JPH08173195A - エンテロウイルス７１型及びコクサッキーａ群ウイルス１６型の型鑑別方法並びにそれに用いるｄｎａプローブ及びｄｎａ断片 - Google Patents
エンテロウイルス７１型及びコクサッキーａ群ウイルス１６型の型鑑別方法並びにそれに用いるｄｎａプローブ及びｄｎａ断片Info
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- JPH08173195A JPH08173195A JP7268660A JP26866095A JPH08173195A JP H08173195 A JPH08173195 A JP H08173195A JP 7268660 A JP7268660 A JP 7268660A JP 26866095 A JP26866095 A JP 26866095A JP H08173195 A JPH08173195 A JP H08173195A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 高い精度でエンテロウイルス７１型（ＥＶ７
１）とコクサッキーＡ群ウイルス１６型（ＣＡ１６）の
型鑑別を可能にする。 【解決手段】 （ｉ）ＥＶ７１及びＣＡ１６の、５´非
翻訳領域の一部とエンテロウイルスの各血清型に特異的
なＤＮＡ配列を持つＶｐ４及びＶｐ２蛋白の一部をコー
ドするＤＮＡ領域を増幅し、（ii）該増幅ＤＮＡ中のＶ
ｐ４蛋白をコードするＤＮＡ領域のＤＮＡ配列を決定
し、（iii)該ＤＮＡ配列中のＥＶ７１及びＣＡ１６の各
血清型に特異的なＤＮＡ配列に基き、該ＤＮＡ配列に各
々相補性を有するＤＮＡ配列をそれぞれ設計してＤＮＡ
プローブとし、（iv）該ＤＮＡプローブと上記（ｉ）の
方法により得られる増幅ＤＮＡとの結合能を解析するこ
とによりＥＶ７１とＣＡ１６の型を鑑別する方法。
１）とコクサッキーＡ群ウイルス１６型（ＣＡ１６）の
型鑑別を可能にする。 【解決手段】 （ｉ）ＥＶ７１及びＣＡ１６の、５´非
翻訳領域の一部とエンテロウイルスの各血清型に特異的
なＤＮＡ配列を持つＶｐ４及びＶｐ２蛋白の一部をコー
ドするＤＮＡ領域を増幅し、（ii）該増幅ＤＮＡ中のＶ
ｐ４蛋白をコードするＤＮＡ領域のＤＮＡ配列を決定
し、（iii)該ＤＮＡ配列中のＥＶ７１及びＣＡ１６の各
血清型に特異的なＤＮＡ配列に基き、該ＤＮＡ配列に各
々相補性を有するＤＮＡ配列をそれぞれ設計してＤＮＡ
プローブとし、（iv）該ＤＮＡプローブと上記（ｉ）の
方法により得られる増幅ＤＮＡとの結合能を解析するこ
とによりＥＶ７１とＣＡ１６の型を鑑別する方法。
Description
【０００１】
【発明が属する技術分野】本発明は、エンテロウイルス
に属するエンテロウイルス７１型（以下これを「ＥＶ７
１」と略記することがある）及びコクサッキーＡ群ウイ
ルス１６型（以下これを「ＣＡ１６」と略記することが
ある）の鑑別方法、それに用いるＤＮＡプローブ、並び
にエンテロウイルス７１型及びコクサッキーＡ群ウイル
ス１６型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝子領域内の塩基
配列に関する。
に属するエンテロウイルス７１型（以下これを「ＥＶ７
１」と略記することがある）及びコクサッキーＡ群ウイ
ルス１６型（以下これを「ＣＡ１６」と略記することが
ある）の鑑別方法、それに用いるＤＮＡプローブ、並び
にエンテロウイルス７１型及びコクサッキーＡ群ウイル
ス１６型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝子領域内の塩基
配列に関する。
【０００２】
【従来の技術】ピコルナウイルス科（Picornaviridae）
に属するエンテロウイルス（Enterovirus)はおよそ７０
種類の血清型に分類されており、多彩な感染症を示すた
め、臨床症状から原因となるウイルスを推定することは
困難である。そのため、病原体を確定するにはウイルス
の分離同定が必要となる。しかし、現在のエンテロウイ
ルス分離同定法は、培養法を用いてウイルスを分離し、
同定のためには更に中和試験が必要である。そしてこれ
らのウイルスの分離培養には、２〜４週間が必要であ
る。更に、標準株の中和抗血清を使用した中和試験にお
いては、血清型鑑別不可能な分離株が頻繁に出現する。
これはエンテロウイルスの遺伝子が自然界ではきわめて
高速で変異をするためと考えられており、これらの解決
には常に新鮮分離株を中和する抗血清の作製が必要とな
る。
に属するエンテロウイルス（Enterovirus)はおよそ７０
種類の血清型に分類されており、多彩な感染症を示すた
め、臨床症状から原因となるウイルスを推定することは
困難である。そのため、病原体を確定するにはウイルス
の分離同定が必要となる。しかし、現在のエンテロウイ
ルス分離同定法は、培養法を用いてウイルスを分離し、
同定のためには更に中和試験が必要である。そしてこれ
らのウイルスの分離培養には、２〜４週間が必要であ
る。更に、標準株の中和抗血清を使用した中和試験にお
いては、血清型鑑別不可能な分離株が頻繁に出現する。
これはエンテロウイルスの遺伝子が自然界ではきわめて
高速で変異をするためと考えられており、これらの解決
には常に新鮮分離株を中和する抗血清の作製が必要とな
る。
【０００３】高感度、特異的にＤＮＡを増幅するポリメ
ラーゼ・チェイン・リアクション法〔Polymerase Chain
Reaction 法、以下これを「ＰＣＲ法」と略記する；Sa
ikiら, Science, 230巻, p.1350-1354, 1985 年参照〕
が開発されてから、エンテロウイルスは、５´非翻訳領
域の塩基配列に相補的なプライマーを用いたＰＣＲ法
や、５´非翻訳領域内、Ｖｐ４とＶｐ２蛋白をコードす
る遺伝子領域の塩基配列に相補性を有するプライマーを
用いたＰＣＲ法で検出されている〔Rotbart, H.,5. J.
Clinical Microbiology, 28, 438-442(1990) ; Olive,
D. M., 5 J. General Virology, 71, 2141-2147(199
0)〕。
ラーゼ・チェイン・リアクション法〔Polymerase Chain
Reaction 法、以下これを「ＰＣＲ法」と略記する；Sa
ikiら, Science, 230巻, p.1350-1354, 1985 年参照〕
が開発されてから、エンテロウイルスは、５´非翻訳領
域の塩基配列に相補的なプライマーを用いたＰＣＲ法
や、５´非翻訳領域内、Ｖｐ４とＶｐ２蛋白をコードす
る遺伝子領域の塩基配列に相補性を有するプライマーを
用いたＰＣＲ法で検出されている〔Rotbart, H.,5. J.
Clinical Microbiology, 28, 438-442(1990) ; Olive,
D. M., 5 J. General Virology, 71, 2141-2147(199
0)〕。
【０００４】さらに、ＰＣＲにより増幅されたＤＮＡを
用いたストリンジェント・リバース固相ハイブリダイゼ
ーション法によるエンテロウイルスの型同定が報告され
ている〔石古博昭等、臨床とウイルス、22 巻、ページ
199-207 (1994) 〕。しかし、本実験では、同一血清型
の中でも年代や地域の違いによりターゲット遺伝子とプ
ローブとの反応性が異なり、特定のウイルス株をプロー
ブに選定することが困難であると予想される。エンテロ
ウイルスによる疾患のなかで、手足口病はその患者から
分離されるウイルスがＥＶ７１とＣＡ１６で９０％以上
を占めるので、２種の血清型を迅速にかつ簡易に検出す
ることにより手足口病の流行ウイルスを同定することが
可能である。
用いたストリンジェント・リバース固相ハイブリダイゼ
ーション法によるエンテロウイルスの型同定が報告され
ている〔石古博昭等、臨床とウイルス、22 巻、ページ
199-207 (1994) 〕。しかし、本実験では、同一血清型
の中でも年代や地域の違いによりターゲット遺伝子とプ
ローブとの反応性が異なり、特定のウイルス株をプロー
ブに選定することが困難であると予想される。エンテロ
ウイルスによる疾患のなかで、手足口病はその患者から
分離されるウイルスがＥＶ７１とＣＡ１６で９０％以上
を占めるので、２種の血清型を迅速にかつ簡易に検出す
ることにより手足口病の流行ウイルスを同定することが
可能である。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、ＥＶ７１と
ＣＡ１６を高い精度で型鑑別できる方法の提供を目的と
する。
ＣＡ１６を高い精度で型鑑別できる方法の提供を目的と
する。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成すべく鋭意検討を重ねた結果、ＥＶ７１及びＣＡ
１６のＶｐ４蛋白をコードする遺伝子領域の塩基配列中
に、各血清型に特異的な塩基配列があり、該塩基配列を
用いてＥＶ７１とＣＡ１６が高い精度で鑑別可能である
ことを見い出し、本発明を完成するに至った。即ち本発
明は、下記１〜６に記載のエンテロウイルス７１型及び
コクサッキーＡ群ウイルス１６型の型鑑別方法、それに
用いるＤＮＡプローブ及びＤＮＡ断片を提供するもので
ある。
を達成すべく鋭意検討を重ねた結果、ＥＶ７１及びＣＡ
１６のＶｐ４蛋白をコードする遺伝子領域の塩基配列中
に、各血清型に特異的な塩基配列があり、該塩基配列を
用いてＥＶ７１とＣＡ１６が高い精度で鑑別可能である
ことを見い出し、本発明を完成するに至った。即ち本発
明は、下記１〜６に記載のエンテロウイルス７１型及び
コクサッキーＡ群ウイルス１６型の型鑑別方法、それに
用いるＤＮＡプローブ及びＤＮＡ断片を提供するもので
ある。
【０００７】１．（ｉ）エンテロウイルス７１型及びコ
クサッキーＡ群ウイルス１６型の、５´非翻訳領域の一
部とエンテロウイルスの血清型に特異的なＤＮＡ配列を
持つＶｐ４及びＶｐ２蛋白の一部をコードするＤＮＡ領
域を増幅し、（ii）該増幅ＤＮＡ中のＶｐ４蛋白をコー
ドするＤＮＡ領域のＤＮＡ配列を決定し、（iii)該ＤＮ
Ａ配列中のエンテロウイルス７１型及びコクサッキーＡ
群ウイルス１６型の各血清型に特異的なＤＮＡ配列に基
き、該ＤＮＡ配列に各々相補性を有するＤＮＡ配列をそ
れぞれ設計してＤＮＡプローブとし、（iv）該ＤＮＡプ
ローブと上記（ｉ）の方法により得られる増幅ＤＮＡと
の結合能を解析することを特徴とするエンテロウイルス
７１型及びコクサッキーＡ群ウイルス１６型の型鑑別方
法。
クサッキーＡ群ウイルス１６型の、５´非翻訳領域の一
部とエンテロウイルスの血清型に特異的なＤＮＡ配列を
持つＶｐ４及びＶｐ２蛋白の一部をコードするＤＮＡ領
域を増幅し、（ii）該増幅ＤＮＡ中のＶｐ４蛋白をコー
ドするＤＮＡ領域のＤＮＡ配列を決定し、（iii)該ＤＮ
Ａ配列中のエンテロウイルス７１型及びコクサッキーＡ
群ウイルス１６型の各血清型に特異的なＤＮＡ配列に基
き、該ＤＮＡ配列に各々相補性を有するＤＮＡ配列をそ
れぞれ設計してＤＮＡプローブとし、（iv）該ＤＮＡプ
ローブと上記（ｉ）の方法により得られる増幅ＤＮＡと
の結合能を解析することを特徴とするエンテロウイルス
７１型及びコクサッキーＡ群ウイルス１６型の型鑑別方
法。
【０００８】２．増幅ＤＮＡ中のエンテロウイルス７１
型のＶｐ４蛋白をコードするＤＮＡ領域と相補性を有す
るＤＮＡ配列が、配列番号３１、配列番号３３、配列番
号３５、配列番号３７又は配列番号４１で示されるＤＮ
Ａ配列であり、増幅ＤＮＡ中のコクサッキーＡ群ウイル
ス１６型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝子領域と相補性
を有するＤＮＡ配列が、配列番号３２、配列番号３４、
配列番号３６、配列番号３８、配列番号３９又は配列番
号４０で示されるＤＮＡ配列である、上記１記載の方
法。 ３．配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列
番号３７又は配列番号４１で示されるＤＮＡ配列を含
む、エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする
ＤＮＡ領域の増幅ＤＮＡと相補性を有するＤＮＡプロー
ブ。
型のＶｐ４蛋白をコードするＤＮＡ領域と相補性を有す
るＤＮＡ配列が、配列番号３１、配列番号３３、配列番
号３５、配列番号３７又は配列番号４１で示されるＤＮ
Ａ配列であり、増幅ＤＮＡ中のコクサッキーＡ群ウイル
ス１６型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝子領域と相補性
を有するＤＮＡ配列が、配列番号３２、配列番号３４、
配列番号３６、配列番号３８、配列番号３９又は配列番
号４０で示されるＤＮＡ配列である、上記１記載の方
法。 ３．配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列
番号３７又は配列番号４１で示されるＤＮＡ配列を含
む、エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする
ＤＮＡ領域の増幅ＤＮＡと相補性を有するＤＮＡプロー
ブ。
【０００９】４．配列番号３２、配列番号３４、配列番
号３６、配列番号３８、配列番号３９又は配列番号４０
で示されるＤＮＡ配列を含む、コクサッキーＡ群ウイル
ス１６型のＶｐ４蛋白をコードするＤＮＡ領域の増幅Ｄ
ＮＡと相補性を有するＤＮＡプローブ。 ５．エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白であって、そ
のアミノ酸配列中に配列番号１で示されるアミノ酸配列
を含む蛋白をコードするＤＮＡ断片。 ６．コクサッキーＡ群ウイルス１６型のＶｐ４蛋白であ
って、そのアミノ酸配列中に配列番号２で示されるアミ
ノ酸配列を含む蛋白をコードするＤＮＡ断片。以下、本
発明について更に詳細について説明する。
号３６、配列番号３８、配列番号３９又は配列番号４０
で示されるＤＮＡ配列を含む、コクサッキーＡ群ウイル
ス１６型のＶｐ４蛋白をコードするＤＮＡ領域の増幅Ｄ
ＮＡと相補性を有するＤＮＡプローブ。 ５．エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白であって、そ
のアミノ酸配列中に配列番号１で示されるアミノ酸配列
を含む蛋白をコードするＤＮＡ断片。 ６．コクサッキーＡ群ウイルス１６型のＶｐ４蛋白であ
って、そのアミノ酸配列中に配列番号２で示されるアミ
ノ酸配列を含む蛋白をコードするＤＮＡ断片。以下、本
発明について更に詳細について説明する。
【００１０】本発明の実施においては、特に指示されな
い限り当該分野の技術範囲内にある分子生物学、微生物
学、組換えＤＮＡ、及び免疫学に於ける従来の手法が採
用される。このような手法は文献中に詳しく説明されて
いる。例えば次のような文献を参照されたい。Maniati
s, Fitsch及び Sambrook, MOLECULAR CLONING ; A LABO
RATORY MANUAL (1982) ; Kevin struhlら, CURRENT PRO
TOCOLS IN MORECULAR BIOLOGY, １巻及び２巻；村松正
實編、ラボマニュアル遺伝子工学 (1990) ; 村松正實
岡山博人編、遺伝子工学ハンドブック、実験医学 別冊
(1991) ；東京大学医科学研究所制癌研究部編、細胞工
学実験プロトコール (1991) 。
い限り当該分野の技術範囲内にある分子生物学、微生物
学、組換えＤＮＡ、及び免疫学に於ける従来の手法が採
用される。このような手法は文献中に詳しく説明されて
いる。例えば次のような文献を参照されたい。Maniati
s, Fitsch及び Sambrook, MOLECULAR CLONING ; A LABO
RATORY MANUAL (1982) ; Kevin struhlら, CURRENT PRO
TOCOLS IN MORECULAR BIOLOGY, １巻及び２巻；村松正
實編、ラボマニュアル遺伝子工学 (1990) ; 村松正實
岡山博人編、遺伝子工学ハンドブック、実験医学 別冊
(1991) ；東京大学医科学研究所制癌研究部編、細胞工
学実験プロトコール (1991) 。
【００１１】１．エンテロウイルス７１型及びコクサッ
キーＡ群ウイルス１６型の５´非翻訳領域の一部とエン
テロウイルスの血清型に特異的な塩基配列を持つＶｐ４
及びＶｐ２蛋白の一部をコードする遺伝子領域の増幅 エンテロウイルス７１型及びコクサッキーＡ群ウイルス
１６型の５´非翻訳領域の一部とエンテロウイルスの血
清型に特異的な塩基配列を持つＶｐ４及びＶｐ２蛋白の
一部をコードする遺伝子領域（以下これを「エンテロウ
イルスの血清型特異的塩基配列を含む遺伝子領域」と略
称することがある）の増幅は、次のとおり行うことがで
きる。
キーＡ群ウイルス１６型の５´非翻訳領域の一部とエン
テロウイルスの血清型に特異的な塩基配列を持つＶｐ４
及びＶｐ２蛋白の一部をコードする遺伝子領域の増幅 エンテロウイルス７１型及びコクサッキーＡ群ウイルス
１６型の５´非翻訳領域の一部とエンテロウイルスの血
清型に特異的な塩基配列を持つＶｐ４及びＶｐ２蛋白の
一部をコードする遺伝子領域（以下これを「エンテロウ
イルスの血清型特異的塩基配列を含む遺伝子領域」と略
称することがある）の増幅は、次のとおり行うことがで
きる。
【００１２】先ず、血清型が既知のエンテロウイルス分
離培養株、継代培養されている血清型が既知のエンテロ
ウイルス標準株等から常法によりＲＮＡを抽出し、この
抽出ＲＮＡから、逆転写酵素を用いｃＤＮＡを作製す
る。このｃＤＮＡにエンテロウイルスの血清型特異的塩
基配列を含む遺伝子領域の上流の型共通部分及び下流の
型共通部分に相補性を有するオリゴヌクレオチドをプラ
イマーとして加えて、エンテロウイルス７１型及びコク
サッキーＡ群ウイルス１６型の５´非翻訳領域、Ｖｐ４
とＶｐ２をコードする遺伝子領域を含む長さが約６５０
塩基の遺伝子ＤＮＡ領域を増幅する。
離培養株、継代培養されている血清型が既知のエンテロ
ウイルス標準株等から常法によりＲＮＡを抽出し、この
抽出ＲＮＡから、逆転写酵素を用いｃＤＮＡを作製す
る。このｃＤＮＡにエンテロウイルスの血清型特異的塩
基配列を含む遺伝子領域の上流の型共通部分及び下流の
型共通部分に相補性を有するオリゴヌクレオチドをプラ
イマーとして加えて、エンテロウイルス７１型及びコク
サッキーＡ群ウイルス１６型の５´非翻訳領域、Ｖｐ４
とＶｐ２をコードする遺伝子領域を含む長さが約６５０
塩基の遺伝子ＤＮＡ領域を増幅する。
【００１３】遺伝子の増幅は、通常用いられるＰＣＲ法
〔このＰＣＲ法の詳細については、特開昭６１−２７４
６９７号公報、特開昭６２−２８１号公報、Sakai ら S
cience 239巻, p.487-491 参照〕により容易に行うこと
