JPH08333213A

JPH08333213A - 抗ウイルス・菌剤

Info

Publication number: JPH08333213A
Application number: JP7168217A
Authority: JP
Inventors: Yoichi Oiso; 大磯洋一
Original assignee: Tayca Corp
Current assignee: Tayca Corp
Priority date: 1995-06-09
Filing date: 1995-06-09
Publication date: 1996-12-17

Abstract

(57)【要約】【構成】構成糖が、Ｄ−ガラクツロン酸、Ｌ−ラムノ
ースおよびＤ−グルコースの３種から成り、その構成モ
ル比が、Ｄ−ガラクツロン酸：Ｌ−ラムノース：Ｄ−グ
ルコース＝０．６〜１．０：０．８〜１．２：０．８〜
１．２である多糖類を有効成分とする抗ウイルス・菌
剤。【効果】安全性ならびに生分解生がより高い微生物産
生多糖類の抗菌性金属塩より成る抗ウイルス・菌剤が提
供される。該抗ウイルス・菌剤は、これらの性質を具備
することにより、特に、医薬品分野における抗ヘルペス
ウイルスホミニス（ＨＶＨ）剤、抗ヒトサイトメガロウ
イルス（ＨＣＭＶ）剤、抗白癬剤、抗歯垢剤、創傷、火
傷時の微生物感染予防・治療剤など、化粧品分野におけ
る抗フケ剤、にきび予防・治療剤、防腐剤など、農業、
林業における病害防除剤などとして優れた効果を示す。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、特定多糖類を有効成分
とする抗ウイルス・菌剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来より、銀、銅、亜鉛、錫、水銀、
鉛、鉄、コバルト、ニッケル、マンガン、ヒ素、アンチ
モン、ビスマス、バリウム、カドミウム、クロムなどが
抗菌性金属として知られており、種々の形態で抗菌剤な
どとして使用されている。

【０００３】具体的な例としては、抗ウイルス活性を有
するヘパリン亜鉛塩（特公昭６２−２５１２６号公
報）、同じく抗ウイルス活性を有するデキストラン硫酸
亜鉛塩（特公昭６３−４８８４９号公報）、病原菌に対
する抗菌活性を有するヒアルロン酸重金属塩（特表昭６
３−５０２６７０号公報）などが挙げられる。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上述の
抗菌性金属イオンを対イオンとする化合物には、アニオ
ン部分、あるいは、生産経路に次に示した問題を抱えて
いる。（１）ヘパリンは抗凝血活性を有しており、患部が出
血している場合などには使用することができない。（２）ヒアルロン酸は生産性の有利さから、動物由来
のものから微生物由来のものへと移行してきたが、ヒア
ルロン酸を生産する微生物は何れも連鎖球菌で、人間や
家畜に寄生し、病原性を持つものが多く、医薬品、化粧
品、食品分野などの高い安全性が求められる分野での使
用は慎重に成らざるをえない。

【０００５】従って、医薬品分野においても使用が制限
されることがなく、また、生産経路上においても何ら安
全性に問題のない、抗菌性金属イオンを対イオンとする
ことができる物質が求められている。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明の目的は、優れた
抗ウイルス・菌性能と人体に対する安全性を有する新規
な抗ウイルス・菌剤を提供することにある。本発明者ら
は、前記の課題を解決すべく鋭意検討した結果、病原性
細菌ではないアゾトバクター属の微生物が生産する、安
全性の高い多糖類が、抗菌性金属を対イオンとして含有
させることが可能であり、優れた抗ウイルス・菌性を有
するが、抗凝血性を示さないことを見出し、本発明に到
達したものである。

【０００７】すなわち本発明は、構成糖が、Ｄ−ガラク
ツロン酸、Ｌ−ラムノースおよびＤ−グルコースの３種
からなり、その構成モル比が、Ｄ−ガラクツロン酸：Ｌ
−ラムノースおよびＤ−グルコース＝０．６〜１．０：
０．８〜１．２：０．８〜１．２であることを特徴とす
る多糖類の抗菌性金属塩を有効成分とする新規抗ウイル
ス・菌剤である。

