ES2321696T3 - Modulo de casete automatizado para un aparato para llevar a cabo inmunoensayos y uso del mismo. - Google Patents
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Abstract
Un procedimiento para llevar a cabo un ensayo para un analito de fluido corporal comprendiendo a) introducir un fluido corporal conteniendo el analito en un depósito de absorción (24) conteniendo una primera composición de reactivo eficaz para reaccionar con uno o más componentes de muestra para formar una muestra modificada, b) poner en contacto repetidamente el depósito (24), con tal depósito conteniendo una muestra de fluido corporal absorbida, con una tira de reactivo (30) que contiene una segunda composición de reactivo eficaz para reaccionar con la muestra modificada formada en dicho depósito (24) para producir un producto detectable dependiente del analito, y c) controlar la frecuencia y la duración de dicho contacto repetido, para controlar así el volumen y la velocidad de la transferencia del fluido de muestra desde el depósito (24) a la tira de reactivo (30).
Description
Módulo de casete automatizado para un aparato
para llevar a cabo inmunoensayos y uso del mismo.
La presente invención está dirigida a un aparato
y a un procedimiento para ser usados en el ensayo de una muestra de
fluido corporal para un analito seleccionado y, particularmente,
para su uso en ensayos automatizados multietapas.
En vistas a los antecedentes de la invención, se
hace referencia a De Maat, M.P.M. et al., Fibrinolysis 8
(Suppl. 2):50-52 (1994); Grau, A.J. et al.,
"Clinical and Biochemical Analysis in
Infection-Associated Stroke". Stroke
26(9):1520-6 (Sept. 1995); Harlow, E. et
al., "Antibodies: A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor
Lab (1988); Hewett, G.E., Patente US nº 5.110.724 (1992); Hewett,
G.E. et al., Patente US nº 5.171.688 (1992); Kuller, L.H.
et al., Am. J. Epidemiol. 144:537-547 (15
Sept. 1996). Leuvering et al., Patente US nº 4.313.734
(1982); Liuzzo G, M.D. et al., N. Engl. J. Med.
331(7): 417-424, 18 Ago. 1994; Mendall, M.A.
et al., British Med. J. 312:1061-65 (27 Abr.
1996); Thompson, S.G. et al., N. Engl. J. Med. 1995;
332:635-41; Tracy, R.P. et al., Circulation,
1996, V93, N3 (1 Feb.), P8 (Tracy).
Se conocen ensayos para detectar la presencia y
los niveles de una variedad de analitos en muestras de fluido
corporal. Tales ensayos a menudo están diseñados con el fin de
simplificar el uso para que se puedan llevar a cabo fiablemente en
una consulta médica o en otro entorno clínico donde el personal
puede tener poca práctica en el procedimiento de un ensayo clínico
o en la interpretación de los resultados de un ensayo. Para
minimizar la necesidad de participación de un operador, es
preferible que el ensayo se lleve a cabo de manera automatizada o
independiente.
Para simplificar el funcionamiento, tales
ensayos independientes se han limitado típicamente a procedimientos
de ensayo de una sola etapa. Un número de ensayos útiles, sin
embargo, son multietapas por naturaleza, necesitando más de una
etapa de reacción o de unión. Además, una o más de las etapas pueden
limitar la velocidad o pueden ser afectadas por concentraciones de
reactivos localizados. Típicamente, los ensayos multietapas se
automatizan menos fácilmente y necesitan generalmente más
aportación del usuario, aumentando así la posibilidad de
errores.
La solicitud de Patente Europea 02004339.4 con
título "High density lipoprotein assay device and method"
divulga un casete para medir la concentración de colesterol
asociado con HDL en muestras de fluido sanguíneo. Por razones de
efectividad y simplicidad, el diseño de ensayo es tal que la
eliminación de lipoproteínas no HDL de una muestra de colesterol de
HDL en la muestra ocurre sin interrupción del ensayo. De esta
manera, el flujo de muestra así como el contacto de reactivo con el
mismo no se pueden controlar generando interferencia en la prueba
cuantitativa y cualitativa.
El documento US 5.744.096 también asignado al
solicitante de la presente solicitud divulga un casete de
inmunoensayo útil para llevar a cabo inmunoensayos multietapas de
manera automatizada. El casete puede adoptar diferentes posiciones
operativas en las que se transfieren soluciones a través de un
camino absorbente que contiene reactivos de ensayo. Para este fin,
el casete contiene un cuerpo y un miembro de soporte, este miembro
de soporte puede empujarse hacia el miembro de base para establecer
un contacto entre dos medios de reacción. La US '096 también
divulga un aparato para mover automáticamente dicho miembro de
soporte y de base el uno hacia al otro para establecer un contacto
entre una tira de transferencia proporcionada en el miembro de base
y una zona de reacción de control proporcionada en el miembro de
soporte. Sin embargo, el aparato no mueve repetidamente el miembro
de soporte y de base hacia delante y atrás entre sí para permitir un
control de la velocidad de transferencia de muestra.
Es por tanto el problema de la presente
invención proporcionar un dispositivo de ensayo independiente
automatizado que sea capaz de llevar a cabo ensayos multietapas, en
particular aquellos que contienen etapas de reacción o de unión
múltiples en los que una o más de las etapas limitan la velocidad o
se afecta al resultado del ensayo final por concentraciones de
reactivo de analito localizadas.
Los problemas anteriores se resuelven mediante
un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 y un aparato de
acuerdo con la reivindicación 6.
A continuación se describe un casete para el uso
en la detección de un analito en una muestra de fluido corporal
líquida. El casete proporciona un cuerpo de casete que tiene
preferiblemente un pocillo de muestra para recibir la muestra, un
soporte montado en el cuerpo para el movimiento hacia delante y
atrás de una posición de transferencia, y un depósito de reactivo y
una tira de reactivo llevados por el cuerpo y el soporte,
respectivamente. El depósito de reactivo contiene una primera
composición de reactivo capaz de reaccionar con uno o más
componentes de muestra para formar una muestra modificada cuando la
muestra migra desde el pocillo de muestra hasta el interior del
depósito. La tira de reactivo contiene una segunda composición de
reactivo capaz de reaccionar con la muestra modificada para formar
un producto detectable dependiente del analito. En un modo de
realización, la tira de reactivo tiene una zona de transferencia
que se pone en contacto con el depósito cuando el soporte se mueve
a su posición de transferencia y una zona de detección situada hacia
abajo de la zona de transferencia. Controlando el movimiento del
soporte hacia delante y atrás de su posición de transferencia, se
pueden controlar el volumen y la velocidad del flujo de muestra
desde el depósito hasta la tira optimizando y/o estandarizando así
las condiciones de transferencia-muestra en el
ensayo.
Para la detección de un analito plurivalente en
una muestra de fluido corporal líquida, la primera composición de
reactivo en el depósito de reactivo puede incluir un conjugado no
soportado de un anticuerpo antianalito y un grupo indicador
detectable donde la reacción para formar una muestra modificada
incluye la unión del conjugado con el analito de muestra para
formar un complejo de analito y conjugado. La segunda composición
de reactivo en la tira de reactivo puede incluir un anticuerpo
antianalito soportado en una región de detección de la tira de
reactivo ubicada hacia abajo de la región de transferencia de
muestra de la tira donde la reacción para formar un producto
detectable dependiente del analito incluye la unión de complejo con
el anticuerpo soportado para localizar el indicador detectable en
el complejo en la zona de detección. El conjugado no soportado en
este modo de realización puede ser un conjugado de un anticuerpo
antianalito y un indicador visible, como partículas metálicas,
partículas marcadas con restos de color o fluorescentes, polímeros
marcados con restos de color o fluorescentes, partículas, o
moléculas de color o fluorescentes.
