JPH08508097A

JPH08508097A - 特異的に反応する物質を検出するための装置

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Publication number: JPH08508097A
Application number: JP6520668A
Authority: JP
Inventors: デ・ゾエーテン，ヤン・ペドロ; フエルヘイユデン，ペトルス・フランシスクス・ヘンドリクス・マリア; グロートフイゼン，テオドルス・ヨハンネス・マリア; ライユマケルス，ヨーゼフ・ヒエロニムス・マリア
Original assignee: アクゾ・ノベル・エヌ・ベー
Priority date: 1993-03-17
Filing date: 1994-03-16
Publication date: 1996-08-27
Anticipated expiration: 2018-06-16
Also published as: CA2158162A1; EP0689673B1; JP3416136B2; ES2105678T3; DE69404026T2; DK0689673T3; US5611995A; ATE154979T1; WO1994022011A1; KR100295970B1; AU683253B2; BR9406010A; GR3024733T3; AU6429194A; DE69404026D1; EP0689673A1; CN1121370A

Abstract

(57)【要約】試験液中の少なくとも１つの特異的に反応する物質を検出するための装置であって、ハウジング（２）、保持器具（３）、および保持器具内に保持されており、基本的に毛細管作用により試験液を搬送することができる材料で構成され検出すべき前記物質が存在するか否かを好ましくは色によって示す分析システムを備えた試験片（１８）を含み、ハウジング（２）が内部スペース（６）と前記試験液を当該内部スペースに導入するための開口部（５）とを有し、かつ試験液が試験片と接触することができるようにするための任意の手段（７）を備え；かつ、この保持器具（３）はベース（１６）とカバー（１４）とを含み、当該保持器具は長手方向の側面および／または横方向の側面が実質的に開放されており、また当該保持器具（３）には色を観察するための少なくとも１つの窓（４）が備えられている装置。

Description

【発明の詳細な説明】特異的に反応する物質を検出するための装置本発明は試験液中の特異的に反応する物質を検出するための装置に関する。本装置は試験片を有し、この試験片は分析システムを包含している。本発明の装置は特に家庭での使用あるいは非専門的な団体での使用を目的としたもので、そこでは通常、素人あるいは非熟練者によってテストが行われる。当分野の技術水準においては、特異的に反応する物質を検出するための試験片として種々のタイプのものがある。そのような試験片は、たとえばある種の色指示体が設けられた時には、試験液のpHの測定に使用することができる。しかしながら、イムノアッセイによって特異的に反応する物質を検出するためには、より複雑な分析システムを備えた試験片が必要となる。試験片（好ましくは多孔質の物質で作成された試験片）に接触した時、検出しようとする特異的に反応する物質を含む可能性のある試験液は、毛細管作用によって試験片中を移動する。こうした試験片は通常、たとえば検出しようとする物質と特異的に反応する反応物質を含む異なる試薬領域（ゾーン）群を含んだものである。これらの反応物質の一つには標識、好ましくは視覚的に観察できるような着色標識が与えられる。こうして試験液が異なる試薬ゾーンを通過してゆくと、そこで異なった免疫反応が起こる。形成された複合体は最終的に検出部位において試薬によって捕捉され、そこに含まれた標識によって目視することができる。このような試験片は現在市販されている。 EP-A-0 183 442は、ハウジングとそのハウジングの中に脱着できないように納められた吸水性物質片を含むクロマトグラフィ式の装置を開示している。ハウジングの内壁にはその試験片をハウジングの中に支持して閉じ込める手段が備えられている。この手段は、試験片の表面および裏面が実質的にハウジングの壁と接触しないように、試験片をハウジングの中に支持して閉じ込めている。ハウジングの底部は、試験片の一部が液状媒体と接触できるようにする手段を有する。このハウジングにはさらに試験片を視覚的に観察するための手段も含まれている。 EP-A-291 194は、水分を通さない剛性材料で作られた中空ケースで構成され、ケースの中に乾燥した多孔質支持体を備えた分析テスト器具を開示している。