JPH0754320B2 - 血液からの単核細胞の分離装置及び方法 - Google Patents
血液からの単核細胞の分離装置及び方法Info
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- JPH0754320B2 JPH0754320B2 JP1180111A JP18011189A JPH0754320B2 JP H0754320 B2 JPH0754320 B2 JP H0754320B2 JP 1180111 A JP1180111 A JP 1180111A JP 18011189 A JP18011189 A JP 18011189A JP H0754320 B2 JPH0754320 B2 JP H0754320B2
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Description
【発明の詳細な説明】 「産業上の利用分野」 本発明は、生の或は希釈した血液から単核細胞の分離に
関し、特に血液分離装置及びこの装置を用いた血液成分
の分離方法に関する。
関し、特に血液分離装置及びこの装置を用いた血液成分
の分離方法に関する。
「従来の技術」 今日市場にある公知の血液分離装置は、ニュートンゲル
の一定部分及び液体密度媒質の一定部分を含有するフィ
コール板のような血液採取管を備えている。このニュー
トンゲルは、ゲル上で採取管かに入れられた血液サンプ
ル及び液体密度媒質間の障壁として採用している。この
採取管が遠心分離された時には、液体密度媒質が他の血
液成分から単核細胞を分離するように作用する。
の一定部分及び液体密度媒質の一定部分を含有するフィ
コール板のような血液採取管を備えている。このニュー
トンゲルは、ゲル上で採取管かに入れられた血液サンプ
ル及び液体密度媒質間の障壁として採用している。この
採取管が遠心分離された時には、液体密度媒質が他の血
液成分から単核細胞を分離するように作用する。
前述の従来の血液分離装置は、血液サンプルがチューブ
に入れられて、直ちに遠心分離されて、目的の血液成分
を取り出す限り、診療所での応用に有効である。この装
置は、医者が血液サンプルを採取管に採取して、遠心分
離或は別の検査のために研究所に送るような、血液採取
管が輸送できる（耐震）血液分離装置としての機能も有
せず、また輸送血液の試験に不向きである。
に入れられて、直ちに遠心分離されて、目的の血液成分
を取り出す限り、診療所での応用に有効である。この装
置は、医者が血液サンプルを採取管に採取して、遠心分
離或は別の検査のために研究所に送るような、血液採取
管が輸送できる（耐震）血液分離装置としての機能も有
せず、また輸送血液の試験に不向きである。
「発明が解決しようとする課題」 このような装置が積み込めない理由は、ゲル及び密度媒
質が液体であり、採取管における予め処置された位置が
保持できないからである。これらゲル及び密度媒質は、
各々が相互に混ざらないが、採取管が横向きになった時
に、採取管内を右往左往してしまう。従って、分離装置
が横向きになり、或はもし分離装置が揺れたならば、ニ
ュートンゲルは、もはや、採取管に含まれる血液サンプ
ル及び液体密度媒質間に位置せず、これら二液間の障壁
として作用しない。血液サンプルが液体密度媒質と混合
して、比重或は密度等の血液分離特性に悪影響を及ぼ
し、この結果血液サンプルの他の成分から単核細胞を好
ましく分離する能力が劣化する。
質が液体であり、採取管における予め処置された位置が
保持できないからである。これらゲル及び密度媒質は、
各々が相互に混ざらないが、採取管が横向きになった時
に、採取管内を右往左往してしまう。従って、分離装置
が横向きになり、或はもし分離装置が揺れたならば、ニ
ュートンゲルは、もはや、採取管に含まれる血液サンプ
ル及び液体密度媒質間に位置せず、これら二液間の障壁
として作用しない。血液サンプルが液体密度媒質と混合
して、比重或は密度等の血液分離特性に悪影響を及ぼ
し、この結果血液サンプルの他の成分から単核細胞を好
ましく分離する能力が劣化する。
「課題を解決するための手段」 本発明の目的は、耐震血液分離装置を提供することであ
る。
る。
本発明の他の目的は、血液サンプルの他の成分から単核
細胞を好ましく分離する方法を提供することである。
細胞を好ましく分離する方法を提供することである。
本発明の更なる目的は、前述の公知の分離装置の固有の
欠点を克服した血液分離装置及びこれを使用した方法を
提供することである。
欠点を克服した血液分離装置及びこれを使用した方法を
提供することである。
本発明の一態様によれば、特に、生或は希釈血液から単
核細胞を分離する血液分離装置は、閉塞された底端と、
血液サンプルを採取する開口である上口とを持つ採取管
を備えている。この採取管が遠心分離されるようになっ
ている。
核細胞を分離する血液分離装置は、閉塞された底端と、
血液サンプルを採取する開口である上口とを持つ採取管
を備えている。この採取管が遠心分離されるようになっ
ている。
この分離装置は、更に、この採取管に含まれる疑液性ゲ
ル（物質）層と、この疑液性ゲル層の下部に位置して、
採取管に含まれるニュートンゲル（物質）層とを備えて
いる。
ル（物質）層と、この疑液性ゲル層の下部に位置して、
採取管に含まれるニュートンゲル（物質）層とを備えて
いる。
この採取管は、疑液性ゲル層上に血液サンプルを採取す
るに十分な自由空間を形成するような寸法である。
るに十分な自由空間を形成するような寸法である。
疑液性ゲル層は、採取管の遠心分離前に、採取管に採取
された血液サンプルと、ニュートンゲル層との間に位置
して、血液サンプル及びニュートンゲル層の相互混合を
防止する、血液サンプル及びニュートンゲル層間の障壁
として作用している。従って、疑液性ゲルは、右往左往
せず、医者から研究所に送り出す途中で、採取管が横倒
