JPH0856695A

JPH0856695A - 安全性評価方法

Info

Publication number: JPH0856695A
Application number: JP16418494A
Authority: JP
Inventors: Koji Hayashi; 浩司林; Toshiyuki Sakaki; 利之榊; Yoshiyasu Yabusaki; 義康薮崎; Koichiro Komai; 浩一郎駒井; Hideo Kaneko; 秀雄金子; Iwao Nakatsuka; 巌中塚
Original assignee: Sumitomo Chemical Co Ltd
Current assignee: Sumitomo Chemical Co Ltd
Priority date: 1993-07-20
Filing date: 1994-07-15
Publication date: 1996-03-05

Abstract

(57)【要約】（修正有）【構成】ヒト由来チトクロムＰ４５０１Ａ２、２Ｃ
９、２Ｅ１、３Ａ４からなる分子種群の分子種につい
て、（１）酵母内発現プロモーター、上記分子種及び酵母Ｎ
ＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素をコードする遺伝子或いは
上記分子種と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工
融合酵素の遺伝子を含む酵母内発現プラスミドの構築工
程、（２）上記プラスミドを酵母に導入、酵母内で上記分子
種及び酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素或いは上記分
子種と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵
素を発現させる酵母菌体の作製工程、（３）上記酵母菌体又は該菌体破砕物を検体化合物と反
応する工程、（４）反応液の代謝産物を分析、検体化合物の解毒代謝
の有無又は発癌物質への代謝の有無を判定する工程、（５）上記により、検体化合物の安全、非安全を評価す
る工程からなる安全性評価方法。【効果】高精度で代謝・薬効・毒性の早期予測・評価
が可能になる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、安全性評価方法に関す
るものである。

【０００２】

【従来の技術】新規化合物の開発では、化合物の、ヒト
における代謝・薬効・毒性を早期に予測・評価する必要
がますます高くなってきている。特に、農薬、一般化合
物などのように、ヒトへの投与による安全性評価試験を
行なうことが不可能な場合、実験動物への投与による安
全性評価試験の結果をヒトへ外挿することにより安全性
評価を行っている。しかしながら、近年チトクロムＰ４
５０を始めとする薬物代謝酵素系の動物種間による違い
が明らかになりつつある。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】その結果、実験動物を
安全性評価試験に用いることは、ヒトにおける代謝・薬
効・毒性を早期に予測・評価するのに必ずしも常に充分
なものであるとはいえなくなった。このために、新規化
合物をヒトへの投与する安全性評価試験、または入手が
倫理的、技術的に困難であるヒト肝臓等の生体組織を用
いる安全性評価試験を行なうことなく、ヒトにおける代
謝系をin vitro系において再現する評価方法が望まれて
いる。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の状
況を鑑み、よりすぐれたヒトにおける代謝系をin vitro
系において再現する評価方法を見い出すべく、鋭意検討
を重ねた結果、酵母発現系は酵母菌体の優れた増殖能力
によりヒト由来のチトクロムＰ４５０分子種あるいは該
分子種と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合
酵素を大量生産するのに適すること、かつ (i)ヒト由来
のチトクロムＰ４５０分子種をコードする塩基配列を有
する遺伝子および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素を
コードする塩基配列を有する遺伝子あるいは(ii)上記の
分子種と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合
酵素をコードする塩基配列を有する遺伝子を含む酵母内
発現プラスミドを用いることにより著しく大量の代謝産
物が短時間でしかも安定して得られるために精密な分析
が可能であること、さらにある種のヒト由来のチトクロ
ムＰ４５０分子種を必須的に組み合せて用いることによ
りヒト肝臓における代謝系をin vitroで再現できること
を見い出し、本発明を完成した。すなわち、本発明は、
（Ｉ）ヒト由来のチトクロムＰ４５０１Ａ２、ヒト由
来のチトクロムＰ４５０２Ｃ９、ヒト由来のチトクロ
ムＰ４５０２Ｅ１ならびにヒト由来のチトクロムＰ４
５０３Ａ４からなる分子種群に含まれる全ての分子種
について、（１）(a) 酵母内で発現させるためのプロモーターなら
びに(b)(i)上記の分子種をコードする塩基配列を有する
遺伝子および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素をコー
ドする塩基配列を有する遺伝子あるいは(ii)上記の分子
種と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素
をコードする塩基配列を有する遺伝子を含む酵母内発現
プラスミドを構築する工程（工程１）、（２）構築された酵母内発現プラスミドを酵母に導入す
ることにより、酵母内で(i) 上記の分子種および酵母Ｎ
ＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素あるいは(ii)上記の分子種
と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を
発現させる酵母菌体を作製する工程（工程２）、（３）作製された酵母菌体または該菌体破砕物を検体で
ある化合物と反応する工程（工程３）、（４）反応後、反応液中に存在する代謝産物を分析する
ことによって、検体である化合物の解毒代謝の有無また
は発癌物質への代謝の有無を判定する工程（工程４
Ａ）、（５）上記の判定により、（ａ）検体である化合物の解
毒代謝の存在（有）または発癌物質への代謝の非存在
（無）の場合、検体である化合物を安全と評価し、また
は、（ｂ）検体である化合物の解毒代謝の非存在（無）
または発癌物質への代謝の存在（有）の場合、検体であ
る化合物を非安全と評価する工程（工程５Ａ）、からな
ることを特徴とする評価方法（以下、評価方法と記
す。）、および(II) ヒト由来のチトクロムＰ４５０
１Ａ２、ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ９、ヒ
ト由来のチトクロムＰ４５０２Ｅ１ならびにヒト由来
のチトクロムＰ４５０３Ａ４からなる分子種群に含ま
れる全ての分子種について、（１）(a) 酵母内で発現させるためのプロモーターなら
びに(b)(i)上記の分子種をコードする塩基配列を有する
遺伝子および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素をコー
ドする塩基配列を有する遺伝子あるいは(ii)上記の分子
種と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素
をコードする塩基配列を有する遺伝子を含む酵母内発現
プラスミドを構築する工程（工程１）、（２）構築された酵母内発現プラスミドを酵母に導入す
ることにより、酵母内で(i) 上記の分子種および酵母Ｎ
ＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素あるいは(ii)上記の分子種
と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を
発現させる酵母菌体を作製する工程（工程２）、（３）作製された酵母菌体または該菌体破砕物を検体で
ある化合物と反応する工程（工程３）、（４）反応後、反応液中に存在する代謝産物を栄養要素
要求性の微生物に作用させることによって、該栄養要素
に対して非要求性となった微生物の存在量を測定する工
程（工程４Ｂ）、（５）上記の測定により、（ａ）栄養要素に対して非要
求性となった微生物が、上記の酵母内発現プラスミドが
導入されていない酵母菌体を用いて上記（３）および
（４）を行う場合（コントロール）と同程度に存在する
場合、検体である化合物を変異原性無と評価し、また
は、（ｂ）栄養要素に対して非要求性となった微生物
が、上記の酵母内発現プラスミドが導入されていない酵
母菌体を用いて上記（３）および（４）を行う場合（コ
ントロール）と比較して実質的に多く存在する場合、検
体である化合物を変異原性有と評価する工程（工程５
Ｂ）、からなることを特徴とする評価方法（以下、変異
原性評価方法と記す。）、さらに(III) ヒト由来のチ
トクロムＰ４５０１Ａ２、ヒト由来のチトクロムＰ４
５０２Ｃ９、ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｅ１
ならびにヒト由来のチトクロムＰ４５０３Ａ４からな
る分子種群に含まれる全ての分子種について、（１）(a) 酵母内で発現させるためのプロモーターなら
びに(b)(i)上記の分子種をコードする塩基配列を有する
遺伝子および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素をコー
ドする塩基配列を有する遺伝子あるいは(ii)上記の分子
種と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素
をコードする塩基配列を有する遺伝子を含む酵母内発現
プラスミドを構築する工程（工程１）、（２）構築された酵母内発現プラスミドを酵母に導入す
ることにより、酵母内で(i) 上記の分子種および酵母Ｎ
ＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素あるいは(ii)上記の分子種
と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を
発現させる酵母菌体を作製する工程（工程２）、（３）作製された酵母菌体または該菌体破砕物を検体で
ある化合物と反応する工程（工程３）、（４）反応後、反応液中に存在する代謝産物を分析する
ことによって、上記の分子種群に含まれる１種類の(i)
ヒト由来のチトクロムＰ４５０分子種あるいは(ii)ヒト
由来のチトクロムＰ４５０分子種と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ
４５０還元酵素の人工融合酵素の場合のみ、特異的に存
在する代謝産物の有無を判定する工程（工程４Ｃ）、（５）上記の判定により、（ａ）１種類の(i) ヒト由来
のチトクロムＰ４５０分子種あるいは(ii)ヒト由来のチ
トクロムＰ４５０分子種と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還
元酵素の人工融合酵素の場合のみに特異的に存在する代
謝産物が存在する場合、該検体化合物を該チトクロムＰ
４５０分子種の代謝プローブとして有効であると評価
し、または（ｂ）特異的に存在する代謝産物が非存在の
場合、該検体化合物を該チトクロムＰ４５０分子種の代
謝プローブとして有効でないと評価する工程（工程５
Ｃ）、からなることを特徴とする評価方法（以下、代謝
プローブ評価方法と記す。）を提供するものである。

【０００５】ヒトにおける代謝系をin vitroで再現する
安全性評価方法としては、従来ラット等の実験動物の肝
臓ホモジネートを用いる試験等が使用されている。一
方、近年ヒト由来のチトクロムＰ４５０分子種をコード
する塩基配列を有する遺伝子をヒト培養細胞に導入した
システムもすでに構築されているが、ヒト培養細胞は増
殖能力が低く、かつ高密度培養が困難であることから大
量のチトクロムＰ４５０分子種を得ことができず、代謝
産物の分析には適さない。また、酵母等の微生物と比較
すると、培養コストも高く、かつ高度な培養技術を必要
とする。上記のような欠点を解消するために、本発明で
は、ある種の(i) ヒト由来のチトクロムＰ４５０分子種
および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素あるいは(ii)
ヒト由来のチトクロムＰ４５０の分子種と酵母ＮＡＤＰ
Ｈ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を発現させる酵母
菌体を用いている。そのために、酵母内で発現させるた
めのプロモーター、ある種の(i) ヒト由来のチトクロム
Ｐ４５０分子種をコードする塩基配列を有する遺伝子お
よび酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素をコードする塩
基配列を有する遺伝子あるいは(ii)ヒト由来のチトクロ
ムＰ４５０の分子種と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵
素の人工融合酵素をコードする塩基配列を有する遺伝子
を含む酵母内発現プラスミドを構築する必要がある。以
下に説明する。

【０００６】本発明では、ヒト由来のチトクロムＰ４５
０分子種としてＰ４５０１Ａ２、Ｐ４５０２Ｃ９、
２Ｅ１ならびにＰ４５０３Ａ４からなる分子種群に含
まれる全ての分子種を組み合せて用いることが必須であ
る。これは、ヒト肝臓における各種チトクロムＰ４５０
分子種の種類・存在量は人種差、個人差があるが、しか
しながらいずれのヒトの場合においても、上記の分子種
群に含まれる全てのチトクロムＰ４５０分子種を必須的
に組み合せて用いることにより、ヒト肝臓における代謝
系をin vitroで効率的に再現することが可能なためであ
る。なお、本発明システムでは、上記の工程１から工程
３、ならびに工程４Ａ、４Ｂおよび４Ｃの各工程を上記
のチトクロムＰ４５０分子種ごとに独立した状態（チト
クロムＰ４５０分子種をおのおの別々の系で並列的に存
在させる状態を意味する。）または複数のチトクロムＰ
４５０分子種を混合した状態（複数のチトクロムＰ４５
０分子種を混合し、１つの系で同時に存在させる状態を
意味する。）あるいは両者の中間的な状態（一部は独立
した状態で、一部は混合した状態で存在させる状態を意
味する。）で行ない、次に工程５Ａ、５Ｂおよび５Ｃに
おいて、上記の全ての分子種について検討、評価しても
かまわない。さらに必要に応じて、上記の分子種群に含
まれるチトクロムＰ４５０分子種の他に、たとえば、Ｐ
４５０１Ａ１、Ｐ４５０２Ａ６、Ｐ４５０２Ｂ
６、Ｐ４５０２Ｃ８、Ｐ４５０２Ｃ１８、Ｐ４５０
２Ｃ１９またはＰ４５０２Ｄ６等の他のチトクロム
Ｐ４５０分子種を補助的に組み合わせることによって、
ヒト肝臓における代謝系をin vitroでより精度よく再現
することができる。本発明において用いられるヒト由来
のチトクロムＰ４５０分子種の必須的な組み合わせ（Ｐ
４５０１Ａ２、Ｐ４５０２Ｃ９、２Ｅ１ならびにＰ
４５０３Ａ４からなる分子種群）でヒト肝臓における
全チトクロムＰ４５０の約85％程度を網羅することがで
き、さらに、たとえば該分子種群にＰ４５０２Ａ６お
よび／またはＰ４５０２Ｃ１９および／またはＰ４５
０２Ｄ６を補助的に加えることにより約90％以上を網
羅することができると推測される。また、具体的には、
たとえばＰ４５０３Ａ４（約３５±１０％）、Ｐ４５
０Ｐ４５０２Ｃ９（約２５±１０％）、Ｐ４５０１
Ａ２（約２３±１０％）、Ｐ４５０２Ｅ１（約１７±
１０％）等の存在量の割合の組み合せをあげることがで
きる。なお、上記の例にかかることなく適宜増加させた
り、減少させることができることは言うまでもなく、こ
の割合を変えることにより、ヒトにおける人種差、個人
差にもより正確に対応することもできる。

【０００７】つぎに酵母内発現プラスミドを構築する工
程（工程１）に関して説明する。上記のヒト由来のチト
クロムＰ４５０分子種をコードする塩基配列は配列番号
１から配列番号７で示される塩基配列中に開示されてい
る。なお、これらのヒト由来のチトクロムＰ４５０分子
種をコードする塩基配列を有する遺伝子は、たとえば、
(1)(a)該遺伝子のmRNAを含むmRNA画分を調製し、逆転写
酵素を用いてcDNAを作製後、該cDNAをファージベクター
及びプラスミドベクターに挿入して得たcDNAライブラリ
ー、または(b) 市販のヒト肝由来のcDNAライブラリ
ー、から目的とする遺伝子を、(i) その遺伝子と相同性
を有するＤＮＡ断片、あるいは(ii)その遺伝子により産
生されるタンパク質を認識する抗体、を用いるような通
常の方法に従いクローニングする方法、または(2) 上記
(1) 記載のcDNAライブラリーからPCR 法を用いてクロー
ニングする方法、等の通常の方法により調製することが
できる。

【０００８】一方、酵母NADPH-チトクロムP450還元酵素
をコードする塩基配列を有する遺伝子は、たとえば、
(1) (a) 該遺伝子のmRNAを含むmRNA画分を調製し、逆転
写酵素を用いてcDNAを作製後、該cDNAをファージベクタ
ー及びプラスミドベクターに挿入して得たcDNAライブラ
リー、または(b) 市販の酵母由来のcDNAライブラリ
ー、から目的とする遺伝子を、(i) その遺伝子と相同性
を有するＤＮＡ断片、あるいは(ii)その遺伝子により産
生されるタンパク質を認識する抗体、を用いるような通
常の方法に従いクローニングする方法、または(2) 上記
(1) 記載のcDNAライブラリーからPCR 法を用いてクロー
ニングする方法、等の通常の方法により調製することが
できる。具体的には、たとえば、特開昭62-19085号公報
に記載される方法等により単離することができる。

【０００９】本発明において用いられる酵母内で発現さ
せるためのプロモーターとしては、通常の酵母発現系に
おいて用いられるプロモーターであれば特に制限される
ものではないが、たとえば酵母アルコール脱水素酵素遺
伝子のプロモーター（以下、ADH プロモーターと記
す。）、グリセルアルデヒド−３リン酸脱水素酵素（以
下、GAPDH プロモーターと記す。）、フォスフォグリセ
リン酸キナーゼ（以下、PGK プロモーターと記す。）等
をあげることができる。なお、ADH プロモーターは、た
とえば酵母ADH1プロモーターおよび同ターミネーターを
保持する酵母発現ベクターpAAH5(Washington Research
Foundationから入手可能、Ammerer ら、Methods in Enz
ymology,101,p.192-201)から通常の遺伝子操作方法によ
り調製することができる。酵母ADH1プロモーターは、Wa
shington Research Foundationの米国特許第299,733(19
81/9/31)に含まれており、米国において、工業的、商業
的目的で使用する場合は権利者からの権利許諾を必要と
する。

【００１０】上記の酵母内で発現させるためのプロモー
ター、前記のヒト由来のチトクロムＰ４５０分子種をコ
ードする塩基配列を有する遺伝子および前記の酵母ＮＡ
ＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素をコードする塩基配列を有す
る遺伝子を含む酵母内発現プラスミドは通常の遺伝子組
み換え方法を用いて構築することができる。たとえば、
特開平2-21180 等に記載されるＡＤＨプロモーターとＡ
ＤＨターミネーターを保有する酵母発現ベクターｐＡＡ
Ｈ５Ｎから調製したＮｏｔＩ断片と特開平2-211880等に
記載される酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素をコード
する塩基配列を有する遺伝子を保有するプラスミドｐＡ
ＲＲＮのＮｏｔＩ部位に挿入し、得られたプラスミドｐ
ＡＨＲＲのＨｉｎｄ III部位にヒト由来のチトクロムＰ
４５０分子種をコードする塩基配列を有する遺伝子を挿
入することにより構築する方法等をあげることができ
る。また必要に応じてpAAH5NベクターのHind III部位を
別な制限酵素用の部位に交換したベクターを利用して構
築する方法もあげられる。

【００１１】さらに本発明では、前記のヒト由来のチト
クロムＰ４５０分子種をコードする塩基配列を有する遺
伝子および前記の酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素を
コードする塩基配列を有する遺伝子の他に、ヒト由来の
チトクロムＰ４５０分子種と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０
還元酵素の人工融合酵素（ヒト由来のチトクロムＰ４５
０分子種の有する１原子酸素添加活性および酵母ＮＡＤ
ＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の有するＮＡＤＰＨからの還元
力供給能を同一分子内に有する酵素）をコードする塩基
配列を有する遺伝子を用いることもできる。このような
遺伝子は、ヒト由来のチトクロムＰ４５０分子種をコー
ドする塩基配列を有する遺伝子と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４
５０還元酵素をコードする塩基配列を有する遺伝子を通
常の遺伝子操作方法により接続し、単一の遺伝子とする
ことにより構築することができる。そして構築された遺
伝子を特開平2-21180 等に記載されるＡＤＨプロモータ
ーとＡＤＨターミネーターを保有する酵母発現ベクター
ｐＡＡＨ５ＮのＨｉｎｄ III部位に挿入することにより
酵母内発現プラスミドを構築する方法をあげることがで
きる。また、複数種の分子種を同時に発現するような単
一の酵母内発現プラスミドを調製することもできる。

【００１２】つぎに酵母内で(i) ヒト由来のチトクロム
Ｐ４５０分子種および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵
素あるいは(ii)ヒト由来のチトクロムＰ４５０の分子種
と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を
発現させる酵母菌体を作製する工程（工程２）に関して
説明する。酵母内でヒト由来のチトクロムＰ４５０分子
種および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素あるいは(i
i)ヒト由来のチトクロムＰ４５０の分子種と酵母ＮＡＤ
ＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を発現させる酵
母菌体は、構築された酵母内発現プラスミドをたとえば
プロトプラスト法、アルカリ金属(LiCl)法等の通常の方
法によって酵母に導入することで得ることができる。本
発明システムにおいて用いられる酵母菌株としては、た
とえばサッカロミセス・セレビシェー（Saccharomyces
cerevisiae）等をあげることができる。好ましくはサッ
カロミセス・セレビシェーＡＨ２２株（ＡＴＣＣ３８６
２６）があげられる。また、複数種の分子種を同時に発
現するように複数種の酵母内発現プラスミドを単一の酵
母菌株に導入することもできる。

【００１３】このように作製させた酵母菌体を用いるこ
とによって、ヒト由来のチトクロムＰ４５０分子種内に
おける電子伝達効率を上昇させ、そしてヒト由来のチト
クロムＰ４５０あるいはヒト由来のチトクロムＰ４５０
の分子種と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融
合酵素の一原子酸素添加活性を著しく向上させることが
可能になる。

【００１４】つぎに作製された酵母菌体または該菌体破
砕物を検体である化合物と反応させる工程（工程３）に
関して説明する。酵母菌体としては通常、生菌体が使用
される。菌体破砕物としては、たとえばミクロソームを
含む菌体破砕液、ミクロソーム画分、またはミクロソー
ムならびに細胞質の両者を含む画分等をあげることがで
きる。これらの調製法は、たとえばＤＮＡ，Vol.４，N
o. ３，ｐ２０３−ｐ２１０（1985）等に記載される通
常の方法でよい。なお、上記のうち、菌体破砕物を検体
である化合物と反応させることが特に好ましい。菌体破
砕物のなかでも、一般的には、ミクロソーム画分を検体
である化合物と反応させることが好ましいが、たとえば
後述するような生物学的分析方法（変異原性または毒性
評価）においてはこの限りではなく、ミクロソームなら
びに細胞質の両者を含む画分の方が好ましい場合があ
る。反応は、酵母菌体または該菌体破砕物を含む培養
液、緩衝液等の溶液に検体である化合物を添加し、該混
合物をたとえば約１０℃〜約４０℃で、約0.１時間〜約
４８時間インキュベートすることにより行なうことがで
きる。なお、酵母菌体または該菌体破砕物の溶液中、存
在量および検体である化合物の添加量は、反応温度、反
応時間、検体である化合物の種類等の各種条件によって
異なるが、たとえば、酵母菌体または該菌体破砕物の溶
液中存在量としては溶液１mlあたり約１０¹⁰〜約１０¹⁵
程度のＰ４５０分子数（酵母菌体として溶液１mlあたり
約１０⁵〜約１０¹⁰程度の菌体数）、好ましくは溶液１m
lあたり約１０¹²〜約１０¹³のＰ４５０分子数（酵母菌
体として溶液あたり約１０⁷〜約１０⁸の菌体数）であ
り、検体である化合物の添加量としては、溶液１mlあた
り約0.01μmol 〜約１μmol 程度の範囲が望ましい。な
お、上記の範囲にかかることなく適宜増加させたり、減
少させることができることは言うまでもない。

【００１５】つぎに反応後、反応液中に存在する代謝産
物を分析することによって、検体である化合物の解毒代
謝の有無または発癌物質への代謝の有無を判定する工程
（工程４Ａ）および検体である化合物の安全性を評価す
る工程（工程５Ａ）に関して説明する。反応後、反応液
中に存在する代謝産物を分析する方法は、監修塩川二
郎ら機器分析のてびき(2) （増補改訂版）第１刷，化学
同人発行（1985年）、R. M.SILVERSTEIN ら，有機化合
物のスペクトルによる同定法第４版第３刷，東京化
学同人発行（1984年）等に記載される通常の分析方法を
用いることができる。そして上記の分析結果に基づい
て、検体である化合物の解毒代謝の有無または発癌物質
への代謝の有無を判定すればよい。

【００１６】また反応液中に存在する代謝産物を分析す
る方法として、たとえば下記のような生物学的分析方法
を利用することもできる（工程４Ｂ）。この場合、たと
えば「反応液中に存在する代謝産物を分析する」ため
に、「反応液中に存在する代謝産物を栄養要素要求性の
微生物に作用させる」ことによって、該栄養要素に対し
て非要求性となった微生物の存在量を測定し、該測定に
よって、（ａ）栄養要素に対して非要求性となった微生
物が、上記の酵母内発現プラスミドが導入されていない
酵母菌体を用いて上記（３）および（４）を行う場合
（コントロール）と同程度に存在する場合、検体である
化合物を変異原性無と評価し、または、（ｂ）栄養要素
に対して非要求性となった微生物が、上記の酵母内発現
プラスミドが導入されていない酵母菌体を用いて上記
（３）および（４）を行う場合（コントロール）と比較
して実質的に多く存在する場合、検体である化合物を変
異原性有と評価する（工程５Ｂ）ことにより検体である
化合物の変異原性を決定することができる。さらに具体
的には、たとえばヒスチジン要求性のサルモネラ菌株
〔Salmonella typhimurium (his ^-) 〕またはトリプト
ファン要求性の大腸菌株〔Escherichia coil (trp ^-)
〕に反応液中に存在する代謝産物を作用させ、該菌株
のアミノ酸に対して非要求性（His ⁺またはTrp ⁺) と
なった菌、すなわち復帰突然変異菌がコロニーを形成す
るか否（復帰突然変異誘発性の有無）または形成したコ
ロニーの数（復帰突然変異誘発性の強弱）を調べる生物
学的分析方法をあげることができる。なお、上記の生物
学的分析方法を用いる場合には、(a) 作製された酵母菌
体または該菌体破砕物を検体である化合物と反応させる
工程（工程３）と(b) 反応後、反応液中に存在する代謝
産物を分析することによって、解毒代謝または発癌物質
への代謝を判定する工程（工程４Ａ）を同時に進行させ
ることも可能である。アリールアミン系化合物の多くは
ヒト肝臓において代謝活性化を受けることにより、変異
原性を示すようになるため、上記の生物学的分析方法を
用いる本発明を利用することが有利である。たとえば、
チトクロムＰ４５０１Ａ２を２０ｐｍｏｌ存在させる
系の場合、約０．１μｇ程度の２−アミノアントラセン
の変異原性を検出することができる。また、上記の微生
物の代わりに哺乳動物由来の細胞を用いた生物学的分析
方法も可能である。たとえば、米国特許第４５３２２０
４号に記載されるヒトＢリンパ芽球細胞ＡＨＨ−１の変
異体であるＬ３細胞株から誘導されるＭＣＬ−５細胞株
（親株と比較して多くの化合物の細胞毒性に対してより
感受性が高い細胞株）に、反応液中に存在する代謝産物
を作用させ、該細胞株の個体数増加を調べる。代謝産物
を作用させた細胞株の個体数増加を代謝産物を作用させ
ていない細胞株の個体数増加と比較してその検体である
化合物の毒性を前記の微生物を用いる生物学的分析方法
の場合と同様に評価することもできる。

【００１７】また本発明を利用することにより、代謝プ
ローブをスクリーニングすることができる。代謝プロー
ブは、生体内において薬物代謝の中心的な役割を果たす
前記の分子種群に含まれるチトクロムＰ４５０の分子種
の存在量を調べるのに用いられる。すなわち、代謝プロ
ーブとしてある種のヒト由来のチトクロムＰ４５０分子
種の特異的な基質となる化合物をヒトに投与し、血中や
尿等の排泄物中の特異的な代謝産物を分析することによ
り、ヒト肝臓における該Ｐ４５０分子種の存在量を推定
することができる。したがって、前記の分子種群に含ま
れる１種類のヒト由来のチトクロムＰ４５０分子種ある
いはヒト由来のチトクロムＰ４５０の分子種と酵母ＮＡ
ＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素の場合のみに
特異的に存在する代謝産物を見い出すことができれば、
その検体である化合物は前記の分子種群に含まれるチト
クロムＰ４５０の分子種に関する代謝プローブとして利
用可能である。すなわち、反応後、反応液中に存在する
代謝産物を分析することによって、上記の分子種群に含
まれる１種類の(i) ヒト由来のチトクロムＰ４５０分子
種あるいは(ii)ヒト由来のチトクロムＰ４５０の分子種
と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素の
場合のみ、特異的に存在する代謝産物の有無を判定する
工程（工程４Ｃ）、上記の判定により、（ａ）１種類の
(i) ヒト由来のチトクロムＰ４５０分子種あるいは(ii)
ヒト由来のチトクロムＰ４５０の分子種と酵母ＮＡＤＰ
Ｈ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素の場合のみに特異
的に存在する代謝産物が存在する場合、該検体化合物を
該チトクロムＰ４５０分子種の代謝プローブとして有効
であると評価し、または（ｂ）特異的に存在する代謝産
物が非存在の場合、該検体化合物を該チトクロムＰ４５
０分子種の代謝プローブとして有効でないと評価する工
程（工程５Ｃ）により代謝プローブをスクリーニングす
ることもできる。

【００１８】以下、実施例についてさらに詳しく説明す
るが、本発明はこれらの実施例にはなんら限定されるも
のではない。

【００１９】実施例１（ヒト由来のチトクロムＰ４５
０分子種をコードする塩基配列を有する遺伝子の取得）市販のヒト肝臓由来のｃＤＮＡライブラリー（Clontech
社）から図１〜図４記載のヒト由来のチトクロムＰ４５
０遺伝子クローニング用プライマーを用いるＰＣＲ法お
よび図５記載のヒト由来のチトクロムＰ４５０遺伝子ク
ローニング用合成リンカー等を用いることによりヒト由
来のチトクロムＰ４５０分子種をコードするｃＤＮＡを
得た。得られたｃＤＮＡの塩基配列および検定アミノ酸
配列を配列表に記載した。なお、下記に示す配列番号と
ヒト由来のチトクロムＰ４５０分子種との関係は、１．本発明に必須的なヒト由来のチトクロムＰ４５０分
子種（１）配列番号１１Ａ２（２）配列番号２２Ｃ９（３）配列番号３２Ｅ１（４）配列番号４３Ａ４２．本発明に補助的なヒト由来のチトクロムＰ４５０分
子種（１）配列番号５、６、７１Ａ１（２）配列番号８、９２Ａ６（３）配列番号10 ２Ｂ６（２）配列番号11、12、13 ２Ｃ８（４）配列番号14 ２Ｃ１８（５）配列番号15 ２Ｃ１９（６）配列番号16、17、18、19 ２Ｄ６である。

【００２０】実施例２（酵母内発現プラスミドの構
築：ｐ１Ａ２、ｐ１Ａ２Ｒ）図６にヒト由来のチトクロムＰ４５０１Ａ２の酵母内
発現プラスミドの構築方法を示す。図１で示すプライマ
ーを用いて、ＰＣＲ法により、ヒト由来のチトクロムＰ
４５０１Ａ２遺伝子のタンパク質コーディング領域の
Ｎ末端約４０ｂｐを除く約1.５ｋｂを増幅した。得られ
た約1.５ｋｂ断片は、ＳａｃＩで切断し、ｐＵＣ１１８
ベクターにサブクローン化した。Ｎ末端約４０ｂｐは図
５で示す合成リンカーを用い、ｐＵＣ１１８ベクターの
Ｈｉｎｄ III、ＳａｃＩ部位にサブクローン化した。1.
５ｋｂ断片を持つベクターは、Ｈｉｎｄ IIIで処理後、
平滑化し、ＥｃｏＲＩリンカーを挿入した。これをＥｃ
ｏＲＩとＳａｃＩで切り出し、Ｎ末端４０ｂｐを含むベ
クターと連結した後、ＥｃｏＲＩで処理、平滑化し、Ｈ
ｉｎｄ IIIリンカーを挿入、さらにＨｉｎｄ IIIで切り
出し、ｐＡＡＨ５Ｎ、及びｐＡＨＲＲに挿入し、ヒト由
来のチトクロムＰ４５０１Ａ２の酵母内発現プラスミ
ドｐ１Ａ２、及びヒト由来のチトクロムＰ４５０１Ａ
２と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の同時酵母内発
現プラスミドｐ１Ａ２Ｒを構築した。

