JPH08333214A

JPH08333214A - 抗ウイルス・菌剤

Info

Publication number: JPH08333214A
Application number: JP7168219A
Authority: JP
Inventors: Yoichi Oiso; 大磯洋一
Original assignee: Tayca Corp
Current assignee: Tayca Corp
Priority date: 1995-06-09
Filing date: 1995-06-09
Publication date: 1996-12-17

Abstract

(57)【要約】【構成】構成糖が、Ｄ−グルクロン酸、Ｌ−ラムノー
ス、Ｄ−ガラクトースおよびＤ−グルコースの４種から
なり、その構成モル比が、Ｄ−グルクロン酸：Ｌ−ラム
ノース：Ｄ−ガラクトース：Ｄ−グルコース＝０．８〜
１．２：２．４〜３．６：０．８〜１．２：０．８〜
１．２である多糖類の抗菌性金属塩を有効成分とする抗
ウイルス・菌剤。【効果】安全性並びに生分解生がより高い微生物産生
多糖類の抗菌性金属塩より成る抗ウイルス・菌剤が提供
される。該抗ウイルス・菌剤は、これらの性質を具備す
ることにより、特に、医薬品分野における抗ヘルペスウ
イルスホミニス（ＨＶＨ）剤、抗ヒトサイトメガロウイ
ルス（ＨＣＭＶ）剤、抗白癬剤、抗歯垢剤、創傷、火傷
時の微生物感染予防・治療剤など、化粧品分野における
抗フケ剤、にきび予防・治療剤、防腐剤など、農業、林
業における病害防除剤などとして優れた効果を示す。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、特定多糖類を有効成分
とする抗ウイルス・菌剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来より、銀、銅、亜鉛、錫、水銀、
鉛、鉄、コバルト、ニッケル、マンガン、ヒ素、アンチ
モン、ビスマス、バリウム、カドミウム、クロムなど
が、抗菌性金属として知られており、種々の形態で抗菌
剤などとして使用されている。

【０００３】具体的な例としては、抗ウイルス活性を有
するヘパリン亜鉛塩（特公昭６２−２５１２６号公
報）、同じく抗ウイルス活性を有するデキストラン硫酸
亜鉛塩（特公昭６３−４８８４９号公報）、病原菌に対
する抗菌活性を有するヒアルロン酸重金属塩（特表昭６
３−５０２６７０号公報）などが挙げられる。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上述の
抗菌性金属イオンを対イオンとする化合物には、アニオ
ン部分、あるいは、生産経路に次に示した問題を抱えて
いる。（１）ヘパリンは抗凝血活性を有しており、患部が出
血している場合などには使用することができない。（２）ヒアルロン酸は生産性の有利さから、動物由来
のものから微生物由来のものへと移行してきたが、ヒア
ルロン酸を生産する微生物は何れも連鎖球菌で、人間や
家畜に寄生し、病原性を持つものが多く、医薬品、化粧
品、食品分野などの高い安全性が求められる分野での使
用は、慎重に成らざるをえない。

【０００５】従って、医薬品分野においても使用が制限
されることなく、また、生産径路上においても何ら安全
性に問題のない、抗菌性金属イオンを対イオンとするこ
とができる物質が求められている。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明の目的は、優れた
抗ウイルス・菌性能と人体に対する安全性を有する新規
な抗ウイルス・菌剤を提供することにある。本発明者ら
は、前記の課題を解決すべく鋭意検討した結果、病原性
細菌ではないクレブシエラ属の微生物が生産する、安全
性の高い多糖類が、抗菌性金属イオンを対イオンとして
含有させることが可能であり、優れた抗ウイルス・菌性
をするが抗凝血性を示さないことを見出し、本発明に到
達したものである。

【０００７】すなわち本発明は、構成糖が、Ｄ−グルク
ロン酸、Ｌ−ラムノース、Ｄ−ガラクトースおよびＤ−
グルコースの４種からなり、その構成モル比が、Ｄ−グ
ルクロン酸：Ｌ−ラムノース：Ｄ−ガラクトース：Ｄ−
グルコース＝０．８〜１．２：２．４〜３．６：０．８
〜１．２：０．８〜１．２である多糖類の抗菌性金属塩
を有効成分とすることを特徴とする抗ウイルス・菌剤で
ある。