しになっても血液サンプル及びニュートンゲルの隔離を
維持している。
された血液サンプルと、ニュートンゲル層との間に位置
して、血液サンプル及びニュートンゲル層の相互混合を
防止する、血液サンプル及びニュートンゲル層間の障壁
として作用している。従って、疑液性ゲルは、右往左往
せず、医者から研究所に送り出す途中で、採取管が横倒
しになっても血液サンプル及びニュートンゲルの隔離を
維持している。
この疑液性ゲル層は、ニュートンゲル物質の比重より大
きい比重を持っている。採取管の遠心分離時には、疑液
性ゲル層がニュートンゲル物質の下部の位置に移動して
いる。
きい比重を持っている。採取管の遠心分離時には、疑液
性ゲル層がニュートンゲル物質の下部の位置に移動して
いる。
ニュートンゲル層は密度媒質として作用する。このニュ
ートンゲル物質は、ニュートンゲル層が遠心分離時に、
採取管に採取された血液サンプルの単核細胞及びより重
い成分間の位置に入り込むような比重を持っている。
ートンゲル物質は、ニュートンゲル層が遠心分離時に、
採取管に採取された血液サンプルの単核細胞及びより重
い成分間の位置に入り込むような比重を持っている。
本発明の他の態様によれば、血液分離装置は、閉塞底端
から順に液体密度勾配媒質、ニュートンゲル、疑液性ゲ
ル及び採取管内の血液サンプルのガラス器具内貯蔵用の
安定剤をもつ前述の形態の採取管を備えている。
から順に液体密度勾配媒質、ニュートンゲル、疑液性ゲ
ル及び採取管内の血液サンプルのガラス器具内貯蔵用の
安定剤をもつ前述の形態の採取管を備えている。
本発明のその他の利点は、図面を参照して以下に説明さ
れる。
れる。
「実施例」 第１図の図面をまず参照すると、本発明の第一形態によ
って構成された血液分離装置は、閉塞された底端４及び
対抗の頂上端の上口６を持つ試験管の形態でよい採取管
２を備えている。この上口６には、取り外せる栓或は他
の蓋８が取り付けられて、血液サンプルが採取管２に吸
引できるように、蓋８に注射針が突き刺せることができ
る。更に、採取管２は、患者から血液を直接採取できる
ように真空引きされる。
って構成された血液分離装置は、閉塞された底端４及び
対抗の頂上端の上口６を持つ試験管の形態でよい採取管
２を備えている。この上口６には、取り外せる栓或は他
の蓋８が取り付けられて、血液サンプルが採取管２に吸
引できるように、蓋８に注射針が突き刺せることができ
る。更に、採取管２は、患者から血液を直接採取できる
ように真空引きされる。
本発明の血液分離装置は、第１図に示す形態において、
採取管に含まれた第１層即ち疑液性ゲル層10と、この疑
液性ゲル層10の下部に位置して、勿論、採取管に含まれ
る第２層即ちニュートンゲル層12とを用いている。
採取管に含まれた第１層即ち疑液性ゲル層10と、この疑
液性ゲル層10の下部に位置して、勿論、採取管に含まれ
る第２層即ちニュートンゲル層12とを用いている。
この採取管２は、疑液性ゲル層10上に自由空間14を形成
するに十分な寸法を持っている。勿論、この自由空間に
は、生或は希釈した血液サンプルが収容される。
するに十分な寸法を持っている。勿論、この自由空間に
は、生或は希釈した血液サンプルが収容される。
この疑液性ゲル層10は、採取管の遠心分離前に、採取管
に採取された血液サンプル（図示略）と、ニュートンゲ
ル層12との間に位置している。この疑液性ゲル層10は、
ニュートンゲル層12が血液サンプルと相互混合するのを
防止するために、血液サンプル及びニュートンゲル層12
間の障壁として作用している。
に採取された血液サンプル（図示略）と、ニュートンゲ
ル層12との間に位置している。この疑液性ゲル層10は、
ニュートンゲル層12が血液サンプルと相互混合するのを
防止するために、血液サンプル及びニュートンゲル層12
間の障壁として作用している。
既に記載したように、ニュートンゲルを含有した従来の
血液分離装置は、横倒しになった時に、採取管の長手方
向に右往左往する質の低下をニュートンゲルに誘発す
る。第１図に示す本発明においては、ニュートンゲル層
12が疑液性ゲル層10と採取管の閉塞端４によってその場
に保持され、血液サンプルを未混合状態に維持してい
る。
血液分離装置は、横倒しになった時に、採取管の長手方
向に右往左往する質の低下をニュートンゲルに誘発す
る。第１図に示す本発明においては、ニュートンゲル層
12が疑液性ゲル層10と採取管の閉塞端４によってその場
に保持され、血液サンプルを未混合状態に維持してい
る。
第１図に記載した血液分離装置において、疑液性ゲル層
10は、ニュートンゲル層12の比重より大きい比重を持
ち、採取管の遠心分離時にニュートンゲル層12下の位置
に移動している。これは第２図に示している。
10は、ニュートンゲル層12の比重より大きい比重を持
ち、採取管の遠心分離時にニュートンゲル層12下の位置
に移動している。これは第２図に示している。
ニュートンゲル層12は、密度媒質として作用する。この
ニュートンゲルは、遠心分離時に、採取管に位置した血
液サンプルの単核細胞及びより重い成分間の採取管２の
位置に入り込むような比重で形成される。
ニュートンゲルは、遠心分離時に、採取管に位置した血
液サンプルの単核細胞及びより重い成分間の採取管２の
位置に入り込むような比重で形成される。
第１図に示すように、勿論、血液分離装置は、凝固防止
剤、安定剤或はこれら混合液のような溶液16を含んでよ
く、この溶液が血液サンプルに混合されて、サンプルが
医者によって採取された後、遠心分離或は更なる処置用
に検査研究所に輸送中に血液細胞の生活力を維持してい
る。
剤、安定剤或はこれら混合液のような溶液16を含んでよ
く、この溶液が血液サンプルに混合されて、サンプルが
医者によって採取された後、遠心分離或は更なる処置用
に検査研究所に輸送中に血液細胞の生活力を維持してい
る。
遠心分離時には、血液成分、疑液性ゲル層及びニュート