Para el uso en la detección de analitos de
proteínas C-reactivas en una muestra sanguínea, el
anticuerpo antianalito en el conjugado no soportado en el depósito
de reactivo y el anticuerpo antianalito soportado en la tira de
reactivo pueden ser anticuerpos específicos contra un epítopo común
en una proteína C-reactiva. Alternativamente, los
dos anticuerpos se pueden dirigir contra diferentes epítopos de
proteínas C-reactivas.
El soporte comprende preferentemente una ventana
a través de la cual se puede ver la unión del complejo en la zona
de detección en la tira de reactivo. Además, la zona de detección en
la tira de reactivo puede estar cubierta por una película
reflectora en la superficie de la tira orientada hacia el otro lado
de la ventana.
El casete comprende además preferentemente un
depósito de absorción llevado por el soporte, hacia abajo de dicha
zona de detección, para recibir líquido de muestra transferida a
través de la tira de reactivo.
La invención comprende un aparato para el uso en
la detección de un analito en una muestra de fluido corporal
líquida de acuerdo con la reivindicación 6. El aparato comprende un
casete del tipo descrito anteriormente y un instrumento para
manejar el casete. El instrumento tiene (a) una carcasa de casete en
la que se pone de forma desmontable el casete durante un ensayo de
muestra, (b) un actuador manejable para mover el soporte en el
casete hacia delante y atrás de su posición de transferencia de
muestra, (c) un detector manejable para detectar una reacción
específica para un analito en la zona de detección en la tira de
reactivo, y (d) un procesador manejablemente conectado con el
actuador para controlar la regulación de volumen y la velocidad de
movimiento de material de muestra desde el depósito de reactivo
hasta la tira de reactivo.
En un modo de realización preferido, la zona de
detección en la tira de reactivo en el casete está cubierta por una
película reflectora en la superficie de la tira orientada hacia el
otro lado de dicha ventana de manera que el flujo de líquido de
muestra a través de la zona de detección produzca un primer cambio
en la reflectancia mensurable a través de la ventana, y la
presencia de una reacción dependiente del analito en la zona de
detección produzca un segundo cambio en la reflectancia mensurable
a través de la ventana. El detector puede ser manejable para
detectar flujo de líquido a través de la zona de detección por un
primer cambio de la reflectancia óptica medida y es manejable para
medir una reacción subsiguiente dependiente del analito en la zona
de detección por un segundo cambio de la reflectancia óptica
medida.
La unidad de control puede ser manejable para
controlar el volumen y la velocidad de la transferencia de muestra
desde el depósito de reactivo hasta la tira de reactivo controlando
uno o más de (i) el período de incubación de muestra antes de
transferir primero la muestra desde el depósito hasta la tira de
reactivo, (ii) la frecuencia de ciclos con la que el actuador mueve
el soporte hacia delante y atrás de su posición de transferencia,
(iii) el tiempo de contacto que se mantiene el soporte en su
posición de transferencia durante cada ciclo, y (iv) el número
total de ciclos de transferencia. La unidad es manejable para
controlar el volumen y la velocidad de la transferencia de muestra
desde dicho depósito hasta la tira de reactivo controlando (i) la
frecuencia de ciclos con la cual el actuador mueve el soporte hacia
delante y atrás de su posición de transferencia y (ii) el tiempo de
contacto que se mantiene el soporte en su posición de transferencia
durante cada ciclo.
La invención comprende un procedimiento de
acuerdo con la reivindicación 1 para llevar a cabo un ensayo para
un analito de fluido corporal por las etapas de: (a) introducir un
fluido corporal que contenga el analito en un depósito de absorción
que contenga una primera composición de reactivo capaz de reaccionar
con uno o más componentes de muestra formando así una muestra
modificada, (b) poner en contacto repetidamente el depósito, con
dicho contenido de muestra de fluido corporal absorbida, con una
almohadilla de reactivo de absorción que contenga una segunda
composición de reactivo capaz de reaccionar con la muestra
modificada formada en el depósito para producir un producto
detectable dependiente del analito, y (c) controlar la frecuencia y
la duración de dicho contacto controlando así el volumen y la
velocidad de transferencia del fluido de muestra desde el depósito
hasta la almohadilla.
En un modo de realización generalmente preferido
de la presente invención, la almohadilla de reactivo es una tira de
reactivo alargada que tiene una zona de transferencia de muestra en
la que el depósito entra en contacto con la tira y una zona de
detección situada hacia abajo de la zona de transferencia.
Para detectar un analito plurivalente en una
muestra de fluido corporal líquida, como una proteína
C-reactiva en una muestra sanguínea o de suero, la
primera composición de reactivo en el depósito de reactivo puede
incluir un conjugado no soportado de un anticuerpo antianalito y un
grupo indicador detectable, y la composición de reactivo en la tira
de reactivo, un anticuerpo antianalito soportado en una región de
detección en la tira de reactivo.
Éstos y otros objetos y características de la
invención quedarán más plenamente aparentes cuando se lea la
siguiente descripción detallada de la invención en conjunción con
las figuras que acompañan.
Las Figs. 1A y 1B son vistas en plano de un
casete de inmunoensayo construido de acuerdo con un modo de
realización de la invención, con el casete en una posición de carga
de muestra inicial (Fig. 1A) y en una posición de transferencia de
muestra (Fig. 1B);
La Fig. 2 es una vista de sección ampliada del
soporte de casete en la región de la zona de detección;
Las Figs. 3A y 3B ilustran la distribución de
fluido de muestra antes (Fig. 3A) y después (Fig. 3B) de la
transferencia de fluido de muestra en el casete.
La Fig. 4 es una vista en perspectiva de un
instrumento para manejar el casete construido de acuerdo con un
modo de realización de la invención;
La Fig. 5 ilustra varios componentes funcionales
del instrumento para manejar el casete en relación con un casete de
inmunoensayo de la invención;
Las Figs. 6A y 6B ilustran perfiles de
transferencia de volumen de muestra diferentes alcanzables con la
invención;
La Fig. 7 ilustra perfiles de reflectancia de un
analito de proteína C-reactiva a tres
concentraciones diferentes durante un procedimiento de ensayo de
acuerdo con un modo de realización de la invención; y
La Fig. 8 es un diagrama de reflectancia medida
como función de concentración de analito de proteína
C-reactiva creado de acuerdo con la invención.
Las Figs. 1A y 1B muestran un casete de
inmunoensayo 10 construido de acuerdo con un modo de realización de
la invención. El casete contiene dos miembros en forma de chapa, un
miembro de base o cuerpo 12 y un soporte o miembro de soporte 14
que se pueden fabricar por procedimientos estándares moldeadores o
mecanizados. El soporte 14 está montado en el cuerpo 12 para
moverse en una dirección vertical en las figuras desde una posición
de reposo ilustrada en la Fig. 1A hasta una posición de
transferencia de muestra mostrada en la Fig. 1B. Más
particularmente, el soporte 14 está montado para moverse hacia
delante y atrás de una posición desde transferencia de muestra.