この支持体は、液状試験サンプルを支持体に適用できるように、ケースの外側に連結されている。サンプルはこの支持体を通って移動し、そこで免疫反応が起こり、目に見える分析結果が支持体の特定のゾーンに現われるようになっている。分析結果を観察することができるようにするために、ケースの中には開口部も設けられる。目に見えるようにするために、たとえば金ゾル粒子のような直接標識材料が使用される。 EP-A-0 349 215は、液体サンプル中のリガンドを検出するための試験セルを開示しており、この試験セルは浸透性材料のための細長いケースを有する。この浸透性材料はケースの中に入れられた水溶液を搬送することができ、リガンドのための受容体（レセプター）を含有している。リガンドの検出のために、レセプターに結合した着色粒子が使用されている。試験部位の観察はケースに設けられた穴または透明部分から行うことができるようになっている。特異的に反応する物質を検出するための公知の装置は、分析システムを備えた試験片をハウジングの中におさめた構成となっている。このハウジングはほぼ密閉状態にシールされているため、試験片上の試薬と試験液が反応した後、試験液の蒸発は非常に遅延されるかまたは蒸発が妨げられてしまう。その結果、試薬は検出部位に再度拡散されることになり、これが不正確な試験結果を招くことになる。本発明は上記の文献などにおいて言及されている公知の技法の改善、特に試験結果の信頼性の改善に関するものである。こうした改善は、試験液中の少なくとも一つの特異的に反応する物質を検出するために下記の構成要素を含む装置を用いることにより達成することができる。即ち、本発明装置は、 −ハウジング −保持器具、および −保持器具内に保持され、基本的に毛細管作用により試験液を搬送することができる材料から成り、検出すべき前記物質が存在するか否かを、好ましくは色によって示す分析システムを包含する試験片、を有する装置であって、ハウジングが内部スペースと、前記試験液を当該内部スペースに導入するための開口部を有し、かつ試験液が試験片と接触することができるようにするための任意の手段を備えており、前記保持器具はベースとカバーで構成され、当該保持器具は長手方向の側面および／または横方向の側面が実質的に開放されており、かつ当該保持器具には試験結果、好ましくは色、を観察するための少なくとも１つの窓を備えていることを特徴とするものである。本発明の装置の重要な特徴は、実質的に開放状態となっている分離した（試験片のための）保持器具を備えていることであり、この保持器具は、試験液を受け入れて搬送する目的のためだけに設計されたハウジングから分離されている。ハウジングは水分を浸透させない、熱可塑性材料やポリスチレンなどのような材料で製作することが有利であり、ある量の試験液を受け入れ搬送する働きをする。この目的のためにハウジングには内部スペースと、試験液を導入するための開口部と、および試験液と試験片を接触させることができるような任意的に設けられる手段とを備える。試験液はハウジング内に、たとえばピペットを用いて直接導入するか、あるいは別のサンプル採取器を用いて間接的に導入することができるが、後者の方が明らかに好ましい。試験液を直接導入する場合、特異的に反応する物質を検出するために必要とされる試験液の量を正しくコントロールするための目視用目盛りがハウジングに付されていることが望ましい。またこのハウジングは、干渉する可能性のある物質を試験液から除去するためのフィルターを有することができる。試験液と試験片を接触させるために、ハウジングにはこうした接触を起こすための任意の手段を備えることができる。このような手段としては（第２の）開口部が好ましく、この開口部は丸型または四角形、あるいは隙間（スプリット）形状とすることができる。保持器具はハウジングと同一の材料で製作することが有利である。この器具の主たる機能は分析システムを備えた試験片を特殊な方式で保持することである。この保持器具はベースとカバーで構成され、試験液と反応した後の試験片を充分かつ迅速に乾燥させるために、その長手方向および／または横方向の側面を実質的に開放した状態に設計する。これにより、不正確な結果を招くいわゆる試薬の “逆拡散（back- diffusion）”が防止される。この乾燥ステップは、必要に応じてたとえば高温（乾燥）空気の流れに曝すなどして、さらに加速することもできる。このようにして試験結果は長時間信頼性を保つことができる。この点は特に本発明において記載する装置を妊娠の検出に使用する場合に利点となる。この保持器具にはカバーとベースの間にスペーサーを備えると有利である。これらのスペーサーは試験片に充分な換気を与えることになる。