ンゲル層が各々第２図に示す位置にあると仮定できる。
通常より重い血液成分である赤血細胞即ち赤血球18は、
採取管の底の閉塞端４方向に重力降下する。ニュートン
ゲル層12の比重より大きい（重い）比重を持つ疑液性ゲ
ルの疑液性ゲル層10は、ニュートンゲル層12の下の位置
に移動する。血液サンプルの顆粒細胞20は、通常、疑液
性ゲル層10及び赤血球18間に位置している。
ンゲル層が各々第２図に示す位置にあると仮定できる。
通常より重い血液成分である赤血細胞即ち赤血球18は、
採取管の底の閉塞端４方向に重力降下する。ニュートン
ゲル層12の比重より大きい（重い）比重を持つ疑液性ゲ
ルの疑液性ゲル層10は、ニュートンゲル層12の下の位置
に移動する。血液サンプルの顆粒細胞20は、通常、疑液
性ゲル層10及び赤血球18間に位置している。
ニュートンゲル層12は、通常、液面上に単核細胞22を配
置させて、採取管２の上部隔壁を形成する。密度媒質と
して使用されるニュートンゲル層は、分離され得る血液
相の比重の中間の特定の比重で形成される。第２図は、
顆粒細胞即ち白血球20及び赤血球18のような血液のより
重い成分、及び血小板、リンパ球及び単核細胞を含有し
た単核細胞溜分22間の障壁を形成するニュートンゲル層
12を示している。
置させて、採取管２の上部隔壁を形成する。密度媒質と
して使用されるニュートンゲル層は、分離され得る血液
相の比重の中間の特定の比重で形成される。第２図は、
顆粒細胞即ち白血球20及び赤血球18のような血液のより
重い成分、及び血小板、リンパ球及び単核細胞を含有し
た単核細胞溜分22間の障壁を形成するニュートンゲル層
12を示している。
血液のプラズマは除去してもよいが、血小板、リンパ球
及び単核細胞を含有した単核細胞溜分22を乱さないよう
に注意深く作業すべきである。この操作は、隔壁層とし
てのニュートンゲル層12上の血小板、リンパ球及び単核
細胞を吸い出す図示略のピペットの手段によって実施さ
れてもよい。その後、等張性Ca+2，Mg+2除去食塩緩衝液
のような希釈剤が徐々にニュートンゲル層12上の採取管
２に注がれる。その後、採取管は、ゆっくりと閉められ
或は攪拌して、ニュートンゲル層12上に置かれた血小
板、リンパ球及び単核細胞を緩衝液に分散させ、この緩
衝液が図示略のピペットを使用して採取管２から取り出
されて、標準及び公知の手順に従って処理される。
及び単核細胞を含有した単核細胞溜分22を乱さないよう
に注意深く作業すべきである。この操作は、隔壁層とし
てのニュートンゲル層12上の血小板、リンパ球及び単核
細胞を吸い出す図示略のピペットの手段によって実施さ
れてもよい。その後、等張性Ca+2，Mg+2除去食塩緩衝液
のような希釈剤が徐々にニュートンゲル層12上の採取管
２に注がれる。その後、採取管は、ゆっくりと閉められ
或は攪拌して、ニュートンゲル層12上に置かれた血小
板、リンパ球及び単核細胞を緩衝液に分散させ、この緩
衝液が図示略のピペットを使用して採取管２から取り出
されて、標準及び公知の手順に従って処理される。
第１図に示した前述の血液分離装置の１つの利点は、ニ
ュートンゲル層12が分離後の採取管内の単核細胞22を支
持し、ルデラー氏等の米国特許第4,190,535号に記載さ
れているような分離媒質として疑液性ゲルを使用した血
液分離装置で起こる赤血球の汚染を最小化する手助けを
することである。ニュートンゲルが低粘度であるので、
ニュートンゲル層12は、分離された単核細胞に対してよ
り粘着性のある表面を提供する。遠心分離の完了時に
は、採取管の閉塞端４に移動しないゆっくりとした赤血
球細胞は、ニュートンゲル層12に吸着或は吸収される。
従って、本発明においては、単核細胞の取り出し時に、
赤血球が殆ど単核細胞22に含まれない。
ュートンゲル層12が分離後の採取管内の単核細胞22を支
持し、ルデラー氏等の米国特許第4,190,535号に記載さ
れているような分離媒質として疑液性ゲルを使用した血
液分離装置で起こる赤血球の汚染を最小化する手助けを
することである。ニュートンゲルが低粘度であるので、
ニュートンゲル層12は、分離された単核細胞に対してよ
り粘着性のある表面を提供する。遠心分離の完了時に
は、採取管の閉塞端４に移動しないゆっくりとした赤血
球細胞は、ニュートンゲル層12に吸着或は吸収される。
従って、本発明においては、単核細胞の取り出し時に、
赤血球が殆ど単核細胞22に含まれない。
第３図は、本発明の血液分離装置のより好ましい形態を
示している。第３図に示した血液分離装置は、第１図の
血液分離装置と同様に、閉塞端部の底４と、開口端部の
上口６とを持ち、血液サンプルを収容する自由空間14が
形成された採取管２を備え、更に、凝固防止剤、安定剤
或はこれらの合同液の溶液16と、疑液性ゲル層10と、こ
の疑液性ゲル層の下部に位置したニュートンゲル層12
と、ニュートンゲル層下の、好ましくは採取管の閉塞端
部４に位置する液体密度媒質層26とを備えている。
示している。第３図に示した血液分離装置は、第１図の
血液分離装置と同様に、閉塞端部の底４と、開口端部の
上口６とを持ち、血液サンプルを収容する自由空間14が
形成された採取管２を備え、更に、凝固防止剤、安定剤
或はこれらの合同液の溶液16と、疑液性ゲル層10と、こ
の疑液性ゲル層の下部に位置したニュートンゲル層12
と、ニュートンゲル層下の、好ましくは採取管の閉塞端
部４に位置する液体密度媒質層26とを備えている。
疑液性ゲル層10は、第１図の実施例で既に述べたよう
に、ニュートンゲル層12及び液体密度（分離）媒質層26
を採取管の下部に維持して、血液サンプル或は溶液16を
隔離した障壁として作用している。この疑液性ゲル層10
は、採取管２の遠心分離時にニュートンゲル層12下の中
立位置に移動するような、ニュートンゲル層12の比重よ
り大きい比重を持っている。しかし、後述するように、
この層10は、液体密度媒質層26のそれより小さい比重を
