JPH09110704A - 免疫異常性疾患予防治療用経口投与剤 - Google Patents
免疫異常性疾患予防治療用経口投与剤Info
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- JPH09110704A JPH09110704A JP7297548A JP29754895A JPH09110704A JP H09110704 A JPH09110704 A JP H09110704A JP 7297548 A JP7297548 A JP 7297548A JP 29754895 A JP29754895 A JP 29754895A JP H09110704 A JPH09110704 A JP H09110704A
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- ses
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 慢性関節リウマチおよび潰瘍性大腸炎等の免
疫異常性疾患に対する新規な予防治療用経口投与剤を提
供することを目的とする。 【構成】 高度に精製されたＳＥ群外毒素を主要構成成
分とし、必要に応じゼラチン、塩、糖またはアミノ酸な
どの好適な安定化剤、賦形剤を添加する。
疫異常性疾患に対する新規な予防治療用経口投与剤を提
供することを目的とする。 【構成】 高度に精製されたＳＥ群外毒素を主要構成成
分とし、必要に応じゼラチン、塩、糖またはアミノ酸な
どの好適な安定化剤、賦形剤を添加する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本願発明は、新規な免疫異常性疾
患予防治療用薬剤に関する。さらに詳細には、ＳＥ群外
毒素(Staphylococcal enterotoxins、以下ＳＥsと称す
ることがある)もしくはその誘導体を本態とする慢性関
節リウマチあるいは難治性炎症性腸疾患等のアレルギー
疾患、免疫異常性疾患予防治療用の経口投与薬剤に関す
る。
患予防治療用薬剤に関する。さらに詳細には、ＳＥ群外
毒素(Staphylococcal enterotoxins、以下ＳＥsと称す
ることがある)もしくはその誘導体を本態とする慢性関
節リウマチあるいは難治性炎症性腸疾患等のアレルギー
疾患、免疫異常性疾患予防治療用の経口投与薬剤に関す
る。
【０００２】
【従来の技術並びに発明が解決しようとする課題】慢性
関節リウマチ(Rheumatoid Arthritis、以下ＲＡと称す
ることがある)等の臓器非特異的自己免疫疾患並びに潰
瘍性大腸炎(Ulcerative Colitis、以下ＵＣと称するこ
とがある)あるいはクローン病のような難治性炎症性大
腸炎等の臓器特異的自己免疫疾患は、通常は免疫学的寛
容の状態にある自己の抗原に対して応答するＴ細胞が、
何らかの原因で自己の組織内で活性化され自己の抗原と
応答するようになり、これが持続的な炎症反応となって
組織に障害を与えることに起因する。この場合、抗原は
自己の関節の構成成分であるII型コラーゲンや消化管粘
膜の構成成分である。これらの疾患の患者数は毎年微増
の傾向にあるにもかかわらず、有効な治療薬や予防治療
方法は見出されていない。現在これらの疾患の治療に
は、サラゾピリン、５-アミノサリチル酸、アザチオプ
リン、６-ＭＰ、胸腺摘出術、トラニラスト、７S-免疫
グロブリン大量療法、成分栄養、シクロスポリンＡおよ
びメトロニダゾール等の免疫抑制剤の薬物療法が対症療
法的に行なわれている。しかしながら、これらは根治的
な療法とは言えず、むしろ長期連用による重篤な副作用
の原因ともなり、より有効な予防治療薬・治療法の開発
が望まれている。
関節リウマチ(Rheumatoid Arthritis、以下ＲＡと称す
ることがある)等の臓器非特異的自己免疫疾患並びに潰
瘍性大腸炎(Ulcerative Colitis、以下ＵＣと称するこ
とがある)あるいはクローン病のような難治性炎症性大
腸炎等の臓器特異的自己免疫疾患は、通常は免疫学的寛
容の状態にある自己の抗原に対して応答するＴ細胞が、
何らかの原因で自己の組織内で活性化され自己の抗原と
応答するようになり、これが持続的な炎症反応となって
組織に障害を与えることに起因する。この場合、抗原は
自己の関節の構成成分であるII型コラーゲンや消化管粘
膜の構成成分である。これらの疾患の患者数は毎年微増
の傾向にあるにもかかわらず、有効な治療薬や予防治療
方法は見出されていない。現在これらの疾患の治療に
は、サラゾピリン、５-アミノサリチル酸、アザチオプ
リン、６-ＭＰ、胸腺摘出術、トラニラスト、７S-免疫
グロブリン大量療法、成分栄養、シクロスポリンＡおよ
びメトロニダゾール等の免疫抑制剤の薬物療法が対症療
法的に行なわれている。しかしながら、これらは根治的
な療法とは言えず、むしろ長期連用による重篤な副作用
の原因ともなり、より有効な予防治療薬・治療法の開発
が望まれている。
【０００３】ＳＥsは、１９８９年、White J.らによっ
て発見された細菌性スーパー抗原である(White J. et a
l.,Cell,56,p27-35,(1989))。通常の抗原が、抗原提示
細胞に取り込まれクラスII主要組織適合遺伝子複合体(M
ajor Histocompatibility Complex、以下ＭＨＣと称す
ることがある)と複合体を形成した状態でＴ細胞上のＴ
細胞抗原受容体(T Cell Antigen Receptor、以下ＴＣＲ
と称することがある)に認識され、しかもその認識はク
ラスIIＭＨＣのハプロタイプに限定される(これをＭＨ
Ｃ拘束性という)のに対して、スーパー抗原はクラスII
ＭＨＣ分子にハプロタイプに関係なく結合し、さらに特
定のＴＣＲのβ鎖可変領域(Ｖβ鎖)に結合する。このよ
うな結合が生じると、スーパー抗原が結合したＴ細胞は
一時的に活性化され分裂増殖を引き起こし、炎症性のサ
イトカインを産生する。
て発見された細菌性スーパー抗原である(White J. et a
l.,Cell,56,p27-35,(1989))。通常の抗原が、抗原提示
細胞に取り込まれクラスII主要組織適合遺伝子複合体(M
ajor Histocompatibility Complex、以下ＭＨＣと称す
ることがある)と複合体を形成した状態でＴ細胞上のＴ
細胞抗原受容体(T Cell Antigen Receptor、以下ＴＣＲ
と称することがある)に認識され、しかもその認識はク
ラスIIＭＨＣのハプロタイプに限定される(これをＭＨ
Ｃ拘束性という)のに対して、スーパー抗原はクラスII
ＭＨＣ分子にハプロタイプに関係なく結合し、さらに特
定のＴＣＲのβ鎖可変領域(Ｖβ鎖)に結合する。このよ
うな結合が生じると、スーパー抗原が結合したＴ細胞は
一時的に活性化され分裂増殖を引き起こし、炎症性のサ
イトカインを産生する。
【０００４】スーパー抗原を新生マウスに静脈内あるい
は腹腔内投与すると、これに応答するＶβＴＣＲを持っ
たＴ細胞亜集団が除去され、同じスーパー抗原に対して
応答しなくなるトレランスの状態になる。一方、成体の
マウスに投与した場合、そのスーパー抗原に結合するＶ
βＴＣＲを持つＴ細胞が再びスーパー抗原の刺激に対し
て応答しなくなる状態、即ちアナジーの状態が誘導され
トレランスになる。このようなスーパー抗原の特徴は通
常の抗原の認識とは異なっている。
は腹腔内投与すると、これに応答するＶβＴＣＲを持っ
たＴ細胞亜集団が除去され、同じスーパー抗原に対して
応答しなくなるトレランスの状態になる。一方、成体の
マウスに投与した場合、そのスーパー抗原に結合するＶ
βＴＣＲを持つＴ細胞が再びスーパー抗原の刺激に対し
て応答しなくなる状態、即ちアナジーの状態が誘導され
トレランスになる。このようなスーパー抗原の特徴は通
常の抗原の認識とは異なっている。
【０００５】ところで、ＳＥsはスーパー抗原としての
機能を有する一方で、ブドウ球菌の食中毒を起こす毒素
エンテロトキシンでもある。エンテロトキシンとしての
病原性は、エンテロトキシンが消化管内へ入ったのち腸
管へ取り込まれることによって発現される。症状として
は悪心、吐き気、下痢、発熱および筋肉痛などが含まれ
るが、このうちのいくつかは、スーパー抗原によって活
性化されたＴ細胞や抗原提示細胞から急激にかつ大量に
生じる炎症性のサイトカインを介して発現されると考え
られている。事実、ＳＥsの一種である黄色ブドウ球菌
エンテロトキシンＢ(Staphylococcal Enterotoxin B、
以下ＳＥＢと称することがある)を静脈内投与した場
合、食中毒と同様の症状が観られたことが報告されてい
る(Seminarsin Immunology,5;3,(1993))。in vivo で投
与した場合、最初にこのようなＴ細胞及び抗原提示細胞