【００２１】実施例３（酵母内発現プラスミドの構
築：ｐ２Ｃ９、ｐ２Ｃ９Ｒ）図７にヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ９の酵母内
発現プラスミドの構築方法を示す。図１で示すプライマ
ーを用いて、ＰＣＲ法により、ヒト由来のチトクロムＰ
４５０２Ｃ９遺伝子のタンパク質コーディング領域を
約0.９ｋｂと約0.６ｋｂの２つの断片に分けて増幅し
た。得られた約0.９ｋｂ断片はＰｓｔＩで切断してｐＵ
ＣＢベクター（pUC19 が有するEcoRI 部位をHindIII
部位に改変し、形成されたHindIII とHindIII 部位の間
のクローニングサイトを下記のクローニングサイト（化
１）：

【化１】に交換することにより作製されたサブクローン用のプラ
スミド）にサブクローン化し、さらに約0.６ｋｂ断片を
ＸｂａＩ、ＰｓｔＩ部位に組み込んで、２つの断片を連
結させた。このプラスミドのＫｐｎＩ部位を平滑化し、
ＸｂａＩリンカーを挿入したものからコーディング領域
を含むＸｂａＩ断片を切り出し、ｐＵＣベクター中にＡ
ＤＨプロモーター、ターミネーター領域を持つｐＵＣＡ
Ｎベクター（市販されるpUC19 ベクターが有するEcoRI
部位とＨindIII部位をそれぞれNotI部位に改変し、形成
されたNotI部位とNotI部位の間にpAAH5Nから調製したNo
tI断片を組み込んで得たベクター）のＨｉｎｄ III部位
を平滑化、ＸｂａＩリンカーを導入したｐＵＣＡＮＸに
挿入した。これをＮｏｔＩで切り出し、同様にＮｏｔＩ
処理したｐＡＡＨ５Ｎ、及びｐＡＨＲＲに挿入し、ヒト
由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ９の酵母内発現プラス
ミドｐ２Ｃ９及び、ヒト由来のチトクロムＰ４５０２
Ｃ９と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の同時酵母内
発現プラスミドｐ２Ｃ９Ｒを構築した。

【００２２】実施例４（酵母内発現プラスミドの構
築：ｐ２Ｅ１、ｐ２Ｅ１Ｒ）図８にヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｅ１の酵母内
発現プラスミドの構築方法を示す。図１で示すプライマ
ーを用いて、ＰＣＲ法により、ヒト由来のチトクロムＰ
４５０２Ｅ１遺伝子のタンパク質コーディング領域を
約0.５ｋｂと約1.０ｋｂの２つの断片に分けて増幅し
た。得られた約0.５ｋｂ断片はＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ
で切断してｐＵＣ１１８ベクターにサブクローン化し、
さらに約1.０ｋｂの断片をＢａｍＨＩ、ＳｐｈＩ部位に
組み込んで２つの断片を連結させた。これをＥｃｏＲ
Ｉ、ＳｐｈＩで切断し、一旦ｐＵＣＢに挿入後、Ｈｉ
ｎｄ IIIで切り出し、ｐＡＡＨ５Ｎ、及びｐＡＨＲＲベ
クターに挿入し、ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｅ
１の酵母内発現プラスミドｐ２Ｅ１、及びヒト由来のチ
トクロムＰ４５０２Ｅ１と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０
還元酵素の同時酵母内発現プラスミドｐ２Ｅ１Ｒを構築
した。

【００２３】実施例５（酵母内発現プラスミドの構
築：ｐ３Ａ４、ｐ３Ａ４Ｒ）図９にヒト由来のチトクロムＰ４５０３Ａ４の酵母内
発現プラスミドの構築方法を示す。図２で示すプライマ
ーを用いて、ＰＣＲ法により、ヒト由来のチトクロムＰ
４５０３Ａ４遺伝子のタンパク質コーディング領域を
約0.６ｋｂと約0.９ｋｂの２つの断片に分けて増幅し
た。得られた約0.６ｋｂ断片はＳａｃＩで切断してｐＵ
Ｃ１１８ベクターにサブクローン化した。その後、Ｅｃ
ｏＲＩで切断、平滑化し、ＸｂａＩリンカーを導入した
ものに、ＸｂａＩ、ＳａｃＩで切断した0.９ｋｂ断片を
組み込み、２つの断片を連結させた。このプラスミドを
ＳｐｈＩで切断後、平滑化し、ＸｂａＩリンカーを導入
したものからＸｂａＩ断片を切り出し、ｐＵＣＡＮＸの
ＸｂａＩ部位に挿入した。これをＮｏｔＩで切り出し、
同様にＮｏｔＩ処理したｐＡＡＨ５Ｎ、及びｐＡＨＲＲ
に挿入し、ヒト由来のチトクロムＰ４５０３Ａ４の酵
母内発現プラスミドｐ３Ａ４、及びヒト由来のチトクロ
ムＰ４５０３Ａ４と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵
素の同時酵母内発現プラスミドｐ３Ａ４Ｒを構築した。

【００２４】実施例６（酵母内発現プラスミドの構
築：ｐ１Ａ１、ｐ１Ａ１Ｒ）図１０にヒト由来のチトクロムＰ４５０１Ａ１の酵母
内発現プラスミドの構築方法を示す。図２で示すプライ
マーを用いて、ＰＣＲ法により、ヒト由来のチトクロム
Ｐ４５０１Ａ１遺伝子のタンパク質コーディング領域
を、約1.０ｋｂと約0.５ｋｂの２つの断片に分けて増幅
した。得られた約1.０ｋｂの断片は、ＸｂａＩとＳａｃ
Ｉにより切断し、ｐＵＣＡベクター（pUC19 が有するEc
oRI 部位をHindIII 部位に改変し、形成されたHindIII
とHindIII 部位の間のクローニングサイトを下記のクロ
ーニングサイト（化２）：

【化２】に交換することにより作製されたサブクローン用のプラ
スミド）にサブクローンした。増幅した約0.５ｋｂ断片
は、一旦ｐＵＣ１９ベクターをＨｉｎｃIIで切断した
ものにサブクローン化し、ＳａｃＩで切断後、1.０ｋｂ
断片を持つベクターと連結した。こうして得られた１Ａ
１遺伝子のコーディング領域をＨｉｎｄ IIIで切り出し
た後、ＡＤＨプロモーターおよびターミネーター領域を
有する酵母発現用ベクターｐＡＡＨ５Ｎ、及びその上流
に酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素遺伝子を有するＰ
４５０と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素同時発現用
ベクターｐＡＨＲＲのＨｉｎｄ III部位に挿入し、ヒト
由来のチトクロムＰ４５０１Ａ１の酵母内発現プラスミ
ドｐ１Ａ１、及びヒト由来のチトクロムＰ４５０１Ａ１
と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の同時酵母内発現
プラスミドｐ１Ａ１Ｒを構築した。さらに、ごく一部の
塩基配列のみが異なる２種のヒト由来のチトクロムＰ４
５０１Ａ１遺伝子断片を上記と同様に得て、２種のヒ
ト由来のチトクロムＰ４５０１Ａ１の酵母内発現プラ
スミドｐ１Ａ１ Variant１、ｐ１Ａ１ Variant２、及び
２種のヒト由来のチトクロムＰ４５０１Ａ１と酵母Ｎ
ＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の同時酵母内発現プラスミ
ドｐ１Ａ１Ｒ Variant１、ｐ１Ａ１Ｒ Variant２を構築
した。

【００２５】実施例７（酵母内発現プラスミドの構
築：ｐ２Ａ６、ｐ２Ａ６Ｒ）図１１にヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ａ６の酵母
内発現プラスミドの構築方法を示す。図３で示すプライ
マー用いて、ＰＣＲ法により、ヒト由来のチトクロムＰ
４５０２Ａ６遺伝子のタンパク質コーディング領域
を、約0.６ｋｂと約0.９ｋｂの２つの断片に分けて増幅
した。その結果、ごく一部の塩基配列のみが異なる２種
のヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ａ６遺伝子断片が
得られた。得られた約0.６ｋｂの断片は、ＸｂａＩとＨ
ｉｎｃIIで切断してｐＵＣＡベクターにサブクローン
化し、さらに0.９ｋｂ断片をＨｉｎｃII、ＫｐｎＩ部位
に組み込んで２つの断片を連結させた。これをＨｉｎｄ
IIIで切り出し、ｐＡＡＨ５Ｎ及び、ｐＡＨＲＲに挿入
し、２種のヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ａ６の酵
母内発現プラスミドｐ２Ａ６、ｐ２Ａ６ Variant１及び
２種のヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ａ６と酵母Ｎ
ＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の同時酵母内発現プラスミ
ドｐ２Ａ６Ｒ、ｐ２Ａ６Ｒ Variant１を構築した。

【００２６】実施例８（酵母内発現プラスミドの構
築：ｐ２Ｂ６、ｐ２Ｂ６Ｒ）図１２にヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｂ６酵母内
発現プラスミドの構築方法を示す。図３で示すプライマ
ーを用いて、ＰＣＲ法により、ヒト由来のチトクロムＰ
４５０２Ｂ６遺伝子全タンパク質コーディング領域を
増幅した。得られた断片は、ＸｂａＩとＢａｍＨＩで切
断してｐＵＣＡにサブクローン化した。これをＨｉｎ
ｄ IIIで部分消化し、ｐＡＡＨ５Ｎ及び、ｐＡＨＲＲベ
クターに挿入し、ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｂ
６の酵母内発現プラスミドｐ２Ｂ６及び、ヒト由来のチ
トクロムＰ４５０２Ｂ６と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０
還元酵素の同時酵母内発現プラスミドｐ２Ｂ６Ｒを構築
した。

【００２７】実施例９（酵母内発現プラスミドの構
築：ｐ２Ｃ８、ｐ２Ｃ８Ｒ）図１３にヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ８の酵母
内発現プラスミドの構築方法を示す。図３で示すプライ
マーを用いて、ＰＣＲ法により、ヒト由来のチトクロム
Ｐ４５０２Ｃ８遺伝子全タンパク質コーディング領域
を増幅した。その結果、ごく一部の塩基配列のみが異な
る３種のヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ８遺伝子が
得られた。得られた断片は、ＸｂａＩで部分消化して、
一旦ｐＵＣＡにサブクローン化した。これをＨｉｎｄ
IIIで切り出し、ｐＡＡＨ５Ｎ及び、ｐＡＨＲＲベクタ
ーに挿入し、３種のヒト由来のチトクロムＰ４５０２
Ｃ８の酵母内発現プラスミドｐ２Ｃ８、ｐ２Ｃ８ Varia
nt１、ｐ２Ｃ８ Variant２、及び３種のヒト由来のチト
クロムＰ４５０２Ｃ８と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還
元酵素の同時酵母内発現プラスミドｐ２Ｃ８Ｒ、ｐ２Ｃ
８Ｒ Variant１、ｐ２Ｃ８Ｒ Variant２を構築した。

【００２８】実施例１０（酵母内発現プラスミドの構
築：ｐ２Ｃ１８、ｐ２Ｃ１８Ｒ）図１４にヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ１８の酵
母内発現プラスミドの構築方法を示す。図３で示すプラ
イマーを用いて、ＰＣＲ法により、ヒト由来のチトクロ
ムＰ４５０２Ｃ１８遺伝子のタンパク質コーディング
領域を約1.４ｋｂと約0.９ｋｂの２つの断片に分けて増
幅した。得られた約1.４ｋｂ断片はＰｓｔＩで切断して
ｐＵＣＡベクターにサブクローン化し、さらに約0.９
ｋｂ断片をＸｂａＩ、ＰｓｔＩ部位に組み込んで、２つ
の断片を連結させた。このプラスミドをＳｍａＩで切断
後、ＸｂａＩリンカーを導入したものからＸｂａＩ断片
を切り出し、ｐＵＣＡＮＸのＸｂａＩサイトに挿入し
た。これをＮｏｔＩで切り出し、同様にＮｏｔＩ処理し
たｐＡＡＨ５Ｎ、及びｐＡＨＲＲに挿入し、ヒト由来の
チトクロムＰ４５０２Ｃ１８の酵母内発現プラスミド
ｐ２Ｃ１８及び、ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ
１８と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の同時酵母内
発現プラスミドｐ２Ｃ１８Ｒを構築した。

【００２９】実施例１１（酵母内発現プラスミドの構
築：ｐ２Ｃ１９、ｐ２Ｃ１９Ｒ）図１５にヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ１９の酵
母内発現プラスミドの構築方法を示す。配列番号２０か
ら２６で示される塩基配列を有するプライマーNo.1、N
o.2、No.3およびNo.4、ならびにNo.5およびNo.6、なら
びにNo.5およびNo.7をそれぞれ用いて、ＰＣＲ法によ
り、ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ１９遺伝子の
タンパク質コーディング領域の一部を増幅した（断片
ａ，ｂ，ｃ）。他の領域については、配列番号２７から
４０で示される塩基配列を有するプライマーNo.8からN
o.21 までを用いて、ＰＣＲ法によってヒト由来のチト
クロムＰ４５０２Ｃ９遺伝子に変異を導入しながらヒ
ト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ１９遺伝子のタンパ
ク質コーディング領域の一部を増幅（断片ｅ，ｆ）し、
さらに残りの領域については、直接的にＤＮＡを合成す
ることによって配列番号４１および４２で示される塩基
配列を有するリンカーNo.1およびNo.2を得た（断片
ｄ）。このようにして、ヒト由来のチトクロムＰ４５０
２Ｃ１９遺伝子のタンパク質コーディング領域全体を
カバーする断片を調製した。なお、以下に配列番号とプ
ライマーNo．との関係を示す。配列番号２０：プライマーNo.1 配列番号２１：プライ
マーNo.2 配列番号２２：プライマーNo.3 配列番号２
３：プライマーNo.4 配列番号２４：プライマーNo.5
配列番号２５：プライマーNo.6 配列番号２６：プライ
マーNo.7 配列番号２７：プライマーNo.8 配列番号２
８：プライマーNo.9 配列番号２９：プライマーNo.10
配列番号３０：プライマーNo.11 配列番号３１：プ
ライマーNo.12 配列番号３２：プライマーNo.13 配
列番号３３：プライマーNo.14 配列番号３４：プライ
マーNo.15 配列番号３５：プライマーNo.16 配列番
号３６：プライマーNo.17 配列番号３７：プライマー
No.18 配列番号３８：プライマーNo.19 配列番号３
９：プライマーNo.20 配列番号４０：プライマーNo.2
1 配列番号４１：リンカーNo.1 配列番号４２：リン
カーNo.2 つぎに、ＸｈｏＩとＢａｍＨＩで処理された断片ａおよ
びＢａｍＨＩとＰｓｔＩで処理された断片ｂを同時にＢ
ｌｕｅＳｃｒｉｐｔ（＋）のＸｈｏＩ、ＰｓｔＩ部位
に挿入し、さらにＸｂａＩとＸｈｏＩで処理された断片
ｅを得られたプラスミドのＸｂａＩ、ＸｈｏＩ部位に挿
入することによって断片ａ，ｂ，ｅを含むプラスミドを
得た。さらに、ＰｓｔＩとＫｐｎＩで処理された断片ｃ
およびリンカーである断片ｄを同時にＢｌｕｅＳｃｒ
ｉｐｔ（＋）のＰｓｔＩ、ＥｃｏＲＩ部位に挿入後、再
びＰｓｔＩ／ＥｃｏＲＩで切り出すことによって得られ
た断片（断片ｃ，ｄ含む断片）およびＥｃｏＲＩで処理
された断片ｆを同時に前記のプラスミド（断片ａ，ｂ，
ｅを含むプラスミド）のＰｓｔＩ、ＨｉｎｃＩＩ部位に
挿入した。このようにしてヒト由来のチトクロムＰ４５
０２Ｃ１９遺伝子のタンパク質コーディング領域全体
を含むプラスミドを構築した。構築されたプラスミドを
ＨｉｎｄＩＩＩで切り出し、同様にＨｉｎｄＩＩＩ処理
したｐＡＡＨ５Ｎ、及びｐＡＨＲＲに挿入し、ヒト由来
のチトクロムＰ４５０２Ｃ１９の酵母内発現プラスミ
ドｐ２Ｃ１９及び、ヒト由来のチトクロムＰ４５０２
Ｃ１９と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の同時酵母
内発現プラスミドｐ２Ｃ１９Ｒを構築した。

【００３０】実施例１２（酵母内発現プラスミドの構
築：ｐ２Ｄ６、ｐ２Ｄ６Ｒ）図１６にヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｄ６の酵母
内発現プラスミドの構築方法を示す。図４で示すプライ
マーを用いて、ＰＣＲ法により、ヒト由来のチトクロム
Ｐ４５０２Ｄ６遺伝子のタンパク質コーディング領域
のＮ末端約２００ｂｐを除くを1.３ｋｂを約0.４ｋｂと
約0.９ｋｂの２つの断片に分けて増幅した。得られた約
0.９ｋｂ断片はＫｐｎＩで切断してｐＵＣＡにサブク
ローン化した。Ｎ末端２００ｂｐは、図５で示した３本
の合成リンカーを用い、まずＮ末端側の２本のリンカー
をBlue Script （＋）ベクターのＸｂａＩ、ＰｓｔＩ部
位に組み込み、その後もう一本のリンカーをそのＳｍａ
Ｉ、ＰｓｔＩ部位に組み込んだ。さらにこのプラスミド
のＰｓｔＩ、ＨｉｎｃII部位にＰＣＲ法で得られた約0.
４ｋｂ断片を組み込み、その後ＮｓｐＶ、ＸｂａＩで切
断し、0.９ｋｂ断片を含むプラスミドに挿入してコーデ
ィング領域を連結させた。これをＨｉｎｄ IIIで切り出
し、ｐＡＡＨ５Ｎ、及びｐＡＨＲＲベクターに挿入し、
ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｄ６の酵母内発現プ
ラスミドｐ２Ｄ６、及びヒト由来のチトクロムＰ４５０
２Ｄ６と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の同時酵
母内発現プラスミドｐ２Ｄ６Ｒを構築した。さらに、ご
く一部の塩基配列のみが異なる３種のヒト由来のチトク
ロムＰ４５０２Ｄ６遺伝子断片を上記と同様に得て、
３種のヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｄ６の酵母内
発現プラスミドｐ２Ｄ６ Variant１、ｐ２Ｄ６ Variant
２、ｐ２Ｄ６ Variant３、及び２種のヒト由来のチトク
ロムＰ４５０２Ｄ６と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元
酵素の同時酵母内発現プラスミドｐ２Ｄ６Ｒ Variant
１、ｐ２Ｄ６Ｒ Variant２、ｐ２Ｄ６Ｒ Variant３を構
築した。

【００３１】実施例１３（人工融合酵素遺伝子を含む
酵母内発現プラスミドの構築）図１７にしたがってプラスミドを構築した。プラスミド
p3A4を鋳型とし、図４に示したプライマーを用いてXbaI
-XhoI 断片を得た。また、プラスミドpBFCR1 (特願平4-
209226) から得た約2.1kb のXhoI-HindIII断片を市販の
ベクターBlue Script(+)のXhoI、HindIII 部位に挿入し
た後、制限酵素XhoIおよびXbaIで同時消化し、断片を得
た。これら両断片を同時に、ベクターpUCAN のXbaI部位
に挿入することにより得られたプラスミドを制限酵素No
tIにより消化して約5.６kbの断片を得た。この断片とベ
クターpAAH5Nから得た約10.5kbのNotI断片を連結するこ
とにより目的とする人工融合酵素遺伝子を含む酵母内発
現プラスミドpF3A4 を得た。該人工融合酵素は1156アミ
ノ酸残基から成り、その構造はＮ末端からヒト肝チトク
ロムP450 3A4をコードする全アミノ酸配列(503残基) 、
リンカーに由来する配列 (Ala-Arg-Ala)、酵母NADPH-チ
トクロムP450還元酵素Ｎ末端４２番目からＣ末端と続い
ている。

【００３２】実施例１４（形質転換酵母菌体の作製）ＹＰＤ培地（１％酵母エキス，２％ポリペプトン、２％
グルコース）1.０mlにサッカロミセス・セレビシェーＡ
Ｈ２２株を植菌し、３０℃で１８時間振盪した後、遠心
分離（5000Xg、10分間) により集菌した。得られた菌体
を1.０mlの0.２ＭＬｉＣ１溶液に懸濁した後、再度遠
心分離（5000Xg、10分間) し、得られたペレットに２０
μｌの１ＭＬｉＣ１溶液、３０μｌの７０％ポリエチ
レングリコール4000溶液、約1.０μｇの実施例２から１
３によって構築された各種の(i)ヒト由来のチトクロム
Ｐ４５０と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の同時酵
母内発現プラスミドあるいは(ii)ヒト由来のチトクロム
Ｐ４５０と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融
合酵素の酵母内発現プラスミドをおのおの単独で含む１
０μｌの溶液を添加した。これを十分に混合した後、３
０℃で１時間インキュベートし、さらに１４０μｌの滅
菌水を加えて攪拌した。この溶液をＳＤ合成培地プレー
ト（2.０％グルコース、0.67％窒素源アミノ酸不含（Ni
trogen basew/o amino acids, Difco製）、２０μｇ／m
lヒスチジン2.０％寒天）上に蒔き、３０℃で３日間イ
ンキュベートし、上記の酵母内発現プラスミドを保有す
る形質転換酵母菌体を選抜した。このようにして、酵母
内で(i) ヒト由来のチトクロムＰ４５０分子種および酵
母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素あるいは(ii)ヒト由来
のチトクロムＰ４５０と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元
酵素の人工融合酵素を発現させる各種の酵母菌体を作製
した。

【００３３】実施例１５（酵母内で発現したヒト由来
のチトクロムＰ４５０の定量）実施例１４によって作製された(i) ヒト由来のチトクロ
ムＰ４５０分子種および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元
酵素あるいは(ii)ヒト由来のチトクロムＰ４５０と酵母
ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を発現さ
せる各種の酵母菌体のおのおのの培養液（ＳＤ合成培
地、菌体濃度約1.５×１０⁷菌体／ml）２００mlを集菌
し、該菌体を１０mlの１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液
（ｐＨ7.０）を懸濁した後、遠心分離（5000×ｇ、１０
分間）した。得られたペレットを新たに2.０mlの１００
ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ7.0 ）に懸濁し、２本
のキュベットに1.０mlずつ分注した。サンプル側のキュ
ベットに一酸化炭素を吹き込んだ後、両キュベット内に
ジチオナイト５−１０mgを添加し、攪拌したのち４００
−５００ｎｍの差スペクトルを測定し、酵母内に存在す
る(i) ヒト由来のチトクロムＰ４５０あるいは(ii)ヒト
由来のチトクロムＰ４５０と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０
還元酵素の人工融合酵素濃度を算出した。各種の形質転
換酵母菌体における各種の(i) ヒト由来のチトクロムＰ
４５０あるいは(ii)ヒト由来のチトクロムＰ４５０と酵
母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の発現量はすべて約１
０⁵−約１０⁶分子／菌体のレベルであった。

【００３４】実施例１６（酵母Ｓ−９Ｍｉｘ画分、
細胞質画分およびミクロソーム画分の調製）実施例１４によって作製された(i) ヒト由来のチトクロ
ムＰ４５０分子種および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元
酵素あるいは(ii)ヒト由来のチトクロムＰ４５０と酵母
ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を発現さ
せる各種の酵母菌体のおのおのの培養液（ＳＤ合成培
地、菌体濃度約1.０×１０⁸菌体／ml）3.８ｌを集菌
し、得られた菌体を４００mlの緩衝液Ａ（１０ｍＭＴ
ｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ7.５），２Ｍソルビトール，0.
１ｍＭＤＴＴ，0.２ｍＭＥＤＴＡ）に懸濁し、１６
０mg ザイモリエイス 100,000（zymolyase100T)を加
え、３０℃で６０分間インキュベートした。遠心分離
（5000×ｇ、１０分間）して得られたスフェロプラスト
を１００mlの緩衝液Ａに懸濁した後、遠心分離（5000×
ｇ、１０分間）した。同じ遠心分離操作をもう一度繰り
返してスフェロプラストの洗浄を行った後、スフェロプ
ラストを２００mlの緩衝液（１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣ
ｌ（ｐＨ7.５），0.65Ｍソルビトール，0.１ｍＭＤ
ＴＴ）に懸濁し超音波破砕（５０Ｗ，５分間）した。該
破砕物を遠心分離（9000×ｇ、２０分間）して、上清を
回収することにより酵母Ｓ−９Ｍｉｘ画分を得た。ま
た、これをさらに遠心分離（125000×ｇ、７０分間）し
て沈澱を集め、0.１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ7.
４）１０mlに再懸濁することによりミクロソーム画分を
得た。一方、上清を回収することにより細胞質画分を得
た。

【００３５】実施例１７（ＧＡＰＤＨプロモーターを
用いる酵母内発現プラスミドの構築および酵母内発現）図１８に、ＧＡＰＤＨプロモーターを用いる酵母内発現
プラスミドの構築法示す。ｐＵＣ１９をＥｃｏＲＩで切
断し平滑化した後、ＮｏｔＩリンカーを挿入して得たプ
ラスミドｐＵＮのＨｉｎｄＩＩＩ部位にｐＡＲＲＮから
得たＨｉｎｄＩＩＩ断片（約３．０Ｋｂ）を挿入し、ｐ
ＵＲを得た。一方、プラスミドｐＡＡＨ５のＸｈｏＩ部
位を平滑化し、ＸｂａＩリンカーを挿入した後、制限酵
素ＸｂａＩおよびＳａｌＩにより切断し、得られた断片
（約２．２Ｋｂ）をｐＵＣ１９のＸｂａＩ、ＳａＩＩ部
位に挿入した。得られたプラスミドをＸｂａＩおよびＰ
ｓｔＩにより切断して得た断片（約２．２Ｋｂ）、サッ
カロミセス・セレビシェーＡＨ２２株から調製した２μ
ｍＤＮＡから切り出したＸｂａＩ−ＰｓｔＩ断片（約
１．３Ｋｂ）、およびｐＵＲをＰｓｔＩで切断して得た
断片、の３断片を連結することによりｐＵＲＬを得た。
さらに、ｐＵＲＬをＨｉｎｄＩＩＩで切断し平滑化した
後連結することによりＨｉｎｄＩＩＩ部位を消失させ
た。次に、ＧＡＰＤＨプロモーターおよびターミネータ
ーを含むＮｏｔＩ断片（約１．６Ｋｂ）〔Agric. Biol.
Chem.,51,1641-1647(1987), J. Biol. Chem.,267,1649
7-16502(1992) に記載される方法により得る〕をｐＵＲ
ＬのＮｏｔＩ部位に挿入することによりｐＵＲＬＧを得
た。ｐＵＲＬＧのＨｉｎｄＩＩＩ部位に、実施例９に準
じて得られたヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｄ６
ｃＤＮＡを挿入することにより、ヒト由来のチトクロム
Ｐ４５０２Ｄ６と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素
の同時酵母内発現プラスミドｐＧ２Ｄ６Ｒを得た。この
プラスミドをサッカロミセス・セレビシェーＡＨ２２株
に実施例１４に準じて導入したところ、ヒト由来のチト
クロムＰ４５０２Ｄ６の産生が認められた。

【００３６】つぎに、ヒト肝臓における代謝系をin vit
roで効率的に再現するためにはヒト由来のチトクロムＰ
４５０分子種としてＰ４５０１Ａ２、Ｐ４５０２Ｃ
９、Ｐ４５０２Ｅ１ならびにＰ４５０３Ａ４からな
る分子種群に含まれる全ての分子種を組み合せて用いる
ことが必須であること、また上記の分子種群にＰ４５０
２Ａ６および／またはＰ４５０２Ｃ１９および／ま
たはＰ４５０２Ｄ６を補助的に加えることがより好ま
しいこと、さらにＰ４５０１Ａ１、Ｐ４５０２Ａ６、
Ｐ４５０２Ｂ６、Ｐ４５０２Ｃ８、Ｐ４５０２Ｃ
１８、Ｐ４５０２Ｃ１９またはＰ４５０２Ｄ６等の
他のチトクロムＰ４５０分子種を補助的に組み合わせる
ことによって精度が向上することを示すために複数の試
験例により以下に説明する。まず実施例１４または１６
によって作製された酵母菌体または該菌体破砕物を各種
の化合物と反応させる試験を行った。

【００３７】試験例１（形質転換酵母生菌体を用いる
７−エトキシクマリンＯ−脱エチル化反応および代謝産
物の分析）実施例１４によって作製された(i) ヒト由来のチトクロ
ムＰ４５０分子種および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元
酵素あるいは(ii)ヒト由来のチトクロムＰ４５０と酵母
ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を発現さ
せる各種の酵母菌体のおのおのの培養液（ＳＤ合成培
地、菌体濃度約2.０×１０⁷菌体／ml）６mlに７−エト
キシクマリンを終濃度0.５ｍＭになるように添加し、３
０℃で２あるいは５時間インキュベートした後、遠心分
離（5000×ｇ、１０分間）し上清を得た。これに62.5μ
ｌの１５％ＴＣＡ、２mlのクロロホルムを加え、よく
攪拌した後、遠心分離（5000×ｇ、１０分間）した。分
離した層からクロロホルム層を回収し、これに0.１Ｍ
ＮａＣｌを含む0.01ＮＮａＯＨを４ml添加し、よく攪
拌した後、再び遠心分離（5000×ｇ、１０分間）した。
上清を回収した後、該上清画分について蛍光（ｅｘ．３
６６ｎｍ，ｅｍ．４５２ｎｍ）を測定し、生成した７−
ヒドロキシクマリンを定量した。その結果、１１種のヒ
ト由来のチトクロムＰ４５０分子種を発現させる各種の
酵母菌体すべてにおいて７−エトキシクマリンＯ−脱エ
チル化活性がみられた。各分子種における活性の程度
は、Ｐ４５０１Ａ１、Ｐ４５０２Ｂ６では強いもの
であり、Ｐ４５０１Ａ２、Ｐ４５０２Ｅ１、Ｐ４５
０２Ａ６、Ｐ４５０２Ｄ６では充分なものであっ
た。またＰ４５０２Ｃ８、Ｐ４５０２Ｃ９、Ｐ４５
０３Ａ４、Ｐ４５０２Ｃ１８、Ｐ４５０２Ｃ１９
では弱いものであった。

【００３８】試験例２（形質転換酵母生菌体を用いる
トルブタミド水酸化反応および代謝産物の分析）試験例２と同様に、(i) ヒト由来のチトクロムＰ４５０
分子種および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素あるい
は(ii)ヒト由来のチトクロムＰ４５０と酵母ＮＡＤＰＨ
−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を発現させる各種の
酵母菌体のおのおのの培養液にトルブタミドを終濃度1.
０ｍＭになるように添加し、３０℃で１５時間インキュ
ベートした後、遠心分離（5000×ｇ、１０分間）し上清
を得た。これに２mlのジクロロメタンを加え、よく攪拌
した後、再び遠心分離（5000×ｇ、１０分間）した。分
離した層からジクロロメタン層を回収し、減圧下で溶媒
を除去した。得られた残渣を１００μｌのアセトニトリ
ルに溶解し、該溶液を下記の条件下でＨＰＬＣにより分
析した。その結果、ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ
８、Ｐ４５０２Ｃ９Ｐ４５０、２Ｃ１８および
Ｐ４５０２Ｃ１９発現酵母菌体においてトルブタミド
水酸化物が検出された。各分子種における活性の程度
は、Ｐ４５０２Ｃ９では強いものであり、Ｐ４５０
２Ｃ１９では充分なものであった。またＰ４５０２
Ｃ８、Ｐ４５０２Ｃ１８では弱いものであった。一
方、それ以外の分子種を発現させる酵母菌体では検出さ
れなかった。ＨＰＬＣの条件カラム：μＢｏｎｄａｐａｋＣ１８（Waters社製）キャリヤー：１０−７０％アセトニトリル−dist. wa
ter（直線濃度勾配２０分）温度：５０℃ 検出：ＵＶ２３０ｎｍ試料量：５０μｌ

