JP4606048B2

JP4606048B2 - ヤマブシタケに含まれる新規化合物及び抗メチシリン耐性黄色ブドウ球菌剤

Info

Publication number: JP4606048B2
Application number: JP2004087529A
Authority: JP
Inventors: 洋和河岸; 真治徳山
Original assignee: Otsuka Foods Co Ltd
Current assignee: Otsuka Foods Co Ltd
Priority date: 2004-03-24
Filing date: 2004-03-24
Publication date: 2011-01-05
Anticipated expiration: 2024-03-24
Also published as: JP2005272346A

Description

本発明は、ヤマブシタケの子実体に含まれる新規化合物、及び抗メチシリン耐性黄色ブドウ球菌剤に関する。

従来、各種の抗生物質が開発され、火傷、切り傷、感染症等の治療目的、或いは手術時の感染予防の目的で、臨床上繁用されてきた。しかしながら、近年、抗生物質の過度の依存が、多種類の抗生物質に対して耐性を示す病原菌を出現させるに至り、これらの耐性菌が重篤な感染症を引き起こしている。とりわけ、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(methicillin resistant Stapylococcus aureus、以下MRSAという)は、ペニシリン系抗生物質、セフェム系抗生物質、モノバクタム系抗生物質、カルバペネム系抗生物質等のβラクタム系抗生物質に対して耐性を備え、しかも高い病原性を有しており、市中感染や院内感染により深刻な感染症を生じさせている。

従来、MRSA感染症の治療剤としては、バイコマイシンが知られている。しかしながら、バイコマイシンには、聴覚や腎臓への副作用が知られており、安全性の点で問題があった。また、近年、バイコマイシンに対して耐性を備えるMRSAの出現が報告されており、バイコマイシンの投与では、MRSA感染症の治療効果が期待できなくなっている。

このような従来技術を背景として、安全性を有し、MRSAに対して有効な抗菌成分の開発が医療上の課題となっている。

ところで、近年、ハリタケ科のキノコであるヤマブシタケに含まれる化合物及びその薬効効果について、種々報告されている。例えば、ヤマブシタケには、クロマン誘導体が含まれており、これがプロスタグランジンＥ２の産生促進作用や神経成長因子の産生誘導作用を発揮することが報告されている（特許文献１参照）。しかしながら、ヤマブシタケにMRSAに対して抗菌作用を発揮する成分が含まれているか否かについては、一切知られていない。
特開平４−２７５２８５号公報

そこで本発明の目的は、上記従来技術の課題を解決することである。より詳細には、本発明は、MRSAに対して有効な抗菌作用を発揮する成分を提供することを目的とするものである。

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討したところ、ヤマブシタケには、下記構造式の化合物が含まれており、該化合物はMRSAに対して優れた抗菌作用を発揮することを見出した。本発明はかかる知見に基づいて、更に検討を重ねて開発されたものである。

即ち、本発明は、下記に掲げる発明を提供するものである：
項１．下記一般式（１）で表される化合物。

項２．項１に記載の化合物を有効成分とする、抗メチシリン耐性黄色ブドウ球菌剤。
項３．酢酸エチル、エタノール、メタノール、アセトン及びこれらと水の混合物よりなる群から選択される少なくとも１種の溶媒を用いてヤマブシタケの子実体を抽出することにより得られる抽出物を有効成分とする、抗メチシリン耐性黄色ブドウ球菌剤。

以下に、本発明を詳細に説明する。

本発明は、下記一般式（１）で表される化合物を提供する。

当該一般式（１）で表される化合物は、ハリタケ科（Hydnaceae）サンゴハリタケ属（Hericium）のキノコであるヤマブシタケ（Hericium erinaceum）に含まれており、当該ヤマブシタケを抽出溶媒で抽出処理することにより得ることができる。