La estructura que monta el soporte 14 en el
cuerpo 12 puede ser de bloques compresibles, como bloques
elastoméricos, como se ilustra por 16, que sostienen los extremos
opuestos del soporte 14. Estos bloques 16 se comprimen cuando el
soporte 14 se mueve desde su posición de reposo, en la que los
bloques 16 están sustancialmente sin compresión, hasta la posición
de transferencia de muestra, en la que los bloques 16 están a
compresión máxima. Se notará que se podría montar el soporte 14 en
el cuerpo 12 de casete por una variedad de estructuras
compresibles, como muelles o imanes, con el fin de obtener
movimientos transversales hacia delante y atrás desde la posición de
transferencia de muestra.
En el cuerpo 12 se proporciona un pocillo de
muestra 18 para recibir la muestra de fluido corporal a analizar.
El pocillo 18 está diseñado para recibir una muestra de fluido
corporal, como una muestra de suero o de sangre, que tiene
típicamente un volumen entre 20 y unos 60 \mul. El pocillo de
muestra 8 transfiere muestra a una almohadilla central 20. La
almohadilla central 20, a su vez, se comunica por una mecha de
capilares 22, a la que también nos referiremos en la presente como
capa de extensión, con una almohadilla de reactivo o un depósito 24
que contiene un primer reactivo o composición de reactivo que queda
por describir. Cuando se pone líquido de muestra en el pocillo 18,
migra por capilaridad a través de la almohadilla central 20 y desde
la almohadilla central 20 a través de la capa de extensión 22 al
depósito 24. Cuando la muestra que se está analizando es una
muestra sanguínea, uno o más de los elementos en el camino de flujo
entre el pocillo de muestra 18 y el depósito 24, y típicamente la
almohadilla central 20 y/o la capa de extensión 22, pueden servir
para quitar o retardar el flujo de glóbulos rojos, con lo que el
material de muestra que llega al depósito se ha deliberado de
células sanguíneas u otros componentes corpusculares. El material de
fibra de vidrio y otro material de matriz apropiado para este
propósito son bien conocidos.
Alternativamente, o adicionalmente, uno o más de
los elementos en el camino de flujo pueden ser eficaces para quitar
componentes de muestra no deseados mediante el uso de reactivos de
unión soportados, por ejemplo, anticuerpos, específicos contra los
componentes no deseados. Los componentes de muestra no deseados se
pueden quitar también exponiendo la muestra en el camino de flujo a
un agente precipitante eficaz para precipitar de manera selectiva
los componentes de muestra no deseados. Por ejemplo, se puede usar
sulfato de dextrano para precipitar selectivamente determinadas
lipoproteínas en una muestra sanguínea. O bien se bloquea la
migración de las partículas precipitadas a través del camino de
flujo, o bien se retarda su flujo. La almohadilla central 20, la
tira de transferencia de muestra 22 y el depósito 24 están formados
preferiblemente por un material fibroso y altamente absorbente
capaz de sacar fluido vía flujo capilar. Una variedad de materiales
fibrosos, como los que se usan habitualmente para esteras
filtrantes fibrosas, incluyendo celulosa, acetato de celulosa y
matrices de fibra de vidrio, son materiales apropiados para la tira
de transferencia. Las fibras pueden ser reticuladas, si se desea,
por reticulación química, fusión térmica o similares. Los sustratos
porosos también son apropiados, como el vidrio aglomerado, las
perlas fusionadas de polímero y similares, cuyas mojabilidad y
dimensiones de intersticios son tales que promueven el movimiento
de un medio acuoso en la tira humedeciendo la superficie. Un
material a título de ejemplo es un filtro de fibra de vidrio que
tiene una densidad de relleno de 0,2-0,5 gm/cm^{3}
aproximadamente. El vidrio central 20, la capa de extensión 22 y el
depósito 24 se pueden montar en el cuerpo 12 directamente en el
cuerpo o mediante un respaldo hecho de plástico u otro material
inerte de soporte.
Aunque el modo de realización del casete 10
mostrado está diseñado para un ensayo único, en el lado derecho del
casete en las figuras, se notará que el casete se podría adaptar
para ensayo(s) adicional(es) en el lado izquierdo del
casete. Además, el ensayo adicional puede tener el mismo formato de
flujo de fluido o puede tener un formato diferente, por ejemplo, la
almohadilla central 20 puede comunicarse con una tira de reactivo
alargada que se extiende a lo largo de la región de borde izquierdo
superior del cuerpo de casete.
Para completar la descripción del cuerpo de
casete 12, un par de bloques elastoméricos 26 a ambos lados de la
almohadilla central sirven para proteger y limitar el movimiento del
soporte cuando éste se mueve hacia su posición de transferencia de
muestra.
El soporte 14 tiene un par de barras de reacción
alargadas, como la barra 28, que extienden hacia el exterior desde
el centro del soporte como se ilustra en las Figs. 1A y 1B. Una tira
de reactivo alargada 30 está fijada a, y se extiende por, la
superficie inferior orientada hacia adentro del soporte 14 como se
muestra. La tira tiene una zona de transferencia de muestra 32
hacia arriba y una zona de detección 34 hacia abajo ubicada
directamente debajo de una ventana 36 formada en la barra de
soporte. Como se ilustra en la Fig. 1B, el movimiento del soporte
14 a su posición de transferencia de muestra, con la compresión de
los bloques 16, deja la zona de transferencia de muestra 32 entrar
en contacto con el depósito de reactivo 24 en el conjunto de casete
12 promoviendo un flujo capilar de fluido desde el depósito 24 hasta
la tira de reactivo 30.
La tira de reactivo 30 está formada de un
material poroso o fibroso que promueve un flujo capilar a través
suyo. Los materiales preferidos incluyen membranas porosas de
polímero fusionado o de polímero microporoso, como las membranas
microporosas de polisulfona, polipropileno, nailon, nitrocelulosa,
Teflón^{TM} o cloruro de polivinilo. En el presente caso, se
prefiere particularmente la nitrocelulosa tal como está disponible
de Sartorius, teniendo dimensiones de longitud, anchura y espesor de
entre 5-20 mm, 1-5 mm y
0,1-0,5 mm, respectivamente.
El extremo hacia abajo de la tira 30 está en
contacto con una almohadilla absorbente 38 que funciona como un
depósito para sacar líquido de muestra suministrado a la tira 30 en
la zona de transferencia de muestra y fluye en una dirección hacia
abajo (a la derecha en las figuras) hacia el interior y a través de
la zona de detección 34. La almohadilla 38 está hecha de un
material absorbente apropiado, como vidrio fibroso o celulosa. El
volumen de absorción de la almohadilla 38 es, preferentemente, por
lo menos la mitad del volumen de la muestra añadida, por ejemplo, 10
a 30 \mul.
En el camino de fluido definido por la tira de
reactivo 30 están dispuestos reactivos, que se describirán
posteriormente, eficaces para producir un producto de reacción
detectable dependiente del analito, que se detecta en la zona de
detección. Por lo tanto, se pueden llevar a cabo varios ensayos
usando el casete 10 como se describirá posteriormente.
La superficie orientada al exterior de la tira
de reactivo 30, hacia abajo de la zona de transferencia de muestra
32, está cubierta por una película reflectora impermeable, como una
película Mylar. En particular, la película se extiende por la zona
de detección 34 en la tira de reactivo 30 que está interpuesta entre
la ventana de soporte 36 y la película reflectora. El objetivo de
la tira reflectora es mejorar la reflectividad de la tira de
reactivo 30, tal como se ve por la ventana de soporte 36 y, en
particular, mejorar el cambio de reflectividad que se observa
cuando se humedece la tira 30 y en respuesta a una reacción analito
especifico que tiene lugar en la zona de detección 34, como se
comentará más adelante.
