JPH08502294A

JPH08502294A - ニューモシスティス−カリニ肺炎の治療方法とそのために有用な化合物

Info

Publication number: JPH08502294A
Application number: JP6510083A
Authority: JP
Inventors: ティドウェル，リチャード・アール; ダイクストラ，クリスティン・シー; ホール，ジェイムズ・イー
Original assignee: ザ・ユニヴァーシティ・オヴ・ノース・キャロライナ・アト・チャペル・ヒル
Priority date: 1992-10-13
Filing date: 1993-10-04
Publication date: 1996-03-12
Anticipated expiration: 2014-05-10
Also published as: ATE187641T1; EP0664703A4; AU675092B2; CA2104196C; US5428051A; EP0664703A1; CA2104196A1; DE69327330D1; US5578631A; NZ257001A; EP0664703B1; DE69327330T2; AU5299593A; WO1994008580A1; JP2888453B2; BR9307235A

Abstract

(57)【要約】ニューモシスティス-カリニ肺炎の治療を必要とする患者におけるニューモシスティス-カリニ肺炎の治療方法を開示する。この方法は、治療に有効な量のビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル］メタン、1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル］ブタンまたは薬剤学的に許容可能なそれらの塩を患者に投与することから成る。本治療方法を実施するための製薬製剤と新規な化合物も、ランブル鞭毛虫の駆除方法と共に開示する。

Description

【発明の詳細な説明】発明の名称ニューモシスティス-カリニ肺炎の治療方法とそのために有用な化合物本発明は、補助金番号NO1-AI 72648の国立衛生研究所からの政府援助を受けてなされた。政府は本発明に対し特定の権利を有する。発明の分野本発明は、ビスーべンズイミダゾール（bis-benzimidazole）によるニューモシスティス-カリニ肺炎の治療方法と、そのための有用な新しいビスーべンズイミダゾールに係わるものである。発明の背景米国特許No.2,277,861に示されているように、ペンタミジンは、塩酸塩の形態で、Ewins et al．によって最初に発見され、その後、Newberry et al．の米国特許No.2,410,796に示されているように、特にペンタミジンのヒドロキシ-エタンスルホン酸塩およびヒドロキシ-プロパンスルホン酸塩等の水溶性塩が開発された。前者の化合物は一般にイセチオン酸ペンタミジン（pentamidine isethion ate）と呼ばれている。イセチオン酸ペンタミジンは現在リフォメド社（LyphoMed，Inc．）により、ペンタム（Pentam）の商標で静注および筋注用として市販されており、ニューモシスティス−カリニによる肺炎の治療に使用されている。この病気は一般に“PC P”と呼ばれている。PCP患者が著しく増加していることから、イセチオン酸ペンタミジンの重要性は、最近劇的に上昇している。PCP患者数の増加は、後天性免疫不全症候群（“AIDS”）が増加したことによる不幸な結末である。現在AIDS患者の約70％がPCPに罹患している。AIDS患者のPCP発生率が高いことから、特にAIDS患者において、イセチオン酸ペンタミジンはPCPの治療に有用であるばかりでなく、予防効果もあり、PCPの発病または再発の防止または遅延にも有用であることが見いだされている。しかし、イセチオン酸ペンタミジンの副作用にその毒性がある。いくつかの死亡例は、イセチオン酸ペンタミジンを静注および筋注投与された患者における重度の低血圧、低血糖、心不整脈に起因していた。イセチオン酸ペンタミジンの毒性に対する懸念から、ペンタミジン使用による副作用を回避する、あるいは最小限にすることが可能なイセチオン酸ペンタミジンに代わる薬剤の必要性が非常に高まりつつある。発明の概要本発明の第１の側面は、治療が必要な患者におけるニューモシスティス-カリニ肺炎の治療方法に係わるものである。