さらに保持器具には試験片のための多くの支持要素も備えられる。ベースには好ましくは横方向ウェブが備えられ、カバーとウェブの間に隙間ができるような形で構成される。この隙間が試験片に適切な換気を確実に与えることになるが、この隙間は狭いために試験片が偶然に接触するのを防ぐことができる。横方向ウェブおよびカバーは保持器具の全長にわたって延在する。しかし、スペーサーは長手方向または横方向の側面だけに短い距離だけ存在するように配することも可能である。スペーサー、支持エレメントおよび横方向ウェブは保持器具と同じ材料で作ると有利である。この保持器具は少なくとも１つの窓を備え、これを通して試験結果を読み取ることができる。この窓は、たとえば保持器具に設けられた１つの穴あるいは透明部分である。もし分析システムが、特異的に反応する物質の存在を試験片の特定部位に固定された色によって示すように設計されている場合は、保持器具にはこの部位を観察することができる少なくとも１つの窓を備えるものとする。また保持器具には試験が正確に実行されるのを確実にするために設けられる対照部位（コントロール・スポット）の場所にも、別の窓を備えるのが望ましい。後者の窓は、この装置を素人がたとえば妊娠を検知するために使用する場合に特に重要である。試験片は基本的に毛細管力で試験液を搬送することができる材料で構成するのが有利である。液体を迅速に取り込むのに適する、吸収性の多孔質または繊維質材料を使用するのが有利である。好適な材料としては、無定形のスポンジ状の構造物、あるいはポリプロピレン、ポリエチレン、ポリフッ化ビニリデン、エチレン／酢酸ビニルコポリマー、ポリアクリロニトリル、ポリテトラフルオロエチレンのような種々の多孔質の合成物質がある。さらに元来疎水性の材料も、試験液を取り込んで毛細管力で搬送できる程度に界面活性剤で前処理して使用することができる。その他の適当な材料としては、多層の材料や、紙または紙状の物質、たとえばニトロセルロースのようにすでに分析用の試験片として一般的に使用されている材料などが挙げられる。試験片は保持器具の中に水平位置で保持するか、もしくは片端を折り曲げてハウジングの中の内部スペースへ延在させて保持することができる。後者の構造により試験片と試験液とは容易に接触できる。保持器具にはまた、余分の試験液を排除するために試験片に隣接する下流部分に吸収体を備えることが望ましい。吸収体の材質は重要ではなく、液体を吸収する能力のある材料、たとえば紙状の材料またはサンプル採取器における吸収材料として使用することができるとされている材料などであれば、どのような材料でもよい。試験片を長くして試験片自体が吸収体の機能を果たすようにするのも有利である。この場合、別の吸収体は必要とされない。スペースを節約するために、長い試験片はロール状またはジグザグに折り畳んでもよい。保持器具には、吸収体の他に、試験片上の分析システムの安定性を確実に向上させるために、シリカのような吸湿剤を含ませてもよい。本発明の好ましい一実施態様においては、保持器具はハウジングから分離することができる。これによりハウジングと保持器具は組み立て前に別々に製作することができ、装置、特に装置の製造をより融通性のあるなものとすることができ、またハウジングと保持器具を異なった組み合わせで使用することも可能となる。また本発明の別の好ましい実施態様においては、ハウジングは細長の形状で、ハウジングの上に保持器具が位置し、ハウジングには試験液を内部スペースに導入するための第１の開口部と、第１の開口部から一定の距離をおいて第２の開口部を設け、この第２の開口部を通って試験液が試験片に接触できる。細長いハウジングは細長いサンプル採取器の使用を可能とし、また他の取り扱いおよび読み取り上の特徴との組み合わせにより、この実施態様を特に家庭での妊娠検知用には好適なものとしている。また本発明の別の好ましい実施態様においては、前記の細長いハウジングに試験片との接触を容易にする手段が備えられている。この手段は好ましくはハウジングの内壁に出張部（elevation）を設けることによって形成することができる。これによりサンプル採取器がハウジングの中に導入されたとき、サンプル採取器の先端が向きを変えられて試験片に押しつけられる。この出張部は試験液を含んだサンプル採取器と試験片の接触が起きる場所の反対側に設けるのが有利である。本発明はまたサンプル採取器をも提供する。このサンプル採取器はハンドルと、試験液を迅速に吸収しかつ試験片への直接または間接的な試験液の放出を容易に行うことができる吸収材料とによって構成されるもので、前記サンプル採取器はハウジングの開口部を通して本発明の装置の内部スペースに導入することができる。