ができる。エンテロウイルスの血清型特異的塩基配列を
含む遺伝子領域の増幅に際して、プライマーとして用い
ることができるオリゴヌクレオチド（以下これを「血清
型共通プライマー」と略称することがある）としては、
血清型特異的塩基配列を含む遺伝子領域の上流の型共通
部分及び下流の型共通部分に相補性を有するオリゴヌク
レオチドを同時に用いるのであれば、いかなるオリゴヌ
クレオチドであってもよい。それらの中で、好ましくは
既知の血清型特異的塩基配列データをもとに、エンテロ
ウイルスに特異的でかつ種間で共通性の高い塩基配列を
５´非翻訳領域（上流の型共通部分）とＶｐ２領域（下
流の型共通部分）に設定し、その塩基配列に基いて化学
合成したオリゴヌクレオチドをプライマーとして用いる
のが適当である。
〔このＰＣＲ法の詳細については、特開昭６１−２７４
６９７号公報、特開昭６２−２８１号公報、Sakai ら S
cience 239巻, p.487-491 参照〕により容易に行うこと
ができる。エンテロウイルスの血清型特異的塩基配列を
含む遺伝子領域の増幅に際して、プライマーとして用い
ることができるオリゴヌクレオチド（以下これを「血清
型共通プライマー」と略称することがある）としては、
血清型特異的塩基配列を含む遺伝子領域の上流の型共通
部分及び下流の型共通部分に相補性を有するオリゴヌク
レオチドを同時に用いるのであれば、いかなるオリゴヌ
クレオチドであってもよい。それらの中で、好ましくは
既知の血清型特異的塩基配列データをもとに、エンテロ
ウイルスに特異的でかつ種間で共通性の高い塩基配列を
５´非翻訳領域（上流の型共通部分）とＶｐ２領域（下
流の型共通部分）に設定し、その塩基配列に基いて化学
合成したオリゴヌクレオチドをプライマーとして用いる
のが適当である。
【００１４】上記プライマーの具体例としては、D.M. O
live et al, Journal of General Virology 71巻、ペー
ジ 2141-2147 (1990) に記載されている配列番号２７及
び配列番号２８で示されるオリゴヌクレオチド、本願発
明者らが先に提案した特開平６−３１１９００号明細書
に記載されている配列番号２９及び配列番号３０で示さ
れるオリゴヌクレオチドを挙げることができる。これら
プライマーの中で、５´末端側のプライマーとして配列
番号２９で示されるオリゴヌクレオチド、３´末端側の
プライマーとして配列番号２８で示されるオリゴヌクレ
オチドを同時に用いるのが適当である。
live et al, Journal of General Virology 71巻、ペー
ジ 2141-2147 (1990) に記載されている配列番号２７及
び配列番号２８で示されるオリゴヌクレオチド、本願発
明者らが先に提案した特開平６−３１１９００号明細書
に記載されている配列番号２９及び配列番号３０で示さ
れるオリゴヌクレオチドを挙げることができる。これら
プライマーの中で、５´末端側のプライマーとして配列
番号２９で示されるオリゴヌクレオチド、３´末端側の
プライマーとして配列番号２８で示されるオリゴヌクレ
オチドを同時に用いるのが適当である。
【００１５】上記したプライマーは、それ自体既知の通
常用いられる核酸合成装置、例えばアプライド・バイオ
システムズ（Applied Biosystems）社製、モデル３８１
−ＡＤＮＡ合成機等を用いる固相合成法により、容易に
化学合成することができる。上記増幅ＤＮＡは、常法、
例えば、アガロースゲル電気泳動法により分離し、ＤＮ
Ａバンドとして検出することができ、これによりエンテ
ロウイルス７１型及びコクサッキーＡ群ウイルス１６型
由来の遺伝子ＤＮＡを確認することができる。
常用いられる核酸合成装置、例えばアプライド・バイオ
システムズ（Applied Biosystems）社製、モデル３８１
−ＡＤＮＡ合成機等を用いる固相合成法により、容易に
化学合成することができる。上記増幅ＤＮＡは、常法、
例えば、アガロースゲル電気泳動法により分離し、ＤＮ
Ａバンドとして検出することができ、これによりエンテ
ロウイルス７１型及びコクサッキーＡ群ウイルス１６型
由来の遺伝子ＤＮＡを確認することができる。
【００１６】２．増幅ＤＮＡ中のＶｐ４蛋白をコードす
る遺伝子領域の塩基配列の決定 上記増幅ＤＮＡの塩基配列は、例えば、アプライド・バ
イオシステムズ社製、モデル３７３−Ａ オートシーク
エンサーを用い、Dye DeoxyTM ターミネーター法により
決定することができる。決定された塩基配列中の翻訳開
始コドン及びエンテロウイルスの既知のＶｐ４蛋白及び
Ｖｐ２蛋白を切断するアミノ酸配列に対応する塩基配列
〔蛋白質 核酸酵素、 137巻、14号、ページ 2609-2618
(1992) 参照〕を探索することにより、Ｖｐ４蛋白をコ
ードする遺伝子領域の塩基配列を決定することができ
る。
る遺伝子領域の塩基配列の決定 上記増幅ＤＮＡの塩基配列は、例えば、アプライド・バ
イオシステムズ社製、モデル３７３−Ａ オートシーク
エンサーを用い、Dye DeoxyTM ターミネーター法により
決定することができる。決定された塩基配列中の翻訳開
始コドン及びエンテロウイルスの既知のＶｐ４蛋白及び
Ｖｐ２蛋白を切断するアミノ酸配列に対応する塩基配列
〔蛋白質 核酸酵素、 137巻、14号、ページ 2609-2618
(1992) 参照〕を探索することにより、Ｖｐ４蛋白をコ
ードする遺伝子領域の塩基配列を決定することができ
る。
【００１７】かくして得られるＥＶ７１のＶｐ４蛋白を
コードする遺伝子領域の配列を配列番号３〜配列番号２
１に、そのアミノ酸配列の組合せを配列番号１に示す。
また、ＣＡ１６のＶｐ４蛋白をコードする遺伝子領域の
配列を配列番号２２〜配列番号２６に、そのアミノ酸配
列の組合せを配列番号２に示す。上記塩基配列を包含す
る本発明のＤＮＡ断片は、ＥＶ７１及びＣＡ１６分離株
のＲＮＡから合成されたｃＤＮＡのみならず、通常用い
られるＤＮＡ合成装置、例えば上記アプライド・バイオ
システムズ社製、モデル３８１−Ａ ＤＮＡ合成機を用
いて合成されたものであってよい。
コードする遺伝子領域の配列を配列番号３〜配列番号２
１に、そのアミノ酸配列の組合せを配列番号１に示す。
また、ＣＡ１６のＶｐ４蛋白をコードする遺伝子領域の
配列を配列番号２２〜配列番号２６に、そのアミノ酸配
列の組合せを配列番号２に示す。上記塩基配列を包含す
る本発明のＤＮＡ断片は、ＥＶ７１及びＣＡ１６分離株
のＲＮＡから合成されたｃＤＮＡのみならず、通常用い
られるＤＮＡ合成装置、例えば上記アプライド・バイオ
システムズ社製、モデル３８１−Ａ ＤＮＡ合成機を用
いて合成されたものであってよい。
【００１８】３．ＤＮＡプローブの設計及び合成 エンテロウイルス７１型の特異的な塩基配列に相補性を
有するＤＮＡプローブ（以下これを「ＥＶ７１特異プロ
ーブ」と略称することがある）の塩基配列は、前記配列
番号３〜配列番号２１で示される配列中のＥＶ７１に特
異的な配列を解析することにより設計することができ
る。同様に、コクサッキーＡ群ウイルス１６型の特異的
な塩基配列に相補性を有するＤＮＡプローブ（以下これ
を「ＣＡ１６特異プローブ」と略称することがある）の
塩基配列は、前記配列番号２２〜配列番号２６で示され
る配列中の、ＣＡ１６に特異的な配列を解析することに
より設計することができる。
有するＤＮＡプローブ（以下これを「ＥＶ７１特異プロ
ーブ」と略称することがある）の塩基配列は、前記配列
番号３〜配列番号２１で示される配列中のＥＶ７１に特
異的な配列を解析することにより設計することができ
る。同様に、コクサッキーＡ群ウイルス１６型の特異的
な塩基配列に相補性を有するＤＮＡプローブ（以下これ
を「ＣＡ１６特異プローブ」と略称することがある）の
塩基配列は、前記配列番号２２〜配列番号２６で示され
る配列中の、ＣＡ１６に特異的な配列を解析することに
より設計することができる。
【００１９】かくして得られるＥＶ７１特異プローブと
しては、例えば、配列番号３１、配列番号３３、配列番
号３５、配列番号３７又は配列番号４１で示されるオリ
ゴヌクレオチド、ＣＡ１６特異プローブとしては、例え
ば、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列
番号３８、配列番号３９又は配列番号４０で示されるオ
リゴヌクレオチドを挙げることができる。上記した血清
型特異プローブのうち、好ましくは、ＥＶ７１特異プロ
ーブとして配列番号３１及び配列番号４１、ＣＡ１６特
異プローブとして配列番号３２、配列番号３９及び配列
番号４０で示されるオリゴヌクレオチドを挙げることが
できる。上記ＤＮＡプローブは、それ自体既知の通常用
いられる核酸合成装置、例えば、アプライド・バイオシ
ステムズ社製、モデル３８１−Ａ ＤＮＡ合成機等を用
いる固相合成法により、容易に化学合成することができ
る。
しては、例えば、配列番号３１、配列番号３３、配列番
号３５、配列番号３７又は配列番号４１で示されるオリ
ゴヌクレオチド、ＣＡ１６特異プローブとしては、例え
ば、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列
番号３８、配列番号３９又は配列番号４０で示されるオ
リゴヌクレオチドを挙げることができる。上記した血清
型特異プローブのうち、好ましくは、ＥＶ７１特異プロ
ーブとして配列番号３１及び配列番号４１、ＣＡ１６特
異プローブとして配列番号３２、配列番号３９及び配列
番号４０で示されるオリゴヌクレオチドを挙げることが
できる。上記ＤＮＡプローブは、それ自体既知の通常用
いられる核酸合成装置、例えば、アプライド・バイオシ
ステムズ社製、モデル３８１−Ａ ＤＮＡ合成機等を用
いる固相合成法により、容易に化学合成することができ
る。
【００２０】４．エンテロウイルス７１型及びコクサッ
キーウイルス１６型の型鑑別 上記した、血清型特異プローブを用いて、次のとおり、
ＥＶ７１及びＣＡ１６を鑑別することができる。先ず、
診察時に採取した臨床検体からのウイルス分離培養株か
ら、常法によりウイルスＲＮＡを抽出する。該抽出ＲＮ
ＡからｃＤＮＡを合成後、前記血清型共通プライマーを
用いて、エンテロウイルスの５´非翻訳領域の一部、Ｖ
ｐ４及びＶｐ２蛋白の一部をコードする遺伝子領域を、
前記ＰＣＲ法により増幅する。増幅ＤＮＡの検出は、ア
ガロース電気泳動により増幅ＤＮＡを分離し、適当な染
色剤、例えばエチジウム・ブロマイド等で染色後、紫外
線照射等により発色させ、そのＤＮＡバンドを確認する
ことにより行うことができる。
キーウイルス１６型の型鑑別 上記した、血清型特異プローブを用いて、次のとおり、
ＥＶ７１及びＣＡ１６を鑑別することができる。先ず、
診察時に採取した臨床検体からのウイルス分離培養株か
ら、常法によりウイルスＲＮＡを抽出する。該抽出ＲＮ
ＡからｃＤＮＡを合成後、前記血清型共通プライマーを
用いて、エンテロウイルスの５´非翻訳領域の一部、Ｖ
ｐ４及びＶｐ２蛋白の一部をコードする遺伝子領域を、
前記ＰＣＲ法により増幅する。増幅ＤＮＡの検出は、ア
ガロース電気泳動により増幅ＤＮＡを分離し、適当な染
色剤、例えばエチジウム・ブロマイド等で染色後、紫外
線照射等により発色させ、そのＤＮＡバンドを確認する
ことにより行うことができる。
【００２１】ＥＶ７１とＣＡ１６の型鑑別は、前記血清
型共通プライマーを用いて増幅したＤＮＡ断片と、前記
血清型特異ＤＮＡプローブ、すなわちＥＶ７１の検出に
は、例えば配列番号３１、配列番号３３、配列番号３
５、配列番号３７及び配列番号４１で示される配列を、
またＣＡ１６の検出には、例えば配列番号３２、配列番
号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号３９及
び配列番号４０で示される配列を有するオリゴヌクレオ
チドを標識することにより作製したＤＮＡプローブと
を、固相上で常法によりハイブリダイズさせ、血清型特
異ＤＮＡプローブの種類を検出解析することにより行う
ことができる。
型共通プライマーを用いて増幅したＤＮＡ断片と、前記
血清型特異ＤＮＡプローブ、すなわちＥＶ７１の検出に
は、例えば配列番号３１、配列番号３３、配列番号３
５、配列番号３７及び配列番号４１で示される配列を、
またＣＡ１６の検出には、例えば配列番号３２、配列番
号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号３９及
び配列番号４０で示される配列を有するオリゴヌクレオ
チドを標識することにより作製したＤＮＡプローブと
を、固相上で常法によりハイブリダイズさせ、血清型特
異ＤＮＡプローブの種類を検出解析することにより行う
ことができる。
【００２２】固相上へのＤＮＡの結合は、それ自体既知
の通常用いられる方法、例えば、増幅ＤＮＡを変性後、
適当な固相、例えばナイロンメンブレンに、常法により
化学結合させることにより行うことができるが、好まし
くは、増幅ＤＮＡを確認するために使用した上記アガロ
ースゲルを変性後、中和し、例えばナイロンメンブレン
に増幅ＤＮＡをトランスファー後固定する方法（以下こ
れを「サザンブロッティング法」と略称することがあ
る）が挙げられる。
の通常用いられる方法、例えば、増幅ＤＮＡを変性後、
適当な固相、例えばナイロンメンブレンに、常法により
化学結合させることにより行うことができるが、好まし
くは、増幅ＤＮＡを確認するために使用した上記アガロ
ースゲルを変性後、中和し、例えばナイロンメンブレン
に増幅ＤＮＡをトランスファー後固定する方法（以下こ
れを「サザンブロッティング法」と略称することがあ
る）が挙げられる。
【００２３】ＤＮＡプローブの標識は、５´末端のリン
酸化反応により〔γ−32Ｐ〕ＡＴＰ、Ｔ４ポリヌクレオ
チドキナーゼ（東洋紡績社製）を用いて行うことができ
る。また、標識物の検出は、標識されたＤＮＡプローブ
とのハイブリダイゼーションを行ったナイロンメンブレ
ンのオートラジオグラフィーを行い、各々のＤＮＡプロ
ーブとのハイブリッド形成の有無を調べることにより行
うことができる。
酸化反応により〔γ−32Ｐ〕ＡＴＰ、Ｔ４ポリヌクレオ
チドキナーゼ（東洋紡績社製）を用いて行うことができ
る。また、標識物の検出は、標識されたＤＮＡプローブ
とのハイブリダイゼーションを行ったナイロンメンブレ
ンのオートラジオグラフィーを行い、各々のＤＮＡプロ
ーブとのハイブリッド形成の有無を調べることにより行
うことができる。
【００２４】上記した、本発明で用いられるエンテロウ
イルスの血清型特異的ＤＮＡ配列を含む遺伝子領域、即
ち、エンテロウイルスの５´非翻訳領域の一部とＶｐ４
及びＶｐ２蛋白の一部をコードする領域、血清型共通プ
ライマー、ＤＮＡプローブ、該プライマーを用いて増幅
可能なＤＮＡ断片等の一例を、図１７に示す。図中、２
桁の数字は配列番号、（ ）内の数字はＤＮＡプローブ
が結合するＶｐ４蛋白をコードする遺伝子領域の位置
（塩基対番号）、〔 〕内の数字は増幅されるＤＮＡ断
片の大きさ、ｂｐは塩基対を示す。
イルスの血清型特異的ＤＮＡ配列を含む遺伝子領域、即
ち、エンテロウイルスの５´非翻訳領域の一部とＶｐ４
及びＶｐ２蛋白の一部をコードする領域、血清型共通プ
ライマー、ＤＮＡプローブ、該プライマーを用いて増幅
可能なＤＮＡ断片等の一例を、図１７に示す。図中、２
桁の数字は配列番号、（ ）内の数字はＤＮＡプローブ
が結合するＶｐ４蛋白をコードする遺伝子領域の位置
（塩基対番号）、〔 〕内の数字は増幅されるＤＮＡ断
片の大きさ、ｂｐは塩基対を示す。
【００２５】
【実施例】次に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説
明するが、下記の実施例は本発明について具体的な認識
を得る一助としてのみ挙げたものであり、これによって
本発明の範囲は何等限定されるものではない。
明するが、下記の実施例は本発明について具体的な認識
を得る一助としてのみ挙げたものであり、これによって
本発明の範囲は何等限定されるものではない。
【００２６】実施例１ ＥＶ７１とＣＡ１６分離培養株
のシークエンス （Ａ）使用微生物 下記の、患者より分離され特異抗血清を用いた中和試験
により血清型が同定されたエンテロウイルス分離株及び
標準株を用いて実験を行った。ここで用いた標準株は、
国立予防衛生研究所において継代培養されているウイル
ス標準株である。
のシークエンス （Ａ）使用微生物 下記の、患者より分離され特異抗血清を用いた中和試験
により血清型が同定されたエンテロウイルス分離株及び
標準株を用いて実験を行った。ここで用いた標準株は、
国立予防衛生研究所において継代培養されているウイル
ス標準株である。
【００２７】 （１）エンテロウイルス分離株 株名（血清型） 分離時期 コクサッキーＡ群ウイルス１６型（ＣＡ１６） １５４７／７９ １９７９年 ４０５７／８１ １９８１年 ０２１６／８６ １９８６年 ０２４１／９１ １９９１年 エンテロウイルス７１型（ＥＶ７１） ナゴヤ／７０ １９７０年 ０１０８／７８ １９７８年 ３０５９／７８ １９７８年 ３３５９／８３ １９８３年 ４１３２／８５ １９８５年 Ｔ８６２３６ａ／８６ １９８６年 １０９１／８９ １９８９年 ０４４５／９０ １９９０年 ０００４／７８ １９７８年 １０９６／８６ １９８６年 ０８７２／８９ １９８９年 ２５８７／８９ １９８９年 ２６０３／８９ １９８９年 ０３７５／９０ １９９０年 ２１３６／９０ １９９０年 ２３９８／９０ １９９０年 ４０９４／９０ １９９０年 ０４１９／９０ １９９０年
【００２８】（２）標準株株名（血清型） 分離時期 コクサッキーＡ群ウイルス １６型（ＣＡ１６） エンテロウイルス ７１型（ＥＶ７１）
【００２９】（Ｂ）ＲＮＡの抽出 上記ウイルス液から、スマイテストＲキット（住友金属
社製）にてＲＮＡを抽出し、イソプロパノール沈澱を行
った。 （Ｃ）ｃＤＮＡの合成 上記（Ｂ）項で得たＲＮＡを鋳型としてリバーストラン
スクリプターゼ（ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ社製）を用いて、
各ウイルスに由来するｃＤＮＡを合成した。 （Ｄ）ＰＣＲ用のプライマーの合成 配列番号２８及び配列番号２９で示されるオリゴヌクレ
オチドをホスホアミダイド（Phosphoamidide）法によ
り、アプライド・バイオシステムズ社製、モデル３８１
−Ａ ＤＮＡ合成機を用いて合成した。上記オリゴヌク
レオチドをＯＰＣTMカートリッジを用いて精製し、ＰＣ
Ｒのプライマーとして使用した。
社製）にてＲＮＡを抽出し、イソプロパノール沈澱を行
った。 （Ｃ）ｃＤＮＡの合成 上記（Ｂ）項で得たＲＮＡを鋳型としてリバーストラン
スクリプターゼ（ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ社製）を用いて、
