JPH08510943A

JPH08510943A - 生物学的接着剤組成物および組織表面間接着の促進方法

Info

Publication number: JPH08510943A
Application number: JP7501935A
Authority: JP
Inventors: ユエルゲンセン，ケイ; アエスキリマン，ダニエル; ビー．ハンジカー，エルンスト
Original assignee: オーソジーン，インコーポレイテッド
Priority date: 1993-06-03
Filing date: 1994-06-03
Publication date: 1996-11-19
Anticipated expiration: 2019-01-06
Also published as: TW404836B; AU8305598A; DE69432300T2; JP3483255B2; CA2163250A1; AU7051194A; DE69432300D1; US5549904A; ATE234643T1; EP0702572B1; US5736132A; WO1994028949A1; EP0702572A1; ES2194869T3

Abstract

(57)【要約】本発明は組織表面間の接着を促進する生物学的接着剤組成物および促進方法に関する。本発明の調合生物学的接着剤組成物は、医薬上で許容される水性担体中で組織トランスグルタミナーゼを使用するものである。この組織トランスグルタミナーゼは組織および（または）酵素のアミン供与体とグルタミニル残基との間の反応を触媒することによって、組織表面の処置に際して、この組織表面間の接着を促進させる有効量で使用される。この担体はまた、上記反応を促進させるためのカルシウムなどの２価金属イオンを含有する。

Description

【発明の詳細な説明】生物学的接着剤組成物および組織表面間接着の促進方法本発明は、生物学的接着剤を外科手術において使用することに関する。生物学的グルー（ｇｌｕｅ）の使用が有利である種々の外科専門分野内で多くの状況が存在する。生物学的グルーは、一般外科における止血、神経外科における神経破断の再構成、形成外科における皮膚ならびに軟骨移植片および欠損部の接着、一般または胸部外科における気胸および（または）フェステルの処置、血管および一般外科における血管支持および腸管吻合などに使用することができる。整形外科における生物学的封鎖剤（ｓｅａｌａｎｔ）の可能な用途には、軟骨および骨軟骨骨折の処置、軟骨または骨軟骨材料の移植、骨軟骨切裂、関節骨折、半月板引裂ならびに切断した靭帯、腱、関節または筋肉の筋腱組織の処置が包含される。さらにまた、治癒プロセスを促進および刺激するために、例えばコラーゲン、ゼラチン、フィブリノーゲン、フィブリンからなるバイオマトリックスインプラント、あるいはまたポリアクリレート類などのような組織トランスグルタミナーゼ基質ではなくかつまた多分、細胞接着蛋白質、成長因子、細胞などの種々の付加物を含有する巨大分子を組織欠損部に重合および接着する用途が包含される。新規生物学的封鎖剤に係わる、この後者の用途は特に重要である。本発明は、調合生物学的接着剤組成物、その製造方法およびその使用に関するものである。本発明の接着剤組成物は、医薬上で許容される担体中で、組織トランスグルタミナーゼ（ｔＴＧ＝トランスグルタミナーゼＩＩ＝Ｃ型トランスグルタミナーゼ）を特定の様相で使用することに基づいている。本発明の価値は、結合組織表面間の接着に係わる身体力学的試験により証明されている。発明の背景軟骨は関節表面全体を覆っており、その特異な構造に基づいて、ほとんど摩擦のない運動を関節に付与する。可動関節における関節軟骨の摩擦係数（この係数はμ＝摩擦力（Ｆ）／負荷重量（Ｗ）で定義される）は、０．００５〜０．０２である（ヒト膝の場合）。比較として、氷対氷の摩擦係数は、ほぼ５倍以上大きい（０．０１〜０．１）、Ｍｏｗ，Ｖ．Ｃ．，Ａ．ＲａｔｃｌｉｆｆｅおよびＡ．Ｒ．Ｐｏｏｌｅによる“ＣＡＲＴＩＬＡＧＥＡＮＤＤＩＡＲＴＨＲＯＤＩＡＬＪＯＩＮＴＳＡＳＰＡＲＰＤＩＧＭＳＦＯＲＨＩＥＲＡＲＣＨＩＣＡＬＭＡＴＥＲＩＡＬＳＡＮＤＳＴＲＵＣＴＵＲＥＳ”，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，１３（２）：６７〜９７（１９９２）。関節軟骨のマトリックスは関節軟骨の６０〜８０重量％の水分（および溶解したイオンおよびガス）および２０〜４０％のコラーゲン、プロテオグリカン類、グリコサミノグリカン類およびグリコプロテイン類などの構造分子からなる。関節軟骨の特殊細胞である軟骨細胞は、このマトリックス中に埋め込まれており、その容積の約１０％のみを占めており、かつまた関節軟骨は、神経を含んでおらず、またリンパ管および血管も含有していない、ＡＲＴＩＣＵＬＡＲＣＡＲＴＩＬＡＧＥＡＮＤＫＮＥＥＪＯＩＮＴＦＵＮＣＴＩＯＮ：ＢＡＳＩＣＳＣＩＥＮＣＥＡＮＤＡＲＴＨＲＯＳＣＯＰＹ、ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｒａｖｅｎ出版社（１９９０）に記載されている、Ｂｕｃｋｗａｌｔｅｒ，Ｊ．Ａ．，Ｌ．Ｃ．ＲｏｓｅｎｂｅｒｇおよびＥ．Ｂ．Ｈｕｎｚｉｋｅｒによる“ＡＲＴＩＣＵＬＡＲＣＡＲＴＩＬＡＧＥ：ＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮ，ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ，ＲＥＳＰＯＮＳＥＴＯＩＮＪＵＲＹ，ＡＮＤＭＥＴＨＯＤＳＯＦＦＡＣＩＬＩＴＡＴＩＮＧＲＥＰＡＩＲ”およびＨｕｎｚｉｋｅｒ，Ｅ．Ｂ．による“ＳＴＲＵＫＴＵＲＭＯＬＥＫＵＬＥＤＥＳＫＮＯＲＰＥＬＧＥＷＥＢＥＳ，ＤＥＲＳＥＨＮＥＮＵＮＤＢＡＮＤＥＲ”，ＫｎｉｅｇｅｌｅｎｋｕｎｄＫｒｅｕｚｂａｎｄｅｒ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（１９９０）。２種の関節病巣を区別することができる。第一の病巣は、軟骨または表在軟骨の欠損であり、これは軟骨下骨には及んでいないか、またはこれを損傷していない。この軟骨下骨には神経支配されており、血管を含有しており、そして関節軟骨を骨および骨髄に連結している。軟骨下骨にまでは及んでいない表在軟骨欠損（すなわち、厚みの部分的欠損）は、線状破壊型、星状骨折、フラップ型、原線維性型であると見做すことができる、Ｂａｕｅｒ，Ｍ．およびＲ．Ｗ．Ｊａｃｋｓｏｎによる“ＣＨＯＮＤＲＡＬＬＥＳＩＯＮＳ０ＦＴＨＥＦＥＭＯＲＡＬＣＯＮＤＹＬＥＳ：ＡＳＹＳＴＥＭＯＦＡＲＴＨＲＯＳＣＯＰＩＣＣＬＡＳＳＩＦＩＣＡＴＩＯＮ”，Ａｒｔｈｒｏｓｃｏｐｙ，４（２）：９７〜１０２（１９８８）。軟骨病巣は多くの場合に、外傷によるものであるが、いずれか明白ではない病因によつても発症する。神経が付与されていないことから、これらの疾患は通常、痛みを生じない。発症すると、これらの疾患は軟骨破片による断続的閉鎖を伴う滑膜（関節被膜の内側）の遅延した膨潤として、あるいは再発性滲出および摩擦音として検知される；ＲＯＣＫＷＯＯＤＡＮＤＧＲＥＥＮ′ＳＦＲＡＣＴＵＲＥＳＩＮＡＤＵＬＴＳ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｊ．Ｂ．ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＣｏｍｐａｎｙ（１９９１）に掲載されたＳｃｏｔｔ，Ｗ．Ｎ．およびＪ．Ｎ．Ｉｎｓａｌｌによる“ＩＮＪＵＲＩＥＳＯＦＴＨＥＫＮＥＥ”。このような欠損は、これらが治癒されないものとして有名であり、修復反応性を示さず、かつまた変形性関節疾患、例えば変形性関節炎の初期段階にかなりの点で類似している。第二に、完全厚みの欠損がある；これは神経および血管を有する軟骨下骨にまで及ぶ。これは、例えばクレーター型または退化型などの重傷の外傷から（前記Ｂａｕｅｒ等による刊行物）、あるいは変形性関節炎などの変形性関節疾患の後期段階で生じる。症状はしばしば、重篤な痛みを伴う。出血および修復反応が生じることがあり、血管新生した線維型の軟骨が生じる。しかしながら、この軟骨は関節機能を支持するには充分ではない。このような修復組織は極くまれにしか持続しない（前記Ｂｕｃｋｗａｌｔｅｒ等による刊行物）。最近、依然として種々の方法が、軟骨および軟骨下欠損の軟骨修復を促進させるために試みられている。１つの方法は、軟骨欠損部を経て出血を誘発する軟骨下骨中に穴を開ける方法である、Ｐｒｉｄｉｅ，Ｋ．Ｈ．による“ＡＭＥＴＨＯＤ０ＦＲＥＳＵＲＦＡＣＩＮＧＯＳＴＥＯＡＲＴＨＲＩＴＩＣＫＮＥＥＪＯＩＮＴＳ”，ＪＢｏｎｅＪｏｉｎｔＳｕｒｇ．（Ｂｒ），４１−Ｂ：６１８〜６１９（１９５９）。