【０００８】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
抗ウイルス・菌剤として用いられる多糖類は、上述の特
徴の他に、以下のような特性を有しているのが好まし
い。

【０００９】分子量：ゲルろ過クロマトグラフイーにて
測定した分子量が、約５×１０³〜１０×１０⁶であ
る。

【００１０】結合様式：各構成糖の結合様式が、実質的
に（１→３）結合である。

【００１１】結合配置：Ｄ−ガラクツロン酸の結合配置
がα、Ｌ−ラムノースの結合配置がβ、Ｄ−グルコース
の結合配置がαである。

【００１２】Ｏ−アセチル基含有量：多糖類における水
酸基（−ＯＨ）の一部が、Ｏ−アセチル基（−ＯＣＯＣ
Ｈ₃）として置換されており、そのＯ−アセチル基の数
は、通常平均して、単位構成糖３あたり１以下である。

【００１３】また、さらに上記多糖類は、以下の物性を
有している。性状：白色繊維状（凍結乾燥物）。

【００１４】溶解性：水、希酸、希アルカリ、ＤＭＳＯ
に対して可溶であり、メタノール、エタノール、アセト
ンに対して不溶である。

【００１５】赤外吸収スペクトル：３４００ｃｍ^-1付
近、１６２０ｃｍ^-1付近、１１１０ｃｍ^-1付近、１２５
０ｃｍ^-1付近、２９５０ｃｍ^-1付近のそれぞれに赤外吸
収のピークが認められる。

【００１６】呈色反応：フェノール硫酸法、カルバゾー
ル硫酸法及びｍ−フェニルフェノール法のいずれも陽
性。

【００１７】本発明の抗ウイルス・菌剤として用いられ
る多糖類の分子量や構成糖の種類、それらの構成比、構
成糖の結合様式などは酸加水分解後のクロマトグラフィ
ー分析、メチル化分析やスミス分解などにより特定が可
能である。

【００１８】上記多糖類の特定方法の具体例を次に示
す。分子量の測定：旭化成社製「ＡｓａｈｉｐａｋＧＦＡ
−７ＭＦ」をカラムとするＧＰＣモードの高速液体クロ
マトグラフィーを使用し、０．１Ｍ硝酸ナトリウム水溶
液を移動相とし、分子量既知のプルランを標準サンプル
として作成した分子量−保持時間標準曲線を使用して測
定する。

【００１９】本件発明に使用する多糖類の物質特許出願
は特開平７−９０００３号公報として公開されている
が、次に、製造方法について説明する。通常、本件多糖
類は、アゾトバクター・ベイジェリンキィーＴＮＭ１株
（通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所受託番
号ＦＥＲＭＢＰ−４１９４）又はその変異株による微
生物培養により、その培養物から採取される。上記変異
株は、紫外線、Ｘ線等の放射線、または、エチルメタン
スルホン酸（ＥＭＳ），Ｎ−メチル−Ｎ´−ニトロ−Ｎ
−ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ）等の化学的突然変異
誘発物質の様な公知の突然変異誘発手段により発生させ
ることができる。

【００２０】上記菌株を用いた微生物培養について、さ
らに詳細に説明する。本発明で用いる多糖類を産生する
微生物を培養するための培地としては、アゾトバクター
（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ）属に属する微生物が生育で
き、上記多糖類を生産する炭素源、窒素源、無機塩類及
び微量栄養源を適量含有するものであれば特に制限され
ない。

【００２１】そして、炭素源としては、グルコース、ラ
クトース、マルトース、キシロース、マンニット、サッ
カロース、ラムノース、アラビノース、トレハロース、
ラフィノースなどが使用される。窒素源としては、硝酸
塩、アンモニウム塩、尿素などの合成化合物、ポリペプ
トン、コーンスティープリカー、酵母エキス、肉エキ
ス、脱脂大豆抽出物、ペプチド、アミノ酸などの天然有
機物が使用される。

