JPH0783928A - 生物学的特異的反応性物質の存在を検出又は測定する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 担体粒子上での生物学的特異的凝集反応によ
り生物学的特異的反応性物質の存在を検出又は測定する
方法において、１０ｍＭ以上の塩の共存下に５〜５０Ｖ
／ｍｍの電界強度になるように交流電圧を該反応系に印
加する。 【効果】 従来の測定方法よりも更に簡便且つ迅速に、
しかも高感度で生物学的特異的反応性物質の存在を検出
又は測定することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は担体粒子上での生物学的
特異的凝集反応により、生物学的特異的反応性物質の存
在を検出又は測定する方法に関する。更に詳しくは、塩
の共存下に交流電圧を該反応系に印加することにより、
従来よりも迅速且つ簡便に、しかも高感度で生物学的特
異的反応性物質の存在を検出又は測定する方法に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】生物学的特異的反応性物質の存在を検出
又は測定する方法としては、例えば、酵素免疫測定法、
放射線免疫測定法が従来より用いられている。これらの
方法は高感度であり精度も高い。しかし酵素、放射線を
使用するため試薬が不安定であることや保管・保存上の
規制があることから、測定において細かい配慮や技術を
要求されるので、より簡便な方法が求められていた。ま
たこれらの方法は測定に比較的長時間を要するため、緊
急検査においては対処が困難とされ、高感度且つ迅速な
方法がさかんに研究されるようになった。

【０００３】１９７０年以降、ラテックス、血球等の担
体上での特異的凝集反応を測定する各種の光学的分析方
法が開発されている。これらの分析システムにおける反
応温度は、一般的には３７〜４５℃の範囲で行われ、撹
拌翼などによって撹拌することにより特異的凝集反応が
進行する。このとき測定（反応）に要する時間は、おお
よそ１０〜２０分であり、酵素免疫測定法、放射線免疫
測定法に比べ迅速であるが、測定感度、測定範囲が前記
測定法に比べ劣るといわれている。

【０００４】免疫学的凝集反応を促進し、また形成する
凝集塊を検出しやすくするために、反応系に直流パルス
電圧を印加することが知られている。例えば、特開昭５
９−１７３７６１（鈴木ら）及び松岡らによるＡｎａ
ｌ．Ｃｈｅｍ．，５７巻，１９９８〜２００２頁（１９
８５）には、カンディダ・アルビカンスの蒸留水懸濁液
と抗体の蒸留水溶液を、電極を備えたキュベットに注入
混合後、パルス高さ１００Ｖ（電界強度１００Ｖ／ｍ
ｍ）の直流パルス電圧を印加して凝集反応を促進するこ
とにより約５分の反応時間で凝集率が約５０％になると
記載されている。

【０００５】また民谷らによるＢｉｏｓｅｎｓｏｒｓ，
３（３），１３９〜１４６頁（１９８８）には、ラテッ
クス粒子に結合したヒト免疫グロブリンＧに対する抗体
の蒸留水中懸濁液とヒト免疫グロブリンＧの蒸留水溶液
を電極を備えたキュベットにて混合後、パルス高さ２０
０Ｖ（電界強度２００Ｖ／ｍｍ）の直流パルス電圧を印
加して、１０分後に５０％の凝集度が得られたと記載さ
れている。

【０００６】

【解決すべき課題】しかしながら、前記の直流パルス電
圧を印加する方法ではまだ凝集反応の促進が不充分なた
め、測定時間、測定感度、測定精度に関して充分に満足
のいくものとはなっていない。また、前記の直流パルス
を印加する方法では反応液の電気分解が起こりやすいと
いう欠点があり、電気分解を起こさないようにするた
め、反応液の塩濃度を極力低くする必要があった。した
がって、測定試料、特に生体試料においては反応系中の
塩濃度を調製するための前処理が必要となるなど簡便な
方法とはいえなかった。