出血を経て、修復反応が誘発され、線維質軟骨が形成されるが、この組織は不充分な身体力学的性質を示し、長期間の耐久力に欠けている、Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，Ｎ．およびＮ．Ｓｈｅｐａｒｄによる “ＴＨＥＲＥＳＵＲＦＡＣＩＮＧＯＦＡＤＵＬＴＲＡＢＢＩＴＡＲＴＩＣＵＬＡＲＣＡＲＴＩＬＡＧＥＢＹＭＵＬＴＩＰＬＥＰＥＲＦＯＲＡＴＩＯＮＳＴＨＲＯＵＧＨＴＨＥＳＵＢＣＨＯＮＤＲＡＬＢＯＮＥ”，Ｊ．ＢｏｎｅａｎｄＪｏｉｎｔＳｕｒｇ，５８−Ａ：２３０〜２３３（１９７６）。骨膜および軟骨膜移植片による関節軟骨欠損部の新表面の形成は評価されている、Ｃｏｕｔｔｓ，Ｒ．Ｄ．，Ｓ．Ｌ．Ｙ．Ｗｏｏ，Ｄ．Ａｍｉｅｌ，Ｈ．Ｐ．ＶｏｎＳｃｈｒｏｅｄｅｒおよびＭ．Ｋ．Ｋｗａｎによる“ＲＩＢＩＯＣＨＯＮＤＲＩＡＬＡＵＴＯＧＲＡＦＴＳＩＮＦＵＬＬ−ＴＨＩＣＫＮＥＥＡＲＴＩＣＵＬＡＲＣＡＲＴＩＬＡＧＥＤＥＦＥＣＴＳＩＮＲＡＢＢＩＴＳ”，Ｃｌｉｎ．Ｏｒｔｈｏｐ．，２６３〜２７３（１９９２）；Ｈｏｍｍｉｎｇａ，Ｇ．Ｎ．，Ｓ．Ｋ．Ｂｕｌｓｔｒａ，Ｐ．Ｓ．Ｍ．ＢｏｕｗｍｅｅｓｔｅｒおよびＡ．Ｊ．ＶａｎＤｅｒＬｉｎｄｅｎによる“ＰＥＲＩＣＨＯＮＤＲＡＬＧＲＡＦＴＩＮＧＦＯＲＣＡＲＴＩＬＡＧＥＬＥＳＩＯＮＳＯＦＴＨＥＫＮＥＥ”，Ｊ．ＢｏｎｅＪｏｉｎｔＳｕｒｇ．（Ｂｒ），７２−Ｂ（６）：１００３〜７（１９９０）；Ｈｏｍｍｉｎｇａ，Ｇ．Ｎ．，Ｔ．Ｊ．ｖａｎｄｅｒＬｉｎｄｅｎ，Ｅ．Ａ．Ｗ．Ｔｅｒｗｉｎｄｔ−ＲｏｕｗｅｎｈｏｒｓｔおよびＪ．Ｄｒｕｋｋｅｒによる“ＲＥＰＡＩＲＯＦＡＲＴＩＣＵＬＡＲＤＥＦＥＣＴＳＢＹＰＥＲＩＣＨＯＮＤＲＩＡＬＧＲＡＦＴＳ：ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＳＩＮＴＨＥＲＡＢＢＩＴ”，ＡｃｔａＯｒｔｈｏｐ．Ｓｃａｎｄ．，６０（３）：３２６〜３２９（１９８９）ならびにＯ´Ｄｒｉｓｃｏｌｌ，Ｓ．Ｗ．，Ｆ．Ｗ．ＫｅｅｌｅｙおよびＲ．Ｂ．Ｓａｌｔｅｒによる“ＤＵＲＡＢＩＬＩＴＹＯＦＲＥＧＥＮＥＲＡＴＥＤＡＲＴＩＣＵＬＡＲＣＡＲＴＩＬＡＧＥＰＲＯＤＵＣＥＤＢＹＦＲＥＥＡＵＴＯＧＥＮＯＵＳＰＥＲＩＯＳＴＥＡＬＧＲＡＦＴＳＩＮＭＡＪＯＲＦＵＬＬ−ＴＨＩＣＫＮＥＳＳＤＥＦＥＣＴＳＩＮＪＯＩＮＴＳＵＲＦＡＣＥＳＵＮＤＥＲＴＨＥＩＮＦＬＵＥＮＣＥＯＦＣＯＮＴＩＮＵＯＵＳＰＡＳＳＩＶＥＭＯＴＩＯＮ”，Ｊ．ＢｏｎｅａｎｄＪｏｉｎｔＳｕｒｇ．，７０−Ａ（４）：５９５〜６０６（１９８８）。軟骨膜および骨膜は、線維質軟骨または骨をそれぞれ覆っている薄い結合組織層である。研究者の大部分は、軟骨膜および骨膜を軟骨下欠損部に縫合しているが、これによって追加の軟骨損傷が生じる。別法として、市販のフィブリン封鎖剤［ティスコル（Ｔｉｓｓｕｃｏｌ）］を使用して、ウサギの膝関節の軟骨欠損部上に軟骨膜を接着させることによって良好な結果を得ている、Ｈｏｍｍｉｎｇａ，Ｇ．Ｎ．，Ｔ．Ｊ．ｖｏｎｄｅｒＬｉｎｄｅｎ，Ｅ．Ａ．Ｗ．Ｔｅｒｗｉｎｄｔ−ＲｏｕｗｅｎｈｏｒｓｔおよびＪ．Ｄｒｕｋｋｅｒによる“ＲＥＰＡＩＲＯＦＡＲＴＩＣＵＬＡＲＤＥＦＥＣＴＳＢＹＰＥＲＩＣＨＯＮＤＲＩＡＬＧＲＡＦＴＳ”，ＡｃｔａＯｒｔｈｏｐ．Ｓｃａｎｄ，６０（３）：３２６〜３２９（１９８９）。しかしながら、この方法の実施には、２週間の関節固定が必要である。関節固定はまた、軟骨または骨軟骨破片の固定にフィブリン封鎖剤を使用する場合にも推奨される。これはこの封鎖剤の剪断力に対する耐性が貧弱なためである、Ｃｌａｅｓ，Ｌ．，Ｃ．Ｂｕｒｒｉ，Ｇ．ＨｅｌｂｉｎｇおよびＥ．Ｌｅｈｎｅｒによる“ＢＩＯＭＥＣＨＡＮＩＳＣＨＥＵＮＴＥＲＳＵＣＨＵＮＧＥＮＺＵＲＦＥＳＴＩＧＫＥＩＴＶＥＲＳＣＨＩＥＤＥＮＥＲＫＮＯＲＰＥＬＫＬＥＢＵＮＧＥＮ”，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｒ．Ａｃｔａ，４８：１１〜１３（１９８１）。フィブリン封鎖剤の使用に対する主要反対意見は、フィブリン封鎖剤がヒト病原性ウィルス、例えばヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）およびＢ型肝炎ウィルスを持ち込む恐れがあることにある。この理由から、ヒト血漿蛋白質の粗製フラクションからなるフィブリン封鎖剤は、米国では使用が許可されていない。線維化したまたは不規則な軟骨の除去（剃り落し）は、治療方法として評価されているが、ヒト膝関節の剃り落し処置された関節軟骨は再生性ではなく、かつまた線維化および細胞壊死の増大さえももたらすことがある、Ｓｃｈｍｉｄ，Ａ．およびＦ．ｓｃｈｍｉｄによる“ＲＥＳＵＬＴＳＡＦＴＥＲＣＡＲＴＩＬＡＧＥＳＨＡＶＩＮＧＳＴＵＤＩＥＤＢＹＥＬＥＣＴＲＯＮＭＩＣＲＯＳＣＯＰＹ”，Ａｍ．Ｊ．ＳｐｏｒｔｓＭｅｄ．，１５（４）：３８６〜３８７（１９８７）。ウサギの膝蓋軟骨の剃り落し処置は、有意の修復を導かない、Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，Ｎ．およびＮ．Ｓｈｅｐａｒｄによる“ＥＦＦＥＣＴＯＦＰＡＴＥＬＬＡＲＳＨＡＶＩＮＧＩＮＴＨＥＲＡＢＢＩＴ”，Ｊ．Ｏｒｔｈｏｐ．Ｒｅｓ．，５：３８８〜３９２（１９８７）。フィブリノーゲン、トロンビンおよび追加の成分を含有するバイオマトリックス（ｂｉｏｍａｔｒｉｘ）に埋め込まれた培養胎児軟骨細胞の移植片としての使用［Ｉｔａｙ，Ｓ．，Ａ．ＡｂｒａｍｏｖｉｃｉおよびＺ．Ｎｅｖｏによる“ＵＳＥＯＦＣＵＬＵＲＥＤＥＭＢＲＹＯＮＡＬＣＨＩＣＫＥＰＩＰＨＹＳＥＡＬＣＨＯＮＤＲＯＣＹＴＥＳＡＳＧＲＡＦＴＳＦＯＲＤＥＦＥＣＴＳＩＮＣＨＩＣＫＡＲＴＩＣＵＬＡＲＣＡＲＴＩＬＡＧＥ”，Ｃｌｉｎ．Ｏｒｔｈｏｐ．，２２０：２８４〜３０３（１９８７）］または骨髄由来間葉幹細胞の移植片としての使用［Ｐｉｎｅｄａ，Ｓ．Ｊ．，Ｔ．Ｇｏｔｏ，Ｖ．Ｍ．ＧｏｌｄｂｅｒｇおよびＡ．Ｉ．Ｃａｐｌａｎによる“ＯＳＴＥＯＣＨＯＮＤＲＡＬＰＲＯＧＥＮＩＴＯＲＣＥＬＬＳＥＮＨＡＮＣＥＲＥＰＡＩＲＯＦＬＡＲＧＥＤＥＦＥＣＴＳＩＮＲＡＢＢＩＴＡＲＴＩＣＵＬＡＲＣＡＲＴＩＬＡＧＥ”，ＴｒａｎｓＯｒｔｈｏｐ．Ｒｅｓ．Ｓｏｃ．，１７（２）：５９８（１９９２）］は、ニワトリにおいて成功し、完全厚さの修復が誘発された。哺乳動物またはヒトにおける、表面欠損部中への軟骨細胞の移植が成功するか否かは不明である。この方法においては、移植片の機械的固定（すなわち、局所固定）に問題が残されている。軟骨骨折の最近の処置はしばしば、組織が自発的接着性に欠けていることによって妨害される。ネジまたはキルシュナー（Ｋｉｒｓｃｈｎｅｒ）ワイヤーによる破片の安定化には、反復外科手術の介入が必要であり、その結果として追加の外傷および破壊が生じ、かつまたこの問題を別にしても、多くの場合に、安定固定は得られない。軟骨骨折は非常に正確に整復されなければならず（最良の幾何学的適合）、別段の骨折では、不充分な身体力学的性質による線維質軟骨の形成を経て治癒される、Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，Ｎ．およびＮ．Ｓｈｅｐａｒｄによる“ ＨＥＡＬＩＮＧＯＦＡＲＴＩＣＵＬＡＲＣＡＲＴＩＬＡＧＥＩＮＩＮＴＲＡ−ＡＲＴＩＣＵＬＡＲＦＲＡＣＴＵＲＥＳＩＮＲＡＢＢＩＴＳ”，Ｊ．ＢｏｎｅａｎｄＪｏｉｎｔＳｕｒｇ．，６２−Ａ：６２８〜６３４（１９８０）。骨軟骨疾患は未知の、多因性病因による骨軟骨病巣を有する。関節部に分離した骨軟骨破片を有する患者の大部分は、外科手術を受けなければならないが、手術を行わない処置は変形性関節炎への進行を示す、ＦｅｄｅｒｉｃｏＤ．Ｊ．，Ｊ．Ｋ．ＬｙｎｃｈおよびＰ．Ｊｏｋｌによる“ＯＳＴＥＯＣＨＯＮＤＲＩＴＩＳＤＩＳＳＥＣＡＮＳＯＦＴＨＥＫＮＥＥ：ＡＨＩＳＴＯＲＩＣＡＬＲＥＶＩＥＮＯＦＥＴＩＯＬＯＧＹＡＮＤＴＲＥＡＴＭＥＮＴ”，Ａｒｔｈｒｏｓｃｏｐｙ，６（３）：１９０〜１９７（１９９０）。骨軟骨破片の固定に関わる選択には、圧縮ネジ、キルシュナーワイヤー、または圧縮ピン処置システム（フックドワイヤー、固定ネジ、およびボルト）の使用が包含される、Ｊａｋｏｂ，Ｒ．Ｐ．による“ＴＨＥＴＲＥＡＴＭＥＮＴ０ＦＯＳＴＥＯＣＨＯＮＤＲＩＴＩＳＤＩＳＳＥＣＡＮＳ０ＦＴＨＥＫＮＥＥＪＯＩＮＴＵＳＩＮＧＡＮＥＷＣＯＭＰＲＥＳＳＩＯＮＷＩＲＥＳＹＳＴＥＭ”，Ｚ．ＵｎｆａｌｌｃｈｉｒＶｅｒｓｉｃｈｅｒｕｎｇｓｍｅｄ．，８３（２）：１０４〜１１０（１９９０）；Ｓｃｏｔｔ，Ｄ．Ｊ．およびＣ．Ａ．Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎによる“ＯＳＴＥＯＣＨＯＮＤＲＩＴＩＳＤＩＳＳＥＣＡＮＳＯＦＴＨＥＫＮＥＥＩＮＡＤＵＬＴＳ”，Ｃｌｉｎ．Ｏｒｔｈｏｐ．，７６：８２〜８６（１９９０）およびＳｍｉｌｉｅ，Ｉ．による“ＯＳＴＥＯＣＨＯＮＤＲＩＴＩＳＤＩＳＳＥＣＡＮＳ，Ｌｏｎｄｏｎ，Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ（１９６０）。