La construcción de las varias capas en el
soporte 14 se ilustra en la vista despiezada de la Fig. 2. Ahí se
ven la barra de soporte 28 con la ventana 36 ubicada en su interior,
y la tira de reactivo 30 con la zona de transferencia de muestra 32
hacia arriba y la zona de detección 34. La tira 30 está atada a la
barra de soporte 28 con una tira adhesiva bilateral 44 que está
inicialmente recubierta con un respaldo desmontable 45. Como se
muestra, la tira adhesiva 44 está separada por un espacio que
corresponde a la ventana de soporte 36 y la zona de detección 34.
La almohadilla absorbente 38 está posicionada de manera que se
traslapa con el extremo hacia abajo de la tira de reactivo 30, y la
película reflectora está posicionada de manera que se extiende
desde un punto justo hacia abajo de la región de transferencia de
muestra en la tira 30 hasta un punto más allá de la almohadilla
absorbente 38. En construcción, los componentes anteriores están
situados como se muestra, y están atados a la barra de soporte 28 y
entre sí quitando el respaldo adhesivo 44 y apretando firmemente la
cara adhesiva del conjunto contra la barra de soporte 28.
El casete 10 está diseñado particularmente para
un ensayo de analito en el que (i) componentes de muestra que
típicamente incluyen el analito mismo, reaccionan con uno o más
reactivos en el depósito 24 para formar una muestra modificada, y
(ii) la muestra modificada, típicamente analito modificado,
reacciona con una segunda composición de reactivo para producir un
producto detectable dependiente del analito. Es decir, tanto el
depósito de reactivo 24 como la tira de reactivo 30 en este modo de
realización preferido contienen uno o más reactivos para llevar a
cabo estas reacciones. El o los reactivos del depósito 24 y la tira
30 también se mencionan aquí como una primera y segunda
composiciones de reactivo, respectivamente, y pueden incluir uno o
más enzimas, anticuerpos, anticuerpos marcados o sustratos de
enzima, reactivos de unión y/o agentes precipitantes tal como se
comentará más ade-
lante.
lante.
En un casete 10 a título de ejemplo, para la
detección de un analito antígeno plurivalente, la composición de
reactivo en el depósito 24 incluye un anticuerpo de analito
específico no soportado marcado, por ejemplo, covalentemente con un
indicador detectable, por ejemplo, partículas metálicas, moléculas
fluorescentes o de color, polímeros ramificados conteniendo restos
acoplados fluorescentes o de color y partículas recubiertas, por
ejemplo, partículas de látex con un recubrimiento fluorescente.
"No soportado" significa que el reactivo está libremente móvil
en el interior del depósito 24. Por tanto, cuando se añade analito
al depósito 24, éste reacciona específicamente con el reactivo de
anticuerpo para formar un complejo marcado móvil de analito y
anticuerpo. En otros modos de realización preferidos de la presente
invención, las composiciones de reactivo pueden ser soportadas o no
soportadas, dependiendo de si el reactivo tiene que migrar junto con
el analito y/o si se esperaría que el reactivo interfiriera con la
determinación de analito
final.
final.
Se conocen en el ramo procedimientos para marcar
un reactivo de unión, como anticuerpos marcados, incluyendo el uso
de marcaciones radioactivas, marcaciones fluorescentes o enzimas
unidos que convierten un sustrato separado en una especie
detectable. Una variedad de anticuerpos marcados con indicadores,
como anticuerpos marcados con enzimas, están disponibles en el
mercado o se pueden preparar fácilmente según procedimientos
conocidos (véase, por ejemplo, Harlow, pp. 319-358).
Para usar con el presente casete de inmunoensayo 10, se prefieren
procedimientos de marcación detectables ópticamente. Con este
propósito se usan ampliamente enzimas que reaccionan con un
sustrato para producir un producto de reacción visible. Un reactivo
marcado particularmente preferido es un anticuerpo de analito
específico conjugado a una partícula visible, como una perla de
látex de color o de oro coloidal. Tales conjugados se describen en
la Patente US nº 4.313.734 (Leuvering) y se pueden obtener también
de fabricantes como BB International (Cardiff, UK) y NanoProbes
(Stony Brook, NY).
La composición de reactivo en la tira de
reactivo 30, que puede incluir uno o más reactivos, puede estar
repartida por toda la tira 30 o localizada en la tira 30, por
ejemplo, en la zona de transferencia de muestra 32 justo hacia
abajo de la zona de transferencia 32, o en la zona de detección 34,
de forma soportada o no soportada. En el modo de realización
descrito anteriormente, para detectar un analito plurivalente, la
segunda composición de reactivo incluye un anticuerpo antianalito
soportado en la zona de detección 34. En este formato, el complejo
de analito y anticuerpo marcado transferido desde el depósito 24
hasta la tira de reactivo 30 migra en una dirección hacia abajo por
la tira 30, donde es atrapado en la zona de detección 34. La etapa
para formar un producto de reacción detectable incluye atrapar un
complejo detectable en la zona de detección 34.
En otros modos de realización preferidos, la
segunda composición de reactivo puede incluir enzimas soportados o
no soportados, sustratos, reactivos de unión marcados, agentes
fotosensibilizadores, agentes reductores u oxidantes y/o grupos de
ácido o de base que pueden donar proteínas e iones hidroxilos como
parte de una reacción de detección de analito, según procedimientos
de reacción conocidos de dos etapas donde, en la presente
invención, una de las etapas debe llevarse a cabo en el depósito de
reactivo 24 y la segunda en la tira de reactivo 30.
Más específicamente, la zona de detección 34
puede contener reactivos eficaces para producir un producto de
reacción detectable con un complejo de analito y anticuerpo no
marcado. Por ejemplo, la zona de detección 34 puede contener una
oxidasa, una peroxidasa y un compuesto que se puede oxidar a una
especie detectable como un colorante. Cuando el complejo de analito
y anticuerpo incluye un sustrato para la oxidasa, el H_{2}O_{2}
generado en la reacción resultante reacciona con el compuesto
oxidable, catalizado por la peroxidasa, para generar el colorante
detectable. Tales ensayos están descritos, por ejemplo, en Hewett
et al.
Los reactivos se pueden incorporar en el
depósito 24 y en la tira 30 empapando el depósito o el material de
tira en una solución de los reactivos, secando o añadiendo después
una solución del material de reactivo a toda o a una zona
localizada de la tira 30, secando posteriormente. Donde el reactivo
está soportado, el depósito o la región de tira pueden proporcionar
por naturaleza, o estar modificados químicamente según métodos
conocidos para tener grupos de superficie reactivos, como grupos
amino, carboxilo, sulfhídrico o aldehído que permiten un
acoplamiento covalente usando agentes activadores o agentes de
acoplamiento bifuncionales.