各ウイルスに由来するｃＤＮＡを合成した。 （Ｄ）ＰＣＲ用のプライマーの合成 配列番号２８及び配列番号２９で示されるオリゴヌクレ
オチドをホスホアミダイド（Phosphoamidide）法によ
り、アプライド・バイオシステムズ社製、モデル３８１
−Ａ ＤＮＡ合成機を用いて合成した。上記オリゴヌク
レオチドをＯＰＣTMカートリッジを用いて精製し、ＰＣ
Ｒのプライマーとして使用した。
【００３０】（Ｅ）標的ＤＮＡの増幅（ＰＣＲ法） 反応液は、終濃度を１０mM Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ（pH８．
０）、５０mM ＫＣｌ、０．００１％ゼラチン、０．５
５mM ＭｇＣｌ2 、０．０５mM ｄＮＴＰｓ、２．５％
ホルムアミドとした溶液に、上記オリゴヌクレオチド合
成プライマー（配列番号２８及び配列番号２９；各５０
μM ）各０．１μl 、前記（Ｃ）項で合成されたエンテ
ロウイルスｃＤＮＡ １００ng〜１μg 、及びＴａｑポ
リメラーゼ（日本ロッシュ社製）０．１２５μl （０．
６２５U ）を加え、計５０μl としたものを調製した。
ＰＣＲは、９５℃３０秒、５５℃３０秒の反応条件で、
１４サイクルでアンプリフィケーションシステム（Ampl
ification System；シータス社）を用いて標的ＤＮＡを
増幅した。
０）、５０mM ＫＣｌ、０．００１％ゼラチン、０．５
５mM ＭｇＣｌ2 、０．０５mM ｄＮＴＰｓ、２．５％
ホルムアミドとした溶液に、上記オリゴヌクレオチド合
成プライマー（配列番号２８及び配列番号２９；各５０
μM ）各０．１μl 、前記（Ｃ）項で合成されたエンテ
ロウイルスｃＤＮＡ １００ng〜１μg 、及びＴａｑポ
リメラーゼ（日本ロッシュ社製）０．１２５μl （０．
６２５U ）を加え、計５０μl としたものを調製した。
ＰＣＲは、９５℃３０秒、５５℃３０秒の反応条件で、
１４サイクルでアンプリフィケーションシステム（Ampl
ification System；シータス社）を用いて標的ＤＮＡを
増幅した。
【００３１】さらに、上記溶液に、終濃度を１０mM Ｔ
ｒｉｓ・ＨＣｌ（pH８．０）、５０mM ＫＣｌ、０．０
０１％ゼラチン、２．３５mM ＭｇＣｌ2 、０．１５mM
ｄＮＴＰｓ、２．５％ホルムアミドとした溶液に、上
記オリゴヌクレオチド合成プライマー（配列番号２８及
び配列番号２９；各５０μM ）各１．０μl 、Ｔａｑポ
リメラーゼ０．２５μl （１．２５U ）を加えた計５０
μl の溶液を加え、９５℃３０秒、５５℃３０秒、７２
℃４５秒、４０サイクルで増幅した。
ｒｉｓ・ＨＣｌ（pH８．０）、５０mM ＫＣｌ、０．０
０１％ゼラチン、２．３５mM ＭｇＣｌ2 、０．１５mM
ｄＮＴＰｓ、２．５％ホルムアミドとした溶液に、上
記オリゴヌクレオチド合成プライマー（配列番号２８及
び配列番号２９；各５０μM ）各１．０μl 、Ｔａｑポ
リメラーゼ０．２５μl （１．２５U ）を加えた計５０
μl の溶液を加え、９５℃３０秒、５５℃３０秒、７２
℃４５秒、４０サイクルで増幅した。
【００３２】（Ｆ）ゲル電気泳動法による増幅ＤＮＡの
確認 ３．０％のアガロースゲルにエチジウムブロマイドを
０．５μg/ml加え、上記（Ｅ）項で増幅したＤＮＡの電
気泳動を行った。泳動後、２５４nmの紫外線を照射し、
エチジウムブロマイドの発色反応によりＤＮＡバンドを
検出し、エンテロウイルスの５´非翻訳領域の一部、Ｖ
ｐ４とＶｐ２蛋白の一部をコードする遺伝子領域に由来
する約６５０塩基の標的ＤＮＡバンドを検出した。
確認 ３．０％のアガロースゲルにエチジウムブロマイドを
０．５μg/ml加え、上記（Ｅ）項で増幅したＤＮＡの電
気泳動を行った。泳動後、２５４nmの紫外線を照射し、
エチジウムブロマイドの発色反応によりＤＮＡバンドを
検出し、エンテロウイルスの５´非翻訳領域の一部、Ｖ
ｐ４とＶｐ２蛋白の一部をコードする遺伝子領域に由来
する約６５０塩基の標的ＤＮＡバンドを検出した。
【００３３】（Ｇ）Ｖｐ４領域の塩基配列の決定 上記（Ｆ）で確認されたＰＣＲ産物は、Centricon-100
（アミコン社製）を用いて精製後、Dye DeoxyTM ターミ
ネーター法により Cycle Sequencing 反応を行い、アプ
ライド・バイオシステムズ社製モデル３７３−Ａ ＤＮ
Ａシークエンサーを用い、塩基配列を決定した。決定さ
れた塩基配列中の翻訳開始コドン及びエンテロウイルス
の既知のＶｐ４蛋白及びＶｐ２蛋白を切断するアミノ酸
配列に対応する塩基配列を探索することにより、Ｖｐ４
蛋白をコードする遺伝子領域の塩基配列を決定した。か
くして得られたＥＶ７１のＶｐ４蛋白をコードする配列
を配列番号３〜配列番号２１に、ＣＡ１６のＶｐ４蛋白
をコードする配列を配列番号２２〜配列番号２６に示
す。
（アミコン社製）を用いて精製後、Dye DeoxyTM ターミ
ネーター法により Cycle Sequencing 反応を行い、アプ
ライド・バイオシステムズ社製モデル３７３−Ａ ＤＮ
Ａシークエンサーを用い、塩基配列を決定した。決定さ
れた塩基配列中の翻訳開始コドン及びエンテロウイルス
の既知のＶｐ４蛋白及びＶｐ２蛋白を切断するアミノ酸
配列に対応する塩基配列を探索することにより、Ｖｐ４
蛋白をコードする遺伝子領域の塩基配列を決定した。か
くして得られたＥＶ７１のＶｐ４蛋白をコードする配列
を配列番号３〜配列番号２１に、ＣＡ１６のＶｐ４蛋白
をコードする配列を配列番号２２〜配列番号２６に示
す。
【００３４】実施例２ ＥＶ７１及びＣＡ１６の型鑑別 （Ａ）使用微生物 （１）標準株 国立予防衛生研究所において継代培養されている下記３
９種類の血清型エンテロウイルス標準株を用いて実験を
行った。これらのエンテロウイルスは、いずれも特異抗
血清を用いた中和試験で血清型が同定されている標準株
である。
９種類の血清型エンテロウイルス標準株を用いて実験を
行った。これらのエンテロウイルスは、いずれも特異抗
血清を用いた中和試験で血清型が同定されている標準株
である。
【００３５】 株名（血清型） 略号 コクサッキーＡ群ウイルス ２型 ＣＡ２ 〃 ４〃 ＣＡ４ 〃 ６〃 ＣＡ６ 〃 ７〃 ＣＡ７ 〃 ９〃 ＣＡ９ 〃 １０〃 ＣＡ１０ 〃 １６〃 ＣＡ１６ 〃 ２４〃 ＣＡ２４ コクサッキーＢ群ウイルス １型 ＣＢ１ 〃 ２〃 ＣＢ２ 〃 ３〃 ＣＢ３ 〃 ４〃 ＣＢ４ 〃 ５〃 ＣＢ５ 〃 ６〃 ＣＢ６ エコーウイルス １型 Ｅ１ 〃 ３〃 Ｅ３ 〃 ４〃 Ｅ４ 〃 ５〃 Ｅ５ 〃 ６〃 Ｅ６ 〃 ７〃 Ｅ７ 〃 ９〃 Ｅ９ 〃 １１〃 Ｅ１１ 〃 １２〃 Ｅ１２ 〃 １３〃 Ｅ１３ 〃 １４〃 Ｅ１４ 〃 １６〃 Ｅ１６ 〃 １７〃 Ｅ１７ 〃 １８〃 Ｅ１８ 〃 １９〃 Ｅ１９ 〃 ２１〃 Ｅ２１ 〃 ２２〃 Ｅ２２ 〃 ２４〃 Ｅ２４ 〃 ２５〃 Ｅ２５ 〃 ３０〃 Ｅ３０ エンテロウイルス ７０型 ＥＶ７０ 〃 ７１〃 ＥＶ７１ ポリオウイルス １型 ＰＶ１ 〃 ２〃 ＰＶ２ 〃 ３〃 ＰＶ３
【００３６】（２）エンテロウイルス分離株 下記の、患者より分離され特異抗血清を用いた中和試験
により血清型が同定されたエンテロウイルス分離株を用
いて実験を行った。
により血清型が同定されたエンテロウイルス分離株を用
いて実験を行った。
【００３７】 株名 分離時期 コクサッキーＡ群ウイルス１６型（ＣＡ１６） ４０５７／８１ １９８１年 ０８４３／８７ １９８７年 ００７１／８８ １９８８年 １０４５／９０ １９９０年 １０５１／９０ １９９０年 ０２４１／９０ １９９０年 ２５００／９２ １９９２年 エンテロウイルス７１型（ＥＶ７１） ナゴヤ／７０ １９７０年 ２１０５／７３ １９７３年 ２０８９／７３ １９７３年 ２１４６／７３ １９７３年 ２２０３／７３ １９７３年 ２３７７／７３ １９７３年 ２３８１／７３ １９７３年 ０１０８／７８ １９７８年 ３０５９／７８ １９７８年 ０１９３／７８ １９７８年 ０２９７／７８ １９７８年 ０３３３／７８ １９７８年 ０７６１／８２ １９８２年 ＦＥ−２７ １９８２年 ０２７２／８３ １９８３年 ＦＥ−１８ １９８３年 ＦＥ−２０ １９８３年 ４１３２／８５ １９８５年 ０８６６／８６ １９８６年 ０８９１／８６ １９８６年 ０９４８／８６ １９８６年 １０２５／８６ １９８６年 １０２７／８６ １９８６年 １０７９／８６ １９８６年 １０９６／８６ １９８６年 １１６３／８６ １９８６年 ０４６０／８７ １９８７年 ０４４３／８８ １９８８年 ２５８７／８９ １９８９年 ２６０３／８９ １９８９年 ２１３６／９０ １９９０年 ２２３４／９０ １９９０年 ２３９８／９０ １９９０年 ０４１９／９０ １９９０年 ０４４５／９０ １９９０年 ０１８９／９０ １９９０年 ４０９４／９０ １９９０年 ＦＥ−４５ １９９０年 ＦＥ−４６ １９９０年 Ｔ９１−Ｙ５６３ １９９１年 １２６４／９２ １９９２年 ２３２６／９２ １９９２年 ２９０９／９３ １９９３年 ００８９／９３ １９９３年 ０１３３／９３ １９９３年 ０１３６／９３ １９９３年 ０１４６／９３ １９９３年 ２２００／９３ １９９３年 ０１５４／９３ １９９３年 ０１５９／９３ １９９３年 ２１２２／９３ １９９３年 ２１６７／９３ １９９３年 ２１６８／９３ １９９３年 ２１７３／９３ １９９３年 ０５６５／９３ １９９３年 ０６３０／９３ １９９３年 ０６７９／９３ １９９３年 ０７０２／９３ １９９３年 ０７２４／９３ １９９３年 ０７４８／９３ １９９３年 ０７７４／９３ １９９３年 ０７９１／９３ １９９３年 ＦＥ−５７ １９９３年 Ｔ９３−１２８ １９９３年 Ｔ９３−１３３ １９９３年 Ｔ９３−Ｙ９９８ １９９３年
【００３８】（Ｂ）ＲＮＡ抽出とｃＤＮＡ合成、及びエ
ンテロウイルス遺伝子のＰＣＲによる増幅とその検出 実施例１の（Ｂ）〜（Ｆ）項で示したように、上記エン
テロウイルス標準株及び分離株のＲＮＡを抽出し、５´
非翻訳領域の一部、Ｖｐ４とＶｐ２蛋白の一部に対応す
る部分を増幅後、アガロースゲルを用いた電気泳動にて
増幅を確認した。なお、マーカーとしてφ×１７４ファ
ージのＨａｅIII 分解物を同時に泳動した。
ンテロウイルス遺伝子のＰＣＲによる増幅とその検出 実施例１の（Ｂ）〜（Ｆ）項で示したように、上記エン
テロウイルス標準株及び分離株のＲＮＡを抽出し、５´
非翻訳領域の一部、Ｖｐ４とＶｐ２蛋白の一部に対応す
る部分を増幅後、アガロースゲルを用いた電気泳動にて
増幅を確認した。なお、マーカーとしてφ×１７４ファ
ージのＨａｅIII 分解物を同時に泳動した。
【００３９】（Ｃ）サザンブロット法 実施例２の（Ｂ）項で増幅ＤＮＡの確認のために使用し
たアガロースゲルを、アルカリ変性液（０．５M ＮａＯ
Ｈ, １．５M ＮａＣｌ）で３０分間処理後、中和液（１
M Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ, １．５M ＮａＣｌ）で３０分間入
れゲルを中性に戻し、ＤＮＡを変性させた。さらに、常
法により、サザンブロッティングを一晩行い、ナイロン
メンブレンに移行したＤＮＡを２５４nmの紫外線１．２
×１０5μJOULES/cm2（UV stratalinkerTM ; ストラタ
ジーン製）により固着させた。
たアガロースゲルを、アルカリ変性液（０．５M ＮａＯ
Ｈ, １．５M ＮａＣｌ）で３０分間処理後、中和液（１
M Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ, １．５M ＮａＣｌ）で３０分間入
れゲルを中性に戻し、ＤＮＡを変性させた。さらに、常
法により、サザンブロッティングを一晩行い、ナイロン
メンブレンに移行したＤＮＡを２５４nmの紫外線１．２
×１０5μJOULES/cm2（UV stratalinkerTM ; ストラタ
ジーン製）により固着させた。
【００４０】（Ｄ）血清型特異的プローブの設計と合成 実施例１（Ｇ）項で示したＣＡ１６及びＥＶ７１のＶｐ
４蛋白質をコードするＤＮＡ領域の塩基配列〔配列番号
３から配列番号２６〕を解析し、これらの配列からＥＶ
７１特異プローブを配列番号３１及び配列番号４１、Ｃ
Ａ１６特異プローブを配列番号３２、配列番号３９及び
配列番号４０のように設計し、実施例１（Ｄ）項に準じ
て合成した。上記ＤＮＡプローブの標識は、５´末端の
リン酸化反応により〔γ−32Ｐ〕ＡＴＰ、Ｔ４ポリヌク
レオチドキナーゼ（東洋紡績社製）を用いて行った。
４蛋白質をコードするＤＮＡ領域の塩基配列〔配列番号
３から配列番号２６〕を解析し、これらの配列からＥＶ
７１特異プローブを配列番号３１及び配列番号４１、Ｃ
Ａ１６特異プローブを配列番号３２、配列番号３９及び
配列番号４０のように設計し、実施例１（Ｄ）項に準じ
て合成した。上記ＤＮＡプローブの標識は、５´末端の
リン酸化反応により〔γ−32Ｐ〕ＡＴＰ、Ｔ４ポリヌク
レオチドキナーゼ（東洋紡績社製）を用いて行った。
【００４１】（Ｅ）ハイブリダイゼーション 上記実施例２（Ｃ）項で作製したメンブレンは、反応液
として１．０M ＮａＣｌ、５０mM Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ
（pH７．５）、０．５％ＰＶＰ、０．２％ヘパリン、１
mM ＥＤＴＡ、２％ＳＤＳを用い、５０℃で１時間処理
し、プレハイブリダイゼーションを行った。ハイブリダ
イゼーションは、上記ハイブリダイゼーション溶液に、
実施例２の（Ｄ）項で合成した〔γ−32Ｐ〕ＡＴＰ標識
ＤＮＡプローブを、１０5 cpm/ml加え、５０℃、４時間
反応させた。メンブレンを５×ＳＳＣ−０．１％ＳＤＳ
溶液中で、５０℃で５分、２回洗浄後、２×ＳＳＣ−
０．１％ＳＤＳ溶液中で、５０℃で５分、２回洗浄し、
非特異的に結合しているプローブを取り除いた。ナイロ
ンメンブレンを乾燥後、ラップに包み、オートラジオグ
ラフィーを−８０℃で４５分間、さらに室温で１５分間
行った後、現像した。
として１．０M ＮａＣｌ、５０mM Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ
（pH７．５）、０．５％ＰＶＰ、０．２％ヘパリン、１
mM ＥＤＴＡ、２％ＳＤＳを用い、５０℃で１時間処理
し、プレハイブリダイゼーションを行った。ハイブリダ
イゼーションは、上記ハイブリダイゼーション溶液に、
実施例２の（Ｄ）項で合成した〔γ−32Ｐ〕ＡＴＰ標識
ＤＮＡプローブを、１０5 cpm/ml加え、５０℃、４時間
反応させた。メンブレンを５×ＳＳＣ−０．１％ＳＤＳ
溶液中で、５０℃で５分、２回洗浄後、２×ＳＳＣ−
０．１％ＳＤＳ溶液中で、５０℃で５分、２回洗浄し、
非特異的に結合しているプローブを取り除いた。ナイロ
ンメンブレンを乾燥後、ラップに包み、オートラジオグ
ラフィーを−８０℃で４５分間、さらに室温で１５分間
行った後、現像した。
【００４２】かくして得られた、ＣＡ１６特異的ＤＮＡ
プローブ（配列番号３２、配列番号３８及び配列番号３
９）と増幅ＤＮＡとのハイブリッドの形成を図１〜図８
に、ＥＶ７１特異的ＤＮＡプローブ（配列番号３１及び
配列番号４１）と増幅ＤＮＡとのハイブリッド形成を図
９〜図１６に示す。図から明らかなとおり、ＥＶ７１特
異的ＤＮＡプローブにはすべてのＥＶ７１分離株が、Ｃ
Ａ１６特異的ＤＮＡプローブにはすべてのＣＡ１６分離
株が反応し、かつ、血清型特異的ＤＮＡプローブと各血
清型のエンテロウイルス標準株から得られたＤＮＡとの
間での交差反応はなく、これは特異的な結合であること
が判明した。上記のとおり、本発明の方法によれば、Ｃ
Ａ１６とＥＶ７１が高精度に鑑別可能である。
プローブ（配列番号３２、配列番号３８及び配列番号３
９）と増幅ＤＮＡとのハイブリッドの形成を図１〜図８
に、ＥＶ７１特異的ＤＮＡプローブ（配列番号３１及び
配列番号４１）と増幅ＤＮＡとのハイブリッド形成を図
９〜図１６に示す。図から明らかなとおり、ＥＶ７１特
異的ＤＮＡプローブにはすべてのＥＶ７１分離株が、Ｃ
Ａ１６特異的ＤＮＡプローブにはすべてのＣＡ１６分離
株が反応し、かつ、血清型特異的ＤＮＡプローブと各血
清型のエンテロウイルス標準株から得られたＤＮＡとの
間での交差反応はなく、これは特異的な結合であること
が判明した。上記のとおり、本発明の方法によれば、Ｃ
Ａ１６とＥＶ７１が高精度に鑑別可能である。
【００４３】
配列番号：１ 配列の長さ：69 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 他の情報 下記配列中、アミノ酸番号３番目のGgg は、Ser 又はTh
r を示し、アミノ酸番号７番目のHhh は、Ala 又はThr
を示し、アミノ酸番号９番目の Iiiは、Arg 又は Xaaを
示し、アミノ酸番号１７番目のJjj は、Asn 又は Xaaを
示し、アミノ酸番号３１番目のKkk は、Asn 又はXaa を
示し、アミノ酸番号３４番目のLll は、Lys 又はXaa を
示し、アミノ酸番号３５番目のMmm は、Asp 又はXaa を
示し、アミノ酸番号４３番目のNnn は、Lys 又はXaa を
示し、アミノ酸番号４７番目のOoo は、Lys 又はXaa を
示し、アミノ酸番号４９番目のPpp は、Asp 又はXaa を
示し、アミノ酸番号５３番目のQqq は、Phe 又はXaa を
示し、アミノ酸番号５４番目のRrr は、Ala 又はGly 又
はXaa を示し、アミノ酸番号５５番目のSss は、Asn 又
はXaa を示す。 配列 Met Gly Ggg Gln Val Ser Hhh Gln Iii Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 Jjj Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Kkk Tyr 20 25 30 Tyr Lll Mmm Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Nnn Gln Ser Leu Ooo Gln 35 40 45 Ppp Pro Asp Lys Qqq Rrr Sss Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 Ala Ala Pro Leu Lys 65
r を示し、アミノ酸番号７番目のHhh は、Ala 又はThr
を示し、アミノ酸番号９番目の Iiiは、Arg 又は Xaaを
示し、アミノ酸番号１７番目のJjj は、Asn 又は Xaaを
示し、アミノ酸番号３１番目のKkk は、Asn 又はXaa を
示し、アミノ酸番号３４番目のLll は、Lys 又はXaa を
示し、アミノ酸番号３５番目のMmm は、Asp 又はXaa を
示し、アミノ酸番号４３番目のNnn は、Lys 又はXaa を
示し、アミノ酸番号４７番目のOoo は、Lys 又はXaa を
示し、アミノ酸番号４９番目のPpp は、Asp 又はXaa を