一般式（１）で表される化合物を取得するための抽出溶媒の一例として、酢酸エチル、メタノール、エタノール、アセトン等の有機溶媒、及びこれらの有機溶媒と水の混合物が挙げられる。これらの溶媒は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を任意に組み合わせて使用してもよい。上記抽出溶媒の中で、好ましくは、酢酸エチル、エタノール及びこれらと水の混合物であり、更に好ましくは酢酸エチル及びこれと水の混合物、特に好ましくは酢酸エチルである。上記有機溶媒と水の混合物を抽出溶媒として使用する場合、該混合物における有機溶媒と水の混合比率としては、例えば、該混合物中に水が１〜９９重量％、好ましくは５〜５０重量％、更に好ましくは５〜３０重量％となる割合が例示される。

一般式（１）で表される化合物を得るには、まず、ヤマブシタケの子実体をそのまま、或いは必要に応じて乾燥、細切、破砕、圧搾又は煮沸処理したものを、上記抽出溶媒で抽出処理する。当該抽出処理は、抽出溶媒１００ｍｌに対して、ヤマブシタケの子実体が乾燥重量で通常５〜３０ｇ、好ましくは１５〜２５ｇ程度を加えて行うことができる。抽出処理は、通常室温で行われるが、３０〜９０℃に加熱して行ってもよい。また、抽出処理は、抽出溶媒中でヤマブシタケの子実体を攪拌又は静置させることにより行うことができるが、必要に応じて還流を行ってもよい。抽出時間は、通常２〜２４時間、好ましくは１０〜１５時間である。

上記抽出処理に先立って、ヤマブシタケの子実体をクロロホルムに浸漬（以下、単にクロロホルム処理という）して、クロロホルム可溶化画分を除去した後、得られた固形分を上記抽出処理に供してもよい。このように、前処理として、クロロホルム処理を行うことによって、より高い純度で一般式（１）で表される化合物を抽出溶媒に抽出させることが可能になる。当該クロロホルム処理における、クロロホルムに対するヤマブシタケの子実体の添加量、処理温度、処理時間、その他の条件等は、前記抽出処理の条件と同様である。

また、生の状態のヤマブシタケの子実体を用いて抽出処理する場合、その抽出処理は、例えば、以下に示す態様の抽出方法によって行うこともできる：メタノール、エタノール、アセトン、又はこれらと水の混合物（例えば８０〜８５％エタノール水溶液、８０〜８５％メタノール水溶液、８５％アセトン水溶液等）を用いて、ヤマブシタケの子実体を室温〜９０℃で１〜７２時間抽出処理し、次いで固形分を除去して更に酢酸エチルを混合し、酢酸エチル中に抽出された成分を回収する。

上記抽出処理後に、抽出溶媒から固形分（不溶化成分）を除去し、次いで減圧下で加熱して溶媒を蒸発させることにより、ヤマブシタケ溶媒抽出物を得ることができる。斯くして得られるヤマブシタケの溶媒抽出物には、一般式（１）で表される化合物が含まれている。当該ヤマブシタケの溶媒抽出物を、必要に応じて、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等の各種クロマト分画処理に供することによって、一般式（１）で表される化合物を単離することができる。

また、一般式（１）で表される化合物は、上記抽出処理後に、抽出溶媒をそのまま上記のクロマト分画処理に供することによっても得ることができる。

斯くして得られる一般式（１）で表される化合物は、下記の物理化学的性質及び構造解析結果を示す。
(1)分子量：１９０．０８４１（Ｃ₈Ｈ₁₄Ｏ₅）
(2)色及び形状：無色アモルファス
(3)溶媒に対する溶解性：（酢酸エチル、メタノール、エタノール、アセトン）に可溶；水にやや可溶
(4)塩基性、中性、酸性の別：（中性）
(5)核磁気共鳴スペクトル（¹Ｈ−ＮＭＲ）：1.30 (d, J=6.4), 1.88 (d, J=14.3), 2.45 (dd, J=14.3, 9.8), 3.33 (b, s), 3.82 (q, J=6.4), 3.74 (d, J=8.1), 3.89 (J=9.8), 4.06 (d, J=8.1)
(6)核磁気共鳴スペクトル（¹³ＣＮＭＲ）：15.1, 39.7, 61.9, 66.5, 69.5, 70.5, 75.3, 97.6
当該一般式（１）で表される化合物は、MRSAに対して優れた抗菌作用を発揮できるので、抗MRSA剤の有効成分として用いることができる。また、前述するように、ヤマブシタケの上記溶媒抽出物には一般式（１）で表される化合物が含有されており、当該抽出物を抗MRSA剤の有効成分として用いることもできる。