【０００７】したがって本発明の目的は、上記したよう
な問題点を改善し従来の測定方法よりも更に簡便且つ迅
速で、しかも高感度で生物学的特異的反応性物質の存在
を検出又は測定することにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、担体粒子
上での生物学的特異的凝集反応により生物学的特異的反
応性物質の存在を検出又は測定する際に、該反応系に交
流電圧を印加することにより、直流パルス電圧を印加し
た場合よりも、反応液の電気分解を著しく抑制でき、そ
のため該反応系に生物学的特異的凝集反応を促進する作
用のある塩を存在させることができることを見出だし
た。本発明はかかる知見に基づき達成されたものであ
る。

【０００９】すなわち、本発明は、担体粒子上での生物
学的特異的凝集反応により生物学的特異的反応性物質の
存在を検出又は測定する方法であって、１０ｍＭ以上の
塩の共存下に５〜５０Ｖ／ｍｍの電界強度になるように
交流電圧を該反応系に印加することを特徴とするもので
ある。

【００１０】担体粒子は、電場をかけると直線的に並ぶ
こと（この現象をパールチェイン化と呼ぶ）、その後電
場を停止すると直線的に並んでいた担体粒子は再分散す
ることが知られている。パールチェイン化の際に生物学
的特異的反応性物質が存在すると、電場を停止後も担体
の再分散が起こらず、パールチェイン化した担体の存在
がなおも認められる。したがって、電場を停止後も再分
散しない、すなわち生物学的特異的凝集反応に関与して
いる凝集粒子を測定することにより生物学的特異的反応
性物質の存在を検出又は測定できるのである。

【００１１】本発明の目的を達成するには、（１）電場
をかけたときの担体のパールチェイン化の促進、（２）
電場を停止後、生物学的特異的凝集反応に関与していな
い担体の再分散の促進、（３）電場を停止後、生物学的
特異的凝集反応に関与しパールチェイン化している担体
の再分散の防止・抑制、（４）電場をかけたとき塩が存
在している反応液の電気分解の抑制、が重要となる。本
発明は上記（１）〜（４）の条件をすべて満たすことに
より従来の測定方法よりも簡便且つ迅速に、しかも高感
度で生物学的特異的反応性物質の存在を検出又は測定す
ることができるのである。

【００１２】本発明において「生物学的特異的凝集反
応」なる用語は、ある物質が特定の物質又はごく少数の
特定の物質群とのみ反応し、担体粒子上で凝集するよう
な反応を示すものとし、幅広い反応を含み得る。例え
ば、抗原またはハプテンと抗体との反応（免疫反応）、
相補的な核酸間のハイブリダイゼーション、レクチンと
そのレセプターとの反応などを挙げることができる。

【００１３】本発明における「生物学的特異的反応性物
質」は、上記の生物学的特異的凝集反応をし、ラテック
ス、血球等を担体として使用する凝集法で測定され得る
物質から選択できる。例えば、ＡＦＰ、ＣＥＡ、ＣＡ１
９−９、ｈＣＧ、フェリチン等の腫瘍マーカー、プロテ
インＣ、プロテインＳ、ＡＴ III、ＦＤＰ，Ｄ−ダイマ
ー等の凝固線溶糸マーカー、ＣＲＰ、ＡＳＯ、ＨＢｓ抗
原、ＨＢｓ抗体等の感染症マーカー、ＴＳＨ、プロラク
チン、インシュリン等のホルモン、ＩｇＧ、ＩｇＥ、Ｉ
ｇＡ、Ｃ３、Ｃ４等の免疫グロブリン及び補体成分、ミ
オグロビン、ミオシン等の組織成分、ＤＮＡ等の核酸が
挙げられる。

【００１４】本発明において印加する電圧は、交流電圧
であることが必須である。交流電圧とすることにより、
直流パルス電圧の場合よりも反応液の電気分解が起こり
にくく、したがって反応液中に塩の存在を許容できるこ
ととなる。後述するように、塩が存在することにより生
物学的特異的凝集反応は促進される。また塩の存在が許
容されるため、生体試料等を前処理することなく測定で
きる。

【００１５】本発明において、交流電圧は波高値の電圧
を示すものとする。

【００１６】本発明の交流電圧の波形は連続波、パルス
波のいずれであっても良く、また任意の形状とし得る
が、好ましくは方形波、矩形波、正弦波、三角波等であ
る。最も好ましくは方形波である。