その治療方法は、ニューモシスティス- カリニ肺炎の治療に有効な量の式（Ｉ）（式中、R₁およびR₂は、独立して、Hおよび低級アルキルからなる群より選択されるか、或いはR₁およびR₂は共に-（CH₂）_m-を表し、この場合mは２〜４である。R₃はHまたは低級アルキルで、XはC1〜C12の直鎖または分岐、飽和または４つまでの二重結合を含む不飽和アルキルである。（例えば、置換されていないか、あるいは低級アルキルにより１回から２回置換されており、飽和あるいは２つまでの二重結合を含む不飽和の、nが１〜８の-（CH₂）_nである。））で示される化合物あるいはその薬剤学的に許容可能な塩を患者に投与することから成る。現在、望ましい化合物は、ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル〕メタンまたは1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-ベンズイミダゾリル〕ブタンまたは薬剤学的に許容可能なそれらの塩である。本発明の第２の側面は、治療が必要な患者におけるランブル鞭毛虫（Giardia Iamblia ）の駆除方法に係わるものである。該方法は、ランブル鞭毛虫の駆除に有効な量の上記式（Ｉ）で示される化合物あるいはその薬剤学的に許容可能な塩を患者に投与することから成る。現在、望ましい化合物は、トランス-1，2-ビス［5-アミジノ-2-べンズイミジアゾリル〕エテン（trans-1，2-bis（5-amidino-2 -benzimidiazolyl）ethene）または薬剤学的に許容可能なその塩である。本発明の第３の側面は、上記式（Ｉ）（式中、R₁およびR₂は共に-（CH₂）_m-を表し、この場合mは２〜４である。 R₃はHまたは低級アルキルである。 Xは-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-、-CH=CH-CH₂-CH₂-、-CH₂-CH=CH-CH₂-、-CH=CH-CH=CH- からなる群より選択され、前記のいずれの場合でも低級アルキルにより１回から２回置換されている。）で示される化合物あるいはその薬剤学的に許容可能な塩である。薬剤学的に許容可能な担体の中に、治療に有効な量のこのような化合物を含めることによって、上記に明らかにされている方法を有効に実施することのできる治療上の有効量を含む新しい薬剤を提供することができる。本発明の第４の側面は、ニューモシスティス-カリニ肺炎治療用薬剤を調製するための上記の式（Ｉ）の化合物の使用に係わるものである。本発明の第５の側面は、ランブル鞭毛虫を駆除する薬剤を調製するための上記の式（Ｉ）の化合物の使用に係わるものである。本発明の前記およびその他の目的および内容は、下記に詳細に説明されている。発明の詳細な説明ここに使用されている“低級アルキル”という言葉は、メチル、エチル、、プロピル、ブチル、イソプロピル、第二級ブチル、第三級ブチル等のC1からC4の直鎖または分岐アルキルを意味する。中でもメチルおよびエチルが望ましい。一般に本発明の方法により治療される対象は人間である。上述のように、本発明は下記に更に詳細に検討されるエアロゾル、経口および非経口投与用の担体中に、前述の式Ｉの化合物または薬剤学的に許容可能なその塩を含む薬剤処方を提供する。また、本発明は、凍結乾燥され、薬剤学的に許容可能な筋注または静注投与用処方を調製するために解凍できる新しい化合物またはその塩も提供する。明らかに、その使用が本発明の範囲内となる特定の化合物の治療有効量は、化合物毎に、また患者毎に多少差があり、患者の状態と投与経路によっても左右される。一般的な提案としては、0.1〜約20mg/kgの投与量が治療効果を有し、経口および／またはエアロゾル投与の場合には、更に高投与量を用いることのできる可能性が高い。高投与量における毒性の問題により、静注投与量は、例えば約10 mg/kgまでに制限されることがある。重量は全て活性基剤に基づき、塩が使用されている場合も同様である。典型的には、約0.56mg/kgから約5mg/kgの投与量が用いられる。治療期間は通常、２〜３週間にわたり１日１回、あるいはニューモシスティス-カリニ肺炎が本質的に抑制されるまでである。低頻度の低投与量投与は、感染の再発を予防または減少させるために使用できる。本方法に従って、式Ｉの化合物、または薬剤学的に許容可能なその塩を、固体として経口投与または吸入投与することができる。あるいは溶液、懸濁液、エマルジョンとして筋注または静注投与することができる。