持つことが好ましい。
に、ニュートンゲル層12及び液体密度（分離）媒質層26
を採取管の下部に維持して、血液サンプル或は溶液16を
隔離した障壁として作用している。この疑液性ゲル層10
は、採取管２の遠心分離時にニュートンゲル層12下の中
立位置に移動するような、ニュートンゲル層12の比重よ
り大きい比重を持っている。しかし、後述するように、
この層10は、液体密度媒質層26のそれより小さい比重を
持つことが好ましい。
第４図は、遠心分離後の血液サンプルを含んだ第３図の
採取管を示している。より重い成分の赤血球18は、通常
閉塞端４に近い採取管の最下部を占有している。この赤
血球層18上には顆粒細胞層20が形成され、顆粒細胞層20
上には、単核細胞及び他の血液成分間の実分離外の位置
に対する障壁として作用する位置から取り出される疑液
性ゲル層10が形成される。
採取管を示している。より重い成分の赤血球18は、通常
閉塞端４に近い採取管の最下部を占有している。この赤
血球層18上には顆粒細胞層20が形成され、顆粒細胞層20
上には、単核細胞及び他の血液成分間の実分離外の位置
に対する障壁として作用する位置から取り出される疑液
性ゲル層10が形成される。
この疑液性ゲル層10上には、採取管の底に移動しない幾
つかの残余の赤血球を含む液体密度媒質の重い液相部28
が配置される。この液体密度媒質の重い液相部28は、血
液プラズマによって殆ど希釈されない部分である。
つかの残余の赤血球を含む液体密度媒質の重い液相部28
が配置される。この液体密度媒質の重い液相部28は、血
液プラズマによって殆ど希釈されない部分である。
ニュートンゲル層12は、遠心分離時に疑液性ゲル層10の
上部に移動する。このニュートンゲル層12は、この層に
おいて吸着或は吸収する残余の赤血球細胞を捕捉するハ
エ取り紙効果を持っている。従って、ニュートンゲル層
12は、抽出される血液相の赤血球細胞汚染を最小化させ
ている。
上部に移動する。このニュートンゲル層12は、この層に
おいて吸着或は吸収する残余の赤血球細胞を捕捉するハ
エ取り紙効果を持っている。従って、ニュートンゲル層
12は、抽出される血液相の赤血球細胞汚染を最小化させ
ている。
ニュートンゲル層12の直上には、液体密度媒質の軽液相
30が配置される。この液体密度媒質の軽液相30は、通
常、ニュートンゲルの比重より軽い比重を持つ液体密度
媒質部を希釈する効果を持つ、遠心分離中に液体密度媒
質層26に血液の水成分を運ぶ赤血球細胞によって起因さ
れるものと信じられる。赤血球18及び疑液性ゲル層10
は、軽液相30より重く、軽液相をニュートンゲル層12上
の位置に移動させる手助けをする。単核細胞22は、直接
液体密度媒質の軽液相上に存在し、単核細胞上には、既
に述べたように、単核細胞の抽出前にピペットで取り出
される血液プラズマがある。
30が配置される。この液体密度媒質の軽液相30は、通
常、ニュートンゲルの比重より軽い比重を持つ液体密度
媒質部を希釈する効果を持つ、遠心分離中に液体密度媒
質層26に血液の水成分を運ぶ赤血球細胞によって起因さ
れるものと信じられる。赤血球18及び疑液性ゲル層10
は、軽液相30より重く、軽液相をニュートンゲル層12上
の位置に移動させる手助けをする。単核細胞22は、直接
液体密度媒質の軽液相上に存在し、単核細胞上には、既
に述べたように、単核細胞の抽出前にピペットで取り出
される血液プラズマがある。
勿論、既に述べたように、液体密度媒質層26の軽液相30
は、ニュートンゲル層12に粘着或は吸収することによっ
て単核細胞の損失を最小化させがちであり、単核細胞22
を浮かすように作用するので好ましい。この結果、単核
細胞が僅かな損失を伴って分離された後採取管から容易
に取り出される。
は、ニュートンゲル層12に粘着或は吸収することによっ
て単核細胞の損失を最小化させがちであり、単核細胞22
を浮かすように作用するので好ましい。この結果、単核
細胞が僅かな損失を伴って分離された後採取管から容易
に取り出される。
遠心分離前或は輸送中に、第３図に示す血液分離装置の
成分（即ち凝固防止剤及び安定剤の溶液16、疑液性ゲル
層10、ニュートンゲル層12及び液体密度媒質層26）の相
対位置を維持することが要望されたならば、第５図及び
第６図に示す実施例が使用できる。
成分（即ち凝固防止剤及び安定剤の溶液16、疑液性ゲル
層10、ニュートンゲル層12及び液体密度媒質層26）の相
対位置を維持することが要望されたならば、第５図及び
第６図に示す実施例が使用できる。
第５図に示す分離装置は、採取管２に挿入されて、閉塞
端４に位置する多孔性フォーム部材32を更に含む点以外
は第３図に示す実施例と同様である。この多孔性フォー
ム部材32は、液体密度媒質層26の全体或は殆どの部分を
保持し吸着するために使用される。このフォーム部材32
は、ニュートンゲル層12に機械的に安定な障壁を提供
し、実際、採取管内の血液収容能力を殆ど減少させない
で、ニュートンゲル層12及び液体密度媒質層26を疑液性
ゲル層10下の位置に保持している。
端４に位置する多孔性フォーム部材32を更に含む点以外
は第３図に示す実施例と同様である。この多孔性フォー
ム部材32は、液体密度媒質層26の全体或は殆どの部分を
保持し吸着するために使用される。このフォーム部材32
は、ニュートンゲル層12に機械的に安定な障壁を提供
し、実際、採取管内の血液収容能力を殆ど減少させない
で、ニュートンゲル層12及び液体密度媒質層26を疑液性
ゲル層10下の位置に保持している。
血液サンプルを含む採取管の遠心分離中には、赤血球細
胞がフォーム部材に入って液体密度媒質と置換する。も
し、フォーム部材32の量が液体密度媒質の密度に殆ど同
じならば、採取管の血液収容能力の減少が無視できる。
赤血球細胞は、前の実施例がそうであったように液体密
度媒質と置換して、採取管２のより下部を占有する。フ