【００３９】試験例３（形質転換酵母生菌体を用いる
テストステロン水酸化反応および代謝産物の分析）試験例１と同様に、(i) ヒト由来のチトクロムＰ４５０
分子種および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素あるい
は(ii)ヒト由来のチトクロムＰ４５０と酵母ＮＡＤＰＨ
−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を発現させる各種の
酵母菌体のおのおのの培養液にテストステロンを終濃度
0.05ｍＭになるように添加し、３０℃で１５時間インキ
ュベートした後、遠心分離（5000×ｇ、１０分間）し、
上清を得た。これに２mlのジクロロメタンを加え、よく
攪拌した後、再び遠心分離（5000×ｇ、１０分間）し
た。分離した層からジクロロメタン層を回収し、減圧下
で溶媒を除去した。得られた残渣を１００μｌのアセト
ニトリルに溶解し、該溶液を下記の条件下でＨＰＬＣに
より分析した。その結果、ヒト由来のチトクロムＰ４５
０１Ａ１、Ｐ４５０２Ｃ８およびＰ４５０３Ａ
４発現酵母菌体においてテストステロン水酸化物が検出
された。各分子種における活性の程度は、Ｐ４５０３
Ａ４では強いものであり、Ｐ４５０１Ａ１、Ｐ４５０
２Ｃ８では弱いものであった。一方、それ以外の分子
種を発現させる酵母菌体では検出されなかった。ＨＰＬＣの条件カラム：μＢｏｎｄａｐａｋＣ１８（Waters社製）キャリヤー：２０−７０％アセトニトリル−dist. wa
ter（直線濃度勾配２５分）温度：５０℃ 検出：ＵＶ２５４ｎｍ試料量：５０μｌ

【００４０】試験例４（形質転換酵母生菌体およびミ
クロソーム画分を用いるクロロゾキサゾン水酸化反応お
よび代謝産物の分析）形質転換酵母生菌体を用いる場合には、試験例１と同様
に、(i) ヒト由来のチトクロムＰ４５０分子種および酵
母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素あるいは(ii)ヒト由来
のチトクロムＰ４５０と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元
酵素の人工融合酵素を発現させる各種の酵母菌体のおの
おのの培養液にクロロゾキサゾンを終濃度0.５ｍＭにな
るように添加し、３０℃で１５時間インキュベートした
後、遠心分離（5000×ｇ、１０分間）し、上清を得た。
これに２mlのジクロロメタンを加え、よく攪拌した後、
再び遠心分離（5000×ｇ、１０分間）した。分離した層
からジクロロメタン層を回収し、減圧下で溶媒を除去し
た。得られた残渣を１００μｌのアセトニトリルに溶解
し、該溶液を下記の条件下でＨＰＬＣにより分析した。
一方、ミクロソーム画分を用いる場合には、実施例１６
によって得られた(i)ヒト由来のチトクロムＰ４５０分
子種および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素あるいは
(ii)ヒト由来のチトクロムＰ４５０と酵母ＮＡＤＰＨ−
Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を発現させる各種の酵
母ミクロソーム画分にＮＡＤＰＨとクロロゾキサゾンを
それぞれ終濃度0.５ｍＭ、２５０μＭになるように添加
し、３７℃で１０分間インキュベートした。その後、ト
リクロロ酢酸を終濃度約１０％(v/v) になるように添加
した。これに２mlのジクロロメタンを加え、よく攪拌し
た後、再び遠心分離（15000 ×ｇ、５分間）した。分離
した層からジクロロメタン層を回収し、減圧下で溶媒を
除去した。得られた残渣を１００μｌのアセトニトリル
に溶解し、該溶液を下記の条件下でＨＰＬＣにより分析
した。その結果、１１種のヒト由来のチトクロムＰ４５
０分子種を発現させる各種の酵母菌体すべてにおいてク
ロロゾキサゾン水酸化物が検出された。各分子種におけ
る活性の程度は、Ｐ４５０２Ｅ１では強いものであ
り、Ｐ４５０１Ａ１、Ｐ４５０１Ａ２、Ｐ４５０
２Ａ６、Ｐ４５０２Ｄ６では充分なものであった。ま
たＰ４５０２Ｃ８、Ｐ４５０２Ｃ９、Ｐ４５０２
Ｂ６、Ｐ４５０２Ｃ１８、Ｐ４５０２Ｃ１９、Ｐ４
５０３Ａ４では弱いものであった。ＨＰＬＣの条件カラム：μＢｏｎｄａｐａｋＣ１８（Waters社製）キャリヤー：２０−７０％アセトニトリル−dist. wa
ter（直線濃度勾配２５分）温度：５０℃ 検出：ＵＶ２５４ｎｍ試料量：５０μｌ

【００４１】試験例５（酵母Ｓ−９Ｍｉｘ画分およ
びミクロソーム画分を用いる２−アミノアントラセン水
酸化反応および代謝産物の分析：エイムズ試験）エイムズ試験方法は、Mutat. Res.(1975) 31,347等に記
載される通常の方法に従った。なお、検体である化合物
としてアリ−ルアミン系化合物である２−アミノアント
ラセンを使用した。ただし、代謝活性化源として、(1)
各種のヒト由来のチトクロムＰ４５０発現酵母菌体から
得た酵母Ｓ−９Ｍｉｘ画分、(2) 該酵母Ｓ−９Ｍｉ
ｘ画分から調製されたミクロソーム画分、あるいは(3)
１サンプルあたり約1200pmolのヒト由来のチトクロムＰ
４５０分子種を含むラットＳ−９Ｍｉｘ〔比較例：肝臓
をホモジナイズした後、遠心分離（9000×ｇ、１０分
間）により得られた上清画分（キッコーマン製）〕をエ
イムズ試験に使用した。その結果、ヒト由来のチトクロ
ムＰ４５０２Ａ６発現酵母菌体（サッカロミセス・セ
レビシェーＡＨ２２／ｐ２Ａ６Ｒ）、ヒト由来のチトク
ロムＰ４５０２Ｃ８発現酵母菌体（サッカロミセス・
セレビシェーＡＨ２２／ｐ２Ｃ８Ｒ）およびヒト由来の
チトクロムＰ４５０３Ａ４発現酵母菌体（サッカロミ
セス・セレビシェーＡＨ２２／ｐ３Ａ４Ｒ）から得られ
た酵母Ｓ−９Ｍｉｘ画分および該酵母Ｓ−９Ｍｉｘ
画分から調製されたミクロソーム画分を用いた場合に
は、復帰突然変異コロニーが検出されなかったが、ヒト
由来のチトクロムＰ４５０１Ａ２発現酵母菌体（サッ
カロミセス・セレビシェーＡＨ２２／ｐ１Ａ２Ｒ）およ
びヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｅ１発現酵母菌体
（サッカロミセス・セレビシェーＡＨ２２／ｐ２Ｅ１
Ｒ）から得られた酵母Ｓ−９Ｍｉｘ画分および該酵母
Ｓ−９Ｍｉｘ画分から調製されたミクロソーム画分を
用いた場合には、供試量１μｇ／プレート（直径９０m
m）において１,000個以上の復帰突然変異コロニーが検
出された。検出された復帰突然変異コロニー数から判断
して、Ｐ４５０１Ａ２分子種は強い代謝活性を有してい
たが、Ｐ４５０２Ｅ１分子種は弱い代謝活性しか存在
しなかった。一方、ラットＳ−９Ｍｉｘとの比較にお
いて、ヒト由来のチトクロムＰ４５０１Ａ２発現酵母
菌体（サッカロミセス・セレビシェーＡＨ２２／ｐ１Ａ
２Ｒ）から得られた酵母Ｓ−９Ｍｉｘ画分および該酵
母Ｓ−９Ｍｉｘ画分から調製されたミクロソーム画分
を用いた場合には、ラットＳ−９Ｍｉｘを用いた場合
に比べて、供試したＰ４５０の量が少ない（1/500 およ
び1/30以下）にもかかわらず、２倍以上の復帰突然変異
コロニーが検出された。

【００４２】試験例６（形質転換酵母生菌体を用いる
アセトアニリド水酸化反応および代謝産物の分析）試験例１と同様に、(i) ヒト由来のチトクロムＰ４５０
分子種および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素あるい
は(ii)ヒト由来のチトクロムＰ４５０と酵母ＮＡＤＰＨ
−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を発現させる各種の
酵母菌体のおのおのの培養液にアセトアニリドを終濃度
５ｍＭになるように添加し、３０℃で１５時間インキュ
ベートした後、遠心分離(5000xg,１０分間）し、上清を
得た。得られた上清画分を下記の条件下でＨＰＬＣによ
り分析した。その結果、１１種のヒト由来のチトクロム
Ｐ４５０分子種を発現させる各種の酵母菌体すべてにお
いてアセトアニリド水酸化物が検出された。各分子種に
おける活性の程度は、Ｐ４５０１Ａ２、Ｐ４５０２
Ｄ６では強いものであり、Ｐ４５０１Ａ１、Ｐ４５０
２Ａ６、Ｐ４５０２Ｂ６、Ｐ４５０２Ｃ８、Ｐ４
５０２Ｃ９、Ｐ４５０２Ｃ１８、Ｐ４５０２Ｃ１
９、Ｐ４５０２Ｅ１では充分なものであった。またＰ
４５０３Ａ４では弱いものであった。ＨＰＬＣの条件カラム：μＢｏｎｄａｐａｋＣ１８（Waters社製）キャリヤー：メタノール：水：酢酸＝１５：８４：１温度：３０℃ 検出：ＵＶ２４５ｎｍ試料量：５０μｌ

【００４３】試験例７（形質転換酵母生菌体を用いる
クマリン７位水酸化反応および代謝産物の分析）実施例１４によって作製された(i) ヒト由来のチトクロ
ムＰ４５０分子種および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元
酵素あるいは(ii)ヒト由来のチトクロムＰ４５０と酵母
ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を発現さ
せる各種の酵母菌体のおのおのの培養液（ＳＤ合成培
地、菌体濃度約2.０×１０⁷菌体／ml）６mlにクマリン
を終濃度0.５ｍＭになるように添加し、３０℃で２ある
いは５時間インキュベートした後、遠心分離（5000×
ｇ、１０分間）し上清を得た。これに62.5μｌの１５％
ＴＣＡ、２mlのクロロホルムを加え、よく攪拌した
後、遠心分離（5000×ｇ、１０分間）した。分離した層
からクロロホルム層を回収し、これに0.１ＭＮａＣｌ
を含む0.01ＮＮａＯＨ、を４ml添加し、よく攪拌した
後、再び遠心分離（5000×ｇ、１０分間）した。上清を
回収した後、該上清画分について蛍光（ｅｘ．３６６ｎ
ｍ，ｅｍ．４５２ｎｍ）を測定し、生成した７−ヒドロ
キシクマリンを定量した。その結果、ヒトＰ４５０２
Ａ６発現酵母菌体のみにおいて特異的に活性が検出さ
れ、それ以外のヒトＰ４５０発現酵母菌体では検出され
なかった。

【００４４】試験例８（酵母ミクロソーム画分を用い
るデブリキソン水酸化反応および代謝産物の分析）実施例１６によって作製された(i) ヒト由来のチトクロ
ムＰ４５０分子種および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元
酵素あるいは(ii)ヒト由来のチトクロムＰ４５０と酵母
ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を発現さ
せる各種の酵母ミクロソーム画分にＮＡＤＰＨと^{1 4}Ｃ
で標識したデブリキソンをそれぞれ終濃度６ｍＭ、１０
０μＭになるように添加し、３７℃で３０分間インキュ
ベートした。その後、過塩素酸を終濃度１０％(v/v) に
なるように添加し、よく攪拌した後、遠心分離（15000
×ｇ、５分間）し上清を得た。得られた上清画分を下記
の条件下でＨＰＬＣにより分析した。その結果、ヒト由
来のチトクロムＰ４５０１Ａ１、Ｐ４５０２Ｄ６発現
酵母ミクロソーム画分においてデブリキソン水酸化物が
検出された。各分子種における活性の程度は、Ｐ４５０
２Ｄ６では強いものであり、Ｐ４５０１Ａ１では充
分なものであった。一方、それ以外のヒト由来のチトク
ロムＰ４５０発現酵母菌体では検出されなかった。ＨＰＬＣの条件カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ５Ｃ１８（ナカライテスク
社製）キャリアー：Ａ液：アセトニトリル、Ｂ液：20mM過塩素
酸ナトリウム(pH2.5）０〜１５分Ａ／Ｂ＝９／９１１５〜３０分Ａ／Ｂ＝９／９１から２５／７５に直
線勾配３０〜３２分Ａ＝１００％３２〜４２分Ａ／Ｂ＝９／９１カラム温度：室温検出器：ＲＩ（^{1 4}Ｃ）試料量：１００μｌ

【００４５】試験例９（酵母ミクロソーム画分を用い
るＳ−メフェイトニン水酸化反応および代謝産物の分
析）実施例１６によって作製された(i) ヒト由来のチトクロ
ムＰ４５０分子種および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元
酵素あるいは(ii)ヒト由来のチトクロムＰ４５０と酵母
ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を発現さ
せる各種の酵母ミクロソーム画分にＮＡＤＰＨと^{1 4}Ｃ
で標識したＳ−メフェイトニンをそれぞれ終濃度３ｍ
Ｍ、２５μＭになるように添加し、３７℃で３０分間イ
ンキュベートした。その後、該反応液と等量のメタノー
ルを添加し、よく攪拌した後、遠心分離（15000 ×ｇ、
５分間）し上清を得た。得られた上清画分を下記の条件
下でＨＰＬＣにより分析した。その結果、ヒト由来のチ
トクロムＰ４５０２Ｃ１９発現酵母菌体のみにおいて
特異的に活性が検出され、それ以外のヒト由来のチトク
ロムＰ４５０発現酵母菌体では検出されなかった。ＨＰＬＣの条件カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ５Ｃ１８（ナカライテスク
社製）キャリアー：Ａ液：メタノール／10mMリン酸カリウム緩
衝液(pH7.0) ＝４０／６０混合液Ｂ液：メタノール０〜１８分Ａ＝１００％１８〜２０分Ｂ＝１００％２０〜３５分Ａ＝１００％カラム温度：室温検出器：ＲＩ（^{1 4}Ｃ）試料量：１００μｌ

【００４６】上記の試験例１から試験例９の結果をまと
めて下記の表に示した。ヒト肝臓における代謝系をin v
itroで再現するためには、できるだけ多くのチトクロム
Ｐ４５０分子種を選択すればよいが、効率的に再現する
には、ヒト肝臓における代謝系への各分子種の寄与度を
判断すればよく、簡単には、代謝活性の高いものおよび
／またはできるだけ多くの化合物を代謝するものを適切
に選択すればよい。そこで、まずトルブタミドに対して
代謝活性の高いチトクロムＰ４５０分子種の選択を検討
した。代謝活性を有するチトクロムＰ４５０分子種は、
Ｐ４５０２Ｃ９、Ｐ４５０２Ｃ８、Ｐ４５０２Ｃ１
８、Ｐ４５０２Ｃ１９であった。このうち、特に代謝
活性の高いチトクロムＰ４５０分子種はＰ４５０２Ｃ
９のみであったので、この分子種を選択した。つぎにテ
ストステロンに対して代謝活性の高いチトクロムＰ４５
０分子種の選択を検討した。代謝活性を有するチトクロ
ムＰ４５０分子種は、Ｐ４５０２Ｃ８、Ｐ４５０３
Ａ４、Ｐ４５０１Ａ１であった。このうち、代謝活性
の高いチトクロムＰ４５０分子種はＰ４５０３Ａ４のみ
であったので、この分子種を選択した。さらに２−アミ
ノアントラセン、クロロゾキサゾンに対して代謝活性の
高いチトクロムＰ４５０分子種の選択を検討した。２−
アミノアントラセンに対して代謝活性を有するチトクロ
ムＰ４５０分子種は、Ｐ４５０１Ａ２、Ｐ４５０２
Ｅ１であった。このうち、代謝活性の最も高いチトクロ
ムＰ４５０分子種はＰ４５０１Ａ２であったので、こ
の分子種を選択した。クロロゾキサゾンに対しては全て
のＰ４５０分子種で代謝活性を有した。このうち、代謝
活性の最も高いチトクロムＰ４５０分子種はＰ４５０
２Ｅ１であったので、この分子種を選択した。つぎにア
セトアニリド、７−エトキシクマリンに対して代謝活性
の高いチトクロムＰ４５０分子種の選択を検討した。そ
の結果、上記で選択された４種類の分子種で対応できる
ことが分かったので他の分子種の選択はしないことにし
た。このようにして選択された４種類の分子種で９種の
供試化合物のうち、代表的な６種の供試化合物に対して
代謝反応を可能とした。そこで、残りの３種の供試化合
物（クマリン、デブリソキン、Ｓ−メフェイトニン）に
対して代謝活性の高いチトクロムＰ４５０分子種の選択
を検討した。いずれの供試化合物においても、代謝には
特異的な分子種が関与しており、ヒト肝臓における代謝
系をin vitroで効率的に再現するためには、必ずしも必
須的なものではなく、上記の選択された４種類の分子種
に補助的に組み合わせることによってヒト肝臓における
代謝系をin vitroでより精度よく再現することができる
ものであることがわかった。以上より、本発明では、ヒ
ト由来のチトクロムＰ４５０分子種としてＰ４５０１
Ａ２、Ｐ４５０２Ｃ９、Ｐ４５０２Ｅ１ならびにＰ
４５０３Ａ４からなる分子種群に含まれる全ての分子
種を組み合せて用いることが必須であることがわかる。

【００４７】

【表１】

【００４８】実施例１８（混合ミクロソーム画分を用
いたクロロゾキサゾンの代謝活性の測定）実施例１６で作製された各種のヒト由来のチトクロムＰ
４５０発現酵母のミクロソーム画分を混合し、これを用
いてクロロゾキサゾンの水酸化活性を測定した。各種の
ヒト由来のチトクロムＰ４５０分子種の混合割合は、 (1) Ｐ４５０３Ａ４（３５％） (2) Ｐ４５０３Ａ４（３３％）Ｐ４５０２Ｃ９（２５％）Ｐ４５０２Ｃ９（５.8％）Ｐ４５０２Ｃ８（５.8％）Ｐ４５０２Ｃ18（５.8％）Ｐ４５０２Ｃ19（５.8％）Ｐ４５０１Ａ２（２３％）Ｐ４５０１Ａ２（１９％）Ｐ４５０２Ｅ１（１７％）Ｐ４５０２Ｅ１（１５％）Ｐ４５０１Ａ１（２.4％）Ｐ４５０２Ａ６（３.0％）Ｐ４５０２Ｂ６（２.4％）Ｐ４５０２Ｄ６（２.4％）（以下、混合系Ａと記す。）（以下、混合系Ｂと記す。）を用いた。各混合系で混合された酵母ミクロソーム画分
に、基質として^{1 4}Ｃで標識したクロロゾキサゾンと補
酵素ＮＡＤＰＨをそれぞれ３８２μＭ、３ｍＭとなるよ
うに添加した。３７℃で３０分間インキュベートした
後、ジクロロメタンを１ｍＬを添加し、反応を停止し
た。攪拌後、遠心分離（１０，０００ｘｇ、５分間）に
よりジクロロメタン層を回収し、窒素気流で溶媒を除去
した。得られた残渣にアセトニトリル５４μＬ、水１４
６μＬを加えて溶解し、得られた溶液を下記の条件下で
ＨＰＬＣで分析した。その結果、混合系Ａ，ＢともPete
r らがヒト肝ミクロソーム画分を用いたクロロゾキサゾ
ンの代謝で報告している（Chem.Res.Toxicol.Vol.3,p56
6-573,1990) のと類似したクロロゾキサゾン代謝物のパ
ターンが得られた。ＨＰＬＣの条件カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ５Ｃ１８（ナカライテスク
社製）キャリアー：Ａ液：アセトニトリル／水＝２７／７３混
合液Ｂ液：アセトニトリル０〜１５分Ａ＝１００％１５〜１７分Ｂ＝１００％１７〜２５分Ａ＝１００％カラム温度：室温検出器：ＲＩ（^{1 4}Ｃ）試料量：１００μｌさらに、各混合系で混合された酵母ミクロソーム画分お
よびヒト肝ミクロソーム画分（Peter らの報告）でのヒ
ト由来のチトクロムＰ４５０の代謝回転速度を算出し
た。混合系Ａの場合、１．８〔product nmol/nmol P450
/min〕で、混合系Ｂの場合、１．６〔product nmol/nmo
l P450/min〕であった。一方、ヒト肝ミクロソーム画分
の場合、文献記載のＶmax とＫm ならびに基質濃度
〔Ｓ〕を用いて下記に示す方法により代謝回転速度Ｖを
算出した結果（表２に示す）、個体差による変動幅は存
在しているものの、下限が１．０〔product nmol/nmol
P450/min〕で、上限が５．９〔product nmol/nmol P450
/min〕であった。この範囲内に混合系Ｂでの代謝回転速
度Ｖはもちろん、本発明である混合系Ａでの代謝回転速
度Ｖも充分に含まれるものであった（オーダー的には全
く一致しているものであった。）したがって、選択された４種類の分子種のみでも充分に
ヒト肝臓における代謝系をin vitroでよく再現すること
ができるものであることがわかった。算出方法 Peter らの文献記載のＶmax とＫm ならびに本実施例で
用いられた基質濃度〔Ｓ〕を、ミカエリス−メンテン式

【数１】Ｖ＝（Ｖmax ＊〔Ｓ〕）／（Ｋm ＋〔Ｓ〕）に代入することによって、任意の基質濃度〔Ｓ〕におけ
るヒト由来のチトクロムＰ４５０の代謝回転速度Ｖを算
出する。

【表２】

【００４９】実施例１９（混合ミクロソーム画分を用
いたデブリソキンの代謝活性の測定）実施例１６で作製された各種のヒト由来のチトクロムＰ
４５０発現酵母のミクロソーム画分を混合し、これを用
いてデブリソキンの水酸化活性を測定した。各種のヒト
由来のチトクロムＰ４５０分子種の混合割合は、Ｐ４５
０３Ａ４（３３％）、Ｐ４５０２Ｃ９（５.8％）、
Ｐ４５０２Ｃ８（５.8％）、Ｐ４５０２Ｃ１８（５.8
％）、Ｐ４５０２Ｃ１９（５.8％）、Ｐ４５０１Ａ
２（１９％）、Ｐ４５０２Ｅ１（１５％）、Ｐ４５０
２Ｂ６（２.4％）、Ｐ４５０２Ｄ６（２.4％）を用い
た。混合された酵母ミクロソーム画分に、基質として
^{1 4}Ｃで標識したデブリソキンと補酵素ＮＡＤＰＨをそ
れぞれ１００μＭ、６ｍＭとなるように添加した。３７
℃で３０分間インキュベートした後、６０％過塩素酸５
０μＬ（終濃度として１２．５％(v/v) ）を添加し、反
応を停止した。攪拌後、遠心分離（１５，０００ｘｇ、
５分間）により上清を回収し、反応生成物をＨＰＬＣで
分析した（分析条件は試験例８に記載のものと同様）。
その結果、Kronbachらがヒト肝ミクロソームを用いたデ
ブリソキンの代謝で報告している（Methods in Enzymol
ogy,Vol.206,p509-517(1991)) のと類似したデブリソキ
ン代謝物のパターンが得られた。

【００５０】実施例２０（混合ミクロソーム画分を用
いたＳ−メフェイトニンの代謝活性の測定）実施例１６で作製された各種のヒト由来のチトクロムＰ
４５０発現酵母のミクロソーム画分を混合し、これを用
いてＳ−メフェイトニンの水酸化活性を測定した。各種
のヒト由来のチトクロムＰ４５０分子種の混合割合は、
実施例１８に記載された混合系Ｂで示されるものを用い
た。混合された酵母ミクロソーム画分に、基質として
^{1 4}Ｃで標識したＳ−メフェイトニンと補酵素ＮＡＤＰ
Ｈをそれぞれ２８μＭ、６ｍＭとなるように添加した。
３７℃で３０分間インキュベートした後、メタノールを
２５０μＬを添加し、反応を停止した。攪拌後、遠心分
離（１５，０００ｘｇ、５分間）により上清を回収し、
反応生成物をＨＰＬＣで分析した（分析条件は試験例９
に記載のものと同様）。その結果、Goldstein らがヒト
肝ミクロソームを用いたＳ−メフェイトニンの代謝で報
告している（Biochemistry Vol.33,p1743-1752,(1994))
のと類似したＳ−メフェイトニン代謝物のパターンが
得られた。

【００５１】

【発明の効果】本発明は、よりすぐれたヒトにおける代
謝系をin vitro系において再現する安全性評価方法であ
り、高精度で代謝・薬効・毒性を早期に予測・評価する
ことを可能にした。

【００５２】

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：１５５１配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列 1 ATG GCA TTG TCC CAG TCT GTT CCC TTC TCG GCC ACA GAG CTC CTC 45 1 Met Ala Leu Ser Gln Ser Val Pro Phe Ser Ala Thr Glu Leu Leu 15 46 CTG GCC TCT GCC ATC TTC TGC CTG GTA TTC TGG GTG CTC AAG GGT 90 16 Leu Ala Ser Ala Ile Phe Cys Leu Val Phe Trp Val Leu Lys Gly 30 91 TTG AGG CCT CGG GTC CCC AAA GGC CTG AAA AGT CCA CCA GAG CCA 135 31 Leu Arg Pro Arg Val Pro Lys Gly Leu Lys Ser Pro Pro Glu Pro 45 136 TGG GGC TGG CCC TTG CTC GGG CAT GTG CTG ACC CTG GGG AAG AAC 180 46 Trp Gly Trp Pro Leu Leu Gly His Val Leu Thr Leu Gly Lys Asn 60 181 CCG CAC CTG GCA CTG TCA AGG ATG AGC CAG CGC TAC GGG GAC GTC 225 61 Pro His Leu Ala Leu Ser Arg Met Ser Gln Arg Tyr Gly Asp Val 75 226 CTG CAG ATC CGC ATT GGC TCC ACG CCC GTG CTG GTG CTG AGC CGC 270 76 Leu Gln Ile Arg Ile Gly Ser Thr Pro Val Leu Val Leu Ser Arg 90 271 CTG GAC ACC ATC CGG CAG GCC CTG GTG CGG CAG GGC GAC GAT TTC 315 91 Leu Asp Thr Ile Arg Gln Ala Leu Val Arg Gln Gly Asp Asp Phe 105 316 AAG GGC CGG CCT GAC CTC TAC ACC TCC ACC CTC ATC ACT GAT GGC 360 106 Lys Gly Arg Pro Asp Leu Tyr Thr Ser Thr Leu Ile Thr Asp Gly 120 361 CAG AGC TTG ACC TTC AGC ACA GAC TCT GGA CCG GTG TGG GCT GCC 405 121 Gln Ser Leu Thr Phe Ser Thr Asp Ser Gly Pro Val Trp Ala Ala 135 406 CGC CGG CGC CTG GCC CAG AAT GCC CTC AAC ACC TTC TCC ATC GCC 450 136 Arg Arg Arg Leu Ala Gln Asn Ala Leu Asn Thr Phe Ser Ile Ala 150 451 TCT GAC CCA GCT TCC TCA TCC TCC TGC TAC CTG GAG GAG CAT GTG 495 151 Ser Asp Pro Ala Ser Ser Ser Ser Cys Tyr Leu Glu Glu His Val 165 496 AGC AAG GAG GCT AAG GCC CTG ATC AGC AGG TTG CAG GAG CTG ATG 540 166 Ser Lys Glu Ala Lys Ala Leu Ile Ser Arg Leu Gln Glu Leu Met 180 541 GCA GGG CCT GGG CAC TTC GAC CCT TAC AAT CAG GTG GTG GTG TCA 585 181 Ala Gly Pro Gly His Phe Asp Pro Tyr Asn Gln Val Val Val Ser 195 586 GTG GCC AAC GTC ATT GGT GCC ATG TGC TTC GGA CAG CAC TTC CCT 630 196 Val Ala Asn Val Ile Gly Ala Met Cys Phe Gly Gln His Phe Pro 210 631 GAG AGT AGC GAT GAG ATG CTC AGC CTC GTG AAG AAC ACT CAT GAG 675 211 Glu Ser Ser Asp Glu Met Leu Ser Leu Val Lys Asn Thr His Glu 225 676 TTC GTG GAG ACT GCC TCC TCC GGG AAC CCC CTG GAC TTC TTC CCC 720 226 Phe Val Glu Thr Ala Ser Ser Gly Asn Pro Leu Asp Phe Phe Pro 240 721 ATC CTT CGC TAC CTG CCT AAC CCT GCC CTG CAG AGG TTC AAG GCC 765 241 Ile Leu Arg Tyr Leu Pro Asn Pro Ala Leu Gln Arg Phe Lys Ala 255 766 TTC AAC CAG AGG TTC CTG TGG TTC CTG CAG AAA ACA GTC CAG GAG 810 256 Phe Asn Gln Arg Phe Leu Trp Phe Leu Gln Lys Thr Val Gln Glu 270 811 CAC TAT CAG GAC TTT GAC AAG AAC AGT GTC CGG GAC ATC ACG GGT 855 271 His Tyr Gln Asp Phe Asp Lys Asn Ser Val Arg Asp Ile Thr Gly 285 856 GCC CTG TTC AAG CAC AGC AAG AAG GGG CCT AGA GCC AGC GGC AAC 900 286 Ala Leu Phe Lys His Ser Lys Lys Gly Pro Arg Ala Ser Gly Asn 300 901 CTC ATC CCA CAG GAG AAG ATT GTC AAC CTT GTC AAT GAC ATC TTT 945 301 Leu Ile Pro Gln Glu Lys Ile Val Asn Leu Val Asn Asp Ile Phe 315 946 GGA GCA GGA TTT GAC ACA GTC ACC ACA GCC ATC TCC TGG AGC CTC 990 316 Gly Ala Gly Phe Asp Thr Val Thr Thr Ala Ile Ser Trp Ser Leu 330 991 ATG TAC CTT GTG ACC AAG CCT GAG ATA CAG AGG AAG ATC CAG AAG 1035 331 Met Tyr Leu Val Thr Lys Pro Glu Ile Gln Arg Lys Ile Gln Lys 345 1036 GAG CTG GAC ACT GTG ATT GGC AGG GAG CGG CGG CCC CGG CTC TCT 1080 346 Glu Leu Asp Thr Val Ile Gly Arg Glu Arg Arg Pro Arg Leu Ser 360 1081 GAC AGA CCC CAG CTG CCC TAC TTG GAG GCC TTC ATC CTG GAG ACC 1125 361 Asp Arg Pro Gln Leu Pro Tyr Leu Glu Ala Phe Ile Leu Glu Thr 375 1126 TTC CGA CAC TCC TCC TTC TTG CCC TTC ACC ATC CCC CAC AGC ACA 1170 376 Phe Arg His Ser Ser Phe Leu Pro Phe Thr Ile Pro His Ser Thr 390 1171 ACA AGG GAC ACA ACG CTG AAT GGC TTC TAC ATC CCC AAG AAA TGC 1215 391 Thr Arg Asp Thr Thr Leu Asn Gly Phe Tyr Ile Pro Lys Lys Cys 405 1216 TGT GTC TTC GTA AAC CAG TGG CAG GTC AAC CAT GAC CCA GAG CTG 1260 406 Cys Val Phe Val Asn Gln Trp Gln Val Asn His Asp Pro Glu Leu 420 1261 TGG GAG GAC CCC TCT GAG TTC CGG CCT GAG CGG TTC CTC ACC GCC 1305 421 Trp Glu Asp Pro Ser Glu Phe Arg Pro Glu Arg Phe Leu Thr Ala 435 1306 GAT GGC ACT GCC ATT AAC AAG CCC TTG AGT GAG AAG ATG ATG CTG 1350 436 Asp Gly Thr Ala Ile Asn Lys Pro Leu Ser Glu Lys Met Met Leu 450 1351 TTT GGC ATG GGT AAG CGC CGG TGT ATC GGG GAA GTC CTG GCC AAG 1395 451 Phe Gly Met Gly Lys Arg Arg Cys Ile Gly Glu Val Leu Ala Lys 465 1396 TGG GAG ATC TTC CTC TTC CTG GCC ATC CTG CTA CAG CAA CTG GAG 1440 466 Trp Glu Ile Phe Leu Phe Leu Ala Ile Leu Leu Gln Gln Leu Glu 480 1441 TTC AGC GTG CCG CCG GGC GTG AAA GTC GAC CTG ACC CCC ATC TAC 1485 481 Phe Ser Val Pro Pro Gly Val Lys Val Asp Leu Thr Pro Ile Tyr 495 1486 GGG CTG ACC ATG AAG CAC GCC CGC TGT GAA CAT GTC CAG GCG CGG 1530 496 Gly Leu Thr Met Lys His Ala Arg Cys Glu His Val Gln Ala Arg 510 1531 CTG CGC TTC TCC ATC AAC TGA 1551 511 Leu Arg Phe Ser Ile Asn *** 517