本発明の抗MRSA剤は、例えば、食品や医薬品の分野において使用され、これによって、MRSAに対して優れた抗菌作用を有する食品や医薬品が提供される。

例えば、医薬分野では、本発明の抗MRSA剤は、薬学的に許容される基材や担体と共に製剤化されて、医薬製剤として使用される。当該医薬製剤には、必要に応じて、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、湿潤化剤、緩衝剤、保存剤、香料等の薬学的に許容される添加剤を任意に配合してもよい。当該医薬製剤の形態としては、特に制限されるものではないが、一例として、フィルム剤、トローチ、散剤、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤等を挙げることができる。

本発明の抗MRSA剤を含む医薬製剤の投与量は、投与形態、投与目的、投与対象者の年齢や体重等によって異なるが、成人１日当たりの投与量として、一般式（１）で表される化合物が、例えば０．１〜５００ｍｇに相当する量を挙げることができる。また、本発明の抗MRSA剤を含む医薬製剤の一日当たりの投与回数は、投与対象者の年齢や体重、症状、該抗MRSA剤の１回当たりの投与量等に応じて適宜設定できる。

また、例えば、食品分野では、本発明の抗MRSA剤は、食品素材として各種食品に配合されることによって使用される。本発明の抗MRSA剤が配合可能な食品は、一般の飲食品の他、特定保健用食品、栄養補助食品、機能性食品、病者用食品等を挙げることができる。

本発明の抗MRSA剤を食品に配合する場合、食品中の該MRSA剤の配合割合については、該食品の種類、対象者の年齢、性別、期待される効果等に応じて、適宜設定することができる。一例として、上記食品の総重量に対して、一般式（１）で表される化合物が０．０１〜５重量％となる割合が挙げられる。

また、本発明の抗MRSA剤含む食品の１日当たりの摂取量や摂取回数は、前記抗MRSA剤を含む医薬製剤の場合と同様である。

更に、本発明の抗MRSA剤は、上記食品や医薬品以外の分野の製品に対しても使用できる。例えば、本発明の抗MRSA剤を各種繊維製品、紙製品、化学製品等の製品に担持させることにより、これらの製品にMRSAに対する抗菌作用を備えさせることができる。これらの製品としては、例えば、寝具（布団、シーツ等）、カバー、カーペット、パジャマ、手術着、白衣、マスク、包帯、ガーゼ、紙タオル、紙製シーツ、紙製カバー、モップ、雑巾、便座カバー等が挙げられる。特に、医療用具（マスク、包帯、ガーゼ）、褥瘡患者等の寝具(布団・シーツ、パジャマ等)、MRSA感染患を媒介し得るもの等の製品に対しては、本発明の抗MRSA剤を好適に使用できる。

本発明の抗MRSA剤を上記製品に担持させる方法としては、特に制限されず、当業界で一般的に使用されている方法を採用すればよい。例えば、本発明の抗MRSA剤を含有する水溶液を上記製品に直接噴霧する方法や、上記製品の構成材料に予め本発明の抗MRSA剤を練り込んでおき（又は付着させておき）、これを用いて上記製品を調製する方法等が挙げられる。

上記製品に、本発明の抗MRSA剤を担持させる量としては、対象製品の種類、対象製品の使用環境等によって異なり一律に規定することはできないが、一例として対象製品の総重量に対して、一般式（１）で表される化合物が０．００１〜５重量％となる割合が挙げられる。