ォーム部材32は、架橋ウレタンフォームのような種々の
材料から形成される。
胞がフォーム部材に入って液体密度媒質と置換する。も
し、フォーム部材32の量が液体密度媒質の密度に殆ど同
じならば、採取管の血液収容能力の減少が無視できる。
赤血球細胞は、前の実施例がそうであったように液体密
度媒質と置換して、採取管２のより下部を占有する。フ
ォーム部材32は、架橋ウレタンフォームのような種々の
材料から形成される。
これの代りに、第２の疑液性ゲル層34は、第６図に示す
ように、多孔性フォーム部材を使用する代りに、第３図
の装置において液体密度勾配媒質層26及びニュートンゲ
ル層12間に位置してもよい。この第２の疑液性ゲル層34
は、採取管における液体密度媒質層26及びニュートンゲ
ル層12の相対位置を維持し、採取管の横倒し時にこれら
成分が混合するのを防止している。
ように、多孔性フォーム部材を使用する代りに、第３図
の装置において液体密度勾配媒質層26及びニュートンゲ
ル層12間に位置してもよい。この第２の疑液性ゲル層34
は、採取管における液体密度媒質層26及びニュートンゲ
ル層12の相対位置を維持し、採取管の横倒し時にこれら
成分が混合するのを防止している。
第３図に示した実施例においては、ニュートンゲル層12
は、既に記載した従来の装置に使用した障壁として使用
せず、むしろ分離後の単核細胞22を汚染し得る残余の赤
血球を捕捉する粘着面を形成するために使用しているの
で、即ち疑液性ゲル層10が障壁として機能しているの
で、標準の15mlの採取管毎に0.5mlのようなかなり少量
でよい。
は、既に記載した従来の装置に使用した障壁として使用
せず、むしろ分離後の単核細胞22を汚染し得る残余の赤
血球を捕捉する粘着面を形成するために使用しているの
で、即ち疑液性ゲル層10が障壁として機能しているの
で、標準の15mlの採取管毎に0.5mlのようなかなり少量
でよい。
血液サンプル或は凝固防止剤及び安定剤溶液16、及びニ
ュートンゲル層12及び液体密度媒質層26間の障壁として
機能する疑液性ゲル層10は、採取管２の断面領域を完全
に覆うに十分な量採取管内に封入されて、採取管が上向
きに長時間保存されても好適な障壁を形成している。10
〜15ml標準遠心分離用採取管毎に2.5ml量の疑液性ゲル
層が劣化しない障壁を形成するに十分である。
ュートンゲル層12及び液体密度媒質層26間の障壁として
機能する疑液性ゲル層10は、採取管２の断面領域を完全
に覆うに十分な量採取管内に封入されて、採取管が上向
きに長時間保存されても好適な障壁を形成している。10
〜15ml標準遠心分離用採取管毎に2.5ml量の疑液性ゲル
層が劣化しない障壁を形成するに十分である。
本発明の１つの利点は、血液分離装置が遠心分離前に血
液サンプル用の積み出し容器として使用を許容する採取
管２において、液体密度媒質層26及び安定剤或は凝固防
止剤溶液16を含有する全成分を製造してもよいことであ
る。前述の従来の血液分離装置は、ニュートンゲルが障
壁として使用された時に、凝固防止剤或は安定剤を液体
密度媒質と混合することを許容し、媒質の密度及びその
細胞分離特性に悪影響するように質を低下させるので、
上記能力を持っていない。
液サンプル用の積み出し容器として使用を許容する採取
管２において、液体密度媒質層26及び安定剤或は凝固防
止剤溶液16を含有する全成分を製造してもよいことであ
る。前述の従来の血液分離装置は、ニュートンゲルが障
壁として使用された時に、凝固防止剤或は安定剤を液体
密度媒質と混合することを許容し、媒質の密度及びその
細胞分離特性に悪影響するように質を低下させるので、
上記能力を持っていない。
血液分離装置の採取管が血液を採取後、検査用に上向き
にして医者から診断研究所に積み出される理由の１つ
は、血液サンプルを可能な限り採取管内の安定剤或は凝
固防止剤に露出させることである。このような事は、障
壁として作用する疑液性ゲル層10が採取管２内で劣化せ
ず、液体密度媒質を採取管内の血液サンプル或は凝固防
止剤／安定剤から隔離するので、本発明によって達成で
きる。
にして医者から診断研究所に積み出される理由の１つ
は、血液サンプルを可能な限り採取管内の安定剤或は凝
固防止剤に露出させることである。このような事は、障
壁として作用する疑液性ゲル層10が採取管２内で劣化せ
ず、液体密度媒質を採取管内の血液サンプル或は凝固防
止剤／安定剤から隔離するので、本発明によって達成で
きる。
本発明の他の利点は、疑液性ゲル層10が親水性或は疎水
性特性で形成されてもよい点である。これは、疑液性ゲ
ル層10が分離媒質としてでなく、障壁としてのみ使用で
き、遠心分離時に所望の血液成分分離を妨害しない中立
位置に移動するからである。従って、多くの型の疑液性
ゲルは、細胞分離媒質として使用された時に水を吸収
し、性能及び特性を変化させがちの無機充填物を含んで
使用されてもよい。
性特性で形成されてもよい点である。これは、疑液性ゲ
ル層10が分離媒質としてでなく、障壁としてのみ使用で
き、遠心分離時に所望の血液成分分離を妨害しない中立
位置に移動するからである。従って、多くの型の疑液性
ゲルは、細胞分離媒質として使用された時に水を吸収
し、性能及び特性を変化させがちの無機充填物を含んで
使用されてもよい。
勿論、疑液性ゲル層10は、唯一の要求特性が障壁区分と
してのみ使用されるので、遠心分離下で所望の中立位置
に移動する。従って、疑液性ゲルの粘度は、遠心分離下
で疑液性ゲル層10の移動を許容する範囲内に留まるよう
に単に選択される。
してのみ使用されるので、遠心分離下で所望の中立位置
に移動する。従って、疑液性ゲルの粘度は、遠心分離下
で疑液性ゲル層10の移動を許容する範囲内に留まるよう
に単に選択される。
水を吸収しがちの無機充填物を含有した疑液性ゲルの使
用の唯一の欠点は、長期間の貯蔵中に疑液性ゲルが水を