代わりに、該化合物または塩は、リポソーム懸濁液として、吸入、静注または筋注することもできる。吸入投与される場合には、該化合物または塩は、粒子サイズが約0.5〜約５ミクロン、望ましくは約１〜約２ミクロンの固体粒子群または小滴群の形態を取らなくてはならない。ニューモシスティス-カリニ肺炎の治療方法を提供するだけでなく、AIDSのような免疫不全患者のニューモシスティス-カリニ肺炎に対する予防方法も提供する。このような患者は過去にニューモシスティス-カリニ肺炎の少なくとも１回の既応歴があるが、治療時には肺炎の徴候を示さない。ニューモシスティス-カリニ肺炎は免疫不全患者に特に打撃を与える疾患となり得るため、症状が発症してから病気を治療するよりも、ニューモシスティス-カリニ肺炎の発症を避けることが望ましい。従って、本発明は、予防効果を発揮する量の式Ｉの化合物または薬剤学的に許容可能なその塩の患者への投与から成るニューモシスティス-カリニ肺炎に対する予防方法を提供する。この方法による化合物または塩の投与形態は、ニューモシスティス-カリニ肺炎に罹患している患者を実際に治療する場合と同じである。本発明の更に有用な側面は、今までニューモシスティス-カリニ肺炎を発症したことが無い免疫不全患者において、ニューモシスティス-カリニ肺炎の初回発症に対する予防方法に係わるものである。この点では、AIDSまたはARC（AIDS関連症候群）に罹患している患者のように、免疫不全と診断された患者は、ニューモシスティス-カリニ肺炎の初回発症前でも、予防に有効な量の式Ｉの化合物または薬剤学的に許容可能なその塩を投与することにより、その感染症に罹患するのを回避または遅延することができる。該化合物または塩は、ニューモシスティス-カリニ肺炎に罹患している患者を治療する場合と同様に投与できる。本発明は、静注または筋注に適した新しい薬剤組成物も提供する。薬剤組成物は、薬剤学的に許容可能な任意の担体中に、式Ｉの化合物または薬剤学的に許容可能なその塩を含む。溶液が望ましい場合には、水溶性化合物または塩に関しては、水が最も優れた担体である。水に不溶の化合物または塩に関しては、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、またはそれらの混合物のような有機賦形剤が適切であろう。後者の場合、有機賦形剤にかなりの量の水を含んでいてもよい。次に、どちらの場合でも、溶液は適切な方法で滅菌できる。滅菌方法としては、0.22ミクロンのフィルターによる濾過が望ましい。滅菌に続いて、溶液を発熱物質を除いたガラス瓶等の適切な容器に充填することができる。勿論、充填は無菌法で行われるべきである。滅菌済の蓋をガラス瓶に被せ、必要に応じて、瓶の中身を凍結乾燥することができる。式Ｉの化合物またはその塩の他に、薬剤組成物はpH調製添加剤等の添加剤を含めることができる。特に、有用なpH調製剤は、乳酸ナトリウム、酢酸ナトリウムあるいはグルコン酸ナトリウム等の酸または塩基、または緩衝液等である。更に、組成物は殺菌剤を含めることもできる。有用な殺菌剤として、メチルパラベン、プロピルパラベン、ベンジルアルコール等がある。殺菌剤は一般に、複数回投与用に設計された瓶に製剤が入れられている場合に使用される。当然、本明細書中に明らかにされているように、本発明の薬剤組成物は、本技術において公知の技術を用いて凍結乾燥することができる。更に本発明の別の側面において、式Ｉの化合物またはその塩から成る注入可能な安定した滅菌済組成物を単位投与量ずつ密閉容器に入れたものを提供する。該化合物または塩は、凍結して提供され、薬剤学的に許容可能な適切な担体により解凍溶解され、人間に注入するための液体組成が調製される。化合物または塩の単位投与量は、典型的には約10mg〜約10gである。該化合物または塩が実質的に水に不溶の場合には、生理学的に許容可能な十分な量の乳化剤を使用して、水性担体に該化合物または塩を乳化することができる。このような有用な乳化剤の１つは、ホスファチジルコリンである。他の製薬組成物は、上記式Ｉの水に不溶の化合物またはその塩、例えば水を媒体とした乳濁液から調製することもできる。その場合、該組成物は、上記式Ｉの化合物またはその塩の所望量を乳化するために、十分な量の薬剤学的に許容可能な乳化剤を含有する。特に有用な乳化剤としては、ホスファチジルコリンやレシチンを挙げることができる。更に、本発明は式Ｉの化合物またはその塩のリポソーム製剤を提供する。リポソーム懸濁液を調製する技術は本技術において公知である。