【００１７】本発明の交流電圧は電界強度が５〜５０Ｖ
／ｍｍとなるように印加することが必須である。電界強
度が５Ｖ／ｍｍよりも小さいと担体のパールチェイン化
が起こりにくく、したがって凝集反応の促進が不十分と
なる。電界強度が５０Ｖ／ｍｍより大きいと反応液の電
気分解が起こりやすく、凝集反応の測定が困難となる。
交流電圧は、より好ましくは１０〜３０Ｖ／ｍｍ、最も
好ましくは１０〜２０Ｖ／ｍｍの電界強度が得られるよ
うに印加する。

【００１８】本発明の交流の周波数は、検討した範囲内
では生物学的特異的凝集反応の速度に大きく影響しない
が、好ましくは１０ＫＨｚ〜１０ＭＨｚの周波数、より
好ましくは５０ＫＨｚ〜１ＭＨｚの周波数である。

【００１９】本発明の担体粒子としては、ラテックス粒
子、ベントナイト、カオリン、金コロイド、赤血球細
胞、ゼラチン、リポソーム等が挙げられる。ラテックス
粒子としては、凝集反応において一般に用いられている
ものが使用できる。ポリスチレン系ラテックス、ポリビ
ニルトルエン系ラテックス、ポリメタクリレート系ラテ
ックスなどであり、官能基モノマー（−ＣＯＯＨ、−Ｏ
Ｈ、−ＮＨ₂ 、−ＳＯ₃等）が共重合して導入されたタ
イプのものでもよい。好ましい担体はラテックス粒子で
ある。

【００２０】反応系中の担体粒子の濃度が高いほどパー
ルチェインが形成されやすいので凝集反応が促進され
る。また、担体粒子の濃度が高いほど生物学的特異的反
応性物質が存在しない場合に再分散したときの担体粒子
の凝集度が大きくなる傾向がある。反応系中の担体粒子
の濃度は、例えばラテックス粒子の場合、好ましくは
０．０１〜１重量％、より好ましくは０．０２５〜０．
５重量％、最も好ましくは０．０５〜０．１重量％であ
る。

【００２１】担体粒子の平均粒径は、例えばラテックス
粒子の場合、０．５〜１０μｍが好ましい。平均粒径が
Ｏ．５μｍ以下又は１０μｍ以上であるとパールチェイ
ンが形成されにくく好ましくない。担体粒子の平均粒径
は、例えばラテックス粒子の場合、さらに好ましくは１
〜５μｍ、最も好ましくは２〜３μｍである。

【００２２】本発明では、塩が反応系中に１０ｍＭ以上
の比較的高い濃度で存在することが必須である。１０ｍ
Ｍ以下の塩濃度では生物学的特異的凝集反応の促進が十
分でなく、また本発明の目的を達成できない。塩が反応
系中に６００ｍＭ以上の濃度で存在すると反応液の電気
分解が起こり易くなるので好ましくない。より好ましい
塩の濃度は１０〜３００ｍＭ、最も好ましい塩の濃度は
２５〜１５０ｍＭである。生体試料等が本発明でいう塩
を含有している場合には、反応系での塩濃度が上記の範
囲に入るように試薬の調製を行なう。

【００２３】直流パルスを用いる場合では約６ｍＭの塩
濃度の反応液でも電気分解が起こるため、塩の存在下で
は生物学的特異的凝集反応の測定は困難である。

【００２４】本発明における塩は生物学的特異的凝集反
応を促進するものの中から選択され得る。例えば、塩化
ナトリウム、塩化カリウム、硝酸ナトリウム、硝酸カリ
ウム、塩化アンモニウムが挙げられるがこれに限定され
るものではない。好ましい塩は例えば塩化ナトリウム、
塩化カリウム、塩化アンモニウム等であり、モル電気伝
導度が１０ｍＭ、２５℃の水溶液において１００ｃｍ²
／（Ω・ｍｏｌ）以上の値を示す塩である。