【０００８】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
抗ウイルス・菌剤として用いられる多糖類は、上述の特
徴の他に、以下のような特性を有しているのが好まし
い。（１）分子量：ゲルろ過クロマトグラフィーを用いて測
定した分子量が、約１×１０³〜１０×１０⁶である。

【０００９】（２）多糖類の種類：酸性ヘテロ多糖類。

【００１０】（３）性状：白色繊維状（凍結乾燥物）

【００１１】（４）溶解性：水、希酸、希アルカリに対
して可溶、メタノール、エタノール、アセトンに対して
は不溶。

【００１２】（５）赤外吸収スペクトル：３４００ｃｍ
^-1付近、１６２０ｃｍ^-1付近、１１００ｃｍ^-1付近、１
２５０ｃｍ^-1付近、２９５０ｃｍ^-1付近のそれぞれに赤
外吸収のピークが認められる。

【００１３】（６）呈色反応：フェノール硫酸法、カル
バゾール硫酸法、およびｍ−フェニルフェノール法のい
ずれも陽性。

【００１４】本発明で使用される多糖類は、好ましく
は、各構成糖残基の結合様式とその構成モル比が下記の
通りである。Ｒｈａ１：Ｌ−ラムノースの結合様式が（１→結合Ｒｈａ２：Ｌ−ラムノースの結合様式が（１→２）結合ＧｌｃＵＡ：Ｄ−グルクロン酸の結合様式が（１→３）
および（１→４）結合Ｇａｌ：Ｄ−ガラクトースの結合様式が（１→３）結合Ｇｌｃ：Ｄ−グルコースの結合様式が（１→２）結合
と略記すると、Ｒｈａ１：Ｒｈａ２：ＧｌｃＵＡ：Ｇａｌ：Ｇｌｃ＝
０．８〜１．２：１．６〜２．４：０．８〜１．２：
０．８〜１．２：０．８〜１．２。

【００１５】本発明で使用される多糖類の分子量、構成
糖の種類、構成比、結合様式などは、各種クロマトグラ
フィー分析、メチル化分析、スミス分解や比旋光度の測
定などにより特定が可能である。具体的には、以下のよ
うな特定方法が例示される。

【００１６】分子量の測定：たとえば、旭化成社製「Ａ
ｓａｈｉｐａｋＧＦＡ−７ＭＦ」をカラムとするＧＰ
Ｃモードの高速液体クロマトグラフィーを使用し、０．
１Ｍ硝酸ナトリウム水溶液を移動相とし、分子量既知の
プルランを標準サンプルとして作成した分子量−保持時
間標準曲線を使用して測定する。

【００１７】構成糖およびその構成比：上記多糖類、お
よび上記多糖類のウロン酸残基におけるカルボキシル基
を還元した多糖類に対し、２Ｍトリフルオロ酢酸（ＴＦ
Ａ）を使用して、１００℃、６時間の条件下に酸加水分
解を行って、アルジトールアセテートに誘導する。得ら
れた各誘導体について、ＥＣＮＳＳ−Ｍコートカラム
（和光純薬社製、「ＧａｓｃｈｒｏｍＱ」）を使用し
てガスクロマトグラフィー分析を行う。本発明で使用す
る多糖類を用いた場合には、結果として、Ｌ−ラムノー
ス、Ｄ−ガラクトースおよびＤ−グルコースによって得
られる化合物と同一の化合物が検出されるが、さらに、
上記還元多糖類との比較により、本発明で使用する多糖
類の構成糖は、Ｄ−グルクロン酸、Ｌ−ラムノース、Ｄ
−ガラクトースおよびＤ−グルコースであると判定で
き、その構成モル比も決定することができる。