式Ｉの化合物またはその塩が水溶性塩である場合、従来のリポソーム技術を用いて、同じものを脂質小胞に取り入れることができる。このような場合、化合物または塩が水溶性であるため、化合物または塩は、リポソームの親水性の中心部内すなわち核内に実質的に取り込まれる。使用される脂質層は、従来の組成のいずれでも使用でき、コレステロールを含んでいても含んでいなくてもよい。対象となっている化合物または塩が水に不溶の場合も、従来のリポソーム形成技術を使用して、リポソームの構造を形成する疎水性の脂質の２つの層の中に実質的に塩を取り込むことができる。どちらの場合でも、調製されたリポソーム製剤は、標準的な音波破砕およびホモジェネート技術を使用してサイズを縮小することができる。当然、式Ｉの化合物またはその塩を含むリポソーム製剤は、水等の薬剤学的に許容可能な担体によって解凍してリポソーム懸濁液を再生するために、凍結することができる。エアロゾルとしての吸入投与に適した製薬製剤も提供される。これらの製剤は、目的の式Ｉの化合物もしくはその塩、または化合物もしくは塩の固体粒子群の溶液または懸濁液から成る。目的の製剤を小さな容器に入れ、噴霧化することができる。噴霧化は、圧縮空気によって、あるいは超音波エネルギーによって、化合物または塩から成る液体小滴または固体粒子群を形成することによって達成される。液体小滴または固体粒子の粒子サイズは、約0.5〜約５ミクロンの範囲である。固体粒子は、微細化（micronization）のような本技術において知られている適切な方法のいずれによっても、式Ｉの化合物またはその塩を処理することによって得ることができる。固体粒子または小滴のサイズは、約１〜約２ミクロンであるのが最も望ましい。この点に関しては、この目的を達成するために、市販の噴霧器が利用できる。エアロゾルとして投与するのに適した製薬製剤が液体である場合、製剤は、水から成る担体中に水溶性化合物の式Ｉの化合物またはその塩を含むのが望ましい。製剤の表面張力を十分小さくするために、界面活性剤を含めることができ、噴霧化される時に、目的のサイズの範囲内で小滴を形成することができる。本明細書で明らかにされているように、本発明は水溶性と水に不溶の化合物と塩を提供している。本明細書における「水溶性」という言葉は、約50mg/mL以上の量が水に溶解できる組成を意味する。本明細書における「水に不溶」という言葉は、水への溶解度が約20mg/mL未満の組成を意味する。応用例によっては、水溶性化合物または塩が望ましく、また別の応用例に関しては、水に不溶の化合物または塩が望ましい場合もある。上記の式（Ｉ）の化合物の具体例としては以下が挙げられるが、それらに限定されない。（１）ビス［5-アミジノ-2-べンズイミダゾリル〕メタン（２）ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル〕メタン（３）1，2-ビス［5-アミジノ-2-べンズイミダゾリル〕エタン（４）1，2-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-ベンズイミダゾリル〕エタン（５）1，3-ビス［5-アミジノ-2-べンズイミダゾリル〕プロパン（６）1，3-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル〕プロパン（７）1，4-ビス［5-アミジノ-2-べンズイミダゾリル〕プロパン（８）1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル〕ブタン（９）1，8-ビス［5-アミジノ-2-ベンズイミダゾリル〕オクタン（10）トランス-1，2-ビス［5-アミジノ-2-べンズイミダゾリル〕エテン（11）1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル〕１−ブテン（12）1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル〕2-ブテン（13）１，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル〕1-メチルブタン（14）１，4-ビス［５−（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル〕2-エチルブタン（15）1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル〕1-メチル-1 -ブテン（16）1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル〕2，3-ジエチル-2-ブテン（17）1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）−2−べンズイミダゾリル〕1，3-ブタジエン（18）1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル〕2-メチル-1 ，3-ブタジエン前記化合物に類似している式（Ｉ）の化合物は、2-イミダゾリル基を2-ピリミジル基に置換することによって生成することができる。