大部分の場合に、金属を取り出すための２回目の手術が必要である。骨軟骨切裂の処置における生物学的接着剤の有効性は、現在まで評価されていない。ヒト半月板は円盤形状または半月形状の軟骨である（これは主として放射状に配列したコラーゲン繊維からなる）。例えば膝関節におけるように、半月板は関節表面間に存在し、関節適合を改善し、かつまた点接触を減少させる［ＲＯＣＫＷＯＯＤＡＮＤＧＲＥＥＮ´ＳＦＲＡＣＴＵＲＥＳＩＮＡＤＵＬＴＳ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｊ．Ｂ．ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＣｏｍｐａｎｙ（１９９１）に掲載されたＳｃｏｔｔ，Ｗ．Ｎ．およびＪ．Ｎ．Ｉｎｓａｌｌによる“ＩＮＪＵＲＩＥＳＯＦＴＨＥＫＮＥＥ”］。半月板の中央部分および内部は、無血管、無神経およびまた無リンパ管の線維質軟骨からなる、Ａｒｎｏｃｚｋｙ，Ｓ．Ｐ．およびＲ．Ｆ．Ｗａｒｒｅｎによる“ＭＩＣＲＯＶＡＳＣＵＬＡＴＵＲＥＯＦＴＨＥＨＵＭＡＮＭＥＮＩＳＣＵＳ”，Ａｍ．Ｊ．ＳｐｏｒｔｓＭｅｄ．１０（２）：９０〜９５（１９８２）。血管末端に生じ、３ｃｍより長いかまたは短い、半月板破損のみは機械的縫合に応答する。その他の種類の半月板破損の場合には、半月板の内部部分を一般に削り取る。この処置は、大部分の場合に、変形性関節疾患を導く［ＲＯＣＫＷＯＯＤＡＮＤＧＲＥＥＮ´ＳＦＲＡＣＴＵＲＥＳＩＮＡＤＵＬＴＳ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｊ．Ｂ．ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＣｏｍｐａｎｙ（１９９１）に掲載されたＳｃｏｔｔ，Ｗ．Ｎ．およびＪ．Ｎ．Ｉｎｓａｌｌによる“ＩＮＪＵＲＩＥＳＯＦＴＨＥＫＮＥＥ”］。有効な生物学的封鎖剤の使用による、あらゆる種類の半月板破損の修復方法は、臨床上で格別の価値を有する。この方法は、手術後に高頻発する変形性関節疾患を最低にするか、または防止さえする。軟骨形成を剌激する潜在能力を有する多くの物質が知られている。例えば、コラーゲンスポンジインプラントは、軟骨修復を助長することができる、Ｓｐｅｅｒ，Ｄ．Ｐ．，Ｍ．Ｃｈｖａｐｉｌ，Ｒ．Ｇ．ＶｏｌｚおよびＭ．Ｄ．Ｈｏｌｍｅｓによる“ＥＮＨＡＮＣＥＭＥＮＴＯＦＨＥＡＬＩＮＧＩＮＯＳＴＥＯＣＨＯＮＤＲＡＬＤＥＦＥＣＴＳＢＹＣＯＬＬＡＧＥＮＳＰＯＮＧＥＩＭＰＬＡＮＴＳ”，Ｃｌｉｎ．Ｏｒｔｈｏｐ．，１４４：３２６〜３３５（１９７９）。ベータ型形質転換成長因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｂｅｔａ）［Ｓｅｙｅｄｉｎ，Ｓ．Ｍ．，Ａ．Ｙ．ＴｈｏｍｐｓｏｎおよびＨ．Ｂｅｎｔｚによる“ＣＡＲＴＩＬＡＧＥ−ＩＮＤＵＣＩＮＧＦＡＣＴＯＲ−α：ＡＰＰＡＲＥＮＴＩＤＥＮＴＩＴＹＴＯＴＲＡＮＳＦＯＲＭＩＮＧＧＲＯＷＴＨＦＡＣＴＯＲ−β，Ｊ．Ｂｉｏ１．Ｃｈｅｍ．２６１（１３）：５６９３〜５６９５（１９８６）およびＳｐｏｒｎ，Ｍ．Ｂ．，Ａ．Ｂ．ＲｏｂｅｒｔｓおよびＬ．Ｍ．Ｗａｋｅｆｉｅｌａｎｄ，Ｒ．Ｋ．Ａｓｓｏｉａｎｄによる “ＴＲＡＮＳＦＯＲＭＩＮＧＧＲＯＷＴＨＦＡＣＴＯＲ−β：ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬＦＵＮＣＴＩＯＮＡＮＤＣＨＥＭＩＣＡＬＳＴＲＵＣＴＵＲＥ ”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２３：５３２〜５３４（１９８６）、線維芽細胞成長因子［Ｚａｐｆ，Ｊ．およびＥ．Ｒ．Ｆｒｏｅｓｃｈによる“ＩＮＳＵＬＩＮ−ＬＩＫＥＧＲＯＷＴＨＦＡＣＴＯＲＳ／ＳＯＭＡＴＯＭＥＤＩＮＳ：ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ，ＳＥＣＲＥＴＩＯＮ，ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬＡＣＴＩＯＮＳＡＮＤＰＨＹＳＩＯＬＯＧＩＣＡＬＲＯＬＥ”，Ｈｏｒｍ．Ｒｅｓ．，２４：１２１〜１３０（１９８６）］およびインシュリン様成長因子［Ｈａｕｓｃｈｋａ，Ｐ．Ｖ．，Ａ．Ｅ．ＭａｖｒａｋｏｓおよびＭ．Ｄ．Ｉａｆｒａｔｉによる “ＧＲＯＷＴＨＦＡＣＴＯＲＳＩＮＢＯＮＥＭＡＴＲＩＸ：ＩＳＯＬＡＴＩＯＮＯＦＭＵＬＴＩＰＬＥＴＹＰＥＳＢＹＡＦＦＩＮＩＴＹＣＨＲＯＭＡＴＯＧＲＡＰＨＹＯＮＨＥＰＡＲＩＮ−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６１（２７）：１２６６５〜１２６７４（１９８６）］のような多くの蛋白質が、軟骨形成を促進することができる。別の方法では、有用な因子の大部分の同定およびこれらを損傷部位に供給し、固定する方法の発見が必要である（Ｂｕｃｋｗａｌｔｅｒ等による前記刊行物）。しかしながら、改良された生物学的封鎖剤は、このような生体活性物質の臨床上の有用性を格別に助長することができる。Ｂ型肝炎または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を導くウィルス感染の危険を伴うことなく使用することができる、有効な生物学的封鎖剤は、前記状況の全部における新規な治療可能性を確実に開くものである。発明の要旨本発明は、調合した生物学的接着剤組成物およびその使用方法に関するものである。この組成物は医薬上で許容される水性担体中に組織トランスグルタミナーゼを含有する。本発明の方法は、組織のまたは酵素それ自体のアミン供与体とグルタミニル残基との間の反応を触媒することによって、組織表面の処置に際して、組織表面間接着を促進させるのに有効な触媒量（１００μｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌ）の組織トランスグルタミナーゼを含有する組成物を使用することによって実施される。この担体はまた、上記反応を促進させる２価金属イオンを含有する。特定の態様において、本発明の生物学的接着剤組成物は、約７〜約８．５のｐＨを有し、緩衝剤およびカルシウム（Ｃａ²⁺⁺）イオンを含有する医薬上で許容される担体中に、組織トランスグルタミナーゼを含有する。さらにまた、組織トランスグルタミナーゼを使用することによって、当該組成物中に蛋白質分解酵素を含有させる必要性が排除され、これによって組織損傷（例えば、フィブリン封鎖剤などの中に存在するトロンビンおよびプラスミンにより誘発される組織損傷）の危険が制限される。本発明の封鎖剤組成物は場合により、１種または２種以上のマトリックス形成蛋白質、例えばフィブロネクチン、または成長因子、例えばβ型形質転換成長因子、を含有することができる。組織トランスグルタミナーゼは動物の細胞および細胞生成物から得ることができる。本発明の生物学的封鎖組成物で使用するための組織トランスグルタミナーゼの組織供給源は、ヒトまたは動物の身体のかなりの臓器および細胞種、例えば肺臓、肝臓、脾臓、腎臓、心臓筋肉、骨格筋肉、眼レンズ、内皮細胞、赤血球、平滑筋細胞、骨およびマクロファージを包含する細胞および細胞生成物からなる。本発明の生物学的接着剤組成物は、整形外科または外傷外科において、組織表面の処置に使用するのに特に適している。本組成物はまた、生体分解性または非生体分解性のマトリックス中に埋め込まれた細胞を包含するバイオマトリックスの処置に使用することもできる。このバイオマトリックスはまた、トランスグルタミナーゼ基質部位を有する天然産出または合成の蛋白質を含有することができる。この接着剤は天然組織表面とバイオマトリックス被覆したインプラント材料との間の接着を助長することができる。組織トランスグルタミナーゼは、組換えＤＮＡ組織トランスグルタミナーゼであることができ、および特にその接着促進に影響を及ぼすことなく、天然組織トランスグルタミナーゼとは相違する分子領域を有する組換えＤＮＡ組織トランスグルタミナーゼであることができる。本発明の前記特徴ならびに当該封鎖剤組成物およびその使用方法の別の態様は、以下の詳細な説明および図面を参照することによりさらに理解されるであろう。図面の簡単な説明図１は、５０％のインキュベーション相対湿度、１０分間のインキュベーション時間における、シリンダー状軟骨の転置に必要な剪断力の影響を示すものである。図２は、５０％のインキュベーション相対湿度、１５分間のインキュベーション相対時間における、シリンダー状軟骨の転置に必要な剪断力の影響を示すものである。図３は、５０％のインキュベーション相対湿度における、シリンダー状軟骨の転置に必要な剪断力の影響を示すものである。図４は、５０％または８０％のインキュベーション相対湿度、１５分間のインキュベーション時間における、シリンダー状軟骨の転置に必要な剪断力の影響を示すものである。