の活性化が起こり、結果的に体重減少などの症状が認め
られ、１〜２週後にトレランスが成立する。トレランス
が成立した動物では、再び同じエンテロトキシンの侵入
があっても食中毒様の症状は認められない。このように
スーパー抗原は生体内に投与された場合、いったんＴ細
胞や抗原提示細胞を活性化して炎症を惹起した後トレラ
ンスを誘導する。
機能を有する一方で、ブドウ球菌の食中毒を起こす毒素
エンテロトキシンでもある。エンテロトキシンとしての
病原性は、エンテロトキシンが消化管内へ入ったのち腸
管へ取り込まれることによって発現される。症状として
は悪心、吐き気、下痢、発熱および筋肉痛などが含まれ
るが、このうちのいくつかは、スーパー抗原によって活
性化されたＴ細胞や抗原提示細胞から急激にかつ大量に
生じる炎症性のサイトカインを介して発現されると考え
られている。事実、ＳＥsの一種である黄色ブドウ球菌
エンテロトキシンＢ(Staphylococcal Enterotoxin B、
以下ＳＥＢと称することがある)を静脈内投与した場
合、食中毒と同様の症状が観られたことが報告されてい
る(Seminarsin Immunology,5;3,(1993))。in vivo で投
与した場合、最初にこのようなＴ細胞及び抗原提示細胞
の活性化が起こり、結果的に体重減少などの症状が認め
られ、１〜２週後にトレランスが成立する。トレランス
が成立した動物では、再び同じエンテロトキシンの侵入
があっても食中毒様の症状は認められない。このように
スーパー抗原は生体内に投与された場合、いったんＴ細
胞や抗原提示細胞を活性化して炎症を惹起した後トレラ
ンスを誘導する。
【０００６】特定のＶβＴＣＲを持つＴ細胞にトレラン
スを誘導するという性質は、ある種の免疫学的疾患、特
にＩ型アレルギー性疾患や自己免疫疾患の予防もしくは
治療に応用できる可能性を示唆している。事実、疾患モ
デルマウスの系を用いてＳＥＢを投与することで発症抑
制が可能になったという報告がなされている。Kim Cら
は、全身性エリテマトーデス(Systemic lupus erythema
tosus、以下ＳＬＥと称することがある)のモデルマウス
であるMRL/lprマウスのループス腎炎がＳＥＢを予め投
与しておくことにより発症を抑制できることを報告した
(J.EXP.Med.,174,p.1131,(1991))。また、Rott O.らは
実験的アレルギー性脳脊髄膜炎(Experimental Allergic
Encephromyelitis、以下ＥＡＥと称することがある)の
系で前もってＳＥＢを投与し、ＳＥＢ応答性のＶβ8Ｔ
ＣＲＴ細胞をトレランスにしておくことで発症が抑制で
きたことを報告した(Int. Natl. Immunology, 4:p.347,
(1991))。これらの結果は、ＳＥＢをワクチン的に用い
ることで特定の自己免疫疾患の発症を予防できる可能性
を示唆するものである。
スを誘導するという性質は、ある種の免疫学的疾患、特
にＩ型アレルギー性疾患や自己免疫疾患の予防もしくは
治療に応用できる可能性を示唆している。事実、疾患モ
デルマウスの系を用いてＳＥＢを投与することで発症抑
制が可能になったという報告がなされている。Kim Cら
は、全身性エリテマトーデス(Systemic lupus erythema
tosus、以下ＳＬＥと称することがある)のモデルマウス
であるMRL/lprマウスのループス腎炎がＳＥＢを予め投
与しておくことにより発症を抑制できることを報告した
(J.EXP.Med.,174,p.1131,(1991))。また、Rott O.らは
実験的アレルギー性脳脊髄膜炎(Experimental Allergic
Encephromyelitis、以下ＥＡＥと称することがある)の
系で前もってＳＥＢを投与し、ＳＥＢ応答性のＶβ8Ｔ
ＣＲＴ細胞をトレランスにしておくことで発症が抑制で
きたことを報告した(Int. Natl. Immunology, 4:p.347,
(1991))。これらの結果は、ＳＥＢをワクチン的に用い
ることで特定の自己免疫疾患の発症を予防できる可能性
を示唆するものである。
【０００７】しかしながら、これらの実験ではＳＥＢの
投与方法は静脈内もしくは腹腔内であり、投与量も１匹
当たり１００μg前後とかなり多い。このような投与量
ではマウスに対して無視できない程度の病原性をもたら
すことは必至であり、このままヒトの疾患に応用するこ
とは不可能である。また、現状では免疫異常性疾患には
その発症の可能性を予見させる様な診断法はなく、従っ
て発症を予防できるような方法はない。一方、免疫異常
性の疾患の患者数はここ５年間を見ても殆ど減少せず、
また患者の大半は労働可能な若年層から中年層に多く、
社会的に重大な問題となっている。スーパー抗原によっ
て誘導されるトレランスは、前述した免疫抑制剤がリン
パ球全般もしくはＴ細胞またはＢ細胞に作用し広範な免
疫抑制を引き起こすのに対して、特定のＶβ亜集団を持
つＴ細胞にのみ作用する。従って、失われる免疫応答は
限られた範囲(約１〜１５％)に留まるので、免疫抑制剤
を使用した場合のように免疫応答全般が失われることは
少なく、原因となっているＴ細胞のみを標的とした原因
療法に近い方法になり得るものである。しかしながら、
スーパー抗原の大量投与は、前述のごとく一時的なＴ細
胞や抗原提示細胞の活性化を引き起こし、体内に急激な
炎症状態を惹起するという毒性の問題点がある。本願発
明は、従来のスーパー抗原投与の問題点を克服し、免疫
異常性の疾患、特にＩ型アレルギー、ＲＡやＵＣを始め
とする難治性炎症性腸疾患の予防もしくは原因療法的治
療薬を提供することを目的とする。
投与方法は静脈内もしくは腹腔内であり、投与量も１匹
当たり１００μg前後とかなり多い。このような投与量
ではマウスに対して無視できない程度の病原性をもたら
すことは必至であり、このままヒトの疾患に応用するこ
とは不可能である。また、現状では免疫異常性疾患には
その発症の可能性を予見させる様な診断法はなく、従っ
て発症を予防できるような方法はない。一方、免疫異常
性の疾患の患者数はここ５年間を見ても殆ど減少せず、
また患者の大半は労働可能な若年層から中年層に多く、
社会的に重大な問題となっている。スーパー抗原によっ
て誘導されるトレランスは、前述した免疫抑制剤がリン
パ球全般もしくはＴ細胞またはＢ細胞に作用し広範な免
疫抑制を引き起こすのに対して、特定のＶβ亜集団を持
つＴ細胞にのみ作用する。従って、失われる免疫応答は
限られた範囲(約１〜１５％)に留まるので、免疫抑制剤
を使用した場合のように免疫応答全般が失われることは
少なく、原因となっているＴ細胞のみを標的とした原因
療法に近い方法になり得るものである。しかしながら、
スーパー抗原の大量投与は、前述のごとく一時的なＴ細
胞や抗原提示細胞の活性化を引き起こし、体内に急激な
炎症状態を惹起するという毒性の問題点がある。本願発
明は、従来のスーパー抗原投与の問題点を克服し、免疫
異常性の疾患、特にＩ型アレルギー、ＲＡやＵＣを始め
とする難治性炎症性腸疾患の予防もしくは原因療法的治
療薬を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本願発明は前述した問題
点を解決するもので、本願発明者が免疫異常性の疾患、
特にＲＡのような臓器非特異的自己免疫疾患、ＵＣやク
ローン病のような難治性炎症性腸疾患を予防及び治療す
る手段を提供すべく鋭意研究を重ねた結果達成されたも
のである。先ず、本願発明者らは、ＳＥＢに代表される
ＳＥsが腸管に到達したときに病原性が発現され、しか
もその病原性はスーパー抗原活性を介していることに着
目し、ＳＥＢを経口的に投与することでスーパー抗原活
性の１つであるトレランスの誘導が可能かどうか検討し
た。鋭意研究の結果、高度に精製したＳＥＢを病原性を
与えない投与量で連続的に長期間経口投与することによ
り、より有効にトレランスを誘導し得るという知見を見
いだし、この知見に基づいて、高度に精製したＳＥＢを
本態としこれを少量含有する新規な免疫異常性疾患予防
治療用経口投与剤を供する本願発明を達成するに至っ
た。本願発明の免疫異常性疾患予防治療用経口投与剤を
用いた場合、生体に病原性を与えることなくトレランス
のみ有効に誘導することができる。従って、前述したＩ
型アレルギー性疾患や自己免疫疾患の予防だけでなく治
療にも応用できる可能性が考えられ、原因療法的免疫異
常性の疾患の予防及び治療用薬剤としての新たな有用性
が開拓された。
点を解決するもので、本願発明者が免疫異常性の疾患、
特にＲＡのような臓器非特異的自己免疫疾患、ＵＣやク
ローン病のような難治性炎症性腸疾患を予防及び治療す
る手段を提供すべく鋭意研究を重ねた結果達成されたも
のである。先ず、本願発明者らは、ＳＥＢに代表される
ＳＥsが腸管に到達したときに病原性が発現され、しか