吸収して、疑液性ゲルが白っぽく褐色することである。
この褐色は、疑液性ゲル層10の障壁特性に影響しない
が、血液分離装置がもはや有用でない外観を呈してしま
う。この問題を克服するためには、二酸化チタンのよう
な着色剤がゲルに添加されて、疑液性ゲルが水を吸収し
た時の外観の変化を最小にさせてもよい。
用の唯一の欠点は、長期間の貯蔵中に疑液性ゲルが水を
吸収して、疑液性ゲルが白っぽく褐色することである。
この褐色は、疑液性ゲル層10の障壁特性に影響しない
が、血液分離装置がもはや有用でない外観を呈してしま
う。この問題を克服するためには、二酸化チタンのよう
な着色剤がゲルに添加されて、疑液性ゲルが水を吸収し
た時の外観の変化を最小にさせてもよい。
本発明の疑液性ゲル層10は、血液分離装置内の成分の相
対位置を維持し、血液サンプル或は凝固防止剤及び安定
剤溶液16、ニュートンゲル層12及び液体密度勾配媒質層
26間の分離状態を維持するのみならず、既に述べたよう
に、液体密度媒質層26の軽液相30をニュートンゲル層12
の上部の所望位置に移動させる変位媒体として作用す
る。
対位置を維持し、血液サンプル或は凝固防止剤及び安定
剤溶液16、ニュートンゲル層12及び液体密度勾配媒質層
26間の分離状態を維持するのみならず、既に述べたよう
に、液体密度媒質層26の軽液相30をニュートンゲル層12
の上部の所望位置に移動させる変位媒体として作用す
る。
勿論、製造中の採取管内の疑液性ゲル層10が本発明の構
造によって容易に位置される。1984年９月24日に出願さ
れた米国出願第653,178号に記載したように、液体密度
媒質と、この液体密度媒質上の疑液性ゲル障壁層を使用
した血液分離装置においては、疑液性ゲル層が液体密度
媒質上に注意しながら配置して、液体密度媒質の表面が
かなり堅い（ゼリー状の）疑液性ゲルを破らないことを
保証しなければならない。本発明においては、液体密度
媒質層26上のニュートンゲル層12が液体密度媒質を破り
そうでなく、液体密度媒質より大きい流動抵抗を持つニ
ュートンゲル層12が疑液性ゲル層10の配置を容易にさせ
るより堅い面を形成している。
造によって容易に位置される。1984年９月24日に出願さ
れた米国出願第653,178号に記載したように、液体密度
媒質と、この液体密度媒質上の疑液性ゲル障壁層を使用
した血液分離装置においては、疑液性ゲル層が液体密度
媒質上に注意しながら配置して、液体密度媒質の表面が
かなり堅い（ゼリー状の）疑液性ゲルを破らないことを
保証しなければならない。本発明においては、液体密度
媒質層26上のニュートンゲル層12が液体密度媒質を破り
そうでなく、液体密度媒質より大きい流動抵抗を持つニ
ュートンゲル層12が疑液性ゲル層10の配置を容易にさせ
るより堅い面を形成している。
疑液性ゲル層10は、障壁としてのみ使用され、水溶液と
の接触で影響されないので、安定剤或は凝固防止剤溶液
16及び液体密度媒質層26の両者が混合されないで障壁疑
液性ゲル層10と接触して貯蔵されてもよい。１対１に希
釈された安定剤の使用は、同じ採取管を使用した分離前
に、サンプルの劣化なしに、基準研究所への細胞分離装
置内の血液サンプルの一晩の積み込みを許容している。
安定剤は、もし、長期間の貯蔵或は長期の積み込み（輸
送時間）が要求されたならば、その生活力を維持する培
養培地を含んでもよい。
の接触で影響されないので、安定剤或は凝固防止剤溶液
16及び液体密度媒質層26の両者が混合されないで障壁疑
液性ゲル層10と接触して貯蔵されてもよい。１対１に希
釈された安定剤の使用は、同じ採取管を使用した分離前
に、サンプルの劣化なしに、基準研究所への細胞分離装
置内の血液サンプルの一晩の積み込みを許容している。
安定剤は、もし、長期間の貯蔵或は長期の積み込み（輸
送時間）が要求されたならば、その生活力を維持する培
養培地を含んでもよい。
使用可能な安定剤は、代表的に、等張或は高張の溶液、
高分子量の有機分子を添加したイオン性溶液、RPMIのよ
うな細胞培養培地及びマッコイ培地である。この安定剤
は、血液との希釈比が0.25対１〜３対１になるような量
である。
高分子量の有機分子を添加したイオン性溶液、RPMIのよ
うな細胞培養培地及びマッコイ培地である。この安定剤
は、血液との希釈比が0.25対１〜３対１になるような量
である。
既に述べたように、本発明の血液分離装置は、真空引き
され、凝固防止剤が安定剤に添加されて、直接吸引採取
管として機能してもよい。
され、凝固防止剤が安定剤に添加されて、直接吸引採取
管として機能してもよい。
勿論、既に述べたように、本発明の各実施例は、採取管
２の上口に、密封と注入口とを兼用した蓋８をかぶせて
もよい。この蓋８は、標準の血液吸引針の侵入が好適な
隔膜を持つブチルゴムの形態でよい。
２の上口に、密封と注入口とを兼用した蓋８をかぶせて
もよい。この蓋８は、標準の血液吸引針の侵入が好適な
隔膜を持つブチルゴムの形態でよい。
疑液性ゲル層10は、水溶液による貯蔵中に水吸収を制限
するために、予め水で飽和させてもよい。疑液性ゲル層
は、シリコンゲル、共ポリエステル樹脂基剤ゲル、ポリ
ブタジエン基剤ゲル、ポリブテン基剤ゲル、或は例えば
α−オレフィンジアルキルマレイン酸共ポリマ基剤ゲル
を含む種々のゲルの１つでよい。
するために、予め水で飽和させてもよい。疑液性ゲル層
は、シリコンゲル、共ポリエステル樹脂基剤ゲル、ポリ
ブタジエン基剤ゲル、ポリブテン基剤ゲル、或は例えば
α−オレフィンジアルキルマレイン酸共ポリマ基剤ゲル
を含む種々のゲルの１つでよい。
勿論、ニュートンゲル層12は、疎水性、特に無機充填物
を含まない樹脂である種々の有機樹脂から選択される。
これの代りに、ニュートンゲルは必須的に疎水性のポリ
エステル樹脂から形成されてもよい。
を含まない樹脂である種々の有機樹脂から選択される。
これの代りに、ニュートンゲルは必須的に疎水性のポリ
エステル樹脂から形成されてもよい。