本発明で使用される化合物は、公知であるか、あるいは本技術に精通している者にとって公知の技術に準じて（例えば、米国特許No.4,933,347を参照）、特に下記に明らかにされている方法により、調製することができる。本明細書で明らかにされているように、本発明で使用される化合物は、薬剤学的に許容可能な塩として存在することが可能である。そのような塩には、グルコン酸塩、乳酸塩、酢酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、ホウ酸塩、硝酸塩、硫酸塩、塩酸塩等が含まれる。本発明の塩は、一般に２倍等量のアミジン塩基化合物を目的の酸と溶液中で反応させて調製される。反応終了後、塩が溶けない溶媒を適量加え、溶液から塩を晶析させる。上記に示されている式（Ｉ）の化合物によるランブル鞭毛虫の駆除方法は、本質的に上記と同じ方法でなされ、ランブル鞭毛虫を駆除するための式（Ｉ）の化合物の製薬製剤は本質的に上記と同様にして調製される。本発明は、以下の限定的でない実施例により更に詳細に説明される。実施例１1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル〕ブタン（化合物８）の合成 p-シアノアニリンを無水酢酸でアセチル化し、収率90％のN-アセチル化中間体を生成する。標準的な条件を用いて中間体をニトロ化し、収率50％の４−シアノ -2-ニトロアニリンを生成する。Par水素添加物質に溶解された10％Pd-Cによるニトロ基の還元により、2-アミノ-4-シアノアニリンが85％の収率で得られた。エタノールとべンゼンの中で1，4-ジシアノブタンからジ-イミデートが形成され、塩酸で飽和した。反応はR．Tidwell et al.，J．Med．Chem．21:613-623（1978 ）に記載されている手順に従って実施され、両方のニトリル基をイミデート部分に変換するのに24時間かかった。 2.56g（9.4mmo1）のジ-イミデートと2.5g（18.8mmo1）の2-アミノ-4-シアノアニリンを酢酸に入れ、加熱し、24時間還流させた。反応混合物を室温に冷却し、酢酸を減圧除去した。残留物を水酸化アンモニウムでアルカリ性にした（pH＝7. 5）。固体の物質を濾過して集め、水で洗浄し、エタノールに溶解した。エタノール溶液をHClで酸性にし、濾過して固体を収集した。固体を熱いメタノールで洗浄し、1.9gの最終中間体を白色固体として得た（収率4.9％、MP（融点）＝335 ℃）。高圧液体クロマトグラフィーにより、生成物の純度が97％以上であることが示された。生成物は、NMRと元素分析により確認された（理論値：Ｃ＝58.12、 H＝4.39、N＝20.34；実測値：C＝58.20、H＝4.36、N＝20.34）。最終中間体（1.8g、4.4mmol）をジオキシム（110ml）とメタノール（25m1）に懸濁し、該懸濁液を８℃に冷却した。温度を８℃に維持しながら、冷却された混合物をHClガスで１時間飽和させた。混合を中止し、赤外線スペクトルにニトリルピークが現れなくなるまで、室温で撹拌した（３日間）。反応混合物を氷浴で冷却し、ジエチルエーテルで生成物を沈澱させた。固体をN₂下に濾過し、無水エタノール（100m l）に懸濁した。エチレンジアミン（1.76ml、1.50g、26.4mmol）を懸濁液に加え、混合物を2.5時間加熱して還流させた。エタノールを除去し、残留固体をジエチルエーテルで洗浄した。固体を収集し、希釈塩酸に溶解した。溶液は炭で脱色し、沈澱が更に形成されなくなるまでNa₂CO₃を添加した。固体を収集し、乾燥させ、1.5gの生成物を得た（収率60％、MP＝319〜321℃）。HPLCにより生成物が97 ％の純度であることが明らかにされた。構造は、NMRと元素分析により確認された（理論値：C＝50.36、H＝5.28、N＝19.58；実測値：C＝50.16、H＝6.32、N＝1 9.39）。