【００１８】本発明で使用する多糖類は、微生物とし
て、たとえば、特願平７−９３１００号記載のクレブシ
エラ・オキシトカＴＮＭ３株（通商産業省工業技術院生
命工学工業技術研究所において、受託番号「ＦＥＲＭ
ＢＰ−４６６９」として、平成６年５月１８日から国際
寄託され保管されている）またはその変異株、あるい
は、カーボハイドレイト・リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄ
ｒａｔｅＲｅｓｅａｒｃｈ）第１５７巻、第１３〜２
５頁（１９８６年）に記載されているクレブシエラＫ１
９株による微生物培養により、その培養物から採取され
る。上記変異株は、紫外線、Ｘ線等の放射線、または、
エチルメタンスルホン酸（ＥＭＳ）、Ｎ−メチル−Ｎ’
−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ）などの
化学的突然変異誘発物質のような公知の突然変異誘発手
段により発生させることができる。上記多糖類の生産性
の有無は菌株の培養液を分析することにより容易に判別
できる。

【００１９】以下、本発明で使用する多糖類の製造方法
について、クレブシエラ・オキシトカＴＮＭ３株を使用
した場合を基に説明する。

【００２０】上記菌株により得られる多糖類は、酸性ヘ
テロ多糖であり、次の式で表される構造の主要繰り返し
単位を有する。

【００２１】

【化１】

【００２２】本発明で用いる多糖類を製造する場合の、
微生物を培養するための培地としては、クレブシエラ
（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）に属する微生物が生育でき、
上記多糖類を生産する炭素源、窒素源、無機塩類及び微
量栄養源を適量含有するものであれば、特に制限されな
い。

【００２３】そして、炭素源としては、グルコース、ラ
クトース、マルトース、キシロース、マンニット、サッ
カロース、ラムノース、アラビノース、トレハロース、
ラフィノースなどが使用される。

【００２４】窒素源としては、硝酸塩、アンモニウム
塩、尿素などの合成化合物、ポリペプトン、コーンステ
ィープリカー、酵母エキス、肉エキス、脱脂大豆抽出
物、ペプチド、アミノ酸などの天然有機物が使用され
る。

【００２５】無機塩類としては、リン酸塩、カリウム
塩、硫酸塩、マグネシウム塩などが使用される。培地に
は、必要に応じ、鉄塩、カルシウム塩、マンガン塩など
を添加することができる。また、微量栄養源としては、
酵母エキス、各種ビタミン類などが使用される。

【００２６】培地の状態は、固体でも液体でも構わな
い。液体培地を使用する場合には、静置培養でもよい
が、振盪培養、通気撹拌培養の方がより高収量に本発明
で用いる多糖類を得ることができる。培養時のｐＨは、
微生物が生育でき、上記多糖類を生産し得るｐＨであれ
ば特に制限されないが、通常は４〜８のｐＨが適切であ
る。培養温度についても、特に制限されないが、通常は
２０〜３５℃が適切である。培養時間は、本発明で用い
る多糖類の生産が最大に達する期間が選ばれるが、通常
は１〜７日が適切である。

【００２７】上記の培養方法で得られた培養物から、本
発明で用いる多糖類を採取する方法としては、従来公知
の方法を採用することができる。たとえば、まず、遠心
分離やろ過などにより、培養物から菌体を除去した後、
得られた培養液にメタノール、エタノール、イソプロパ
ノール、アセトンなどの有機溶媒を加えて沈殿を生じさ
せる。次いで、沈殿物を水に溶解させた後、水に対して
透析を行ない、通風乾燥、熱風乾燥、噴霧乾燥、ドラム
乾燥、減圧乾燥、凍結乾燥などの方法により、透析内液
を乾燥して多糖類を回収する。

【００２８】上記の採取方法の他に、限外ろ過により、
上記培養液から多糖類以外の成分を除去し、得られた濃
縮液を上述の乾燥工程に供する方法を採用してもよい。
さらに、必要に応じ、通常の多糖類の精製法に従って精
製することにより、高純度精製品を得ることもできる。
精製法としては、イオン交換、ゲルろ過、アフィニティ
ー等の各種のカラムクロマトグラフィー、４級アンモニ
ウム塩による沈殿や塩析、有機溶媒による沈殿などが採
用される。

