JPH0767358B2 - サフランの柱頭様組織の生産法 - Google Patents
サフランの柱頭様組織の生産法Info
- Publication number
- JPH0767358B2 JPH0767358B2 JP10875690A JP10875690A JPH0767358B2 JP H0767358 B2 JPH0767358 B2 JP H0767358B2 JP 10875690 A JP10875690 A JP 10875690A JP 10875690 A JP10875690 A JP 10875690A JP H0767358 B2 JPH0767358 B2 JP H0767358B2
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- Japan
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- callus
- medium
- stigma
- naa
- tissue
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- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、アヤメ科植物サフラン（Crocus sativus
L.）の柱頭部より誘導したカルスより柱頭様組織を効率
よく再分化させ、大量生産する方法に関するものであ
る。
L.）の柱頭部より誘導したカルスより柱頭様組織を効率
よく再分化させ、大量生産する方法に関するものであ
る。
〔従来の技術〕 サフランの雌しべの柱頭は、クロシン、ピクロクロシ
ン、サフラナールなどを含み、食品着色料、芳香料及び
薬用として極めて重要である。サフランの栽培は、年一
回行われ開花した柱頭部を手で摘み取った後、乾燥させ
て商品としている。しかし、このような方法では、広大
な栽培面積と人手を必要とし、天候にも大きく影響さ
れ、品質も一定でない。
ン、サフラナールなどを含み、食品着色料、芳香料及び
薬用として極めて重要である。サフランの栽培は、年一
回行われ開花した柱頭部を手で摘み取った後、乾燥させ
て商品としている。しかし、このような方法では、広大
な栽培面積と人手を必要とし、天候にも大きく影響さ
れ、品質も一定でない。
これらの問題点を解決する手段として、植物組織培養技
術の利用が考えられる。
術の利用が考えられる。
サフランの雌しべを培養してカルスを誘導し、培養カル
スから柱頭様組織が再分化することを日本生薬学会1986
年（第33回）年会において、小山らにより報告がなされ
ている。また、特開昭63−240782号公報にも同様の報告
がなされている。これらは、ともにα−ナフタレン酢酸
（以下「NAA」という）及びN6−ベンジルアデニン（６
−ベンジルアミノプリン（BAP））（以下「BA」とい
う）を、前者ではそれぞれ10-5M〜５×10-5M（1.86〜9.
31mg/L）及び10-6M〜３×10-5M（0.225〜6.76mg/L）、
後者ではそれぞれ0.1〜10ppm（0.1〜10mg/L）及び５〜1
5ppm（５〜15mg/L）含有する培地で培養を行うものであ
る。
スから柱頭様組織が再分化することを日本生薬学会1986
年（第33回）年会において、小山らにより報告がなされ
ている。また、特開昭63−240782号公報にも同様の報告
がなされている。これらは、ともにα−ナフタレン酢酸
（以下「NAA」という）及びN6−ベンジルアデニン（６
−ベンジルアミノプリン（BAP））（以下「BA」とい
う）を、前者ではそれぞれ10-5M〜５×10-5M（1.86〜9.
31mg/L）及び10-6M〜３×10-5M（0.225〜6.76mg/L）、
後者ではそれぞれ0.1〜10ppm（0.1〜10mg/L）及び５〜1
5ppm（５〜15mg/L）含有する培地で培養を行うものであ
る。
しかしながら、これらの技術において、柱頭様組織の再
分化効率は未だ充分なものとはいえない。更に、これら
の技術において、NAA、BAの濃度は培養中一定に保持さ
れており、培養過程において、これらの濃度を変化させ
る試みはなされておらず、何ら示唆すらされていない。
分化効率は未だ充分なものとはいえない。更に、これら
の技術において、NAA、BAの濃度は培養中一定に保持さ
れており、培養過程において、これらの濃度を変化させ
る試みはなされておらず、何ら示唆すらされていない。
従来の柱頭部（柱頭、花柱、子房、花柄）培養方法で
は、大量の柱頭様組織が得られない。更にカルスを長年
継代培養することにより柱頭様組織は、再分化が困難と
なる。
は、大量の柱頭様組織が得られない。更にカルスを長年
継代培養することにより柱頭様組織は、再分化が困難と
なる。
本発明者らは、培地のNAA、BAそれぞれの濃度及び前培
養培地のNAA、BA濃度について検討し、継代培養したカ
ルスから効率よく柱頭様組織を再分化させる方法を見出
した。
養培地のNAA、BA濃度について検討し、継代培養したカ
ルスから効率よく柱頭様組織を再分化させる方法を見出