実施例２ビス［5-（アミジノ-2-べンズイミダゾリル］メタン（化合物２）と 1，3-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル］プロパン（化合物６）の合成これらの化合物は、適切な出発原料を用いて上記の実施例１に記載されている方法と本質的に同じ方法で合成された。物理的データが下記の表ｌに記載されている。実施例３ Sprague-Dawleyラットにおけるニューモシスティス-カリニの誘発と治療バリアー（barrier）内で飼育され、ウィルスがいないことは証明されていない体重150〜200gの雄のSprague-Dawleyラットをヒルトップ-ラボラトリーズ社（ Hillt op Laboratories）から入手し、別々に飼育した。動物は、低タンパク質食（８％）（ICNバイオメディカルズ社、シンシナティー市、オハイオ州）で飼育を開始し、テトラサイクリン（tetracycline）（0.5mg/ml）とデキサメタゾン（dexa methasone）（１．0μg/ml）を含む水を飲ませた。投与は、次の８週間行われ、水分摂取量を毎日監視し、毎週動物の体重を測定した。動物が水分を摂取しすぎた時は、コルチゾン（cortisone）による毒性を避けるために、飲用溶液を希釈した。６週目の最初に、動物を各群８匹以上に群分けし、被験化合物を毎日尾静脈に指示された投与量で次の14日間静注するか、あるいは次の14日間胃管による強制栄養法により経口投与した。全ての動物を８週目の終わりにクロロホルム吸入により屠殺し、10％ホルマリンで右肺をin situで膨張させ、組織学的検査のために固定した。固定された肺組織から縦方向の切片を作製し、ニューモシスティス-カリニの嚢胞の壁を選択的に染色するグロコットのメタナミン銀（Grocott's methenamine silver）（GM S）染色により染色した。染色された切片に記号を付け、２人の検査官が盲検法で各切片を採点した。切片は、改変された公知の手順（P．Walzer et al.，Anti microb．Agents．Chemother．32：896-905（1988））に従って、読み取られ、次のように採点された。0.5＝十分検討された２枚の切片について計数された嚢胞が10未満である。１＝10％未満の肺組織に病変を有する散在性の嚢胞が認められる。２＝顕著の限局性病変を有する散在性の嚢胞が認められ、肺組織の10〜25％に病変が認められる。３＝多数の顕著な限局性病変部分を有する散在性の嚢胞が認められ、肺組織の26〜50％に病変が認められる。４＝多数の非常に顕著な病変部分が組織全体に認められる嚢胞があり、肺組織の50％以上に病変が認められる。左肺の重量を測定し、#60のワイアーメッシュにより粉砕し、カチオンを含まないハンクス液（Hank’s balanced salts）（HBSS-）と10mMβ-メルカプトエタノール（β-Me）に1：10（w/v）で懸濁した。HBSS-とβ-Meの中に1：10の濃度で希釈された５μ １の肺ホモジェネートをスポットしてスライドを作製し、風乾した。スライドをクレシルバイオレットで染色し、盲検法で嚢胞を計数した。嚢胞/g（元の肺組織重量）の数が計算され、食塩水を投与された対照群に対するパーセントとして報告された。被験化合物の毒性は、10mg/kgまたは次に高い可溶性または非毒性投与量で以下の基準により評価された。０＝局所的、臨床的または組織学的毒性が認められない。＋＝被験投与量で全ての動物が生存しており、症状は観察されず、低血圧の徴候は最小限か、あるいは全く認められず、やや過剰な体重減少が認められ、および／または局所毒性の軽度の徴候が注入部位に認められ、組織病理学的所見は認められなかった。＋＋＝被験投与量で全てまたは大部分の動物が生存しており、低血圧の顕著な徴候が認められ、全ての動物に他の臨床的副作用および／または幾つかの組織病理学的所見が認められ、多くの動物は注入部位に重度の病変が認められた。＋＋＋＝単回投与後に急性毒性が認められ、重症の低血圧に匹敵する症状が認められ、および／または複数回投与後には動物の健康が急激に低下し、動物の５０％未満が死亡し、スクリーニング投与量を減少させる結果となった。＋＋＋＋＝動物の５０％以上が死亡し、スクリーニング投与量を減少させる結果となった。食塩水投与群およびペンタミジン投与群と比較する際、カイ二乗適合度の検定を用いて、各被験群のP値を計算した。