【００２９】上記で製造される多糖類の重合度は、製造
時の培地組成、採取法などの条件を調節することによっ
て変化させることができる。また、トリフルオロ酢酸
（ＴＦＡ）、ギ酸、塩酸などを使用し、かつ、条件を調
節することにより、採取品や精製品を加水分解すること
ができる。さらに、具体的な方法として、加圧下での加
温や、超音波処理などを行って重合度を変化させても、
好適な結果が得られる。従って、上記多糖類の分子量
は、約１×１０³〜１０×１０⁶の範囲で自由に調節す
ることが可能である。

【００３０】そして、上述した微生物培養により、その
培養物から採取される本発明で用いる多糖類は、酸性ヘ
テロ多糖類であり、その構成糖は、Ｄ−グルクロン酸、
Ｌ−ラムノース、Ｄ−ガラクトースおよびＤ−グルコー
スの４種からなり、その構成モル比は、Ｄ−グルクロン
酸：Ｌ−ラムノース：Ｄ−ガラクトース：Ｄ−グルコー
ス＝０．８〜１．２：２．４〜３．６：０．８〜１．
２：０．８〜１．２の範囲にある。

【００３１】このようにして得られる、本発明で用いる
多糖類は、抗菌性の金属と組み合わせることにより抗ウ
イルス・菌活性を示すが、抗凝血性は示さない。また、
本発明で用いる多糖類は抗菌性金属塩にしても水溶性で
あるので、種々の抗菌性金属を担持して各分野で使用さ
れている抗菌性ゼオライトや、抗フケ剤として知られて
いる２−メルカプトピリジン−Ｎ−オキシド亜鉛塩（Ｚ
ｐｔ）などの水不溶性抗菌剤のように、溶液中で使用す
る際に分散剤などの添加を必要としない。

【００３２】本発明の抗ウイルス・菌剤の具体的な用途
としては、従来から抗菌性金属によって抗ウイルス・菌
作用を受けることが知られているウイルス、微生物の増
殖を阻害することに基づく用途を挙げることができ、医
薬品分野における抗ヘルぺスウイルスホミニス（ＨＶ
Ｈ）剤、抗ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）剤、
抗白癬剤、抗歯垢剤、創傷、火傷時の微生物感染予防・
治療剤など、化粧品分野における抗フケ剤、にきび予防
／治療剤防腐剤など、農業、林業分野における病害防除
剤などとしての用途が可能である。

【００３３】

【実施例】本発明を実施例によりさらに詳細に説明する
が、本発明は、その要旨を越えない限り、以下の実施例
に限定されるものではない。

【００３４】製造例１５００ｍｌ容の坂口フラスコに、表１に示す組成の培地
を１００ｍｌ入れ、１２１℃で２０分間湿熱滅菌後、表
１に示す組成の培地を用いて試験管で２日間液体振盪培
養していたクレブシエラ・オキシトカ（Ｋｌｅｂｓｉｅ
ｌｌａｏｘｙｔｏｃａ）ＴＮＭ３株（ＦＥＲＭＢＰ
−４６６９）を、一白金耳分植菌し、振幅数毎分１１０
ストローク、２８℃で１日間レシプロ振盪培養を行っ
た。

【００３５】

【表１】培地組成（重量％）グルコース２．０ポリペプトン０．１リン酸一水素カリウム０．１５硫酸マグネシウム・７水和物０．０５ビタミンＢ₁ ０．０００５ビオチン０．０００００６パントテン酸カルシウム０．００１ニコチンアミド０．０００５ｐＨ６．５

【００３６】

【表２】培地組成（重量％）グルコース４ポリペプトン０．２リン酸−水素カリウム０．１５硫酸マグネシウム・７水和物０．０１ビタミンＢ₁ ０．０００５ビオチン０．０００００６パントテン酸カルシウム０．００１ニコチンアミド０．０００５

【００３７】表２に示す組成の培地８リットルを入れて
上記と同様の滅菌を行った１５リットル容のジャーファ
ーメンターに、得られた培養液４００ｍｌを接種し、温
度２８℃、通気量５リットル／ｍｉｎの条件下で、５Ｍ
水酸化ナトリウム水溶液を用いて系中のｐＨを７に保ち
ながら、９５時間通気撹拌培養を行った。なお、回転数
は、培養２４時間目までは２００ｒｐｍ、それ以降３３
時間目までは４００ｒｐｍ、それ以降９５時間までは７
００ｒｐｍとした。