もその病原性はスーパー抗原活性を介していることに着
目し、ＳＥＢを経口的に投与することでスーパー抗原活
性の１つであるトレランスの誘導が可能かどうか検討し
た。鋭意研究の結果、高度に精製したＳＥＢを病原性を
与えない投与量で連続的に長期間経口投与することによ
り、より有効にトレランスを誘導し得るという知見を見
いだし、この知見に基づいて、高度に精製したＳＥＢを
本態としこれを少量含有する新規な免疫異常性疾患予防
治療用経口投与剤を供する本願発明を達成するに至っ
た。本願発明の免疫異常性疾患予防治療用経口投与剤を
用いた場合、生体に病原性を与えることなくトレランス
のみ有効に誘導することができる。従って、前述したＩ
型アレルギー性疾患や自己免疫疾患の予防だけでなく治
療にも応用できる可能性が考えられ、原因療法的免疫異
常性の疾患の予防及び治療用薬剤としての新たな有用性
が開拓された。
【０００９】すなわち、本願発明は、ＲＡやＵＣのよう
な疾患を持つ患者の原因となっているＴ細胞にトレラン
スを誘導し得る高度に精製されたＳＥsもしくはその誘
導体を本態とする経口投与薬剤に関するものである。本
願発明でもたらされる経口投与用薬剤を使用した場合、
免疫抑制剤を投与した時に観られる広範な免疫抑制、例
えばＴ細胞のマイトジェンに対する増殖応答の低下、Ｂ
細胞のマイトジェンに対する増殖応答の低下、特定の抗
原に対する増殖応答の低下は認められない。しかしなが
ら、ＲＡやＵＣの発症に関与すると考えられるＶβ8Ｔ
ＣＲ陽性Ｔ細胞にトレランスを誘導することができる。
Ｖβ8ＴＣＲ陽性Ｔ細胞は、他の疾患、例えば前述した
ＥＡＥやＳＬＥにも関与していることが指摘されている
ので、これらの疾患に関連しているＴ細胞にトレランス
を誘導することも可能である。
な疾患を持つ患者の原因となっているＴ細胞にトレラン
スを誘導し得る高度に精製されたＳＥsもしくはその誘
導体を本態とする経口投与薬剤に関するものである。本
願発明でもたらされる経口投与用薬剤を使用した場合、
免疫抑制剤を投与した時に観られる広範な免疫抑制、例
えばＴ細胞のマイトジェンに対する増殖応答の低下、Ｂ
細胞のマイトジェンに対する増殖応答の低下、特定の抗
原に対する増殖応答の低下は認められない。しかしなが
ら、ＲＡやＵＣの発症に関与すると考えられるＶβ8Ｔ
ＣＲ陽性Ｔ細胞にトレランスを誘導することができる。
Ｖβ8ＴＣＲ陽性Ｔ細胞は、他の疾患、例えば前述した
ＥＡＥやＳＬＥにも関与していることが指摘されている
ので、これらの疾患に関連しているＴ細胞にトレランス
を誘導することも可能である。
【００１０】本願発明によれば、静脈内や腹腔内にスー
パー抗原として機能し得るＳＥsを投与することによっ
て引き起こされる病原性、例えば１０〜２０％に及ぶ体
重減少は認められない。すなわち、このような病原性の
原因となっている全身に及ぶＴ細胞及び抗原提示細胞と
してのマクロファージあるいはＢ細胞の急激な活性化、
それに伴う炎症性のサイトカイン例えば、ＩＬ-1、ＩＬ
-2、ＩＬ-4、ＴＮＦ-α、ＴＮＦ-β、ＩＮＦ-γ等の大
量の産生が認められないので細菌性スーパー抗原の有す
る病原性を生体に影響を及ぼさないレベルまで著しく低
減することを可能にする。
パー抗原として機能し得るＳＥsを投与することによっ
て引き起こされる病原性、例えば１０〜２０％に及ぶ体
重減少は認められない。すなわち、このような病原性の
原因となっている全身に及ぶＴ細胞及び抗原提示細胞と
してのマクロファージあるいはＢ細胞の急激な活性化、
それに伴う炎症性のサイトカイン例えば、ＩＬ-1、ＩＬ
-2、ＩＬ-4、ＴＮＦ-α、ＴＮＦ-β、ＩＮＦ-γ等の大
量の産生が認められないので細菌性スーパー抗原の有す
る病原性を生体に影響を及ぼさないレベルまで著しく低
減することを可能にする。
【００１１】本願発明の免疫異常性疾患予防治療用の経
口投与用薬剤は、その本態として高度に精製された上述
のＳＥsもしくはその誘導体を他の投与形態の薬剤に比
較して極めて少量含有することを特徴とする。薬剤の本
態として、好適な態様であるＳＥＢに限らず他のＶβＴ
ＣＲ結合性を持つ細菌性スーパー抗原、例えばＳＥＡ、
ＳＥＣ1、Ｃ2、Ｃ3、Ｄ、Ｅ等の他のＳＥsを使用した場
合についても同様の効果をもたらすものである。また、
それらの誘導体も好適に使用し得る。つまり、これらは
他のＶβＴＣＲを持つＴ細胞亜集団に特異的にトレラン
スを誘導する。本願発明に使用されるＳＥsを調製する
方法は特に限定されていないが、例えばＳＥsを産生す
る細菌を培養しその培養上清より分離調製する方法ある
いは遺伝子組換え技術により得たＳＥs産生細胞より分
離する方法などによって調製することができる。
口投与用薬剤は、その本態として高度に精製された上述
のＳＥsもしくはその誘導体を他の投与形態の薬剤に比
較して極めて少量含有することを特徴とする。薬剤の本
態として、好適な態様であるＳＥＢに限らず他のＶβＴ
ＣＲ結合性を持つ細菌性スーパー抗原、例えばＳＥＡ、
ＳＥＣ1、Ｃ2、Ｃ3、Ｄ、Ｅ等の他のＳＥsを使用した場
合についても同様の効果をもたらすものである。また、
それらの誘導体も好適に使用し得る。つまり、これらは
他のＶβＴＣＲを持つＴ細胞亜集団に特異的にトレラン
スを誘導する。本願発明に使用されるＳＥsを調製する
方法は特に限定されていないが、例えばＳＥsを産生す
る細菌を培養しその培養上清より分離調製する方法ある
いは遺伝子組換え技術により得たＳＥs産生細胞より分
離する方法などによって調製することができる。
【００１２】例えば、本願発明の薬剤の本態となるＳＥ
sの好適な態様であるＳＥＢは以下の方法で調製するこ
とができる。Staphylococcus aureus ２４３株の培養上
清から調製する方法について述べると、まず、４％ＮＺ
アミン、０.０１％塩酸チアミン、0.0000５％ニコチン
酸を含む培地中で同菌株を好気的に２４時間培養し、遠
心分離によって菌体を除去し培養上清を調製する。得ら
れた培養上清を、本願発明者によって独自に作製された
抗ＳＥＢ単クローン抗体を固相化した担体を充填したカ
ラムに通液し、洗浄後、４Ｍ塩化マグネシウムあるいは
３Ｍチオシアン酸ナトリウム溶液で溶出する。溶出液を
生理食塩水中に２回透析した後、さらにリン酸緩衝生理
食塩水(phosphate buffer saline、 以下ＰＢＳと称す
ることがある)に２回透析する。透析後得られた画分を
タンパク質の濃度を測定した後、０.４５μm径のメンブ
レンフィルターを用いて無菌濾過する。この濾液を一定
量ずつ分注することでＳＥＢを調製する。また、遺伝子
組換え技術を用いてＳＥsを調製する方法としては、例
えばJonesC.L.等によって報告された方法がある(Jones
C.L. and Khan S.A.,J.Bacteriol.,1(1),p.29-33,(198
6))。また、遺伝子組換え技術を用いた点突然変異(poin
t mutation)を導入することで、ＳＥsのより好ましい分
子型を創製することも可能である。
sの好適な態様であるＳＥＢは以下の方法で調製するこ
とができる。Staphylococcus aureus ２４３株の培養上
清から調製する方法について述べると、まず、４％ＮＺ
アミン、０.０１％塩酸チアミン、0.0000５％ニコチン
酸を含む培地中で同菌株を好気的に２４時間培養し、遠
心分離によって菌体を除去し培養上清を調製する。得ら
れた培養上清を、本願発明者によって独自に作製された
抗ＳＥＢ単クローン抗体を固相化した担体を充填したカ
ラムに通液し、洗浄後、４Ｍ塩化マグネシウムあるいは
３Ｍチオシアン酸ナトリウム溶液で溶出する。溶出液を
生理食塩水中に２回透析した後、さらにリン酸緩衝生理
食塩水(phosphate buffer saline、 以下ＰＢＳと称す
ることがある)に２回透析する。透析後得られた画分を
タンパク質の濃度を測定した後、０.４５μm径のメンブ
レンフィルターを用いて無菌濾過する。この濾液を一定
量ずつ分注することでＳＥＢを調製する。また、遺伝子
組換え技術を用いてＳＥsを調製する方法としては、例
えばJonesC.L.等によって報告された方法がある(Jones
C.L. and Khan S.A.,J.Bacteriol.,1(1),p.29-33,(198
6))。また、遺伝子組換え技術を用いた点突然変異(poin
t mutation)を導入することで、ＳＥsのより好ましい分
子型を創製することも可能である。
【００１３】調製されたＳＥsの活性を最大限に維持す
るために、本願発明のＳＥｓは新鮮であるか、４℃で保
存する場合には保存後約５日以内のものが好ましい。あ
るいは、本願発明のＳＥｓは、ゼラチン、塩、糖、糖ア
ルコールまたはアミノ酸などの好適な安定化剤と共に凍
結乾燥もしくは液体の状況で保存することができるし、
さらには、ＳＥs溶液を凍結し保存することも可能であ