サンプル採取器から試験片への液体サンプルの移動は、単に押すだけで行うことができる。この移動は、ハウジングの中の特殊な手段たとえば内壁の上に設けられた出張部によって、あるいは試験片の先端部を曲げることによりそれがハウジングの内部スペースに入り込むようにすることによって容易に行うことができる。サンプル採取器から試験片へと試験液を直接移動させる代わりに、コネクターにより間接的に試験液を移動させることもまた可能である。このコネクターは試験液をサンプル採取器から試験片へ毛細管作用によって移動させる。コネクターはサンプル採取器に使用される材料と同じもので作ることができるが、別の小さな孔サイズのものが望ましい。コネクターはいろいろな方法で装着することができ、たとえば試験片に対向するように、あるいはサンプル採取器によって試験片に押しつけられるように配置することができる。サンプル採取器は、試験液を簡単に吸収することができる一方試験液を機械的な圧力や毛細管移動などによって簡単に放出することもできる材料からなる。したがってこうした材料としてはスポンジ状の材料ということになり、たとえば原綿あるいはポリエチレン酢酸ビニルならびにその他ポリエステル、およびポリプロピレンのような親水性および親水化処理した合成ポリマー材料である。この材料には試薬類、たとえば試験液のpHを調節するための緩衝用化合物、あるいは試験液中に存在する可能性のある干渉物質を除去することができる化合物を加えることもできる。サンプル採取器の他の例としては、試験液を吸収したり放出したりすることはできない材料で構成されたもので、単にその形状や構造によって吸収や放出ができるように構成されたものである。サンプル採取器は吸収材料の隣にハンドルを備えるが、これはたとえば色付きのものとすることができる。この色はサンプルの識別に役立ち、こうすればより多くの異なるサンプルを容易に取り扱うことができる。本発明の別の実施態様においては、サンプル採取器のハンドルと吸収材料の間に連結ロッドを備え、これによってサンプル採取器の取り扱いを容易にするものがある。このロッドとハンドルの間には肩部が備えられ、サンプル採集器を導入すると、ハウジングがこの肩部に当たる。本発明はまた、上述の装置やサンプル採取器を含む装置にも関し、またこの器具を使用して試験液中の少なくとも１種の特異的に反応する物質を検出する方法にも関する。試験片上の分析用試験システムに関しては特別の制限はない。分析システムの一例はドイツの実用新案DE-U-88 05565.5．に記載されている。その他の種々の方法がEP-A-0 183 442、Wo-A-91/12528、EP-A-0 349 215、およびEP-A-0 186 79 9に記載されている。好ましい実施態様においては、本明細書中で使用する“分析システム”という用語は、特定の反応物（たとえば抗体）が特異的に反応する物質（たとえば妊娠ホルモンｈＣＧ）と反応（たとえば免疫反応）して複合体を形成することを指す。この複合体に（もし目視できる標識が備わっていない場合には）、たとえば標識化抗−抗体（これは一般的なイムノグロブリンに対する二次抗体で、したがってｈＣＧ抗体も捕捉することができる）との反応で標識を付ける。この標識化複合体は試験片上に固定された別の試薬との反応により、試験片上の別の部位に固定され目視できるようになる。原則的にはすべての種類の標識を使用することができるが、本発明の装置で使用する好ましい標識はいわゆる粒状標識である。最も好ましくは、別の試薬や装置を必要とせずに直接目視できる試験結果を与える直接粒状標識が使用される。この直接粒状標識は、金ゾル粒子、ラテックス粒子、顔料粒子、染料や炭素−およびセレンのゾル粒子を含んだリポソームなどのような小さな着色粒子からなる。これらの粒子は水には不溶であるが、溶液中では再懸濁可能なものである。これらすべての粒状標識は文献において良く知られている（Clin．Chem．27，1157 ,1981、EP 007 654、EP 032 270、EP 291 194、EP 154 749、EP321 008参照）。金ゾル粒子は特に有利である。金ゾル粒子は直径サイズが約５から１００nmであるのが有利である。分析システムの種々の試薬は試験片の種々のゾーンに配され、試験液はそれらを通して拡散してゆく。妊娠テスト試験片（直接粒状標識として金ゾルを使用した場合）として好適なものは、下記のゾーン（上流から下流に向けて）を備えたものである：第１ゾーン：妊娠ホルモンｈＣＧに対する抗体で金ゾル粒子標識が付けられたもの。この抗体は試験液と接触した後は試験片中を自由に移動できる。第２ゾーン：試験片上に固定化されたｈＣＧに対する抗体。この試験片の第１ゾーンでは自由に移動できる金ゾル標識ｈＣＧ抗体と試験液中に存在するｈＣＧとの間で免疫反応が起こる。