【００２２】無機塩類としては、リン酸塩、カリウム
塩、硫酸塩、マグネシウム塩などが使用される。培地に
は、必要に応じ、鉄塩、カルシウム塩、マンガン塩など
を添加することができる。また、微量栄養源としては、
酵母エキス、各種ビタミン類などが使用される。

【００２３】培地の状態は、固体でも液体でも構わな
い。液体培地を使用する場合には、静置培養でもよい
が、振盪培養、通気撹拌培養の方が、より高収量に本発
明で使用する多糖類を得ることができる。培養時のｐＨ
は、微生物が生育できて本発明で使用する多糖類を生産
し得るｐＨであれば特に制限されないが、通常は４〜８
のｐＨが適切である。培養温度についても、特に制限さ
れないが、通常は２０〜３５℃が適切である。培養時間
は、本発明で使用する多糖類の生産が最大に達する期間
が選ばれるが、通常は１〜７日が適切である。

【００２４】上記の培養方法で得られた培養物から、本
発明で使用する多糖類を採取する方法としては、従来公
知の方法を採用することができる。たとえば、まず、遠
心分離やろ過などにより、培養物から菌体を除去した
後、得られた培養液にメタノール、エタノール、イソプ
ロパノール、アセトンなどの有機溶媒を加えて沈殿を生
じさせる。次いで、沈殿物を水に溶解させた後、水に対
して透析を行ない、通風乾燥、熱風乾燥、噴霧乾燥、ド
ラム乾燥、減圧乾燥、凍結乾燥などの方法により、透析
内液を乾燥して多糖類を回収する。

【００２５】上記の採取方法の他に、限外ろ過により、
上記の培養液から本発明で使用する多糖類以外の成分を
除去し、得られた濃縮液を上述の乾燥工程に供する方法
を採用してもよい。さらに、必要に応じ、通常の多糖類
の精製法に従って精製することにより、高純度精製品を
得ることもできる。精製法としては、イオン交換、ゲル
ろ過、アフィニティー等の各種のカラムクロマトグラフ
ィー、４級アンモニウム塩による沈殿や塩析、有機溶媒
による沈殿などが採用される。

【００２６】本発明で用いる多糖類の重合度は、製造時
の培地組成、採取法などの条件を調節することによって
変化させることができる。また、ＴＦＡ、ギ酸、塩酸な
どを使用し、かつ、条件を調節することにより、採取品
や精製品を加水分解することができる。さらに、具体的
な方法として、加圧下での加温や、超音波処理などを行
って重合度を変化させても、好適な結果が得られる。

【００２７】従って、上記多糖類の分子量は、約５×１
０³〜１０×１０⁶の範囲で自由に調節することが可能
である。

【００２８】そして、上述した微生物培養により、その
培養物から採取される本発明で用いる多糖類は、Ｄ−ガ
ラクツロン酸、Ｌ−ラムノースおよびＤ−グルコースの
３種の構成糖から成り、その構成モル比が、Ｄ−ガラク
ツロン酸：Ｌ−ラムノース：Ｄ−グルコース＝０．６〜
１．０：０．８〜１．２：０．８〜１．２の範囲にある
ことが、前述した分析手段により明らかになった。

【００２９】上記説明した本発明で用いる多糖類は、微
生物を培養することによって製造が可能である。この場
合、アゾトバクター・ベイジェリンキーが使用され、さ
らに好ましくは、微生物として天然土壌から純粋分離し
たアゾトバクター・ベイジェリンキーＴＮＭ１株（ＦＥ
ＲＭＢＰ−４１９４）、または、その変異株が使用さ
れる（たとえば、特開平７−９０００３号公報参照）。
変異株は、紫外線、Ｘ線などの放射線またはエチルメタ
ンスルホン酸（ＥＭＳ）、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−
Ｎ−ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ）などの化学的突然
変異誘発物質のような公知の突然変異誘発手段により発
生させることが出来る。

