄ（検出試薬Ａの２７倍希釈）、検出試薬Ｅ（検
出試薬Ａの８１倍希釈）を調製した。

【０１３１】実施例２（ＴＭＢを用いた残留塩素濃度の
判定）残留塩素測定は、活性塩素源として次亜塩素酸ナトリウ
ム溶液を希釈したものを用いて以下のようにして測定し
た。次亜塩素酸ナトリウム溶液（関東化学製、活性塩素
量：最低５％以上、以下の実験では活性塩素量を５％と
して各溶液の活性塩素量を算出した。）を蒸留水で希釈
して、最終活性塩素濃度として２（ｍｇ／ｌ）、１０
（ｍｇ／ｌ）、２０（ｍｇ／ｌ）、５０（ｍｇ／ｌ）、
１００（ｍｇ／ｌ）、２００（ｍｇ／ｌ）、３００（ｍ
ｇ／ｌ）、４００（ｍｇ／ｌ）、５００（ｍｇ／ｌ）、
８００（ｍｇ／ｌ）、１０００（ｍｇ／ｌ）、２０００
（ｍｇ／ｌ）、５０００（ｍｇ／ｌ）の水溶液を調製し
た。

【０１３２】これら各濃度の次亜塩素酸ナトリウム溶液
を１００μｌずつ、各検出試薬ＡからＥが１ｍｌずつ入
ったガラスチューブに加えて軽く振った。その結果、即
座に発色し、均一の色を呈するまでチューブを振った後
発色から１分後に色相を観察した。その結果を表１に示
した。

【０１３３】

【表１】

【０１３４】また、検出試薬Ｂについて（特に青色に発
色する濃度領域について）分光光度計マイクロフロー・
スペクトロフォトメーターＣＬ−７５０（島津製作所
製）を用いて６５０ｎｍの吸光度を測定した結果を表２
に示した。

【０１３５】

【表２】

【０１３６】表１の結果から、次亜塩素酸ナトリウム溶
液の濃度の変化に応じて低濃度の方から順に、青色、緑
色、黄色、オレンジ色、又は赤色という色相の変化が生
じ、それにより活性塩素の濃度の判定が簡便に実施でき
ることがわかる。更に、この結果ＴＭＢ濃度を変化させ
ることにより測定対象試料の測定濃度領域を調整し、例
えば必要に応じて比較的高感度測定用、低感度測定用の
検出試薬が調製できることがわかる。例えば、この実施
例の結果によれば、検出試薬Ａを用いることにより例え
ば５００〜２０００（ｍｇ／ｌ）の濃度を、検出試薬Ｂ
を用いることにより例えば２００〜１０００（ｍｇ／
ｌ）を、検出試薬Ｃを用いることにより例えば２０（又
は５０）〜４００（ｍｇ／ｌ）を、そして検出試薬Ｄを
用いた場合には例えば１０〜２００（ｍｇ／ｌ）を色相
の変化で測定できることになる。

【０１３７】また、表２の結果から青色に発色する領域
において発色濃度が活性塩素濃度と正の相関を示すこと
から、被検液の低濃度域では青色の発色濃度を、そして
それ以上の濃度域では発色の色相の変化を観察すること
により２〜１０００（ｍｇ／ｌ）の領域が判定可能とな
り、色相のみの変化から判定した場合に比較して著しく
拡大された濃度領域が判定可能となることがわかる。更
に、標準濃度溶液を作成して、検量線を作成しておけ
ば、定量することも可能である。

【０１３８】実施例３（ＴＭＢを用いた残留塩素濃度判
定試薬の調製（２））ＴＭＢ（アルドリッチ社製）１０ｍｇにｐＨ２．０の塩
酸水溶液２ｍｌを加えてよく撹拌して溶解し、ＴＭＢ溶
液をつくった。一方、０．１Ｍクエン酸−０．１Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ４．８）（以下ＣＰ緩衝液という）をつ
くり、ここへそれぞれ２，４−ジヒドロキシ安息香酸、
４−ヒドロキシ安息香酸、サリチルアミド、４−アミノ
ベンズアミド、４−クロロフェノール、２−アミノベン
ツイミダゾール、マロン酸ジメチル、３−オキソブタン
酸エチルを最終濃度でＴＭＢの２倍等量（０．８４ｍ
Ｍ）となるように添加した溶液を調製した。このＣＰ緩
衝液１ｍｌに対しＴＭＢ溶液を２０μｌの割合で添加し
て（沈殿を生じないようＴＭＢ溶液２０μｌに対してＣ
Ｐ緩衝液１ｍｌを加えた。）撹拌し、検出試薬Ａ１〜Ａ
８を調製した。