本発明においては、分離媒質、第３図に示す液体密度媒
質層26或は第１図に示すニュートンゲル層12が約1.07〜
1.09の比重を持つように選択されるが、1.09以上の比重
を持ってもよい。
質層26或は第１図に示すニュートンゲル層12が約1.07〜
1.09の比重を持つように選択されるが、1.09以上の比重
を持ってもよい。
「発明の効果」 本発明は、最初に述べた従来の血液分離装置と異なる、
医者から基準研究所に積み出し即ち輸送できる血液分離
装置を提供するが、従来の血液分離装置の全利点も持っ
ている。その上部に疑液性ゲル層10が配置されるニュー
トンゲル層12の使用によって、試料形成が容易であり、
ニュートンゲル層12がもはや障壁として機能せず、赤血
球汚染を最小化するように機能するので、より少量のニ
ュートンゲルが使用できる。
医者から基準研究所に積み出し即ち輸送できる血液分離
装置を提供するが、従来の血液分離装置の全利点も持っ
ている。その上部に疑液性ゲル層10が配置されるニュー
トンゲル層12の使用によって、試料形成が容易であり、
ニュートンゲル層12がもはや障壁として機能せず、赤血
球汚染を最小化するように機能するので、より少量のニ
ュートンゲルが使用できる。
血液サンプルを含有した血液分離装置は、遠心分離器に
直接置かれて、約1,000〜2,000Gの加速度で約10〜30分
間回転させられて、単核細胞を分離している。好ましく
は、約1.500Gで15分間である。
直接置かれて、約1,000〜2,000Gの加速度で約10〜30分
間回転させられて、単核細胞を分離している。好ましく
は、約1.500Gで15分間である。
第１図は本発明の一形態によって形成された血液分離装
置の側面図、第２図は血液サンプルが含まれた分離装置
が遠心分離された後に、第１図に示した血液分離装置の
血液成分及び他の要素の状態図、第３図は本発明の第二
実施例の血液分離装置を示し、遠心分離前に安定剤或は
他の溶液が含まれた分離装置の側面図、第４図は血液サ
ンプルの含有の分離装置が遠心分離された後の第２図に
示した血液分離装置の血液成分及び他の要素の状態図、
第５図は本発明の第三形態によって形成された血液分離
装置の側面図、第６図は本発明の第四形態によって形成
された血液分離装置の側面図である。 ２……採取管、４……閉塞底端、６……上口、８……
蓋、10……疑液性ゲル層、12……ニュートンゲル層、14
……自由空間、16……凝固防止剤、安定剤或はこれら混
合液、22……単核細胞。
置の側面図、第２図は血液サンプルが含まれた分離装置
が遠心分離された後に、第１図に示した血液分離装置の
血液成分及び他の要素の状態図、第３図は本発明の第二
実施例の血液分離装置を示し、遠心分離前に安定剤或は
他の溶液が含まれた分離装置の側面図、第４図は血液サ
ンプルの含有の分離装置が遠心分離された後の第２図に
示した血液分離装置の血液成分及び他の要素の状態図、
第５図は本発明の第三形態によって形成された血液分離
装置の側面図、第６図は本発明の第四形態によって形成
された血液分離装置の側面図である。 ２……採取管、４……閉塞底端、６……上口、８……
蓋、10……疑液性ゲル層、12……ニュートンゲル層、14
……自由空間、16……凝固防止剤、安定剤或はこれら混
合液、22……単核細胞。
Claims (30)
- 【請求項１】閉塞端部の底と、開口端部の上口とを有
し、血液サンプルが採取されて遠心分離される採取管
と、 この採取管に含まれる疑液性ゲル層と、 この疑液性ゲル層の下部に位置して、前記採取管に含ま
れるニュートンゲル層とを備え、 前記採取管は、疑液性ゲル層の上部に前記血液サンプル
を採取するに十分な自由空間を形成する寸法を持ち、 前記疑液性ゲル層は、採取管の遠心分離前に、採取管に
採取された血液サンプルと、前記ニュートンゲル層との
間に位置して、血液サンプル及びニュートンゲル層の相
互混合を防止する、血液サンプル及びニュートンゲル層
間の障壁として作用し、 この疑液性ゲル層は、ニュートンゲル層の比重より大き
い比重を持ち、採取管の遠心分離時に、ニュートンゲル
物質の下部の位置に移動し、 前記ニュートンゲル層は、密度媒質として作用して、ニ
ュートンゲル層が遠心分離時に、採取管に採取された血
液サンプルの単核細胞及びより重い成分間の位置に入り
込むような比重を持つ血液からの単核細胞の分離装置。 - 【請求項２】閉塞端部の底と、開口端部の上口とを有
し、血液サンプルが採取されて遠心分離される採取管
と、 この採取管に含まれる疑液性ゲル層と、 この疑液性ゲル層の下部に位置して、前記採取管に含ま
れるニュートンゲル層と、 前記採取管に含まれ、ニュートンゲル層の下部の、ニュ
ートンゲル層及び閉塞端部間に位置する液体密度媒質層
とを備え、 前記採取管は、疑液性ゲル層の上部に前記血液サンプル
を採取するに十分な自由空間を形成する寸法を持ち、 前記疑液性ゲル層は、採取管の遠心分離前に、採取管に
採取された血液サンプル及び前記ニュートンゲル層間に
位置して、血液サンプルがニュートンゲル層及び液体密
度媒質層と相互混合することを防止する、血液サンプル
とニュートンゲル層及び液体密度媒質層との間の障壁と
して作用し、 この疑液性ゲル層は、ニュートンゲル層の比重より大き
く、前記液体密度媒質層のそれより小さい比重を持ち、
採取管の遠心分離時に、ニュートンゲル層の下部の位置
に移動し、 前記ニュートンゲル層は、採取管の遠心分離時に、疑液
性ゲル層の上部の採取管に位置するような比重を持ち、 前記液体密度媒質は、分離媒体として作用して、採取管
の遠心分離時に、採取管に採取された血液サンプルの単
核細胞及びより重い成分間の位置に入り込むような比重
を持つ血液からの単核細胞の分離装置。 - 【請求項３】前記ニュートンゲル層は、約1.07〜1.09の
比重を持つ特許請求の範囲第１項記載の装置。 - 【請求項４】前記液体密度媒質層の比重は、約1.07〜1.