示し、アミノ酸番号５３番目のQqq は、Phe 又はXaa を
示し、アミノ酸番号５４番目のRrr は、Ala 又はGly 又
はXaa を示し、アミノ酸番号５５番目のSss は、Asn 又
はXaa を示す。 配列 Met Gly Ggg Gln Val Ser Hhh Gln Iii Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 Jjj Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Kkk Tyr 20 25 30 Tyr Lll Mmm Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Nnn Gln Ser Leu Ooo Gln 35 40 45 Ppp Pro Asp Lys Qqq Rrr Sss Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 Ala Ala Pro Leu Lys 65
【００４４】配列番号：２ 配列の長さ：69 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 他の情報 下記配列中、アミノ酸番号９番目のAaa は、Arg 又はXa
a を示し、アミノ酸番号１９番目のBbb は、Ala 又はXa
a を示し、アミノ酸番号２１番目のCcc は、Glu 又はXa
a を示し、アミノ酸番号２３番目のDdd は、Ser 又はTh
r を示し、アミノ酸番号２４番目のEee は、Thr 又はXa
a を示し、アミノ酸番号２９番目のFffは、Thr 又はPro
を示す。 配列 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Aaa Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 Asn Ser Bbb Ser Ccc Gly Ddd Eee Ile Asn Tyr Thr Fff Ile Asn Tyr 20 25 30 Tyr Lys Asp Ala Tyr Ala Ala Ser Ala Gly Arg Gln Asp Met Ser Gln 35 40 45 Asp Pro Lys Lys Phe Thr Asp Pro Val Met Asp Val Ile His Glu Met 50 55 60 Ala Pro Pro Leu Lys 65
a を示し、アミノ酸番号１９番目のBbb は、Ala 又はXa
a を示し、アミノ酸番号２１番目のCcc は、Glu 又はXa
a を示し、アミノ酸番号２３番目のDdd は、Ser 又はTh
r を示し、アミノ酸番号２４番目のEee は、Thr 又はXa
a を示し、アミノ酸番号２９番目のFffは、Thr 又はPro
を示す。 配列 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Aaa Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 Asn Ser Bbb Ser Ccc Gly Ddd Eee Ile Asn Tyr Thr Fff Ile Asn Tyr 20 25 30 Tyr Lys Asp Ala Tyr Ala Ala Ser Ala Gly Arg Gln Asp Met Ser Gln 35 40 45 Asp Pro Lys Lys Phe Thr Asp Pro Val Met Asp Val Ile His Glu Met 50 55 60 Ala Pro Pro Leu Lys 65
【００４５】配列番号：３ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：enterovirus enterovirus type 71 株名：BrCr 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGC TCC CAG GTC TCC ACA CAG CGA TCC GGC TCG CAT GAG AAT TCC 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCC ACG GAA GGC TCC ACT ATA AAT TAC ACA ACC ATT AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAA GAC TCG TAT GCT GCC ACT GCT GGA AAG CAA AGT CTC AAA CAA 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCT GAC AAG TTT GCG AAC CCT GTG AAG GAC ATC TTT ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCA GCG CCC TTA AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGC TCC CAG GTC TCC ACA CAG CGA TCC GGC TCG CAT GAG AAT TCC 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCC ACG GAA GGC TCC ACT ATA AAT TAC ACA ACC ATT AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAA GAC TCG TAT GCT GCC ACT GCT GGA AAG CAA AGT CTC AAA CAA 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCT GAC AAG TTT GCG AAC CCT GTG AAG GAC ATC TTT ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCA GCG CCC TTA AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
【００４６】配列番号：４ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：enterovirus type 71 株名：ナゴヤ／７０ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイスル７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGT TCA CAA GTG TCT ACT CAG CGG TCC GGC TCC CAC GAG AAT TCC 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAT TCA GCT ACA GAA GGT TCC ACC ATT AAT TAC ACT ACT ATC AAT TAT 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCT TAT GCT GCC ACA GCA GGC AAG CAG AGC CTC AAA CAA 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAC CCT GAC AAG TTT GGC AAT CCT GTC AAG GAC ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Gly Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCG GCG CCA CTG AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGT TCA CAA GTG TCT ACT CAG CGG TCC GGC TCC CAC GAG AAT TCC 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAT TCA GCT ACA GAA GGT TCC ACC ATT AAT TAC ACT ACT ATC AAT TAT 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCT TAT GCT GCC ACA GCA GGC AAG CAG AGC CTC AAA CAA 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAC CCT GAC AAG TTT GGC AAT CCT GTC AAG GAC ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Gly Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCG GCG CCA CTG AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
【００４７】配列番号：５ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：enterovirus type 71 株名：０１０８／７８ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGT TCA CAA GTG TCT ACT CAG CGG TCC GGC TCC CAC GAG AAT TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAT TCA GCT ACA GAA GGC TCC ACC ATC AAT TAC ACT ACC ATC AAC TAT 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCT TAT GCT GCC ACA GCA GGT AAG CAG AGC CTC AAA CAA 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAC CCT GAC AAG TTT GCT AAT CCT GTC AAG GAC ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCC GCG CCA CTG AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGT TCA CAA GTG TCT ACT CAG CGG TCC GGC TCC CAC GAG AAT TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAT TCA GCT ACA GAA GGC TCC ACC ATC AAT TAC ACT ACC ATC AAC TAT 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCT TAT GCT GCC ACA GCA GGT AAG CAG AGC CTC AAA CAA 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAC CCT GAC AAG TTT GCT AAT CCT GTC AAG GAC ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCC GCG CCA CTG AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
【００４８】配列番号：６ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ７１ 株名：３０５９／７３ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ＡＴＧ ＧＧＴ ＴＣＡ ＣＡＡ ＧＴＧ ＴＣＴ ＡＣＴ ＣＡＧ ＣＧＧ
ＴＣＣ ＧＧＣ ＴＣＣ ＣＡＣ ＧＡＧ ＡＡＴ ＴＣＴ 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAT TCA GCT ACA GAA GGC TCC ACC ATT AAT TAC ACT ACC ATC AAC TAT 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCT TAT GCT GCC ACA GCA GGC AAG CAG AGC CTT AAA CAA 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAC CCT GAC AAG TTT GCT AAT CCT GTC AAG GAC ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCC GCG CCA CTG AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ＡＴＧ ＧＧＴ ＴＣＡ ＣＡＡ ＧＴＧ ＴＣＴ ＡＣＴ ＣＡＧ ＣＧＧ
ＴＣＣ ＧＧＣ ＴＣＣ ＣＡＣ ＧＡＧ ＡＡＴ ＴＣＴ 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAT TCA GCT ACA GAA GGC TCC ACC ATT AAT TAC ACT ACC ATC AAC TAT 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCT TAT GCT GCC ACA GCA GGC AAG CAG AGC CTT AAA CAA 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAC CCT GAC AAG TTT GCT AAT CCT GTC AAG GAC ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCC GCG CCA CTG AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
【００４９】配列番号：７ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：enterovirus type 71 株名：０００４／７８ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGA TCG CAG GTG TCC ACA CAA CGC TCT GGT TCG CAT GAA AAT TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAT TCA GCC ACT GAA GGT TCC ACT ATA AAC TAC ACC ACC ATC AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAT AAG GAC TCT TAT GCC GCT ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTT AAG CAA 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCA GAC AAG TTT GCA AAT CCC GTT AAA GAT ATT TTC ACT GAG ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCG GCA CCA CTG AAA ２０
７ Ａｌａ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｌｙｓ ６５
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGA TCG CAG GTG TCC ACA CAA CGC TCT GGT TCG CAT GAA AAT TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAT TCA GCC ACT GAA GGT TCC ACT ATA AAC TAC ACC ACC ATC AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAT AAG GAC TCT TAT GCC GCT ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTT AAG CAA 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCA GAC AAG TTT GCA AAT CCC GTT AAA GAT ATT TTC ACT GAG ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCG GCA CCA CTG AAA ２０
７ Ａｌａ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｌｙｓ ６５
【００５０】配列番号：８ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｇｅｎｏｍｉｃ ＲＮＡ 起源 生物名：enterovirus type 71 株名：３３５９／８３ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGT TCA CAA GTA TCC ACT CAG CGG TCC GGC TCC CAC GAG AAT TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAT TCA GCT ACA GAA GGC TCC ACC ATT AAT TAC ACT ACT ATC AAC TAT 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCT TAT GCT GCC ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTC AAA CAA 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAC CCC GAC AAG TTT GCT AAT CCT GTC AAG GAC ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCG GCG CCG CTG AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGT TCA CAA GTA TCC ACT CAG CGG TCC GGC TCC CAC GAG AAT TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAT TCA GCT ACA GAA GGC TCC ACC ATT AAT TAC ACT ACT ATC AAC TAT 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCT TAT GCT GCC ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTC AAA CAA 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAC CCC GAC AAG TTT GCT AAT CCT GTC AAG GAC ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCG GCG CCG CTG AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