した。
本発明のサフランの柱頭様組織の生産法は、サフラン柱
頭部より誘導したカルスを、実質的にカルスのみを増殖
させるオーキシン及びサイトカイニン濃度に調製された
カルス増殖培地で培養し、次いで、培養後のカルスを、
実質的にオーキシン及びサイトカイニンを含有しないカ
ルス再分化培地で培養し、サフラン柱頭様組織に分化さ
せることを特徴とするものである。
頭部より誘導したカルスを、実質的にカルスのみを増殖
させるオーキシン及びサイトカイニン濃度に調製された
カルス増殖培地で培養し、次いで、培養後のカルスを、
実質的にオーキシン及びサイトカイニンを含有しないカ
ルス再分化培地で培養し、サフラン柱頭様組織に分化さ
せることを特徴とするものである。
なお、本発明において、「実質的にカルスのみを増殖さ
せるオーキシン及びサイトカイニン濃度」とは、用いる
オーキシン及びサイトカイニンの種類により異なるが、
オーキシンとしてα−ナフタレン酢酸を用いた場合であ
れば通常0.5〜100mg/L程度であり、サイトカイニンとし
てN6−ベンジルアデニンを用いた場合であれば通常0.5
〜50mg/L程度である。
せるオーキシン及びサイトカイニン濃度」とは、用いる
オーキシン及びサイトカイニンの種類により異なるが、
オーキシンとしてα−ナフタレン酢酸を用いた場合であ
れば通常0.5〜100mg/L程度であり、サイトカイニンとし
てN6−ベンジルアデニンを用いた場合であれば通常0.5
〜50mg/L程度である。
また、本発明において、「実質的にオーキシン及びサイ
トカイニンを含有しない」とは、オーキシン及びサイト
カイニンを全く含有しないか、含有しても極めて微量で
あることを意味する。具体的な濃度は、用いるオーキシ
ン及びサイトカイニンの種類により異なるが、オーキシ
ンとしてα−ナフタレン酢酸を用いた場合であれば、全
く含有しないか又は0.5mg/L以下であり、サイトカイニ
ンとしてN6−ベンジルアデニンを用いた場合であれば、
全く含有しないか又は0.5mg/L以下である。
トカイニンを含有しない」とは、オーキシン及びサイト
カイニンを全く含有しないか、含有しても極めて微量で
あることを意味する。具体的な濃度は、用いるオーキシ
ン及びサイトカイニンの種類により異なるが、オーキシ
ンとしてα−ナフタレン酢酸を用いた場合であれば、全
く含有しないか又は0.5mg/L以下であり、サイトカイニ
ンとしてN6−ベンジルアデニンを用いた場合であれば、
全く含有しないか又は0.5mg/L以下である。
前記カルス増殖培地及びカルス再分化培地は、ともに通
常の無機成分及び炭素源を必須成分として、これに必要
に応じて、NAA、BA以外の植物ホルモン類、ビタミン類
を添加しうる培地である。前記の無機成分としては、窒
素、リン、カリウム、ナトリウム、カルシウム、マグネ
シウム、イオウ、鉄、マンガン、亜鉛、ホウ素、モリブ
デン、塩素、沃素、コバルト等の元素を含む無機塩が挙
げられ、具体的には、硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、
硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、塩化カルシウ
ム、燐酸一水素カリウム、燐酸二水素ナトリウム、硫酸
マグネシウム、塩化マグネシウム、硫酸ナトリウム、硫
酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、モリブデン酸ナトリ
ウム、沃化カリウム、硫酸亜鉛、硼酸、塩化コバルト等
の化合物が挙げられる。
常の無機成分及び炭素源を必須成分として、これに必要
に応じて、NAA、BA以外の植物ホルモン類、ビタミン類
を添加しうる培地である。前記の無機成分としては、窒
素、リン、カリウム、ナトリウム、カルシウム、マグネ
シウム、イオウ、鉄、マンガン、亜鉛、ホウ素、モリブ
デン、塩素、沃素、コバルト等の元素を含む無機塩が挙
げられ、具体的には、硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、
硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、塩化カルシウ
ム、燐酸一水素カリウム、燐酸二水素ナトリウム、硫酸
マグネシウム、塩化マグネシウム、硫酸ナトリウム、硫
酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、モリブデン酸ナトリ
ウム、沃化カリウム、硫酸亜鉛、硼酸、塩化コバルト等
の化合物が挙げられる。
前記炭素源としては、ショ糖などの炭水化物とその誘導
体などが挙げられる。
体などが挙げられる。
前記NAA、BA以外の植物ホルモン類としては、例えば2,4
−ジクロロフェノキシ酢酸等のオーキシン類、及びカイ
ネチン、ゼアチン等のサイトカイニン類が挙げられる。
−ジクロロフェノキシ酢酸等のオーキシン類、及びカイ
ネチン、ゼアチン等のサイトカイニン類が挙げられる。
前記ビタミン類としては、チアミン、イノシトール、ピ