る。本願発明では、かかる有効成分としてのＳＥsもし
くはその誘導体と公知の適当な賦形剤を組み合わせ、公
知の方法で本願発明の免疫異常性疾患予防治療用経口投
与剤とすることができる。本願発明の免疫異常性疾患予
防治療用経口投与剤の本態となるＳＥsもしくはその誘
導体は高純度のものが要求され、例えば少なくともゲル
電気泳動において単一バンドを示す程度に精製されてい
ることが望まれる。この意味から、市販の標品をそのま
ま使用することは好ましい態様ではない。また、薬剤の
性質上、本態に夾雑する内毒素(エンドトキシン)が除去
されていることが要求される。本薬剤の最終的な剤型に
ついては、経口投与用の薬剤である限り特別の制約はな
く粉末(固形)状、溶液状あるいはシロップ状のものが考
慮され得る。例えば、ＳＥsもしくはその誘導体を適当
な賦型剤、例えば炭水化物、糖、糖アルコールおよびア
ミノ酸等と共に凍結乾燥し固形状としたものまたはＳＥ
sもしくはその誘導体を生理食塩水および許容し得る張
度のイオン強度を有する適当な緩衝液中に溶解した液状
製剤等は好適な態様である。また、本態となるＳＥsも
しくはその誘導体を市販の飲料水に溶解し経口的に摂取
することも考えられ得る。薬剤中の含量については、Ｓ
Ｅsの毒素としての特性を考慮し低用量に抑えることが
要求されこれを満足する量且つ薬効が発揮される用量、
例えば１回の投与当り０.０１〜５０μg、好ましくは
０.０２〜０.５μgの本態を含有する薬剤が好適であ
る。
るために、本願発明のＳＥｓは新鮮であるか、４℃で保
存する場合には保存後約５日以内のものが好ましい。あ
るいは、本願発明のＳＥｓは、ゼラチン、塩、糖、糖ア
ルコールまたはアミノ酸などの好適な安定化剤と共に凍
結乾燥もしくは液体の状況で保存することができるし、
さらには、ＳＥs溶液を凍結し保存することも可能であ
る。本願発明では、かかる有効成分としてのＳＥsもし
くはその誘導体と公知の適当な賦形剤を組み合わせ、公
知の方法で本願発明の免疫異常性疾患予防治療用経口投
与剤とすることができる。本願発明の免疫異常性疾患予
防治療用経口投与剤の本態となるＳＥsもしくはその誘
導体は高純度のものが要求され、例えば少なくともゲル
電気泳動において単一バンドを示す程度に精製されてい
ることが望まれる。この意味から、市販の標品をそのま
ま使用することは好ましい態様ではない。また、薬剤の
性質上、本態に夾雑する内毒素(エンドトキシン)が除去
されていることが要求される。本薬剤の最終的な剤型に
ついては、経口投与用の薬剤である限り特別の制約はな
く粉末(固形)状、溶液状あるいはシロップ状のものが考
慮され得る。例えば、ＳＥsもしくはその誘導体を適当
な賦型剤、例えば炭水化物、糖、糖アルコールおよびア
ミノ酸等と共に凍結乾燥し固形状としたものまたはＳＥ
sもしくはその誘導体を生理食塩水および許容し得る張
度のイオン強度を有する適当な緩衝液中に溶解した液状
製剤等は好適な態様である。また、本態となるＳＥsも
しくはその誘導体を市販の飲料水に溶解し経口的に摂取
することも考えられ得る。薬剤中の含量については、Ｓ
Ｅsの毒素としての特性を考慮し低用量に抑えることが
要求されこれを満足する量且つ薬効が発揮される用量、
例えば１回の投与当り０.０１〜５０μg、好ましくは
０.０２〜０.５μgの本態を含有する薬剤が好適であ
る。
【００１４】本願発明の高度に精製されたＳＥsもしく
はその誘導体を本態とする免疫異常性疾患予防治療用経
口投与剤の有効投与量は、例えば投与対象者の年齢、症
状及び重症度などにより変動し、最終的には医師の意図
により変動するものであるが、例えばＳＥsに換算した
場合、一般に成人一日当り０.０５〜５μgであり、好ま
しくは０.０５〜０.５μgを１〜２回に分けて経口的に
投与するのがよい。また、場合により例えばアザチオプ
リン、シクロフォスファミド、またＴＮＦα抗体等の高
分子の抗炎症剤等の他の薬剤と併用することも可能であ
る。
はその誘導体を本態とする免疫異常性疾患予防治療用経
口投与剤の有効投与量は、例えば投与対象者の年齢、症
状及び重症度などにより変動し、最終的には医師の意図
により変動するものであるが、例えばＳＥsに換算した
場合、一般に成人一日当り０.０５〜５μgであり、好ま
しくは０.０５〜０.５μgを１〜２回に分けて経口的に
投与するのがよい。また、場合により例えばアザチオプ
リン、シクロフォスファミド、またＴＮＦα抗体等の高
分子の抗炎症剤等の他の薬剤と併用することも可能であ
る。
【００１５】本願発明の経口投与用薬剤を免疫異常性の
疾患の予防及び治療に使用する場合、以下のような機構
が想定され得る。本願発明の薬剤の本態であるＳＥs
は、もともとプロテアーゼによる加水分解に耐性で、投
与された該タンパク質の一部は小腸もしくは大腸にまで
到達すると考えられる。その後、腸管の粘膜を通じて排
出リンパ管や門脈に吸収され、肝臓を経て体循環に入り
全身を循環するようになる。その過程でＭＨＣ classII
分子陽性細胞に結合し、さらに特定のＶβＴＣＲ陽性Ｔ
細胞に結合する。ＶβＴＣＲ陽性Ｔ細胞は一過性に活性
化された後に抗原刺激やレクチン刺激に対して応答しな
い状態即ちトレランスになる。ＳＥsの投与が２０回以
上になるとトレランスになったＶβＴＣＲ陽性Ｔ細胞も
増加し、in vitro の測定系での測定が可能になる。と
ころで、ＲＡモデルマウスではＶβ8ＴＣＲ陽性Ｔ細胞
が疾患の発症に関与していることが知られている。そこ
で、このモデルマウスにＳＥsを予め経口的に投与しＶ
β8ＴＣＲ陽性Ｔ細胞をトレランスにしておくと、その
後疾患を発症させるためのコラーゲン免疫を行なっても
疾患は全く発症しないかあるいは発症しても軽度である
と思われる。即ち、ＲＡ疾患が予防される。また同様の
効果はＵＣモデルマウスでも認められる可能性がある。
一方、一旦疾患を発症させたマウスに経口的にＳＥsを
長期間投与し続けることで体内で活性化され自己抗原と
応答しているＶβ8ＴＣＲ陽性Ｔ細胞にトレランスを誘
導し、自己抗原との応答性も低下させることにより疾患
を治療することができる。
疾患の予防及び治療に使用する場合、以下のような機構
が想定され得る。本願発明の薬剤の本態であるＳＥs
は、もともとプロテアーゼによる加水分解に耐性で、投
与された該タンパク質の一部は小腸もしくは大腸にまで
到達すると考えられる。その後、腸管の粘膜を通じて排
出リンパ管や門脈に吸収され、肝臓を経て体循環に入り
全身を循環するようになる。その過程でＭＨＣ classII
分子陽性細胞に結合し、さらに特定のＶβＴＣＲ陽性Ｔ
細胞に結合する。ＶβＴＣＲ陽性Ｔ細胞は一過性に活性
化された後に抗原刺激やレクチン刺激に対して応答しな
い状態即ちトレランスになる。ＳＥsの投与が２０回以
上になるとトレランスになったＶβＴＣＲ陽性Ｔ細胞も
増加し、in vitro の測定系での測定が可能になる。と
ころで、ＲＡモデルマウスではＶβ8ＴＣＲ陽性Ｔ細胞
が疾患の発症に関与していることが知られている。そこ
で、このモデルマウスにＳＥsを予め経口的に投与しＶ
β8ＴＣＲ陽性Ｔ細胞をトレランスにしておくと、その
後疾患を発症させるためのコラーゲン免疫を行なっても
疾患は全く発症しないかあるいは発症しても軽度である
と思われる。即ち、ＲＡ疾患が予防される。また同様の
効果はＵＣモデルマウスでも認められる可能性がある。
一方、一旦疾患を発症させたマウスに経口的にＳＥsを
長期間投与し続けることで体内で活性化され自己抗原と
応答しているＶβ8ＴＣＲ陽性Ｔ細胞にトレランスを誘
導し、自己抗原との応答性も低下させることにより疾患
を治療することができる。
【００１６】
【本発明の作用並びに効果】本願発明の薬剤の本態であ
るＳＥsもしくはその誘導体は、経口的に投与された場
合腸管を通じて体内へ取り込まれ、特定のＶβＴＣＲ陽
性Ｔ細胞と結合しこの細胞にトレランスを誘導する。ト
レランスは正常な免疫反応の一つで抗原特異的である。
スーパー抗原によって誘導されるトレランスは特定のＶ
βＴＣＲ特異的であるので、スーパー抗原が結合したＴ
細胞のみにトレランスが誘導されるが、結果としてこれ
らのＴ細胞が特異性を持つ抗原に対しても応答しなくな
る。この抗原が免疫異常性の疾患に関連する抗原であっ
た場合、その抗原に対する応答性は失われることにな
る。また本願発明では生体に影響を及ぼさない投与量で
ＳＥsを長期間連続的に投与し、緩やかにかつ最大限に
トレランスを誘導するので、一旦成立したトレランスは
少なくとも数ケ月間は持続する。このような特徴は慢性
化し、疾患が終生持続するような免疫異常性の疾患、特
に自己免疫疾患の予防や治療において正常な細胞を標的
として含まず、できるだけ疾患に関与する細胞を標的と
した画期的な方法であり、原因となっている細胞のみを
標的とした理想的な方法に飛躍的に近づくものである。
また、対象疾患も自己免疫疾患に限らず、Ｉ型アレルギ