【００３８】得られた培養物のｐＨを１０％硫酸で４．
５に調整し、１２１℃で６０分間湿熱滅菌後、遠心分離
により菌体を除去した。得られた培養上清分について、
残留培地成分などの多糖類以外の成分が除去されるま
で、クロスフロー方式の限外ろ過を繰り返した。限外ろ
過には、東ソー社製、限外ろ過システム「ＵＦ−ＬＭＳ
II」（分画分子量：３×１０⁶）を使用した。限外ろ過
膜を透過しなかった濃縮液を凍結乾燥し、培地１リット
ル当たり、約２１ｇの単一な多糖類を得た。なお、多糖
類の単一性の確認は、ＧＰＣモードの高速液体クロマト
グラフィーを使用して行った。

【００３９】旭化成社製「ＡｓａｈｉｐａｋＧＦＡ−
７ＭＦ」をカラムとし、0.1 Ｍの硝酸ナトリウム水溶液
を移動相とした高速液体クロマトグラフィーを使用し、
上記の多糖類の分子量を測定した結果、多糖類のクロマ
トグラフのピークトップの保持時間は、分子量既知のプ
ルランを標準サンプルとして作成した分子量−保持時間
標準曲線において、分子量約1.5 ×１０⁶に相当する値
を示した。

【００４０】また、上記の多糖類、およびグルクロン酸
残基のカルボキシル基を還元した多糖類について、各構
成糖まで加水分解を行い、アルジトールアセテートに誘
導した後、ガスクロマトグラフィー分析を行った。あら
かじめ作成した検量線と各構成糖のピーク面積とから各
構成糖のモル比を求めたところ、Ｄ−グルクロン酸：Ｌ
−ラムノース：Ｄ−ガラクトース：Ｄ−グルコース＝
１：３：１：１であった。

【００４１】製造例２製造例１で得られた多糖類の１％（ｗ／ｖ）水溶液，５
００ｍｌに、ＣｕＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ，２ｇをかきまぜな
がら添加した。限外ろ過による脱塩後、凍結乾燥を行
い、ウロン酸残基の対イオンが銅イオンである多糖類を
得た。

【００４２】製造例３製造例１で得られた多糖類の１％（ｗ／ｖ）水溶液、５
００ｍｌにＺｎＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ，３ｇをかきまぜなが
ら添加した。限外ろ過による脱塩後、凍結乾燥すること
によって、ウロン酸残基の対イオンが亜鉛イオンである
多糖類を得た。

【００４３】製造例４製造例１で得られた多糖類の１％（ｗ／ｖ）水溶液，５
００ｍｌに、ＡｇＮＯ₃，２ｇをかきまぜながら添加し
た。限外ろ過による脱塩後、凍結乾燥することによっ
て、ウロン酸残基の対イオンが銀イオンである多糖類を
得た。

【００４４】安全性データ本件発明で用いる多糖類の安全性データを測定したとこ
ろ、次の結果が得られた。急性経口毒性（ラット、ＬＤ₅₀）：＞５０００ｍｇ／
ｋｇ（実際上無害）皮膚１次刺激性（Ｄｒａｉｚｅ法）：１次刺激指数
０．２（弱い刺激物）

【００４５】上記の結果より本件多糖類は、急性経口毒
性が実際上無害であり、１次刺激指数が表３から明らか
なように、ほぼ、無刺激物に近いレベルの刺激性を示す
程度であって安全性の高い物質である。

【００４６】

【表３】皮膚刺激性評価１次刺激指数（ＰＩＩ）無刺激物０弱い刺激物０＜ＰＩＩ≦２中程度の刺激物２＜ＰＩＩ≦５強い刺激物５＜

【００４７】なお、比較対象のため、食器洗い用洗剤の
原料としても使用されているラウリル硫酸ナトリウム
（和光純薬社製）の４％水溶液について皮膚１次刺激試
験を同様に実施したところ、１次刺激指数は４．０（中
程度の刺激物）であった。