【００５３】配列番号：２配列の長さ：１４７３配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列 1 ATG GAT TCT ATT GTG TCC CTT GTG CTC TGT CTC TCA TGT TTG CTT 45 1 Met Asp Ser Ile Val Ser Leu Val Leu Cys Leu Ser Cys Leu Leu 15 46 CTC CTT TCA CTC TGG AGA CAG AGC TCT GGG AGA GGA AAA CTC CCT 90 16 Leu Leu Ser Leu Trp Arg Gln Ser Ser Gly Arg Gly Lys Leu Pro 30 91 CCT GGC CCC ACT CCT CTC CCA GTG ATT GGA AAT ATC CTA CAG ATA 135 31 Pro Gly Pro Thr Pro Leu Pro Val Ile Gly Asn Ile Leu Gln Ile 45 136 GGT ATT AAG GAC ATC AGC AAA TCC TTA ACC AAT CTC TCA AAG GTC 180 46 Gly Ile Lys Asp Ile Ser Lys Ser Leu Thr Asn Leu Ser Lys Val 60 181 TAT GGC CCT GTG TTC ACT CTG TAT TTT GGC CTG AAA CCC ATA GTG 225 61 Tyr Gly Pro Val Phe Thr Leu Tyr Phe Gly Leu Lys Pro Ile Val 75 226 GTG CTG CAT GGA TAT GAA GCA GTG AAG GAA GCC CTG ATT GAT CTT 270 76 Val Leu His Gly Tyr Glu Ala Val Lys Glu Ala Leu Ile Asp Leu 90 271 GGA GAG GAG TTT TCT GGA AGA GGC ATT TTC CCA CTG GCT GAA AGA 315 91 Gly Glu Glu Phe Ser Gly Arg Gly Ile Phe Pro Leu Ala Glu Arg 105 316 GCT AAC AGA GGA TTT GGA ATT GTT TTC AGC AAT GGA AAG AAA TGG 360 106 Ala Asn Arg Gly Phe Gly Ile Val Phe Ser Asn Gly Lys Lys Trp 120 361 AAG GAG ATC CGG CGT TTC TCC CTC ATG ACG CTG CGG AAT TTT GGG 405 121 Lys Glu Ile Arg Arg Phe Ser Leu Met Thr Leu Arg Asn Phe Gly 135 406 ATG GGG AAG AGG AGC ATT GAG GAC CGT GTT CAA GAG GAA GCC CGC 450 136 Met Gly Lys Arg Ser Ile Glu Asp Arg Val Gln Glu Glu Ala Arg 150 451 TGC CTT GTG GAG GAG TTG AGA AAA ACC AAG GCC TCA CCC TGT GAT 495 151 Cys Leu Val Glu Glu Leu Arg Lys Thr Lys Ala Ser Pro Cys Asp 165 496 CCC ACT TTC ATC CTG GGC TGT GCT CCC TGC AAT GTG ATC TGC TCC 540 166 Pro Thr Phe Ile Leu Gly Cys Ala Pro Cys Asn Val Ile Cys Ser 180 541 ATT ATT TTC CAT AAA CGT TTT GAT TAT AAA GAT CAG CAA TTT CTT 585 181 Ile Ile Phe His Lys Arg Phe Asp Tyr Lys Asp Gln Gln Phe Leu 195 586 AAC TTA ATG GAA AAG TTG AAT GAA AAC ATC AAG ATT TTG AGC AGC 630 196 Asn Leu Met Glu Lys Leu Asn Glu Asn Ile Lys Ile Leu Ser Ser 210 631 CCC TGG ATC CAG ATC TGC AAT AAT TTT TCT CCT ATC ATT GAT TAC 675 211 Pro Trp Ile Gln Ile Cys Asn Asn Phe Ser Pro Ile Ile Asp Tyr 225 676 TTC CCG GGA ACT CAC AAC AAA TTA CTT AAA AAC GTT GCT TTT ATG 720 226 Phe Pro Gly Thr His Asn Lys Leu Leu Lys Asn Val Ala Phe Met 240 721 AAA AGT TAT ATT TTG GAA AAA GTA AAA GAA CAC CAA GAA TCA ATG 765 241 Lys Ser Tyr Ile Leu Glu Lys Val Lys Glu His Gln Glu Ser Met 255 766 GAC ATG AAC AAC CCT CAG GAC TTT ATT GAT TGC TTC CTG ATG AAA 810 256 Asp Met Asn Asn Pro Gln Asp Phe Ile Asp Cys Phe Leu Met Lys 270 811 ATG GAG AAG GAA AAG CAC AAC CAA CCA TCT GAA TTT ACT ATT GAA 855 271 Met Glu Lys Glu Lys His Asn Gln Pro Ser Glu Phe Thr Ile Glu 285 856 AGC TTG GAA AAC ACT GCA GTT GAC TTG TTT GGA GCT GGG ACA GAG 900 286 Ser Leu Glu Asn Thr Ala Val Asp Leu Phe Gly Ala Gly Thr Glu 300 901 ACG ACA AGC ACA ACC CTG AGA TAT GCT CTC CTT CTC CTG CTG AAG 945 301 Thr Thr Ser Thr Thr Leu Arg Tyr Ala Leu Leu Leu Leu Leu Lys 315 946 CAC CCA GAG GTC ACA GCT AAA GTC CAG GAA GAG ATT GAA CGT GTG 990 316 His Pro Glu Val Thr Ala Lys Val Gln Glu Glu Ile Glu Arg Val 330 991 ATT GGC AGA AAC CGG AGC CCC TGC ATG CAA GAC AGG AGC CAC ATG 1035 331 Ile Gly Arg Asn Arg Ser Pro Cys Met Gln Asp Arg Ser His Met 345 1036 CCC TAC ACA GAT GCT GTG GTG CAC GAG GTC CAG AGA TAC ATT GAC 1080 346 Pro Tyr Thr Asp Ala Val Val His Glu Val Gln Arg Tyr Ile Asp 360 1081 CTT CTC CCC ACC AGC CTG CCC CAT GCA GTG ACC TGT GAC ATT AAA 1125 361 Leu Leu Pro Thr Ser Leu Pro His Ala Val Thr Cys Asp Ile Lys 375 1126 TTC AGA AAC TAT CTC ATT CCC AAG GGC ACA ACC ATA TTA ATT TCC 1170 376 Phe Arg Asn Tyr Leu Ile Pro Lys Gly Thr Thr Ile Leu Ile Ser 390 1171 CTG ACT TCT GTG CTA CAT GAC AAC AAA GAA TTT CCC AAC CCA GAG 1215 391 Leu Thr Ser Val Leu His Asp Asn Lys Glu Phe Pro Asn Pro Glu 405 1216 ATG TTT GAC CCT CAT CAC TTT CTG GAT GAA GGT GGC AAT TTT AAG 1260 406 Met Phe Asp Pro His His Phe Leu Asp Glu Gly Gly Asn Phe Lys 420 1261 AAA AGT AAA TAC TTC ATG CCT TTC TCA GCA GGA AAA CGG ATT TGT 1305 421 Lys Ser Lys Tyr Phe Met Pro Phe Ser Ala Gly Lys Arg Ile Cys 435 1306 GTG GGA GAA GCC CTG GCC GGC ATG GAG CTG TTT TTA TTC CTG ACC 1350 436 Val Gly Glu Ala Leu Ala Gly Met Glu Leu Phe Leu Phe Leu Thr 450 1351 TCC ATT TTA CAG AAC TTT AAC CTG AAA TCT CTG GTT GAC CCA AAG 1395 451 Ser Ile Leu Gln Asn Phe Asn Leu Lys Ser Leu Val Asp Pro Lys 465 1396 AAC CTT GAC ACC ACT CCA GTT GTC AAT GGA TTT GCC TCT GTG CCG 1440 466 Asn Leu Asp Thr Thr Pro Val Val Asn Gly Phe Ala Ser Val Pro 480 1441 CCC TTC TAC CAG CTG TGC TTC ATT CCT GTC TGA 1473 481 Pro Phe Tyr Gln Leu Cys Phe Ile Pro Val *** 491

【００５４】配列番号：３配列の長さ：１４８２配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列 1 ATG TCT GCC CTC GGA GTC ACC GTG GCC CTG CTG GTG TGG GCG GCC 45 1 Met Ser Ala Leu Gly Val Thr Val Ala Leu Leu Val Trp Ala Ala 15 46 TTC CTC CTG CTG GTG TCC ATG TGG AGG CAG GTG CAC AGC AGC TGG 90 16 Phe Leu Leu Leu Val Ser Met Trp Arg Gln Val His Ser Ser Trp 30 91 AAT CTG CCC CCA GGC CCT TTC CCG CTT CCC ATC ATC GGG AAC CTC 135 31 Asn Leu Pro Pro Gly Pro Phe Pro Leu Pro Ile Ile Gly Asn Leu 45 136 TTC CAG TTG GAA TTG AAG AAT ATT CCC AAG TCC TTC ACC CGG TTG 180 46 Phe Gln Leu Glu Leu Lys Asn Ile Pro Lys Ser Phe Thr Arg Leu 60 181 GCC CAG CGC TTC GGG CCG GTG TTC ACG CTG TAC GTG GGC TCG CAG 225 61 Ala Gln Arg Phe Gly Pro Val Phe Thr Leu Tyr Val Gly Ser Gln 75 226 CGC ATG GTG GTG ATG CAC GGC TAC AAG GCG GTG AAG GAA GCG CTG 270 76 Arg Met Val Val Met His Gly Tyr Lys Ala Val Lys Glu Ala Leu 90 271 CTG GAC TAC AAG GAC GAG TTC TCG GGC AGA GGC GAC CTC CCC GCG 315 91 Leu Asp Tyr Lys Asp Glu Phe Ser Gly Arg Gly Asp Leu Pro Ala 105 316 TTC CAT GCG CAC AGG GAC AGG GGA ATC ATT TTT AAT AAT GGA CCT 360 106 Phe His Ala His Arg Asp Arg Gly Ile Ile Phe Asn Asn Gly Pro 120 361 ACC TGG AAG GAC ATC CGG CGG TTT TCC CTG ACC ACC CTC CGG AAC 405 121 Thr Trp Lys Asp Ile Arg Arg Phe Ser Leu Thr Thr Leu Arg Asn 135 406 TAT GGG ATG GGG AAA CAG GGC AAT GAG AGC CGG ATC CAG AGG GAG 450 136 Tyr Gly Met Gly Lys Gln Gly Asn Glu Ser Arg Ile Gln Arg Glu 150 451 GCC CAC TTC CTG CTG GAA GCA CTC AGG AAG ACC CAA GGC CAG CCT 495 151 Ala His Phe Leu Leu Glu Ala Leu Arg Lys Thr Gln Gly Gln Pro 165 496 TTC GAC CCC ACC TTC CTC ATC GGG TGC GCG CCC TGC AAC GTC ATA 540 166 Phe Asp Pro Thr Phe Leu Ile Gly Cys Ala Pro Cys Asn Val Ile 180 541 GCC GAC ATC CTC TTC CGC AAG CAT TTT GAC TAC AAT GAT GAG AAG 585 181 Ala Asp Ile Leu Phe Arg Lys His Phe Asp Tyr Asn Asp Glu Lys 195 586 TTT CTA AGG CTG ATG TAT TTG TTT AAT GAG AAC TTC CAC CTA CTC 630 196 Phe Leu Arg Leu Met Tyr Leu Phe Asn Glu Asn Phe His Leu Leu 210 631 AGC ACT CCC TGG CTC CAG CTT TAC AAT AAT TTT CCC AGC TTT CTA 675 211 Ser Thr Pro Trp Leu Gln Leu Tyr Asn Asn Phe Pro Ser Phe Leu 225 676 CAC TAC TTG CCT GGA AGC CAC AGA AAA GTC ATA AAA AAT GTG GCT 720 226 His Tyr Leu Pro Gly Ser His Arg Lys Val Ile Lys Asn Val Ala 240 721 GAA GTA AAA GAG TAT GTG TCT GAA AGG GTG AAG GAG CAC CAT CAA 765 241 Glu Val Lys Glu Tyr Val Ser Glu Arg Val Lys Glu His His Gln 255 766 TCT CTG GAC CCC AAC TGT CCC CGG GAC CTC ACC GAC TGC CTG CTC 810 256 Ser Leu Asp Pro Asn Cys Pro Arg Asp Leu Thr Asp Cys Leu Leu 270 811 GTG GAA ATG GAG AAG GAA AAG CAC AGT GCA GAG CGC TTG TAC ACA 855 271 Val Glu Met Glu Lys Glu Lys His Ser Ala Glu Arg Leu Tyr Thr 285 856 ATG GAC GGT ATC ACC GTG ACT GTG GCC GAC CTG TTC TTT GCG GGG 900 286 Met Asp Gly Ile Thr Val Thr Val Ala Asp Leu Phe Phe Ala Gly 300 901 ACA GAG ACC ACC AGC ACA ACT CTG AGA TAT GGG CTC CTG ATT CTC 945 301 Thr Glu Thr Thr Ser Thr Thr Leu Arg Tyr Gly Leu Leu Ile Leu 315 946 ATG AAA TAC CCT GAG ATC GAA GAG AAG CTC CAT GAA GAA ATT GAC 990 316 Met Lys Tyr Pro Glu Ile Glu Glu Lys Leu His Glu Glu Ile Asp 330 991 AGG GTG ATT GGG CCA AGC CGA ATC CCT GCC ATC AAG GAT AGG CAA 1035 331 Arg Val Ile Gly Pro Ser Arg Ile Pro Ala Ile Lys Asp Arg Gln 345 1036 GAG ATG CCC TAC ATG GAT GCT GTG GTG CAT GAG ATT CAG CGG TTC 1080 346 Glu Met Pro Tyr Met Asp Ala Val Val His Glu Ile Gln Arg Phe 360 1081 ATC ACC CTC GTG CCC TCC AAC CTG CCC CAT GAA GCA ACC CGA GAC 1125 361 Ile Thr Leu Val Pro Ser Asn Leu Pro His Glu Ala Thr Arg Asp 375 1126 ACC ATT TTC AGA GGA TAC CTC ATC CCC AAG GGC ACA GTC GTA GTG 1170 376 Thr Ile Phe Arg Gly Tyr Leu Ile Pro Lys Gly Thr Val Val Val 390 1171 CCA ACT CTG GAC TCT GTT TTG TAT GAC AAC CAA GAA TTT CCT GAT 1215 391 Pro Thr Leu Asp Ser Val Leu Tyr Asp Asn Gln Glu Phe Pro Asp 405 1216 CCA GAA AAG TTT AAG CCA GAA CAC TTC CTG AAT GAA AAT GGA AAG 1260 406 Pro Glu Lys Phe Lys Pro Glu His Phe Leu Asn Glu Asn Gly Lys 420 1261 TTC AAG TAC AGT GAC TAT TTC AAG CCA TTT TCC ACA GGA AAA CGA 1305 421 Phe Lys Tyr Ser Asp Tyr Phe Lys Pro Phe Ser Thr Gly Lys Arg 435 1306 GTG TGT GCT GGA GAA GGC CTG GCT CGC ATG GAG TTG TTT CTT TTG 1350 436 Val Cys Ala Gly Glu Gly Leu Ala Arg Met Glu Leu Phe Leu Leu 450 1351 TTG TGT GCC ATT TTG CAG CAT TTT AAT TTG AAG CCT CTC GTT GAC 1395 451 Leu Cys Ala Ile Leu Gln His Phe Asn Leu Lys Pro Leu Val Asp 465 1396 CCA AAG GAT ATC GAC CTC AGC CCT ATA CAT ATT GGG TTT GGC TGT 1440 466 Pro Lys Asp Ile Asp Leu Ser Pro Ile His Ile Gly Phe Gly Cys 480 1441 ATC CCA CCA CGT TAC AAA CTC TGT GTC ATT CCC CGC TCA TGA 1482 481 Ile Pro Pro Arg Tyr Lys Leu Cys Val Ile Pro Arg Ser *** 494

【００５５】配列番号：４配列の長さ：１５１２配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列 1 ATG GCT CTC ATC CCA GAC TTG GCC ATG GAA ACC TGG CTT CTC CTG 45 1 Met Ala Leu Ile Pro Asp Leu Ala Met Glu Thr Trp Leu Leu Leu 15 46 GCT GTC AGC CTG GTG CTC CTC TAT CTA TAT GGA ACC CAT TCA CAT 90 16 Ala Val Ser Leu Val Leu Leu Tyr Leu Tyr Gly Thr His Ser His 30 91 GGA CTT TTT AAG AAG CTT GGA ATT CCA GGG CCC ACA CCT CTG CCT 135 31 Gly Leu Phe Lys Lys Leu Gly Ile Pro Gly Pro Thr Pro Leu Pro 45 136 TTT TTG GGA AAT ATT TTG TCC TAC CAT AAG GGC TTT TGT ATG TTT 180 46 Phe Leu Gly Asn Ile Leu Ser Tyr His Lys Gly Phe Cys Met Phe 60 181 GAC ATG GAA TGT CAT AAA AAG TAT GGA AAA GTG TGG GGC TTT TAT 225 61 Asp Met Glu Cys His Lys Lys Tyr Gly Lys Val Trp Gly Phe Tyr 75 226 GAT GGT CAA CAG CCT GTG CTG GCT ATC ACA GAT CCT GAC ATG ATC 270 76 Asp Gly Gln Gln Pro Val Leu Ala Ile Thr Asp Pro Asp Met Ile 90 271 AAA ACA GTG CTA GTG AAA GAA TGT TAT TCT GTC TTC ACA AAC CGG 315 91 Lys Thr Val Leu Val Lys Glu Cys Tyr Ser Val Phe Thr Asn Arg 105 316 AGG CCT TTT GGT CCA GTG GGA TTT ATG AAA AGT GCC ATC TCT ATA 360 106 Arg Pro Phe Gly Pro Val Gly Phe Met Lys Ser Ala Ile Ser Ile 120 361 GCT GAG GAT GAA GAA TGG AAG AGA TTA CGA TCA TTG CTG TCT CCA 405 121 Ala Glu Asp Glu Glu Trp Lys Arg Leu Arg Ser Leu Leu Ser Pro 135 406 ACC TTC ACC AGT GGA AAA CTC AAG GAG ATG GTC CCT ATC ATT GCC 450 136 Thr Phe Thr Ser Gly Lys Leu Lys Glu Met Val Pro Ile Ile Ala 150 451 CAG TAT GGA GAT GTG TTG GTG AGA AAT CTG AGG CGG GAA GCA GAG 495 151 Gln Tyr Gly Asp Val Leu Val Arg Asn Leu Arg Arg Glu Ala Glu 165 496 ACA GGC AAG CCT GTC ACC TTG AAA GAC GTC TTT GGG GCC TAC AGC 540 166 Thr Gly Lys Pro Val Thr Leu Lys Asp Val Phe Gly Ala Tyr Ser 180 541 ATG GAT GTG ATC ACT AGC ACA TCA TTT GGA GTG AAC ATC GAC TCT 585 181 Met Asp Val Ile Thr Ser Thr Ser Phe Gly Val Asn Ile Asp Ser 195 586 CTC AAC AAT CCA CAA GAC CCC TTT GTG GAA AAC ACC AAG AAG CTT 630 196 Leu Asn Asn Pro Gln Asp Pro Phe Val Glu Asn Thr Lys Lys Leu 210 631 TTA AGA TTT GAT TTT TTG GAT CCA TTC TTT CTC TCA ATA ACA GTC 675 211 Leu Arg Phe Asp Phe Leu Asp Pro Phe Phe Leu Ser Ile Thr Val 225 676 TTT CCA TTC CTC ATC CCA ATT CTT GAA GTA TTA AAT ATC TGT GTG 720 226 Phe Pro Phe Leu Ile Pro Ile Leu Glu Val Leu Asn Ile Cys Val 240 721 TTT CCA AGA GAA GTT ACA AAT TTT TTA AGA AAA TCT GTA AAA AGG 765 241 Phe Pro Arg Glu Val Thr Asn Phe Leu Arg Lys Ser Val Lys Arg 255 766 ATG AAA GAA AGT CGC CTC GAA GAT ACA CAA AAG CAC CGA GTG GAT 810 256 Met Lys Glu Ser Arg Leu Glu Asp Thr Gln Lys His Arg Val Asp 270 811 TTC CTT CAG CTG ATG ATT GAC TCT CAG AAT TCA AAA GAA ACT GAG 855 271 Phe Leu Gln Leu Met Ile Asp Ser Gln Asn Ser Lys Glu Thr Glu 285 856 TCC CAC AAA GCT CTG TCC GAT CTG GAG CTC GTG GCC CAA TCA ATT 900 286 Ser His Lys Ala Leu Ser Asp Leu Glu Leu Val Ala Gln Ser Ile 300 901 ATC TTT ATT TTT GCT GGC TAT GAA ACC ACG AGC AGT GTT CTC TCC 945 301 Ile Phe Ile Phe Ala Gly Tyr Glu Thr Thr Ser Ser Val Leu Ser 315 946 TTC ATT ATG TAT GAA CTG GCC ACT CAC CCT GAT GTC CAG CAG AAA 990 316 Phe Ile Met Tyr Glu Leu Ala Thr His Pro Asp Val Gln Gln Lys 330 991 CTG CAG GAG GAA ATT GAT GCA GTT TTA CCC AAT AAG GCA CCA CCC 1035 331 Leu Gln Glu Glu Ile Asp Ala Val Leu Pro Asn Lys Ala Pro Pro 345 1036 ACC TAT GAT ACT GTG CTA CAG ATG GAG TAT CTT GAC ATG GTG GTG 1080 346 Thr Tyr Asp Thr Val Leu Gln Met Glu Tyr Leu Asp Met Val Val 360 1081 AAT GAA ACG CTC AGA TTA TTC CCA ATT GCT ATG AGA CTT GAG AGG 1125 361 Asn Glu Thr Leu Arg Leu Phe Pro Ile Ala Met Arg Leu Glu Arg 375 1126 GTC TGC AAA AAA GAT GTT GAG ATC AAT GGG ATG TTC ATT CCC AAA 1170 376 Val Cys Lys Lys Asp Val Glu Ile Asn Gly Met Phe Ile Pro Lys 390 1171 GGG TGG GTG GTG ATG ATT CCA AGC TAT GCT CTT CAC CGT GAC CCA 1215 391 Gly Trp Val Val Met Ile Pro Ser Tyr Ala Leu His Arg Asp Pro 405 1216 AAG TAC TGG ACA GAG CCT GAG AAG TTC CTC CCT GAA AGA TTC AGC 1260 406 Lys Tyr Trp Thr Glu Pro Glu Lys Phe Leu Pro Glu Arg Phe Ser 420 1261 AAG AAG AAC AAG GAC AAC ATA GAT CCT TAC ATA TAC ACA CCC TTT 1305 421 Lys Lys Asn Lys Asp Asn Ile Asp Pro Tyr Ile Tyr Thr Pro Phe 435 1306 GGA AGT GGA CCC AGA AAC TGC ATT GGC ATG AGG TTT GCT CTC ATG 1350 436 Gly Ser Gly Pro Arg Asn Cys Ile Gly Met Arg Phe Ala Leu Met 450 1351 AAC ATG AAA CTT GCT CTA ATC AGA GTC CTT CAG AAC TTC TCC TTC 1395 451 Asn Met Lys Leu Ala Leu Ile Arg Val Leu Gln Asn Phe Ser Phe 465 1396 AAA CCT TGT AAA GAA ACA CAG ATC CCC CTG AAA TTA AGC TTA GGA 1440 466 Lys Pro Cys Lys Glu Thr Gln Ile Pro Leu Lys Leu Ser Leu Gly 480 1441 GGA CTT CTT CAA CCA GAA AAA CCC GTT GTT CTA AAG GTT GAG TCA 1473 481 Gly Leu Leu Gln Pro Glu Lys Pro Val Val Leu Lys Val Glu Ser 491 1486 AGG GAT GGC ACC GTA AGT GGA GCC TGA 1512 496 Arg Asp Gly Thr Val Ser Gly Ala *** 504

【００５６】配列番号：５配列の長さ：１５３９配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列 1 ATG CTT TTC CCA ATC TCC ATG TCG GCC ACG GAG TTT CTT CTG GCC 45 1 Met Leu Phe Pro Ile Ser Met Ser Ala Thr Glu Phe Leu Leu Ala 15 46 TCT GTC ATC TTC TGT CTG GTA TTC TGG GTA ATC AGG GCC TCA AGA 90 16 Ser Val Ile Phe Cys Leu Val Phe Trp Val Ile Arg Ala Ser Arg 30 91 CCT CAG GTC CCC AAA GGC CTG AAG AAT CCA CCA GGG CCA TGG GGC 135 31 Pro Gln Val Pro Lys Gly Leu Lys Asn Pro Pro Gly Pro Trp Gly 45 136 TGG CCT CTG ATT GGG CAC ATG CTG ACC CTG GGA AAG AAC CCG CAC 180 46 Trp Pro Leu Ile Gly His Met Leu Thr Leu Gly Lys Asn Pro His 60 181 CTG GCA CTG TCA AGG ATG AGC CAG CAG TAT GGG GAC GTG CTG CAG 225 61 Leu Ala Leu Ser Arg Met Ser Gln Gln Tyr Gly Asp Val Leu Gln 75 226 ATC CGA ATT GGC TCC ACA CCC GTG GTG GTG CTG AGC GGC CTG GAC 270 76 Ile Arg Ile Gly Ser Thr Pro Val Val Val Leu Ser Gly Leu Asp 90 271 ACC ATC CGG CAG GCC CTG GTG CGG CAG GGC GAT GAT TTC AAG GGC 315 91 Thr Ile Arg Gln Ala Leu Val Arg Gln Gly Asp Asp Phe Lys Gly 105 316 CGG CCC GAC CTC TAC ACC TTC ACC CTC ATC AGT AAT GGT CAG AGC 360 106 Arg Pro Asp Leu Tyr Thr Phe Thr Leu Ile Ser Asn Gly Gln Ser 120 361 ATG TCC TTC AGC CCA GAC TCT GGA CCA GTG TGG GCT GCC CGC CGG 405 121 Met Ser Phe Ser Pro Asp Ser Gly Pro Val Trp Ala Ala Arg Arg 135 406 CGC CTG GCC CAG AAT GGC CTG AAA AGT TTC TCC ATT GCC TCT GAC 450 136 Arg Leu Ala Gln Asn Gly Leu Lys Ser Phe Ser Ile Ala Ser Asp 150 451 CCA GCC TCC TCA ACC TCC TGC TAC CTG GAA GAG CAT GTG AGC AAG 495 151 Pro Ala Ser Ser Thr Ser Cys Tyr Leu Glu Glu His Val Ser Lys 165 496 GAG GCT GAG GTC CTG ATA AGC ACG TTG CAG GAG CTG ATG GCA GGG 540 166 Glu Ala Glu Val Leu Ile Ser Thr Leu Gln Glu Leu Met Ala Gly 180 541 CCT GGG CAC TTT AAC CCC TAC AGG TAT GTG GTG GTA TCA GTG ACC 585 181 Pro Gly His Phe Asn Pro Tyr Arg Tyr Val Val Val Ser Val Thr 195 586 AAT GTC ATC TGT GCC ATT TGC TTT GGC CGG CGC TAT GAC CAC AAC 630 196 Asn Val Ile Cys Ala Ile Cys Phe Gly Arg Arg Tyr Asp His Asn 210 631 CAC CAA GAA CTG CTT AGC CTA GTC AAC CTG AAT AAT AAT TTC GGG 675 211 His Gln Glu Leu Leu Ser Leu Val Asn Leu Asn Asn Asn Phe Gly 225 676 GAG GTG GTT GGC TCT GGA AAC CCA GCT GAC TTC ATC CCT ATT CTT 720 226 Glu Val Val Gly Ser Gly Asn Pro Ala Asp Phe Ile Pro Ile Leu 240 721 CGC TAC CTA CCC AAC CCT TCC CTG AAT GCC TTC AAG GAC CTG AAT 765 241 Arg Tyr Leu Pro Asn Pro Ser Leu Asn Ala Phe Lys Asp Leu Asn 255 766 GAG AAG TTC TAC AGC TTC ATG CAG AAG ATG GTC AAG GAG CAC TAC 810 256 Glu Lys Phe Tyr Ser Phe Met Gln Lys Met Val Lys Glu His Tyr 270 811 AAA ACC TTT GAG AAG GGC CAC ATC CGG GAC ATC ACA GAC AGC CTG 855 271 Lys Thr Phe Glu Lys Gly His Ile Arg Asp Ile Thr Asp Ser Leu 285 856 ATT GAG CAC TGT CAG GAG AAG CAG CTG GAT GAG AAC GCC AAT GTC 900 286 Ile Glu His Cys Gln Glu Lys Gln Leu Asp Glu Asn Ala Asn Val 300 901 CAG CTG TCA GAT GAG AAG ATC ATT AAC ATC GTC TTG GAC CTC TTT 945 301 Gln Leu Ser Asp Glu Lys Ile Ile Asn Ile Val Leu Asp Leu Phe 315 946 GGA GCT GGG TTT GAC ACA GTC ACA ACT GCT ATC TCC TGG AGC CTC 990 316 Gly Ala Gly Phe Asp Thr Val Thr Thr Ala Ile Ser Trp Ser Leu 330 991 ATG TAT TTG GTG ATG AAC CCC AGG GTA CAG AGA AAG ATC CAA GAG 1035 331 Met Tyr Leu Val Met Asn Pro Arg Val Gln Arg Lys Ile Gln Glu 345 1036 GAG CTC GAC ACA GTG ATT GGC AGG TCA CGG CGG CCC CGG CTC TCT 1080 346 Glu Leu Asp Thr Val Ile Gly Arg Ser Arg Arg Pro Arg Leu Ser 360 1081 GAC AGA TCC CAT CTG CCC TAT ATG GAG GCC TTC ATC CTG GAG ACC 1125 361 Asp Arg Ser His Leu Pro Tyr Met Glu Ala Phe Ile Leu Glu Thr 375 1126 TTC CGA CAC TCT TCC TTC GTC CCC TTC ACC ATC CCC CAC AGC ACA 1170 376 Phe Arg His Ser Ser Phe Val Pro Phe Thr Ile Pro His Ser Thr 390 1171 ACA AGA GAC ACA AGT TTG AAA GGC TTT TAC ATC CCC AAG GGG CGT 1215 391 Thr Arg Asp Thr Ser Leu Lys Gly Phe Tyr Ile Pro Lys Gly Arg 405 1216 TGT GTC TTT GTA AAC CAG TGG CAG ATC AAC CAT GAC CAG AAG CTA 1260 406 Cys Val Phe Val Asn Gln Trp Gln Ile Asn His Asp Gln Lys Leu 420 1261 TGG GTC AAC CCA TCT GAG TTC CTA CCT GAA CGG TTT CTC ACC CCT 1305 421 Trp Val Asn Pro Ser Glu Phe Leu Pro Glu Arg Phe Leu Thr Pro 435 1306 GAT GGT GCT ATC GAC AAG GTG TTA AGT GAG AAG GTG ATT ATC TTT 1350 436 Asp Gly Ala Ile Asp Lys Val Leu Ser Glu Lys Val Ile Ile Phe 450 1351 GGC ATG GGC AAG CGG AAG TGT ATC GGT GAG ACC ATT GCC AGC TGG 1395 451 Gly Met Gly Lys Arg Lys Cys Ile Gly Glu Thr Ile Ala Ser Trp 465 1396 GAG GTC TTT CTC TTC CTG GCT ATC CTG CTG CAA CGG GTG GAA TTC 1440 466 Glu Val Phe Leu Phe Leu Ala Ile Leu Leu Gln Arg Val Glu Phe 480 1441 AGC GTG CCA CTG GGC GTG AAG GTG GAC ATG ACC CCC ATC TAT GGG 1485 481 Ser Val Pro Leu Gly Val Lys Val Asp Met Thr Pro Ile Tyr Gly 495 1486 CTA ACC ATG AAG CAT GCC TGC TGT GAG CAC TTC CAA ATG CAG CTG 1530 496 Leu Thr Met Lys His Ala Cys Cys Glu His Phe Gln Met Gln Leu 510 1531 CGC TCT TAG 1539 511 Arg Ser *** 513