StatView512＋ソフトウェアパッケージ（ブレインパワー社、カラバサス、カリフォルニアナ旧を使用して、マッキントッシュIIコンピューターで統計学的分析が行われた。下記の表２に示されている式（Ｉ）の化合物に関するデータは、これらが有効な化合物であることを示している。化合物８は、ペンタミジンよりも抗-PCP剤として４倍以上強力で、親化合物よりも毒性は有意に低かった。化合物８は、25mg /kgで毎日経口投与された場合に、PCPに対し多少の活性を示した。実施例４ランブル鞭毛虫に対するビスーべンズイミダゾールの in vitroにおける生物活性ランブル鞭毛虫は、米国および世界中の下痢疾患の重要な原因である。一般的には、R．Tidwell et al．の米国特許No．4,963,589を参照されたい。この実施例は、ランブル鞭毛虫を駆除するための化合物の活性を測定するためになされた。これらの実験は公知の技術に従って実施された（R．Tidwell et al．の米国特許4,963,589を参照）。簡単に述べると、ランブル鞭毛虫、WB株（ATCC#30957）を、熱により不活性化された10％胎児ウシ血清と50μg/mlのアンピシリンと50μ g/mlの硫酸ゲンタマイシンを含むフィルター滅菌されたカイスターの培地（Keis ter’smedium）で50％初期指数的成長相まで成長させた。分析培地は、改変されたカイスターの培地と熱により不活性化された５％胎児ウシ血清を併せたものであった。分析手順は、以下のステップに従って実施された。 (1) （０時間）分析培地に懸濁されたジアミジンの連続希釈液を、96ウェルのミクロタイタープレートに２列ずつに調製し、2.5×10^４個の栄養型を各ウェルに加えた。プレートを嫌気的チャンバーに入れ、窒素ガスを供給し、37℃でインキュベーションした。 (2) （24時間）1.5〜２μCi/ウェルとなるように［メチル-³H］-チミジン（１〜10Ci/mmol）を加えた。 (3) （42時間）マルチマッシュ型細胞採取器により採取された細胞をガラスミクロファイバーペーパーに移す。洗浄し、乾燥させたフィルターをシンチレーションカウンターを用いて計数し、［³H］-チミジンの取り込み量を測定する。 (4) ［³H］-チミジンの取り込み量に関するデータを、非直線回帰法により論理的な対数濃度反応に当てはめ、［³H］-チミジンの取り込みを50％抑制するために必要な薬物濃度を決定した。データが下記の表３に示されている。これらのデータは、この一連の化合物がランブル鞭毛虫の駆除に有効であることを示している。前記の実施例は、本発明を説明するためのものであって、限定するものと考えるべきではない。本発明は、以下の請求の範囲により規定され、請求の範囲と同等のものはその中に含められる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ダイクストラ，クリスティン・シーアメリカ合衆国、27516 ノース・キャロライナ、チャペル・ヒル、ベニントン・ドライヴ 203 (72)発明者ホール，ジェイムズ・イーアメリカ合衆国、27514 ノース・キャロライナ、チャペル・ヒル、スプリングヴュー・トレイル 2440

Claims

【特許請求の範囲】１．ニューモシスティス-カリニ肺炎の治療に有効な量の式（Ｉ）（式中、R₁およびR₂は、各々独立して、Hおよび低級アルキルからなる群より選択されるか、またはR₁およびR₂は共に-（CH₂）m-を表し、この場合mは２〜４である。R₃はHまたは低級アルキルである。XはC1〜C12の直鎖または分岐の、飽和または４つまでの二重結合を含む不飽和アルキルである。）で示される化合物あるいはその薬剤学的に許容可能な塩を患者に投与することから成る、そのような治療が必要な患者のニューモシスティス-カリニ肺炎の治療方法。２．上記患者がニューモシスティス-カリニ肺炎に罹患している請求項１記載の方法。３．上記患者がニューモシスティス-カリニ肺炎を発症する危険性を有し、予防に有効な量の上記化合物が投与される請求項１記載の方法。４． R₁、R₂、およびR₃がＨである請求項１記載の方法。５． R₁とR₂が共に-CH₂-CH₂-を表し、R₃がHである請求項１記載の方法。６． Xが-（CH₂）_n-で、この場合ｎが１〜８であり、置換されていないか、または低級アルキルにより１回から２回置換されており、飽和されているか、または飽和されておらず、２個までの二重結合を含む請求項１記載の方法。