【００３０】上記菌株は、通商産業省工業技術院生命工
学工業技術研究所において、受託番号「ＦＥＲＭＢＰ
−４１９４」として、平成５年２月１８日から国際寄託
され保管されている。

【００３１】このようにして得られる、本発明で用いる
多糖類は、抗菌性の金属と組み合わせることにより抗ウ
イルス・菌活性を示すが、抗凝血性は示さない。また、
本発明で用いる多糖類は、抗菌性金属塩にしても水溶性
であるので、種々の抗菌性金属を担持して各分野で使用
されている抗菌性ゼオライトや、抗フケ剤として用いら
れている２−メルカプトピリジン−Ｎ−オキシド亜鉛塩
（Ｚｐｔ）などの水不溶性抗菌剤のように、溶液中で使
用する際に分散剤などの添加を必要としない。ただし、
必要に応じて、水不溶性とすることもできる。

【００３２】本発明の抗ウイルス・菌剤の具体的な用途
としては、従来から抗菌性金属によって抗ウイルス・菌
作用を受けることが知られているウイルス、微生物の増
殖を阻害することに基づく用途を挙げることができ、医
薬品分野における抗ヘルペスウイルスホミニス（ＨＶ
Ｈ）剤、抗ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）剤、
抗白癬剤、抗歯垢剤、創傷、火傷時の微生物感染予防・
治療剤など、化粧品分野における抗フケ剤、にきび予防
・治療剤、防腐剤など、農業、林業分野における病害防
除剤などとしての用途が可能である。

【００３３】安全性データ本発明で用いる多糖類の安全性データを測定したとこ
ろ、次の結果が得られた。急性経口毒性（ラット、ＬＤ₅₀）：＞５０００ｍｇ／
ｋｇ（実際上無害）皮膚１次刺激性（Ｄｒａｉｚｅ法）：１次刺激指数
０．３（弱い刺激物）

【００３４】前記の結果より本件多糖類は、急性経口毒
性が実際上無害であり、１次刺激指数が表１から明らか
なように、ほぼ、無刺激物に近いレベルの刺激性を示す
程度であって安全性の高い物質である。

【００３５】

【表１】皮膚刺激性評価１次刺激指数（ＰＩＩ）無刺激物０弱い刺激物０＜ＰＩＩ≦２中等度の刺激物２＜ＰＩＩ≦５強い刺激物５＜

【００３６】

【実施例】次に、本発明を実施例によりさらに詳細に説
明するが、本発明は、その要旨を越えない限り、以下の
実施例に限定されるものではない。

【００３７】多糖類の製造例１５００ｍｌ容の坂口フラスコに表１に示したような組成
の培地を１００ｍｌ入れ、１２１℃で２０分間湿熱滅菌
後、表１に示す組成の培地を用いて試験管で３日間液体
振盪培養していたアゾトバクター・ベイジェリンキィー
（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒｂｅｉｊｅｒｉｎｃｋｉ
ｉ）ＴＮＭ１株（ＦＥＲＭＢＰ−４１９４）を、一白
金耳分植菌し、振盪数毎分１１０ストローク、２８℃で
１日間レシプロ振盪培養を行った。

【００３８】

【表２】培地組成（重量％）スクロース３硝酸ナトリウム０．３リン酸−水素カリウム０．１５硫酸マグネシウム・７水和物０．０５硫酸鉄・７水和物０．００１塩化カルシウム・２水和物０．１ｐＨ６．５

【００３９】上記表２と同様の組成の培地６リットルを
入れて前記と同様の滅菌を行った１０リットル容のジャ
ーファーメンターに、上記で得られた培養液３００ｍｌ
を接種し、温度２８℃、通気量６リットル／ｍｉｎの条
件下で、５Ｍ水酸化ナトリウムを用いて系中のｐＨを７
に保ちながら、７０時間通気撹拌培養を行った。尚、回
転数は、培養２４時間目までは４００ｒｐｍ、それ以降
７０時間までは７００ｒｐｍとした。