【００５１】配列番号：９ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：enterovirus type 71 株名：４１３２／８５ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGC TCA CAA GTG TCT ACT CAG CGA TCC GGC TCC CAC GAG AAT TCC 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 ANT TCA GCT ACA GAA GGC TCC ACC ATT AAT TAC ACT ACC ATC ANC TAT 96 Xaa Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Xaa Tyr 20 25 30 TAC ANA GNC TCT TAT GCT GCA ACA GCA GGC ANA CAG AGY CTT AMA CAA 144 Tyr Xaa Xaa Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Xaa Gln Ser Leu Xaa Gln 35 40 45 GMC CCT GAT AAG TKT GCT AMT CCT GTC AAG GAC ATT TTC ACT GAA ATG 192 Xaa Pro Asp Lys Xaa Ala Xaa Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCC GCG CCA CTA AAA 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGC TCA CAA GTG TCT ACT CAG CGA TCC GGC TCC CAC GAG AAT TCC 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 ANT TCA GCT ACA GAA GGC TCC ACC ATT AAT TAC ACT ACC ATC ANC TAT 96 Xaa Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Xaa Tyr 20 25 30 TAC ANA GNC TCT TAT GCT GCA ACA GCA GGC ANA CAG AGY CTT AMA CAA 144 Tyr Xaa Xaa Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Xaa Gln Ser Leu Xaa Gln 35 40 45 GMC CCT GAT AAG TKT GCT AMT CCT GTC AAG GAC ATT TTC ACT GAA ATG 192 Xaa Pro Asp Lys Xaa Ala Xaa Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCC GCG CCA CTA AAA 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
【００５２】配列番号：１０ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：enterovirus type 71 株名：Ｔ８６２３６ａ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGT ACA CAA GTA TCC ACT CAG SGG TCC GGC TCC CAC GAG AAT TCT 48 Met Gly Thr Gln Val Ser Thr Gln Xaa Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAT TCA GCT ACA GAA GGC TCC ACC ATT AAC TAC ACT ACT ATC AAC TAT 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCT TAT GCT GCT ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTC AAA CAA 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAC CCC GAC AAG TTT GCT AAT CCT GTC AAG GAC ATT TTT ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCG GCG CCA CTG AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGT ACA CAA GTA TCC ACT CAG SGG TCC GGC TCC CAC GAG AAT TCT 48 Met Gly Thr Gln Val Ser Thr Gln Xaa Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAT TCA GCT ACA GAA GGC TCC ACC ATT AAC TAC ACT ACT ATC AAC TAT 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCT TAT GCT GCT ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTC AAA CAA 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAC CCC GAC AAG TTT GCT AAT CCT GTC AAG GAC ATT TTT ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCG GCG CCA CTG AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
【００５３】配列番号：１１ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：enterovirus type 71 株名：１０９６／８６ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGC TCA CAG GTG TCC ACA CAA CGC TCC GGT TCG CAT GAA AAC TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCT ACT GAG GGC TCC ACC ATA AAC TAT ACT ACC ATC AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCC TAT GCC GCC ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTT AAG CAG 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCA GAT AAG TTT GCG AAT CCT GTC AAG GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCA GCG CCA CTA AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGC TCA CAG GTG TCC ACA CAA CGC TCC GGT TCG CAT GAA AAC TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCT ACT GAG GGC TCC ACC ATA AAC TAT ACT ACC ATC AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCC TAT GCC GCC ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTT AAG CAG 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCA GAT AAG TTT GCG AAT CCT GTC AAG GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCA GCG CCA CTA AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
【００５４】配列番号：１２ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：enterovirus type 71 株名：１０９１／８９ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGT TCA CAA GTG TCT GCT CAG CGA TCC GGC TCC CAC GAG AAT TCC 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Ala Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAT TCA GCT ACA GAA GGC TCC ACC ATT AAT TAC ACT ACC ATC AAC TAT 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAA GAC TCT TAT GCT GCA ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTC AAA CAA 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAC CCT GAT AAG TTT GCT AAC CCT GTC AAG GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCT GCG CCA CTG AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGT TCA CAA GTG TCT GCT CAG CGA TCC GGC TCC CAC GAG AAT TCC 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Ala Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAT TCA GCT ACA GAA GGC TCC ACC ATT AAT TAC ACT ACC ATC AAC TAT 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAA GAC TCT TAT GCT GCA ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTC AAA CAA 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAC CCT GAT AAG TTT GCT AAC CCT GTC AAG GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCT GCG CCA CTG AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
【００５５】配列番号：１３ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ７１ 株名：０８７２／８９ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ＡＴＧ ＧＧＣ ＴＣＡ ＣＡＧ ＧＴＧ ＴＣＣ ＡＣＡ ＣＡＡ ＣＧＣ
ＴＣＣ ＧＧＴ ＴＣＧ ＣＡＴ ＧＡＡ ＡＡＣ ＴＣＴ 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCT ACT GAG GGT TCC ACC ATA AAC TAT ACC ACC ATT AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCC TAT GCT GCC ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTT AAA CAG 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCA GAT AAG TTT GCA AAT CCT GTC AAA GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCA GCG CCA CTA AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ＡＴＧ ＧＧＣ ＴＣＡ ＣＡＧ ＧＴＧ ＴＣＣ ＡＣＡ ＣＡＡ ＣＧＣ
ＴＣＣ ＧＧＴ ＴＣＧ ＣＡＴ ＧＡＡ ＡＡＣ ＴＣＴ 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCT ACT GAG GGT TCC ACC ATA AAC TAT ACC ACC ATT AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCC TAT GCT GCC ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTT AAA CAG 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCA GAT AAG TTT GCA AAT CCT GTC AAA GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCA GCG CCA CTA AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
【００５６】配列番号：１４ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：enterovirus type 71 株名：２５８７／８９ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGC TCA CAG GTG TCC ACA CAA CGC TCC GGT TCG CAT GAA AAC TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCT ACT GAG GGT TCC ACC ATA AAC TAC ACT ACC ATT AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCC TAT GCC GCC ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTT AAG CAG 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCA GAT AAG TTT GCA AAT CCT GTC AAG GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCA GCG CCA CTA AAG ２０
７ Ａｌａ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｌｙｓ ６５
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGC TCA CAG GTG TCC ACA CAA CGC TCC GGT TCG CAT GAA AAC TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCT ACT GAG GGT TCC ACC ATA AAC TAC ACT ACC ATT AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCC TAT GCC GCC ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTT AAG CAG 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCA GAT AAG TTT GCA AAT CCT GTC AAG GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCA GCG CCA CTA AAG ２０
７ Ａｌａ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｌｙｓ ６５