７． Xが-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-、-CH=CH-CH₂-CH₂-、CH₂-CH=CH-CH₂-、-CH=CH-CH=C H-からなる群より選択され、前記のいずれの場合でも低級アルキルで１回から２回置換されている請求項１記載の方法。８．上記式（Ｉ）の化合物がビス［5-（2-イミダゾリル）-2-ベンズイミダゾリル］メタンまたは薬剤学的に許容可能なその塩である請求項１記載の方法。９．上記式（Ｉ）の化合物が1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル］ブタンまたは薬剤学的に許容可能なその塩である請求項１記載の方法。１０．式（Ｉ）（式中、R₁およびR₂は共に-（CH₂）_m-を表し、この場合ｍは２〜４である。R₃は Hまたは低級アルキルである。Xは-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-、-CH=CH-CH₂-CH₂-、CH₂-CH =CH-CH₂-、-CH=CH-CH=CH-からなる群より選択され、前記のいずれの場合でも低級アルキルで１回から２回置換されている。）で示される化合物および薬剤学的に許容可能なその塩。１１． 1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル］ブタン、 1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル］1-ブテン、 1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル］2-ブテン、 1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル］1-メチルブタン、 1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズゾイミダゾリル］2-エチルブタン、 1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル］1-メチル-1 -ブテン、 1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル］2，3-ジエチル-2-ブテン、 1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル］1，3-ブタジエン、 1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル］2-メチル-1 ，3-ブタジエン、および薬剤学的に許容可能なそれらの塩からなる群より選択される請求項１０記載の化合物。１２． 1，4-ビス［5-（2-イミダゾリル）-2-べンズイミダゾリル〕ブタンおよび薬剤学的に許容可能なその塩からなる群より選択される請求項１０記載の化合物。１３．薬剤学的に許容可能な担体に治療に有効な量の請求項１０記載の化合物を含む製薬組成物。１４．ランブル鞭毛虫の駆除に有効な量の式（Ｉ）（式中、R₁およびR₂は、各々独立して、Hおよび低級アルキルからなる群より選択されるか、または、R₁およびR₂は共に-（CH₂）_m-を表し、この場合ｍは２〜４である。R₃はHまたは低級アルキルである。XはC1〜C12の直鎖または分岐の、飽和または４つまでの二重結合を含む不飽和アルキルである。）で示される化合物またはその薬剤学的に許容可能な塩を患者に投与することから成る、そのような治療が必要な患者のランブル鞭毛虫の駆除方法。１５． R₁、R₂、およびR₃がHである請求項１４記載の方法。１６． R₁とR₂が共に-CH₂-CH₂-を表し、R₃がHである請求項１４記載の方法。１７． Xが-（CH₂）_n-で、この場合nが１〜８であり、置換されていないか、または低級アルキルにより１回から２回置換されており、飽和されているか、または飽和されておらず、２個までの二重結合を含む請求項１４記載の方法。１８． Xが-CH₂-である請求項１４記載の方法。１９． Xが-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-、-CH=CH-CH₂-CH₂-、-CH₂-CH=CH-CH₂-、-CH=CH-C H=CH-からなる群より選択され、前記のいずれの場合でも低級アルキルで１回から２回置換されている請求項１４記載の方法。２０．上記式（Ｉ）の化合物がトランス-1，2-ビス［5-アミジノ-2-べンズイミダゾリル］エタンまたは薬剤学的に許容可能なその塩である請求項１４記載の方法。