【００４０】得られた培養物を水で１０倍に希釈し、９
０℃まで加温した後、遠心分離により菌体を除去した。
得られた培養上清分について、残留培地成分などの多糖
類以外の成分が除去されるまで、クロスフロー方式の限
外ろ過を繰り返した。限外ろ過には、東ソー社製、限外
ろ過システム「ＵＦ−ＬＭＳII」（分画分子量：３×１
０⁶）を使用した。限外ろ過膜を透過しなかった濃縮液
を凍結乾燥し、培地１リットル当たり、約１２ｇの単一
な多糖類を得た。

【００４１】なお、多糖類の単一性の確認は、ＧＰＣモ
ードの高速液体クロマトグラフィーを使用して行った。

【００４２】旭化成社製「ＡｓａｈｉｐａｋＧＦＡ−
７ＭＦ」をカラムとし、０．１Ｍ硝酸ナトリウム水溶液
を移動相とした高速液体クロマトグラフィーを使用し、
前記した製造例の多糖類の分子量を測定した結果、多糖
類のクロマトグラフのピークトップの保持時間は、分子
量既知のプルランを標準サンプルとして作成した分子量
−保持時間標準曲線において、分子量約２×１０⁶に相
当する値を示した。

【００４３】また、この多糖類およびガラクツロン酸残
基のカルボキシル基を還元した多糖類について、各構成
糖まで加水分解を行い、アルジトールアセテートに誘導
した後、ガスクロマトグラフィー分析を行った。あらか
じめ作成した検量線と各構成糖のピーク面積から各構成
糖のモル比を求めたところ、各構成糖のモル比は、Ｄ−
ガラクツロン酸：Ｌ−ラムノース：Ｄ−グルコース＝
０．９：１：１であった。

【００４４】さらに、製造例で得られた多糖類における
水酸基の修飾度合いについて調べるため、０．０１Ｍの
水酸化カリウム及び０．１３Ｍの塩化カリウム水溶液中
で、室温下５時間、脱アシル化処理を行った。処理試料
の赤外吸収スペクトルを測定したところ、１７３０ｃｍ
^-1近傍のピークが消失していた。

【００４５】また、この処理試料の高速液体クロマトグ
ラフィー分析を行ったところ、得られるピークの保持時
間は、アセチル基が脱離した場合に生じる酢酸カリウム
の存在を示し、さらに、そのピーク高さとあらかじめ作
成した検量線とから、製造例で得られた多糖類における
Ｏ−アセチル基含有量は、多糖類全体に対して約１０重
量％であることがわかった。この値は、おおよそで単位
構成糖３個あたりに一つの水酸基が、Ｏ−アセチル基と
して置換されていることを意味する。

【００４６】製造例２抗菌性金属含有多糖類の製造は、製造例１で得られた多
糖類の１％（ｗ／ｖ）水溶液，５００ｍｌに、塩化銅
（ＣｕＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ），２ｇをかきまぜながら添加
した。限外ろ過による脱塩後、凍結乾燥することによっ
て、ウロン酸残基の対イオンが銅イオンである多糖類を
得た。

【００４７】製造例３製造例１で得られた多糖類の１％（ｗ／ｖ）水溶液，５
００ｍｌに、硫酸亜鉛（ＺｎＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ），３ｇ
をかきまぜながら添加した。限外ろ過による脱塩後、凍
結乾燥することによってウロン酸残基の対イオンが亜鉛
イオンである多糖類を得た。

【００４８】製造例４製造例１で得られた多糖類の１％（ｗ／ｖ）水溶液，５
００ｍｌに、硝酸銀（ＡｇＮＯ₃），２ｇをかきまぜな
がら添加した。限外ろ過による脱塩後、凍結乾燥するこ
とによってウロン酸残基の対イオンが銀イオンである多
糖類を得た。