【００４８】実施例１（抗菌性評価）製造例２、３、４で得た多糖類のウロン酸残基をＣｕ、
Ｚｎ，Ａｇ型に置換したものを、普通寒天培地へ含有量
が２％（ｗ／ｖ）となるように添加した。表４に示す組
成の培地５０ｍｌを、１２１℃で２０分間湿熱滅菌後、
２枚のシャーレ（直径９０ｍｍ×高さ１０ｍｍ）に２５
ｍｌずつ入れた。実験室内で上記シャーレを２時間開放
放置した後、インキュベーター内で３７℃、７２時間放
置した時のコロニー数を調べた。

【００４９】比較のため、各製造例で得た多糖類そのも
の（ウロン酸残基の対イオンを抗菌性金属イオンに置換
していない多糖類）およびプルラン（林原社製）につい
ても同様な操作を行った。結果を表５に示す。

【００５０】

【表４】培地組成（重量％）肉エキス０．３ポリペプトン１．０ＮａＣｌ０．５寒天１．５ｐＨ７．０

【００５１】

【表５】製造例１で得た多糖類の２枚のシャーレのグルクロン酸残基をコロニー数の合計Ｃｕ型に置換したもの３Ｚｎ型に置換したもの２Ａｇ型に置換したもの１製造例１で得た多糖類７３プルラン６８

【００５２】上記の結果から、多糖類中のグルクロン酸
残基をＣｕ、Ｚｎ，Ａｇ型にすることによって、本発明
の抗ウイルス・菌剤は、プルランには認められない抗ウ
イルス・菌性を持つようになることが明らかである。

【００５３】実施例２（細菌に対する抗菌性評価）細菌であるＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ，Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ，Ｅｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ、酵母であるＳａｃｃｈａｒｏ
ｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ，Ｃａｎｄｉｄａ
ｕｔｉｔｉｓ、に対する抗菌性を以下に述べる方法で調
べた。

【００５４】表６に示す組成の培地、１００ｍｌを１２
１℃で２０分間、湿熱滅菌後、シャーレ（直径９０ｍｍ
×高さ１０ｍｍ）に２０ｍｌずつ流し込み、約４０℃に
保っておいて、液体培養していた抗菌性評価に用いる細
菌の培養液、０．５ｍｌを培地に均一に添加した。

【００５５】

【表６】培地組成（重量％）肉エキス０．３ペプトン１．０塩化ナトリウム０．５寒天１．５ｐＨ７

【００５６】１時間後、製造例２〜４で得られた抗菌性
金属イオンを対イオンとした多糖類の２％（ｗ／ｖ）水
溶液中に浸したペーパーディスク（直径８ｍｍ）を各細
菌を添加（植菌）した培地上において、３７℃で４８時
間培養後の阻止円の直径計を調べた。また、比較のた
め、製造例１で得た多糖類そのもの（ウロン酸残基の対
イオンを抗菌性金属イオンに置換していない多糖類）と
プルラン（林原社製）についても同様に処理した。結果
を表７に示す。

【００５７】

【表７】阻止円の直径（ｍｍ） B.subtilis S.aureus E.coli S.cerevisiae Ｃｕ型１１１０１１９Ｚｎ型１２１１１２１２Ａｇ型１４１１１３１３製造例１で得た多糖類００００プルラン００００

【００５８】上記の結果から明らかな通り、本発明で用
いる多糖類は構成糖であるウロン酸残基の対イオンを抗
菌性金属イオンにすることにより、細菌や酵母に対して
抗菌性を持つようになることがわかる。これに対して、
プルランでは、その構造から明らかなように、本質的に
抗菌性金属イオンを置換することが出来ないため、同様
の効果は発現しえない。