【００５７】配列番号：１５ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｇｅｎｏｍｉｃ ＲＮＡ 起源 生物名：enterovirus type 71 株名：２６０３／８９ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGC TCA CAG GTG TCC ACA CAA CGC TCC GGT TCG CAT GAA AAC TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCT ACT GAG GGT TCC ACC ATA AAC TAT ACC ACC ATT AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCC TAT GCT GCC ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTT AAA CAG 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCA GAT AAG TTT GSA AAT CCT GTC AAA GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Xaa Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCA GCG CCA CTA AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGC TCA CAG GTG TCC ACA CAA CGC TCC GGT TCG CAT GAA AAC TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCT ACT GAG GGT TCC ACC ATA AAC TAT ACC ACC ATT AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCC TAT GCT GCC ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTT AAA CAG 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCA GAT AAG TTT GSA AAT CCT GTC AAA GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Xaa Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCA GCG CCA CTA AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
【００５８】配列番号：１６ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：enterovirus type 71 株名：０４４５／９０ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGT TCA CAA GTG TCT GCT CAG CGA TCC GGC TCC CAC GAG AAC TCC 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Ala Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAT TCA GCT ACA GAA GGC TCC ACC ATT AAT TAC ACT ACC ATC AAC TAT 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAA GAC TCT TAT GCT GCA ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTC AAA CAA 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAC CCT GAT AAG TTT GCT AAC CCT GTC AAG GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCT GCG CCA CTG AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGT TCA CAA GTG TCT GCT CAG CGA TCC GGC TCC CAC GAG AAC TCC 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Ala Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAT TCA GCT ACA GAA GGC TCC ACC ATT AAT TAC ACT ACC ATC AAC TAT 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAA GAC TCT TAT GCT GCA ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTC AAA CAA 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAC CCT GAT AAG TTT GCT AAC CCT GTC AAG GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCT GCG CCA CTG AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
【００５９】配列番号：１７ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：enterovirus type 71 株名：０３７５／９０ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGC TCA CAG GTG TCC ACA CAA CGC TCC GGT TCG CAT GAA AAC TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCT ACT GAG GGT TCC ACC ATA AAC TAT ACC ACC ATT AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCC TAT GCT GCC ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTT AAA CAG 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCA GAT AAG TTT GCA AAT CCT GTC AAA GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCA GCG CCA CTA AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGC TCA CAG GTG TCC ACA CAA CGC TCC GGT TCG CAT GAA AAC TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCT ACT GAG GGT TCC ACC ATA AAC TAT ACC ACC ATT AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCC TAT GCT GCC ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTT AAA CAG 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCA GAT AAG TTT GCA AAT CCT GTC AAA GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCA GCG CCA CTA AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
【００６０】配列番号：１８ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：enterovirus type 71 株名：２１３６／９０ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGC TCA CAG GTG TCC ACA CAA CGC TCC GGC TCA CAT GAA AAC TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCC ACT GAG GGC TCC ACC ATA AAC TAC ACT ACT ATT AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCC TAT GCC GCT ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTC AAG CAG 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCA GAT AAG TTT GCA AAT CCT GTC AAA GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCA GCG CCA CTA AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGC TCA CAG GTG TCC ACA CAA CGC TCC GGC TCA CAT GAA AAC TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCC ACT GAG GGC TCC ACC ATA AAC TAC ACT ACT ATT AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCC TAT GCC GCT ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTC AAG CAG 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCA GAT AAG TTT GCA AAT CCT GTC AAA GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCA GCG CCA CTA AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
【００６１】配列番号：１９ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：enterovirus type 71 株名：２３９８／９０ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGC TCA CAG GTG TCC ACA CAA CGC TCC GGC TCA CAT GAA AAC TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 10 AAC TCA GCT ACT GAG GGC TCC ACC ATA AAC TAC ACT ACT ATT AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 30 TAC AAG GAC TCC TAT GCC GCT ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTC AAG CAG 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 40 GAT CCA GAT AAG TTT GCA AAT CCT GTC AAA GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 60 GCA GCG CCA CTA AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGC TCA CAG GTG TCC ACA CAA CGC TCC GGC TCA CAT GAA AAC TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 10 AAC TCA GCT ACT GAG GGC TCC ACC ATA AAC TAC ACT ACT ATT AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 30 TAC AAG GAC TCC TAT GCC GCT ACA GCA GGC AAA CAG AGC CTC AAG CAG 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 40 GAT CCA GAT AAG TTT GCA AAT CCT GTC AAA GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 60 GCA GCG CCA CTA AAG 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
【００６２】配列番号：２０ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ７１ 株名：４０９４／９０ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ＡＴＧ ＧＧＣ ＴＣＡ ＣＡＧ ＧＴＧ ＴＣＣ ＡＣＡ ＣＡＧ ＣＧＣ
ＴＣＣ ＧＧＣ ＴＣＧ ＣＡＴ ＧＡＡ ＡＡＣ ＴＣＴ 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCT ACC GAG GGC TCC ACC ATA AAC TAC ACT ACC ATT AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCC TAT GCC GCT ACA GCA GGC AAA CAG AGT CTT AAG CAG 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCA GAC AAG TTT GCA AAT CCT GTC AAA GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCA GCG CCA CTA AAA 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ＡＴＧ ＧＧＣ ＴＣＡ ＣＡＧ ＧＴＧ ＴＣＣ ＡＣＡ ＣＡＧ ＣＧＣ
ＴＣＣ ＧＧＣ ＴＣＧ ＣＡＴ ＧＡＡ ＡＡＣ ＴＣＴ 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCT ACC GAG GGC TCC ACC ATA AAC TAC ACT ACC ATT AAT TAC 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCC TAT GCC GCT ACA GCA GGC AAA CAG AGT CTT AAG CAG 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCA GAC AAG TTT GCA AAT CCT GTC AAA GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCA GCG CCA CTA AAA 207 Ala Ala Pro Leu Lys 65
【００６３】配列番号：２１ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：enterovirus type 71 株名：０４１９／９０ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコードする遺伝
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGC TCA CAG GTG TCC ACG CAA CGC TCC GGC TCG CAT GAA AAC TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAT TCA GCT ACT GAG GGC TCC ACC ATA AAC TAT ACC ACC ATT AAT TAT 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCC TAT GCC GCC ACA GCA GGC AAA CAG AGT CTT AAG CAG 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCA GAC AAG TTT GCA AAT CCT GTC AAA GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCT GCG CCA CTA AAG ２０
７ Ａｌａ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｌｙｓ ６５
子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGC TCA CAG GTG TCC ACG CAA CGC TCC GGC TCG CAT GAA AAC TCT 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAT TCA GCT ACT GAG GGC TCC ACC ATA AAC TAT ACC ACC ATT AAT TAT 96 Asn Ser Ala Thr Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAC TCC TAT GCC GCC ACA GCA GGC AAA CAG AGT CTT AAG CAG 144 Tyr Lys Asp Ser Tyr Ala Ala Thr Ala Gly Lys Gln Ser Leu Lys Gln 35 40 45 GAT CCA GAC AAG TTT GCA AAT CCT GTC AAA GAT ATT TTC ACT GAA ATG 192 Asp Pro Asp Lys Phe Ala Asn Pro Val Lys Asp Ile Phe Thr Glu Met 50 55 60 GCT GCG CCA CTA AAG ２０