【００４９】実施例１（抗菌性評価）製造例２、３、４で得たガラクツロン酸残基をそれぞれ
Ｃｕ，Ｚｎ，Ａｇ型に置換した多糖類を、普通寒天培地
へ含有量が２％（ｗ／ｖ）となるように添加した。表４
に示す組成の培地５０ｍｌを、１２１℃で２０分間湿熱
滅菌後、２枚のシャーレ（直径９０ｍｍ×高さ１０ｍ
ｍ）に２５ｍｌずつ入れた。実験室内で上記シャーレを
２時間開放放置した後、インキュベーター内で３７℃で
７２時間放置した時のコロニー数を調べた。

【００５０】比較のため、製造例１で得た多糖類そのも
の（ガラクツロン酸残基の対イオンを抗菌性金属イオン
に置換していない多糖類）およびプルラン（林原社製）
についても同様な操作を行った。結果を表４に示す。

【００５１】

【表３】培地組成（重量％）肉エキス０．３ポリペプトン１．０塩化ナトリウム０．５寒天１．５ｐＨ７．０

【００５２】

【表４】製造例２、３、４で得た２枚のシャーレの多糖類の抗菌性金属塩コロニー数の合計Ｃｕ型としたもの４Ｚｎ型としたもの２Ａｇ型としたもの１製造例１で得た多糖類６７プルラン６８

【００５３】実施例２（細菌に対する抗菌性評価）細菌であるＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ，Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ，Ｅｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ、酵母であるＳａｃｃｈａｒｏ
ｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ，Ｃａｎｄｉｄａ
ｕｔｉｔｉｓ、に対する抗菌性を以下に述べる方法で調
べた。

【００５４】表５に示す組成の培地、１００ｍｌを１２
１℃で２０分間、湿熱滅菌後、シャーレ（直径９０ｍｍ
×高さ１０ｍｍ）に２０ｍｌずつ流し込み、約４０℃に
保っておいて、液体培養していた抗菌性評価に用いる細
菌の培養液、０．５ｍｌを培地に均一に添加した。

【００５５】

【表５】培地組成（重量％）肉エキス０．３ペプトン１．０塩化ナトリウム０．５寒天１．５ｐＨ７

【００５６】１時間後、製造例２〜４で得られた抗菌性
金属イオンを対イオンとした多糖類の２％（ｗ／ｖ）水
溶液中に浸したペーパーディスク（直径８ｍｍ）を、各
細菌を添加（植菌）した培地上に置き、３７℃で４８時
間培養後の阻止円の直径を調べた。また、比較のため、
製造例１で得た多糖類そのもの（ウロン酸残基の対イオ
ンを抗菌性金属イオンに置換していない多糖類）とプル
ラン（林原社製）についても同様に処理した。結果を表
６に示す。

【００５７】

【表６】阻止円の直径（ｍｍ） B.subtilis S.aureus E.coli S.cerevisiae Ｃｕ型１１１０１１９Ｚｎ型１２１１１２１２Ａｇ型１４１１１３１３製造例１で得た多糖類００００プルラン００００

【００５８】上記の結果から明らかな通り、本発明で用
いる多糖類は、構成糖であるウロン酸残基の対イオンを
抗菌性金属イオンにすることにより、細菌や酵母に対し
抗菌性を持つようになることがわかる。これに対して、
プルランでは、その構造から明らかなように、本質的に
抗菌性金属イオンを置換することが出来ないため、同様
の効果は発現しえない。

【００５９】実施例３（多糖類の血液抗凝固性測定）多糖類の血液抗凝固性を活性化部分トロンボプラスチン
時間（ＡＰＴＴ）を測定することにより調べた。３．８
％クエン酸ナトリウム液０．５ｍｌに正常人より採血し
た血液４．５ｍｌを加える。３３００ｒｐｍで１０分間
遠心分離して、血漿を採取する。血漿、０．１ｍｌにセ
ライト浮遊液（セライト、０．７ｇを生理食塩水、１０
０ｍｌに浮遊させたもの）、０．１ｍｌを加え、１分間
振る。これにケファリン浮遊液、０．１ｍｌを加え、３
７℃で６分間保ったのち、０．０２５Ｍ塩化カルシウム
液、０．１ｍｌを吹き込み、凝固するまでの時間を測定
したところ約４５秒であった。次に製造例で得られた多
糖類、０．０５ｍｇを含む３．８％クエン酸ナトリウム
液、０．５ｍｌを用いて上記と同じ操作を行なったとこ
ろ、凝固時間は約４５秒であったが、ヘパリンナトリウ
ムを用いて本発明で使用する多糖類と同じ処理をした
が、凝固時間は約２５０秒であった。上述の結果から明
らかなように、ヘパリンナトリウムでは血液抗凝固性が
認められたが、本発明で使用する多糖類には血液抗凝固
性は認められなかった。