ーの様な特定のＴ細胞の特定の外来抗原に対する過敏反
応が発端で起こる抗体仲介性の疾患にも有効であると考
えられる。
るＳＥsもしくはその誘導体は、経口的に投与された場
合腸管を通じて体内へ取り込まれ、特定のＶβＴＣＲ陽
性Ｔ細胞と結合しこの細胞にトレランスを誘導する。ト
レランスは正常な免疫反応の一つで抗原特異的である。
スーパー抗原によって誘導されるトレランスは特定のＶ
βＴＣＲ特異的であるので、スーパー抗原が結合したＴ
細胞のみにトレランスが誘導されるが、結果としてこれ
らのＴ細胞が特異性を持つ抗原に対しても応答しなくな
る。この抗原が免疫異常性の疾患に関連する抗原であっ
た場合、その抗原に対する応答性は失われることにな
る。また本願発明では生体に影響を及ぼさない投与量で
ＳＥsを長期間連続的に投与し、緩やかにかつ最大限に
トレランスを誘導するので、一旦成立したトレランスは
少なくとも数ケ月間は持続する。このような特徴は慢性
化し、疾患が終生持続するような免疫異常性の疾患、特
に自己免疫疾患の予防や治療において正常な細胞を標的
として含まず、できるだけ疾患に関与する細胞を標的と
した画期的な方法であり、原因となっている細胞のみを
標的とした理想的な方法に飛躍的に近づくものである。
また、対象疾患も自己免疫疾患に限らず、Ｉ型アレルギ
ーの様な特定のＴ細胞の特定の外来抗原に対する過敏反
応が発端で起こる抗体仲介性の疾患にも有効であると考
えられる。
【００１７】以下、本願発明を実施例に基づき詳細に説
明するが、本願発明は何らこれらに限定されるものでは
ない。
明するが、本願発明は何らこれらに限定されるものでは
ない。
【００１８】
【実施例】試験例 (ＲＡの発症抑制及び治療効果)BA/1JマウスにII型コラ
ーゲンを免疫することによって発症するコラーゲン誘導
関節炎(collagen type II、 以下ＣＩＡと略す)の系を
評価系として使用した(Trentham D.E., et al.,J.Exp.M
ed.,146,p.857-868(1977))。発症一週間前にＰＢＳに溶
解し希釈したＳＥＢを1μg/マウス/日の投与量で連続し
て３〜４週間の間経口的に投与し、対象としてはＰＢＳ
のみ投与した実験群(非投与群)を設定した。関節炎はそ
の重症度に応じて１〜４度のスコア(関節炎スコア)で評
価した。結果は関節炎のスコアをＳＥＢ投与群の平均と
非投与群の平均とで比較し、ウイルコクソンの検定法を
用いて検定し有意差があるかどうか検討した。
ーゲンを免疫することによって発症するコラーゲン誘導
関節炎(collagen type II、 以下ＣＩＡと略す)の系を
評価系として使用した(Trentham D.E., et al.,J.Exp.M
ed.,146,p.857-868(1977))。発症一週間前にＰＢＳに溶
解し希釈したＳＥＢを1μg/マウス/日の投与量で連続し
て３〜４週間の間経口的に投与し、対象としてはＰＢＳ
のみ投与した実験群(非投与群)を設定した。関節炎はそ
の重症度に応じて１〜４度のスコア(関節炎スコア)で評
価した。結果は関節炎のスコアをＳＥＢ投与群の平均と
非投与群の平均とで比較し、ウイルコクソンの検定法を
用いて検定し有意差があるかどうか検討した。
【００１９】その結果、ＳＥＢ非投与群では発症率は１
００％であったが、ＳＥＢ投与群では発症率は２０％程
度であり、この差は有意であった(Ｐ<０.０１)。また発
症した個体間で重症度(合計関節炎スコアを発症個体数
で割った値)を比較したところ、ＳＥＢ投与群が非投与
群に比べて低く、たとえ発症しても症状は軽度であるこ
とが判明した。また、ＣＩＡが発症した時にＳＥＢを１
μgの投与量で１日１回９０日間連続して経口的に投与
しＣＩＡが治癒するかどうか検討した。その結果、関節
炎のスコアでみたＣＩＡの症状はＣIIの２回目の免疫か
ら２１日目においてＳＥＢ投与群は非投与群と比べて低
い関節炎スコアを示し、しかもその差は統計学的に有意
であった(Ｐ<０.０１)。これらの結果は、ＳＥＢを前も
って経口投与することによりＶβ8ＴＣＲ陽性Ｔ細胞に
トレランスが誘導され、その結果発症が抑制されること
を意味し、疾患の発症が予防されたことが明らかとなっ
た。さらにＣＩＡが発症してからＳＥＢの経口投与を開
始しても症状の軽減が観られるので、ＳＥＢを本態とす
る薬剤の経口投与でＣＩＡを治癒させることが可能であ
る。
００％であったが、ＳＥＢ投与群では発症率は２０％程
度であり、この差は有意であった(Ｐ<０.０１)。また発
症した個体間で重症度(合計関節炎スコアを発症個体数
で割った値)を比較したところ、ＳＥＢ投与群が非投与
群に比べて低く、たとえ発症しても症状は軽度であるこ
とが判明した。また、ＣＩＡが発症した時にＳＥＢを１
μgの投与量で１日１回９０日間連続して経口的に投与
しＣＩＡが治癒するかどうか検討した。その結果、関節
炎のスコアでみたＣＩＡの症状はＣIIの２回目の免疫か
ら２１日目においてＳＥＢ投与群は非投与群と比べて低
い関節炎スコアを示し、しかもその差は統計学的に有意
であった(Ｐ<０.０１)。これらの結果は、ＳＥＢを前も
って経口投与することによりＶβ8ＴＣＲ陽性Ｔ細胞に
トレランスが誘導され、その結果発症が抑制されること
を意味し、疾患の発症が予防されたことが明らかとなっ
た。さらにＣＩＡが発症してからＳＥＢの経口投与を開
始しても症状の軽減が観られるので、ＳＥＢを本態とす
る薬剤の経口投与でＣＩＡを治癒させることが可能であ
る。
【００２０】一方、予めC57BL/6マウスにＳＥＢを０.２
μg、１.０μg、５.０μgの投与量で１日１回１０〜２
０日間経口的に投与し、さらに７〜１０日間飼育するこ
とでＶβ8ＴＣＲＴ細胞に特異的なトレランスを誘導し
た。その後１％の硫酸デキストランナトリウム溶液(dex
tran sulfate sodium salt、以下ＤＳＳと称することが
ある)を自由飲水投与しＵＣを発症させ、その症状につ
いて組織病理学的に比較した。その結果、非投与マウス
及び０.２μg、１.０μgのＳＥＢ投与マウスでは全てＵ
Ｃが発症したが、５.０μg投与群では僅かに炎症の痕跡
が認められたもののそれは極めて軽度であり、ＵＣには
至っていなかった。この結果は、ＳＥＢの経口投与によ
り予めトレランスを誘導することによってＵＣの発症が
抑制されることを示している。また、ＳＥＢの投与量は
５.０μg/mouseに限らずこれ以上の高い投与量を用いた
場合も発症抑制が可能なことは容易に推測できる。
μg、１.０μg、５.０μgの投与量で１日１回１０〜２
０日間経口的に投与し、さらに７〜１０日間飼育するこ
とでＶβ8ＴＣＲＴ細胞に特異的なトレランスを誘導し
た。その後１％の硫酸デキストランナトリウム溶液(dex
tran sulfate sodium salt、以下ＤＳＳと称することが
ある)を自由飲水投与しＵＣを発症させ、その症状につ
いて組織病理学的に比較した。その結果、非投与マウス
及び０.２μg、１.０μgのＳＥＢ投与マウスでは全てＵ
Ｃが発症したが、５.０μg投与群では僅かに炎症の痕跡
が認められたもののそれは極めて軽度であり、ＵＣには
至っていなかった。この結果は、ＳＥＢの経口投与によ
り予めトレランスを誘導することによってＵＣの発症が
抑制されることを示している。また、ＳＥＢの投与量は
５.０μg/mouseに限らずこれ以上の高い投与量を用いた
場合も発症抑制が可能なことは容易に推測できる。
【００２１】実施例 １ (高純度ＳＥＢの調製)S.aureus２４３株を４％ＮＺアミ
ン、０.０１％塩酸チアミン、0.0000５％のニコチン酸
を含有する培地で、２４〜３６時間培養した。限外濾過
によって菌体を除去し濃縮した。これを出発材料とし、
本願発明者等が独自に作製した抗ＳＥＢ単クローン抗体
(ＳＡ５８-２)を結合したセファローズ４Ｂカラムに通
液してＳＥＢを吸着させ、０.１５ＭＮａＣｌ溶液で洗
浄した後、４ＭＭｇＣｌ2溶液で溶出した。得られた画
分を０.１５ＭＮａＣｌ溶液もしくは０.１５ＭＮａＣｌ
を含むＰＢＳに透析したものをＳＥＢ標品とした。この
ようにして得られたＳＥＢ標品は図１に示すように還元
下でのＳＤＳ-ＰＡＧＥ、ＣＢＢ染色で単一のバンドと
して検出された。一方、従来の市販のＳＥＢ(Toxin Tec
hnology社製)は、ＳＥＢのバンドの他に夾雑するタンパ
ク質のバンドが検出された。これらの夾雑タンパク質の
成分については現在のところ不明であるが、これらの成
分がＳＥＢの毒性発現に関与している可能性は否定でき
ない。
ン、０.０１％塩酸チアミン、0.0000５％のニコチン酸
を含有する培地で、２４〜３６時間培養した。限外濾過
によって菌体を除去し濃縮した。これを出発材料とし、
本願発明者等が独自に作製した抗ＳＥＢ単クローン抗体
(ＳＡ５８-２)を結合したセファローズ４Ｂカラムに通
液してＳＥＢを吸着させ、０.１５ＭＮａＣｌ溶液で洗