【００５７】配列番号：６配列の長さ：１５３９配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直線状配列 1 ATG CTT TTC CCA ATC TCC ATG TCG GCC ACG GAG TTT CTT CTG GCC 45 1 Met Leu Phe Pro Ile Ser Met Ser Ala Thr Glu Phe Leu Leu Ala 15 46 TCT GTC ATC TTC TGT CTG GTA TTC TGG GTA ATC AGG GCC TCA AGA 90 16 Ser Val Ile Phe Cys Leu Val Phe Trp Val Ile Arg Ala Ser Arg 30 91 CCT CAG GTC CCC AAA GGC CTG AAG AAT CCA CCA GGG CCA TGG GGC 135 31 Pro Gln Val Pro Lys Gly Leu Lys Asn Pro Pro Gly Pro Trp Gly 45 136 TGG CCT CTG ATT GGG CAC ATG CTG ACC CTG GGA AAG AAC CCG CAC 180 46 Trp Pro Leu Ile Gly His Met Leu Thr Leu Gly Lys Asn Pro His 60 181 CTG GCA CTG TCA AGG ATG AGC CAG CAG TAT GGG GAC GTG CTG CAG 225 61 Leu Ala Leu Ser Arg Met Ser Gln Gln Tyr Gly Asp Val Leu Gln 75 226 ATC CGA ATT GGC TCC ACA CCC GTG GTG GTG CTG AGC GGC CTG GAC 270 76 Ile Arg Ile Gly Ser Thr Pro Val Val Val Leu Ser Gly Leu Asp 90 271 ACC ATC CGG CAG GCC CTG GTG CGG CAG GGC GAT GAT TTC AAG GGC 315 91 Thr Ile Arg Gln Ala Leu Val Arg Gln Gly Asp Asp Phe Lys Gly 105 316 CGG CCC GAC CTC TAC ACC TTC ACC CTC ATC AGT AAT GGT CAG AGC 360 106 Arg Pro Asp Leu Tyr Thr Phe Thr Leu Ile Ser Asn Gly Gln Ser 120 361 ATG TCC TTC AGC CCA GAC TCT GGA CCA GTG TGG GCT GCC CGC CGG 405 121 Met Ser Phe Ser Pro Asp Ser Gly Pro Val Trp Ala Ala Arg Arg 135 406 CGC CTG GCC CAG AAT GGC CTG AAA AGT TTC TCC ATT GCC TCT GAC 450 136 Arg Leu Ala Gln Asn Gly Leu Lys Ser Phe Ser Ile Ala Ser Asp 150 451 CCA GCC TCC TCA ACC TCC TGC TAC CTG GAA GAG CAT GTG AGC AAG 495 151 Pro Ala Ser Ser Thr Ser Cys Tyr Leu Glu Glu His Val Ser Lys 165 496 GAG GCT GAG GTC CTG ATA AGC ACG TTG CAG GAG CTG ATG GCA GGG 540 166 Glu Ala Glu Val Leu Ile Ser Thr Leu Gln Glu Leu Met Ala Gly 180 541 CCT GGG CAC TTT AAC CCC TAC AGG TAT GTG GTG GTA TCA GTG ACC 585 181 Pro Gly His Phe Asn Pro Tyr Arg Tyr Val Val Val Ser Val Thr 195 586 AAT GTC ATC TGT GCC ATT TGC TTT GGC CGG CGC TAT GAC CAC AAC 630 196 Asn Val Ile Cys Ala Ile Cys Phe Gly Arg Arg Tyr Asp His Asn 210 631 CAC CAA GAA CTG CTT AGC CTA GTC AAC CTG AAT AAT AAT TTC GGG 675 211 His Gln Glu Leu Leu Ser Leu Val Asn Leu Asn Asn Asn Phe Gly 225 676 GAG GTG GTT GGC TCT GGA AAC CCA GCT GAC TTC ATC CCT ATT CTT 720 226 Glu Val Val Gly Ser Gly Asn Pro Ala Asp Phe Ile Pro Ile Leu 240 721 CGC TAC CTA CCC AAC CCT TCC CTG AAT GCC TTC AAG GAC CTG AAT 765 241 Arg Tyr Leu Pro Asn Pro Ser Leu Asn Ala Phe Lys Asp Leu Asn 255 766 GAG AAG TTC TAC AGC TTC ATG CAG AAG ATG GTC AAG GAG CAC TAC 810 256 Glu Lys Phe Tyr Ser Phe Met Gln Lys Met Val Lys Glu His Tyr 270 811 AAA ACC TTT GAG AAG GGC CAC ATC CGG GAC ATC ACA GAC AGC CTG 855 271 Lys Thr Phe Glu Lys Gly His Ile Arg Asp Ile Thr Asp Ser Leu 285 856 ATT GAG CAC TGT CAG GAG AAG CAG CTG GAT GAG AAC GCC AAT GTC 900 286 Ile Glu His Cys Gln Glu Lys Gln Leu Asp Glu Asn Ala Asn Val 300 901 CAG CTG TCA GAT GAG AAG ATC ATT AAC ATC GTC TTG GAC CTC TTT 945 301 Gln Leu Ser Asp Glu Lys Ile Ile Asn Ile Val Leu Asp Leu Phe 315 946 GGA GCT GGG TTT GAC ACA GTC ACA ACT GCT ATC TCC TGG AGC CTC 990 316 Gly Ala Gly Phe Asp Thr Val Thr Thr Ala Ile Ser Trp Ser Leu 330 991 ATG TAT TTG GTG ATG AAC CCC AGG GTA CAG AGA AAG ATC CAA GAG 1035 331 Met Tyr Leu Val Met Asn Pro Arg Val Gln Arg Lys Ile Gln Glu 345 1036 GAG CTC GAC ACA GTG ATT GGC AGG TCA CGG CGG CCC CGG CTC TCT 1080 346 Glu Leu Asp Thr Val Ile Gly Arg Ser Arg Arg Pro Arg Leu Ser 360 1081 GAC AGA TCC CAT CTG CCC TAT ATG GAG GCC TTC ATC CTG GAG ACC 1125 361 Asp Arg Ser His Leu Pro Tyr Met Glu Ala Phe Ile Leu Glu Thr 375 1126 TTC CGA CAC TCT TCC TTC GTC CCC TTC ACC ATC CCC CAC AGC ACA 1170 376 Phe Arg His Ser Ser Phe Val Pro Phe Thr Ile Pro His Ser Thr 390 1171 ACA AGA GAC ACA AGT TTG AAA GGC TTT TAC ATC CCC AAG GGG CGT 1215 391 Thr Arg Asp Thr Ser Leu Lys Gly Phe Tyr Ile Pro Lys Gly Arg 405 1216 TGT GTC TTT GTA AAC CAG TGG CAG ATC AAC CAT GAC CAG AAG CTA 1260 406 Cys Val Phe Val Asn Gln Trp Gln Ile Asn His Asp Gln Lys Leu 420 1261 TGG GTC AAC CCA TCT GAG TTC CTA CCT GAA CGG TTT CTC ACC CCT 1305 421 Trp Val Asn Pro Ser Glu Phe Leu Pro Glu Arg Phe Leu Thr Pro 435 1306 GAT GGT GCT ATC GAC AAG GTG TTA AGT GAG AAG GTG ATT ATC TTT 1350 436 Asp Gly Ala Ile Asp Lys Val Leu Ser Glu Lys Val Ile Ile Phe 450 1351 GGC ATG GGC AAG CGG AAG TGT ATC GGT GAG ACC ATT GCC CGC TGG 1395 451 Gly Met Gly Lys Arg Lys Cys Ile Gly Glu Thr Ile Ala Arg Trp 465 1396 GAG GTC TTT CTC TTC CTG GCT ATC CTG CTG CAA CGG GTG GAA TTC 1440 466 Glu Val Phe Leu Phe Leu Ala Ile Leu Leu Gln Arg Val Glu Phe 480 1441 AGC GTG CCA CTG GGC GTG AAG GTG GAC ATG ACC CCC ATC TAT GGG 1485 481 Ser Val Pro Leu Gly Val Lys Val Asp Met Thr Pro Ile Tyr Gly 495 1486 CTA ACC ATG AAG CAT GCC TGC TGT GAG CAC TTC CAA ATG CAG CTG 1530 496 Leu Thr Met Lys His Ala Cys Cys Glu His Phe Gln Met Gln Leu 510 1531 CGC TCT TAG 1539 511 Arg Ser *** 513

【００５８】配列番号：７配列の長さ：１５３９配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直線状配列 1 ATG CTT TTC CCA ATC TCC ATG TCG GCC ACG GAG TTT CTT CTG GCC 45 1 Met Leu Phe Pro Ile Ser Met Ser Ala Thr Glu Phe Leu Leu Ala 15 46 TCT GTC ATC TTC TGT CTG GTA TTC TGG GTA ATC AGG GCC TCA AGA 90 16 Ser Val Ile Phe Cys Leu Val Phe Trp Val Ile Arg Ala Ser Arg 30 91 CCT CAG GTC CCC AAA GGC CTG AAG AAT CCA CCA GGG CCA TGG GGC 135 31 Pro Gln Val Pro Lys Gly Leu Lys Asn Pro Pro Gly Pro Trp Gly 45 136 TGG CCT CTG ATT GGG CAC ATG CTG ACC CTG GGA AAG AAC CCG CAC 180 46 Trp Pro Leu Ile Gly His Met Leu Thr Leu Gly Lys Asn Pro His 60 181 CTG GCA CTG TCA AGG ATG AGC CAG CAG TAT GGG GAC GTG CTG CAG 225 61 Leu Ala Leu Ser Arg Met Ser Gln Gln Tyr Gly Asp Val Leu Gln 75 226 ATC CGA ATT GGC TCC ACA CCC GTG GTG GTG CTG AGC GGC CTG GAC 270 76 Ile Arg Ile Gly Ser Thr Pro Val Val Val Leu Ser Gly Leu Asp 90 271 ACC ATC CGG CAG GCC CTG GTG CGG CAG GGC GAT GAT TTC AAG GGC 315 91 Thr Ile Arg Gln Ala Leu Val Arg Gln Gly Asp Asp Phe Lys Gly 105 316 CGG CCC GAC CTC TAC ACC TTC ACC CTC ATC AGT AAT GGT CAG AGC 360 106 Arg Pro Asp Leu Tyr Thr Phe Thr Leu Ile Ser Asn Gly Gln Ser 120 361 ATG TCC TTC AGC CCA GAC TCT GGA CCA GTG TGG GCT GCC CGC CGG 405 121 Met Ser Phe Ser Pro Asp Ser Gly Pro Val Trp Ala Ala Arg Arg 135 406 CGC CTG GCC CAG AAT GGC CTG AAA AGT TTC TCC ATT GCC TCT GAC 450 136 Arg Leu Ala Gln Asn Gly Leu Lys Ser Phe Ser Ile Ala Ser Asp 150 451 CCA GCC TCC TCA ACC TCC TGC TAC CTG GAA GAG CAT GTG AGC AAG 495 151 Pro Ala Ser Ser Thr Ser Cys Tyr Leu Glu Glu His Val Ser Lys 165 496 GAG GCT GAG GTC CTG ATA AGC ACG TTG CAG GAG CTG ATG GCA GGG 540 166 Glu Ala Glu Val Leu Ile Ser Thr Leu Gln Glu Leu Met Ala Gly 180 541 CCT GGG CAC TTT AAC CCC TAC AGG TAT GTG GTG GTA TCA GTG ACC 585 181 Pro Gly His Phe Asn Pro Tyr Arg Tyr Val Val Val Ser Val Thr 195 586 AAT GTC ATC TGT GCC ATT TGC TTT GGC CGG CGC TAT GAC CAC AAC 630 196 Asn Val Ile Cys Ala Ile Cys Phe Gly Arg Arg Tyr Asp His Asn 210 631 CAC CAA GAA CTG CTT AGC CTA GTC AAC CTG AAT AAT AAT TTC GGG 675 211 His Gln Glu Leu Leu Ser Leu Val Asn Leu Asn Asn Asn Phe Gly 225 676 GAG GTG GTT GGC TCT GGA AAC CCA GCT GAC TTC ATC CCT ATT CTT 720 226 Glu Val Val Gly Ser Gly Asn Pro Ala Asp Phe Ile Pro Ile Leu 240 721 CGC TAC CTA CCC AAC CCT TCC CTG AAT GCC TTC AAG GAC CTG AAT 765 241 Arg Tyr Leu Pro Asn Pro Ser Leu Asn Ala Phe Lys Asp Leu Asn 255 766 GAG AAG TTC TAC AGC TTC ATG CAG AAG ATG GTC AAG GAG CAC TAC 810 256 Glu Lys Phe Tyr Ser Phe Met Gln Lys Met Val Lys Glu His Tyr 270 811 AAA ACC TTT GAG AAG GGC CAC ATC CGG GAC ATC ACA GAC AGC CTG 855 271 Lys Thr Phe Glu Lys Gly His Ile Arg Asp Ile Thr Asp Ser Leu 285 856 ATT GAG CAC TGT CAG GAG AAG CAG CTG GAT GAG AAC GCC AAT GTC 900 286 Ile Glu His Cys Gln Glu Lys Gln Leu Asp Glu Asn Ala Asn Val 300 901 CAG CTG TCA GAT GAG AAG ATC ATT AAC ATC GTC TTG GAC CTC TTT 945 301 Gln Leu Ser Asp Glu Lys Ile Ile Asn Ile Val Leu Asp Leu Phe 315 946 GGA GCT GGG TTT GAC ACA GTC ACA ACT GCT ATC TCC TGG AGC CTC 990 316 Gly Ala Gly Phe Asp Thr Val Thr Thr Ala Ile Ser Trp Ser Leu 330 991 ATG TAT TTG GTG ATG AAC CCC AGG GTA CAG AGA AAG ATC CAA GAG 1035 331 Met Tyr Leu Val Met Asn Pro Arg Val Gln Arg Lys Ile Gln Glu 345 1036 GAG CTC GAC ACA GTG ATT GGC AGG TCA CGG CGG CCC CGG CTC TCT 1080 346 Glu Leu Asp Thr Val Ile Gly Arg Ser Arg Arg Pro Arg Leu Ser 360 1081 GAC AGA TCC CAT CTG CCC TAT ATG GAG GCC TTC ATC CTG GAG ACC 1125 361 Asp Arg Ser His Leu Pro Tyr Met Glu Ala Phe Ile Leu Glu Thr 375 1126 TTC CGA CAC TCT TCC TTC GTC CCC TTC ACC ATC CCC CAC AGC ACA 1170 376 Phe Arg His Ser Ser Phe Val Pro Phe Thr Ile Pro His Ser Thr 390 1171 ACA AGA GAC ACA AGT TTG AAA GGC TTT TAC ATC CCC AAG GGG CGT 1215 391 Thr Arg Asp Thr Ser Leu Lys Gly Phe Tyr Ile Pro Lys Gly Arg 405 1216 TGT GTC TTT GTA AAC CAG TGG CAG ATC AAC CAT GAC CAG AAG CTA 1260 406 Cys Val Phe Val Asn Gln Trp Gln Ile Asn His Asp Gln Lys Leu 420 1261 TGG GTC AAC CCA TCT GAG TTC CTA CCT GAA CGG TTT CTC ACC CCT 1305 421 Trp Val Asn Pro Ser Glu Phe Leu Pro Glu Arg Phe Leu Thr Pro 435 1306 GAT GGT GCT ATC GAC AAG GTG TTA AGT GAG AAG GTG ATT ATC TTT 1350 436 Asp Gly Ala Ile Asp Lys Val Leu Ser Glu Lys Val Ile Ile Phe 450 1351 GGC ATG GGC AAG CGG AAG TGT ATC GGT GAG ACC GTT GCC CGC TGG 1395 451 Gly Met Gly Lys Arg Lys Cys Ile Gly Glu Thr Val Ala Arg Trp 465 1396 GAG GTC TTT CTC TTC CTG GCT ATC CTG CTG CAA CGG GTG GAA TTC 1440 466 Glu Val Phe Leu Phe Leu Ala Ile Leu Leu Gln Arg Val Glu Phe 480 1441 AGC GTG CCA CTG GGC GTG AAG GTG GAC ATG ACC CCC ATC TAT GGG 1485 481 Ser Val Pro Leu Gly Val Lys Val Asp Met Thr Pro Ile Tyr Gly 495 1486 CTA ACC ATG AAG CAT GCC TGC TGT GAG CAC TTC CAA ATG CAG CTG 1530 496 Leu Thr Met Lys His Ala Cys Cys Glu His Phe Gln Met Gln Leu 510 1531 CGC TCT TAG 1539 511 Arg Ser *** 513

【００５９】配列番号：８配列の長さ：１４８５配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列 1 ATG CTG GCC TCA GGG ATG CTT CTG GTG GCC TTG CTG GTC TGC CTG 45 1 Met Leu Ala Ser Gly Met Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Cys Leu 15 46 ACT GTG ATG GTC TTG ATG TCT GTT TGG CAG CAG AGG AAG AGC AAG 90 16 Thr Val Met Val Leu Met Ser Val Trp Gln Gln Arg Lys Ser Lys 30 91 GGG AAG CTG CCT CCG GGA CCC ACC CCA TTG CCC TTC ATT GGA AAC 135 31 Gly Lys Leu Pro Pro Gly Pro Thr Pro Leu Pro Phe Ile Gly Asn 45 136 TAC CTG CAG CTG AAC ACA GAG CAG ATG TAC AAC TCC CTC ATG AAG 180 46 Tyr Leu Gln Leu Asn Thr Glu Gln Met Tyr Asn Ser Leu Met Lys 60 181 ATC AGT GAG CGC TAT GGC CCC GTG TTC ACC ATT CAC TTG GGG CCC 225 61 Ile Ser Glu Arg Tyr Gly Pro Val Phe Thr Ile His Leu Gly Pro 75 226 CGG CGG GTC GTG GTG CTG TGT GGA CAT GAT GCC GTC AGG GAG GCT 270 76 Arg Arg Val Val Val Leu Cys Gly His Asp Ala Val Arg Glu Ala 90 271 CTG GTG GAC CAG GCT GAG GAG TTC AGC GGG CGA GGC GAG CAA GCC 315 91 Leu Val Asp Gln Ala Glu Glu Phe Ser Gly Arg Gly Glu Gln Ala 105 316 ACC TTC GAC TGG GTC TTC AAA GGC TAT GGC GTG GTA TTC AGC AAC 360 106 Thr Phe Asp Trp Val Phe Lys Gly Tyr Gly Val Val Phe Ser Asn 120 361 GGG GAG CGC GCC AAG CAG CTC CGG CGC TTC TCC ATC GCC ACC CTG 405 121 Gly Glu Arg Ala Lys Gln Leu Arg Arg Phe Ser Ile Ala Thr Leu 135 406 CGG GAC TTC GGG GTG GGC AAG CGA GGC ATC GAG GAG CGC ATC CAG 450 136 Arg Asp Phe Gly Val Gly Lys Arg Gly Ile Glu Glu Arg Ile Gln 150 451 GAG GAG GCG GGC TTC CTC ATC GAC GCC CTC CGG GGC ACT GGC GGC 495 151 Glu Glu Ala Gly Phe Leu Ile Asp Ala Leu Arg Gly Thr Gly Gly 165 496 GCC AAT ATC GAT CCC ACC TTC TTC CTG AGC CGC ACA GTC TCC AAT 540 166 Ala Asn Ile Asp Pro Thr Phe Phe Leu Ser Arg Thr Val Ser Asn 180 541 GTC ATC AGC TCC ATT GTC TTT GGG GAC CGC TTT GAC TAT AAG GAC 585 181 Val Ile Ser Ser Ile Val Phe Gly Asp Arg Phe Asp Tyr Lys Asp 195 586 AAA GAG TTC CTG TCA CTG TTG CGC ATG ATG CTA GGA ATC TTC CAG 630 196 Lys Glu Phe Leu Ser Leu Leu Arg Met Met Leu Gly Ile Phe Gln 210 631 TTC ACG TCA ACC TCC ACG GGG CAG CTC TAT GAG ATG TTC TCT TCG 675 211 Phe Thr Ser Thr Ser Thr Gly Gln Leu Tyr Glu Met Phe Ser Ser 225 676 GTG ATG AAA CAC CTG CCA GGA CCA CAG CAA CAG GCC TTT CAG TTG 720 226 Val Met Lys His Leu Pro Gly Pro Gln Gln Gln Ala Phe Gln Leu 240 721 CTG CAA GGG CTG GAG GAC TTC ATA GCC AAG AAG GTG GAG CAC AAC 765 241 Leu Gln Gly Leu Glu Asp Phe Ile Ala Lys Lys Val Glu His Asn 255 766 CAG CGC ACG CTG GAT CCC AAT TCC CCA CGG GAC TTC ATT GAC TCC 810 256 Gln Arg Thr Leu Asp Pro Asn Ser Pro Arg Asp Phe Ile Asp Ser 270 811 TTT CTC ATC CGC ATG CAG GAG GAG GAG AAG AAC CCC AAC ACG GAG 855 271 Phe Leu Ile Arg Met Gln Glu Glu Glu Lys Asn Pro Asn Thr Glu 285 856 TTC TAC TTG AAA AAC CTG GTG ATG ACC ACG TTG AAC CTC TTC ATT 900 286 Phe Tyr Leu Lys Asn Leu Val Met Thr Thr Leu Asn Leu Phe Ile 300 901 GGG GGC ACC GAG ACC GTC AGC ACC ACC CTG CGC TAT GGC TTC TTG 945 301 Gly Gly Thr Glu Thr Val Ser Thr Thr Leu Arg Tyr Gly Phe Leu 315 946 CTG CTC ATG AAG CAC CCA GAG GTG GAG GCC AAG GTC CAT GAG GAG 990 316 Leu Leu Met Lys His Pro Glu Val Glu Ala Lys Val His Glu Glu 330 991 ATT GAC AGA GTG ATC GGC AAG AAC CGG CAG CCC AAG TTT GAG GAC 1035 331 Ile Asp Arg Val Ile Gly Lys Asn Arg Gln Pro Lys Phe Glu Asp 345 1036 CGG GCC AAG ATG CCC TAC ATG GAG GCA GTG ATC CAC GAG ATC CAA 1080 346 Arg Ala Lys Met Pro Tyr Met Glu Ala Val Ile His Glu Ile Gln 360 1081 AGA TTT GGA GAC GTG ATC CCC ATG AGT TTG GCC CGC AGA GTC AAA 1125 361 Arg Phe Gly Asp Val Ile Pro Met Ser Leu Ala Arg Arg Val Lys 375 1126 AAG GAC ACC AAG TTT CGG GAT TTC TTC CTC CCT AAG GGC ACC GAA 1170 376 Lys Asp Thr Lys Phe Arg Asp Phe Phe Leu Pro Lys Gly Thr Glu 390 1171 GTG TAC CCT ATG CTG GGC TCT GTG CTG AGA GAC CCC AGT TTC TTC 1215 391 Val Tyr Pro Met Leu Gly Ser Val Leu Arg Asp Pro Ser Phe Phe 405 1216 TCC AAC CCC CAG GAC TTC AAT CCC CAG CAC TTC CTG AAT GAG AAG 1260 406 Ser Asn Pro Gln Asp Phe Asn Pro Gln His Phe Leu Asn Glu Lys 420 1261 GGG CAG TTT AAG AAG AGT GAT GCT TTT GTG CCC TTT TCC ATC GGA 1305 421 Gly Gln Phe Lys Lys Ser Asp Ala Phe Val Pro Phe Ser Ile Gly 435 1306 AAG CGG AAC TGT TTC GGA GAA GGC CTG GCC AGA ATG GAG CTC TTT 1350 436 Lys Arg Asn Cys Phe Gly Glu Gly Leu Ala Arg Met Glu Leu Phe 450 1351 CTC TTC TTC ACC ACC GTC ATG CAG AAC TTC CGC CTC AAG TCC TCC 1395 451 Leu Phe Phe Thr Thr Val Met Gln Asn Phe Arg Leu Lys Ser Ser 465 1396 CAG TCA CCT AAG GAC ATT GAC GTG TCC CCC AGA CAC GTG GGC TTT 1440 466 Gln Ser Pro Lys Asp Ile Asp Val Ser Pro Arg His Val Gly Phe 480 1441 GCC ACG ATC CCA CGA AAC TAC ACC ATG AGC TTC CTG CCC CGC TGA 1485 481 Ala Thr Ile Pro Arg Asn Tyr Thr Met Ser Phe Leu Pro Arg *** 495

【００６０】配列番号：９配列の長さ：１４８５配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直線状配列 1 ATG CTG GCC TCA GGG ATG CTT CTG GTG GCC TTG CTG GTC TGC CTG 45 1 Met Leu Ala Ser Gly Met Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Cys Leu 15 46 ACT GTG ATG GTC TTG ATG TCT GTT TGG CAG CAG AGG AAG AGC AAG 90 16 Thr Val Met Val Leu Met Ser Val Trp Gln Gln Arg Lys Ser Lys 30 91 GGG AAG CTG CCT CCG GGA CCC ACC CCA TTG CCC TTC ATT GGA AAC 135 31 Gly Lys Leu Pro Pro Gly Pro Thr Pro Leu Pro Phe Ile Gly Asn 45 136 TAC CTG CAG CTG AAC ACA GAG CAG ATG TAC AAC TCC CTC ATG AAG 180 46 Tyr Leu Gln Leu Asn Thr Glu Gln Met Tyr Asn Ser Leu Met Lys 60 181 ATC AGT GAG CGC TAT GGC CCC GTG TTC ACC ATT CAC TTG GGG CCC 225 61 Ile Ser Glu Arg Tyr Gly Pro Val Phe Thr Ile His Leu Gly Pro 75 226 CGG CGG GTC GTG GTG CTG TGT GGA CAT GAT GCC GTC AGG GAG GCT 270 76 Arg Arg Val Val Val Leu Cys Gly His Asp Ala Val Arg Glu Ala 90 271 CTG GTG GAC CAG GCT GAG GAG TTC AGC GGG CGA GGC GAG CAA GCC 315 91 Leu Val Asp Gln Ala Glu Glu Phe Ser Gly Arg Gly Glu Gln Ala 105 316 ACC TTC GAC TGG GTC TTC AAA GGC TAT GGC GTG GTA TTC AGC AAC 360 106 Thr Phe Asp Trp Val Phe Lys Gly Tyr Gly Val Val Phe Ser Asn 120 361 GGG GAG CGC GCC AAG CAG CTC CGG CGC TTC TCC ATC GCC ACC CTG 405 121 Gly Glu Arg Ala Lys Gln Leu Arg Arg Phe Ser Ile Ala Thr Leu 135 406 CGG GAC TTC GGG GTG GGC AAG CGA GGC ATC GAG GAG CGC ATC CAG 450 136 Arg Asp Phe Gly Val Gly Lys Arg Gly Ile Glu Glu Arg Ile Gln 150 451 GAG GAG GCG GGC TTC CTC ATC GAC GCC CTC CGG GGC ACT GGC GGC 495 151 Glu Glu Ala Gly Phe Leu Ile Asp Ala Leu Arg Gly Thr Gly Gly 165 496 GCC AAT ATC GAT CCC ACC TTC TTC CTG AGC CGC ACA GTC TCC AAT 540 166 Ala Asn Ile Asp Pro Thr Phe Phe Leu Ser Arg Thr Val Ser Asn 180 541 GTC ATC AGC TCC ATT GTC TTT GGG GAC CGC TTT GAC TAT AAG GAC 585 181 Val Ile Ser Ser Ile Val Phe Gly Asp Arg Phe Asp Tyr Lys Asp 195 586 AAA GAG TTC CTG TCA CTG TTG CGC ATG ATG CTA GGA ATC TTC CAG 630 196 Lys Glu Phe Leu Ser Leu Leu Arg Met Met Leu Gly Ile Phe Gln 210 631 TTC ACG TCA ACC TCC ACG GGG CAG CTC TAT GAG ATG TTC TCT TCG 675 211 Phe Thr Ser Thr Ser Thr Gly Gln Leu Tyr Glu Met Phe Ser Ser 225 676 GTG ATG AAA CAC CTG CCA GGA CCA CAG CAA CAG GCC TTT CAG TTG 720 226 Val Met Lys His Leu Pro Gly Pro Gln Gln Gln Ala Phe Gln Leu 240 721 CTG CAA GGG CTG GAG GAC TTC ATA GCC AAG AAG GTG GAG CAC AAC 765 241 Leu Gln Gly Leu Glu Asp Phe Ile Ala Lys Lys Val Glu His Asn 255 766 CAG CGC ACG CTG GAT CCC AAT TCC CCA CGG GAC TTC ATT GAC TCC 810 256 Gln Arg Thr Leu Asp Pro Asn Ser Pro Arg Asp Phe Ile Asp Ser 270 811 TTT CTC ATC CGC ATG CAG GAG GAG GAG AAG AAC CCC AAC ACG GAG 855 271 Phe Leu Ile Arg Met Gln Glu Glu Glu Lys Asn Pro Asn Thr Glu 285 856 TTC TAC TTG AAA AAC CTG GTG ATG ACC ACG TTG AAC CTC TTC ATT 900 286 Phe Tyr Leu Lys Asn Leu Val Met Thr Thr Leu Asn Leu Phe Ile 300 901 GGG GGC ACC GAG ACC GTC AGC ACC ACC CTG CGC TAT GGC TTC TTG 945 301 Gly Gly Thr Glu Thr Val Ser Thr Thr Leu Arg Tyr Gly Phe Leu 315 946 CTG CTC ATG AAG CAC CCA GAG GTG GAG GCC AAG GTC CAT GAG GAG 990 316 Leu Leu Met Lys His Pro Glu Val Glu Ala Lys Val His Glu Glu 330 991 ATT GAC AGA GTG ATC GGC AAG AAC CGG CAG CCC AAG TTT GAG GAC 1035 331 Ile Asp Arg Val Ile Gly Lys Asn Arg Gln Pro Lys Phe Glu Asp 345 1036 CGG GCC AAG ATG CCC TAC ATG GAG GCA GTG ATC CAC GAG ATC CAA 1080 346 Arg Ala Lys Met Pro Tyr Met Glu Ala Val Ile His Glu Ile Gln 360 1081 AGA TTT GGA GAC GTG ATC CCC ATG AGT TTG GCC CGC AGA GTC AAA 1125 361 Arg Phe Gly Asp Val Ile Pro Met Ser Leu Ala Arg Arg Val Lys 375 1126 AAG GAC ACC AAG TTT CGG GAT TTC TTC CTC CCT AAG GGC ACC GAA 1170 376 Lys Asp Thr Lys Phe Arg Asp Phe Phe Leu Pro Lys Gly Thr Glu 390 1171 GTG TAC CCT ATG CTG GGC TCT GTG CTG AGA GAC CCC AGT TTC TTC 1215 391 Val Tyr Pro Met Leu Gly Ser Val Leu Arg Asp Pro Ser Phe Phe 405 1216 TCC AAC CCC CAG GAC TTC AAT CCC CAG CAC TTC CTG AAT GAG AAG 1260 406 Ser Asn Pro Gln Asp Phe Asn Pro Gln His Phe Leu Asn Glu Lys 420 1261 GGG CAG TTT AAG AAG AGT GAT GCT TTT GTG CCC TTT TCC ATC GGA 1305 421 Gly Gln Phe Lys Lys Ser Asp Ala Phe Val Pro Phe Ser Ile Gly 435 1306 AAG CGG AAC TGT TTC GGA GAA GGC CTG GCC AGA ATG GAG CTC TTT 1350 436 Lys Arg Asn Cys Phe Gly Glu Gly Leu Ala Arg Met Glu Leu Phe 450 1351 CTC TTC TTC ACC ACC GTC ATG CAG AAC TTC CGC CTC AAG TCC TCC 1395 451 Leu Phe Phe Thr Thr Val Met Gln Asn Phe Arg Leu Lys Ser Ser 465 1396 CAG TCA CCT AAG GAC ATT GAC GTG TCC CCC AAA CAC GTG GGC TTT 1440 466 Gln Ser Pro Lys Asp Ile Asp Val Ser Pro Lys His Val Gly Phe 480 1441 GCC ACG ATC CCA CGA AAC TAC ACC ATG AGC TTC CTG CCC CGC TGA 1485 481 Ala Thr Ile Pro Arg Asn Tyr Thr Met Ser Phe Leu Pro Arg *** 495