【０１３９】実施例４（ＴＭＢを用いた残留塩素濃度の
判定（２））残留塩素測定は、活性塩素源として次亜塩素酸ナトリウ
ム溶液を希釈したものを用いて以下のようにして測定し
た。次亜塩素酸ナトリウム溶液（関東化学製、活性塩素
量：最低５％以上、以下の実験では活性塩素量を５％と
して各溶液の活性塩素量を算出した。）を蒸留水で希釈
して、最終活性塩素濃度として２（ｍｇ／ｌ）、１０
（ｍｇ／ｌ）、２０（ｍｇ／ｌ）、５０（ｍｇ／ｌ）、
１００（ｍｇ／ｌ）、２００（ｍｇ／ｌ）、３００（ｍ
ｇ／ｌ）、４００（ｍｇ／ｌ）、５００（ｍｇ／ｌ）、
８００（ｍｇ／ｌ）、１０００（ｍｇ／ｌ）、２０００
（ｍｇ／ｌ）、５０００（ｍｇ／ｌ）の水溶液を調製し
た。

【０１４０】これら各濃度の次亜塩素酸ナトリウム溶液
を１００μｌずつ、各検出試薬Ａ、Ａ１〜Ａ８を１ｍｌ
ずつ入れたガラスチューブに加えて軽く振った。その結
果、即座に発色し、均一の色を呈するまでチューブを振
った後発色から２４時間後に沈殿の生成を観察した。そ
の結果を表３に示した。

【０１４１】

【表３】

【０１４２】この結果、本発明の化合物を添加すること
により、発色後一定時間経過後に色素の沈殿の生成が抑
制されていることがわかる。

【０１４３】実施例５（スルホプロピル−ＴＭＢを用い
た残留塩素濃度判定試薬の調製）Ｎ−スルホプロピル−３，３′，５，５′−テトラメチ
ルベンジジン（以下ＳＰ−ＴＭＢ）（同仁化学研究所
製）１０ｍｇにｐＨ２．０の塩酸水溶液２ｍｌを加えて
よく撹拌して溶解し、ＴＭＢ溶液をつくった。一方、
０．１Ｍクエン酸−０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ４．
８）（以下ＣＰ緩衝液という）をつくった。このＣＰ緩
衝液１ｍｌに対しＳＰ−ＴＭＢ溶液を２０μｌの割合で
添加して（沈殿を生じないようＳＰ−ＴＭＢ溶液２０μ
ｌに対してＣＰ緩衝液１ｍｌを加えた。）撹拌し、検出
試薬ａを調製した。また、別途調製した検出試薬ａとＣ
Ｐ緩衝液を容積比１：２で混合してＴＭＢ濃度が検出試
薬ａの３倍希釈液となる検出試薬ｂを調製した。更に同
様にしてＳＰ−ＴＭＢ濃度が順次３倍希釈になるように
検出試薬ｃ（検出試薬ａの９倍希釈）、検出試薬ｄ（検
出試薬ａの２７倍希釈）、検出試薬ｅ（検出試薬ａの８
１倍希釈）を調製した。

【０１４４】実施例６（ＳＰ−ＴＭＢを用いた残留塩素
濃度の判定）残留塩素測定は、活性塩素源として次亜塩素酸ナトリウ
ム溶液を希釈したものを用いて以下のようにして測定し
た。

【０１４５】次亜塩素酸ナトリウム溶液（関東化学製、
活性塩素量：最低５％以上、以下の実験では活性塩素量
を５％として各溶液の活性塩素量を算出した。）を蒸留
水で希釈して、最終活性塩素濃度として２（ｍｇ／
ｌ）、１０（ｍｇ／ｌ）、２０（ｍｇ／ｌ）、５０（ｍ
ｇ／ｌ）、１００（ｍｇ／ｌ）、２００（ｍｇ／ｌ）、
３００（ｍｇ／ｌ）、４００（ｍｇ／ｌ）、５００（ｍ
ｇ／ｌ）、８００（ｍｇ／ｌ）、１０００（ｍｇ／
ｌ）、２０００（ｍｇ／ｌ）、５０００（ｍｇ／ｌ）の
水溶液を調製した。これら各濃度の次亜塩素酸ナトリウ
ム溶液を１００μｌずつ、各検出試薬ａからｅが１ｍｌ
ずつ入ったガラスチューブに加えて軽く振った。その結
果、即座に発色し、均一の色を呈するまでチューブを振
った後発色から１分後に色相を観察した。その結果を表
４に示した。