図５は、５０％のインキュベーション相対湿度、１０分間のインキュベーション時間における、シリンダー状軟骨の転置に必要な剪断力の影響を示すものであり、事前の５分間のコンドロイチナーゼＡＣ（ＣＡＣ）によるシリンダー状軟骨表面の処置を伴う場合（ｔＴＧ＋ＣＡＣ）または伴わない場合（ｔＴＧ）が示されている。詳細な説明Ａ．組織トランスグルタミナーゼ本発明の生物学的封鎖剤組成物で使用する組織トランスグルタミナーゼ酵素を調製するための供給源は、ヒトまたは動物の身体のかなりの臓器および細胞種、例えば肺臓、肝臓、脾臓、腎臓、心臓筋肉、骨格筋肉、眼レンズ、内皮細胞、赤血球、平滑筋細胞、骨およびマクロファージを包含する細胞および細胞生成物からなる。これらの酵素の組織供給源は、個々の医療指示に応じて、選択し、または特別に調節することができる。「組織トランスグルタミナーゼ」（ｔＴＧ＝トランスグルタミナーゼＩＩ＝Ｃ型トランスグルタミナーゼ）の用語または本発明において酵素の形態で特別に使用されているものとしてのトランスグルタミナーゼの用語は、細胞起源または後の翻訳修飾から独立して使用されている［Ｋ．Ｉｋｕｒａ，Ｔ．Ｎａｓｕ，Ｈ．Ｙｏｋａｔａ，Ｙ．Ｔｓｕｃｈｉｙａ，Ｒ．ＳａｓａｋｉおよびＨ．Ｃｈｉｂａによる“ＡＭＩＮＯＡＣＩＤＳＥＱＵＥＮＣＥＯＦＧＵＩＮＥＡＰＩＧＬＩＶＥＲＴＲＡＮＳＧＬＵＴＡＭＩＮＡＳＥＦＲＯＭＩＴＳｃＤＮＡＳＥＱＵＥＮＣＥ”，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７：２８９８〜２９０５（１９８８）］。この酵素は、組換えＤＮＡ技術により製造することができ、その活性部位に影響しない領域で修飾して、使用に良好な形態（例えば、保存安定性、使用方法、グルタミニル基質品質などの点）、より大きい免疫学的寛容性、またはある場合には酵素能力を得ることができる。Ｂ．医薬上で許容される担体または媒質組織トランスグルタミナーゼは、医薬上で許容される担体または媒質中に配合することができる。この担体は約７〜約８．５の範囲のｐＨを維持するために、緩衝剤を含有する。トリス（Ｔｒｉｓ）−緩衝剤またはヘペス（ＨＥＰＥＳ）− 緩衝剤を使用することができる。好適トリス−緩衝剤は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩である。その他の種類の緩衝剤も使用することができるが、高濃度の炭酸塩、酢酸塩およびリン酸塩緩衝剤の使用（あるいはまた、このような緩衝剤中のカルシウムイオンの溶解度が小さいことから、Ｃａ²⁺より大きいカルシウムイオンの使用）は回避することが望ましい。軟骨用途に対しては、カルシウム（Ｃａ²⁺）イオンをまた、０．５ｍＭ以上、好ましくは約５０〜１００ｍＭ以上の濃度で存在させると好ましく、これにより反応が加速される。ストロンチウムは、使用することができる２値金属イオンのもう一つの例である。Ｃ．マトリックス蛋白質本発明の生物学的封鎖剤組成物は場合により、マトリックス形成蛋白質を含有することができる。この蛋白質は、その成分の量および種類に係わり、特定の用途に応じて調整することができ、コラーゲン、フィブリン、フィブリノーゲン、フィブロネクチン、エンタクチン、オステオネクチン、オステオポンチン、トロンボスポンジン、ビトロネクチン、β−ラクトグロブリンおよびカゼイン、ならびにその混合物からなる群から選択することができる。一般に、組織トランスグルタミナーゼ触媒反応のための１個または２個以上のアミン受容部位を含有するかぎり、いかなる蛋白質も本封鎖剤組成物に使用することができる。Ｄ．成長因子本発明の生物学的接着剤組成物はまた、β型形質転換成長因子族、α型形質転換成長因子族、インシュリン様成長因子族、表皮成長因子、血小板由来成長因子族、腫瘍壊死因子族、線維芽細胞成長因子族およびインターロイキン類からなる群から選択される成長因子を含有することができる。Ｅ．整形外科、外傷外科、または形成外科用途本発明の生物学的接着剤組成物は、関節骨折、軟骨欠損、表在軟骨欠損（軟骨欠損）、完全厚さ欠損、骨軟骨切裂、半月板破損、靭帯破損、腱破損、筋肉外傷、筋腱関節外傷、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｅ）移植、骨移植、靭帯移植、腱移植、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）移植、軟骨−骨移植、骨移植、皮膚移植物固定、移植（修復）神経および血管吻合、および上記組織表面の組み合わせ処置からなる群から選択される整形外科または外傷外科における組織表面の処置に使用することができる。［Ｓｃｈｌａｇ，Ｇ．，Ｒｅｄｅ，Ｈ．（Ｅｄｓ）による“ＦＩＢＲＩＮＳＥＡＬＡＮＴＩＮＯＰＥＲＡＴＩＶＥＭＥＤＩＣＩＮＥ”，ＴｒａｕｍａｔｏｌｏｇｙＯｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ，Ｖｏｌ．７，Ｓｐｒｉｎｇｅ出版社、ＮｅｗＹｏｒｋ（１９８６）参照］。Ｆ．その他の用途本発明の生物学的接着剤組成物は、胚転移（ｅｍｂｒｙｏｔｒａｎｓｆｅｒ）などの別の用途、およびまた組織表面とバイオマトリックス被覆インプラント材料との間の接着を助長するために、フィブリングルーの代わりに使用することができる。このバイオマトリックスインプラントはまた、トランスグルタミナーゼ基質部位を有する天然産生または合成の蛋白質を含有できる。このマトリックスは、生体分解性または生体非分解性であることができ、この接着剤はマトリックス中に埋め込まれた細胞を使用するためのものであることができる（間葉細胞、軟骨芽細胞、軟骨細胞、幹細胞など）。この方法の修正方法には、組織表面を消化性酵素により予備処理して、接着を助長する方法が包含される。例えば、組織表面をコンドロイチナーゼＡＣまたはＡＢＣおよび（または）その他の消化性酵素により予備処理すると、組織トランスグルタミナーゼの基質の利用性が増大され、従って接着能力を増加される（図４参照）。提案される生物学的封鎖剤に関わる分子上の論拠本発明の方法および組成物では、生理学的事象に似ており、外来基質蛋白質を添加しなくても、封鎖作用を可能にする条件下における組織トランスグルタミナーゼによる組織表面蛋白質の架橋が使用される。成長因子ＸＩＩＩ、血漿トランスグルタミナーゼではなく、組織トランスグルタミナーゼを使用することによって、公知の市販封鎖剤が基づく方法とは相違している。本発明の生物学的封鎖剤は、より広い特異性を有し、他のいずれの蛋白質添加物も使用することなく、酵素単独の作用により、組織表面の接着を可能にする。本発明の生物学的封鎖剤は、因子ＸＩＩＩを含有する市販の封鎖剤が具備するよりも大きい剪断力に対する安定を有することが見出された。本発明の生物学的封鎖剤の鍵物質は、組織トランスグルタミナーゼである。この酵素は、蛋白質が架橋して、網状ポリマーを形成する化学反応を触媒する。この酵素は、トランスグルタミナーゼと称される大きい酵素一族に属しており、中でも組織および体液に広く分布されていることが証明されている。かなりの生理学的プロセス中で、例えば止血および傷口治癒プロセス中のフィブリン凝固における、末端分化細胞の細胞膜における、各種細胞外マトリックスにおける、およびまた表皮のケラチン化したエンベロープの形成におけるプロセス中で、蛋白質はトランスグルタミナーゼにより変性される。その生物学的機能は数少ない場合について知られているのみであるが、トランスグルタミナーゼの作用のメカニズムの特徴は分子レベルでは充分に確認されている。トランスグルタミナーゼ（ＥＣ２．３．２．１３）はＣａ²⁺依存アシル転移反応を触媒する。この反応では、ペプチド結合したグルタミン残基と種々の一級アミンとの間で新しいγ−アミド結合が形成される［Ｆｏｌｋ，Ｊ．Ｅ．による“ ＴＲＡＮＳＧＬＵＴＡＭＩＮＡＳＥＳ”，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，４９：５１７〜５３１（１９８０）；Ｆｏｌｋ，Ｊ．Ｅ．およびＪ．Ｓ．Ｆｉｎｌａｙｓｏｎによる“ＴＨＥ ε−（γ−ＧＬＵＴＡＭＹＬ）ＬＹＳＩＮＥＣＲＯＳＳＬＩＮＫＡＮＤＴＨＥＣＡＴＡＬＹＴＩＣＲＯＬＥＯＦＴＲＡＮＳＧＬＵＴＡＭＩＮＡＳＥＳ”，Ａｄｖ．ＰｒｏｔｅｉｎＣｈｅｍ．，３１：１〜1３３（１９７７）およびＬｏｒａｎｄ，Ｌ．およびＳ．Ｍ．Ｃｏｎｒａｄによる“ＴＲＡＮＳＧＬＵＴＡＭＩＮＡＳＥＳ”，Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｃｈｅｍ．，５８：９〜３５（１９８４）］。グルタミン残基はアシル供与体として作用し、最も慣用のアシル受容体はペプチド結合したリジン残基のε−アミノ基（反応経路Ｉ）またはプトレスシン（ｐｕｔｒｅｓｃｉｎｓ）またはスペルミジン（ｓｐｅｒｍｉｄｉｎｅ）などの若干の天然産生（ポリ）アミンの一級アミノ基（反応経路ＩＩ）である。