浄した後、４ＭＭｇＣｌ2溶液で溶出した。得られた画
分を０.１５ＭＮａＣｌ溶液もしくは０.１５ＭＮａＣｌ
を含むＰＢＳに透析したものをＳＥＢ標品とした。この
ようにして得られたＳＥＢ標品は図１に示すように還元
下でのＳＤＳ-ＰＡＧＥ、ＣＢＢ染色で単一のバンドと
して検出された。一方、従来の市販のＳＥＢ(Toxin Tec
hnology社製)は、ＳＥＢのバンドの他に夾雑するタンパ
ク質のバンドが検出された。これらの夾雑タンパク質の
成分については現在のところ不明であるが、これらの成
分がＳＥＢの毒性発現に関与している可能性は否定でき
ない。
【００２２】実施例 ２ (ＳＥＢの経口投与によるＶβ特異的免疫学的トレラン
スの誘導)DBA/1Jマウスに、S.aureus２４３株より精製
したＳＥＢをＰＢＳに溶解し、ゾンデを使用して１匹当
たり０.２〜１０μgの投与量で１日１回１０日〜９０日
にわたって経口投与した。先ず、投与開始後１０日目に
Ｖβ8ＴＣＲ陽性Ｔ細胞特異的なトレランスが誘導され
るかどうか確認した。トレランスの誘導はＳＥＢに対す
る増殖応答の測定、抗Ｖβ8ＴＣＲ単クローン抗体刺激
に対する応答性低下、フローサイトメトリーによるＶβ
8ＴＣＲ陽性Ｔ細胞の増減の測定で評価した。
スの誘導)DBA/1Jマウスに、S.aureus２４３株より精製
したＳＥＢをＰＢＳに溶解し、ゾンデを使用して１匹当
たり０.２〜１０μgの投与量で１日１回１０日〜９０日
にわたって経口投与した。先ず、投与開始後１０日目に
Ｖβ8ＴＣＲ陽性Ｔ細胞特異的なトレランスが誘導され
るかどうか確認した。トレランスの誘導はＳＥＢに対す
る増殖応答の測定、抗Ｖβ8ＴＣＲ単クローン抗体刺激
に対する応答性低下、フローサイトメトリーによるＶβ
8ＴＣＲ陽性Ｔ細胞の増減の測定で評価した。
【００２３】i)ＳＥＢに対する増殖応答の測定 ＳＥＢ投与群及び非投与群から抽出したマウスから脾臓
細胞を調製し、抗マウスＩｇＭ単クローン抗体及び抗マ
ウスＩｇＧ単クローン抗体を固相化したプラスチックプ
レートに加え、３７℃で２時間インキュベートしＢ細胞
を除去した。残りの細胞画分はＴ細胞画分として以下の
実験に使用した。また他のＳＥＢを投与していない他の
同系のマウスから調製した同系のマウスの脾臓細胞を細
胞分裂を阻害するマイトマイシンＣで処理し、抗原提示
細胞として使用した。５x１０5個マイトマイシンＣ処理
脾臓細胞を９６穴のマイクロプレートに加えた。この
時、刺激物質としてＳＥＢを段階希釈して、３７℃、６
６時間インキュベートし６６時間目に細胞をトリチウム
チミジンで３７℃、６時間でラベル(0.5μCi/well)し
た。ラベル後、セルハーベスターで細胞を収穫し、液体
シンチレーションカウンターで細胞に取り込まれた放射
活性を測定した。なお、培養には刺激物質の対象として
ＳＥＡ(Staphylococcal enterotoxin A)に対する増殖応
答を観るウェルも設定した。
細胞を調製し、抗マウスＩｇＭ単クローン抗体及び抗マ
ウスＩｇＧ単クローン抗体を固相化したプラスチックプ
レートに加え、３７℃で２時間インキュベートしＢ細胞
を除去した。残りの細胞画分はＴ細胞画分として以下の
実験に使用した。また他のＳＥＢを投与していない他の
同系のマウスから調製した同系のマウスの脾臓細胞を細
胞分裂を阻害するマイトマイシンＣで処理し、抗原提示
細胞として使用した。５x１０5個マイトマイシンＣ処理
脾臓細胞を９６穴のマイクロプレートに加えた。この
時、刺激物質としてＳＥＢを段階希釈して、３７℃、６
６時間インキュベートし６６時間目に細胞をトリチウム
チミジンで３７℃、６時間でラベル(0.5μCi/well)し
た。ラベル後、セルハーベスターで細胞を収穫し、液体
シンチレーションカウンターで細胞に取り込まれた放射
活性を測定した。なお、培養には刺激物質の対象として
ＳＥＡ(Staphylococcal enterotoxin A)に対する増殖応
答を観るウェルも設定した。
【００２４】このようにしてＳＥＢに対する増殖応答
を、ＳＥＢ経口投与群と非投与群とで比較した結果、図
２に示すように、測定に用いた全てのＳＥＢ濃度におい
てＳＥＢ投与群ではトリウムチミジンの取り込みが非投
与群に比べて著しく低下していることが判明した。この
ことはＳＥＢに対する応答性が低下していることを示し
ており、ＳＥＢ特異的なトレランスが成立している可能
性が考えられた。そこで、次にＳＥＢ応答性の抗Ｖβ8
ＴＣＲ単クローン抗体を使用して、この細胞の抗Ｖβ8
ＴＣＲ単クローン抗体に対する増殖応答が低下している
かどうか検討した。 先ず、予め抗体を96穴プレートに
固相化し、ＳＥＢ投与マウス及び非投与群から得た脾臓
Ｔ細胞の懸濁液(２x１０6/ml)を加えた。３７℃で６６
時間インキュベートした後、前述したように[3Ｈ]-チミ
ジンで６時間ラベルし、放射活性を比較した。その結
果、図３に示されるようにＳＥＢを経口投与した群では
非投与群に比べて取り込まれた[3Ｈ]-チミジンの放射活
性が低く、抗Ｖβ8ＴＣＲ単クローン抗体刺激に低応答
性であることが判った。即ち、Ｖβ8ＴＣＲＴ細胞が部
分的なアナジーになっていることが判明した。
を、ＳＥＢ経口投与群と非投与群とで比較した結果、図
２に示すように、測定に用いた全てのＳＥＢ濃度におい
てＳＥＢ投与群ではトリウムチミジンの取り込みが非投
与群に比べて著しく低下していることが判明した。この
ことはＳＥＢに対する応答性が低下していることを示し
ており、ＳＥＢ特異的なトレランスが成立している可能
性が考えられた。そこで、次にＳＥＢ応答性の抗Ｖβ8
ＴＣＲ単クローン抗体を使用して、この細胞の抗Ｖβ8
ＴＣＲ単クローン抗体に対する増殖応答が低下している
かどうか検討した。 先ず、予め抗体を96穴プレートに
固相化し、ＳＥＢ投与マウス及び非投与群から得た脾臓
Ｔ細胞の懸濁液(２x１０6/ml)を加えた。３７℃で６６
時間インキュベートした後、前述したように[3Ｈ]-チミ
ジンで６時間ラベルし、放射活性を比較した。その結
果、図３に示されるようにＳＥＢを経口投与した群では
非投与群に比べて取り込まれた[3Ｈ]-チミジンの放射活
性が低く、抗Ｖβ8ＴＣＲ単クローン抗体刺激に低応答
性であることが判った。即ち、Ｖβ8ＴＣＲＴ細胞が部
分的なアナジーになっていることが判明した。
【００２５】ii)フローサイトメトリー解析によるclona
l deletionの解析 さらに、ＳＥＢ経口投与後のＶβ8ＴＣＲ陽性Ｔ細胞の
ポピュレーションの増減についてもフローサイトメトリ
ーを用いて解析した。脾臓細胞から調製したＴ細胞をst
aining buffer(２％ウシ血清アルブミン、０.０２％ア
ジ化ナトリウム、ＰＢＳ)に１０7個/mlで懸濁し、それ
ぞれエッペンドルフチューブに移した。それぞれのチュ
ーブにＦＩＴＣラベル抗マウスＶβ8ＴＣＲ単クローン
抗体を１μg/mlで加え、氷中で最低３０分間反応させ
た。反応後、staining bufferで３回洗浄し、５００μg
/mlのプロピジウムヨーダイド(propidium iodide)溶液
に懸濁してＦＡＣＳcan(Becton Dickinson社製)を用い
て染色度合いを解析した。結果はＴ細胞全体におけるそ
のポピュレーションの比率で表した。その結果、ＳＥＢ
を投与していない群由来のＴ細胞ではＶβ8ＴＣＲＴ細
胞が１５.４％であったが、ＳＥＢ経口投与群では１１.
０％と約３０％程度低い値を示した。この結果、ＳＥＢ
を連続的に経口投与することによりＳＥＢ応答性のＶβ
8ＴＣＲＴ細胞が部分的に減少すること、即ちclonal de
letionが認められることが判明した。これらの結果か
ら、ＳＥＢを連続的に経口投与することによりＶβ8Ｔ
ＣＲＴ細胞の不応答性によるＳＥＢ特異的なアナジーと
Ｖβ8ＴＣＲＴ細胞の部分的なclonal deletionによるト
レランスの誘導が成立していることが示された。
l deletionの解析 さらに、ＳＥＢ経口投与後のＶβ8ＴＣＲ陽性Ｔ細胞の
ポピュレーションの増減についてもフローサイトメトリ
ーを用いて解析した。脾臓細胞から調製したＴ細胞をst
aining buffer(２％ウシ血清アルブミン、０.０２％ア
ジ化ナトリウム、ＰＢＳ)に１０7個/mlで懸濁し、それ
ぞれエッペンドルフチューブに移した。それぞれのチュ
ーブにＦＩＴＣラベル抗マウスＶβ8ＴＣＲ単クローン
抗体を１μg/mlで加え、氷中で最低３０分間反応させ
た。反応後、staining bufferで３回洗浄し、５００μg
/mlのプロピジウムヨーダイド(propidium iodide)溶液
に懸濁してＦＡＣＳcan(Becton Dickinson社製)を用い
て染色度合いを解析した。結果はＴ細胞全体におけるそ
のポピュレーションの比率で表した。その結果、ＳＥＢ
を投与していない群由来のＴ細胞ではＶβ8ＴＣＲＴ細
胞が１５.４％であったが、ＳＥＢ経口投与群では１１.