【０１４６】

【表４】

【０１４７】また、検出試薬ａについて（特に青色に発
色する濃度領域について）分光光度計マイクロフロー・
スペクトロフォトメーターＣＬ−７５０（島津製作所
製）を用いて６５５ｎｍの吸光度を測定した結果を表５
に示した。

【０１４８】

【表５】

【０１４９】上記表４の結果から、次亜塩素酸ナトリウ
ム溶液の濃度の変化に応じて低濃度の方から順に、青緑
色、黄色、オレンジ色、又は赤色という色相の変化が生
じ、それにより活性塩素の濃度の判定が簡便に実施でき
ることがわかる。更に、この結果ＳＰ−ＴＭＢ濃度を変
化させることにより測定対象試料の測定濃度領域を調整
し、例えば必要に応じて比較的高感度測定用、低感度測
定用の検出試薬が調製できることがわかる。

【０１５０】例えば、この実施例の結果によれば、検出
試薬ａを用いることにより、例えば５００〜２０００
（ｍｇ／ｌ）の濃度を、検出試薬ｂを用いることによ
り、例えば２００〜１０００（ｍｇ／ｌ）を、検出試薬
ｃを用いることにより、例えば２０（又は５０）〜４０
０（ｍｇ／ｌ）を、そして検出試薬ｄを用いた場合には
例えば、１０〜２００（ｍｇ／ｌ）を測定できることに
なる。

【０１５１】また、上記表５の結果から青緑色に発色す
る領域においても発色濃度が活性塩素濃度と正の相関を
示すことから、青緑色の発色濃度により被検液間の残留
塩素濃度の比較をすることも可能である。

【０１５２】実施例７（ＳＰ−ＴＭＢを用いた残留塩素
濃度判定試薬の調製（２））ＳＰ−ＴＭＢ（アルドリッチ社製）１０ｍｇにｐＨ２．
０の塩酸水溶液２ｍｌを加えてよく撹拌して溶解し、Ｔ
ＭＢ溶液をつくった。一方、０．１Ｍクエン酸−０．１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ４．８）（以下ＣＰ緩衝液とい
う）をつくり、ここへそれぞれ２，４−ジヒドロキシ安
息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸、サリチルアミド、４
−アミノベンズアミド、４−クロロフェノール、２−ア
ミノベンツイミダゾールを最終濃度でＳＰ−ＴＭＢの２
倍等量（０．８４ｍＭ）となるように添加した溶液を調
製した。

【０１５３】このＣＰ緩衝液１ｍｌに対しＳＰ−ＴＭＢ
溶液を２０μｌの割合で添加して（沈殿を生じないよう
ＳＰ−ＴＭＢ溶液２０μｌに対してＣＰ緩衝液１ｍｌを
加えた。）撹拌し、検出試薬ａ１〜ａ６を調製した。

【０１５４】実施例８（ＳＰ−ＴＭＢを用いた残留塩素
濃度の判定（２））残留塩素測定は、活性塩素源として次亜塩素酸ナトリウ
ム溶液を希釈したものを用いて以下のようにして測定し
た。

【０１５５】次亜塩素酸ナトリウム溶液（関東化学製、
活性塩素量：最低５％以上、以下の実験では活性塩素量
を５％として各溶液の活性塩素量を算出した。）を蒸留
水で希釈して、最終活性塩素濃度として２（ｍｇ／
ｌ）、１０（ｍｇ／ｌ）、２０（ｍｇ／ｌ）、５０（ｍ
ｇ／ｌ）、１００（ｍｇ／ｌ）、２００（ｍｇ／ｌ）、
３００（ｍｇ／ｌ）、４００（ｍｇ／ｌ）、５００（ｍ
ｇ／ｌ）、８００（ｍｇ／ｌ）、１０００（ｍｇ／
ｌ）、２０００（ｍｇ／ｌ）、５０００（ｍｇ／ｌ）の
水溶液を調製した。