第一の場合に、この反応は蛋白質における、または蛋白質間におけるγ−グルタミル−ε−リジン架橋の形成をもたらす。第二の反応経路に従う場合には、生物学的活性に多分影響を及ぼす修飾が生じ、蛋白質の逆戻りが生じ、ポリマーは形成されない。反応経路ＩＰ−（ＣＨ₂）₂ＣＯＮＨ₂＋Ｈ₂Ｎ−（ＣＨ₂）₄−Ｐ → グルタミン蛋白質結合リジンＰ−（ＣＨ₂）₂ＣＯＮＨ−（ＣＨ₂）₄−Ｐ＋ＮＨ₃ 反応経路ＩＩＰ−（ＣＨ₂）₂ＣＯＮＨ₂＋Ｈ₂Ｎ−Ｒ → グルタミン一級アミンＰ−（ＣＨ₂）₂ＣＯＮＨ−Ｒ＋ＮＨ₃ 式中、Ｐ＝蛋白質であり、そしてＲ＝各種構造の有機側鎖である。グルタミニル基質として作用する蛋白質の数は、主要構造および形状の両方がグルタミン残基が反応性であるか否かを決定することから、格別に制限される。これに対して、アシル受容体における構造上の差異に対する寛容性は格別であり、−（ＣＨ₂）₄−ＮＨ₂基の存在を必要とするだけである。これは、何故に蛋白質結合リジン残基と小型一級アミンとの両方がアミン供与体として作用できるのかを説明している。すなわち、特定の組織では、小型蛋白質サブセットのみがこの酵素のグルタミニル基質であり、他方組織の大部分の蛋白質はリジン残基のε −アミノ基に関与して、当該架橋反応のアシル受容体として作用することができる。さらにまた、相違するグルタミニル基質に係わる特異性は、トランスグルタミナーゼの種類により変化する。数種のトランスグルタミナーゼが、基質として単一の蛋白質を認識することができるが、多くの場合に、相違するグルタミン残基に対して、相違する親和性および（または）特異性を有する。或る種の蛋白質はトランスグルタミナーゼ族の中の唯一の一員のみに対する基質として作用する。因子ＸＩＩＩ、血漿トランスグルタミナーゼは、市販のフィブリン封鎖剤の基本成分であるが、組織トランスグルタミナーゼに比較して、より制限された群の蛋白質結合したグルタミンに対してのみ作用する［Ｇｏｒｍａｎ，Ｊ．Ｊ．およびＪ．Ｅ．Ｆｏｌｋによる“ＳＴＲＵＣＴＵＲＡＬＦＥＡＴＵＲＥＳＯＦＧＬＵＴＡＭＩＮＥＳＵＢＳＴＲＡＴＥＳＦＯＲＴＲＡＮＳＧＬＵＴＡＭＩＮＡＳＥＳ”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５６（６）：２７１２〜２７１５（１９８１）およびＧｏｒｍａｎ，Ｊ．Ｊ．およびＪ．Ｅ．Ｆｏｌｋによる“ ＳＴＲＵＣＴＵＲＡＬＦＥＡＴＵＲＥＳＯＦＧＬＵＴＡＭＩＮＥＳＵＢＳＴＲＡＴＥＳＦＯＲＴＲＡＮＳＧＬＵＴＡＭＩＮＡＳＥＳ”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５９（１４）：９００７〜９０１０（１９８４）］。組織トランスグルタミナーゼは、広範囲の組織に分布しており、主として細胞内酵素である［Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｃ．Ｓ．，Ｐ．Ｊ．ＢｉｒｃｋｂｉｃｈｌｅｒおよびＲ．Ｈ．Ｒｉｃｅによる“ＴＲＡＮＳＧＬＵＴＡＭＩＮＡＳＥＳ：ＭＵＬＴＩＦＵＮＣＴＩＯＮＡＬＣＲＯＳＳ−ＬＩＮＫＩＮＧＥＮＺＹＭＥＳＴＨＡＴＳＴＡＢＩＬＩＺＥＴＩＳＳＵＥＳ”，ＦＡＳＥＢＪ５：３０７１〜３０７７（１９９１）］。本発明の封鎖剤は、因子ＸＩＩＩではなく、組織トランスグルタミナーゼを使用する。その主要利点は、その広い基質特異性がより強力な接着をもたらすことにある。因子ＸＩＩＩは、血漿中を循環している場合には、触媒性を有するａ− サブユニットのダイマー（それぞれＭｒ−８３´０００）および２個の調節ｂ− サブユニット（Ｍｒ−８０´０００）からなるテトラマー、ａ₂ｂ₂（Ｍｒ−３２０´０００）として存在し、あるいはまた例えば血小板、白血球および胎盤においては、ａ−サブユニットのみのダイマーとして存在する、Ｃａｒｒｅｌｌ，Ｎ．Ａ．，Ｈ．Ｐ．ＥｒｉｃｋｓｏｎおよびＪ．ＭｃＤｏｎａｇｈによる“ＥＬＥＣＴＲＯＮＭＩＣＲＯＳＣＯＰＹＡＮＤＨＹＤＲＯＤＹＮＡＭＩＣＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳＯＦＦＺＣＴＯＲＸＩＩＩＳＵＢＵＮＩＴＳ”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６４（１）：５５１〜５５６（１９８９）。因子ＸＩＩＩのａ−サブユニットは組織トランスグルタミナーゼに対して高度の配列相同性を有するが、この蛋白質は相違する遺伝子に由来する、Ｉｃｈｉｎｏｓｅ，Ａ．，Ｒ．Ｅ．ＢｏｔｔｅｎｕｓおよびＥ．Ｗ．Ｄａｖｉｅによる“ＳＴＲＵＣＴＵＲＥＯＦＴＲＡＮＳＧＬＵＴＡＭＩＮＡＳＥＳ”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６５（２３）：１３４１１〜１３４１４（１９９０）。因子ＸＩＩＩはチモーゲンであり、トロンビン開裂により因子ＸＩＩＩａに活性化され、引き続きＣａ⁺²依存性で活性ａ−サブユニットと不活性ｂ−サブユニットとに解離する。市販のフィブリン封鎖剤は活性剤因子ＸＩＩＩ、フィブリノーゲン、フィブロネクチン、トロンビン、ＣａＣｌ₂を含有するヒト血漿の部分精製したフラクションからなる。大部分の組織トランスグルタミナーゼは、約７７´０００の分子質量を有するモノマー型球状蛋白質であり（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ等による前記刊行物およびＩｃｈｉｎｏｓｅ等による前記刊行物）、因子ＸＩＩＩとは異なり、蛋白質分解的活性化を必要としない。この性質は、再現使用を容易にする。軟骨形成を刺激する、β型形質転換成長因子およびインシュリン様成長因子と同様の多くの代用物質が従来開示されており、最適の再生を達成するものとされる新規封鎖剤に関連して使用されている。我々は最近、組織トランスグルタミナーゼが種々の軟骨で発現することを証明した。Ａｅｓｃｈｌｉｍａｎｎ，Ｄ．，Ｗｅｔｔｅｒｗａｌｄ，Ａ．，Ｆｌｅｉｓｃｈ，Ｈ．およびＰａｕｌｓｓｏｎ，Ｍによる“ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＴＩＳＳＵＥＴＲＡＮＳＧＬＵＴＡＭＩＮＡＳＥＩＮＳＫＥＬＥＴＡＬＴＩＳＳＵＥＳＣＯＲＲＥＬＡＴＥＳＷＩＴＨＥＶＥＮＴＳＯＦＴＥＲＭＩＮＡＬＤＩＦＦＥＲＥＮＴＩＡＴＩＯＮＯＦＣＨＯＮＤＲＯＣＹＴＥＳ”，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ．１２０（６），１４６１〜１４７０頁（１９９３）。組織トランスグルタミナーゼはまた、軟骨における生理学的架橋を触媒し、この観点から、本発明の封鎖剤は天然で生じるプロセスを偽装するものである。酵素およびその反応生成物の両方が正常軟骨で発現することから、ほとんど毒性を有していない。トランスグルタミナーゼは、表皮の表皮層を形成する不溶性膜の形成中における蛋白質架橋を触媒する、Ｔｈａｃｈｅｒ，Ｓ．Ｍ．およびＲ．Ｈ．Ｒｉｃｅによる“ＫＥＲＡＴＩＮＯＣＹＴＥ−ＳＰＥＣＩＦＩＣＴＲＡＮＳＧＬＵＴＡＭＩＮＡＳＥＯＦＣＵＬＴＵＲＥＤＨＵＭＡＮＥＰＩＤＥＲＭＡＬＣＥＬＬＳ：ＲＥＬＡＴＩＯＮＴＯＣＲＯＳＳ−ＬＩＮＫＥＤＥＮＶＥＬＯＰＥＦＯＲＭＡＴＩＯＮＡＮＤＴＥＲＭＩＮＡＬＤＩＦＦＥＲＥＮＴＩＡＴＩＯＮ”，Ｃｅｌｌ４０：６８５〜６９５（１９８５）。大規模架橋の生成は皮膚における免疫学的応答を誘発させないことから、組織トランスグルタミナーゼにより形成される生成物が免疫原性ではないことは明らかである。高度にコラーゲン質の骨格組織で（ｔＴＧ）酵素を使用するための重要な先要条件として、骨および腱で発現するコラーゲン、タイプＩＩＩ（Ｂｏｗｎｅｓｓ等による前記刊行物、１９８７）および軟骨で発現するコラーゲン、タイプＩＩ（Ａｅｓｃｈｌｉｍａｎｎ等による前記刊行物、１９９３）は、組織トランスグルタミナーゼのための基質である。数種の他の細胞外基質蛋白質が血管内皮様エンタクチン、オステネクチン（Ｏｅｓｔｅｎｅｃｔｉｎ）と緊密に関連しており［Ａｅｓｃｈｌｉｍａｎｎ，Ｄ．およびＭ．Ｐａｕｌｓｓｏｎによる“ＣＲＯＳＳ−ＬＩＮＫＩＮＧＯＦＬＡＭＩＮＩＮ−ＮＩＤＯＧＥＮＣＯＭＰＬＥＸＥＳＢＹＴＩＳＳＵＥＴＲＡＮＳＧＬＵＴＡＭＩＮＡＳＥ”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６６：１５３０８〜１５３１７（１９９１）；Ａｅｓｃｈｌｉｍａｎｎ，Ｄ．，Ｗｅｔｔｅｒｗａｌｄ，Ａ．，Ｆｌｅｉｓｃｈ，Ｈ．およびＰａｕｌｓｓｏｎ，Ｍ．