En un modo de realización particularmente
preferido, el casete 10 está diseñado para la detección de proteína
C-reactiva, típicamente medida en una muestra
sanguínea o de suero. En este modo de realización, la composición
de reactivo en el depósito 24 es un anticuerpo monoclonal no
soportado específico contra un epítopo de proteína
C-reactiva, es decir, un epítopo en una de las 5
subunidades idénticas en proteína C-reactiva. Un
anticuerpo de proteína anti C-reactivo a título de
ejemplo es un anticuerpo monoclonal producido por la línea celular
identificada por el número CC002, y disponible por Scripps
Laboratories (San Diego, CA). El anticuerpo está marcado por
conjugación a micropartículas de oro, según métodos estándares, por
ejemplo, como se describe en, "The place of gold in rapid
tests", John Chandler, Tracey Gurmin y Nicola Robinson, IVD
Technology 6, nº 2 (2000): 37-49. El segundo
reactivo es un anticuerpo específico contra la proteína
C-reactiva y está soportado en la zona de detección
34. Un anticuerpo a título de ejemplo es el mismo que el que se usa
en el primer reactivo de anticuerpo (de depósito). Se dan detalles
del ensayo en el Ejemplo 1.
Las Figs. 3A y 3B ilustran el flujo de líquido
de muestra hasta el interior y a través de los elementos de flujo
de fluido del casete 10 durante el funcionamiento del casete. Como
se ve en la Fig. 3A, la muestra líquida aplicada al pocillo de
muestra 18 se saca por capilaridad hasta la almohadilla central 20
y, desde ahí, por la capa de extensión 22 al depósito 24. Aquí, la
muestra puede ser detenida durante un tiempo de incubación deseado,
en presencia del primer reactivo. Tiempos de incubación típicos
pueden variar de unos pocos segundos hasta diez minutos o más.
Cuando el soporte 14 en el casete 10 se mueve a
su posición de transferencia de muestra, mostrada en la Fig. 3B, el
líquido de muestra fluye por capilaridad hasta el interior de la
zona de transferencia de la tira 32 cuando esta última entra en
contacto con el depósito 24. Desde la zona de transferencia 32, el
líquido de muestra migra en una dirección hacia abajo hasta el
interior y a través de la zona de detección 34 y finalmente hasta
el interior de la almohadilla absorbente 38. Controlando la demora
entre la adición de material de muestra en el pocillo de muestra 18
del casete y el movimiento inicial del soporte 14 hasta su posición
de transferencia de muestra, el casete 10 se puede manejar para
controlar el periodo de incubación de muestra antes que la muestra
se transfiera primeramente desde el depósito 24 hasta la tira de
reactivo 30.
Adicionalmente, la velocidad de la transferencia
de líquido y el volumen de muestra total transferido se pueden
controlar controlando (i) la frecuencia de ciclo con la cual el
actuador mueve el soporte 14 hacia delante y atrás de su posición
de transferencia, (ii) el tiempo de contacto que se mantiene el
soporte 14 en su posición de transferencia durante cada ciclo, y
(iii) el número total de ciclos de transferencia. Como se comenta en
la siguiente sección, este control está convenientemente
proporcionado por un instrumento para manejar el casete en un
aparato de ensayo construido de acuerdo con otro aspecto de la
invención.
La Fig. 4 es una vista en perspectiva de un
instrumento para manejar el casete 48 construido de acuerdo con la
invención, y la Fig. 5 muestra elementos funcionales clave del
instrumento en forma esquemática. El instrumento incluye una
carcasa de casete, representada por el cajón 50, adaptada para
recibir y mantener el casete 10 en un estado operativo cuando un
líquido de muestra se ha añadido al casete 10. En particular, el
cajón 50 está al bies para encajar con muescas guía, como las
muescas 52, en el cuerpo de casete 12 para sujetar el casete 10 con
la carcasa 50 en una posición deseada.
El instrumento incluye además un actuador 53 que
tiene pistones o empujadores activados por solenoide indicados con
54, manejables para engancharse con el soporte del casete 14 y mover
el soporte 14 de su estado de reposo a su posición de transferencia
de muestra cuando una unidad de control 55 actúa en el instrumento
48. En particular, la unidad de control 55 se puede programar o
ajustar por el usuario para controlar uno o más de los siguientes
actuadores variables:
- (i)
- el periodo entre la adición de muestra en la transferencia de muestra del casete a la tira 30. Este tiempo corresponde aproximadamente al periodo de incubación de la exposición del líquido de muestra a, y reacción con, la primera composición de reactivo, y puede variar desde un óptimo de unos segundos hasta 10 minutos o más, dependiendo de la naturaleza de la primera reacción de muestra.
- (ii)
- la frecuencia de ciclo con la que el actuador 53 mueve el soporte 14 hacia delante y atrás de su posición de transferencia. La frecuencia se puede variar entre uno por ensayo a unos pocos por minuto a uno por segundo.
- (iii)
- el tiempo de contacto que se mantiene el soporte 14 en su posición de transferencia durante cada ciclo. Junto con la frecuencia, esta variable define la velocidad total a la que el líquido de muestra se transfiere a la tira de reactivo 30. Esta velocidad se puede optimizar para tipos diferentes de químicas de ensayo. Por ejemplo, puede ser deseable regular el flujo de material del pocillo de muestra 18 a través del depósito de reactivo 24 para asegurar un tiempo de reacción suficiente en el depósito de reactivo 24, o medir la velocidad de flujo por la tira de reactivo 30 para asegurar un tiempo de reacción adecuado en la tira 30.
- (iv)
- el número total de ciclos de transferencia que, junto con el tiempo de contacto en cada ciclo, determinará el volumen total transferido del cuerpo de casete 12 a la tira 30. Controlando el volumen total transferido, se puede determinar una medida más cuantitativa de la concentración de analito expresado en cantidad de analito/volumen de muestra. En particular, el volumen que pasa por la zona de detección 34 será la cantidad total transferida menos una cantidad predeterminada que queda en la parte de la tira 30 hacia arriba de la zona de detección 34.
Hay que notar que la unidad de control 55 se
puede preprogramar para controlar la transferencia de líquido en el
ensayo de una manera optimizada para cualquier tipo elegido de
química de ensayo. Varios perfiles de transferencia de líquido que
se pueden obtener con la invención se considerarán más adelante.
También como se muestra en la Fig. 5, el
instrumento para manejar el casete 48 incluye un fotodetector 56
manejable para detectar cambios en la reflectancia de la zona de
detección, como se observa por la ventana 36. En este caso, el
fotodetector 56 puede ser un sencillo dispositivo para medir la
intensidad de luz de reflectancia en la ventana 36 cuando la
ventana de detección 36 está iluminada por una fuente de luz, por
ejemplo, un LED que también forma parte del detector 56. En otros
modos de realización, el detector 56 puede incluir un detector de
luz emitida y rayo de excitación fluorescente de longitud de onda
seleccionada, o una fuente de luz visible de longitud de onda
seleccionada y fotodetector para medir la absorción de luz en la
superficie de detección.
Particularmente donde el detector de luz 56 está
diseñado para medir la reflectancia desde la superficie de la tira
de reactivo en la zona de detección, la película reflectora es
eficaz para aumentar, es decir, amplificar la intensidad de
reflectancia y mejorar así la resolución y la exactitud. Como se
verá en la siguiente sección, la reflectancia aumentada también
permite que la zona de detección sirva como un "control" para
monitorizar el flujo de fluido por la tira de reactivo 30.
Como se ha mencionado anteriormente, una
característica de la invención es la capacidad de controlar la
velocidad y el volumen del flujo de fluido de un área de reacción a
otra, y así las cinéticas de las reacciones y el volumen total del
ensayo. Esta característica es importante cuando una o más
reacciones de ensayo son de paso limitante o cuando se quiere
ensayar un punto final cinético. La característica también es
importante para controlar la cantidad total de líquido de muestra
que fluye hasta el interior y a través de la zona de detección 34,
para cuantificar la concentración de analito en la zona 34.