形成された金ゾル標識ｈＣＧ抗体／ｈＣＧ複合体は第２ゾーンへ拡散してゆく。この複合体はそこで固定化されたｈＣＧに捕捉される。ｈＣＧに捕捉されない金ゾル標識ｈＣＧ抗体は第２ゾーンを自由に拡散して抜け出る。もう１つ別の好適な妊娠テスト試験片は次のような構成のものである：第１ゾーン：金ゾル粒子標識ｈＣＧ抗体（自由に移動可能）。第２ゾーン：ビオチンに結合したｈＣＧ抗体（自由に移動可能）。第３ゾーン：アビジン（固定化）。試験液中に存在するｈＣＧは第１ゾーンで金ゾル粒子標識ｈＣＧ抗体と反応する。形成された金ゾル粒子標識ｈＣＧ抗体／ｈＣＧ複合体は第２ゾーンに拡散し、そこで金ゾル粒子標識ｈＣＧ抗体／ｈＣＧ／ビオチン化ｈＣＧ抗体の“サンドイッチ”複合体が形成される。この“サンドイッチ”複合体は第３ゾーンに拡散し、そこで非常に強いアビジン／ビオチン反応により固定される。複合体とならなかったフリーの金ゾル粒子標識ｈＣＧ抗体は再び自由に拡散してこのゾーンを抜け出る。特に好適な試験片は次のゾーンを備えている：第１ゾーン：ｈＣＧ抗体（自由に移動可能）第２ゾーン：金ゾル粒子標識抗−抗体（自由に移動可能）で、第３ゾーンからのｈＣＧ抗体とは免疫反応しないもの。第３ゾーン：ｈＣＧ抗体（固定化されたもの）。試験液中に存在するｈＣＧは第１ゾーンでｈＣＧ抗体／ｈＣＧ複合体を形成する。この複合体は第２ゾーンに拡散し、金ゾル粒子標識抗−抗体と反応する。ついで金ゾル粒子標識抗−抗体／ｈＣＧ抗体／ｈＣＧ複合体は第３ゾーンに拡散し、そこで固定化されたｈＣＧ抗体により固定され、目視により検知される。ｈＣＧを含まない複合体（金ゾル粒子標識抗−抗体／ｈＣＧ抗体複合体）はこのゾーンで捕捉されずに拡散して出てゆく。試験片上の上記の分析システムは種々の理由で望ましいものである：ａ）このシステムは第１ゾーンのｈＣＧ抗体の高い親和性と特異性を保証するもので、試験液中に存在するいかなるｈＣＧとの間でもそこで一次反応を起こす。なぜならばこれらの抗体はそれぞれの“自然な”形で存在するからである。このことはそれらの抗体が標識化合物には捕捉されず、また固相上に固定化されないことを意味する。したがって、これらの抗体の高い親和性、特異性などという特別な特性は、前記の捕捉反応に邪魔されることなく維持されることになる。ｂ）第１ゾーンからの特定のｈＣＧ抗体と第２ゾーンからの金ゾル粒子標識抗 −抗体の間で、凝集（複合体の形成）が幾らか生じる。形成されるこれらの複合体は第３ゾーンに搬送され、複合体がｈＣＧを含んでいる場合は、第３ゾーンからの固定化されたｈＣＧ抗体によって固定される。これらの“凝集された”複合体は、凝集していないｈＣＧ抗体／抗−抗体より多くの金ゾル粒子標識抗−抗体を含む。したがってｈＣＧ１分子当り、より多くの標識が捕捉されることになり、これはより多くの色を意味し、したがってより高い感度を意味することになる。この現象は他の分析システムには認められないものである。ｃ）最後に、第１ゾーンからのｈＣＧ抗体は、試験液中のｈＣＧと第２ゾーンからの金ゾル粒子標識抗−抗体の間の“スぺーサー”としての作用も有する。したがって標識とｈＣＧの間の距離が大きくなる。したがってｈＣＧ／ｈＣＧ抗体／金ゾル粒子標識抗−抗体複合体はより簡単に、第３ゾーンからの固定化されたｈＣＧ抗体に捕捉される。これは標識抗体との立体障害が少ないからである。これも高い感度をもたらすことになる。試薬類はいろいろな方法で試験片の上に導入することができる。たとえば、こうした目的用として公知の印刷方法を使用することが可能である。この場合、試薬類は単に試験片の表面に塗布するか、あるいは試験片中に含浸させるかのいずれでもよい。場合によっては試薬類をマイクロカプセルの形で導入するのが有利なこともある。これは捕捉されない標識抗体と干渉を起こす前述の標識複合体を固定するために試薬が必要とされる場合に望ましい。抗体あるいはアビジンのような捕捉試薬類は共有結合または吸収により試験片上に固定化することができる。これらの試薬類はそのようにして固定化するか、あるいはたとえばラテックス粒子のような粒子に結合させることができる。もし試験片が、たとえばニトロセルロースからなる場合、試験片を化学的に前処理することなく抗体を直接結合させることができる。しかし結合させた後、試験片上の残存結合部位は、例えばポリビニルアルコールのような親水性の合成ポリマー、あるいは例えばヒトおよびウシ血清アルブミンや卵白アルブミンなどのような親水性の生体ポリマーでブロックしなければならない。もし試験片が紙のような他の物質でできている場合、ＣＮＢｒまたはカルボニルジイミダゾールを用いて共有結合させることできる。