リドキシン、ニコチン酸、葉酸、ビオチン等が挙げられ
る。
リドキシン、ニコチン酸、葉酸、ビオチン等が挙げられ
る。
また、前記両培地には、アミノ酸、例えば、グリシン、
アスパラギン、グルタミン、プロリン、セリン、リジン
等を添加してもよい。
アスパラギン、グルタミン、プロリン、セリン、リジン
等を添加してもよい。
本発明の前記両培地は、通常無機成分を0.1μＭないし9
0mM、炭素源を10g/Lないし90g/L、ビタミン類を0.1mg/L
ないし1000mg/L及びアミノ酸類を０ないし1000mg/L含ま
せて使用することが望ましい。
0mM、炭素源を10g/Lないし90g/L、ビタミン類を0.1mg/L
ないし1000mg/L及びアミノ酸類を０ないし1000mg/L含ま
せて使用することが望ましい。
本発明の組織培養に用いられる前記両培地としては、従
来から植物の組織培養に用いられている培地、例えばム
ラシゲ・スクーグ（Murashige ＆ Skoog）の培地、リン
スマイヤー・スクーグ（Linsmaier ＆ Skoog）の培地、
ホワイト（White）の培地、ガンボルグ（Gamborg）のＢ
−５培地、ニッチ・ニッチ（Nitsch ＆ Nitsch）の培
地、チェンク・ヒルデブランド（Schenk ＆ Hidebrand
t）（以下、「SH培地」という）等に前記した炭素源及
び植物ホルモンを添加し、更に必要に応じて前記ビタミ
ン類、アミノ酸類を添加して調製される培地であるが、
本発明では、このなかでもSHの培地を用いて調製される
培地に、植物ホルモンNAA0.5〜100mg/L、BA0.5〜50mg/L
の高濃度植物ホルモンを添加して７〜60日培養後、低濃
度のNAA（０〜0.5mg/L）、BA（０〜0.5mg/L）を添加し
たSH培地で培養することが好ましい。なお、上記した従
来公知の培地組織に関しては、例えば、山田康之著「植
物細胞培養マニュアル」p.6〜p.8、講談社サイエンティ
フィク、1984年に記載されている。
来から植物の組織培養に用いられている培地、例えばム
ラシゲ・スクーグ（Murashige ＆ Skoog）の培地、リン
スマイヤー・スクーグ（Linsmaier ＆ Skoog）の培地、
ホワイト（White）の培地、ガンボルグ（Gamborg）のＢ
−５培地、ニッチ・ニッチ（Nitsch ＆ Nitsch）の培
地、チェンク・ヒルデブランド（Schenk ＆ Hidebrand
t）（以下、「SH培地」という）等に前記した炭素源及
び植物ホルモンを添加し、更に必要に応じて前記ビタミ
ン類、アミノ酸類を添加して調製される培地であるが、
本発明では、このなかでもSHの培地を用いて調製される
培地に、植物ホルモンNAA0.5〜100mg/L、BA0.5〜50mg/L
の高濃度植物ホルモンを添加して７〜60日培養後、低濃
度のNAA（０〜0.5mg/L）、BA（０〜0.5mg/L）を添加し
たSH培地で培養することが好ましい。なお、上記した従
来公知の培地組織に関しては、例えば、山田康之著「植
物細胞培養マニュアル」p.6〜p.8、講談社サイエンティ
フィク、1984年に記載されている。
本発明で使用できる前記培地は、液体培地又は寒天或い
はゲルライトを通常0.2〜１％含有させた固形培地であ
る。
はゲルライトを通常0.2〜１％含有させた固形培地であ
る。
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、こ
れらの実施例は、本発明の範囲を何ら制限するものでは
ない。
れらの実施例は、本発明の範囲を何ら制限するものでは
ない。
実施例１ アヤメ科植物サフランの花柱より誘導したカルスを植物
ホルモン濃度NAA10mg/L、BA1mg/L、ショ糖３％、グリシ
ン3ppm、アスパラギン3ppm pH5.8に調整したSH培地で、
43日間暗所（22±２℃）培養後、NAA0〜10mg/LとBA0〜1
0mg/Lの組合わせを作成し、61日間SH培地で同様にして
培養した結果を第１表に示した。
ホルモン濃度NAA10mg/L、BA1mg/L、ショ糖３％、グリシ
ン3ppm、アスパラギン3ppm pH5.8に調整したSH培地で、
43日間暗所（22±２℃）培養後、NAA0〜10mg/LとBA0〜1
0mg/Lの組合わせを作成し、61日間SH培地で同様にして
培養した結果を第１表に示した。
NAA、BAを0.1mg/L以下で培養することにより柱頭様組織
を効率よく再分化させることができた。
を効率よく再分化させることができた。
実施例２ アヤメ科植物サフランの花柱より誘導したカルスを植物
ホルモン濃度NAA10mg/L、BA1mg/L、ショ糖３％、グリシ
ン3ppmアスパラギン3ppm pH5.8に調整したSH培地で、43
日間暗所（22±２℃）培養後、NAA0〜100mg/LとBA0〜10
0mg/Lの組合わせを作成し、41日間SH培地で培養後、NAA
0.075mg/L、BA0.075mg/Lを含んだSH（ゲランガム）培地
に移植し、41日間培養した結果を第2,3表に示した。
ホルモン濃度NAA10mg/L、BA1mg/L、ショ糖３％、グリシ