【０１５６】これら各濃度の次亜塩素酸ナトリウム溶液
を１００μｌずつ、各検出試薬ａ、ａ１〜ａ６を１ｍｌ
ずつ入れたガラスチューブに加えて軽く振った。その結
果、即座に発色し、均一の色を呈するまでチューブを振
った後、発色から２４時間後に沈殿の生成を観察した。
その結果を表６に示した。

【０１５７】

【表６】

【０１５８】この結果、本発明の化合物を添加すること
により、発色後一定時間経過後に色素の沈殿の生成が抑
制されていることがわかる。

【０１５９】実施例９（分注による判定精度）精密ピペット（分注誤差変動係
数１％以内）で試験管（１２×７５ｍｍ）に実施例１で
作成した検出試薬Ａ２ｍｌを分注した（３本）。

【０１６０】分注誤差による反応の影響の程度を求める
ために、検出試薬Ａ２ｍｌの基準に対し、−２％，−
４％，−８％，−１２％の誤差を設定し、即ちそれぞれ
検出試薬Ａ１．９６ｍｌ，１．９２ｍｌ，１．７６ｍ
ｌを正確に試験管へ分注した（それぞれ３本）。

【０１６１】次に標準次亜塩素酸溶液を、それぞれ５０
ｐｐｍ，１００ｐｐｍ，２００ｐｐｍ、上記検出試薬Ａ
を分注したそれぞれの試験管に注入し、軽く手で揺すっ
て撹拌した。３０秒〜３分放置した後、検出試薬Ａの分
注誤差に対し、目視による試薬の発色色相の変化を表７
に示す。

【０１６２】

【表７】

【０１６３】表７から明らかなように分注誤差が４％を
越えると標準次亜塩素酸量に対する目視による色相判定
に差異を生じた。

【０１６４】（分注誤差）検出試薬Ａ２ｍｌを人、分
注器具、環境を変えて連続して分注し、それぞれ分注し
た検出試薬Ａの重量を精密天秤で測定した。結果を以下
に示す。

【０１６５】

【表８】

【０１６６】表８の結果から、通常の分注操作におい
て、人、分注器具、環境等の間差の分注誤差変動係数は
５％程度が見込まれ、人、分注器具、環境により大きく
バラつくことが分かる。

【０１６７】よって本発明のキット性能を満足させる為
には予め精密ピペット（例えば、ＦＨ−１０Ｓ：（株）
ヒラサワ：分注誤差変動係数１％以内）により精度よく
試験管等に個別分注することにより判定精度に対する信
頼度を向上させることができることが分かる。

【０１６８】（保存性試験）１．Ａ：ポリスチレン、Ｂ：アクリル、Ｃ：ポリエリレ
ン、Ｄ：ポリプロピレン製の試験管に検出試薬Ａ２ｍ
ｌを分注し、図３に示すアルミシートを用いて２６０
℃、４秒でそれぞれの試験管をヒートシールした。この
試料を５本用意した。

【０１６９】２．ガラス広口ビン（直径８ｃｍ）に検出
試薬Ａ１００ｍｌを入れ、ガラススクリューキャップ
で栓をした。この試料（以下バルク試料Ａ，Ｂ，Ｃとい
う）を３個用意した。

【０１７０】３．上記で作成した各々の試料を通常の環
境下で６月間保存した。

【０１７１】４．検出試薬Ａの劣化度を確認するために
検出試薬Ａのバックグランドの波長４５０ｎｍの吸光度
を測定した。

【０１７２】また、検出試薬Ａの発色反応の劣化を見る
ためにそれぞれの試料の検出試薬Ａ２ｍｌに対し標準次
亜塩素酸溶液（５５ｐｐｍ）１００μｌを入れ、しばら
く放置した後、波長４５０ｎｍの吸光度を測定した。結
果を以下に示す。

【０１７３】

【表９】

【０１７４】表９から明らかなようにバルク状態で保存
した試料Ａ，Ｂ，Ｃはバックグラウンドが上昇し、試薬
Ａの発色時の色相にも実際の判定レベルより高い数値を
示した。