０％と約３０％程度低い値を示した。この結果、ＳＥＢ
を連続的に経口投与することによりＳＥＢ応答性のＶβ
8ＴＣＲＴ細胞が部分的に減少すること、即ちclonal de
letionが認められることが判明した。これらの結果か
ら、ＳＥＢを連続的に経口投与することによりＶβ8Ｔ
ＣＲＴ細胞の不応答性によるＳＥＢ特異的なアナジーと
Ｖβ8ＴＣＲＴ細胞の部分的なclonal deletionによるト
レランスの誘導が成立していることが示された。
【００２６】実施例 ３ (ＳＥＢ経口投与によるＣＩＡの発症抑制)６〜１６週齡
のDBA/1J雌のマウスに０.１５ＭのＮａＣｌを含む５０
ｍＭトリス塩酸(ｐＨ８.０)に溶解したウシII型コラー
ゲン(ＣII、ヤガイ中央研究所社製)をフロイント完全ア
ジュバント(Freund Complete Adjuvant、以下ＦＣＡと
称することがある)でエマルジョン化し、１匹当たり２
００μgの投与量で背部に皮内投与した。その３週後に
ＣII２００μgを溶液状態のままで腹腔内に投与した。
以後１週〜３カ月間飼育することでコラーゲン誘導関節
炎(collagen induced arthritis、以下ＣＩＡと称する
ことがある)が発症した。ＣＩＡの評価については、ＣI
Iを腹腔内投与した後１週後に四肢の指の関節から発症
し始め、１０〜１４日目にほぼ１００％のマウスが発症
した。ＣＩＡの評価は、四肢の関節の関節炎を重症度に
応じて１〜４点でスコア化することにより行なった。最
初の投与から約４週後にヒトのＲＡ様の症状を呈するよ
うになり、その後の重症度は次第に増加していった。こ
の時、マウスにＳＥＢを予め経口投与してＶβ8ＴＣＲ
Ｔ細胞にトレランスを誘導しておいた実験群では発症率
は極めて低く全体の約２０％であった。これに比べてＳ
ＥＢ非投与群では発症率は１００％であったので、ＳＥ
Ｂの経口投与により、明らかにＣＩＡの発症が抑制され
ていることが示された(図４)。
のDBA/1J雌のマウスに０.１５ＭのＮａＣｌを含む５０
ｍＭトリス塩酸(ｐＨ８.０)に溶解したウシII型コラー
ゲン(ＣII、ヤガイ中央研究所社製)をフロイント完全ア
ジュバント(Freund Complete Adjuvant、以下ＦＣＡと
称することがある)でエマルジョン化し、１匹当たり２
００μgの投与量で背部に皮内投与した。その３週後に
ＣII２００μgを溶液状態のままで腹腔内に投与した。
以後１週〜３カ月間飼育することでコラーゲン誘導関節
炎(collagen induced arthritis、以下ＣＩＡと称する
ことがある)が発症した。ＣＩＡの評価については、ＣI
Iを腹腔内投与した後１週後に四肢の指の関節から発症
し始め、１０〜１４日目にほぼ１００％のマウスが発症
した。ＣＩＡの評価は、四肢の関節の関節炎を重症度に
応じて１〜４点でスコア化することにより行なった。最
初の投与から約４週後にヒトのＲＡ様の症状を呈するよ
うになり、その後の重症度は次第に増加していった。こ
の時、マウスにＳＥＢを予め経口投与してＶβ8ＴＣＲ
Ｔ細胞にトレランスを誘導しておいた実験群では発症率
は極めて低く全体の約２０％であった。これに比べてＳ
ＥＢ非投与群では発症率は１００％であったので、ＳＥ
Ｂの経口投与により、明らかにＣＩＡの発症が抑制され
ていることが示された(図４)。
【００２７】実施例 ４ (ＳＥＢの経口投与によるＣＩＡの治療効果)先ず、DBA/
1JマウスにＣIIを二度免疫してさらにブースター免疫を
行ないＣＩＡを発症させた。最後の免疫から１週後より
ＳＥＢを１μg/マウスの投与量で０.２ml/マウスで１日
１回連続９０日間経口的に投与した。関節炎スコアの変
化を、経時的な臨床スコア測定による評価あるいは病理
標本作製・鏡検による評価を行なった。その結果、ＳＥ
Ｂ非投与群では１匹当たりの関節炎のスコアは高いまま
９０日目まで維持され疾患が持続していることが示され
た。一方、ＳＥＢを経口的に９０日間連続投与した場合
の関節炎スコアは、投与後３週目頃から徐々に下がり始
め９０日目にはほぼ０に近い値を示した(図５)。このこ
とは、ＣＩＡを一旦発症させた後でもＳＥＢを経口的に
連続して長期間投与し続けることにより関節炎が改善で
きること、即ち治癒できることを示唆している。しか
も、この時使用したＳＥＢの投与量は１μg/マウスと低
く動物に病原性をもたらすような量ではないことから、
安全で経済的な量であると言える。以上のように、本発
明によってもたらされる高純度のＳＥＢ本態とする経口
投与用薬剤を１μg/マウス/日の低投与量で長期間投与
することにより、ヒトの慢性関節リウマチのモデルであ
るＣＩＡを治療することが可能であることが明らかにな
った。また０.１μg/マウス/日の経口投与でもＶβＴＣ
Ｒ陽性Ｔ細胞特異的なトレランスが誘導されることが示
されているのでこの投与量でもＣＩＡの治療が可能であ
ることが推測される。
1JマウスにＣIIを二度免疫してさらにブースター免疫を
行ないＣＩＡを発症させた。最後の免疫から１週後より
ＳＥＢを１μg/マウスの投与量で０.２ml/マウスで１日
１回連続９０日間経口的に投与した。関節炎スコアの変
化を、経時的な臨床スコア測定による評価あるいは病理
標本作製・鏡検による評価を行なった。その結果、ＳＥ
Ｂ非投与群では１匹当たりの関節炎のスコアは高いまま
９０日目まで維持され疾患が持続していることが示され
た。一方、ＳＥＢを経口的に９０日間連続投与した場合
の関節炎スコアは、投与後３週目頃から徐々に下がり始
め９０日目にはほぼ０に近い値を示した(図５)。このこ
とは、ＣＩＡを一旦発症させた後でもＳＥＢを経口的に
連続して長期間投与し続けることにより関節炎が改善で
きること、即ち治癒できることを示唆している。しか
も、この時使用したＳＥＢの投与量は１μg/マウスと低
く動物に病原性をもたらすような量ではないことから、
安全で経済的な量であると言える。以上のように、本発
明によってもたらされる高純度のＳＥＢ本態とする経口
投与用薬剤を１μg/マウス/日の低投与量で長期間投与
することにより、ヒトの慢性関節リウマチのモデルであ
るＣＩＡを治療することが可能であることが明らかにな
った。また０.１μg/マウス/日の経口投与でもＶβＴＣ
Ｒ陽性Ｔ細胞特異的なトレランスが誘導されることが示
されているのでこの投与量でもＣＩＡの治療が可能であ
ることが推測される。
【００２８】実施例 ５ (ＤＳＳ誘導ＵＣの発症)前述したように６〜１６週齡の
C57BL/6マウスにＭ.Ｗ.４０,０００の硫酸デキストラン
ナトリウム(Dextran Sulfate Sodium salts, 以下ＤＳ
Ｓと称することがある)を、１％の濃度で自由飲水投与
しながら７〜１０日間飼育することで、大腸に慢性的な
炎症を発症する炎症性大腸炎モデルをＵＣのモデルとし
て適用した(Gastroenterology, 98:p.694-702,(199
0))。飲水投与開始後１０日目に飲水投与を終了し、水
のみを引き続き１４日〜２０日間投与した。経時的に、
マウスから大腸を切除し平滑筋の方向に沿って切開し、
ピンで数カ所をゴム製シートに固定し、そのまま５％中
性ホルマリン液に浸すことで組織を固定した。その後、
組織をエチルアルコール処理により脱水し、パラフィン
ブロックに包埋した後、ミクロトームで約１０mmの厚さ
に切断した後、スライドグラスに貼り付け、ヘマトキシ
リン-エオジン染色を行なった。染色後、それぞれを光
学顕微鏡で鏡検し、各実験群での差異を調べた。
C57BL/6マウスにＭ.Ｗ.４０,０００の硫酸デキストラン
ナトリウム(Dextran Sulfate Sodium salts, 以下ＤＳ
Ｓと称することがある)を、１％の濃度で自由飲水投与
しながら７〜１０日間飼育することで、大腸に慢性的な
炎症を発症する炎症性大腸炎モデルをＵＣのモデルとし
て適用した(Gastroenterology, 98:p.694-702,(199
0))。飲水投与開始後１０日目に飲水投与を終了し、水
のみを引き続き１４日〜２０日間投与した。経時的に、
マウスから大腸を切除し平滑筋の方向に沿って切開し、
ピンで数カ所をゴム製シートに固定し、そのまま５％中
性ホルマリン液に浸すことで組織を固定した。その後、
組織をエチルアルコール処理により脱水し、パラフィン
ブロックに包埋した後、ミクロトームで約１０mmの厚さ
に切断した後、スライドグラスに貼り付け、ヘマトキシ
リン-エオジン染色を行なった。染色後、それぞれを光
学顕微鏡で鏡検し、各実験群での差異を調べた。
【００２９】i)経口投与によるトレランスの誘導 C57BL/6マウスは、通常、スーパー抗原に対する応答性
が低い。そこでまずＳＥＢの連続的な経口投与によるＶ
β8ＴＣＲ特異的なトレランスが誘導されるかどうかを
調べた。DBA/1マウスの場合より高い投与量(５μg/マウ
ス)で１日１回、１４日間にわたって投与した。最終投
与から１４日目にマウスから脾臓を摘出し、実施例２の
項で述べた方法に従いＴ細胞を調製し、同様に同系の正
常マウスの脾臓細胞をＭＭＣ処理して抗原提示細胞とし
た。これらの細胞を使用してＳＥＢに対する応答性及び
抗Ｖβ8ＴＣＲモノクローナル抗体刺激に対する増殖応
答を測定した。その結果、図６に示すように、ＳＥＢに
対する増殖応答及び抗Ｖβ8ＴＣＲモノクローナル抗体
に対する増殖応答ともＳＥＢを投与していない正常マウ
スのそれと比べて有意に低下しており、Ｖβ8ＴＣＲＴ
細胞特異的なトレランスが誘導されていることが示され
た。
が低い。そこでまずＳＥＢの連続的な経口投与によるＶ
β8ＴＣＲ特異的なトレランスが誘導されるかどうかを
調べた。DBA/1マウスの場合より高い投与量(５μg/マウ
ス)で１日１回、１４日間にわたって投与した。最終投
与から１４日目にマウスから脾臓を摘出し、実施例２の
項で述べた方法に従いＴ細胞を調製し、同様に同系の正
常マウスの脾臓細胞をＭＭＣ処理して抗原提示細胞とし
た。これらの細胞を使用してＳＥＢに対する応答性及び
抗Ｖβ8ＴＣＲモノクローナル抗体刺激に対する増殖応
答を測定した。その結果、図６に示すように、ＳＥＢに
対する増殖応答及び抗Ｖβ8ＴＣＲモノクローナル抗体
に対する増殖応答ともＳＥＢを投与していない正常マウ
スのそれと比べて有意に低下しており、Ｖβ8ＴＣＲＴ
細胞特異的なトレランスが誘導されていることが示され
た。
【００３０】ii)ＳＥＢの経口投与によるＵＣの発症抑
制 先ず、DBA/1Jマウスに予めＰＢＳに溶解したＳＥＢを５
μg/マウス/日の投与量で最低１０日間経口投与を行な
いトレランスを誘導した。またＰＢＳのみ投与した実験
群を設定し陽性対象とし、続いて１.０％ＤＳＳを１０
日間自由飲水投与してＵＣの発症が抑制されるかどうか
調べた。なお、ＳＥＢ及びＤＳＳの非投与群を設定し陰
性対象とした。ＤＳＳ投与終了後１８日目にマウスを解
剖して大腸を摘出し、ヘマトキシリン-エオジン染色で
病理切片を作製し、大腸の病変について各実験群で比較
検討した。その結果、図７に示すように陽性対照群では
大腸粘膜上皮の剥離、脱落及び細胞浸潤を伴う大腸炎が
認められ、病変のステージは極期を過ぎ修復期に入った
状態であった。一方、５μg/マウス/日の投与量でＳＥ
Ｂを経口投与されたマウスでは、直腸上部に炎症像はあ
るものの他に比べて明らかに軽度であり、陰性対照群の
像に近い検鏡像であった。以上のように、ＳＥＢを予め
経口投与してＶβ8ＴＣＲＴ細胞にトレランスを誘導す
ることにより、ＤＳＳ誘導ＵＣの発症を抑制できること
が明らかになった。
制 先ず、DBA/1Jマウスに予めＰＢＳに溶解したＳＥＢを５
μg/マウス/日の投与量で最低１０日間経口投与を行な
いトレランスを誘導した。またＰＢＳのみ投与した実験
群を設定し陽性対象とし、続いて１.０％ＤＳＳを１０
日間自由飲水投与してＵＣの発症が抑制されるかどうか
調べた。なお、ＳＥＢ及びＤＳＳの非投与群を設定し陰
性対象とした。ＤＳＳ投与終了後１８日目にマウスを解
剖して大腸を摘出し、ヘマトキシリン-エオジン染色で
病理切片を作製し、大腸の病変について各実験群で比較
検討した。その結果、図７に示すように陽性対照群では
大腸粘膜上皮の剥離、脱落及び細胞浸潤を伴う大腸炎が
認められ、病変のステージは極期を過ぎ修復期に入った
状態であった。一方、５μg/マウス/日の投与量でＳＥ
Ｂを経口投与されたマウスでは、直腸上部に炎症像はあ
るものの他に比べて明らかに軽度であり、陰性対照群の