【００２５】本発明の好ましい態様としては、生物学的
特異的反応性物質が抗原及び／又は抗体である該方法が
挙げられる。抗原／抗体としては、前記のものが挙げら
れ、好ましくはミオグロビン／抗ミオグロビン抗体、ヒ
トＡＦＰ／ヒトＡＦＰ抗体等が挙げられる。

【００２６】更なる本発明の好ましい態様として、担体
粒子が抗体を感作させたラテックス粒子であり、生物学
的特異的反応性物質が抗原である該方法が挙げられる。
ラテックス粒子への抗体の感作は、例えば、従来周知の
方法でラテックス粒子に抗体を吸着又は結合させること
により実施することができる。抗原及び抗体としては、
前記した組み合わせのものが例示できる。

【００２７】

【実施例】以下、実施例及び比較例をもって本発明を詳
細に説明するが、これらは本発明を限定するものではな
い。

【００２８】実施例１ 印加時間と再分散時間 （１）抗ミオグロビン抗体感作ラテックス試薬の調製 ０．３７５ｍｇの抗ミオグロビン抗体（Ｏｒｇａｎｏｎ
Ｔｅｋｎｉｋａ Ｎ．Ｖ．製）を８ｍｌのグリシン緩
衝液（Ｏ．１Ｍグリシン、５０ｍＭ塩化ナトリウム、
０．０５％アジ化ナトリウム含有、以下ＧＢＳと略す）
に溶解し、２．１６μｍの蛍光標識ラテックス（ポリサ
イエンス社、固形分２．５％懸濁液）２ｍｌを加え室温
で２時間撹拌した後、感作したラテックスを遠心分離し
て上清を除去した。沈殿を０．２％牛血清アルブミンの
グリシン緩衝液溶液（０．２％ＢＳＡ−ＧＢＳ）２５ｍ
ｌに懸濁させ、抗ミオグロビン抗体感作ラテックス試薬
を調製した。

【００２９】（２）測定装置 図１の装置を使用し生物学的特異的凝集反応を測定し
た。スライドグラス１，２にはさまれた電極３，４（電
極の厚さ：０．０２ｍｍ、電極間の距離：０．５ｍｍ）
に交流電源供給装置により交流電圧を印加する。蛍光顕
微鏡７、ＣＣＤカメラ８、画像処理ボード９、パーソナ
ルコンピューター１０より成る画像処理装置により、担
体の凝集状態を測定する。

【００３０】（３）測定方法 ０．５％牛血清アルブミンのグリシン緩衝液溶液（０．
５％ＢＳＡ−ＧＢＳ）を用いて、標準ミオグロビンを希
釈して、濃度０及び１００ｎｇ／ｍｌの検体を調製し
た。これらの検体１０μｌ，前述した抗ミオグロビン抗
体感作ラテックス試薬１０μｌをスライドグラス上で混
合させ、前述した装置を用いて、周波数１００ＫＨｚの
交流電圧（方形波）を２０Ｖ／ｍｍの電界強度で１分間
印加しパールチェインを形成させた。反応系におけるラ
テックス粒子の濃度は０．１重量％であった。この１分
間の印加後、直ちに電源を切り１〜２分間放置すること
により生物学的特異的凝集反応に関与していないラテッ
クス粒子を再分散させた後、画像処理装置を用いて、ラ
テックス粒子の凝集度（ＡＲ）を、以下の式により求め
た。そして、５画面の平均をとって凝集度とし、反応性
を測定した。

【００３１】ＡＲ＝（２個以上に凝集した粒子数）／
（総粒子数）×１００ （％） （４）結果 図２に凝集度の経時的な変化を示した。ミオグロビン濃
度が１００ｎｇ／ｍｌの検体は、交流電圧を１分間印加
することにより約９０％の凝集度（ＡＲ）を示し、電源
を切って１〜２分間再分散させても凝集度は約８０％で
ほぼ一定であった。一方、ミオグロビン濃度が０ｎｇ／
ｍｌの検体は、交流電圧を１分間印加することにより約
９０％の凝集度（ＡＲ）を示したが、電源を切って１〜
２分間再分散させることにより凝集度は約２０％となっ
た。このことは、１分間の交流電圧の印加で担体は十分
に凝集し、また印加後直ちに電源を切り１〜２分間放置
することにより、生物学的特異的凝集反応に関与してい
ないラテックス粒子はほぼ完全に再分散するが、生物学
的特異的凝集反応に関与しているラテックス粒子はほと
んど再分散しないことを示している。