Las Figs. 6A y 6B ilustran dos curvas de
transferencia de muestra que ilustran las diferentes características
de transferencia de muestra que se pueden obtener en la invención.
En el primer caso, ilustrado en la Fig. 6A, la muestra se añade al
casete 10 en tiempo t_{0}, y se la permite incubar en el depósito
de reactivo 24 hasta un tiempo t_{1}, cuando la barra de soporte
en el casete se pone en contacto con el depósito 24. Si la barra de
soporte 28 se mantiene en contacto con el depósito 24 por un periodo
de tiempo prolongado, la transferencia de muestra a la tira 30,
expresada como volumen de muestra en función del tiempo, aumenta de
forma lineal hasta un tiempo t_{f} cuando tanto la tira 30 como la
almohadilla 38 se encuentran completamente saturadas (ignorando los
efectos de evaporación de muestra).
En la Fig. 6B, el tiempo de incubación de
muestra, de t_{0} a t_{1}, es el mismo que en la Fig. 6A pero
la transferencia de muestra está afectada por tres eventos de
transferencia diferenciados, intercalados por intervalos en los que
el soporte deja el contacto con el depósito 24 y la acumulación de
volumen durante todo el tiempo es plana. Como se puede ver, el
último enfoque permite una velocidad de transferencia de volumen
más controlada y típicamente más lenta que cuando la transferencia
de muestra se realiza como un evento ininterrumpido.
La Fig. 7 muestra una curva de reflectancia a
título de ejemplo de un ensayo en el que un analito de proteína
C-reactiva reacciona primero con un anticuerpo
antianalito marcado en el depósito de casete 24 para formar un
complejo de anticuerpo y analito detectable, y luego se transfiere
el complejo a la tira de reactivo 30 donde es atrapado por un
anticuerpo antianalito soportado en la zona de detección 30. La
reflectancia inicial durante los primeros pocos segundos después de
la transferencia de muestra al soporte 14, corresponde a una
reflectancia de tira seca. El descenso abrupto de reflectancia tiene
lugar cuando el borde frontal de la muestra transferida pasa a
través de la zona de detección 34. El descenso de reflectancia se
debe tanto al humedecimiento de la tira 30 en la zona de detección
34 como a la presencia de anticuerpos marcados con oro coloidal,
tanto en complejos como en forma no complejada.
Con un flujo continuo de material de muestra por
la zona de detección 34, el nivel de reflectancia empieza de
cambiar con el tiempo, dependiendo de la concentración relativa de
conjugado de anticuerpo complejado y no complejado, es decir,
dependiendo de la concentración de analito de muestra. A una
concentración de analito más baja, donde hay relativamente más
conjugado en forma no complejada y se atrapa relativamente menos
conjugado en la zona de detección 34, la reflectancia empieza a
aumentar con el tiempo a medida que más y más conjugado se lleva
fuera de la zona de detección 34 por la transferencia de muestra a
través de la zona 34. Esto se ve en la gráfica de "diamante"
de la Fig. 7. En cambio, a concentraciones de analito más altas, se
atrapa progresivamente más conjugado en la zona de detección 34,
con flujo de muestra a través de la zona 34, actuando para bajar la
reflectancia con el tiempo como se indica en la gráfica de
"triángulo" de la misma figura.
La concentración de analito se mide comparando
la reflectancia medida en un punto final elegido, por ejemplo 4
minutos, con mediciones de reflectancia estándares de
concentraciones de analito conocidas. La reflectancia medida se
puede expresar, por ejemplo, como una proporción entre el porcentaje
de reflectancia final y el porcentaje de reflectancia inicial. Como
se ve en la gráfica mostrada en la Fig. 8, una gráfica de esta
relación muestra una curva dependiente del analito por una
concentración de proteína C-reactiva de 0 a 8
\mug/ml.
De lo precedente se puede notar cómo se obtienen
varios objetos y características de la invención. El casete 10
proporciona un formato de ensayo de tira seca en el cual se pueden
llevar a cabo de manera controlada reacciones consecutivas
dependientes del analito controlando la transferencia de velocidad y
volumen de una región de reacción a otra. Además, el casete 10 está
diseñado para permitir volúmenes de muestra controlados y medidos a
través de la zona de detección 34, para una determinación más
cuantitativa de la concentración de analito. El formato de casete
sirve para ensayos múltiples en el mismo casete y alimentados de la
misma muestra. Finalmente, la tira reflectora en la barra de
soporte 28 actúa para aumentar los cambios de reflectancia,
aumentando la fiabilidad y la resolución de un ensayo.
Preferiblemente, el casete 10 de la invención se
suministra de soluciones y reactivos precargados y por lo tanto es
completamente independiente, no necesitando la carga de soluciones
por un operador. El lector 48 que contiene el casete 10 se puede
programar para ajustar el casete a sus diferentes posiciones de
funcionamiento en tiempos designados. Un ensayo de etapas múltiples
se puede por tanto llevar a cabo con el casete 10 contenido dentro
de un lector de casete 48, no necesitando aportación de un operador
exterior.
En una aplicación específica del presente
dispositivo, se analiza una muestra sanguínea por niveles de
proteína C-reactiva. Se ha demostrado que niveles
alterados de este compuesto son diagnóstico de trastornos
caracterizados por factores de riesgo para el derrame cerebral y la
isquemia vascular cerebral, y el derrame y la cardiopatía
isquémicos (véase, por ejemplo, De Maat, Grau, Kuller, Liuzzo,
Mendall, Thompson y Tracy).
El casete 10 para el ensayo se preparó como
sigue: La almohadilla central 20 es una almohadilla de fibra de
vidrio capaz de absorber aproximadamente 20 \mul de líquido. La
capa de extensión 22 también es de fibra de vidrio. El depósito 24
es de un material de plástico poroso con un volumen de absorción
total de aproximadamente 6 \mul. El depósito 24 se empapó
inicialmente con 6 \mul de una solución de 20 D.O. de conjugado de
anticuerpo formado por oro coloidal conjugado con anticuerpo
específico contra proteína C-reactiva obtenido de
BBInternational (Cardiff, UK). Luego, se secó el depósito 24.
La tira de reactivo 30 en el casete 10 es una
tira de nitrocelulosa de 11 mm por 3 mm, obtenida de Sartorius
(Goettingen, GmbH), con un espesor de menos de 10 mils (0,25 mm). El
anticuerpo contra la proteína C-reactiva se acopló
a la región de detección 34 mediante interacción hidrofóbica con la
nitrocelulosa. La región de detección 34 se ubicó aproximadamente a
6 mm de la región de transferencia de muestra 32. La almohadilla de
absorción 38 del extremo hacia abajo de la tira 30 es de un material
de fibra de celulosa con un volumen de absorción total de
aproximadamente 25 \mul.
En el método de ensayo, se aplicó una muestra
sanguínea humana de 50 \mul al pocillo de muestra 18 en el casete
10. Después de un periodo de incubación de 3 minutos, se movió el
soporte 14 a su posición de transferencia de muestra durante 4
minutos. Durante el flujo de líquido de muestra a la tira 30, se
monitorizó la reflectancia en la ventana 36 de la barra de soporte.
A los 4 minutos aproximadamente, se alcanzó un punto final estable
(Fig. 7). Se determinó la proporción de señal entre reflectancia de
punto final y reflectancia inicial y se la usó para calcular la
concentración de analito de una curva estándar generada por muestras
con cantidades conocidas de proteína C-reactiva.