【０１７５】それに対し、試験管Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄに個別
分注状態で保存した試料の検出試薬Ａはバックグラウン
ドの上昇は認められず、検出試薬Ａの発色反応の劣化も
なかった。当然、濃度判定に及ぼす影響は観察できなか
った。

【０１７６】

【発明の効果】本発明による残留塩素量を判定する方法
及び残留塩素量を判定するキットは、テトラアルキルベ
ンジジン及びその誘導体が酸化剤、特に残留塩素と共存
することによりその量に応じて生成する色素の色相に変
化が生ずることを利用して、簡便な操作で、且つ発色し
た色の色相を観察することによって被検液中の残留塩素
濃度を測定することができる。更に、生成した色素の沈
澱の発生を抑制して、発色後時間経過しても正確な被検
液中の残留塩素濃度を測定することを可能にした。

【０１７７】また、酸化物、特に残留塩素を含有する被
検液を試薬に添加するだけで即座に含有される酸化物の
濃度、特に残留塩素濃度を検出することができ、密封さ
れた容器中の酸化剤（試薬）の保存性物良好であった。

【０１７８】尚、ＯＤ，ＤＰＤの場合も同様な結果が得
られた。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の一例を示す酸化物検出用キット構成図
である。

【図２】本発明の一例を示す容器（試薬）と分注機（被
検液用）を示す図である。

【図３】本発明の一例を示すアルミシートの断面図を示
す。

【符号の説明】

１容器（試験管）２指示薬（試薬）３アルミシート４チップ５分注機（被検液用）１０保護層１１アルミ箔層１２ドライ層１３ホットメルト層

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ベンジジン指示薬又はその塩を含有する
溶液と被検液を混合して生成する色素の色相により、被
検液中の残留塩素量を判定することを特徴とする残留塩
素量を判定する方法。
【請求項２】ベンジジン指示薬又はその塩を含有する
溶液と被検液を混合して生成する色素の色相により、被
検液中の残留塩素量を判定する方法であって、ベンジジ
ン指示薬又はその塩の濃度を変化させることによって、
生成する色素の色相変化が生じる残留塩素の濃度領域を
変化させることを特徴とする残留塩素量を判定する方
法。
【請求項３】ベンジジン指示薬がテトラアルキルベン
ジジンであることを特徴とする請求項１又は２に記載の
残留塩素量を判定する方法。
【請求項４】テトラアルキルベンジジンが３，３′，
５，５′−テトラメチルベンジジンであることを特徴と
する請求項３に記載の残留塩素量を判定する方法。
【請求項５】テトラアルキルベンジジンが下記一般式
Ｉで表される３，３′，５，５′−テトラアルキルベン
ジジンのスルホアルキル誘導体である請求項３に記載の
残留塩素量を判定する方法。【化１】〔式中Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｒ₄は同一又は異なっても良く、
各々炭素原子数１乃至６の直鎖アルキル基を表し、
Ｒ₅，Ｒ₆は水素原子又は次式II：−（ＣＨ₂）ｎＳＯ₃Ｈ
（式中、ｎは１乃至６の整数を表す。）で表されるスル
ホアルキル基を表し、かつ少なくともＲ₅、Ｒ₆の何れか
一方は該スルホアルキル基を表すものであり、更に該ス
ルホアルキル基はヒドロキシル基の少なくとも１個によ
り置換されていてもよい。〕
【請求項６】前記色相が青色、緑色、黄色、オレンジ
色、赤色又はこれらの中間色の何れかであることを特徴
とする請求項４に記載の残留塩素量を判定する方法。
【請求項７】前記色相が青緑色、黄色、オレンジ色、