【００３２】実施例２ 印加電圧の影響 （１）抗ミオグロビン抗体感作ラテックス試薬の調製 実施例１と同様にして抗ミオグロビン抗体感作ラテック
ス試薬を調製した。

【００３３】（２）測定装置 図１の装置を使用し生物学的特異的凝集反応を測定し
た。

【００３４】（３）測定方法 １００ＫＨｚの交流電圧（方形波）を表１に示した電界
強度になるように１分間印加しパールチェインを形成さ
せた。この１分間の印加後、直ちに電源を切り１分間放
置することにより実施例１と同様にしてラテックス粒子
の凝集度（ＡＲ）を測定した。

【００３５】（４）結果 表１の結果から、電界強度としては５〜５０Ｖ／ｍｍ、
より好ましくは１０〜３０Ｖ／ｍｍ、最も好ましくは１
０〜２０Ｖ／ｍｍであることが分かる。

【００３６】

【表１】

【００３７】なお、直流パルス（周波数８ＫＨｚ、パル
ス幅２０μｓｅｃ、電界強度２０Ｖ／ｍｍ）を印加した
場合、直ちに反応液が電気分解を起こし凝集度は測定不
能であった。

【００３８】実施例３ 交流周波数の影響 周波数１０ＫＨｚ〜１０ＭＨｚの交流電圧（方形波）を
電界強度が２０Ｖ／ｍｍとなるように印加し、実施例２
と同様にして凝集度を測定した。表２に示した結果か
ら、交流周波数は１０ＫＨｚ〜１０ＭＨｚの間では生物
学的特異的凝集反応に大きな影響を与えないことが分か
る。

【００３９】

【表２】

【００４０】実施例４ ラテックス粒子の濃度の影響 ラテックス粒子の濃度が反応系に対して０．０２５〜
０．５重量％になるように抗ミオグロビン抗体感作ラテ
ックス試薬を実施例１と同様にして調製した。交流電圧
（周波数１００ＫＨｚ、電界強度２０Ｖ／ｍｍ、方形
波）を印加して、凝集度を実施例２と同様にして測定し
た。表３に結果を示す。

【００４１】

【表３】

【００４２】実施例５ ラテックス粒子の粒径の影響 下記の表４に記載した平均粒径のラテックス粒子を用
い、ラテックス粒子の濃度が反応系に対して表４に記載
の濃度になるように抗ミオグロビン抗体感作ラテックス
試薬を実施例１と同様にして調製した。交流電圧（周波
数１００ＫＨｚ、電界強度２０Ｖ／ｍｍ、方形波）を印
加して、ラテックス粒子のパールチェインを実施例１と
同様にして形成させ、パールチェインの形成の有無を観
察した。表４に示した結果から、ラテックス粒子の平均
粒径は０．５〜１０μｍ、好ましくは１〜５μｍ、より
好ましくは２〜３μｍであることが分かる。正弦波、三
角波の交流電圧（周波数１００ＫＨｚ、電界強度２０Ｖ
／ｍｍ）においても同様な結果が得られた。

【００４３】

【表４】

【００４４】実施例６ 塩の濃度の影響（その１） （１） 抗ミオグロビン抗体感作ラテックス試薬の調製 実施例１と同様にして調製した抗ミオグロビン抗体感作
ラテックス試薬を遠心分離して上清を除去した後、沈殿
を精製水に懸濁した。得られた懸濁液に対し、更に遠心
分離、精製水に懸濁という上記の操作を５回繰り返して
脱塩処理を行い、ラテックス濃度１％の懸濁液とした。