【００６１】配列番号：１０配列の長さ：１４７６配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列 1 ATG GAA CTC AGC GTC CTC CTC TTC CTT GCA CTC CTC ACA GGA CTC 45 1 Met Glu Leu Ser Val Leu Leu Phe Leu Ala Leu Leu Thr Gly Leu 15 46 TTG CTA CTC CTG GTT CAG CGC CAC CCT AAC ACC CAT GAC CGC CTC 90 16 Leu Leu Leu Leu Val Gln Arg His Pro Asn Thr His Asp Arg Leu 30 91 CCA CCA GGG CCC CGC CCT CTG CCC CTT TTG GGA AAC CTT CTG CAG 135 31 Pro Pro Gly Pro Arg Pro Leu Pro Leu Leu Gly Asn Leu Leu Gln 45 136 ATG GAT AGA AGA GGC CTA CTC AAA TCC TTT CTG AGG TTC CGA GAG 180 46 Met Asp Arg Arg Gly Leu Leu Lys Ser Phe Leu Arg Phe Arg Glu 60 181 AAA TAT GGG GAC GTC TTC ACG GTA CAC CTG GGA CCG AGG CCC GTG 225 61 Lys Tyr Gly Asp Val Phe Thr Val His Leu Gly Pro Arg Pro Val 75 226 GTC ATG CTG TGT GGA GTA GAG GCC ATA CGG GAG GCC CTT GTG GAC 270 76 Val Met Leu Cys Gly Val Glu Ala Ile Arg Glu Ala Leu Val Asp 90 271 AAG GCT GAG GCC TTC TCT GGC CGG GGA AAA ATC GCC ATG GTC GAC 315 91 Lys Ala Glu Ala Phe Ser Gly Arg Gly Lys Ile Ala Met Val Asp 105 316 CCA TTC TTC CGG GGA TAT GGT GTG ATC TTT GCC AAT GGA AAC CGC 360 106 Pro Phe Phe Arg Gly Tyr Gly Val Ile Phe Ala Asn Gly Asn Arg 120 361 TGG AAG GTG CTT CGG CGA TTC TCT GTG ACC ACT ATG AGG GAC TTC 405 121 Trp Lys Val Leu Arg Arg Phe Ser Val Thr Thr Met Arg Asp Phe 135 406 GGG ATG GGA AAG CGG AGT GTG GAG GAG CGG ATT CAG GAG GAG GCT 450 136 Gly Met Gly Lys Arg Ser Val Glu Glu Arg Ile Gln Glu Glu Ala 150 451 CAG TGT CTG ATA GAG GAG CTT CGG AAA TCC AAG GGG GCC CTC ATG 495 151 Gln Cys Leu Ile Glu Glu Leu Arg Lys Ser Lys Gly Ala Leu Met 165 496 GAC CCC ACC TTC CTC TTC CAG TCC ATT ACC GCC AAC ATC ATC TGC 540 166 Asp Pro Thr Phe Leu Phe Gln Ser Ile Thr Ala Asn Ile Ile Cys 180 541 TCC ATC GTC TTT GGA AAA CGA TTC CAC TAC CAA GAT CAA GAG TTC 585 181 Ser Ile Val Phe Gly Lys Arg Phe His Tyr Gln Asp Gln Glu Phe 195 586 CTG AAG ATG CTG AAC TTG TTC TAC CAG ACT TTT TCA CTC ATC AGC 630 196 Leu Lys Met Leu Asn Leu Phe Tyr Gln Thr Phe Ser Leu Ile Ser 210 631 TCT GTA TTC GGC CAG CTG TTT GAG CTC TTC TCT GGC TTC TTG AAA 675 211 Ser Val Phe Gly Gln Leu Phe Glu Leu Phe Ser Gly Phe Leu Lys 225 676 TAC TTT CCT GGG GCA CAC AGG CAA GTT TAC AAA AAC CTG CAG GAA 720 226 Tyr Phe Pro Gly Ala His Arg Gln Val Tyr Lys Asn Leu Gln Glu 240 721 ATC AAT GCT TAC ATT GGC CAC AGT GTG GAG AAG CAC CGT GAA ACC 765 241 Ile Asn Ala Tyr Ile Gly His Ser Val Glu Lys His Arg Glu Thr 255 766 CTG GAC CCC AGC GCC CCC AAG GAC CTC ATC GAC ACC TAC CTG CTC 810 256 Leu Asp Pro Ser Ala Pro Lys Asp Leu Ile Asp Thr Tyr Leu Leu 270 811 CAC ATG GAA AAA GAG AAA TCC AAC GCA CAC AGT GAA TTC AGC CAC 855 271 His Met Glu Lys Glu Lys Ser Asn Ala His Ser Glu Phe Ser His 285 856 CAG AAC CTC AAC CTC AAC ACG CTC TCG CTC TTC TTT GCT GGC ACT 900 286 Gln Asn Leu Asn Leu Asn Thr Leu Ser Leu Phe Phe Ala Gly Thr 300 901 GAG ACC ACC AGC ACC ACT CTC CGC TAC GGC TTC CTG CTC ATG CTC 945 301 Glu Thr Thr Ser Thr Thr Leu Arg Tyr Gly Phe Leu Leu Met Leu 315 946 AAA TAC CCT CAT GTT GCA GAG AGA GTC TAC AGG GAG ATT GAA CAG 990 316 Lys Tyr Pro His Val Ala Glu Arg Val Tyr Arg Glu Ile Glu Gln 330 991 GTG ATT GGC CCA CAT CGC CCT CCA GAG CTT CAT GAC CGA GCC AAA 1035 331 Val Ile Gly Pro His Arg Pro Pro Glu Leu His Asp Arg Ala Lys 345 1036 ATG CCA TAC ACA GAG GCA GTC ATC TAT GAG ATT CAG AGA TTT TCC 1080 346 Met Pro Tyr Thr Glu Ala Val Ile Tyr Glu Ile Gln Arg Phe Ser 360 1081 GAC CTT CTC CCC ATG GGT GTG CCC CAC ATT GTC ACC CAA CAC ACC 1125 361 Asp Leu Leu Pro Met Gly Val Pro His Ile Val Thr Gln His Thr 375 1126 AGC TTC CGA GGG TAC ATC ATC CCC AAG GAC ACA GAA GTA TTT CTC 1170 376 Ser Phe Arg Gly Tyr Ile Ile Pro Lys Asp Thr Glu Val Phe Leu 390 1171 ATC CTG AGC ACT GCT CTC CAT GAC CCA CAC TAC TTT GAA AAA CCA 1215 391 Ile Leu Ser Thr Ala Leu His Asp Pro His Tyr Phe Glu Lys Pro 405 1216 GAC GCC TTC AAT CCT GAC CAC TTT CTG GAT GCC AAT GGG GCA CTG 1260 406 Asp Ala Phe Asn Pro Asp His Phe Leu Asp Ala Asn Gly Ala Leu 420 1261 AAA AAG ACT GAA GCT TTT ATC CCC TTC TCC TTA GGG AAG CGG ATT 1305 421 Lys Lys Thr Glu Ala Phe Ile Pro Phe Ser Leu Gly Lys Arg Ile 435 1306 TGT CTT GGT GAA GGC ATC GCC CGT GCG GAA TTG TTC CTC TTC TTC 1350 436 Cys Leu Gly Glu Gly Ile Ala Arg Ala Glu Leu Phe Leu Phe Phe 450 1351 ACC ACC ATC CTC CAG AAC TTC TCC ATG GCC AGC CCC GTG GCC CCA 1395 451 Thr Thr Ile Leu Gln Asn Phe Ser Met Ala Ser Pro Val Ala Pro 465 1396 GAA GAC ATC GAT CTG ACA CCC CAG GAG TGT GGT GTG GGC AAA ATA 1440 466 Glu Asp Ile Asp Leu Thr Pro Gln Glu Cys Gly Val Gly Lys Ile 480 1441 CCC CCA ACA TAC CAG ATC CGC TTC CTG CCC CGC TGA 1476 481 Pro Pro Thr Tyr Gln Ile Arg Phe Leu Pro Arg *** 492

【００６２】配列番号：１１配列の長さ：１４７３配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列 1 ATG GAA CCT TTT GTG GTC CTG GTG CTG TGT CTC TCT TTT ATG CTT 45 1 Met Glu Pro Phe Val Val Leu Val Leu Cys Leu Ser Phe Met Leu 15 46 CTC TTT TCA CTC TGG AGA CAG AGC TGT AGG AGA AGG AAG CTC CCT 90 16 Leu Phe Ser Leu Trp Arg Gln Ser Cys Arg Arg Arg Lys Leu Pro 30 91 CCT GGC CCC ACT CCT CTT CCT ATT ATT GGA AAT ATG CTA CAG ATA 135 31 Pro Gly Pro Thr Pro Leu Pro Ile Ile Gly Asn Met Leu Gln Ile 45 136 GAT GTT AAG GAC ATC TGC AAA TCT TTC ACC AAT TTC TCA AAA GTC 180 46 Asp Val Lys Asp Ile Cys Lys Ser Phe Thr Asn Phe Ser Lys Val 60 181 TAT GGT CCT GTG TTC ACC GTG TAT TTT GGC ATG AAT CCC ATA GTG 225 61 Tyr Gly Pro Val Phe Thr Val Tyr Phe Gly Met Asn Pro Ile Val 75 226 GTG TTT CAT GGA TAT GAG GCA GTG AAG GAA GCC CTG ATT GAT AAT 270 76 Val Phe His Gly Tyr Glu Ala Val Lys Glu Ala Leu Ile Asp Asn 90 271 GGA GAG GAG TTT TCT GGA AGA GGC AAT TCC CCA ATA TCT CAA AGA 315 91 Gly Glu Glu Phe Ser Gly Arg Gly Asn Ser Pro Ile Ser Gln Arg 105 316 ATT ACT AAA GGA CTT GGA ATC ATT TCC AGC AAT GGA AAG AGA TGG 360 106 Ile Thr Lys Gly Leu Gly Ile Ile Ser Ser Asn Gly Lys Arg Trp 120 361 AAG GAG ATC CGG CGT TTC TCC CTC ACA ACC TTG CGG AAT TTT GGG 405 121 Lys Glu Ile Arg Arg Phe Ser Leu Thr Thr Leu Arg Asn Phe Gly 135 406 ATG GGG AAG AGG AGC ATT GAG GAC CGT GTT CAA GAG GAA GCT CAC 450 136 Met Gly Lys Arg Ser Ile Glu Asp Arg Val Gln Glu Glu Ala His 150 451 TGC CTT GTG GAG GAG TTG AGA AAA ACC AAG GCT TCA CCC TGT GAT 495 151 Cys Leu Val Glu Glu Leu Arg Lys Thr Lys Ala Ser Pro Cys Asp 165 496 CCC ACT TTC ATC CTG GGC TGT GCT CCC TGC AAT GTG ATC TGC TCC 540 166 Pro Thr Phe Ile Leu Gly Cys Ala Pro Cys Asn Val Ile Cys Ser 180 541 GTT GTT TTC CAG AAA CGA TTT GAT TAT AAA GAT CAG AAT TTT CTC 585 181 Val Val Phe Gln Lys Arg Phe Asp Tyr Lys Asp Gln Asn Phe Leu 195 586 ACC CTG ATG AAA AGA TTC AAT GAA AAC TTC AGG ATT CTG AAC TCC 630 196 Thr Leu Met Lys Arg Phe Asn Glu Asn Phe Arg Ile Leu Asn Ser 210 631 CCA TGG ATC CAG GTC TGC AAT AAT TTC CCT CTA CTC ATT GAT TGT 675 211 Pro Trp Ile Gln Val Cys Asn Asn Phe Pro Leu Leu Ile Asp Cys 225 676 TTC CCA GGA ACT CAC AAC AAA GTG CTT AAA AAT GTT GCT CTT ACA 720 226 Phe Pro Gly Thr His Asn Lys Val Leu Lys Asn Val Ala Leu Thr 240 721 CGA AGT TAC ATT AGG GAG AAA GTA AAA GAA CAC CAA GCA TCA CTG 765 241 Arg Ser Tyr Ile Arg Glu Lys Val Lys Glu His Gln Ala Ser Leu 255 766 GAT GTT AAC AAT CCT CGG GAC TTT ATC GAT TGC TTC CTG ATC AAA 810 256 Asp Val Asn Asn Pro Arg Asp Phe Ile Asp Cys Phe Leu Ile Lys 270 811 ATG GAG CAG GAA AAG GAC AAC CAA AAG TCA GAA TTC AAT ATT GAA 855 271 Met Glu Gln Glu Lys Asp Asn Gln Lys Ser Glu Phe Asn Ile Glu 285 856 AAC TTG GTT GGC ACT GTA GCT GAT CTA TTT GTT GCT GGA ACA GAG 900 286 Asn Leu Val Gly Thr Val Ala Asp Leu Phe Val Ala Gly Thr Glu 300 901 ACA ACA AGC ACC ACT CTG AGA TAT GGA CTC CTG CTC CTG CTG AAG 945 301 Thr Thr Ser Thr Thr Leu Arg Tyr Gly Leu Leu Leu Leu Leu Lys 315 946 CAC CCA GAG GTC ACA GCT AAA GTC CAG GAA GAG ATT GAT CAT GTA 990 316 His Pro Glu Val Thr Ala Lys Val Gln Glu Glu Ile Asp His Val 330 991 ATT GGC AGA CAC AGG AGC CCC TGC ATG CAG GAT AGG AGC CAC ATG 1035 331 Ile Gly Arg His Arg Ser Pro Cys Met Gln Asp Arg Ser His Met 345 1036 CCT TAC ACT GAT GCT GTA GTG CAC GAG ATC CAG AGA TAC AGT GAC 1080 346 Pro Tyr Thr Asp Ala Val Val His Glu Ile Gln Arg Tyr Ser Asp 360 1081 CTT GTC CCC ACC GGT GTG CCC CAT GCA GTG ACC ACT GAT ACT AAG 1125 361 Leu Val Pro Thr Gly Val Pro His Ala Val Thr Thr Asp Thr Lys 375 1126 TTC AGA AAC TAC CTC ATC CCC AAG GGC ACA ACC ATA ATG GCA TTA 1170 376 Phe Arg Asn Tyr Leu Ile Pro Lys Gly Thr Thr Ile Met Ala Leu 390 1171 CTG ACT TCC GTG CTA CAT GAT GAC AAA GAA TTT CCT AAT CCA AAT 1215 391 Leu Thr Ser Val Leu His Asp Asp Lys Glu Phe Pro Asn Pro Asn 405 1216 ATC TTT GAC CCT GGC CAC TTT CTA GAT AAG AAT GGC AAC TTT AAG 1260 406 Ile Phe Asp Pro Gly His Phe Leu Asp Lys Asn Gly Asn Phe Lys 420 1261 AAA AGT GAC TAC TTC ATG CCT TTC TCA GCA GGA AAA CGA ATT TGT 1305 421 Lys Ser Asp Tyr Phe Met Pro Phe Ser Ala Gly Lys Arg Ile Cys 435 1306 GCA GGA GAA GGA CTT GCC CGC ATG GAG CTA TTT TTA TTT CTA ACC 1350 436 Ala Gly Glu Gly Leu Ala Arg Met Glu Leu Phe Leu Phe Leu Thr 450 1351 ACA ATT TTA CAG AAC TTT AAC CTG AAA TCT GTT GAT GAT TTA AAG 1395 451 Thr Ile Leu Gln Asn Phe Asn Leu Lys Ser Val Asp Asp Leu Lys 465 1396 AAC CTC AAT ACT ACT GCA GTT ACC AAA GGG ATT GTT TCT CTG CCA 1440 466 Asn Leu Asn Thr Thr Ala Val Thr Lys Gly Ile Val Ser Leu Pro 480 1441 CCC TCA TAC CAG ATC TGC TTC ATC CCT GTC TGA 1473 481 Pro Ser Tyr Gln Ile Cys Phe Ile Pro Val *** 491

【００６３】配列番号：１２配列の長さ：１４７３配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列 1 ATG GAA CCT TTT GTG GTC CTG GTG CTG TGT CTC TCT TTT ATG CTT 45 1 Met Glu Pro Phe Val Val Leu Val Leu Cys Leu Ser Phe Met Leu 15 46 CTC TTT TCA CTC TGG AGA CAG AGC TGT AGG AGA AGG AAG CTC CCT 90 16 Leu Phe Ser Leu Trp Arg Gln Ser Cys Arg Arg Arg Lys Leu Pro 30 91 CCT GGC CCC ACT CCT CTT CCT ATT ATT GGA AAT ATG CTA CAG ATA 135 31 Pro Gly Pro Thr Pro Leu Pro Ile Ile Gly Asn Met Leu Gln Ile 45 136 GAT GTT AAG GAC ATC TGC AAA TCT TTC ACC AAT TTC TCA AAA GTC 180 46 Asp Val Lys Asp Ile Cys Lys Ser Phe Thr Asn Phe Ser Lys Val 60 181 TAT GGT CCT GTG TTC ACC GTG TAT TTT GGC ATG AAT CCC ATA GTG 225 61 Tyr Gly Pro Val Phe Thr Val Tyr Phe Gly Met Asn Pro Ile Val 75 226 GTG TTT CAT GGA TAT GAG GCA GTG AAG GAA GCC CTG ATT GAT AAT 270 76 Val Phe His Gly Tyr Glu Ala Val Lys Glu Ala Leu Ile Asp Asn 90 271 GGA GAG GAG TTT TCT GGA AGA GGC AAT TCC CCA ATA TCT CAA AGA 315 91 Gly Glu Glu Phe Ser Gly Arg Gly Asn Ser Pro Ile Ser Gln Arg 105 316 ATT ACT AAA GGA CTT GGA ATC ATT TCC AGC AAT GGA AAG AGA TGG 360 106 Ile Thr Lys Gly Leu Gly Ile Ile Ser Ser Asn Gly Lys Arg Trp 120 361 AAG GAG ATC CGG CGT TTC TCC CTC ACA ACC TTG CGG AAT TTT GGG 405 121 Lys Glu Ile Arg Arg Phe Ser Leu Thr Thr Leu Arg Asn Phe Gly 135 406 ATG GGG AAG AAG AGC ATT GAG GAC CGT GTT CAA GAG GAA GCT CAC 450 136 Met Gly Lys Lys Ser Ile Glu Asp Arg Val Gln Glu Glu Ala His 150 451 TGC CTT GTG GAG GAG TTG AGA AAA ACC AAG GCT TCA CCC TGT GAT 495 151 Cys Leu Val Glu Glu Leu Arg Lys Thr Lys Ala Ser Pro Cys Asp 165 496 CCC ACT TTC ATC CTG GGC TGT GCT CCC TGC AAT GTG ATC TGC TCC 540 166 Pro Thr Phe Ile Leu Gly Cys Ala Pro Cys Asn Val Ile Cys Ser 180 541 GTT GTT TTC CAG AAA CGA TTT GAT TAT AAA GAT CAG AAT TTT CTC 585 181 Val Val Phe Gln Lys Arg Phe Asp Tyr Lys Asp Gln Asn Phe Leu 195 586 ACC CTG ATG AAA AGA TTC AAT GAA AAC TTC AGG ATT CTG AAC TCC 630 196 Thr Leu Met Lys Arg Phe Asn Glu Asn Phe Arg Ile Leu Asn Ser 210 631 CCA TGG ATC CAG GTC TGC AAT AAT TTC CCT CTA CTC ATT GAT TGT 675 211 Pro Trp Ile Gln Val Cys Asn Asn Phe Pro Leu Leu Ile Asp Cys 225 676 TTC CCA GGA ACT CAC AAC AAA GTG CTT AAA AAT GTT GCT CTT ACA 720 226 Phe Pro Gly Thr His Asn Lys Val Leu Lys Asn Val Ala Leu Thr 240 721 CGA AGT TAC ATT AGG GAG AAA GTA AAA GAA CAC CAA GCA TCA CTG 765 241 Arg Ser Tyr Ile Arg Glu Lys Val Lys Glu His Gln Ala Ser Leu 255 766 GAT GTT AAC AAT CCT CGG GAC TTT ATC GAT TGC TTC CTG ATC AAA 810 256 Asp Val Asn Asn Pro Arg Asp Phe Ile Asp Cys Phe Leu Ile Lys 270 811 ATG GAG CAG GAA AAG GAC AAC CAA AAG TCA GAA TTC AAT ATT GAA 855 271 Met Glu Gln Glu Lys Asp Asn Gln Lys Ser Glu Phe Asn Ile Glu 285 856 AAC TTG GTT GGC ACT GTA GCT GAT CTA TTT GTT GCT GGA ACA GAG 900 286 Asn Leu Val Gly Thr Val Ala Asp Leu Phe Val Ala Gly Thr Glu 300 901 ACA ACA AGC ACC ACT CTG AGA TAT GGA CTC CTG CTC CTG CTG AAG 945 301 Thr Thr Ser Thr Thr Leu Arg Tyr Gly Leu Leu Leu Leu Leu Lys 315 946 CAC CCA GAG GTC ACA GCT AAA GTC CAG GAA GAG ATT GAT CAT GTA 990 316 His Pro Glu Val Thr Ala Lys Val Gln Glu Glu Ile Asp His Val 330 991 ATT GGC AGA CAC AGG AGC CCC TGC ATG CAG GAT AGG AGC CAC ATG 1035 331 Ile Gly Arg His Arg Ser Pro Cys Met Gln Asp Arg Ser His Met 345 1036 CCT TAC ACT GAT GCT GTA GTG CAC GAG ATC CAG AGA TAC AGT GAC 1080 346 Pro Tyr Thr Asp Ala Val Val His Glu Ile Gln Arg Tyr Ser Asp 360 1081 CTT GTC CCC ACC GGT GTG CCC CAT GCA GTG ACC ACT GAT ACT AAG 1125 361 Leu Val Pro Thr Gly Val Pro His Ala Val Thr Thr Asp Thr Lys 375 1126 TTC AGA AAC TAC CTC ATC CCC AAG GGC ACA ACC ATA ATG GCA TTA 1170 376 Phe Arg Asn Tyr Leu Ile Pro Lys Gly Thr Thr Ile Met Ala Leu 390 1171 CTG ACT TCC GTG CTA CAT GAT GAC AGA GAA TTT CCT AAT CCA AAT 1215 391 Leu Thr Ser Val Leu His Asp Asp Arg Glu Phe Pro Asn Pro Asn 405 1216 ATC TTT GAC CCT GGC CAC TTT CTA GAT AAG AAT GGC AAC TTT AAG 1260 406 Ile Phe Asp Pro Gly His Phe Leu Asp Lys Asn Gly Asn Phe Lys 420 1261 AAA AGT GAC TAC TTC ATG CCT TTC TCA GCA GGA AAA CGA ATT TGT 1305 421 Lys Ser Asp Tyr Phe Met Pro Phe Ser Ala Gly Lys Arg Ile Cys 435 1306 GCA GGA GAA GGA CTT GCC CGC ATG GAG CTA TTT TTA TTT CTA ACC 1350 436 Ala Gly Glu Gly Leu Ala Arg Met Glu Leu Phe Leu Phe Leu Thr 450 1351 ACA ATT TTA CAG AAC TTT AAC CTG AAA TCT GTT GAT GAT TTA AAG 1395 451 Thr Ile Leu Gln Asn Phe Asn Leu Lys Ser Val Asp Asp Leu Lys 465 1396 AAC CTC AAT ACT ACT GCA GTT ACC AAA GGG ATT GTT TCT CTG CCA 1440 466 Asn Leu Asn Thr Thr Ala Val Thr Lys Gly Ile Val Ser Leu Pro 480 1441 CCC TCA TAC CAG ATC TGC TTC ATC CCT GTC TGA 1473 481 Pro Ser Tyr Gln Ile Cys Phe Ile Pro Val *** 491

【００６４】配列番号：１３配列の長さ：１４７３配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列 1 ATG GAA CCT TTT GTG GTC CTG GTG CTG TGT CTC TCT TTT ATG CTT 45 1 Met Glu Pro Phe Val Val Leu Val Leu Cys Leu Ser Phe Met Leu 15 46 CTC TTT TCA CTC TGG AGA CAG AGC TGT AGG AGA AGG AAG CTC CCT 90 16 Leu Phe Ser Leu Trp Arg Gln Ser Cys Arg Arg Arg Lys Leu Pro 30 91 CCT GGC CCC ACT CCT CTT CCT ATT ATT GGA AAT ATG CTA CAG ATA 135 31 Pro Gly Pro Thr Pro Leu Pro Ile Ile Gly Asn Met Leu Gln Ile 45 136 GAT GTT AAG GAC ATC TGC AAA TCT TTC ACC AAT TTC TCA AAA GTC 180 46 Asp Val Lys Asp Ile Cys Lys Ser Phe Thr Asn Phe Ser Lys Val 60 181 TAT GGT CCT GTG TTC ACC GTG TAT TTT GGC ATG AAT CCC ATA GTG 225 61 Tyr Gly Pro Val Phe Thr Val Tyr Phe Gly Met Asn Pro Ile Val 75 226 GTG TTT CAT GGA TAT GTG GCA GTG AAG GAA GCC CTG ATT GAT AAT 270 76 Val Phe His Gly Tyr Val Ala Val Lys Glu Ala Leu Ile Asp Asn 90 271 GGA GAG GAG TTT TCT GGA AGA GGC AAT TCC CCA ATA TCT CAA AGA 315 91 Gly Glu Glu Phe Ser Gly Arg Gly Asn Ser Pro Ile Ser Gln Arg 105 316 ATT ACT AAA GGA CTT GGA ATC ATT TCC AGC AAT GGA AAG AGA TGG 360 106 Ile Thr Lys Gly Leu Gly Ile Ile Ser Ser Asn Gly Lys Arg Trp 120 361 AAG GAG ATC CGG CGT TTC TCC CTC ACA ACC TTG CGG AAT TTT GGG 405 121 Lys Glu Ile Arg Arg Phe Ser Leu Thr Thr Leu Arg Asn Phe Gly 135 406 ATG GGG AAG AAG AGC ATT GAG GAC CGT GTT CAA GAG GAA GCT CAC 450 136 Met Gly Lys Lys Ser Ile Glu Asp Arg Val Gln Glu Glu Ala His 150 451 TGC CTT GTG GAG GAG TTG AGA AAA ACC AAG GCT TCA CCC TGT GAT 495 151 Cys Leu Val Glu Glu Leu Arg Lys Thr Lys Ala Ser Pro Cys Asp 165 496 CCC ACT TTC ATC CTG GGC TGT GCT CCC TGC AAT GTG ATC TGC TCC 540 166 Pro Thr Phe Ile Leu Gly Cys Ala Pro Cys Asn Val Ile Cys Ser 180 541 GTT GTT TTC CAG AAA CGA TTT GAT TAT AAA GAT CAG AAT TTT CTC 585 181 Val Val Phe Gln Lys Arg Phe Asp Tyr Lys Asp Gln Asn Phe Leu 195 586 ACC CTG ATG AAA AGA TTC AAT GAA AAC TTC AGG ATT CTG AAC TCC 630 196 Thr Leu Met Lys Arg Phe Asn Glu Asn Phe Arg Ile Leu Asn Ser 210 631 CCA TGG ATC CAG GTC TGC AAT AAT TTC CCT CTA CTC ATT GAT TGT 675 211 Pro Trp Ile Gln Val Cys Asn Asn Phe Pro Leu Leu Ile Asp Cys 225 676 TTC CCA GGA ACT CAC AAC AAA GTG CTT AAA AAT GTT GCT CTT ACA 720 226 Phe Pro Gly Thr His Asn Lys Val Leu Lys Asn Val Ala Leu Thr 240 721 CGA AGT TAC ATT AGG GAG AAA GTA AAA GAA CAC CAA GCA TCA CTG 765 241 Arg Ser Tyr Ile Arg Glu Lys Val Lys Glu His Gln Ala Ser Leu 255 766 GAT GTT AAC AAT CCT CGG GAC TTT ATC GAT TGC TTC CTG ATC AAA 810 256 Asp Val Asn Asn Pro Arg Asp Phe Ile Asp Cys Phe Leu Ile Lys 270 811 ATG GAG CAG GAA AAG GAC AAC CAA AAG TCA GAA TTC AAT ATT GAA 855 271 Met Glu Gln Glu Lys Asp Asn Gln Lys Ser Glu Phe Asn Ile Glu 285 856 AAC TTG GTT GGC ACT GTA GCT GAT CTA TTT GTT GCT GGA ACA GAG 900 286 Asn Leu Val Gly Thr Val Ala Asp Leu Phe Val Ala Gly Thr Glu 300 901 ACA ACA AGC ACC ACT CTG AGA TAT GGA CTC CTG CTC CTG CTG AAG 945 301 Thr Thr Ser Thr Thr Leu Arg Tyr Gly Leu Leu Leu Leu Leu Lys 315 946 CAC CCA GAG GTC ACA GCT AAA GTC CAG GAA GAG ATT GAT CAT GTA 990 316 His Pro Glu Val Thr Ala Lys Val Gln Glu Glu Ile Asp His Val 330 991 ATT GGC AGA CAC AGG AGC CCC TGC ATG CAG GAT AGG AGC CAC ATG 1035 331 Ile Gly Arg His Arg Ser Pro Cys Met Gln Asp Arg Ser His Met 345 1036 CCT TAC ACT GAT GCT GTA GTG CAC GAG ATC CAG AGA TAC AGT GAC 1080 346 Pro Tyr Thr Asp Ala Val Val His Glu Ile Gln Arg Tyr Ser Asp 360 1081 CTT GTC CCC ACC GGT GTG CCC CAT GCA GTG ACC ACT GAT ACT AAG 1125 361 Leu Val Pro Thr Gly Val Pro His Ala Val Thr Thr Asp Thr Lys 375 1126 TTC AGA AAC TAC CTC ATC CCC AAG GGC ACA ACC ATA ATG GCA TTA 1170 376 Phe Arg Asn Tyr Leu Ile Pro Lys Gly Thr Thr Ile Met Ala Leu 390 1171 CTG ACT TCC GTG CTA CAT GAT GAC AGA GAA TTT CCT AAT CCA AAT 1215 391 Leu Thr Ser Val Leu His Asp Asp Arg Glu Phe Pro Asn Pro Asn 405 1216 ATC TTT GAC CCT GGC CAC TTT CTA GAT AAG AAT GGC AAC TTT AAG 1260 406 Ile Phe Asp Pro Gly His Phe Leu Asp Lys Asn Gly Asn Phe Lys 420 1261 AAA AGT GAC TAC TTC ATG CCT TTC TCA GCA GGA AAA CGA ATT TGT 1305 421 Lys Ser Asp Tyr Phe Met Pro Phe Ser Ala Gly Lys Arg Ile Cys 435 1306 GCA GGA GAA GGA CTT GCC CGC ATG GAG CTA TTT TTA TTT CTA ACC 1350 436 Ala Gly Glu Gly Leu Ala Arg Met Glu Leu Phe Leu Phe Leu Thr 450 1351 ACA ATT TTA CAG AAC TTT AAC CTG AAA TCT GTT GAT GAT TTA AAG 1395 451 Thr Ile Leu Gln Asn Phe Asn Leu Lys Ser Val Asp Asp Leu Lys 465 1396 AAC CTC AAT ACT ACT GCA GTT ACC AAA GGG ATT GTT TCT CTG CCA 1440 466 Asn Leu Asn Thr Thr Ala Val Thr Lys Gly Ile Val Ser Leu Pro 480 1441 CCC TCA TAC CAG ATC TGC TTC ATC CCT GTC TGA 1473 481 Pro Ser Tyr Gln Ile Cys Phe Ile Pro Val *** 491