【００５９】実施例３（多糖類の血液抗凝固性測定）多糖類の血液抗凝固性を活性化部分トロンボプラスチン
時間（ＡＰＴＴ）を測定することにより調べた。３．８
％クエン酸ナトリウム液、０．５ｍｌに正常人より採血
した血液、４．５ｍｌを加える。３３００ｒｐｍで１０
分間遠心分離して、血漿を採取する。血漿、０．１ｍｌ
にセライト浮遊液（セライト、０．７ｇを生理食塩水、
１００ｍｌに浮遊させたもの）、０．１ｍｌを加え、１
分間振る。これにケファリン浮遊液、０．１ｍｌを加
え、３７℃で６分間保った後、０．０２５Ｍ塩化カルシ
ウム液、０．１ｍｌを吹き込み、凝固するまでの時間を
測定したところ、約４５秒であった。次に製造例で得ら
れた多糖類、０．０５ｍｇを含む３．８％クエン酸ナト
ルイム液、０．５ｍｌを用いて上記と同じ操作を行なっ
たところ、凝固時間は約４５秒であったが、ヘパリンナ
トリウムを用いて本発明で用いる多糖類と同じ処理をし
たが、凝固時間は約２５０秒であった。上述の結果から
明らかなように、ヘパリンナトリウムでは血液抗凝固性
が認められたが、本発明で用いる多糖類には血液抗凝固
性は認められなかった。

【００６０】実施例４（多糖類生産性微生物の安全
性）製造例１と同様にして得た培養終了後の培養液の一部
（８００ｍｌ）を凍結乾燥し、得られた凍結乾燥物に蒸
留水３０ｍｌを加えて均一に分散した試料を、マウス
（６週令、雌）に１日１回、１ｍｌ分を合計６回経口投
与したが、投与終了後、一ヵ月経っても何ら異常は認め
られなかった。なお、投与した菌体量は合計で約３８０
ｍｇであった。

【００６１】実施例５（多糖類生産性微生物の安全
性）製造例１における培養終了後の培養液、１０ｍｌをマウ
ス（６週令、雌）の頭部以外のところに、ほぼ、均一に
塗布したが、一ヵ月後、何ら異常は認められなかった。

【００６２】実施例６（抗ウイルス性の評価）本発明で使用する多糖類の抗ヒトサイトメガロウイルス
（ＨＣＭＶ）性を次の方法で評価した。

【００６３】製造例４で得られた多糖類をＭＥＭ（２％
牛胎仔血清を含む、以下２％ＭＥＭと表す）培地に、濃
度が１２０μｇ／ｍｌになるように溶解したものとＨＣ
ＭＶ、２×１０³ｐｆｕ／ｍｌとを等量混合し、時々、
かきまぜながら、室温で１時間インキュベートした。イ
ンキュベート終了後の液、０．５ｍｌをヒト胎児肺細胞
（ＨＥＬ，１０−１４代）１×１０⁴ｃｅｌｌに感染さ
せ、ＣＯ₂インキュベーターで３７℃、７２時間培養し
た。

【００６４】７２時間インキュベート後、抗ウイルス活
性を「Ｍｉｃｒｏｔｒａｋ」キット（Ｓｙｖａ社製）を
用いた蛍光抗体染色法により行なった。この方法では、
蛍光染色される細胞が少ないほど、抗ウイルス活性は高
いと評価されるが、蛍光顕微鏡の一視野中の蛍光染色陽
性細胞数を測定したところ、コントロールでは約３０で
あったのに対して、本発明で用いる多糖類をＨＣＭＶに
作用させた場合では６であった。

【００６５】実施例７（抗菌性化粧料の調製）表８に示す処方によりクリームを調製した。すなわち、
（１）〜（７）、（１１）を加熱溶解し、７０℃に保つ
（油相）。（８）〜（１０）を（１２）に加熱溶解した
ものに、かきまぜながら油相を加える。ホモミキサー処
理した後、急冷してクリームを得た。

【００６６】

【表８】重量％（１）ワセリン８．０（２）ラノリン２．０（３）スクワラン２０．０（４）セタノール５．０（５）モノステアリン酸グリセロール２．０（６）ポリオキシエチレンモノラウリン酸ソルビタン（２０ＥＯ）２．０（７）パラオキシ安息香酸エチル０．２（８）製造例２で得られた多糖類０．５（９）グリセロール（８６％）５．０（１０）１、３−ブチレングリコール５．０（１１）香料０．１（１２）精製水５０．２

【００６７】実施例８（抗菌性化粧料の調製）実施例６において、製造例２で得られた本発明で使用す
る多糖類の代わりに製造例３で得られた本発明で使用す
る多糖類を用いて、実施例７と同じ方法でクリームを調
製した。