赤色又はこれらの中間色の何れかであることを特徴とす
る請求項５記載の残留塩素量を判定する方法。
【請求項８】ベンジジン指示薬又はその塩を含有する
溶液と被検液を混合して生成する色素の色相により、被
検液中の残留塩素量を判定するキット。
【請求項９】ベンジジン指示薬又はその塩を希釈でき
る溶液を含んでなる、ベンジジン指示薬又はその塩を含
有する溶液と被検液を混合して生成する色素の色相によ
り被検液中の残留塩素量を判定するキット。
【請求項１０】ベンジジン指示薬又はその塩を含有す
る溶液と被検液を混合して生成する色素の色相により、
被検液中の残留塩素量を判定するキットであって、ベン
ジジン指示薬又はその塩を含有する溶液の複数の希釈倍
率及び／又は濃度と被検液中の様々な残留塩素含有量の
組み合わせによって観察される標準的な発色の色相名及
び／又は発色の色相見本を含む被検液中の残留塩素量を
判定するキット。
【請求項１１】ベンジジン指示薬がテトラアルキルベ
ンジジンであることを特徴とする請求項８〜１０の何れ
か１項に記載の残留塩素量を判定するキット。
【請求項１２】テトラアルキルベンジジンが３，
３′，５，５′−テトラメチルベンジジンであることを
特徴とする請求項１１に記載の残留塩素量を判定するキ
ット。
【請求項１３】テトラアルキルベンジジンが前記一般
式Ｉで表される３，３′，５，５′−テトラアルキルベ
ンジジンのスルホアルキル誘導体であること特徴とする
請求項１１に記載の残留塩素量を判定するキット。
【請求項１４】ベンジジン指示薬又はその塩及び一般
式（１）〜（４）から選ばれる化合物を少なくとも１種
含有する溶液と被検液を混合して生成する色素の色相に
より、被検液中の残留塩素量を判定することを特徴とす
る残留塩素量を判定する方法。【化２】〔式中、Ｗ₁は、−ＮＯ₂，−ＣＮ，−ＣＨＯ，−ＣＯＲ
₇（Ｒ₇はアルキル基、又は水素原子）の何れかであっ
て、Ｘ₁，Ｙ₁，Ｚ₁は、それぞれ、−ＮＲ₈Ｒ₉（Ｒ₈，Ｒ
₉は置換、無置換のアルキル基、又は水素原子）、−Ｏ
Ｒ₁₀（Ｒ₁₀は置換、無置換のアルキル基、又は水素原
子）、−Ｒ₁₁（Ｒ₁₁は置換、無置換の炭素数１から４の
低級アルキル基）、−Ｃｌ，−Ｆ，−Ｉ，−Ｈから選ば
れる原子、基であり、Ｘ₁，Ｙ₁，Ｚ₁のうち少なくとも
一つは水素原子以外である。〕【化３】〔式中、Ｘ₂，Ｙ₂，Ｚ₂は、それぞれ、−ＮＲ₁₂Ｒ
₁₃（Ｒ₁₂，Ｒ₁₃は置換、無置換のアルキル基、又は水素
原子）、−ＯＲ₁₄（Ｒ₁₄は置換、無置換のアルキル基、
又は水素原子）、−Ｒ₁₅（Ｒ₁₅は置換、無置換の炭素数
１から４の低級アルキル基）、−Ｃｌ，−Ｆ，−Ｉ，−
Ｈから選ばれる原子、基であり、Ｘ₂，Ｙ₂，Ｚ₂のうち
少なくとも一つは水素原子以外である。〕【化４】〔式中、Ｘ₃は、−ＮＲ₁₆Ｒ₁₇（Ｒ₁₆，Ｒ₁₇は置換、無
置換のアルキル基、置換、無置換のアルケニル基、置
換、無置換のアルキニル基、置換、無置換のフェニル
基、置換、無置換のヘテロ環残基又は水素原子）、−Ｏ
Ｒ₁₈（Ｒ₁₈は置換、無置換アルキル基、又は水素原
子）、−Ｒ₁₉（Ｒ₁₉は置換、無置換の炭素数１から４の
低級アルキル基）、−Ｃｌ，−Ｆ，−Ｉ，−Ｈから選ば
れる原子、基であり、Ｙ₃は、置換、無置換のアルキル
基、置換、無置換のアルケニル基、置換、無置換のアル
キニル基、置換、無置換のフェニル基、置換、無置換の
ヘテロ環残基、−ＮＲ₂₀Ｒ₂₁（Ｒ₂₀，Ｒ₂₁は置換、無置
換のアルキル基、又は水素原子）、置換、無置換のアル
キルチオ基、置換、無置換のフェニルチオ基、−ＯＲ₂₂
（Ｒ₂₂は置換、無置換のアルキル基、又は水素原子）、
−Ｒ₂₃（Ｒ₂₃は置換、無置換の炭素数１から４の低級ア
ルキル基）、−Ｃｌ，−Ｆ，−Ｉ，−Ｈから選ばれる原