【００４５】（２）測定装置 図１の装置を使用しパールチェインの形成、反応液の電
気分解を観察した。

【００４６】（３）実験方法 塩化ナトリウム水溶液（６００、３００、１５０、７
５、５０、２５、１２．５、６．２５、３．２及び０ｍ
Ｍ）と（１）で調製した脱塩抗ミオグロビン抗体感作ラ
テックス試薬をそれぞれ９：１で混合しラテックス濃度
０．１％とした。交流電圧（周波数１００ＫＨｚ、方形
波）を０〜１００Ｖ／ｍｍの電界強度になるように印加
し、パールチェインの形成、反応液の電気分解を観察し
た。

【００４７】（４）結果 表５に示したように、反応系中の塩化ナトリウム濃度が
０〜６００ｍＭの間において約１０Ｖ／ｍｍの電界強度
においてパールチェインの形成が観察された。反応液の
電気分解は、反応系中の塩化ナトリウム濃度が６００ｍ
Ｍの場合には１３Ｖ／ｍｍの電界強度で観察され、反応
系中の塩化ナトリウム濃度が３００ｍＭ以下の場合には
約２０〜３０Ｖ／ｍｍの電界強度で観察された。

【００４８】

【表５】

【００４９】比較例１ 直流パルス（周波数８ＫＨｚ、パルス幅２０μｓｅｃ、
２０Ｖ／ｍｍ）を同様に印加したところ、反応系中の塩
化ナトリウム濃度が６．２５ｍＭ以上の場合には電気分
解を起こし、パールチェインの形成が観察されなかっ
た。

【００５０】実施例７ 塩の濃度の影響（その２） 下記の表６に記載した濃度の塩化ナトリウムを反応系に
含むようにＧＢＳを用い抗ミオグロビン抗体感作ラテッ
クス試薬を実施例１と同様にして調製した。交流電圧
（周波数１００ＫＨｚ、電界強度２０Ｖ／ｍｍ，方形
波）を印加して、凝集度を実施例２と同様にして測定し
た。表６に示した結果から、塩化ナトリウムの濃度は１
０ｍＭ以上、好ましくは２５〜１５０ｍＭであることが
分かる。

【００５１】

【表６】

【００５２】実施例８ （１）抗ミオグロビン感作ラテックス試薬の調製 実施例１と同様にして調製した。

【００５３】（２）測定装置 図１の装置を使用し生物学的特異的凝集反応を測定し
た。

【００５４】（３）測定方法 ０．５％牛血清アルブミンのグリシン緩衝液溶液（０．
５％ＢＳＡ−ＧＢＳ）を用いて、標準ミオグロビンを希
釈し、濃度０、１．０、２．５、５．０、１０、２５、
５０、１００、及び２５０ｎｇ／ｍｌの検体を調製し
た。これらの検体１０μｌ，前述した抗ミオグロビン感
作ラテックス試薬１０μｌをスライドグラス上で混合さ
せ、前述した装置を用いて、周波数１００ＫＨｚの交流
電圧（方形波）を２０Ｖ／ｍｍの電界強度になるように
それぞれ０．５、１．０及び１．５分間印加しパールチ
ェインを形成させた。この印加後、直ちに電源を切り１
分間放置することにより免疫反応に関与していないラテ
ックス粒子を再分散させた後、凝集度（ＡＲ）を測定し
た。

【００５５】（４）結果 図３に示した結果から、印加時間０．５分でほぼ十分な
凝集度を示し、１．０〜１．５分で凝集度はほぼ平衡に
なることが分かる。このことは、本発明により非常に短
時間でしかも精度良く生物学的特異的反応性物質の存在
を検出又は測定することが可能であることを示してい
る。

【００５６】実施例９ 抗ミオグロビン抗体感作ラテックス試薬の調製、測定装
置は実施例１と同様であった。０．５％牛血清アルブミ
ンのグリシン緩衝液溶液（０．５％ＢＳＡ−ＧＢＳ）を
用いて、標準ミオグロビンを希釈して、濃度０、０．
１、１、２．５、５、１０、２５、５０、１００、及び
２５０ｎｇ／ｍｌの検体を調製した。これらの検体を実
施例２と同様にして、ラテックス粒子の凝集度（ＡＲ）
を測定した。