【００６５】配列番号：１４配列の長さ：１４７３配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列 1 ATG GAT CCA GCT GTG GCT CTG GTG CTC TGT CTC TCC TGT TTG TTT 45 1 Met Asp Pro Ala Val Ala Leu Val Leu Cys Leu Ser Cys Leu Phe 15 46 CTC CTT TCA CTC TGG AGG CAG AGC TCT GGA AGA GGG AGG CTC CCG 90 16 Leu Leu Ser Leu Trp Arg Gln Ser Ser Gly Arg Gly Arg Leu Pro 30 91 TCT GGC CCC ACT CCT CTC CCG ATT ATT GGA AAT ATC CTG CAG TTA 135 31 Ser Gly Pro Thr Pro Leu Pro Ile Ile Gly Asn Ile Leu Gln Leu 45 136 GAT GTT AAG GAC ATG AGC AAA TCC TTA ACC AAT TTC TCA AAA GTC 180 46 Asp Val Lys Asp Met Ser Lys Ser Leu Thr Asn Phe Ser Lys Val 60 181 TAT GGC CCT GTG TTC ACT GTG TAT TTT GGC CTG AAG CCC ATT GTG 225 61 Tyr Gly Pro Val Phe Thr Val Tyr Phe Gly Leu Lys Pro Ile Val 75 226 GTG TTG CAT GGA TAT GAA GCA GTG AAG GAG GCC CTG ATT GAT CAT 270 76 Val Leu His Gly Tyr Glu Ala Val Lys Glu Ala Leu Ile Asp His 90 271 GGA GAG GAG TTT TCT GGA AGA GGA AGT TTT CCA GTG GCT GAA AAA 315 91 Gly Glu Glu Phe Ser Gly Arg Gly Ser Phe Pro Val Ala Glu Lys 105 316 GTT AAC AAA GGA CTT GGA ATC CTT TTC AGC AAT GGA AAG AGA TGG 360 106 Val Asn Lys Gly Leu Gly Ile Leu Phe Ser Asn Gly Lys Arg Trp 120 361 AAG GAG ATC CGG CGT TTC TGC CTC ATG ACT CTG CGG AAT TTT GGG 405 121 Lys Glu Ile Arg Arg Phe Cys Leu Met Thr Leu Arg Asn Phe Gly 135 406 ATG GGG AAG AGG AGC ATC GAG GAC CGT GTT CAA GAG GAA GCC CGC 450 136 Met Gly Lys Arg Ser Ile Glu Asp Arg Val Gln Glu Glu Ala Arg 150 451 TGC CTT GTG GAG GAG TTG AGA AAA ACC AAT GCC TCA CCC TGT GAT 495 151 Cys Leu Val Glu Glu Leu Arg Lys Thr Asn Ala Ser Pro Cys Asp 165 496 CCC ACT TTC ATC CTG GGC TGT GCT CCC TGC AAT GTG ATC TGC TCT 540 166 Pro Thr Phe Ile Leu Gly Cys Ala Pro Cys Asn Val Ile Cys Ser 180 541 GTT ATT TTC CAT GAT CGA TTT GAT TAT AAA GAT CAG AGG TTT CTT 585 181 Val Ile Phe His Asp Arg Phe Asp Tyr Lys Asp Gln Arg Phe Leu 195 586 AAC TTG ATG GAA AAA TTC AAT GAA AAC CTC AGG ATT CTG AGC TCT 630 196 Asn Leu Met Glu Lys Phe Asn Glu Asn Leu Arg Ile Leu Ser Ser 210 631 CCA TGG ATC CAG GTC TGC AAT AAT TTC CCT GCT CTC ATC GAT TAT 675 211 Pro Trp Ile Gln Val Cys Asn Asn Phe Pro Ala Leu Ile Asp Tyr 225 676 CTC CCA GGA AGT CAT AAT AAA ATA GCT GAA AAT TTT GCT TAC ATT 720 226 Leu Pro Gly Ser His Asn Lys Ile Ala Glu Asn Phe Ala Tyr Ile 240 721 AAA AGT TAT GTA TTG GAG AGA ATA AAA GAA CAT CAA GAA TCC CTG 765 241 Lys Ser Tyr Val Leu Glu Arg Ile Lys Glu His Gln Glu Ser Leu 255 766 GAC ATG AAC AGT GCT CGG GAC TTT ATT GAT TGT TTC CTG ATC AAA 810 256 Asp Met Asn Ser Ala Arg Asp Phe Ile Asp Cys Phe Leu Ile Lys 270 811 ATG GAA CAG GAA AAG CAC AAT CAA CAG TCT GAA TTT ACT GTT GAA 855 271 Met Glu Gln Glu Lys His Asn Gln Gln Ser Glu Phe Thr Val Glu 285 856 AGC TTG ATA GCC ACT GTA ACT GAT ATG TTT GGG GCT GGA ACA GAG 900 286 Ser Leu Ile Ala Thr Val Thr Asp Met Phe Gly Ala Gly Thr Glu 300 901 ACA ACG AGC ACC ACT CTG AGA TAT GGA CTC CTG CTC CTG CTG AAG 945 301 Thr Thr Ser Thr Thr Leu Arg Tyr Gly Leu Leu Leu Leu Leu Lys 315 946 TAC CCA GAG GTC ACA GCT AAA GTC CAG GAA GAG ATT GAA TGT GTA 990 316 Tyr Pro Glu Val Thr Ala Lys Val Gln Glu Glu Ile Glu Cys Val 330 991 GTT GGC AGA AAC CGG AGC CCC TGT ATG CAG GAC AGG AGT CAC ATG 1035 331 Val Gly Arg Asn Arg Ser Pro Cys Met Gln Asp Arg Ser His Met 345 1036 CCC TAC ACA GAT GCT GTG GTG CAC GAG ATC CAG AGA TAC ATT GAC 1080 346 Pro Tyr Thr Asp Ala Val Val His Glu Ile Gln Arg Tyr Ile Asp 360 1081 CTC CTC CCC ACC AAC CTG CCC CAT GCA GTG ACC TGT GAT GTT AAA 1125 361 Leu Leu Pro Thr Asn Leu Pro His Ala Val Thr Cys Asp Val Lys 375 1126 TTC AAA AAC TAC CTC ATC CCC AAG GGC ACG ACC ATA ATA ACA TCC 1170 376 Phe Lys Asn Tyr Leu Ile Pro Lys Gly Thr Thr Ile Ile Thr Ser 390 1171 CTG ACT TCT GTG CTG CAC AAT GAC AAA GAA TTC CCC AAC CCA GAG 1215 391 Leu Thr Ser Val Leu His Asn Asp Lys Glu Phe Pro Asn Pro Glu 405 1216 ATG TTT GAC CCT GGC CAC TTT CTG GAT AAG AGT GGC AAC TTT AAG 1260 406 Met Phe Asp Pro Gly His Phe Leu Asp Lys Ser Gly Asn Phe Lys 420 1261 AAA AGT GAC TAC TTC ATG CCT TTC TCA GCA GGA AAA CGG ATG TGT 1305 421 Lys Ser Asp Tyr Phe Met Pro Phe Ser Ala Gly Lys Arg Met Cys 435 1306 ATG GGA GAG GGC CTG GCC CGC ATG GAG CTG TTT TTA TTC CTG ACC 1350 436 Met Gly Glu Gly Leu Ala Arg Met Glu Leu Phe Leu Phe Leu Thr 450 1351 ACC ATT TTG CAG AAC TTT AAC CTG AAA TCT CAG GTT GAC CCA AAG 1395 451 Thr Ile Leu Gln Asn Phe Asn Leu Lys Ser Gln Val Asp Pro Lys 465 1396 GAT ATT GAC ATC ACC CCC ATT GCC AAT GCA TTT GGT CGT GTG CCA 1440 466 Asp Ile Asp Ile Thr Pro Ile Ala Asn Ala Phe Gly Arg Val Pro 480 1441 CCC TTG TAC CAG CTC TGC TTC ATT CCT GTC TGA 1473 481 Pro Leu Tyr Gln Leu Cys Phe Ile Pro Val *** 491

【００６６】配列番号：１５配列の長さ：１４７３配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列 1 ATG GAT CCT TTT GTG GTC CTT GTG CTC TGT CTC TCA TGT TTG CTT 45 1 Met Asp Pro Phe Val Val Leu Val Leu Cys Leu Ser Cys Leu Leu 15 46 CTC CTT TCA CTC TGG AGA CAG AGC TCT GGG AGA GGA AAA CTC CCT 90 16 Leu Leu Ser Leu Trp Arg Gln Ser Ser Gly Arg Gly Lys Leu Pro 30 91 CCT GGC CCC ACT CCT CTC CCA GTG ATT GGA AAT ATC CTA CAG ATA 135 31 Pro Gly Pro Thr Pro Leu Pro Val Ile Gly Asn Ile Leu Gln Ile 45 136 GAT ATT AAG GAT GTC AGC AAA TCC TTA ACC AAT CTC TCA AAA ATC 180 46 Asp Ile Lys Asp Val Ser Lys Ser Leu Thr Asn Leu Ser Lys Ile 60 181 TAT GGC CCT GTG TTC ACT CTG TAT TTT GGC CTC GAG CGC ATG GTG 225 61 Tyr Gly Pro Val Phe Thr Leu Tyr Phe Gly Leu Glu Arg Met Val 75 226 GTG CTG CAT GGA TAT GAA GTG GTG AAG GAA GCC CTG ATT GAT CTT 270 76 Val Leu His Gly Tyr Glu Val Val Lys Glu Ala Leu Ile Asp Leu 90 271 GGA GAG GAG TTT TCT GGA AGA GGC CAT TTC CCA CTG GCT GAA AGA 315 91 Gly Glu Glu Phe Ser Gly Arg Gly His Phe Pro Leu Ala Glu Arg 105 316 GCT AAC AGA GGA TTT GGA ATC GTT TTC AGC AAT GGA AAG AGA TGG 360 106 Ala Asn Arg Gly Phe Gly Ile Val Phe Ser Asn Gly Lys Arg Trp 120 361 AAG GAG ATC CGG CGT TTC TCC CTC ATG ACG CTG CGG AAT TTT GGG 405 121 Lys Glu Ile Arg Arg Phe Ser Leu Met Thr Leu Arg Asn Phe Gly 135 406 ATG GGG AAG AGG AGC ATT GAG GAC CGT GTT CAA GAG GAA GCC CGC 450 136 Met Gly Lys Arg Ser Ile Glu Asp Arg Val Gln Glu Glu Ala Arg 150 451 TGC CTT GTG GAG GAG TTG AGA AAA ACC AAG GCT TCA CCC TGT GAT 495 151 Cys Leu Val Glu Glu Leu Arg Lys Thr Lys Ala Ser Pro Cys Asp 165 496 CCC ACT TTC ATC CTG GGC TGT GCT CCC TGC AAT GTG ATC TGC TCC 540 166 Pro Thr Phe Ile Leu Gly Cys Ala Pro Cys Asn Val Ile Cys Ser 180 541 ATT ATT TTC CAG AAA CGT TTC GAT TAT AAA GAT CAG CAA TTT CTT 585 181 Ile Ile Phe Gln Lys Arg Phe Asp Tyr Lys Asp Gln Gln Phe Leu 195 586 AAC TTG ATG GAA AAA TTG AAT GAA AAC ATC AGG ATT GTA AGC ACC 630 196 Asn Leu Met Glu Lys Leu Asn Glu Asn Ile Arg Ile Val Ser Thr 210 631 CCC TGG ATC CAG ATA TGC AAT AAT TTT CCC ACT ATC ATT GAT TAT 675 211 Pro Trp Ile Gln Ile Cys Asn Asn Phe Pro Thr Ile Ile Asp Tyr 225 676 TTC CCG GGA ACC CAT AAC AAA TTA CTT AAA AAC CTT GCT TTT ATG 720 226 Phe Pro Gly Thr His Asn Lys Leu Leu Lys Asn Leu Ala Phe Met 240 721 GAA AGT GAT ATT TTG GAG AAA GTA AAA GAA CAC CAA GAA TCG ATG 765 241 Glu Ser Asp Ile Leu Glu Lys Val Lys Glu His Gln Glu Ser Met 255 766 GAC ATC AAC AAC CCT CGG GAC TTT ATT GAT TGC TTC CTG ATC AAA 810 256 Asp Ile Asn Asn Pro Arg Asp Phe Ile Asp Cys Phe Leu Ile Lys 270 811 ATG GAG AAG GAA AAG CAA AAC CAA CAG TCT GAA TTC ACT ATT GAA 855 271 Met Glu Lys Glu Lys Gln Asn Gln Gln Ser Glu Phe Thr Ile Glu 285 856 AAC TTG GTA ATC ACT GCA GCT GAC TTA CTT GGA GCT GGG ACA GAG 900 286 Asn Leu Val Ile Thr Ala Ala Asp Leu Leu Gly Ala Gly Thr Glu 300 901 ACA ACA AGC ACA ACC CTG AGA TAT GCT CTC CTT CTC CTG CTG AAG 945 301 Thr Thr Ser Thr Thr Leu Arg Tyr Ala Leu Leu Leu Leu Leu Lys 315 946 CAC CCA GAG GTC ACA GCT AAA GTC CAG GAA GAG ATT GAA CGT GTC 990 316 His Pro Glu Val Thr Ala Lys Val Gln Glu Glu Ile Glu Arg Val 330 991 GTT GGC AGA AAC CGG AGC CCC TGC ATG CAG GAC AGG GGC CAC ATG 1035 331 Val Gly Arg Asn Arg Ser Pro Cys Met Gln Asp Arg Gly His Met 345 1036 CCC TAC ACA GAT GCT GTG GTG CAC GAG GTC CAG AGA TAC ATC GAC 1080 346 Pro Tyr Thr Asp Ala Val Val His Glu Val Gln Arg Tyr Ile Asp 360 1081 CTC ATC CCC ACC AGC CTG CCC CAT GCA GTG ACC TGT GAC GTT AAA 1125 361 Leu Ile Pro Thr Ser Leu Pro His Ala Val Thr Cys Asp Val Lys 375 1126 TTC AGA AAC TAC CTC ATT CCC AAG GGC ACA ACC ATA TTA ACT TCC 1170 376 Phe Arg Asn Tyr Leu Ile Pro Lys Gly Thr Thr Ile Leu Thr Ser 390 1171 CTC ACT TCT GTG CTA CAT GAC AAC AAA GAA TTC CCC AAC CCA GAG 1215 391 Leu Thr Ser Val Leu His Asp Asn Lys Glu Phe Pro Asn Pro Glu 405 1216 ATG TTT GAC CCT CGT CAC TTT CTG GAT GAA GGT GGA AAT TTT AAG 1260 406 Met Phe Asp Pro Arg His Phe Leu Asp Glu Gly Gly Asn Phe Lys 420 1261 AAA AGT AAC TAC TTC ATG CCT TTC TCA GCA GGA AAA CGG ATT TGT 1305 421 Lys Ser Asn Tyr Phe Met Pro Phe Ser Ala Gly Lys Arg Ile Cys 435 1306 GTG GGA GAG GGC CTG GCC CGC ATG GAG CTG TTT TTA TTC CTG ACC 1350 436 Val Gly Glu Gly Leu Ala Arg Met Glu Leu Phe Leu Phe Leu Thr 450 1351 TTC ATT TTA CAG AAC TTT AAC CTG AAA TCT CTG ATT GAC CCA AAG 1395 451 Phe Ile Leu Gln Asn Phe Asn Leu Lys Ser Leu Ile Asp Pro Lys 465 1396 GAC CTT GAC ACA ACT CCT GTT GTC AAT GGA TTT GCT TCT GTC CCG 1440 466 Asp Leu Asp Thr Thr Pro Val Val Asn Gly Phe Ala Ser Val Pro 480 1441 CCC TTC TAT CAG CTG TGC TTC ATT CCT GTC TGA 1473 481 Pro Phe Tyr Gln Leu Cys Phe Ile Pro Val *** 491

【００６７】配列番号：１６配列の長さ：１４９４配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列 1 ATG GGG CTA GAA GCA CTG GTG CCC CTG GCC GTG ATA GTG GCC ATC 45 1 Met Gly Leu Glu Ala Leu Val Pro Leu Ala Val Ile Val Ala Ile 15 46 TTC CTG CTC CTG GTG GAC CTG ATG CAC CGG CGC CAA CGC TGG GCT 90 16 Phe Leu Leu Leu Val Asp Leu Met His Arg Arg Gln Arg Trp Ala 30 91 GCA CGC TAC CCA CCA GGC CCC CTG CCA CTG CCC GGG CTG GGC AAC 135 31 Ala Arg Tyr Pro Pro Gly Pro Leu Pro Leu Pro Gly Leu Gly Asn 45 136 CTG CTG CAT GTG GAC TTC CAG AAC ACA CCA TAC TGC TTC GAC CAG 180 46 Leu Leu His Val Asp Phe Gln Asn Thr Pro Tyr Cys Phe Asp Gln 60 181 TTG CGG CGC CGC TTC GGG GAC GTG TTC AGC CTG CAG CTG GCC TGG 225 61 Leu Arg Arg Arg Phe Gly Asp Val Phe Ser Leu Gln Leu Ala Trp 75 226 ACG CCG GTG GTC GTG CTC AAT GGG CTG GCG GCC GTG CGC GAG GCG 270 76 Thr Pro Val Val Val Leu Asn Gly Leu Ala Ala Val Arg Glu Ala 90 271 CTG GTG ACC CAC GGC GAG GAC ACC GCC GAC CGC CCG CCT GTG CCC 315 91 Leu Val Thr His Gly Glu Asp Thr Ala Asp Arg Pro Pro Val Pro 105 316 ATC ACC CAG ATC CTG GGT TTC GGG CCG CGT TCC CAA GGG GTG TTC 360 106 Ile Thr Gln Ile Leu Gly Phe Gly Pro Arg Ser Gln Gly Val Phe 120 361 CTG GCG CGC TAT GGG CCC GCG TGG CGC GAG CAG AGG CGC TTC TCC 405 121 Leu Ala Arg Tyr Gly Pro Ala Trp Arg Glu Gln Arg Arg Phe Ser 135 406 GTC TCC ACC TTG CGC AAC TTG GGC CTG GGC AAG AAG TCG CTG GAG 450 136 Val Ser Thr Leu Arg Asn Leu Gly Leu Gly Lys Lys Ser Leu Glu 150 451 CAG TGG GTG ACC GAG GAG GCC GCC TGC CTT TGT GCC GCC TTC GCC 495 151 Gln Trp Val Thr Glu Glu Ala Ala Cys Leu Cys Ala Ala Phe Ala 165 496 AAC CAC TCC GGA CGC CCC TTT CGC CCC AAC GGT CTC TTG GAC AAA 540 166 Asn His Ser Gly Arg Pro Phe Arg Pro Asn Gly Leu Leu Asp Lys 180 541 GCC GTG AGC AAC GTG ATC GCC TCC CTC ACC TGC GGG CGC CGC TTC 585 181 Ala Val Ser Asn Val Ile Ala Ser Leu Thr Cys Gly Arg Arg Phe 195 586 GAA TAC GAC GAC CCT CGC TTC CTC AGG CTG CTG GAC CTA GCT CAG 630 196 Glu Tyr Asp Asp Pro Arg Phe Leu Arg Leu Leu Asp Leu Ala Gln 210 631 GAG GGA CTG AAG GAG GAG TCG GGC TTT CTG CGC GAG GTG CTG AAT 675 211 Glu Gly Leu Lys Glu Glu Ser Gly Phe Leu Arg Glu Val Leu Asn 225 676 GCT GTC CCC GTC CTC CTG CAT ATC CCA GCG CTG GCT GGC AAG GTC 720 226 Ala Val Pro Val Leu Leu His Ile Pro Ala Leu Ala Gly Lys Val 240 721 CTA CGC TTC CAA AAG GCT TTC CTG ACC CAG CTG GAT GAG CTG CTA 765 241 Leu Arg Phe Gln Lys Ala Phe Leu Thr Gln Leu Asp Glu Leu Leu 255 766 ACT GAG CAC AGG ATG ACC TGG GAC CCA GCC CAG CCC CCC CGA GAC 810 256 Thr Glu His Arg Met Thr Trp Asp Pro Ala Gln Pro Pro Arg Asp 270 811 CTG ACT GAG GCC TTC CTG GCA GAG ATG GAG AAG GCC AAG GGG AAC 855 271 Leu Thr Glu Ala Phe Leu Ala Glu Met Glu Lys Ala Lys Gly Asn 285 856 CCT GAG AGC AGC TTC AAT GAT GAG AAC CTG TGC ATA GTG GTG GCT 900 286 Pro Glu Ser Ser Phe Asn Asp Glu Asn Leu Cys Ile Val Val Ala 300 901 GAC CTG TTC TCT GCC GGG ATG GTG ACC ACC TCG ACC ACG CTG GCC 945 301 Asp Leu Phe Ser Ala Gly Met Val Thr Thr Ser Thr Thr Leu Ala 315 946 TGG GGC CTC CTG CTC ATG ATC CTA CAT CCG GAT GTG CAG CGC CGT 990 316 Trp Gly Leu Leu Leu Met Ile Leu His Pro Asp Val Gln Arg Arg 330 991 GTC CAA CAG GAG ATC GAC GAC GTG ATA GGG CAG GTG CGG CGA CCA 1035 331 Val Gln Gln Glu Ile Asp Asp Val Ile Gly Gln Val Arg Arg Pro 345 1036 GAG ATG GGT GAC CAG GCT CAC ATG CCC TAC ACC ACT GCC GTG ATT 1080 346 Glu Met Gly Asp Gln Ala His Met Pro Tyr Thr Thr Ala Val Ile 360 1081 CAT GAG GTG CAG CGC TTT GGG GAC ATC GTC CCC CTG GGT GTG ACC 1125 361 His Glu Val Gln Arg Phe Gly Asp Ile Val Pro Leu Gly Val Thr 375 1126 CAT ATG ACA TCC CGT GAC ATC GAA GTA CAG GGC TTC CGC ATC CCT 1170 376 His Met Thr Ser Arg Asp Ile Glu Val Gln Gly Phe Arg Ile Pro 390 1171 AAG GGA ACG ACA CTC ATC ACC AAC CTG TCA TCG GTG CTG AAG GAT 1215 391 Lys Gly Thr Thr Leu Ile Thr Asn Leu Ser Ser Val Leu Lys Asp 405 1216 GAG GCC GTC TGG GAG AAG CCC TTC CGC TTC CAC CCC GAA CAC TTC 1260 406 Glu Ala Val Trp Glu Lys Pro Phe Arg Phe His Pro Glu His Phe 420 1261 CTG GAT GCC CAG GGC CAC TTT GTG AAG CCG GAG GCC TTC CTG CCT 1305 421 Leu Asp Ala Gln Gly His Phe Val Lys Pro Glu Ala Phe Leu Pro 435 1306 TTC TCA GCA GGC CGC CGT GCA TGC CTC GGG GAG CCC CTG GCC CGC 1350 436 Phe Ser Ala Gly Arg Arg Ala Cys Leu Gly Glu Pro Leu Ala Arg 450 1351 ATG GAG CTC TTC CTC TTC TTC ACC TCC CTG CTG CAG CAC TTC AGC 1395 451 Met Glu Leu Phe Leu Phe Phe Thr Ser Leu Leu Gln His Phe Ser 465 1396 TTC TCG GTG CCC ACT GGA CAG CCC CGG CCC AGC CAC CAT GGT GTC 1440 466 Phe Ser Val Pro Thr Gly Gln Pro Arg Pro Ser His His Gly Val 480 1441 TTT GCT TTC CTG GTG ACC CCA TCC CCC TAT GAG CTT TGT GCT GTG 1473 481 Phe Ala Phe Leu Val Thr Pro Ser Pro Tyr Glu Leu Cys Ala Val 491 1486 CCC CGC TAG 1494 496 Pro Arg *** 498

【００６８】配列番号：１７配列の長さ：１４９４配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直線状配列 1 ATG GGG CTA GAA GCA CTG GTG CCC CTG GCC GTG ATA GTG GCC ATC 45 1 Met Gly Leu Glu Ala Leu Val Pro Leu Ala Val Ile Val Ala Ile 15 46 TTC CTG CTC CTG GTG GAC CTG ATG CAC CGG CGC CAA CGC TGG GCT 90 16 Phe Leu Leu Leu Val Asp Leu Met His Arg Arg Gln Arg Trp Ala 30 91 GCA CGC TAC CCA CCA GGC CCC CTG CCA CTG CCC GGG CTG GGC AAC 135 31 Ala Arg Tyr Pro Pro Gly Pro Leu Pro Leu Pro Gly Leu Gly Asn 45 136 CTG CTG CAT GTG GAC TTC CAG AAC ACA CCA TAC TGC TTC GAC CAG 180 46 Leu Leu His Val Asp Phe Gln Asn Thr Pro Tyr Cys Phe Asp Gln 60 181 TTG CGG CGC CGC TTC GGG GAC GTG TTC AGC CTG CAG CTG GCC TGG 225 61 Leu Arg Arg Arg Phe Gly Asp Val Phe Ser Leu Gln Leu Ala Trp 75 226 ACG CCG GTG GTC GTG CTC AAT GGG CTG GCG GCC GTG CGC GAG GCG 270 76 Thr Pro Val Val Val Leu Asn Gly Leu Ala Ala Val Arg Glu Ala 90 271 CTG GTG ACC CAC GGC GAG GAC ACC GCC GAC CGC CCG CCT GTG CCC 315 91 Leu Val Thr His Gly Glu Asp Thr Ala Asp Arg Pro Pro Val Pro 105 316 ATC ACC CAG ATC CTG GGT TTC GGG CCG CGT TCC CAA GGG GTG TTC 360 106 Ile Thr Gln Ile Leu Gly Phe Gly Pro Arg Ser Gln Gly Val Phe 120 361 CTG GCG CGC TAT GGG CCC GCG TGG CGC GAG CAG AGG CGC TTC TCC 405 121 Leu Ala Arg Tyr Gly Pro Ala Trp Arg Glu Gln Arg Arg Phe Ser 135 406 GTC TCC ACC TTG CGC AAC TTG GGC CTG GGC AAG AAG TCG CTG GAG 450 136 Val Ser Thr Leu Arg Asn Leu Gly Leu Gly Lys Lys Ser Leu Glu 150 451 CAG TGG GTG ACC GAG GAG GCC GCC TGC CTT TGT GCC GCC TTC GCC 495 151 Gln Trp Val Thr Glu Glu Ala Ala Cys Leu Cys Ala Ala Phe Ala 165 496 AAC CAC TCC GGA CGC CCC TTT CGC CCC AAC GGT CTC TTG GAC AAA 540 166 Asn His Ser Gly Arg Pro Phe Arg Pro Asn Gly Leu Leu Asp Lys 180 541 GCC GTG AGC AAC GTG ATC GCC TCC CTC ACC TGC GGG CGC CGC TTC 585 181 Ala Val Ser Asn Val Ile Ala Ser Leu Thr Cys Gly Arg Arg Phe 195 586 GAA TAC GAC GAC CCT CGC TTC CTC AGG CTG CTG GAC CTA GCT CAG 630 196 Glu Tyr Asp Asp Pro Arg Phe Leu Arg Leu Leu Asp Leu Ala Gln 210 631 GAG GGA CTG AAG GAG GAG TCG GGC TTT CTG CGC GAG GTG CTG AAT 675 211 Glu Gly Leu Lys Glu Glu Ser Gly Phe Leu Arg Glu Val Leu Asn 225 676 GCT GTC CCC GTC CTC CTG CAT ATC CCA GCG CTG GCT GGC AAG GTC 720 226 Ala Val Pro Val Leu Leu His Ile Pro Ala Leu Ala Gly Lys Val 240 721 CTA CGC TTC CAA AAG GCT TTC CTG ACC CAG CTG GAT GAG CTG CTA 765 241 Leu Arg Phe Gln Lys Ala Phe Leu Thr Gln Leu Asp Glu Leu Leu 255 766 ACT GAG CAC AGG ATG ACC TGG GAC CCA GCC CAG CCC CCC CGA GAC 810 256 Thr Glu His Arg Met Thr Trp Asp Pro Ala Gln Pro Pro Arg Asp 270 811 CTG ACT GAG GCC TTC CTG GCA GAG ATG GAG AAG GCC AAG GGG AAC 855 271 Leu Thr Glu Ala Phe Leu Ala Glu Met Glu Lys Ala Lys Gly Asn 285 856 CCT GAG AGC AGC TTC AAT GAT GAG AAC CTG CGC ATA GTG GTG GCT 900 286 Pro Glu Ser Ser Phe Asn Asp Glu Asn Leu Arg Ile Val Val Ala 300 901 GAC CTG TTC TCT GCC GGG ATG GTG ACC ACC TCG ACC ACG CTG GCC 945 301 Asp Leu Phe Ser Ala Gly Met Val Thr Thr Ser Thr Thr Leu Ala 315 946 TGG GGC CTC CTG CTC ATG ATC CTA CAT CCG GAT GTG CAG CGC CGT 990 316 Trp Gly Leu Leu Leu Met Ile Leu His Pro Asp Val Gln Arg Arg 330 991 GTC CAA CAG GAG ATC GAC GAC GTG ATA GGG CAG GTG CGG CGA CCA 1035 331 Val Gln Gln Glu Ile Asp Asp Val Ile Gly Gln Val Arg Arg Pro 345 1036 GAG ATG GGT GAC CAG GCT CAC ATG CCC TAC ACC ACT GCC GTG ATT 1080 346 Glu Met Gly Asp Gln Ala His Met Pro Tyr Thr Thr Ala Val Ile 360 1081 CAT GAG GTG CAG CGC TTT GGG GAC ATC GTC CCC CTG GGT GTG ACC 1125 361 His Glu Val Gln Arg Phe Gly Asp Ile Val Pro Leu Gly Val Thr 375 1126 CAT ATG ACA TCC CGT GAC ATC GAA GTA CAG GGC TTC CGC ATC CCT 1170 376 His Met Thr Ser Arg Asp Ile Glu Val Gln Gly Phe Arg Ile Pro 390 1171 AAG GGA ACG ACA CTC ATC ACC AAC CTG TCA TCG GTG CTG AAG GAT 1215 391 Lys Gly Thr Thr Leu Ile Thr Asn Leu Ser Ser Val Leu Lys Asp 405 1216 GAG GCC GTC TGG GAG AAG CCC TTC CGC TTC CAC CCC GAA CAC TTC 1260 406 Glu Ala Val Trp Glu Lys Pro Phe Arg Phe His Pro Glu His Phe 420 1261 CTG GAT GCC CAG GGC CAC TTT GTG AAG CCG GAG GCC TTC CTG CCT 1305 421 Leu Asp Ala Gln Gly His Phe Val Lys Pro Glu Ala Phe Leu Pro 435 1306 TTC TCA GCA GGC CGC CGT GCA TGC CTC GGG GAG CCC CTG GCC CGC 1350 436 Phe Ser Ala Gly Arg Arg Ala Cys Leu Gly Glu Pro Leu Ala Arg 450 1351 ATG GAG CTC TTC CTC TTC TTC ACC TCC CTG CTG CAG CAC TTC AGC 1395 451 Met Glu Leu Phe Leu Phe Phe Thr Ser Leu Leu Gln His Phe Ser 465 1396 TTC TCG GTG CCC ACT GGA CAG CCC CGG CCC AGC CAC CAT GGT GTC 1440 466 Phe Ser Val Pro Thr Gly Gln Pro Arg Pro Ser His His Gly Val 480 1441 TTT GCT TTC CTG GTG ACC CCA TCC CCC TAT GAG CTT TGT GCT GTG 1485 481 Phe Ala Phe Leu Val Thr Pro Ser Pro Tyr Glu Leu Cys Ala Val 495 1486 CCC CGC TAG 1494 496 Pro Arg *** 498