像に近い検鏡像であった。以上のように、ＳＥＢを予め
経口投与してＶβ8ＴＣＲＴ細胞にトレランスを誘導す
ることにより、ＤＳＳ誘導ＵＣの発症を抑制できること
が明らかになった。
【００３１】これらの結果より、本願発明のもしくはそ
の誘導体を本態とするによりトレランスを誘導し、ＣＩ
Ａ及びＵＣの発症を抑制できるということ、またＣＩＡ
を治療できるということは、同様の方法がヒトの慢性関
節リウマチ及び潰瘍性大腸炎或いはこれに類似するクロ
ーン病の予防及び治療に適用できることを示している。
の誘導体を本態とするによりトレランスを誘導し、ＣＩ
Ａ及びＵＣの発症を抑制できるということ、またＣＩＡ
を治療できるということは、同様の方法がヒトの慢性関
節リウマチ及び潰瘍性大腸炎或いはこれに類似するクロ
ーン病の予防及び治療に適用できることを示している。
【図１】 本願発明に用いられるＳＥＢの精製方法とそ
れによって得られたＳＥＢの純度の上昇を示す電気泳動
図(図面代用写真)である。
れによって得られたＳＥＢの純度の上昇を示す電気泳動
図(図面代用写真)である。
【図２】 本願発明に用いられるＳＥＢの経口投与後の
マウス脾臓Ｔ細胞のＳＥＢに対する増殖応答の低下を示
す図である。
マウス脾臓Ｔ細胞のＳＥＢに対する増殖応答の低下を示
す図である。
【図３】 本願発明に用いられるＳＥＢ経口投与後のマ
ウス脾臓Ｔ細胞の抗Ｖβ8ＴＣＲ単クローン抗体に対す
る増殖応答の低下を示す図である。
ウス脾臓Ｔ細胞の抗Ｖβ8ＴＣＲ単クローン抗体に対す
る増殖応答の低下を示す図である。
【図４】 本願発明に用いられるＳＥＢの経口投与後の
ＣＩＡの発症抑制を示す図である。
ＣＩＡの発症抑制を示す図である。
【図５】 本願発明に用いられるＳＥＢの経口投与によ
るＣＩＡの治療効果を示す図である。
るＣＩＡの治療効果を示す図である。
【図６】 C57BL/6マウス脾臓Ｔ細胞での本願発明の免
疫異常性疾患予防治療用経口投与剤投与に伴うＳＥＢに
対する増殖応答の低下を示す図である。
疫異常性疾患予防治療用経口投与剤投与に伴うＳＥＢに
対する増殖応答の低下を示す図である。
【図７】 本願発明の免疫異常性疾患予防予防治療用経
口投与剤投与後のＤＳＳ誘導ＵＣの発症抑制を示す生物
(病理切片)の形態図(図面代用写真)である。
口投与剤投与後のＤＳＳ誘導ＵＣの発症抑制を示す生物
(病理切片)の形態図(図面代用写真)である。
フロントページの続き (72)発明者 今川 義孝 熊本県熊本市東町４丁目16番２棟205号 (72)発明者 時吉 幸男 熊本県熊本市若葉３丁目14−19
Claims (6)
- 【請求項１】 免疫異常性疾患の予防治療に有効量のＳ
Ｅ群外毒素(Staphylococcal enterotoxins、以下ＳＥs
と称することがある)もしくはその誘導体を含有する免
疫異常性疾患予防治療用経口投与剤。 - 【請求項２】 含有されるＳＥsもしくはその誘導体
が、ゲル電気泳動において単一バンドを示す程度に精製
されていることを要件とする請求項１記載の免疫異常性
疾患予防治療用経口投与剤。 - 【請求項３】 １回投与当り０.０１〜５０μg、好まし
くは０.０２〜０.５μgのＳＥsもしくはその誘導体を含
有する請求項１もしくは請求項２に記載の免疫異常性疾
患予防治療用経口投与剤。 - 【請求項４】 ＳＥsが、ＶβＴ細胞抗原受容体(以下、
ＶβＴＣＲと称することがある)に結合性を有する、黄
色ブドウ球菌エンテロトキシンＢ(ＳＥＢ)、黄色ブドウ
球菌エンテロトキシンＡ(ＳＥＡ)、黄色ブドウ球菌エン
テロトキシンＣ1(ＳＥＣ1)、黄色ブドウ球菌エンテロト
キシンＣ2(ＳＥＣ2)、黄色ブドウ球菌エンテロトキシン
Ｃ3(ＳＥＣ3)、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＤ(Ｓ
ＥＤ)、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＥ(ＳＥＥ)お
よびこれらの誘導体より成る群から選ばれる物質である
請求項１〜請求項３のいずれかに記載の免疫異常性疾患
予防治療用経口投与剤。 - 【請求項５】 生理学的に許容し得るｐＨおよび許容し
得る張度のイオン強度を有する水溶液である請求項１〜
請求項４のいずれかに記載の免疫異常性疾患予防治療用
経口投与剤。 - 【請求項６】 生理学的に許容し得る張度を溶液に与え
るに充分な量で、炭水化物、糖、糖アルコールおよびア
ミノ酸より成る群から選ばれる物質を含有する請求項５
記載の免疫異常性疾患予防治療用経口投与剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7297548A JPH09110704A (ja) | 1995-10-19 | 1995-10-19 | 免疫異常性疾患予防治療用経口投与剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7297548A JPH09110704A (ja) | 1995-10-19 | 1995-10-19 | 免疫異常性疾患予防治療用経口投与剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09110704A true JPH09110704A (ja) | 1997-04-28 |
Family
ID=17847974
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7297548A Pending JPH09110704A (ja) | 1995-10-19 | 1995-10-19 | 免疫異常性疾患予防治療用経口投与剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09110704A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999040935A1 (fr) * | 1998-02-15 | 1999-08-19 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Nouveaux medicaments preventifs/curatifs de l'immunopathie |
| WO2004087915A1 (ja) * | 2003-03-28 | 2004-10-14 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Ｓｅｂ改変体およびそれを含有する免疫異常性疾患の予防・治療用剤 |
| WO2006009501A1 (en) * | 2004-07-16 | 2006-01-26 | Forskapatent I Syd Ab | Prevention of allergy in children |
| WO2006011137A2 (en) | 2004-07-26 | 2006-02-02 | State Of Israel, Department Of Agriculture, Kimron Veterinary Institute | Novel bacteria and pharmaceutically active products obtained therefrom |
| WO2013119170A3 (en) * | 2012-02-08 | 2013-11-07 | Premune Ab | Prevention of inflammatory disorders in domestic non-human mammals |
| CN114848794A (zh) * | 2022-05-25 | 2022-08-05 | 沈阳协合生物制药股份有限公司 | 一种通过调节t细胞免疫预防和治疗骨质疏松病的方法 |
-
1995
- 1995-10-19 JP JP7297548A patent/JPH09110704A/ja active Pending
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999040935A1 (fr) * | 1998-02-15 | 1999-08-19 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Nouveaux medicaments preventifs/curatifs de l'immunopathie |
| AU746372B2 (en) * | 1998-02-15 | 2002-04-18 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Novel preventives/remedies for immunopathy |
| WO2004087915A1 (ja) * | 2003-03-28 | 2004-10-14 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Ｓｅｂ改変体およびそれを含有する免疫異常性疾患の予防・治療用剤 |
| JPWO2004087915A1 (ja) * | 2003-03-28 | 2006-07-06 | 財団法人化学及血清療法研究所 | Ｓｅｂ改変体およびそれを含有する免疫異常性疾患の予防・治療用剤 |
| JP4516914B2 (ja) * | 2003-03-28 | 2010-08-04 | 一般財団法人化学及血清療法研究所 | Ｓｅｂ改変体およびそれを含有する免疫異常性疾患の予防・治療用剤 |
| US8226958B2 (en) | 2003-03-28 | 2012-07-24 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Modified SEB and prophylactics/remedies for immunopathy containing the same |
| WO2006009501A1 (en) * | 2004-07-16 | 2006-01-26 | Forskapatent I Syd Ab | Prevention of allergy in children |
| WO2006011137A2 (en) | 2004-07-26 | 2006-02-02 | State Of Israel, Department Of Agriculture, Kimron Veterinary Institute | Novel bacteria and pharmaceutically active products obtained therefrom |
| WO2006011137A3 (en) * | 2004-07-26 | 2006-03-30 | State Of Israel Dept Of Agricu | Novel bacteria and pharmaceutically active products obtained therefrom |
| WO2013119170A3 (en) * | 2012-02-08 | 2013-11-07 | Premune Ab | Prevention of inflammatory disorders in domestic non-human mammals |
| US9375468B2 (en) | 2012-02-08 | 2016-06-28 | Premune Ab | Prevention of inflammatory disorders in domestic non-human mammals |
| CN114848794A (zh) * | 2022-05-25 | 2022-08-05 | 沈阳协合生物制药股份有限公司 | 一种通过调节t细胞免疫预防和治疗骨质疏松病的方法 |
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Legal Events
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| A02 | Decision of refusal |
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