【００５７】交流電圧の印加時間及び放置時間がそれぞ
れ１分の場合及びそれぞれ３０秒の場合の結果を図４に
示す。

【００５８】比較例２ 実施例９の各検体と抗ミオグロビン抗体感作ラテックス
試薬を各５０μｌずつ反応チューブにとり、３７℃で２
０分間インキュベーションした。この反応溶液２０μｌ
をスライドグラスにとり、実施例１と同様にして凝集度
を測定した。結果を図４に示した。

【００５９】図４から、本発明は従来の方法（３７℃
で、１０〜２０分のインキュベーション時間が必要とさ
れている）に比べ非常に短時間で、かつ高感度に測定す
ることができることが分かる。

【００６０】実施例１０ （１）抗ヒトＡＦＰ抗体感作ラテックス試薬の調製 抗ヒトＡＦＰ抗体（道東化学株式会社製）を用いて、実
施例１と同様にして抗ヒトＡＦＰ抗体感作ラテックス試
薬を調製した。

【００６１】（２）測定装置 図１の装置を使用し凝集反応を測定した。

【００６２】（３）測定方法 ０．５％牛血清アルブミンのグリシン緩衝液溶液（０．
５％ＢＳＡ−ＧＢＳ）を用いて、標準ＡＦＰを希釈し、
濃度０、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１
０、５０、１００、５００及び１０００ｎｇ／ｍｌの検
体を調製した。これらの検体１０μｌ，前述した抗ヒト
ＡＦＰ抗体感作ラテックス試薬１０μｌをスライドグラ
ス上で混合させ、前述した装置を用いて、周波数１００
ＫＨｚの交流電圧（方形波）を１６Ｖ／ｍｍの電界強度
で４０秒間印加しパールチェインを形成させた。反応系
中のラテックス粒子の濃度は０．１重量％であった。４
０秒間の印加後、直ちに電源を切り４０秒間放置するこ
とにより生物学的特異的凝集反応に関与していないラテ
ックス粒子を再分散させた後、凝集度（ＡＲ）を測定し
た。

【００６３】（４）結果 結果を図５に示した。

【００６４】比較例３ 実施例１０の各検体と抗ヒトＡＦＰ抗体感作ラテックス
試薬を各５０μｌずつ反応チューブにとり、３７℃で２
０分間インキュベーションした。この反応溶液２０μｌ
をスライドグラスにとり、比較例１と同様にして凝集度
を測定した。結果を図５に示した。

【００６５】図５から、本発明は従来の方法（３７℃
で、１０〜２０分のインキュベーション時間が必要とさ
れている）に比べ非常に短時間で、かつ高感度に測定す
ることができることが分かる。

【００６６】

【発明の効果】本発明によれば、従来の測定方法よりも
簡便且つ迅速に、しかも高感度で生物学的特異的反応性
物質の存在を検出又は測定することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明で使用した生物学的特異的反応性物質の
存在を検出又は測定するための装置の概略図を示す。
（Ａ）は全体図、（Ｂ）はスライドグラスと電極の組合
せ部の断面図である。

【図２】交流電圧の印加時の凝集度及び交流電圧の印加
を停止し再分散させた時の凝集度の変化を表わすグラフ
である。

【図３】ミオグロビン濃度、交流電圧の印加時間と凝集
度の関係を表わすグラフである。

【図４】ミオグロビン濃度と凝集度の関係を表わすグラ
フである。

【図５】ヒトＡＦＰ濃度と凝集度の関係を表わすグラフ
である。

【符号の説明】

１、２：スライドグラス ３、４：電極 ５：交流電源供給装置 ６：オシロスコープ ７：蛍光顕微鏡 ８：ＣＣＤカメラ ９：画像処理ボード １０：パーソナルコンピューター

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 担体粒子上での生物学的特異的凝集反応
   により生物学的特異的反応性物質の存在を検出又は測定
   する方法であって、１０ｍＭ以上の塩の共存下に５〜５
   ０Ｖ／ｍｍの電界強度になるように交流電圧を該反応系
   に印加することを特徴とする前記方法。