JPH0770168A - シアタン誘導体及びこれを有効成分とする神経成長因子産生誘導剤並びに抗菌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】本発明は新規のシアタン（ cyathane ）誘導体
及びこれを有効成分とする神経成長因子（ＮＧＦ）産生
誘導剤並びに抗菌剤を提供するものである。 【構成】本発明のシアタン（ cyathane ）誘導体は下記
の式１で示され、ヤマブシタケの培養菌糸体から抽出、
単離される。 【式１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ハリタケ科（ Hydnace
ae ）、サンゴハリタケ属（ Hericium ）のキノコであ
るヤマブシタケ（ Hericium erinaceum ）の培養菌糸体
中に含まれるシアタン（ cyathane ）誘導体及びこれを
有効成分とする神経成長因子（ＮＧＦ）産生誘導剤並び
に抗菌剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来、キノコの子実体中に含まれる化合
物及びその薬剤効果については複数の報告がある。例え
ば、サルノコシカケ科のキノコであるカワラタケ（ Pol
yporusversicolor ）の子実体中にはエルゴステロール
誘導体が含まれており、該エルゴステロール誘導体には
肝臓癌細胞に対する殺細胞効果のあることがテトラヘド
ロン（ Tetrahedron ）３９，２７７９〜２７８５（１
９８３）に報告されている。またハラタケ科のキノコで
あるヒメマツタケ（ Agaricus blazei ）の子実体中に
もエルゴステロール誘導体が含まれており、該エルゴス
テロール誘導体には子宮頸癌細胞に対する殺細胞効果の
あることがフィトケミストリ（ Phytochemistry ）２
７，２７７７〜２７８９（１９８８）に報告されてい
る。同様のことは特公昭４８−６７６６号公報、特公昭
５５−７１７０２号公報、特公昭５８−６２１１８号公
報等にも報告されている。

【０００３】ハリタケ科のキノコであるヤマブシタケに
ついても、該ヤマブシタケの子実体中にはオクタデセン
酸誘導体、イソインドリノン誘導体、フタリド誘導体が
含まれており、これらには子宮頸癌細胞に対する殺細胞
効果のあることが特開平３−１５７３４７、特開平３−
１５７３６７、特開平３−１５７３７９に報告されてい
る。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】しかし、ヤマブシタケ
の培養菌糸体中に含まれる化合物及びその薬剤効果につ
いては全く報告がない。

【０００５】

【課題を解決するための手段】しかして本発明者らは、
叙上の如き実情に鑑み、ヤマブシタケの培養菌糸体中に
含まれる化合物及びその薬剤効果について鋭意研究した
結果、ヤマブシタケの培養菌糸体中には特定の化学構造
からなる新規のシアタン（ cyathane ）誘導体が含まれ
ており、該シアタン（ cyathane ）誘導体には神経成長
因子（ＮＧＦ）産生誘導効果及び抗菌効果のあることを
見出した。

【０００６】すなわち本発明は、下記の式１で示される
シアタン（ cyathane ）誘導体及び該シアタン（ cyath
ane ）誘導体を有効成分とする神経成長因子（ＮＧＦ）
産生誘導剤並びに抗菌剤に係る。

【０００７】

【式１】

【０００８】式１で示されるシアタン（ cyathane ）誘
導体はヤマブシタケの菌糸体を次のように処理すること
によって得られる。先ず、ヤマブシタケの菌糸体をＳＧ
Ｃ培地（グルコース、スターチ、コーンスティープリカ
ー、ＫＨ₂ＰＯ₄、ＣｕＳＯ₄、ＺｎＣｌ₂、塩酸チアミン
及び水系のＰＨ＝５．３〜５．５に調製された液体培
地）にて３０℃で４週間培養する。得られた培養菌糸体
を遠心分離によって上澄液と沈殿物である培養菌糸体と
に分離し、該培養菌糸体を水及び有機溶媒の均一系で抽
出する。この場合、水及び有機溶媒の均一系としては、
８０〜８５％メタノールやエタノール、８５％アセトン
等がある。抽出は通常室温で行なうが、加熱還流しても
よく、抽出時間は通常１〜７２時間である。例えば、８
５％エタノール中にヤマブシタケの培養菌糸体を加え、
ホモジナイズ処理し、これを室温で一昼夜放置した後、
濾過して抽出液を得、該抽出液を減圧下に４０〜４５℃
で加熱して有機溶媒を蒸発することにより水相を得るの
である。

【０００９】次に、該水相を水及び有機溶媒の混合系で
液−液分配抽出処理して有機溶媒層を分取し、該有機溶
媒層から有機溶媒を蒸発して乾固物を得る。この場合、
有機溶媒としては、クロロホルム、酢酸エチル、ジエチ
ルエーテル等がある。例えば、上記水相に酢酸エチルを
加え、振盪後、放置して分層した酢酸エチル層を分取
し、該酢酸エチル層を減圧下に４０〜４５℃で加熱して
酢酸エチルを蒸発することにより乾固物を得るのであ
る。