本発明の抗MRSA剤は、MRSAに対して顕著に優れた抗菌作用を発揮できる。そのため、本発明の抗MRSA剤を食品や医薬品に配合することにより、MRSA感染症治療用の食品又は医薬品を提供できる。また、本発明の抗MRSA剤を含有する食品又は医薬品は、MRSA感染予防用の食品又は医薬品としても有用である。

また、本発明の抗MRSA剤を、各種繊維製品、紙製品、化学製品等の各種製品に配合することにより、該製品に抗MRSA作用を備えさせることができる。このような抗MRSA作用を有する製品は、MRSAの感染症が起こりやすい病院、保育園、幼稚園、小学校、老人ホーム等の施設において有用である。また、特に、病院内で使用される上記各種製品（例えば、衛生用具、医療用具、入院患者の寝具等）に本発明の抗MRSA剤を担持させることによって、MRSAの院内感染の予防に有用である。

本発明の抗MRSA剤は、食用として使用されているヤマブシタケに含まれる化合物を有効成分とするものであるので、安全性の点でも問題なく使用することができる。

以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

実施例１一般式（１）で表される化合物の調製
ヤマブシタケの乾燥子実体３．８ｋｇをクロロホルム２０Ｌに加えて、ホモジナイズ処理し２５℃で１２時間、静置した。次いで、固形分を回収し、該固形分（乾燥重量）３．７ｋｇを酢酸エチル２０Ｌに加えて、２５℃で１２時間、静置した。

得られた酢酸エチル層４０ｇをシリカゲルカラム（silica gel 60N、関東化学社製）を用いたカラムクロマトグラフィーに供した。この際、展開溶媒として、順次極性が大きくなるように、クロロホルム／メタノール＝９：１、８：２、７：３、６：４、５：５、０：１０をそれぞれ１Ｌ用いて、４０ｍＬの画分を合計１５０画分得た。この内、クロロホルム／メタノール＝８：２溶出画分を、更に展開溶媒としてクロロホルム／メタノール＝８：２、６：４、０：１０を各１Ｌ用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを行い、４０ｍＬの画分を合計７５画分得た。次いで、得られた第２１〜２８画分について、クロロホルム／メタノール＝８：２を展開溶媒として用いて薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を行い、スポットが検出された画分をかき取った。更に、回収した画分をＨＰＬＣ（カラム；CAPCEL PAK C 18、流速；５ｍＬ／ｍｉｎ、溶媒１０％メタノール水溶液）に供し、一般式（１）で表される化合物４．１ｍｇを単離した。

試験例１抗MRSA作用評価試験
MRSA2932株（臨床分離菌、名古屋大学医学部から入手）を５ｍＬの液体培地を用いて、３０℃で１６時間、２００ｒｐｍで振とう培養し、MRSA培養液を得た。このMRSA培養液を２０倍に希釈したもの１００μＬをトリプトソーヤ寒天培地プレート（表面積６０．８ｃｍ²、ＴＳＡ培地、Becton Dickinson社製）に塗抹し、これを検定用培地とした。該検定用培地に、実施例１で得られた一般式（１）で表される化合物を1ｍｇ／ｍＬの濃度で含有する水溶液を染み込ませて乾燥させたペーパーディスク（抗生物質検定用８ｍｍ、アドバンテック社製）を、静かにピンセットで乗せて、３０℃で２０時間培養を行った。培養後、検定用培地に生成した阻止円の直径を測定し、下記式に従って抗菌活性を求めた。

この結果、抗菌活性は１０ｍｍであり、一般式（１）で表される化合物には、MRSAに対して優れた抗菌作用があることが確認された。

Claims

下記一般式（１）で表される化合物。
請求項１に記載の化合物を有効成分とする、抗メチシリン耐性黄色ブドウ球菌剤。