【００６０】実施例４（多糖類生産性微生物の安全
性）製造例１と同様にして得た培養終了後の培養液の一部
（８００ｍｌ）を凍結乾燥し、得られた凍結乾燥物に蒸
留水、６０ｍｌを加えて均一に分散した試料を、マウス
（６週令、雌）に１日１回、１ｍｌ分を計６回経口投与
したが、投与終了後、１ケ月経ても何ら異常は認められ
なかった。なお、投与した菌体量は計５０ｍｇであっ
た。

【００６１】実施例５（多糖類生産性微生物の安全
性）製造例１における培養終了後の培養液、１０ｍｌをマウ
ス（６週令、雌）の頭部以外のところに、ほぼ均一に塗
布したが、一ヵ月後、何ら異常は認められなかった。

【００６２】実施例６（抗菌性ゲルの調製）製造例１で得た多糖類の２％（ｗ／ｖ）水溶液に５Ｍ水
酸化ナトリウムを添加してｐＨを１２に調整し、５時間
かきまぜた後、限外ろ過による脱塩を行った。脱塩終了
後の水溶液を１％（ｗ／ｖ）硫酸亜鉛（ＺｎＳＯ₄・７
Ｈ₂Ｏ）水溶液中に滴下して、水不溶性の球状ゲルを得
た。また、このゲルを５０℃の乾燥機に入れ、ゲル中の
水分を蒸発させた後、乳鉢で粉砕して水不溶性の抗菌性
多糖類を調製した。

【００６３】実施例７（抗ウイルス性の評価）本発明の多糖類の抗ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭ
Ｖ）性を次の方法で評価した。

【００６４】製造例４で得られた多糖類をＭＥＭ（２％
牛胎仔血清を含む、以下２％ＭＥＭと表す）培地に、濃
度が７０μｇ／ｍｌになるように溶解したものとＨＣＭ
Ｖ２×１０³ｐｆｕ／ｍｌとを等量混合し、時々、かき
まぜながら、室温で１時間インキュベートした。インキ
ュベート終了後の液、０．５ｍｌをヒト胎児肺細胞（Ｈ
ＥＬ，１０−１４代）１×１０⁴ｃｅｌｌに感染させ、
ＣＯ₂インキュベーターで３７℃、７２時間培養した。

【００６５】７２時間インキュベート後、抗ウイルス活
性を「Ｍｉｃｒｏｔｒａｋ」キット（Ｓｙｖａ社製）を
用いた蛍光抗体染色法により行なった。この方法では、
蛍光染色される細胞が少ないほど、抗ウイルス活性は高
いと評価されるが、蛍光顕微鏡の一視野中の蛍光染色陽
性細胞数を測定したところ、コントロールでは約３０で
あったのに対して、本発明の多糖類をＨＣＭＶに作用さ
せた場合では６であった。

【００６６】実施例８（抗菌性化粧料の調製）表７に示す処方によりクリームを調製した。すなわち、
（１）〜（７）、（１１）を加熱溶解し、７０℃に保つ
（油相）。（８）〜（１０）を（１２）に加熱溶解した
ものに、かきまぜながら油相を加える。ホモミキサー処
理した後、急冷してクリームを得た。