試験片にはサンプル中に検出すべき物質が含まれているか否かに関係なく色のシグナルを発生する対照ゾーン（コントロール・ゾーン）を備えることが望ましい。そのような対照ゾーンには、例えば女性の尿中の尿素と反応する発色剤が含まれている。あるいはそれに替え、この対照ゾーンには標識抗体あるいは標識抗 −抗体と反応する固定化された抗体、抗−抗体またはその他の結合試薬を含ませる。以下本発明の実施態様を詳細に説明する。図１および２はそれぞれ本発明で説明した装置の実施態様の平面図および側面図を示すものであり；図３および４は図１に示した実施態様の横断面図および軸方向断面図を示すものであり；図５は図１−図４の実施態様で使用可能な、連結ロッドを備えたサンプル採集器の平面図を示すものであり；図６はサンプル採取器を含む別の実施態様の軸方向断面図を示すものであり；図７は図６に示した実施態様で使用可能なサンプル採取器の平面図を示すものであり；図８は本発明のさらに別の実施態様の平面図を示すものであり；図９、１０、１１は図８に示した実施態様の側面図、横断面図、および軸方向断面図をそれぞれ示すものであり；図１２は図８に示した実施態様で使用可能なサンプル採取器の平面図を示すものであり；図１３は本発明のさらに別の実施態様の平面図を示したものであり；図１４、１５、１６、１７はコネクターを使用した本発明の別の実施態様の平面図、側面図、横断面図、および軸方向断面図をそれぞれ示すものであり；図１８は図１４−図１７に示した実施態様で使用可能なサンプル採取器の平面図を示したものである。図１−図４の装置は、ハウジング２、ならびに試験片１８および吸収体２０を中に保持する保持器具３で構成される。ハウジング２には、分析しようとする物質を含んでいるであろう試験液をハウジング２の内部スペース６に導入するための開口部５が備えられている。試験液はサンプル採取器によって導入されるが、このサンプル採取器はハンドル１２、吸収材料１０、連結ロッド１１および肩部１３で構成されている。ハウジングにはさらに開口部７が設けられており、そこを通して試験液と試験片の接触が起こる。サンプル採取器と試験片の接触はハウジング２の内壁の出張部３０によって容易になるが、この出張部がサンプル採取器を試験片１８に押しつける。保持器具３はカバー１４、スペーサー１５、ベース１６および横方向ウェブ１７からなり、スペーサーに支えられたカバーは横方向ウェブ１７の上に置かれる。横方向ウェブ１７は、カバー１４と横方向ウェブの間に隙間（スプリット）１９が形成されるように構成されている。保持器具３には１つまたはそれ以上の窓４、４’があり、これらを通して好ましくは試験片の特定の部位に色で示される試験結果を観察できるようになっている。図５は図１−図４の装置に使用されるサンプル採取器を示す。図６は本発明によるもう１つ別の実施態様をサンプル採取器を含めて示すもので、ここでは試験片１８は支持エレメント３２および３３によって所定の位置に保持されている。図７は図６の装置に使用されているサンプル採取器を示す。図８−図１１は本発明によるさらに別の実施態様を示したものであるが、ここでは吸収材料１０を有するサンプル採取器と試験片１８との間の接触を容易にするために、試験片１８は折り曲げられてハウジング２の内部スペース６の中に延びている。図１２は図８−図１１の装置に使用されているサンプル採取器を示す。図１３は本発明による装置のもう一つ別の実施態様を示すものであり、ここでは試験片１８はハウジング２の内部スペース６の中に延びて入っており、また試験液は開口部５を通して導入される。図１４−図１７は本発明で説明した装置のもう一つ別の実施態様を示すもので、ここではサンプル採取器と試験片の間の接触はコネクター３１を通して行われる。本発明の装置を用いて、例えば、ｈＣＧを検出する場合に、その分析システムの構成が第１ゾーンはｈＣＧ抗体、第２ゾーンが標識抗−抗体、第３ゾーンが固定化されたｈＣＧ抗体となっている場合は、次のように行われる：ｈＣＧを含んでいると思われる試験液を直接またはサンプル採取器により間接的に、本発明の装置のハウジングの内部スペースに導入する。吸収材料を含むこのサンプル採取器がハウジングの中に導入されると、分析システムを含んだ試験片と接触する。試験液が放出され、毛細管作用により試験片を通って移動する。試験液中に存在するｈＣＧはいかなるものも第１ゾーンからの特定のｈＣＧ抗体と反応する。形成されたｈＣＧ抗体／ｈＣＧ複合体は試験液とともに第２ゾーンへ移動し、そこで金ゾル粒子で標識が付けられた抗−抗体と反応する。このようにして得られた複合体は第３ゾーンに送られ、そこで第３ゾーンからの固定化されたｈＣＧ抗体によって固定される。試験液中に存在するｈＣＧは、第３ゾーンにあるこの固定部位で色を読むことにより検知することができる。