ン3ppmアスパラギン3ppm pH5.8に調整したSH培地で、43
日間暗所（22±２℃）培養後、NAA0〜100mg/LとBA0〜10
0mg/Lの組合わせを作成し、41日間SH培地で培養後、NAA
0.075mg/L、BA0.075mg/Lを含んだSH（ゲランガム）培地
に移植し、41日間培養した結果を第2,3表に示した。
再分化本数は、前培養（増殖培地）の植物ホルモンBA濃
度に大きく影響され、BA濃度25〜50mg/Lまで再分化本数
を増大させた。BA100mg/Lでは、前培養である増殖培地
でカルスが死滅した。
度に大きく影響され、BA濃度25〜50mg/Lまで再分化本数
を増大させた。BA100mg/Lでは、前培養である増殖培地
でカルスが死滅した。
再分化本数は、第２表と同様にBA100mg/Lでは、カルス
が死滅した。BA0〜100mg/Lの組合わせ培地（増殖培地）
に同植物ホルモン組合わせ培地を継代し、実施例２と同
様にNAA0.075mg/L、BA0.075mg/Lを含んだSH（ゲランガ
ム）培地で43日間暗所（22±２℃）培養した結果を第4,
5表に示した。
が死滅した。BA0〜100mg/Lの組合わせ培地（増殖培地）
に同植物ホルモン組合わせ培地を継代し、実施例２と同
様にNAA0.075mg/L、BA0.075mg/Lを含んだSH（ゲランガ
ム）培地で43日間暗所（22±２℃）培養した結果を第4,
5表に示した。
NAA、BAが同濃度の場合、25mg/Lまで柱頭様組織の再分
化本数を増大させた。NAAが1mg/Lの場合、BA50mg/Lまで
再分化本数にあまり大きな差としてあらわれなかった。
BA100mg/Lでは、カルスが死滅した。BA1mg/Lの場合、NA
A濃度が増大することにともない再分化本数を増やす傾
向を示した（第4,5表より）。
化本数を増大させた。NAAが1mg/Lの場合、BA50mg/Lまで
再分化本数にあまり大きな差としてあらわれなかった。
BA100mg/Lでは、カルスが死滅した。BA1mg/Lの場合、NA
A濃度が増大することにともない再分化本数を増やす傾
向を示した（第4,5表より）。
本発明によれば、培養組織であるサフラン柱頭部由来の
カルスから柱頭様組織を効率良く大量に再分化させるこ
とができる。
カルスから柱頭様組織を効率良く大量に再分化させるこ
とができる。
Claims (1)
- 【請求項１】サフラン柱頭部より誘導したカルスを、実
質的にカルスのみを増殖させるオーキシン及びサイトカ
イニン濃度に調製されたカルス増殖培地で培養し、次い
で、培養後のカルスを、実質的にオーキシン及びサイト
カイニンを含有しないカルス再分化培地で培養し、サフ
ラン柱頭様組織に分化させることを特徴とするサフラン
柱頭様組織の生産法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10875690A JPH0767358B2 (ja) | 1990-04-26 | 1990-04-26 | サフランの柱頭様組織の生産法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10875690A JPH0767358B2 (ja) | 1990-04-26 | 1990-04-26 | サフランの柱頭様組織の生産法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH048239A JPH048239A (ja) | 1992-01-13 |
| JPH0767358B2 true JPH0767358B2 (ja) | 1995-07-26 |
Family
ID=14492709
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10875690A Expired - Lifetime JPH0767358B2 (ja) | 1990-04-26 | 1990-04-26 | サフランの柱頭様組織の生産法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0767358B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104855289B (zh) * | 2015-05-21 | 2017-03-22 | 江苏丰收大地种业发展有限公司 | 一种利用浅层培养生产藏红花微球茎方法 |
| CN106376463B (zh) * | 2016-08-30 | 2018-06-26 | 上海市农业科学院 | 一种西红花种球的繁育方法 |
-
1990
- 1990-04-26 JP JP10875690A patent/JPH0767358B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH048239A (ja) | 1992-01-13 |
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