による“ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＴＩＳＳＵＥＴＲＡＮＳＧＬＵＴＡＭＩＮＡＳＥＩＮＳＫＥＬＥＴＡＬＴＩＳＳＵＥＳＣＯＲＲＥＬＡＴＩＯＮＳＷＩＴＨＥＶＥＮＴＳＯＦＴＥＲＭＩＮＡＬＤＩＦＦＥＲＥＮＴＩＡＴＩＯＮＯＦＣＨＯＮＤＲＯＣＹＴＥＳ”，Ｊ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ（１９９３），印刷中］およびまたビトロネクチン、フィブロネクチンおよびフィブリン（フィブリノーゲン）と緊密に関連している［Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｃ．Ｓ．，Ｐ．Ｊ．ＢｉｒｃｋｂｉｃｈｌｅｒおよびＲ．Ｈ．Ｒｉｃｅによる“ＴＲＡＮＳＧＬＵＴＡＭＩＮＡＳＥＳ：ＭＵＬＴＩＦＵＮＣＴＩＯＮＡＬＣＲＯＳＳ−ＬＩＮＫＩＮＧＥＮＺＹＭＥＳＴＨＡＴＳＴＡＢＩＬＩＺＥＴＩＳＳＵＥＳ”，ＦＡＳＥＢＪ．５：３０７１〜３０７７（１９９１）］という発見は、血管損傷の修復に対する組織トランスグルタミナーゼの潜在的用途範囲を拡大する。例本発明の生物学的封鎖剤によりもたらされる接着強度と市販組成物で得られる接着強度との比較を可能にする生物学的接着剤の接着強度の量的評価に係わるインビトロシステムが開発されている。組織トランスグルタミナーゼ（ｔＴＧ）を、モルモット肝臓ホモジネート上清をＤＥＡＥ−セルロースクロマトグラフイに付し、次いで当該酵素をプロタミン沈殿させ、次いで分子ふるいカラム上で再度クロマトグラフイに付すことによって、モルモット肝臓から精製した、Ｃｏｎｎｅｌｌａｎ，Ｊ．Ｍ．，Ｓ．Ｉ．Ｃｈｕｎｇ，Ｎ．Ｋ．Ｗｈｅｔｚｅｌ，Ｌ．Ｍ．ＢｒａｄｌｅｙおよびＪ．Ｅ．Ｆｏｌｋによる“ＳＴＲＵＣＴＵＲＡＬＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳＯＦＧＵＩＮＥＡＰＩＧＬＩＶＥＲＴＲＡＮＳＧＬＵＴＡＭＩＮＡＳＥ”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４６（４）：１０９３〜１０９８（１９７１）。ｔＴＧを集め、１ｍＭＥＤＴＡおよび１５０ｍＭＮａＣｌを含有する、１０ｍＭトリス／アセテート（ｐＨ６．０）中で１ｍｇ／ｍｌに濃縮した、Ａｅｓｃｈｌｉｍａｎｎ，Ｄ．およびＭ．Ｐａｕｌｓｓｏｎによる“ＣＲＯＳＳ−ＬＩＮＫＩＮＧＯＦＬＡＭＩＮＩＮ−ＮＩＤＯＧＥＮＣＯＭＰＬＥＸＥＳＢＹＴＩＳＳＵＥＴＲＡＮＳＧＬＵＴＡＭＩＮＡＳＥ”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６６：１５３０８〜１５３１７（１９９１）。組織トランスグルタミナーゼを、市販のフィブリン接着剤［ティスコル（Ｔｉｓｓｕｃｏｌ）］および３種の別の種類の対照（ＮａＣｌ−溶液、トリス −反応緩衝剤および無処理でインキュベート）と比較した。ティスコルは、使用の前に混合する２つの溶液からなる。このうちの一つの溶液は、フィブリノーゲン７５〜１１５ｍｇ／ｍｌ、血漿フィブロネクチン２〜９ｍｇ／ｍｌ、因子ＸＩＩＩ１０〜５０Ｕ／ｍｌおよびプラスミノーゲン４０〜１２０μｇ／ｍｌからなる。他の一つの溶液は、５３ｍＭＣａＣｌ₂中の４ＩＵトロンビンからなる。３７℃に加熱し、混合した後に、これら２成分を軟骨表面に施用する。組織トランスグルタミナーゼグルーは次の２溶液からなる：Ａ）組織トランスグルタミナーゼ（１０ｍＭトリス／アセテート、ｐＨ６．０、１５０ｍＭＮａＣｌ、１ｍＭＥＤＴＡ中の１ｍｇ／ｍｌ）およびＢ）トリス反応緩衝剤（１０ｍＭトリス／ＨＣｌ、ｐＨ７．４、３００ｍＭＮａＣｌ中の０．１ＭＣａＣｌ₂ ）。これらを別々の組織表面に施用し、これら２つの組織表面を接合することによって混合させる。０．９％ＮａＣｌ溶液、トリス反応緩衝剤および無処理の軟骨表面を対照として使用した。リン酸塩緩衝した塩類溶液（ＧＩＢＣＯ）中に１Ｕ／ｍｌの活性にまで溶解したコンドロイチナーゼＡＣ（ＣＡＣ）４μｌ（Ｓｉｇｍａ）により、湿ったチャンバー内で５分間にわたり各軟骨表面を、それぞれのカートリッジ表面上で予備処理し、次いでリン酸塩緩衝した塩類溶液により十分に洗浄し、次いでセルコットンにより注意して乾燥させた。この予備処理によって、グリコサミノグリカン類（コンドロイチン４−硫酸塩およびコンドロイチン６−硫酸塩）の解重合が生じ、従って基質側により接近するようになる、Ｃａｒｎｅｙ，Ｓ．Ｌ．による“ ＰＲＯＴＥＯＧＬＹＣＡＮＳ．ＣＡＲＢＯＨＹＤＲＡＴＥＡＮＡＬＹＳＩＳ” ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＩＲＬ出版社（１９８６）。３．９ｍｍ径を有するシリンダー形状軟骨−骨を、屠殺後の１０〜２０時間の時点で、ウシ肩からミエロトミイドリル（ｍｙｅｌｏｔｏｍｙｄｒｉｌｌ）（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅＳｔｒａｕｍａｎｎ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）により得た。この軟骨の厚さの５０％を、当該シリンダー形状物の長軸に対して平行に、レザー刃により切り取った。この表面を、４μｌのｔＴＧ溶液および４μｌのトリス反応緩衝剤、１滴のフィブリングルーまたは８μｌの対照溶液により処理するか、あるいは無処理で放置した。２個のシリンダー状軟骨を直ちに、それらの切断面で接合し、この接合物を含湿チャンバー（湿度５０％または８０％）内で３７℃において１０分間または１５分間インキュベートしながら、この接合物に８０ｇの重力を垂直に負荷した。制御した線型ランプ付き剪断力（ｌｉｎｅａｒ，ｒａｍｐｅｄｓｈｅａｒｓｈｅａｒｆｏｒｃｅ）（０．２７Ｎ／Ｓ）を、このシリンダー状軟骨の先端に負荷した。この剪断力は電磁コイルおよび強磁性バーにより駆動される信号発生機および増幅器により調節し、特別に設計した負荷セル（ｌｏａｄｃｅｌｌ）（精度１．０×１０^-3Ｎ）を用いて測定した。この負荷セルを動的歪ゲージ増幅器（ＤＭＤ２０Ａ、ＨｏｔｔｉｎｇｅｒＢｌａｄｗｉｎＭｅｓｓｔｒｅｃｈｎｉｋ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）に連結した。データ自動記録器（Ｍｉｋｒｏｍｅｃ，Ｓｕｐｒａｇ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で記録し、この記録をコンピューターに伝送した。得られた剪断力のデジタル化と平行して、入力信号［リニアアップランプ（ｌｉｎｅａｒｕｐｒａｍｐ）］および測定値はオシロスコープ上で可視化することができる。シリンダー状軟骨組織試料の露出表面にｔＴＧを適用することによって、ＮａＣｌ−溶液のみ、トリス緩衝液のみまたは無溶液の対照群に比較して、より大きい接着効果が得られた［ｐ＜０．０１、ウイルコクソンサインド−ランク試験（Ｗｉｌｃｏｘｏｎｓｉｇｎｅｄ−ｒａｎｋｔｅｓｔ）］（図１）。インキュベーション時間を１０分間（図１）から１５分間（図２）に増加した後にも同一の効果が得られたが、剪断力、特にＮａＣｌ群の剪断力は増加傾向を示した。さらにまた、生成された接着力は組織トランスグルタミナーゼの濃度に依存していた（図３参照）。ティスコルと比較して、ｔＴＧは５０％の相対湿度で匹敵する接着能力を示したが、相対湿度を８０％に上昇させた場合には、ティスコルの接着能力は、より大きく減少された（図４）。コンドロイチナーゼの先行施用を伴うｔＴＧの封鎖効果は図５に示されている。本発明の他の修正または態様は、本発明の範囲から逸脱することなく、前記説明から当技術の当業者に理解されるものと見做される。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年６月１日【補正内容】請求の範囲１．組織トランスグルタミナーゼおよび医薬上で許容される担体からなり、この組織トランスグルタミナーゼは、組織の処置に際して、２価金属イオンの存在の下に接着を促進させる有効量で存在する、調合した生物学的接着剤組成物。２．水性媒質中に緩衝剤および２価金属イオンを含有し、かつまた約７〜約８．５のｐＨを有する、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。３．上記２価金属イオンがカルシウムおよびストロンチウムからなる群から選択される、請求項２に記載の生物学的接着剤組成物。４．上記２価金属イオンがカルシウムである、請求項２に記載の生物学的接着剤組成物。５．上記カルシウムが約０．５ｍＭ〜約１００ｍＭの範囲の量で存在する、請求項４に記載の生物学的接着剤組成物。６．上記組織トランスグルタミナーゼが、動物の細胞および細胞生成物の凝固物から得られるものである、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。７．上記組織トランスグルタミナーゼが、上皮、実質臓器、結合または神経組織、筋肉、軟骨、骨、肺臓、肝臓、脾臓、腎臓、心臓筋肉、骨格筋肉、眼レンズ、内皮細胞、平滑筋細胞、およびバイオマトリックスからなる群から選択され、これにより上記組織群から相当して選択される組織の接着を促進する、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。