さらにこの試験の性能は、常に正（＋）の結果を示す第４ゾーンにある対照部位の色を観察することにより管理される。本発明を下記の実施例を参照しつつさらに詳しく説明する。使用される装置は図６に示したものである。実施例１１．金ゾル標識付きモノクローナル・ラット抗マウスＩｇＧ（金ゾルコンジュゲート）の調製：平均粒径５０nm（Ａ₅₄₀＝5.0）の金ゾルをFrensによる方法（Nature Physical Science 240巻，1973，20）で調製した。塩化ナトリウム１ml当り１mgのモノクローナル・ラット抗マウスＩｇＧ（抗− カッパ）を含む溶液（９g/l）を、0.1Ｍ水酸化ナトリウムを用いてpH8.0に調節した。１リットルの金ゾル溶液を0.1Ｍ水酸化ナトリウムによりpH 8.0に調節し、２０mlのモノクローナル・ラット抗マウスＩｇＧ溶液と混合し、その後４０ml の２０Ｍポリエチレングリコール溶液（pH 8.0）を加えることにより後被覆した。後被覆された金ゾルコンジュゲートを常温、３５００Ｇで２０分間遠心分離して沈降させた。上澄み液を吸引除去した後、金ゾルコンジュゲートペレットを、２％（v/v）胎児牛血清、１６０g/lのショ糖、２％（w/v） Trlton Ｘ１００およびpH 8,0の１Ｍトリスを含んだ溶液中に再懸濁させ、Ａ₅₄ ₀ の値を50.0とした。２．モノクローナル抗−ｈＣＧ IgG溶液の調製ｈＣＧに対するモノクローナル抗体（ベータ・サブユニット特異性）を、基本的にEP 045 103に記載の方法により作成した。４０ｇのモノクローナル抗−ｈＣＧＩｇＧを、１Ｍトリス（pH 8.0）、１６０g/lのショ糖および２％（w/v）Tr lton ＸＩ００を含んだ１リットルの溶液中に溶解した。３．ポリクローナル抗−ｈＣＧＩｇＧ溶液の調製ｈＣＧに対するポリクローナル抗体を常法により作成した。免疫精製した抗− ｈＣＧＩｇＧ６ｇを、3.5mMトリス（pH 8.0）および９g/lの塩化ナトリウムを含んだ１リットルの溶液に溶解した。４．試験片の作成長さ100mm、幅70mmの長方形のガラス紙片の上に、モノクローナル抗−ｈＣＧＩｇＧ溶液（上記２参照）を、ガラス紙片の下端から10mmの位置に幅方向に幅 5mmの線状に塗布して、第１移動性反応ゾーンを形成した。同じガラス紙片の上に第２移動性反応ゾーンを、再び幅方向に、金ゾルコンジュゲート溶液（上記１参照）をガラス紙片の下端から16mmの位置に幅5mmの線状に塗布して形成した。この２つの移動性反応ゾーンを空気乾燥（50℃）し、シートを長手方向に切断して幅7mmの細片とした。それぞれの試験片上の下端から40mmの位置に１μｌのポリクローナルｈＣＧＩｇＧ溶液（上記３参照）をピペットで滴下して、第３反応ゾーン（検出ゾーン）を形成した。それぞれの試験片上の下端から50mmの位置に１μlのモノクローナル抗−ｈＣＧＩｇＧ溶液（上記２参照）をピペットで滴加して、第４反応ゾーン（対照ゾーン）を形成した。このあと、検出および対照ゾーンを空気乾燥（50℃）した。５．装置の組み立ておよびテスト試験片を装置の中に本発明で説明したように組み立て、妊娠していない女性の尿に各種濃度のｈＣＧ（15-25=300 000 IU/l）を加えたもので試験を行った。これに加えて、ｈＬＨ標準も濃度500 IU/lで試験した。装置を尿サンプルの中に４分間挿入後、下記の結果を得た：実施例２１．カーボンゾル標識モノクローナル抗ｈＣＧＩｇＧ（カーボンゾルコンジュゲート）の調製 0.5gのDegussa Spezial Schwartz100をpH 8.6の５０mlの５mMホウ酸塩緩衝液に懸濁させた。この懸濁液を氷冷撹拌しながら３０分間、音波処理（27W、20kHz；Branson So nifier）した。この１％Ｃ−ゾルは常温で保管可能である。１０mlの１％Ｃ−ゾルを４０mlの５mMホウ酸塩緩衝液（pH8．6）に加え懸濁液を得た。この懸濁液をさらに、上記の１％Ｃ−ゾルの場合と同様に処理した。こうして得た0.2％Ｃ−ゾルは常温で保管可能である。塩化ナトリウム１ml当り１mgのモノクローナル抗ｈＣＧＩｇＧ（ベータ−サブユニット特異性；実施例１参照）溶液（９g/I）を、0.1Ｍ水酸化ナトリウムを用いてpH 8.0に調節した。１リットルのカーボンゾル溶液を５mMホウ酸によりpH 8.6に調節し、２０mlのモノクローナル抗ｈＣＧ溶液と混合し、常温で２時間撹拌しながらインキュベートした。ついでカーボンゾルコンジュゲートを常温、10 000Ｇで６分間遠心分離して沈降させた。上澄み液を吸引除去した後、カーボンペレットを、２%（v/v）胎児牛血清、１６０g/lのショ糖、２％（w/v）TritonＸ１００および１Ｍトリス（pH 8.6）を含む溶液中に再懸濁した。