【００１０】上記乾固物はそれ自体が神経成長因子（Ｎ
ＧＦ）産生誘導剤及び抗菌剤として有効なものである
が、該乾固物から不純物を除去してその神経成長因子
（ＮＧＦ）産生誘導効果及び抗菌効果を高めるために、
該乾固物をクロマト分画処理するのが好ましく、クロマ
ト分画処理したものを更に再分画処理して目的とするシ
アタン（ cyathane ）誘導体を単離するのがより好まし
い。この場合、詳しくは実施例で後述するように、クロ
ロホルム／アセトン、ヘキサン／エーテル等を展開溶媒
とするシリカゲルカラムクロマトグラフィー或は薄層ク
ロマトグラフィーを用いてクロマト分画処理することが
でき、またＯＤＳカラムを用いた高速液体クロマトグラ
フィーで再分画処理することができる。

【００１１】かくして再分画処理することにより単離さ
れる化合物の物理化学的性質及び構造解析結果は下記の
通りである。 （１）分子量：４７８（Ｃ₂₇Ｈ₄₂Ｏ₇） （２）赤外線吸収スペクトル：３４００，２９６０，２
９５０，２９３０，１６９０，１０８７，１０６０，１
０２０cm^-1 （３）核磁気共鳴スペクトル（¹Ｈ−ＮＭＲ,δ）：０．
７７（３Ｈ，ｓ），０．９５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７
２），０．９７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７２），１．０８
（３Ｈ，ｓ），１．０８（１Ｈ，ｍ），１．４４（１
Ｈ，ｍ），１．５１（１Ｈ，ｍ），１．５２（２Ｈ，
ｍ），１．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１２，１２．
２１），２．０９（１Ｈ，ｍ），２．２６（２Ｈ，
ｍ），２．２６（１Ｈ，ｍ），２．９３（１Ｈ，hepte
t，Ｊ＝６．７２），３．３６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．
２１），３．４６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．９０，１
１．３６），３．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９３），
３．７３（１Ｈ，ｍ），３．７３（１Ｈ，ｍ），３．７
３（１Ｈ，ｍ），４．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．９
０），４．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８８），４．７７
（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），６．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９
３），９．４２（１Ｈ，ｓ），｛１．１５（３Ｈ，ｔ，
Ｊ＝７．０２，ＣＨ₃），３．５３（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝
７．０２，ＣＨ₂）｝ （４）核磁気共鳴スペクトル（¹³Ｃ−ＮＭＲ,δ）：１
７．２，２１．６，２２．１，２３．９，２７．１，２
８．４，３０．８，３４．０，３４．２，３５．８，３
６．９，４３．４，４９．５，６１．１，６８．７，６
８．９，６９．２，６９．５，８５．０，１０４．０，
１３９．０，１４０．３，１４５．３，１５４．４，１
９３．９，｛１５．４（ＣＨ₃），６５．６（ＣＨ₂）｝ （５）溶媒に対する溶解性：クロロホルム、アセトン、
酢酸エチル、メタノールに可溶、エタノールにやや可
溶、水に不溶 （６）塩基性、中性、酸性の区別：中性物質 （７）色及び性状：無色針状結晶（融点；１２１〜１２
３℃）

【００１２】上記の物理化学的性質及び構造解析結果か
ら、単離される化合物は式１で示されるシアタン（ cya
thane ）誘導体であることが決定された。

【００１３】詳しくは実施例で後述するように、本発明
のシアタン（ cyathane ）誘導体は神経成長因子（ＮＧ
Ｆ）産生誘導効果及び抗菌効果があり、神経成長因子
（ＮＧＦ）産生誘導効果を有する化合物は老人性痴呆症
治療剤としての利用が注目されており、また抗菌効果を
有する化合物は天然抗菌剤として食品への利用が注目さ
れている。

【００１４】

【実施例】

シアタン（ cyathane ）誘導体の抽出及び単離 ヤマブシタケの菌糸体をＳＧＣ培地（前掲のもの）にて
４週間培養し、培養菌糸体を得た。８５％エタノール５
リットルに該培養菌糸体７００ｇ（湿重量）を加え、ホ
モジナイズ処理し、これを室温で一昼夜放置した後、濾
過して抽出液を得た。残渣に８５％エタノール５リット
ルを加え、同様に抽出処理を行なって抽出液を得、これ
を１回目の抽出液と合わせた。そして合わせた抽出液を
減圧下に４０〜４５℃で加熱してエタノールを蒸発する
ことにより水相を得た。