８．上記組織トランスグルタミナーゼが、約１００μｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌの量である、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。９．上記組織トランスグルタミナーゼが、肺臓、肝臓、脾臓、腎臓、心臓筋肉、骨格筋肉、眼レンズ、内皮細胞、赤血球、平滑筋細胞、骨およびマクロファージからなる細胞および細胞生成物の群から選択される組織供給源から得られるものであり、これにより上記組織群から相当して選択される組織の接着を促進する、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。 10．追加の蛋白質を含有する、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。 11．上記蛋白質が、コラーゲン、フィブリン、フィブリノーゲン、フィブロネクチン、エンタクチン、オステオネクチン、オステオポンチン、トロンボスポンジン、ビトロネクチン、β−ラクトグロブリンおよびカゼイン、ならびにその混合物からなる群から選択される、請求項１０に記載の生物学的接着剤組成物。 12．成長因子を含有する、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。 13．上記成長因子が、β型形質転換成長因子族、α型形質転換成長因子族、インシュリン様成長因子族、表皮成長因子、血小板由来成長因子族、腫瘍壊死因子族、線維芽細胞成長因子族およびインターロイキンルイン類からなる群から選択される、請求項１２に記載の生物学的接着剤組成物。 14．上記組織トランスグルタミナーゼが、組換えＤＮＡ組織トランスグルタミナーゼである、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。 15．上記組換えＤＮＡが、その接着促進に影響を及ぼすことのなく、天然組織トランスグルタミナーとは相違する分子領域を有する、請求項１４に記載の生物学的接着剤組成物。 16．関節骨折、軟骨欠損、表在軟骨欠損、完全厚さ欠損、骨軟骨切裂、半月板破損、靭帯破損、腱破損、筋肉外傷、筋鍵関節外傷、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｅ）移植、骨組織移植、靭帯移植、腱移植、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）移植、軟骨−骨移植、皮膚移植片固定、神経および血管の移植または修復、血管移植片の貼付けおよび微細血管吻合からなる群から選択される組織の処置に使用するための、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。 17．上記組織が、トランスグルタミナーゼ基質部位を有し、かつまた細胞または胚転移システム（ｔｒａｎｓｆｅｒｓｙｓｔｅｍ）を含有するバイオマトリックスからなる、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。 18．トランスグルタミナーゼ基質部位を有する天然産生または合成蛋白質をさらに含有するバイオマトリックスインプラントの処置に使用するための、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。 19．上記蛋白質が、コラーゲン、フィブリン、フィブリノーゲン、フィブロネクチン、エンタクチン、オステオネクチン、オステオポンチン、トロンボスポンジン、ビトロネクチン、β−ラクトグロブリン、カゼインおよびその混合物から選択される、請求項１８に記載の生物学的接着剤組成物。 20．組織とバイオマトリックス被覆インプラント材料との間の接着の促進に使用するための、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。 21．上記組織が、上皮、実質臓器、結合または神経組織、筋肉、軟骨、骨、肺臓、肝臓、脾臓、腎臓、心臓筋肉、骨格筋肉、眼レンズ、内皮細胞、平滑筋細胞およびバイオマトリックスからなる群から選択され、これにより上記組織群から相当して選択される組織の接着を促進する、請求項２０に記載の生物学的接着剤組成物。 22．組織の処置において、接着を促進させる方法であって、接着させる組織を用意し、次いでこの組織に、２価金属イオンの存在の下に当該組織の接着を促進させる有効量の組織トランスグルタミナーゼを施用する、ことからなる方法。 23．上記組織トランスグルタミナーゼを、約７〜約８．５のｐＨを有し、かつまた緩衝剤および２価カルシウムイオンを含有する医薬上で許容される水性担体中に配合されている、請求項２２に記載の方法。 24．上記カルシウムを、約０．１ｍＭ〜約１００ｍＭの範囲の量で存在させる、請求項２３に記載の方法。 25．上記組織トランスグルタミナーゼ（ｔＴＧ）が、肺臓、肝臓、脾臓、腎臓、心臓筋肉、骨格筋肉、眼レンズ、内皮細胞、赤血球、平滑筋細胞、骨およびマクロファージからなる細胞および細胞生成物の群から選択される組織源から得られるものであり、これにより上記組織群から相当して選択される組織の接着を促進させる、請求項２２に記載の方法。 26．上記担体が、蛋白質を含有する、請求項２３に記載の方法。 27．上記蛋白質が、コラーゲン、フィブリン、フィブリノーゲン、フィブロネクチン、エンタクチン、オステオネクチン、オステオポンチン、トロンボスポンジン、ビトロネクチン、β−ラクトグロブリンおよびカゼインならびにその混合物からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。 28．上記担体が、成長因子を含有する、請求項２３に記載の方法。 29．上記成長因子が、β型形質転換成長因子族、α型形質転換成長因子族、インシュリン様成長因子族、表皮成長因子、血小板由来成長因子族、腫瘍壊死因子族、線維芽細胞成長因子族およびインターロイキンからなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。 30．上記組織トランスグルタミナーゼが、組換えＤＮＡ組織トランスグルタミナーゼである、請求項２２に記載の方法。 31．上記組換えＤＮＡが、その接着促進に影響を及ぼすことなく、天然組織トランスグルタミナーゼとは相違する分子領域を有する、請求項３０に記載の方法。 32．関節骨折、軟骨欠損、表在軟骨欠損、完全厚さ欠損、骨軟骨切裂、半月板破損、靭帯破損、腱破損、筋肉外傷、筋鍵関節外傷、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｅ）移植、骨移植、靭帯移植、腱移植、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）移植、軟骨− 骨移植、皮膚移植片固定、神経および血管の移植または修復、血管移植片の貼付けおよび微細血管吻合からなる群から選択される組織処置に使用するための、請求項２２に記載の方法。 33．上記組織が、トランスグルタミナーゼ基質部位を有し、かつまた細胞または胚転移システムを含有するバイオマトリックスからなる、請求項２２に記載の方法。 34．トランスグルタミナーゼ基質部位を有する天然産生または合成蛋白質をさらに含有するバイオマトリックスインプラントの処置に使用するための、請求項２２に記載の方法。 35．上記蛋白質が、コラーゲン、フィブリン、フィブリノーゲン、フィブロネクチン、エンタクチン、オステオネクチン、オステオポンチン、トロンボスポンジン、ビトロネクチン、β−ラクトグロブリン、カゼインおよびその混合物から選択される、請求項３４に記載の方法。 36．組織とバイオマトリックス被覆インプラント材料との間の接着の促進に使用するための、請求項２２に記載の方法。 37．上記組織が、上皮、実質臓器、結合または神経組織、筋肉、軟骨、骨、肺臓、肝臓、脾臓、腎臓、心臓筋肉、骨格筋肉、眼レンズ、内皮細胞、平滑筋細胞およびバイオマトリックスからなる群から選択され、これにより上記組織群から相当して選択される組織の接着を促進させる、請求項２２に記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ハンジカー，エルンストビー. スイス国シーエィチ ― 4533 リードホルツ，ゾンネンレイン 32

Claims