７ Ａｌａ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｌｙｓ ６５
【００６４】配列番号：２２ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｇｅｎｏｍｉｃ ＲＮＡ 起源 生物名：entrovirus coxsackievirus A16 株名：G10 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 コクサッキーＡ群ウイルス１６型のＶｐ４蛋白をコード
する遺伝子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGG TCA CAA GTC TCA ACC CAA CGA TCG GGT TCC CAC GAA AAT TCG 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCA TCA GAA GGA TCT ACT ATA AAC TAC ACC ACC ATC AAC TAT 96 Asn Ser Ala Ser Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAT GCA TAT GCT GCC AGC GCG GGT CGC CAA GAT ATG TCT CAG 144 Tyr Lys Asp Ala Tyr Ala Ala Ser Ala Gly Arg Gln Asp Met Ser Gln 35 40 45 GAC CCT AAG AAA TTC ACA GAC CCT GTG ATG GAT GTC ATA CAC GAG ATG 192 Asp Pro Lys Lys Phe Thr Asp Pro Val Met Asp Val Ile His Glu Met 50 55 60 GCT CCT CCC TTG AAA 207 Ala Pro Pro Leu Lys 65
する遺伝子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGG TCA CAA GTC TCA ACC CAA CGA TCG GGT TCC CAC GAA AAT TCG 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCA TCA GAA GGA TCT ACT ATA AAC TAC ACC ACC ATC AAC TAT 96 Asn Ser Ala Ser Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAC AAG GAT GCA TAT GCT GCC AGC GCG GGT CGC CAA GAT ATG TCT CAG 144 Tyr Lys Asp Ala Tyr Ala Ala Ser Ala Gly Arg Gln Asp Met Ser Gln 35 40 45 GAC CCT AAG AAA TTC ACA GAC CCT GTG ATG GAT GTC ATA CAC GAG ATG 192 Asp Pro Lys Lys Phe Thr Asp Pro Val Met Asp Val Ile His Glu Met 50 55 60 GCT CCT CCC TTG AAA 207 Ala Pro Pro Leu Lys 65
【００６５】配列番号：２３ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：coxsackievirus A16 株名：１５４７／７９ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 コクサッキーＡ群ウイルス１６型のＶｐ４蛋白をコード
する遺伝子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGG TCA CAG GTT TCC ACT CAG CGG TCT GGG TCA CAT GAG AAC TCA 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCT GCA TCG GAG GGT TCA ACT ATA AAT TAT ACA ACC ATA AAT TAC 96 Asn Ser Ala Ser Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAT AAG GAT GCA TAT GCT GCA AGT GCG GGG CGC CAG GAT ATG TCC CAA 144 Tyr Lys Asp Ala Tyr Ala Ala Ser Ala Gly Arg Gln Asp Met Ser Gln 35 40 45 GAC CCG AAG AAA TTT ACC GAT CCT GTT ATG GAC GTT ATA CAT GAG ATG 192 Asp Pro Lys Lys Phe Thr Asp Pro Val Met Asp Val Ile His Glu Met 50 55 60 GCT CCA CCA CTT AAA 207 Ala Pro Pro Leu Lys 65
する遺伝子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGG TCA CAG GTT TCC ACT CAG CGG TCT GGG TCA CAT GAG AAC TCA 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCT GCA TCG GAG GGT TCA ACT ATA AAT TAT ACA ACC ATA AAT TAC 96 Asn Ser Ala Ser Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAT AAG GAT GCA TAT GCT GCA AGT GCG GGG CGC CAG GAT ATG TCC CAA 144 Tyr Lys Asp Ala Tyr Ala Ala Ser Ala Gly Arg Gln Asp Met Ser Gln 35 40 45 GAC CCG AAG AAA TTT ACC GAT CCT GTT ATG GAC GTT ATA CAT GAG ATG 192 Asp Pro Lys Lys Phe Thr Asp Pro Val Met Asp Val Ile His Glu Met 50 55 60 GCT CCA CCA CTT AAA 207 Ala Pro Pro Leu Lys 65
【００６６】配列番号：２４ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：coxsackievirus A16 株名：４０５７／８１ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 コクサッキーＡ群ウイルス１６型のＶｐ４蛋白をコード
する遺伝子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGG TCA CAG GTC TCC ACT CAG CGG TCT GGG TCA CAT GAG AAC TCA 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCT GCA TCG GAG GGT TCA ACT ATA AAT TAC ACA ACC ATA AAT TAC 96 Asn Ser Ala Ser Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAT AAG GAT GCA TAT GCT GCA AGT GCG GGG CGC CAG GAT ATG TCC CAA 144 Tyr Lys Asp Ala Tyr Ala Ala Ser Ala Gly Arg Gln Asp Met Ser Gln 35 40 45 GAC CCG AAG AAA TTT ACC GAT CCT GTC ATG GAC GTT ATA CAT GAG ATG 192 Asp Pro Lys Lys Phe Thr Asp Pro Val Met Asp Val Ile His Glu Met 50 55 60 GCT CCA CCA CTC AAA 207 Ala Pro Pro Leu Lys 65
する遺伝子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGG TCA CAG GTC TCC ACT CAG CGG TCT GGG TCA CAT GAG AAC TCA 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCT GCA TCG GAG GGT TCA ACT ATA AAT TAC ACA ACC ATA AAT TAC 96 Asn Ser Ala Ser Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAT AAG GAT GCA TAT GCT GCA AGT GCG GGG CGC CAG GAT ATG TCC CAA 144 Tyr Lys Asp Ala Tyr Ala Ala Ser Ala Gly Arg Gln Asp Met Ser Gln 35 40 45 GAC CCG AAG AAA TTT ACC GAT CCT GTC ATG GAC GTT ATA CAT GAG ATG 192 Asp Pro Lys Lys Phe Thr Asp Pro Val Met Asp Val Ile His Glu Met 50 55 60 GCT CCA CCA CTC AAA 207 Ala Pro Pro Leu Lys 65
【００６７】配列番号：２５ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：coxsackievirus A16 株名：０２１６／８６ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 コクサッキーＡ群ウイルス１６型のＶｐ４蛋白をコード
する遺伝子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGG TCA CAG GTC TCC ACT CAG SGG TCT GGG TCA CAC GAA AAC TCA 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Xaa Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCT GYA TCG GRG GGT ACA WCT ATA AAT TAC ACA CCC ATA AAT TAC 96 Asn Ser Xaa Ser Xaa Gly Thr Xaa Ile Asn Tyr Thr Pro Ile Asn Tyr 20 25 30 TAT AAG GAT GCA TAT GCT GCA AGT GCG GGA CGM CAG GAT ATG TCC CAG 144 Tyr Lys Asp Ala Tyr Ala Ala Ser Ala Gly Arg Gln Asp Met Ser Gln 35 40 45 GAC CCG AAG AAA TTC ACC GAT CCT GTC ATG GAC GTT ATA CAT GAG ATG 192 Asp Pro Lys Lys Phe Thr Asp Pro Val Met Asp Val Ile His Glu Met 50 55 60 GCT CCA CCG CTC AAA 207 Ala Pro Pro Leu Lys 65
する遺伝子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGG TCA CAG GTC TCC ACT CAG SGG TCT GGG TCA CAC GAA AAC TCA 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Xaa Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCT GYA TCG GRG GGT ACA WCT ATA AAT TAC ACA CCC ATA AAT TAC 96 Asn Ser Xaa Ser Xaa Gly Thr Xaa Ile Asn Tyr Thr Pro Ile Asn Tyr 20 25 30 TAT AAG GAT GCA TAT GCT GCA AGT GCG GGA CGM CAG GAT ATG TCC CAG 144 Tyr Lys Asp Ala Tyr Ala Ala Ser Ala Gly Arg Gln Asp Met Ser Gln 35 40 45 GAC CCG AAG AAA TTC ACC GAT CCT GTC ATG GAC GTT ATA CAT GAG ATG 192 Asp Pro Lys Lys Phe Thr Asp Pro Val Met Asp Val Ile His Glu Met 50 55 60 GCT CCA CCG CTC AAA 207 Ala Pro Pro Leu Lys 65
【００６８】配列番号：２６ 配列の長さ：２０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to genomic RNA 起源 生物名：coxsackievirus A16 株名：０２４１／９１ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１−２０７ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の情報 コクサッキーＡ群ウイルス１６型のＶｐ４蛋白をコード
する遺伝子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGG TCA CAG GTC TCC ACT CAA CGG TCT GGG TCA CAT GAG AAC TCA 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCA TCA GAG GGT TCA ACT ATA AAT TAC ACA ACC ATA AAT TAC 96 Asn Ser Ala Ser Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAT AAA GAT GCA TAT GCT GCG AGT GCG GGG CGC CAG GAT ATG TCC CAA 144 Tyr Lys Asp Ala Tyr Ala Ala Ser Ala Gly Arg Gln Asp Met Ser Gln 35 40 45 GAT CCG AAG AAA TTT ACC GAT CCT GTT ATG GAT GTT ATA CAC GAG ATG 192 Asp Pro Lys Lys Phe Thr Asp Pro Val Met Asp Val Ile His Glu Met 50 55 60 GCT CCA CCA CTC AAA 207 Ala Pro Pro Leu Lys 65
する遺伝子領域の１〜２０７番目の塩基配列 配列 ATG GGG TCA CAG GTC TCC ACT CAA CGG TCT GGG TCA CAT GAG AAC TCA 48 Met Gly Ser Gln Val Ser Thr Gln Arg Ser Gly Ser His Glu Asn Ser 5 10 15 AAC TCA GCA TCA GAG GGT TCA ACT ATA AAT TAC ACA ACC ATA AAT TAC 96 Asn Ser Ala Ser Glu Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Thr Ile Asn Tyr 20 25 30 TAT AAA GAT GCA TAT GCT GCG AGT GCG GGG CGC CAG GAT ATG TCC CAA 144 Tyr Lys Asp Ala Tyr Ala Ala Ser Ala Gly Arg Gln Asp Met Ser Gln 35 40 45 GAT CCG AAG AAA TTT ACC GAT CCT GTT ATG GAT GTT ATA CAC GAG ATG 192 Asp Pro Lys Lys Phe Thr Asp Pro Val Met Asp Val Ile His Glu Met 50 55 60 GCT CCA CCA CTC AAA 207 Ala Pro Pro Leu Lys 65
【００６９】配列番号：２７ 配列の長さ：１６ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 他の情報 エンテロウイルスの５´非翻訳領域の一部で antigenom
ic sense RNAに相補性を有する配列 配列 CTACTTTGGG TGTCCG 16
ic sense RNAに相補性を有する配列 配列 CTACTTTGGG TGTCCG 16
【００７０】配列番号：２８ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 他の情報 エンテロウイルスのＶｐ２蛋白をコードする遺伝子領域
の一部で genomic sense RNAに相補性を有する配列。配
列中、塩基番号６番目のＱはＴ又はＣを示し、塩基番号
１８番目のＮはＡ又はＣ又はＧ又はＴを示す。 配列 GGTAAQTTCC ACCACCANCC 20
の一部で genomic sense RNAに相補性を有する配列。配
列中、塩基番号６番目のＱはＴ又はＣを示し、塩基番号
１８番目のＮはＡ又はＣ又はＧ又はＴを示す。 配列 GGTAAQTTCC ACCACCANCC 20
【００７１】配列番号：２９ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 他の情報 エンテロウイルスの５´非翻訳領域の一部で antigenom
ic sense RNAに相補性を有する配列 配列 CATCTTTGGG TGTCCGTGTT ２０
ic sense RNAに相補性を有する配列 配列 CATCTTTGGG TGTCCGTGTT ２０
【００７２】配列番号：３０ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 他の情報 エンテロウイルスのＶＰ２蛋白をコードする遺伝子領域