Aunque la invención se ha descrito con
referencia a procedimientos y modos de realización específicos, se
notará que se pueden hacer varias modificaciones sin alejarse de la
invención.
Claims (12)
1. Un procedimiento para llevar a cabo un ensayo
para un analito de fluido corporal comprendiendo
- a)
- introducir un fluido corporal conteniendo el analito en un depósito de absorción (24) conteniendo una primera composición de reactivo eficaz para reaccionar con uno o más componentes de muestra para formar una muestra modificada,
- b)
- poner en contacto repetidamente el depósito (24), con tal depósito conteniendo una muestra de fluido corporal absorbida, con una tira de reactivo (30) que contiene una segunda composición de reactivo eficaz para reaccionar con la muestra modificada formada en dicho depósito (24) para producir un producto detectable dependiente del analito, y
- c)
- controlar la frecuencia y la duración de dicho contacto repetido, para controlar así el volumen y la velocidad de la transferencia del fluido de muestra desde el depósito (24) a la tira de reactivo (30).
2. El procedimiento de la reivindicación 1 en el
que dicha tira de reactivo (30) es una tira de reactivo alargada
(30) que tiene una zona de transferencia de muestra (32) en la que
el depósito (24) hace contacto con la tira (30), y una zona de
detección (34) ubicada hacia abajo de la zona de transferencia
(32).
3. El procedimiento de la reivindicación 2 para
detectar un analito plurivalente en una muestra de fluido corporal
líquida, en el que la primera composición de reactivo en el depósito
de reactivo (24) incluye un conjugado no soportado de un anticuerpo
antianalito y un grupo indicador detectable, la reacción para formar
una muestra modificada incluye la unión del conjugado con el
analito de muestra con el fin de formar un complejo de conjugado y
analito, la composición de reactivo en la tira de reactivo (30)
incluye un anticuerpo antianalito soportado en una región de
detección en la tira de reactivo (30), y la reacción para formar un
producto detectable dependiente del analito incluye la unión del
complejo con el anticuerpo soportado para localizar el indicador
detectable en el complejo en la zona de detección (34).
4. El procedimiento de la reivindicación 3 en el
que dicho conjugado no soportado es un conjugado de un anticuerpo
antianalito y un indicador detectable seleccionado del grupo
consistente en partículas metálicas, partículas marcadas con restos
de color o fluorescentes, polímeros marcados con restos de color o
fluorescentes, partículas y moléculas de color o fluorescentes.
5. El procedimiento de la reivindicación 4 para
ser usado en la detección de analito de proteína
C-reactiva en una muestra sanguínea, en el que el
anticuerpo antianalito del conjugado no soportado en el depósito de
reactivo (24) y el anticuerpo antianalito soportado en la tira de
reactivo (30) son anticuerpos específicos contra un epítopo común
en la proteína C-reactiva.
6. Aparato para ser usado en la detección de un
analito en una muestra de fluido corporal líquida, comprendiendo
- i)
- un casete (10) teniendo
- a)
- un cuerpo de casete (12) comprendiendo un depósito de reactivo que contiene una primera composición de reactivo eficaz para reaccionar con uno o más componentes de muestra para formar una muestra modificada;
- b)
- un soporte (14) montado sobre dicho cuerpo (12) manejable para moverse hacia delante y atrás de una posición de transferencia para realizar una comunicación de fluido entre dicho depósito (24) y una tira de reactivo (30) llevada sobre dicho soporte (14); y
- c)
- dicha tira de reactivo (30) conteniendo una segunda composición de reactivo eficaz para reaccionar con la muestra modificada formada en dicho depósito (24) para formar un producto detectable dependiente del analito;
- ii)
- un instrumento para manejar el casete (48) teniendo
- a)
- una carcasa de casete (50) en el que se puede colocar el casete (10) de manera desmontable durante un ensayo de muestra;
- b)
- un actuador (53) manejable para mover el soporte (14) en el casete (10) hacia delante y atrás de la posición de transferencia;
- c)
- un detector (56) manejable para detectar una reacción específica de analito en la tira de reactivo; y
- d)
- una unidad de control (55) manejablemente conectada con el actuador (53) para controlar el volumen y la velocidad de transferencia de muestra desde dicho depósito de reactivo (24) hasta la tira de reactivo (30) durante un procedimiento de ensayo, donde la unidad de control (55) es manejable para controlar la velocidad de transferencia de muestra desde dicho depósito (24) hasta la tira de reactivo (30) moviendo repetidamente el soporte (14) en el casete (10) hacia delante y atrás de la posición de transferencia y controlando (i) la frecuencia de ciclo con la que el actuador (53) mueve el soporte (14) hacia delante y atrás desde su posición de transferencia y (ii) el tiempo de contacto que se mantiene el soporte (14) en su posición de transferencia durante cada ciclo.
7. El aparato de la reivindicación 6 en el que
dicho cuerpo de casete (12) tiene un pocillo de muestra (18) para
recibir dicha muestra con el fin de que ésta pueda migrar desde
dicho pocillo de muestra (18) hasta el interior de dicho depósito
(24).
8. El aparato de la reivindicación 7 en el que
la primera composición de reactivo en el depósito de reactivo (24)
incluye un conjugado no soportado de un anticuerpo antianalito y un
grupo indicador detectable, la reacción para formar una muestra
modificada incluye la unión del conjugado con el analito de muestra
para formar un complejo de conjugado y analito, la composición de
reactivo en la tira de reactivo (30) incluye un anticuerpo
antianalito soportado en una región de detección (34) en la tira de
reactivo (30), y la reacción para formar un producto detectable
dependiente del analito incluye la unión del complejo con el
anticuerpo soportado con el fin de localizar el indicador
detectable en el complejo en la zona de detección (34).
9. El aparato de la reivindicación 8 en el que
dicho conjugado no soportado es un conjugado de un anticuerpo
antianalito y un indicador detectable seleccionado del grupo
consistente en partículas metálicas, partículas marcadas con restos
de color o fluorescentes, polímeros marcados con restos de color o
fluorescentes, partículas y moléculas de color o fluorescentes.
10. El aparato de la reivindicación 9 para ser
usado en la detección de analito de proteína
C-reactiva en una muestra sanguínea, en el que el
anticuerpo antianalito en el conjugado no soportado en el depósito
de reactivo (24) y el anticuerpo antianalito soportado en la tira
de reactivo (30) son anticuerpos específicos contra un epítopo
común en la proteína C-reactiva.
11. El aparato de la reivindicación 8 en el que
dicho soporte (14) incluye una ventana (36) por la cual dicho
detector (56) puede detectar una reacción detectable en la zona de
detección (34) en la tira de reactivo (30).
12. El aparato de la reivindicación 6 en el que
dicha unidad de control (55) es manejable para controlar el volumen
y la velocidad de transferencia de muestra desde el depósito de
reactivo (24) hasta la tira de reactivo (30) controlando además el
período de incubación de muestra antes de transferir primero la
muestra desde el depósito (24) hasta la tira de reactivo (30).