【００６９】配列番号：１８配列の長さ：１４９４配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直線状配列 1 ATG GGG CTA GAA GCA CTG GTG CCC CTG GCC GTG ATA GTG GCC ATC 45 1 Met Gly Leu Glu Ala Leu Val Pro Leu Ala Val Ile Val Ala Ile 15 46 TTC CTG CTC CTG GTG GAC CTG ATG CAC CGG CGC CAA CGC TGG GCT 90 16 Phe Leu Leu Leu Val Asp Leu Met His Arg Arg Gln Arg Trp Ala 30 91 GCA CGC TAC CCA CCA GGC CCC CTG CCA CTG CCC GGG CTG GGC AAC 135 31 Ala Arg Tyr Pro Pro Gly Pro Leu Pro Leu Pro Gly Leu Gly Asn 45 136 CTG CTG CAT GTG GAC TTC CAG AAC ACA CCA TAC TGC TTC GAC CAG 180 46 Leu Leu His Val Asp Phe Gln Asn Thr Pro Tyr Cys Phe Asp Gln 60 181 TTG CGG CGC CGC TTC GGG GAC GTG TTC AGC CTG CAG CTG GCC TGG 225 61 Leu Arg Arg Arg Phe Gly Asp Val Phe Ser Leu Gln Leu Ala Trp 75 226 ACG CCG GTG GTC GTG CTC AAT GGG CTG GCG GCC GTG CGC GAG GCG 270 76 Thr Pro Val Val Val Leu Asn Gly Leu Ala Ala Val Arg Glu Ala 90 271 CTG GTG ACC CAC GGC GAG GAC ACC GCC GAC CGC CCG CCT GTG CCC 315 91 Leu Val Thr His Gly Glu Asp Thr Ala Asp Arg Pro Pro Val Pro 105 316 ATC ACC CAG ATC CTG GGT TTC GGG CCG CGT TCC CAA GGG GTG TTC 360 106 Ile Thr Gln Ile Leu Gly Phe Gly Pro Arg Ser Gln Gly Val Phe 120 361 CTG GCG CGC TAT GGG CCC GCG TGG CGC GAG CAG AGG CGC TTC TCC 405 121 Leu Ala Arg Tyr Gly Pro Ala Trp Arg Glu Gln Arg Arg Phe Ser 135 406 GTC TCC ACC TTG CGC AAC TTG GGC CTG GGC AAG AAG TCG CTG GAG 450 136 Val Ser Thr Leu Arg Asn Leu Gly Leu Gly Lys Lys Ser Leu Glu 150 451 CAG TGG GTG ACC GAG GAG GCC GCC TGC CTT TGT GCC GCC TTC GCC 495 151 Gln Trp Val Thr Glu Glu Ala Ala Cys Leu Cys Ala Ala Phe Ala 165 496 AAC CAC TCC GGA CGC CCC TTT CGC CCC AAC GGT CTC TTG GAC AAA 540 166 Asn His Ser Gly Arg Pro Phe Arg Pro Asn Gly Leu Leu Asp Lys 180 541 GCC GTG AGC AAC GTG ATC GCC TCC CTC ACC TGC GGG CGC CGC TTC 585 181 Ala Val Ser Asn Val Ile Ala Ser Leu Thr Cys Gly Arg Arg Phe 195 586 GAA TAC GAC GAC CCT CGC TTC CTC AGG CTG CTG GAC CTA GCT CAG 630 196 Glu Tyr Asp Asp Pro Arg Phe Leu Arg Leu Leu Asp Leu Ala Gln 210 631 GAG GGA CTG AAG GAG GAG TCG GGC TTT CTG CGC GAG GTG CTG AAT 675 211 Glu Gly Leu Lys Glu Glu Ser Gly Phe Leu Arg Glu Val Leu Asn 225 676 GCT GTC CCC GTC CTC CTG CAT ATC CCA GCG CTG GCT GGC AAG GTC 720 226 Ala Val Pro Val Leu Leu His Ile Pro Ala Leu Ala Gly Lys Val 240 721 CTA CGC TTC CAA AAG GCT TTC CTG ACC CAG CTG GAT GAG CTG CTA 765 241 Leu Arg Phe Gln Lys Ala Phe Leu Thr Gln Leu Asp Glu Leu Leu 255 766 ACT GAG CAC AGG ATG ACC TGG GAC CCA GCC CAG CCC CCC CGA GAC 810 256 Thr Glu His Arg Met Thr Trp Asp Pro Ala Gln Pro Pro Arg Asp 270 811 CTG ACT GAG GCC TTC CTG GCA GAG ATG GAG AAG GCC AAG GGG AAC 855 271 Leu Thr Glu Ala Phe Leu Ala Glu Met Glu Lys Ala Lys Gly Asn 285 856 CCT GAG AGC AGC TTC AAT GAT GAG AAC CTG CGC ATA GTG GTG GCT 900 286 Pro Glu Ser Ser Phe Asn Asp Glu Asn Leu Arg Ile Val Val Ala 300 901 GAC CTG TTC TCT GCC GGG ATG GTG ACC ACC TCG ACC ACG CTG GCC 945 301 Asp Leu Phe Ser Ala Gly Met Val Thr Thr Ser Thr Thr Leu Ala 315 946 TGG GGC CTC CTG CTC ATG ATC CTA CAT CCG GAT GTG CAG CGC CGT 990 316 Trp Gly Leu Leu Leu Met Ile Leu His Pro Asp Val Gln Arg Arg 330 991 GTC CAA CAG GAG ATC GAC GAC GTG ATA GGG CAG GTG CGG CGA CCA 1035 331 Val Gln Gln Glu Ile Asp Asp Val Ile Gly Gln Val Arg Arg Pro 345 1036 GAG ATG GGT GAC CAG GCT CAC ATG CCC TAC ACC ACT GCC GTG ATT 1080 346 Glu Met Gly Asp Gln Ala His Met Pro Tyr Thr Thr Ala Val Ile 360 1081 CAT GAG GTG CAG CGC TTT GGG GAC ATC GTC CCC CTG GGT GTG ACC 1125 361 His Glu Val Gln Arg Phe Gly Asp Ile Val Pro Leu Gly Val Thr 375 1126 CAT ATG ACA TCC CGT GAC ATC GAA GTA CAG GGC TTC CGC ATC CCT 1170 376 His Met Thr Ser Arg Asp Ile Glu Val Gln Gly Phe Arg Ile Pro 390 1171 AAG GGA ACG ACA CTC ATC ACC AAC CTG TCA TCG GTG CTG AAG GAT 1215 391 Lys Gly Thr Thr Leu Ile Thr Asn Leu Ser Ser Val Leu Lys Asp 405 1216 GAG GCC GTC TGG GAG AAG CCC TTC CGC TTC CAC CCC GAA CAC TTC 1260 406 Glu Ala Val Trp Glu Lys Pro Phe Arg Phe His Pro Glu His Phe 420 1261 CTG GAT GCC CAG GGC CAC TTT GTG AAG CCG GAG GCC TTC CTG CCT 1305 421 Leu Asp Ala Gln Gly His Phe Val Lys Pro Glu Ala Phe Leu Pro 435 1306 TTC TCA GCA GGC CGC CGT GCA TGC CTC GGG GAG CCC CTG GCC CGC 1350 436 Phe Ser Ala Gly Arg Arg Ala Cys Leu Gly Glu Pro Leu Ala Arg 450 1351 ATG GAG CTC TTC CTC TTC TTC ACC TCC CTG CTG CAG CAC TTC AGC 1395 451 Met Glu Leu Phe Leu Phe Phe Thr Ser Leu Leu Gln His Phe Ser 465 1396 TTC TCG GTG CCC ACT GGA CAG CCC CGG CCC AGC CAC CAT GGT GTC 1440 466 Phe Ser Val Pro Thr Gly Gln Pro Arg Pro Ser His His Gly Val 480 1441 TTT GCT TTC CTG GTG AGC CCA TCC CCC TAT GAG CTT TGT GCT GTG 1485 481 Phe Ala Phe Leu Val Ser Pro Ser Pro Tyr Glu Leu Cys Ala Val 495 1486 CCC CGC TAG 1494 496 Pro Arg *** 498

【００７０】配列番号：１９配列の長さ：１４９４配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直線状配列 1 ATG GGG CTA GAA GCA CTG GTG CCC CTG GCC GTG ATA GTG GCC ATC 45 1 Met Gly Leu Glu Ala Leu Val Pro Leu Ala Val Ile Val Ala Ile 15 46 TTC CTG CTC CTG GTG GAC CTG ATG CAC CGG CGC CAA CGC TGG GCT 90 16 Phe Leu Leu Leu Val Asp Leu Met His Arg Arg Gln Arg Trp Ala 30 91 GCA CGC TAC CCA CCA GGC CCC CTG CCA CTG CCC GGG CTG GGC AAC 135 31 Ala Arg Tyr Pro Pro Gly Pro Leu Pro Leu Pro Gly Leu Gly Asn 45 136 CTG CTG CAT GTG GAC TTC CAG AAC ACA CCA TAC TGC TTC GAC CAG 180 46 Leu Leu His Val Asp Phe Gln Asn Thr Pro Tyr Cys Phe Asp Gln 60 181 TTG CGG CGC CGC TTC GGG GAC GTG TTC AGC CTG CAG CTG GCC TGG 225 61 Leu Arg Arg Arg Phe Gly Asp Val Phe Ser Leu Gln Leu Ala Trp 75 226 ACG CCG GTG GTC GTG CTC AAT GGG CTG GCG GCC GTG CGC GAG GCG 270 76 Thr Pro Val Val Val Leu Asn Gly Leu Ala Ala Val Arg Glu Ala 90 271 CTG GTG ACC CAC GGC GAG GAC ACC GCC GAC CGC CCG CCT GTG CCC 315 91 Leu Val Thr His Gly Glu Asp Thr Ala Asp Arg Pro Pro Val Pro 105 316 ATC ACC CAG ATC CTG GGT TTC GGG CCG CGT TCC CAA GGG GTG TTC 360 106 Ile Thr Gln Ile Leu Gly Phe Gly Pro Arg Ser Gln Gly Val Phe 120 361 CTG GCG CGC TAT GGG CCC GCG TGG CGC GAG CAG AGG CGC TTC TCC 405 121 Leu Ala Arg Tyr Gly Pro Ala Trp Arg Glu Gln Arg Arg Phe Ser 135 406 GTC TCC ACC TTG CGC AAC TTG GGC CTG GGC AAG AAG TCG CTG GAG 450 136 Val Ser Thr Leu Arg Asn Leu Gly Leu Gly Lys Lys Ser Leu Glu 150 451 CAG TGG GTG ACC GAG GAG GCC GCC TGC CTT TGT GCC GCC TTC GCC 495 151 Gln Trp Val Thr Glu Glu Ala Ala Cys Leu Cys Ala Ala Phe Ala 165 496 AAC CAC TCC GGA CGC CCC TTT CGC CCC AAC GGT CTC TTG GAC AAA 540 166 Asn His Ser Gly Arg Pro Phe Arg Pro Asn Gly Leu Leu Asp Lys 180 541 GCC GTG AGC AAC GTG ATC GCC TCC CTC ACC TGC GGG CGC CGC TTC 585 181 Ala Val Ser Asn Val Ile Ala Ser Leu Thr Cys Gly Arg Arg Phe 195 586 GAA TAC GAC GAC CCT CGC TTC CTC AGG CTG CTG GAC CTA GCT CAG 630 196 Glu Tyr Asp Asp Pro Arg Phe Leu Arg Leu Leu Asp Leu Ala Gln 210 631 GAG GGA CTG AAG GAG GAG TCG GGC TTT CTG CGC GAG GTG CTG AAT 675 211 Glu Gly Leu Lys Glu Glu Ser Gly Phe Leu Arg Glu Val Leu Asn 225 676 GCT GTC CCC GTC CTC CTG CAT ATC CCA GCG CTG GCT GGC AAG GTC 720 226 Ala Val Pro Val Leu Leu His Ile Pro Ala Leu Ala Gly Lys Val 240 721 CTA CGC TTC CAA AAG GCT TTC CTG ACC CAG CTG GAT GAG CTG CTA 765 241 Leu Arg Phe Gln Lys Ala Phe Leu Thr Gln Leu Asp Glu Leu Leu 255 766 ACT GAG CAC AGG ATG ACC TGG GAC CCA GCC CAG CCC CCC CGA GAC 810 256 Thr Glu His Arg Met Thr Trp Asp Pro Ala Gln Pro Pro Arg Asp 270 811 CTG ACT GAG GCC TTC CTG GCA GAG ATG GAG AAG GCC AAG GGG AAC 855 271 Leu Thr Glu Ala Phe Leu Ala Glu Met Glu Lys Ala Lys Gly Asn 285 856 CCT GAG AGC AGC TTC AAT GAT GAG AAC CTG TGC ATA GTG GTG GCT 900 286 Pro Glu Ser Ser Phe Asn Asp Glu Asn Leu Cys Ile Val Val Ala 300 901 GAC CTG TTC TCT GCC GGG ATG GTG ACC ACC TCG ACC ACG CTG GCC 945 301 Asp Leu Phe Ser Ala Gly Met Val Thr Thr Ser Thr Thr Leu Ala 315 946 TGG GGC CTC CTG CTC ATG ATC CTA CAT CCG GAT GTG CAG CGC CGT 990 316 Trp Gly Leu Leu Leu Met Ile Leu His Pro Asp Val Gln Arg Arg 330 991 GTC CAA CAG GAG ATC GAC GAC GTG ATA GGG CAG GTG CGG CGA CCA 1035 331 Val Gln Gln Glu Ile Asp Asp Val Ile Gly Gln Val Arg Arg Pro 345 1036 GAG ATG GGT GAC CAG GCT CAC ATG CCC TAC ACC ACT GCC GTG ATT 1080 346 Glu Met Gly Asp Gln Ala His Met Pro Tyr Thr Thr Ala Val Ile 360 1081 CAT GAG GTG CAG CGC TTT GGG GAC ATC GTC CCC CTG GGT GTG ACC 1125 361 His Glu Val Gln Arg Phe Gly Asp Ile Val Pro Leu Gly Val Thr 375 1126 CAT ATG ACA TCC CGT GAC ATC GAA GTA CAG GGC TTC CGC ATC CCT 1170 376 His Met Thr Ser Arg Asp Ile Glu Val Gln Gly Phe Arg Ile Pro 390 1171 AAG GGA ACG ACA CTC ATC ACC AAC CTG TCA TCG GTG CTG AAG GAT 1215 391 Lys Gly Thr Thr Leu Ile Thr Asn Leu Ser Ser Val Leu Lys Asp 405 1216 GAG GCC GTC TGG GAG AAG CCC TTC CGC TTC CAC CCC GAA CAC TTC 1260 406 Glu Ala Val Trp Glu Lys Pro Phe Arg Phe His Pro Glu His Phe 420 1261 CTG GAT GCC CAG GGC CAC TTT GTG AAG CCG GAG GCC TTC CTG CCT 1305 421 Leu Asp Ala Gln Gly His Phe Val Lys Pro Glu Ala Phe Leu Pro 435 1306 TTC TCA GCA GGC CGC CGT GCA TGC CTC GGG GAG CCC CTG GCC CGC 1350 436 Phe Ser Ala Gly Arg Arg Ala Cys Leu Gly Glu Pro Leu Ala Arg 450 1351 ATG GAG CTC TTC CTC TTC TTC ACC TCC CTG CTG CAG CAC TTC AGC 1395 451 Met Glu Leu Phe Leu Phe Phe Thr Ser Leu Leu Gln His Phe Ser 465 1396 TTC TCG GTG CCC ACT GGA CAG CCC CGG CCC AGC CAC CAT GGT GTC 1440 466 Phe Ser Val Pro Thr Gly Gln Pro Arg Pro Ser His His Gly Val 480 1441 TTT GCT TTC CTG GTG AGC CCA TCC CCC TAT GAG CTT TGT GCT GTG 1485 481 Phe Ala Phe Leu Val Ser Pro Ser Pro Tyr Glu Leu Cys Ala Val 495 1486 CCC CGC TAG 1494 496 Pro Arg *** 498

【００７１】配列番号：２０配列の長さ：３４配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 GGAACGCATGGTGGTGCTGCATGGATATGAAGTG 34

【００７２】配列番号：２１配列の長さ：５６配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 CTCAAAGATCTATGGCCCTGTGTTCACTCTGTATTTTGGCCTCGAGC
GCATGGTGG 56

【００７３】配列番号：２２配列の長さ：２８配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 CCACCATGCGCTCGAGGCCAAAATACAG 28

【００７４】配列番号：２３配列の長さ：３１配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 GGGTTCCCGGGAAATAATCAATGATAGTGGG 31

【００７５】配列番号：２４配列の長さ：３３配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 GGATTGTAAGCACCCCCTGGATCCAGATATGC 33

【００７６】配列番号：２５配列の長さ：３５配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 CCCAGCTCCAAGTAAGTCAGCTGCAGTGATTACC 35

【００７７】配列番号：２６配列の長さ：４１配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 GGTGGTACCCTTGGGAATGAGGTAGTTTCTGAATTTAACGTC 41

【００７８】配列番号：２７配列の長さ：３３配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 AGTCTAGAATGGATCCTTTTGTGGTCCTTGTGC 33

【００７９】配列番号：２８配列の長さ：３０配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 CCCAGAGCTCTGTCTCCAGAGTGAAAGGAG 30

【００８０】配列番号：２９配列の長さ：３０配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 ACAGAGCTCTGGGAGAGGAAAACTCCCTCC 30

【００８１】配列番号：３０配列の長さ：５４配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 CCATAGATTTTTGAGAGATTGGTTAAGGATTTGCTGACATCCTTAAT
ATCTATC 54

【００８２】配列番号：３１配列の長さ：３０配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 GACCCTCGTCACTTTCTGGATGAAGGTGGA 30

【００８３】配列番号：３２配列の長さ：３６配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 GAAGTAGTTACTTTTCTTAAAATTTCCACCTTCATC 36

【００８４】配列番号：３３配列の長さ：３７配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 AAAGAATTCCCCAACCCAGAGATGTTTGACCCTCGTC 37

【００８５】配列番号：３４配列の長さ：６１配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 GGCCAGGCCCTCTCCCACACAAATCCGTTTTCCTGCTGAGAAAGGCA
TGAAGTAGTTAC 61

【００８６】配列番号：３５配列の長さ：４４配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 GAGAGGGCCTGGCCCGCATGGAGCTGTTTTTATTCCTGACCTTC 4
4

【００８７】配列番号：３６配列の長さ：３４配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 CAGGAGTTGTGTCAAGGTCCTTTGGGTCAATCAG 34

【００８８】配列番号：３７配列の長さ：６４配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 TTGTCAATGGATTTGCTTCTGTCCCGCCCTTCTATCAGCTGTGCTTC
ATTCCTGTCTGAGGATC 64

【００８９】配列番号：３８配列の長さ：５５配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 CAGAAGCAAATCCATTGACAACAGGAGTTGTGTCAAGGTCCTTTGGG
TCAATCAG 55

【００９０】配列番号：３９配列の長さ：６０配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 CTCAGACAGGAATGAAGCACAGCTGATAGAAGGGCGGGACAGAAGCA
AATCCATTGACAA 60

【００９１】配列番号：４０配列の長さ：３２配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直線状配列 1 GCAGCCAGACCATCTGTGCTTCTTCAGACAGG 32

【００９２】配列番号：４１配列の長さ：４４配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直線状配列 1 CACCATATTAACTTCCCTCACTTCTGTGCTACATGACAACAAAG 4
4

【００９３】配列番号：４２配列の長さ：５２配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直線状配列 1 AATTCTTTGTTGTCATGTAGCACAGAAGTGAGGGAAGTTAATATGGT
GGTAC 52

【図面の簡単な説明】

【図１】ヒト由来のチトクロムＰ４５０１Ａ２、Ｐ４
５０２Ｃ９およびＰ４５０２Ｅ１遺伝子クローニング
用プライマーを示す図である。

【図２】ヒト由来のチトクロムＰ４５０３Ａ４、Ｐ４
５０１Ａ１およびＰ４５０２Ａ６遺伝子クローニング
用プライマーを示す図である。

【図３】ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｂ６、Ｐ４
５０２Ｃ８およびＰ４５０２Ｃ１８遺伝子クローニン
グ用プライマーを示す図である。

【図４】ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ１９、Ｐ
４５０２Ｄ６およびＰ４５０３Ａ４(XbaI-XhoI断片）
遺伝子クローニング用プライマーを示す図である。

【図５】ヒト由来のチトクロムＰ４５０１Ａ２および
Ｐ４５０２Ｄ６遺伝子クローニングに用いた合成リン
カーを示す図である。

【図６】ヒト由来のチトクロムＰ４５０１Ａ２遺伝子
を含む酵母内発現プラスミド（ｐ１Ａ２，ｐ１Ａ２Ｒ）
の構築法を示す図である。

【図７】ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ９遺伝子
を含む酵母内発現プラスミド（ｐ２Ｃ９，ｐ２Ｃ９Ｒ）
の構築法を示す図である。

【図８】ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｅ１遺伝子
を含む酵母内発現プラスミド（ｐ２Ｅ１，ｐ２Ｅ１Ｒ）
の構築法を示す図である。

【図９】ヒト由来のチトクロムＰ４５０３Ａ４遺伝子
を含む酵母内発現プラスミド（ｐ３Ａ４，ｐ３Ａ４Ｒ）
の構築法を示す図である。

【図１０】ヒト由来のチトクロムＰ４５０１Ａ１遺伝
子を含む酵母内発現プラスミド（ｐ１Ａ１，ｐ１Ａ１
Ｒ）の構築法を示す図である。

【図１１】ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ａ６遺伝
子を含む酵母内発現プラスミド（ｐ２Ａ６，ｐ２Ａ６
Ｒ）の構築法を示す図である。

【図１２】ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｂ６遺伝
子を含む酵母内発現プラスミド（ｐ２Ｂ６，ｐ２Ｂ６
Ｒ）の構築法を示す図である。

【図１３】ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ８遺伝
子を含む酵母内発現プラスミド（ｐ２Ｃ８，ｐ２Ｃ８
Ｒ）の構築法を示す図である。

【図１４】ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ１８遺
伝子を含む酵母内発現プラスミド（ｐ２Ｃ１８，ｐ２Ｃ
１８Ｒ）の構築法を示す図である。

【図１５】ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ１９遺
伝子を含む酵母内発現プラスミド（ｐ２Ｃ１９，ｐ２Ｃ
１９Ｒ）の構築法を示す図である。

【図１６】ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｄ６遺伝
子を含む酵母内発現プラスミド（ｐ２Ｄ６，ｐ２Ｄ６
Ｒ）の構築法を示す図である。

【図１７】ヒト由来のチトクロムＰ４５０３Ａ４と酵
母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素遺伝子
を含む酵母内発現プラスミド（ｐＦ３Ａ４）の構築法を
示す図である。

【図１８】ＧＡＰＤＨプロモーターを用いた酵母内発現
プラスミドの構築法を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者駒井浩一郎大阪市此花区春日出中３丁目１番98号住友化学工業株式会社内 (72)発明者金子秀雄大阪市此花区春日出中３丁目１番98号住友化学工業株式会社内 (72)発明者中塚巌大阪市此花区春日出中３丁目１番98号住友化学工業株式会社内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ヒト由来のチトクロムＰ４５０１Ａ２、
ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ９、ヒト由来のチ
トクロムＰ４５０２Ｅ１ならびにヒト由来のチトクロ
ムＰ４５０３Ａ４からなる分子種群に含まれる全ての
分子種について、（１）(a) 酵母内で発現させるためのプロモーターなら
びに(b)(i)上記の分子種をコードする塩基配列を有する
遺伝子および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素をコー
ドする塩基配列を有する遺伝子あるいは(ii)上記の分子
種と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素
をコードする塩基配列を有する遺伝子を含む酵母内発現
プラスミドを構築する工程、（２）構築された酵母内発現プラスミドを酵母に導入す
ることにより、酵母内で(i) 上記の分子種および酵母Ｎ
ＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素あるいは(ii)上記の分子種
と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を
発現させる酵母菌体を作製する工程、（３）作製された酵母菌体または該菌体破砕物を検体で
ある化合物と反応する工程、（４）反応後、反応液中に存在する代謝産物を分析する
ことによって、検体である化合物の解毒代謝の有無また
は発癌物質への代謝の有無を判定する工程、（５）上記の判定により、（ａ）検体である化合物の解
毒代謝の存在（有）または発癌物質への代謝の非存在
（無）の場合、検体である化合物を安全と評価し、また
は、（ｂ）検体である化合物の解毒代謝の非存在（無）
または発癌物質への代謝の存在（有）の場合、検体であ
る化合物を非安全と評価する工程、からなることを特徴
とする評価方法。
【請求項２】請求項１記載の分子種群にヒト由来のチト
クロムＰ４５０２Ａ６および／またはヒト由来のチト
クロムＰ４５０２Ｃ１９および／またはヒト由来のチ
トクロムＰ４５０２Ｄ６を加えることを特徴とする請
求項１記載の評価方法。
【請求項３】請求項１記載の分子種群にヒト由来のチト
クロムＰ４５０１Ａ１、ヒト由来のチトクロムＰ４５
０２Ａ６、ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｂ６、
ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ８、ヒト由来のチ
トクロムＰ４５０２Ｃ１８、ヒト由来のチトクロムＰ
４５０２Ｃ１９ならびにヒト由来のチトクロムＰ４５
０２Ｄ６からなる分子種群に含まれる分子種を加える
ことを特徴とする請求項１記載の評価方法。
【請求項４】ヒト由来のチトクロムＰ４５０１Ａ２、
ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ９、ヒト由来のチ
トクロムＰ４５０２Ｅ１ならびにヒト由来のチトクロ
ムＰ４５０３Ａ４からなる分子種群に含まれる全ての
分子種について、（１）(a) 酵母内で発現させるためのプロモーターなら
びに(b)(i)上記の分子種をコードする塩基配列を有する
遺伝子および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素をコー
ドする塩基配列を有する遺伝子あるいは(ii)上記の分子
種と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素
をコードする塩基配列を有する遺伝子を含む酵母内発現
プラスミドを構築する工程、（２）構築された酵母内発現プラスミドを酵母に導入す
ることにより、酵母内で(i) 上記の分子種および酵母Ｎ
ＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素あるいは(ii)上記の分子種
と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を
発現させる酵母菌体を作製する工程、（３）作製された酵母菌体または該菌体破砕物を検体で
ある化合物と反応する工程、（４）反応後、反応液中に存在する代謝産物を栄養要素
要求性の微生物に作用させることによって、該栄養要素
に対して非要求性となった微生物の存在量を測定する工
程、（５）上記の測定により、（ａ）栄養要素に対して非要
求性となった微生物が、上記の酵母内発現プラスミドが
導入されていない酵母菌体を用いて上記（３）および
（４）を行う場合（コントロール）と同程度に存在する
場合、検体である化合物を変異原性無と評価し、また
は、（ｂ）栄養要素に対して非要求性となった微生物
が、上記の酵母内発現プラスミドが導入されていない酵
母菌体を用いて上記（３）および（４）を行う場合（コ
ントロール）と比較して実質的に多く存在する場合、検
体である化合物を変異原性有と評価する工程、からなる
ことを特徴とする評価方法。
【請求項５】ヒト由来のチトクロムＰ４５０１Ａ２、
ヒト由来のチトクロムＰ４５０２Ｃ９、ヒト由来のチ
トクロムＰ４５０２Ｅ１ならびにヒト由来のチトクロ
ムＰ４５０３Ａ４からなる分子種群に含まれる全ての
分子種について、（１）(a) 酵母内で発現させるためのプロモーターなら
びに(b)(i)上記の分子種をコードする塩基配列を有する
遺伝子および酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素をコー
ドする塩基配列を有する遺伝子あるいは(ii)上記の分子
種と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素
をコードする塩基配列を有する遺伝子を含む酵母内発現
プラスミドを構築する工程、（２）構築された酵母内発現プラスミドを酵母に導入す
ることにより、酵母内で(i) 上記の分子種および酵母Ｎ
ＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素あるいは(ii)上記の分子種
と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還元酵素の人工融合酵素を
発現させる酵母菌体を作製する工程、（３）作製された酵母菌体または該菌体破砕物を検体で
ある化合物と反応する工程、（４）反応後、反応液中に存在する代謝産物を分析する
ことによって、上記の分子種群に含まれる１種類の(i)
ヒト由来のチトクロムＰ４５０分子種あるいは(ii)ヒト
由来のチトクロムＰ４５０分子種と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ
４５０還元酵素の人工融合酵素の場合のみ、特異的に存
在する代謝産物の有無を判定する工程、（５）上記の判定により、（ａ）１種類の(i) ヒト由来
のチトクロムＰ４５０分子種あるいは(ii)ヒト由来のチ
トクロムＰ４５０分子種と酵母ＮＡＤＰＨ−Ｐ４５０還
元酵素の人工融合酵素の場合のみに特異的に存在する代
謝産物が存在する場合、該検体化合物を該チトクロムＰ
４５０分子種の代謝プローブとして有効であると評価
し、または（ｂ）特異的に存在する代謝産物が非存在の
場合、該検体化合物を該チトクロムＰ４５０分子種の代
謝プローブとして有効でないと評価する工程、からなる
ことを特徴とする評価方法。