【００６７】

【表７】重量％（１）ワセリン８．０（２）ラノリン２．０（３）スクワラン２０．０（４）セタノール５．０（５）モノステアリン酸グリセロール２．０（６）ポリオキシエチレンモノラウリン酸ソルビタン（２０ＥＯ）２．０（７）パラオキシ安息香酸エチル０．２（８）製造例２で得られた多糖類０．５（９）グリセロール（８６％）５．０（１０）１、３−ブチレングリコール５．０（１１）香料０．１（１２）精製水５０．２

【００６８】実施例９（抗菌性化粧料の調製）実施例８において製造例２で得られた本発明で使用する
多糖類の代わりに製造例３で得られた本発明で使用する
多糖類を用いて、実施例８と同じ方法でクリームを調製
した。

【００６９】実施例１０（抗菌性化粧料の調製）実施例８において製造例２で得られた本発明で使用する
多糖類の代わりに製造例４で得られた本発明で使用する
多糖類を用いて、実施例８と同じ方法でクリームを調製
した。

【００７０】実施例１１（抗ウイルス製剤の調製）カルボキシメチルセルロースナトリウム塩、２００ｇと
ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、５０
ｇとをグリセリン、１０００ｇ、蒸留水、６．５Ｌに均
一に混合する。そこに、製造例３で得られた本発明で使
用する多糖類、２００ｇとポリオキシエチレンモノオレ
エート、１０ｇとを溶解した水溶液、２Ｌを添加し、よ
くかきまぜた後、蒸留水を加えて全量を１０Ｌにした。
得られたゲル様物をチューブに詰めて、抗ウイルス製剤
を調製した。

【００７１】実施例１２（抗ウイルス製剤の調製）実施例１１において、製造例３で得られた本発明で使用
する多糖類の代わりに製造例４で得られた本発明で使用
する多糖類を用いて、実施例１１と同じ方法で抗ウイル
ス製剤を調製した。

【００７２】上記各実施例の結果から、多糖類中のガラ
クツロン酸残基をＣｕ、Ｚｎ，Ａｇ型にすることによっ
て、本発明の抗ウイルス・菌剤は、プルランには認めら
れない抗ウイルス・菌性を持つようになることが明らか
である。

【００７３】

【発明の効果】以上説明した通り、本発明によれば従来
の抗ウイルス・菌剤にはない、多糖類を成分とする優れ
た性質を有する抗ウイルス・菌剤を提供することができ
る。本発明の抗ウイルス・菌剤は、医薬品分野における
抗ヘルペスウイルスホミニス（ＨＶＨ）剤、抗ヒトサイ
トメガロウイルス（ＨＣＭＶ）剤、抗白癬剤、抗歯垢
剤、創傷、火傷時の微生物感染予防・治療剤などや、化
粧品分野における抗フケ剤、にきび予防・治療剤、防腐
剤など、農業、林業分野における病害防除剤などに優れ
た効果がある。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ０１Ｎ 59/20 Ａ０１Ｎ 59/20 Ｚ 63/02 63/02 ＤＡ６１Ｋ 31/725 ＡＤＹＡ６１Ｋ 31/725 ＡＤＹＡＤＺＡＤＺ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】構成糖が、Ｄ−ガラクツロン酸、Ｌ−ラ
ムノースおよびＤ−グルコースの３種からなり、その構
成モル比が、Ｄ−ガラクツロン酸：Ｌ−ラムノース：Ｄ
−グルコース＝０．６〜１．０：０．８〜１．２：０．
８〜１．２である多糖類の抗菌性金属塩を有効成分とす
る抗ウイルス・菌剤。
【請求項２】多糖類の各構成糖の結合様式が実質的に
１、３結合（または１→３）であることを特徴とする請
求項１に記載の抗ウイルス・菌剤。
【請求項３】抗菌性金属が、銅、亜鉛、銀からなる群
のうちの少なくとも１種以上である請求項１〜２のいず
れか１項に記載の抗ウイルス・菌剤。
【請求項４】ゲルろ過クロマトグラフィーを用いて測
定した多糖類の分子量が、約５×１０³〜１０×１０⁶
である請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗ウイルス
・菌剤。
【請求項５】請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗
ウイルス・菌剤を含有する抗ウイルス・菌剤組成物。