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US7238519B2 (en) * | 2002-06-07 | 2007-07-03 | Cholestech Corporation | Automated immunoassay cassette, apparatus and method |
FI20040205A (fi) | 2004-02-11 | 2005-08-12 | Reagena Ltd Oy | Menetelmä ja laite pikatestin valmistamiseksi |
GB2427271A (en) * | 2005-06-16 | 2006-12-20 | Porvair Filtration Group Ltd | Diagnostic device |
US7816122B2 (en) * | 2005-10-18 | 2010-10-19 | Idexx Laboratories, Inc. | Lateral flow device with onboard reagents |
US7615075B2 (en) * | 2005-11-04 | 2009-11-10 | Rush University Medical Center | Plastic implant impregnated with a degradation protector |
ATE483165T1 (de) * | 2007-01-09 | 2010-10-15 | Cholestech Corp | Vorrichtung und verfahren zur messung des ldl- assoziierten cholesterols |
US20080213133A1 (en) * | 2007-02-05 | 2008-09-04 | Gordon Wallace | Flow analysis apparatus and method |
US8247235B2 (en) | 2007-06-08 | 2012-08-21 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Lipoprotein analysis by differential charged-particle mobility |
JP5792614B2 (ja) * | 2008-04-09 | 2015-10-14 | ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーBecton, Dickinson And Company | 被覆ナノ粒子を使用した高感度免疫学的検定 |
US9354200B1 (en) | 2008-08-07 | 2016-05-31 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Detection apparatus for differential-charged particle mobility analyzer |
EP2547279A1 (en) | 2010-03-18 | 2013-01-23 | Smith&Nephew, Inc. | A device for use during ligament reconstruction surgery |
US9250211B2 (en) | 2010-12-30 | 2016-02-02 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Magnetic separation of lipoproteins using dextran sulfate |
EP2825309B1 (en) | 2012-03-16 | 2018-05-16 | Stat-Diagnostica & Innovation, S.L. | A test cartridge with integrated transfer module |
WO2016200922A1 (en) | 2015-06-12 | 2016-12-15 | Cytochip Inc. | Fluidic units and cartridges for multi-analyte analysis |
US10634602B2 (en) | 2015-06-12 | 2020-04-28 | Cytochip Inc. | Fluidic cartridge for cytometry and additional analysis |
WO2017011554A1 (en) | 2015-07-14 | 2017-01-19 | Cytochip Inc. | Volume sensing in fluidic cartridge |
CN106841650A (zh) * | 2017-03-28 | 2017-06-13 | 苏州翊讯生物科技有限公司 | 化学发光免疫分析仪用多通道检测装置 |
US10293340B2 (en) | 2017-10-11 | 2019-05-21 | Fitbit, Inc. | Microfluidic metering and delivery system |
WO2019083844A1 (en) | 2017-10-23 | 2019-05-02 | Cytochip Inc. | DEVICES AND METHOD FOR MEASURING TARGET ANALYTES AND PARTICLES |
KR102245892B1 (ko) * | 2019-10-11 | 2021-04-29 | 한국과학기술원 | 프렉션 바운드 측정에 기반한 피검출체의 농도 확인 방법 |
CN112964888A (zh) * | 2021-04-28 | 2021-06-15 | 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 | 试剂转移装置以及免疫诊断设备 |
Family Cites Families (34)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5622871A (en) * | 1987-04-27 | 1997-04-22 | Unilever Patent Holdings B.V. | Capillary immunoassay and device therefor comprising mobilizable particulate labelled reagents |
NL7807532A (nl) * | 1978-07-13 | 1980-01-15 | Akzo Nv | Metaal-immunotest. |
US6406920B1 (en) * | 1980-06-20 | 2002-06-18 | Inverness Medical Switzerland Gmbh | Processes and apparatus for carrying out specific binding assays |
US4816224A (en) * | 1980-08-05 | 1989-03-28 | Boehringer Mannheim Gmbh | Device for separating plasma or serum from whole blood and analyzing the same |
US5073484A (en) * | 1982-03-09 | 1991-12-17 | Bio-Metric Systems, Inc. | Quantitative analysis apparatus and method |
US4552839A (en) * | 1983-08-01 | 1985-11-12 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Determination of analytes in particle-containing medium |
US4743560A (en) * | 1984-03-26 | 1988-05-10 | Becton Dickinson And Company | Solid phase assay |
US4756828A (en) * | 1984-04-12 | 1988-07-12 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Chromatographic strip having non-compressed edges |
US4632901A (en) * | 1984-05-11 | 1986-12-30 | Hybritech Incorporated | Method and apparatus for immunoassays |
US4999285A (en) * | 1984-11-15 | 1991-03-12 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Chromatographic cassette |
DE3445816C1 (de) * | 1984-12-15 | 1986-06-12 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Flaechenfoermiges diagnostisches Mittel |
CA1289872C (en) * | 1986-06-18 | 1991-10-01 | David L. Woodrum | Reversible immobilization of assay reagents in a multizone test device |
US4963468A (en) * | 1986-09-05 | 1990-10-16 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Immunoseparating strip |
US4920046A (en) * | 1987-02-20 | 1990-04-24 | Becton, Dickinson And Company | Process, test device, and test kit for a rapid assay having a visible readout |
CA1303983C (en) * | 1987-03-27 | 1992-06-23 | Robert W. Rosenstein | Solid phase assay |
US5137808A (en) * | 1987-04-07 | 1992-08-11 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Immunoassay device |
US4956275A (en) * | 1987-04-14 | 1990-09-11 | Molecular Devices Corporation | Migratory detection immunoassay |
JPH0746107B2 (ja) * | 1987-04-27 | 1995-05-17 | ユニリーバー・ナームローゼ・ベンノートシヤープ | 検定法 |
US4943522A (en) * | 1987-06-01 | 1990-07-24 | Quidel | Lateral flow, non-bibulous membrane assay protocols |
US4959324A (en) * | 1989-03-16 | 1990-09-25 | Chemtrak, Inc. | Sample pad assay initiation device and method of making |
US4981786A (en) * | 1987-09-04 | 1991-01-01 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Multiple port assay device |
AU2684488A (en) * | 1988-06-27 | 1990-01-04 | Carter-Wallace, Inc. | Test device and method for colored particle immunoassay |
US5171688A (en) * | 1988-08-30 | 1992-12-15 | Cholestech Corporation | Self-corrected assay device |
US6352862B1 (en) * | 1989-02-17 | 2002-03-05 | Unilever Patent Holdings B.V. | Analytical test device for imuno assays and methods of using same |
US5260221A (en) * | 1989-03-16 | 1993-11-09 | Ramel Urs A | Sample pad assay initiation device |
US5075078A (en) * | 1989-10-05 | 1991-12-24 | Abbott Laboratories | Self-performing immunochromatographic device |
US5135873A (en) * | 1989-11-27 | 1992-08-04 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Device and method for completing a fluidic circuit which employs a liquid expandable piece of bibulous material |
US5252496A (en) * | 1989-12-18 | 1993-10-12 | Princeton Biomeditech Corporation | Carbon black immunochemical label |
US5110724A (en) * | 1990-04-02 | 1992-05-05 | Cholestech Corporation | Multi-analyte assay device |
US5591646A (en) * | 1992-09-02 | 1997-01-07 | Arris Pharmaceutical | Method and apparatus for peptide synthesis and screening |
DK0689673T3 (da) * | 1993-03-17 | 1998-02-02 | Akzo Nobel Nv | Apparat til påvisning af et specifikt reagerende stof |
US5744096A (en) * | 1997-02-21 | 1998-04-28 | Cholestech Corporation | Automated immunoassay cassette |
KR100292182B1 (ko) * | 1997-09-18 | 2001-11-26 | 모리시타 요이찌 | 면역크로마토그라피장치 |
AU2288200A (en) * | 1999-01-09 | 2000-08-01 | Bernd Pevec | Method and device for determining an analyte |
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