子、基である。Ｚ₃はヒドロキシル基、置換、無置換ア
ルコキシル基、置換、無置換のアルキル基、置換、無置
換のシクロアルキル基である。〕一般式（４）Ｘ₄−ＣＯＣＨ₂ＣＯ−Ｙ₄ 〔式中、Ｘ₄，Ｙ₄は、それぞれ、置換、無置換のアルキ
ル基、置換、無置換のアルコキシル基、置換、無置換の
フェニル基、ヒドロキシル基又はアミノ基で置換された
フェニル基、−ＮＲ₂₄Ｒ₂₅（Ｒ₂₄，Ｒ₂₅は置換、無置換
のアルキル基、又は水素原子）から選ばれる基であ
る。〕
【請求項１５】ベンジジン指示薬又はその塩及び上記
一般式（１）乃至（４）から選ばれる化合物を少なくと
も１種類含有する溶液と被検液を混合して生成する色素
の色相により、被検液中の残留塩素量を判定する方法で
あって、ベンジジン指示薬又はその塩の濃度を変化させ
ることによって、生成する色素の色相変化が生じる残留
塩素の濃度領域を変化させることを特徴とする残留塩素
量を判定する方法。
【請求項１６】ベンジジン指示薬がテトラアルキルベ
ンジジンであることを特徴とする請求項１４又は１５に
記載の残留塩素量を判定する方法。
【請求項１７】テトラアルキルベンジジンが３，
３′，５，５′−テトラメチルベンジジンであることを
特徴とする請求項１６に記載の残留塩素量を判定する方
法。
【請求項１８】テトラアルキルベンジジンが前記一般
式Ｉで表される３，３′，５，５′−テトラアルキルベ
ンジジンのスルホアルキル誘導体であることを特徴とす
る請求項１６に記載の残留塩素量を判定する方法。
【請求項１９】ベンジジン指示薬又はその塩及び前記
一般式（１）乃至（４）から選ばれる化合物を少なくと
も１種含有する溶液と被検液を混合して生成する色素の
色相により、被検液中の残留塩素量を判定するキット。
【請求項２０】ベンジジン指示薬又はその塩を希釈で
きる溶液を含んでなる、ベンジジン指示薬又はその塩及
び上記一般式（１）乃至（４）から選ばれる化合物を少
なくとも１種含有する溶液と被検液を混合して生成する
色素の色相により被検液中の残留塩素量を判定するキッ
ト。
【請求項２１】ベンジジン指示薬又はその塩及び上記
一般式（１）乃至（４）から選ばれる化合物を少なくと
も１種含有する溶液と被検液を混合して生成する色素の
色相により、被検液中の残留塩素量を判定するキットで
あって、発色溶液の複数の希釈倍率及び／又は濃度と被
検液中の様々な残留塩素含有量の組み合わせによって観
察される標準的な発色の色相名及び／又は発色の色相見
本を含む被検液中の残留塩素量を判定するキット。
【請求項２２】ベンジジン指示薬がテトラアルキルベ
ンジジンであることを特徴とする請求項１９〜２１の何
れか１項に記載の残留塩素量を判定するキット。
【請求項２３】テトラアルキルベンジジンが３，
３′，５，５′−テトラメチルベンジジンであることを
特徴とする請求項２２に記載の残留塩素量を判定するキ
ット。
【請求項２４】テトラアルキルベンジジンが前記一般
式Ｉで表される３，３′，５，５′−テトラアルキルベ
ンジジンのスルホアルキル誘導体であることを特徴とす
る請求項２２に記載の残留塩素量を判定するキット。
【請求項２５】予め指示薬が分注され、密封された容
器が複数個収納箱に収納されていることを特徴とする酸
化物検出用キット。
【請求項２６】前記指示薬がベンジジン指示薬及びそ
の塩であることを特徴とする請求項２５に記載の酸化物
検出用キット。
【請求項２７】前記指示薬がパラフェニレンジアミン
誘導体であることを特徴とする請求項２５に記載の酸化
物検出用キット。
【請求項２８】前記一般式（１）〜（４）から選ばれ
る化合物の少なくとも１種を前記容器に含有しているこ
とを特徴とする請求項２５、２６又は２７に記載の酸化
物検出用キット。