【００１５】上記水相に酢酸エチル１リットルを加え、
振盪後、放置して分層した酢酸エチル層を分取した。残
渣に酢酸エチル１リットルを加え、同様に液−液分配抽
出処理を行なって酢酸エチル層を分取した。同様の操作
を３回繰り返し、分取した酢酸エチル層を１回目の酢酸
エチル層と合わせた。合わせた酢酸エチル層を減圧下に
４０〜４５℃で加熱して酢酸エチルを蒸発し、更にデシ
ケータで乾燥して乾固物７．０ｇを得た。

【００１６】上記乾固物をヘキサンで溶解し、ワコーゲ
ルＣ−２００（和光純薬社製）を用いてカラムクロマト
グラフィーを行なった。この際、展開溶媒として、順次
極性が大きくなるように、クロロホルム／アセトン＝
９：１、８：２、７：３、１：１を各２００ml用い、５
０mlの画分を合計１６画分得た。このうちのクロロホル
ム／アセトン＝８：２溶出画分を更にシリカゲルカラム
クロマトグラフィーに供し、展開溶媒としてベンゼン／
メタノール＝９：１を８０ml用い、１０mlの画分を合計
８画分得た。このうちの第２画分から式１に示されるシ
アタン（ cyathane ）誘導体を２６．７mg単離した。

【００１７】シアタン（ cyathane ）誘導体の神経成長
因子（ＮＧＦ）産生誘導効果 古川らの方法｛バイオケミカル アンド バイオフィジ
カル リサーチ コミュニケーションズ（ Biochemical
and Biophysical Research Communications），１３
６，５７−６３（１９８６）｝にしたがい、胎生後期
（１９日令）ラット皮質初代アストログリア細胞を培養
器に１０％牛胎仔血清を含むダルベッコ変法イーグル培
地（ＤＭＥＭ）で培養（１〜２週間、３日毎に培地を交
換）し、コンフルエントに達したところで、０．５％牛
血清アルブミンを含むＤＭＥＭに変えて数日培養した。
ここへジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解したシ
アタン（ cyathane ）誘導体を所定濃度になるように
０．５％牛血清アルブミンを含むＤＭＥＭにて調製し、
投与した。２４時間の培養後、培養液を集め、古川らの
方法｛ジャーナル オブ ニューロケミストリー（ Jou
rnal of Neurochemistry），４０，７３４−７４４（１
９８３）｝によるエンザイムアッセイ法で神経成長因子
（ＮＧＦ）濃度を測定した。シアタン（ cyathane ）誘
導体を投与しないで培養した対照群とシアタン（ cyath
ane ）誘導体を１ｍＭ投与して培養した群との間でｔ検
定を行なった。その結果、投与した群は１％の危険率で
有効と有意検定された。

【００１８】シアタン（ cyathane ）誘導体の抗菌効果 肉エキス１．０％、ポリペプトン０．５％、塩化ナトリ
ウム０．２５％、寒天１．５％を含むＰＨ７．２〜７．
４の普通寒天培地を作製し、試験管に１５ml及び６mlず
つを分注し、オートクレーブ（１２１℃で２０分）にて
加圧蒸気滅菌を行なった。滅菌済みのシャーレに加圧蒸
気滅菌した１５mlの培地を無菌的に流入し、平面に固定
させ基層とした。別に加圧蒸気滅菌した６mlの培地を溶
解し、５５〜６０℃まで冷却したものに、５mlの液体培
地中で３０℃で１６時間振盪培養した枯草菌（バチルス
ズブチリス）を５０μl接種し、よく混合した後、こ
れを菌層として上記基層の上に流入し、検定用培地とし
た。該検定用培地の上に、シアタン（ cyathane ）誘導
体の１０mg／ml溶液を染み込ませて溶媒を乾かしたペー
パーディスクを静かにピンセットで乗せ、３０℃の恒温
室で２４時間培養後、生成した阻止円の直径を測定し、
下記の式２により抗菌活性を求めた。

【式２】抗菌活性（mm）＝測定した阻止円の直径（mm）
−ペーパーディスクの直径（８mm） 抗菌活性は３mmであり、シアタン（ cyathane ）誘導体
はバチルス ズブチリスに対して抗菌効果のあることが
検定された。

【００１９】

【発明の効果】既に明らかなように、以上説明した本発
明のシアタン（ cyathane ）誘導体には神経成長因子
（ＮＧＦ）産生誘導剤及び抗菌剤として有効という効果
がある。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 坂本 秀樹 栃木県那須郡西那須野町大字井口47番地12 (72)発明者 石黒 幸雄 栃木県那須郡西那須野町東三島５丁目96番 地19

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記の式１で示されるシアタン（ cyath
   ane ）誘導体。 【式１】
2. 【請求項２】 請求項１記載のシアタン（ cyathane ）
   誘導体を有効成分とする神経成長因子（ＮＧＦ）産生誘
   導剤。
3. 【請求項３】 請求項１記載のシアタン（ cyathane ）
   誘導体を有効成分とする抗菌剤。