【特許請求の範囲】１．組織トランスグルタミナーゼおよび医薬上で許容される水性担体からなり、この組織トランスグルタミナーゼは組織表面の処置に際して、これらの組織表面の接着を促進するために有効量で存在し、この担体は２価金属イオンを含有する、調合した生物学的接着剤組成物。２．約７〜約８．５のｐＨを有し、かつまた緩衝剤を含有する、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。３．上記２価金属イオンがカルシウムおよびストロンチウムからなる群から選択される、請求項２に記載の生物学的接着剤組成物。４．上記２価金属イオンがカルシウムである、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。５．上記カルシウムが約０．５ｍＭ〜約１００ｍＭの範囲の量で存在する、請求項４に記載の生物学的接着剤組成物。６．上記組織トランスグルタミナーゼが、動物の細胞および細胞生成物の凝固物から得られるものである、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。７．上記組織トランスグルタミナーゼが、肺臓、肝臓、脾臓、腎臓、心臓筋肉、骨格筋肉、眼レンズ、内皮細胞、赤血球、平滑筋細胞、骨およびマクロファージからなる細胞および細胞生成物の群から選択される組織源から得られるものであり、これにより上記組織群から相当して選択される組織の接着を促進する、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。８．追加の蛋白質を含有する、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。９．上記蛋白質が、コラーゲン、フィブリン、フィブリノーゲン、フィブロネクチン、エンタクチン、オステオネクチン、オステオポンチン、トロンボスポンジン、ビトロネクチン、β−ラクトグロブリンおよびカゼイン、ならびにその混合物からなる群から選択される、請求項８に記載の生物学的接着剤組成物。 10．成長因子を含有する、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。 11．上記成長因子が、β型形質転換成長因子族、α型形質転換成長因子族、インシュリン様成長因子族、表皮成長因子、血小板由来成長因子族、腫瘍壊死因子族、線維芽細胞成長因子族およびインターロイキンからなる群から選択される、請求項１０に記載の生物学的接着剤組成物。 12．上記組織トランスグルタミナーゼが、組換えＤＮＡ組織トランスグルタミナーゼである、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。 13．上記組換えＤＮＡが、その接着促進に影響を及ぼすことのなく、天然組織トランスグルタミナーとは相違する分子領域を有する、請求項１２に記載の生物学的接着剤。 14．関節骨折、軟骨欠損、表在軟骨欠損、完全厚さ欠損、骨軟骨切裂、半月板破損、靭帯破損、腱破損、筋肉外傷、筋鍵関節外傷、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｅ）移植、骨移植、靭帯移植、腱移植、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）移植、軟骨− 骨移植、皮膚移植片固定、神経および血管の移植または修復、血管移植片の貼付け、微細血管吻合、および上記組織表面の組合わせ処置からなる群から選択される整形外科または外傷外科における組織表面の処置に使用するための、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。 15．上記組織が、トランスグルタミナーゼ基質部位を有し、かつまた細胞または胚転移システム（ｔｒａｎｓｆｅｒｓｙｓｔｅｍ）を含有するバイオマトリックスからなる、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。 16．トランスグルタミナーゼ基質部位を有する天然産生または合成蛋白質をさらに含有するバイオマトリックスインプラントの処置に使用するための、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。 17．上記蛋白質が、コラーゲン、フィブリン、フィブリノーゲン、フィブロネクチン、エンタクチン、オステオネクチン、オステオポンチン、トロンボスポンジン、ビトロネクチン、β−ラクトグロブリン、カゼインおよびその混合物からなる群から選択される、請求項１６に記載の生物学的接着剤組成物。 18．組織表面とバイオマトリックス被覆インプラント材料との間の接着の助長に使用するための、請求項１に記載の生物学的接着剤組成物。 19．上記組織表面が、上皮、実質臓器、結合または神経組織、筋肉、軟骨、骨、肺臓、肝臓、脾臓、腎臓、心臓筋肉、骨格筋肉、眼レンズ、内皮細胞、平滑筋細胞およびバイオマトリックスからなる群から選択され、これにより上記組織群から相当して選択される組織表面の接着を促進する、請求項１８に記載の生物学的接着剤組成物。 20．組織表面間の接着を促進させる方法であって、接着させる組織表面を用意し、次いでこの組織表面の少なくとも１方に、当該組織表面間の接着を促進させる有効量の組織トランスグルタミナーゼを施用する、ことからなり、上記担体が２価金属イオンを含有する方法。 21．上記組織トランスグルタミナーゼが、約７〜約８．５のｐＨを有し、かつまた緩衝剤および２価カルシウムイオンを含有する医薬上で許容される水性担体中に配合されている、請求項２０に記載の方法。 22．上記カルシウムイオンを、約０．１ｍＭ〜約１００ｍＭの範囲の量で存在させる、請求項２１に記載の方法。 23．上記組織トランスグルタミナーゼ（ｔＴＧ）が、肺臓、肝臓、脾臓、腎臓、心臓筋肉、骨格筋肉、眼レンズ、内皮細胞、赤血球、平滑筋細胞、骨およびマクロファージからなる細胞および細胞生成物の群から選択される組織源から得られるものであり、これにより上記組織群から相当して選択される組織の接着が促進される、請求項２０に記載の方法。 24．上記担体が、蛋白質を含有する、請求項２１に記載の方法。 25．上記蛋白質が、コラーゲン、フィブリン、フィブリノーゲン、フィブロネクチン、エンタクチン、オステオネクチン、オステオポンチン、トロンボスポンジン、ビトロネクチン、β−ラクトグロブリンおよびカゼインならびにその混合物からなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。 26．上記担体が、成長因子を含有する、請求項２１に記載の方法。 27．上記成長因子が、β型形質転換成長因子族、α型形質転換成長因子族、インシュリン様成長因子族、表皮成長因子、血小板由来成長因子族、腫瘍壊死因子族、線維芽細胞成長因子族およびインターロイキンからなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。 28．上記組織トランスグルタミナーゼが、組換えＤＮＡ組織トランスグルタミナーゼである、請求項２０に記載の方法。 29．上記組換えＤＮＡが、その接着促進に影響を及ぼすことなく、天然組織トランスグルタミナーゼとは相違する分子領域を有する、請求項２８に記載の方法。 30．関節骨折、軟骨欠損、表在軟骨欠損、完全厚さ欠損、骨軟骨切裂、半月板破損、靭帯破損、腱破損、筋肉外傷、筋腱関節外傷、軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｅ）移植、骨移植、靭帯移植、腱移植、軟骨（ｃｈｏｎｄｒａｌ）移植、軟骨− 骨移植、皮膚移植片固定、神経および血管の移植または修復、血管移植片の貼付け、微細血管吻合、および上記組織表面の組合わせ処置からなる群から選択される整形外科または外傷外科における組織表面の処置に使用するための、請求項２０に記載の方法。 31．上記組織表面の少なくとも１方が、トランスグルタミナーゼ基質部位を有し、かつまた細胞または胚転移システムを含有するバイオマトリックスからなる、請求項２０に記載の方法。 32．トランスグルタミナーゼ基質部位を有する天然産生または合成蛋白質をさらに含有するバイオマトリックスインプラントの処置に使用するための、請求項２０に記載の方法。 33．上記蛋白質が、コラーゲン、フィブリン、フィブリノーゲン、フィブロネクチン、エンタクチン、オステオネクチン、オステオポンチン、トロンボスポンジン、ビトロネクチン、β−ラクトグロブリン、カゼインおよびその混合物からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。 34．組織表面とバイオマトリックス被覆インプラント材料との間の接着の促進に使用するための、請求項２０に記載の方法。 35．上記組織表面が、上皮、実質臓器、結合または神経組織、筋肉、軟骨、骨、肺臓、肝臓、脾臓、腎臓、心臓筋肉、骨格筋肉、眼レンズ、内皮細胞、平滑筋細胞およびバイオマトリックスからなる群から選択され、これにより上記組織群から相当して選択される組織の接着を促進させる、請求項２０に記載の方法。