２．モノクローナル抗−ｈＣＧＩｇＧ溶液の調製モノクローナルｈＣＧ抗体（アルファ・サブユニット特異性）を、基本的には EP 045 103に記載された方法により作成した。３ｇのモノクローナル抗−ｈＣＧＩｇＧを、２５mMトリス（pH 8.0）および９g/lの塩化ナトリウムを含む１リットルの溶液中に溶解した。３．モノクローナル・ラット抗−マウスＩｇＧ溶液の調製３ｇのモノクローナル・ラット抗−マウスＩｇＧ（抗−カッパ）を、２５mMトリス（pH 8.0）および９g/lの塩化ナトリウムを含んだ１リットルの溶液中に溶解した。４．試験片の作成長方形のガラス紙（長さ100mm、幅70mm）の上に、カーボンゾルコンジュゲート溶液（上記１参照）を、ガラス紙の下端から10mmの位置に幅方向に幅5mmの線状に塗布して、移動性反応ゾーンを形成した。この移動性反応ゾーンを空気乾燥（50℃）し、シートを長手方向に切断して幅 7mmの細片とした。それぞれの試験片上の下端から40mmの位置に１μｌのモノクローナル抗−ｈＣＧＩｇＧ溶液（上記２参照）をピペットで滴加して、第２反応ゾーン（検出ゾーン）を形成した。それぞれの試験片上の下端から50mmの位置に１μｌのモノクローナル・ラット抗−マウスＩｇＧ溶液（上記３参照）をピペットで滴加して、第３反応ゾーン（対照ゾーン）を形成した。５．装置の組み立ておよびテスト本発明の説明において記載した試験片を装置の中に組み込み、妊娠していない女性の尿に各種濃度のｈＣＧ（15-25-300 000 IU/l）を加えたもので試験を行った。これに加えて、ｈＬＨ標準も濃度500 IU/l で試験した。装置を尿サンプルの中に２分間挿入後、下記の結果を得た：

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者グロートフイゼン，テオドルス・ヨハンネス・マリアオランダ国、エヌ・エル―3011・デー・アー・ロツテルダム、ハーフセフエール・46 (72)発明者ライユマケルス，ヨーゼフ・ヒエロニムス・マリアオランダ国、エヌ・エル―2611・エル・ヘー・デルフト、リエトフエルト・47

Claims

【特許請求の範囲】１．試験液中の少なくとも１つの特異的に反応する物質を検出するための装置であって、 −ハウジング（２）、 −保持器具（３）、および −保持器具内に保持されており、基本的に毛細管作用により試験液を搬送することができる材料で構成され、検出すべき前記物質が存在するか否かを好ましくは色によって示す分析システムを備えた試験片（１８）を含み、ハウジング（２）が内部スペース（６）と、前記試験液を当該内部スペースに導入するための開口部（５）とを有し、かつ試験液が試験片と接触することができるようにするための任意の手段（７）を備え；前記保持器具（３）はベース（１６）とカバー（１４）とを有し、当該保持器具は長手方向の側面および／または横方向の側面が実質的に開放されており、かつ当該保持器具（３）には色を観察するための少なくとも１つの窓（４）が備えられている装置。２．保持器具（３）がハウジングから分離できることを特徴とする請求項１に記載の装置。３．ハウジングが細長いハウジングであり、保持器具はハウジング上に位置し、かつハウジングには検出すべき物質を含んでいる可能性のある試験液を内部スペース（６）に導入するための第１の開口部（５）、およびその第１の開口部から一定の距離をおいて第２の開口部（７）を備え、その開口部を通して試験液が試験片に接触できるようになっている請求項１または２に記載の装置。４．ハウジングに試験片（１８）との接触を容易にするための手段（７）を備えたことを特徴とする請求項３に記載の装置。５．試験片（１８）中の分析システムが標識化合物を含み、その標識が視覚的に認識できる粒状標識であることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の装置。６．ハンドル（１２）と、試験液を迅速に吸収しかつ試験片に試験液を直接または間接的に容易に放出することができる吸収材料（１０）とからなるサンプル採取器であって、当該サンプル採取器が請求項１−５に記載の装置の開口部（５）を通して内部スペース（６）に導入されうるサンプル採取器。７．ハンドル（１２）と吸収材料（１０）の間に連結ロッド（１１）が備えられていることを特徴とする請求項６に記載のサンプル採取器。８．請求項１−５に記載の装置および請求項６−７に記載のサンプル採取器とを備えた装置。９．試験液中の少なくとも１つの特異的に反応する物質を検出する方法で、請求項８に記載の装置を使用する方法。１０．特異的に反応する物質がｈＣＧまたはｈＬＨである請求項９に記載の方法。