の一部で ｇｅｎｏｍｉｃ ｓｅｎｓｅ ＲＮＡに相補
性を有する配列 配列 TCAGGCAACT TCCACCACCA 20
の一部で ｇｅｎｏｍｉｃ ｓｅｎｓｅ ＲＮＡに相補
性を有する配列 配列 TCAGGCAACT TCCACCACCA 20
【００７３】配列番号：３１ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 他の情報 エンテロウイルスのＶｐ４蛋白をコードする遺伝子領域
の１１８〜１３７番目の antigenomic sense RNAに相補
性を有する配列 配列 AGGCTCTGTT TGCCTGCTGT 20
の１１８〜１３７番目の antigenomic sense RNAに相補
性を有する配列 配列 AGGCTCTGTT TGCCTGCTGT 20
【００７４】配列番号：３２ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 他の情報 エンテロウイルスのＶｐ４蛋白をコードする遺伝子領域
の１１８〜１３７番目の antigenomic sense RNAに相補
性を有する配列 配列 ATATCCTGGC GCCCCGCACT 20
の１１８〜１３７番目の antigenomic sense RNAに相補
性を有する配列 配列 ATATCCTGGC GCCCCGCACT 20
【００７５】配列番号：３３ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 他の情報 エンテロウイルスのＶｐ４蛋白をコードする遺伝子領域
の１２２〜１４１番目の antigenomic sense RNAに相補
性を有する配列 配列 TTTGAGGCTC TGTTTGCCTG 20
の１２２〜１４１番目の antigenomic sense RNAに相補
性を有する配列 配列 TTTGAGGCTC TGTTTGCCTG 20
【００７６】配列番号：３４ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 他の情報 エンテロウイルスのＶｐ４蛋白をコードする遺伝子領域
の１２２〜１４１番目の antigenomic sense RNAに相補
性を有する配列 配列 GGACATATCC TGGCGCCCCG 20
の１２２〜１４１番目の antigenomic sense RNAに相補
性を有する配列 配列 GGACATATCC TGGCGCCCCG 20
【００７７】配列番号：３５ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 他の情報 エンテロウイルスのＶｐ４蛋白をコードする遺伝子領域
の１８１〜２００番目の antigenomic sense RNAに相補
性を有する配列 配列 GGCGCTGCCA TTTCAGTGAA 20
の１８１〜２００番目の antigenomic sense RNAに相補
性を有する配列 配列 GGCGCTGCCA TTTCAGTGAA 20
【００７８】配列番号：３６ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 他の情報 エンテロウイルスのＶｐ４蛋白をコードする遺伝子の１
８１〜２００番目の antigenomic sense RNAに相補性を
有する配列 配列 GGTGGAGCCA TCTCATGTAT 20
８１〜２００番目の antigenomic sense RNAに相補性を
有する配列 配列 GGTGGAGCCA TCTCATGTAT 20
【００７９】配列番号：３７ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 他の情報 エンテロウイルスのＶｐ４蛋白をコードする遺伝子領域
の１７３〜１９２番目の antigenomic sense RNAに相補
性を有する配列。配列中、塩基番号１９番目のＱは、Ｃ
又はＴを示す。 配列 CATTTCAGTG AAAATRTCQT 20
の１７３〜１９２番目の antigenomic sense RNAに相補
性を有する配列。配列中、塩基番号１９番目のＱは、Ｃ
又はＴを示す。 配列 CATTTCAGTG AAAATRTCQT 20
【００８０】配列番号：３８ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 他の情報 エンテロウイルスのＶｐ４蛋白をコードする遺伝子領域
の１７３〜１９２番目の antigenomic sense RNAに相補
性を有する配列 配列 CATCTCRTGT ATAACRTCCA 20
の１７３〜１９２番目の antigenomic sense RNAに相補
性を有する配列 配列 CATCTCRTGT ATAACRTCCA 20
【００８１】配列番号：３９ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 他の情報 エンテロウイルスのＶｐ４をコードする遺伝子領域の１
１８〜１３７番目の antigenomic sense RNAの相補性を
有する配列 配列 ATATCTTGAC GCCCAGCGCT 20
１８〜１３７番目の antigenomic sense RNAの相補性を
有する配列 配列 ATATCTTGAC GCCCAGCGCT 20
【００８２】配列番号：４０ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 他の情報 エンテロウイルスのＶｐ４をコードする遺伝子領域の１
７２〜１９１番目の antigenomic sense RNAの相補性を
有する配列。配列中、塩基番号３番目のＱは、Ｃ又はＴ
を示す。 配列 ATQTCATGTA TAACRTCCAT 20
７２〜１９１番目の antigenomic sense RNAの相補性を
有する配列。配列中、塩基番号３番目のＱは、Ｃ又はＴ
を示す。 配列 ATQTCATGTA TAACRTCCAT 20
【００８３】配列番号：４１ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 他の情報 エンテロウイルスのＶｐ４をコードする遺伝子領域の１
７２〜１９１番目の antigenomic sense RNAの相補性を
有する配列。配列中、塩基番号１８番目のＱは、Ｃ又は
Ｔを示す。 配列 ATTTCAGTGA AAATRTCQTT 20
７２〜１９１番目の antigenomic sense RNAの相補性を
有する配列。配列中、塩基番号１８番目のＱは、Ｃ又は
Ｔを示す。 配列 ATTTCAGTGA AAATRTCQTT 20
【図１】ＣＡ１６特異プローブ（配列番号３２、配列番
号３８及び配列番号３９）と増幅ＤＮＡとのハイブリッ
ド形成を示す図である。
号３８及び配列番号３９）と増幅ＤＮＡとのハイブリッ
ド形成を示す図である。
【図２】ＣＡ１６特異プローブ（配列番号３２、配列番
号３８及び配列番号３９）と増幅ＤＮＡとのハイブリッ
ド形成を示す図である。
号３８及び配列番号３９）と増幅ＤＮＡとのハイブリッ
ド形成を示す図である。
【図３】ＣＡ１６特異プローブ（配列番号３２、配列番
号３８及び配列番号３９）と増幅ＤＮＡとのハイブリッ
ド形成を示す図である。
号３８及び配列番号３９）と増幅ＤＮＡとのハイブリッ
ド形成を示す図である。
【図４】ＣＡ１６特異プローブ（配列番号３２、配列番
号３８及び配列番号３９）と増幅ＤＮＡとのハイブリッ
ド形成を示す図である。
号３８及び配列番号３９）と増幅ＤＮＡとのハイブリッ
ド形成を示す図である。
【図５】ＣＡ１６特異プローブ（配列番号３２、配列番
号３８及び配列番号３９）と増幅ＤＮＡとのハイブリッ
ド形成を示す図である。
号３８及び配列番号３９）と増幅ＤＮＡとのハイブリッ
ド形成を示す図である。
【図６】ＣＡ１６特異プローブ（配列番号３２、配列番
号３８及び配列番号３９）と増幅ＤＮＡとのハイブリッ
ド形成を示す図である。
号３８及び配列番号３９）と増幅ＤＮＡとのハイブリッ
ド形成を示す図である。
【図７】ＣＡ１６特異プローブ（配列番号３２、配列番
号３８及び配列番号３９）と増幅ＤＮＡとのハイブリッ
ド形成を示す図である。
号３８及び配列番号３９）と増幅ＤＮＡとのハイブリッ
ド形成を示す図である。
【図８】ＣＡ１６特異プローブ（配列番号３２、配列番
号３８及び配列番号３９）と増幅ＤＮＡとのハイブリッ
ド形成を示す図である。
号３８及び配列番号３９）と増幅ＤＮＡとのハイブリッ
ド形成を示す図である。
【図９】ＥＶ７１特異ＤＮＡプローブ（配列番号３１及
び配列番号４１）と増幅ＤＮＡとのハイブリッド形成を
示す図である。
び配列番号４１）と増幅ＤＮＡとのハイブリッド形成を
示す図である。
【図１０】ＥＶ７１特異ＤＮＡプローブ（配列番号３１
及び配列番号４１）と増幅ＤＮＡとのハイブリッド形成
を示す図である。
及び配列番号４１）と増幅ＤＮＡとのハイブリッド形成
を示す図である。
【図１１】ＥＶ７１特異ＤＮＡプローブ（配列番号３１
及び配列番号４１）と増幅ＤＮＡとのハイブリッド形成
を示す図である。
及び配列番号４１）と増幅ＤＮＡとのハイブリッド形成
を示す図である。
【図１２】ＥＶ７１特異ＤＮＡプローブ（配列番号３１
及び配列番号４１）と増幅ＤＮＡとのハイブリッド形成
を示す図である。
及び配列番号４１）と増幅ＤＮＡとのハイブリッド形成
を示す図である。
【図１３】ＥＶ７１特異ＤＮＡプローブ（配列番号３１
及び配列番号４１）と増幅ＤＮＡとのハイブリッド形成
を示す図である。
及び配列番号４１）と増幅ＤＮＡとのハイブリッド形成
を示す図である。
【図１４】ＥＶ７１特異ＤＮＡプローブ（配列番号３１
及び配列番号４１）と増幅ＤＮＡとのハイブリッド形成
を示す図である。
及び配列番号４１）と増幅ＤＮＡとのハイブリッド形成
を示す図である。
【図１５】ＥＶ７１特異ＤＮＡプローブ（配列番号３１
及び配列番号４１）と増幅ＤＮＡとのハイブリッド形成
を示す図である。
及び配列番号４１）と増幅ＤＮＡとのハイブリッド形成
を示す図である。
【図１６】ＥＶ７１特異ＤＮＡプローブ（配列番号３１
及び配列番号４１）と増幅ＤＮＡとのハイブリッド形成
を示す図である。
及び配列番号４１）と増幅ＤＮＡとのハイブリッド形成
を示す図である。
【図１７】エンテロウイルスの増幅遺伝子領域の位置、
増幅ＤＮＡの大きさ並びにＣＡ１６特異ＤＮＡプローブ
及びＥＶ７１特異ＤＮＡプローブの結合位置を示す図で
ある。図中２ケタの数字は配列番号、（ ）内の数字は
Ｖｐ４蛋白をコードする遺伝子領域内の位置、〔 〕内
の数字はＤＮＡ断片の大きさ（ｂｐ）を示す。
増幅ＤＮＡの大きさ並びにＣＡ１６特異ＤＮＡプローブ
及びＥＶ７１特異ＤＮＡプローブの結合位置を示す図で
ある。図中２ケタの数字は配列番号、（ ）内の数字は
Ｖｐ４蛋白をコードする遺伝子領域内の位置、〔 〕内
の数字はＤＮＡ断片の大きさ（ｂｐ）を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 栄 賢司 愛知県名古屋市北区辻町字流７−６ 愛知 県衛生研究所内 (72)発明者 武田 直和 東京都新宿区戸山１−23−１ 国立予防衛 生研究所内
Claims (6)
- 【請求項１】 （ｉ）エンテロウイルス７１型及びコク
サッキーＡ群ウイルス１６型の、５´非翻訳領域の一部
とエンテロウイルスの各血清型に特異的なＤＮＡ配列を
持つＶｐ４及びＶｐ２蛋白の一部をコードするＤＮＡ領
域を増幅し、（ii）該増幅ＤＮＡ中のＶｐ４蛋白をコー
ドするＤＮＡ領域のＤＮＡ配列を決定し、（iii)該ＤＮ
Ａ配列中のエンテロウイルス７１型及びコクサッキーＡ
群ウイルス１６型の各血清型に特異的なＤＮＡ配列に基
き、該ＤＮＡ配列に各々相補性を有するＤＮＡ配列をそ
れぞれ設計してＤＮＡプローブとし、（iv）該ＤＮＡプ
ローブと上記（ｉ）の方法により得られる増幅ＤＮＡと
の結合能を解析することを特徴とするエンテロウイルス
７１型及びコクサッキーＡ群ウイルス１６型の型鑑別方
法。 - 【請求項２】 増幅ＤＮＡ中のエンテロウイルス７１型
のＶｐ４蛋白をコードするＤＮＡ領域と相補性を有する
ＤＮＡ配列が、配列番号３１、配列番号３３、配列番号
３５、配列番号３７又は配列番号４１で示されるＤＮＡ
配列であり、増幅ＤＮＡ中のコクサッキーＡ群ウイルス
１６型のＶｐ４蛋白をコードするＤＮＡ領域と相補性を
有するＤＮＡ配列が、配列番号３２、配列番号３４、配
列番号３６、配列番号３８、配列番号３９又は配列番号
４０で示されるＤＮＡ配列である、請求項１記載の方
法。 - 【請求項３】 配列番号３１、配列番号３３、配列番号
３５、配列番号３７又は配列番号４１で示されるＤＮＡ
配列を含む、エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白をコ
ードするＤＮＡ領域の増幅ＤＮＡと相補性を有するＤＮ
Ａプローブ。 - 【請求項４】 配列番号３２、配列番号３４、配列番号
３６、配列番号３８、配列番号３９又は配列番号４０で
示されるＤＮＡ配列を含む、コクサッキーＡ群ウイルス
１６型のＶｐ４蛋白をコードするＤＮＡ領域の増幅ＤＮ
Ａと相補性を有するＤＮＡプローブ。 - 【請求項５】 エンテロウイルス７１型のＶｐ４蛋白で
あって、そのアミノ酸配列中に配列番号１で示されるア
ミノ酸配列を含む蛋白をコードするＤＮＡ断片。 - 【請求項６】 コクサッキーＡ群ウイルス１６型のＶｐ
４蛋白であって、そのアミノ酸配列中に配列番号２で示
されるアミノ酸配列を含む蛋白をコードするＤＮＡ断
片。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7268660A JPH08173195A (ja) | 1994-10-28 | 1995-10-17 | エンテロウイルス７１型及びコクサッキーａ群ウイルス１６型の型鑑別方法並びにそれに用いるｄｎａプローブ及びｄｎａ断片 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26512494 | 1994-10-28 | ||
| JP6-265124 | 1994-10-28 | ||
| JP7268660A JPH08173195A (ja) | 1994-10-28 | 1995-10-17 | エンテロウイルス７１型及びコクサッキーａ群ウイルス１６型の型鑑別方法並びにそれに用いるｄｎａプローブ及びｄｎａ断片 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08173195A true JPH08173195A (ja) | 1996-07-09 |
Family
ID=26546831
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7268660A Pending JPH08173195A (ja) | 1994-10-28 | 1995-10-17 | エンテロウイルス７１型及びコクサッキーａ群ウイルス１６型の型鑑別方法並びにそれに用いるｄｎａプローブ及びｄｎａ断片 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08173195A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102944677A (zh) * | 2012-11-26 | 2013-02-27 | 深圳市伯劳特生物制品有限公司 | 一种手足口病分型检测试剂盒及其制备方法 |
| WO2016145087A1 (en) * | 2015-03-09 | 2016-09-15 | National Health Research Institutes | High-growth enterovirus 71 strains and vaccines |
| CN106795499A (zh) * | 2014-06-12 | 2017-05-31 | 淡马锡生命科学研究院有限公司 | 稳定的冷适应的温度敏感性嵌合肠道病毒的开发 |
| CN114480735A (zh) * | 2022-01-18 | 2022-05-13 | 上海伯杰医疗科技股份有限公司 | 一种肠道a组病毒全基因组测序的方法及其应用 |
-
1995
- 1995-10-17 JP JP7268660A patent/JPH08173195A/ja active Pending
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| CN102944677A (zh) * | 2012-11-26 | 2013-02-27 | 深圳市伯劳特生物制品有限公司 | 一种手足口病分型检测试剂盒及其制备方法 |
| CN106795499A (zh) * | 2014-06-12 | 2017-05-31 | 淡马锡生命科学研究院有限公司 | 稳定的冷适应的温度敏感性嵌合肠道病毒的开发 |
| CN106795499B (zh) * | 2014-06-12 | 2021-05-14 | 淡马锡生命科学研究院有限公司 | 稳定的冷适应的温度敏感性嵌合肠道病毒的开发 |
| WO2016145087A1 (en) * | 2015-03-09 | 2016-09-15 | National Health Research Institutes | High-growth enterovirus 71 strains and vaccines |
| CN108055827A (zh) * | 2015-03-09 | 2018-05-18 | 财团法人卫生研究院 | 高成长肠病毒71型病毒株及其疫苗 |
| CN108055827B (zh) * | 2015-03-09 | 2021-12-24 | 台湾卫生研究院 | 高成长肠病毒71型病毒株及其疫苗 |
| CN114480735A (zh) * | 2022-01-18 | 2022-05-13 | 上海伯杰医疗科技股份有限公司 | 一种肠道a组病毒全基因组测序的方法及其应用 |
| CN114480735B (zh) * | 2022-01-18 | 2024-04-09 | 上海伯杰医疗科技股份有限公司 | 一种肠道a组病毒全基因组测序的方法及其应用 |
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| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20050823 |
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| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20051220 |