09である特許請求の範囲第２項記載の装置。 - 【請求項５】前記ニュートンゲル層は、必須的に疎水性
の有機樹脂から形成される特許請求の範囲第１項記載の
装置。 - 【請求項６】前記ニュートンゲル層は、必須的に疎水性
の有機樹脂から形成される特許請求の範囲第２項記載の
装置。 - 【請求項７】前記ニュートンゲル層は、ポリエステル樹
脂から形成される特許請求の範囲第１項記載の装置。 - 【請求項８】前記ニュートンゲル層は、ポリエステル樹
脂から形成される特許請求の範囲第２項記載の装置。 - 【請求項９】前記疑液性ゲル層は、シリコンゲル、共ポ
リエステル樹脂基剤ゲル、ポリブタジエン基剤ゲル、ポ
リブテン基剤ゲル及びα−オレフィンジアルキルマレイ
ン酸共ポリマ基剤ゲルからなる群から選択される特許請
求の範囲第１項記載の装置。 - 【請求項１０】前記疑液性ゲル層は、シリコンゲル、共
ポリエステル樹脂基剤ゲル、ポリブタジエン基剤ゲル、
ポリブテン基剤ゲル及びα−オレフィンジアルキルマレ
イン酸共ポリマ基剤ゲルからなる群から選択される特許
請求の範囲第２項記載の装置。 - 【請求項１１】前記疑液性ゲル層は、水との吸着を制限
するために、予め水で飽和させられる特許請求の範囲第
１項記載の装置。 - 【請求項１２】前記疑液性ゲル層は、水との吸着を制限
するために、予め水で飽和させられる特許請求の範囲第
２項記載の装置。 - 【請求項１３】前記疑液性ゲル層は、水との吸着に起因
する外観の変化を最小にするために、着色剤を含む特許
請求の範囲第１項記載の装置。 - 【請求項１４】前記疑液性ゲル層は、水との吸着に起因
する外観の変化を最小にするために、着色剤を含む特許
請求の範囲第２項記載の装置。 - 【請求項１５】前記採取管には、血液サンプルの血液細
胞の老化を最小にし、従って採取管における血液サンプ
ルのガラス器具内貯蔵を許容するために、採取管に位置
した血液サンプルと混合される安定剤が含まれる特許請
求の範囲第１項記載の装置。 - 【請求項１６】前記採取管には、血液サンプルの血液細
胞の老化を最小にし、従って採取管における血液サンプ
ルのガラス器具内貯蔵を許容するために、採取管に位置
した血液サンプルと混合される安定剤が含まれる特許請
求の範囲第２項記載の装置。 - 【請求項１７】前記安定剤は、等張溶液、高張溶液、高
分子量の有機分子を添加したイオン性溶液、細胞培養培
地及びマッコイ培地からなる安定剤の群から選択される
特許請求の範囲第15項記載の装置。 - 【請求項１８】前記安定剤は、等張溶液、高張溶液、高
分子量の有機分子を添加したイオン性溶液、細胞培養培
地及びマッコイ培地からなる安定剤の群から選択される
特許請求の範囲第16項記載の装置。 - 【請求項１９】前記採取管の上口には、蓋が取り付けら
れる特許請求の範囲第１項記載の装置。 - 【請求項２０】前記採取管の上口には、蓋が取り付けら
れる特許請求の範囲第２項記載の装置。 - 【請求項２１】前記採取管に形成される自由空間が真空
引きされて、血液サンプルの直接吸引を許容する特許請
求の範囲第１項記載の装置。 - 【請求項２２】前記採取管に形成される自由空間が真空
引きされて、血液サンプルの直接吸引を許容する特許請
求の範囲第２項記載の装置。 - 【請求項２３】前記採取管には、閉塞端部近傍に位置す
る多孔性フォーム部材が含まれ、この多孔性フォーム部
材が採取管内の液体密度媒質層を吸着する特許請求の範
囲第２項記載の装置。 - 【請求項２４】前記多孔性フォーム部材は、架橋ウレタ
ンフォームから形成される特許請求の範囲第23項記載の
装置。 - 【請求項２５】採取管と、この採取管に含まれる疑液性
ゲル層と、この疑液性ゲル層の下部に位置して、前記採
取管に含まれるニュートンゲル層とを備え、 前記疑液性ゲル層は、採取管の遠心分離前に、採取管に
採取され得る血液サンプルと前記ニュートンゲル層との
間に位置して、血液サンプル及びニュートンゲル層の相
互混合を防止する血液サンプル及びニュートンゲル層間
の障壁として作用し、ニュートンゲル物質の比重より大
きい比重を持って、採取管の遠心分離時に、ニュートン
ゲル物質の下部の位置に移動し、 前記ニュートンゲル層は、密度媒質として作用して、ニ
ュートンゲル層が遠心分離時に、採取管に採取された血
液サンプルの単核細胞及びより重い成分間の位置に入り
込むような比重を持つ血液分離装置に、血液サンプルを
導入し、 この採取管を約1,000〜2,000Gの速度で遠心分離して、
疑液性ゲル層がニュートンゲル層の下の位置に移動し、
ニュートンゲル層が単核細胞及びこれより重い血液サン
プル成分間に位置させた段階を備えた血液からの単核細
胞の分離方法。 - 【請求項２６】前記血液サンプルから分離されたプラズ
マを除去し、プラズマの分離後に単核細胞に対する希釈
剤を添加して、ニュートンゲル層上に配置された懸濁液
を形成する段階を備えた特許請求の範囲第25項記載の方
法。 - 【請求項２７】前記ニュートンゲル層の上に配置された
懸濁液を除去する段階を備えた特許請求の範囲第26項記
載の方法。 - 【請求項２８】採取管と、この採取管に含まれる疑液性
ゲル層と、この疑液性ゲル層下に位置して、前記採取管
に含まれるニュートンゲル層と、このニュートンゲル層
下に位置して、該採取管に含まれる液体密度媒質層とを
備えて、 前記疑液性ゲル層は、採取管の遠心分離前に、採取管に
採取され得る血液サンプルと前記ニュートンゲル層及び
液体密度媒質層との間に位置して、血液サンプルとニュ
ートンゲル層及び液体密度媒質層との相互混合を防止す
る血液サンプル及びニュートンゲル層及び液体密度媒質
層間の障壁として作用し、ニュートンゲル物質の比重よ
り大きい比重を持って、採取管の遠心分離時に、ニュー
トンゲル物質下の位置に移動し、 前記液体密度媒質は、遠心分離時に、採取管に採取され
た血液サンプルの単核細胞及びより重い成分間の位置に
入り込むような比重を持つ血液分離装置に、血液サンプ
ルを導入し、 この採取管を約1,000〜2,000Gの速度で遠心分離して、
疑液性ゲル層がニュートンゲル層の下の位置に移動し、
少なくとも液体密度媒質が単核細胞及びこれより重い血
液サンプル成分間に位置させられた段階を備えた血液か
らの単核細胞の分離方法。 - 【請求項２９】前記血液サンプルから分離されたプラズ
マを除去し、プラズマの分離後に単核細胞に対する希釈
剤を添加して、ニュートンゲル層の上に配置された懸濁
液を形成する段階を備えた特許請求の範囲第28項記載の
方法。 - 【請求項３０】前記ニュートンゲル層の上に配置された
懸濁液を除去する段階を備えた特許請求の範囲第29項記
載の方法。
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