【００６８】実施例９（抗菌性化粧料の調製）実施例６において、製造例２で得られた本発明で使用す
る多糖類の代わりに製造例４で得られた本発明で使用す
る多糖類を用いて、実施例７と同じ方法でクリームを調
製した。

【００６９】実施例１０（抗ウイルス製剤の調製）カルボキシメチルセルロースナトリウム塩、２００ｇと
ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、５０
ｇとをグリセリン、１０００ｇ、蒸留水、６．５Ｌに均
一に混合する。そこに、製造例３で得られた本発明の多
糖類、２００ｇとポリオキシエチレンモノオレエート、
１０ｇとを溶解した水溶液、２Ｌを添加し、よくかきま
ぜた後、蒸留水を加えて全量を１０Ｌにした。得られた
ゲル様物をチューブに詰めて、抗ウイルス製剤を調製し
た。

【００７０】実施例１１（抗ウイルス製剤の調製）実施例９において、製造例３で得られた本発明で使用す
る多糖類の代わりに製造例４で得られた本発明で使用す
る多糖類を用いて、実施例１０と同じ方法で抗ウイルス
製剤を調製した。

【００７１】上記各実施例の結果から、多糖類中のグル
クロン酸残基をＣｕ、Ｚｎ，Ａｇ型にすることによっ
て、本発明の抗ウイルス・菌剤は、プルランには認めら
れない抗ウイルス・菌性を持つようになることが明らか
である。

【００７２】

【発明の効果】以上説明した通り、本発明によれば従来
の抗ウイルス・菌剤にはない、優れた性質を持つ多糖類
を成分とする新規な抗ウイルス・菌剤を提供することが
できる。本発明の抗ウイルス・菌剤は医薬品分野におけ
る抗ヘルペスウイルスホミニス（ＨＶＨ）剤、抗ヒトサ
イトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）剤、抗白癬剤、抗歯垢
剤、創傷、火傷時の微生物感染予防・治療剤など、化粧
品分野における抗フケ剤、にきび予防・治療剤、防腐剤
など、農業、林業分野における病害防除剤などに優れた
効果がある。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ０１Ｎ 59/20 Ａ０１Ｎ 59/20 Ｚ 63/02 63/02 ＤＡ６１Ｋ 31/725 ＡＤＹＡ６１Ｋ 31/725 ＡＤＹＡＤＺＡＤＺ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】構成糖がＤ−グルクロン酸、Ｌ−ラムノ
ース、Ｄ−ガラクトースおよびＤ−グルコースの４種か
らなり、その構成モル比が、Ｄ−グルクロン酸：Ｌ−ラ
ムノース：Ｄ−ガラクトース：Ｄ−グルコース＝０．８
〜１．２ :２．４〜３．６ :０．８〜１．２ :０．８〜
１．２である多糖類の抗菌性金属塩を有効成分とする抗
ウイルス・菌剤。
【請求項２】多糖類の各構成糖残基の結合様式とその
構成モル比が下記の通りである請求項１に記載の抗ウイ
ルス・菌剤。Ｒｈａ１：Ｌ−ラムノースの結合様式が（１→結合Ｒｈａ２：Ｌ−ラムノースの結合様式が（１→２）結合ＧｌｃＵＡ：Ｄ−グルクロン酸の結合様式が（１→３）
および（１→４）結合Ｇａｌ：Ｄ−ガラクトースの結合様式が（１→３）結合Ｇｌｃ：Ｄ−グルコースの結合様式が（１→２）結合
と略記すると、Ｒｈａ１：Ｒｈａ２：ＧｌｃＵＡ：Ｇａｌ：Ｇｌｃ＝
０．８〜１．２：１．６〜２．４：０．８〜１．２：
０．８〜１．２：０．８〜１．２。
【請求項３】抗菌性金属が、銅、亜鉛、銀からなる群
のうちの少なくとも１種以上である請求項１または２に
記載の抗ウイルス・菌剤。
【請求項４】ゲルろ過クロマトグラフィーを用いて測
定した多糖類の分子量が、約１×１０³〜１０×１０⁶
である請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗ウイルス
・菌剤。
【請求項５】請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗
ウイルス・菌剤を含有する抗ウイルス・菌剤組成物。