JPS59154362A - 凝固防止血液からリンパ球を分離する方法および装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は全血液中の細胞性成分の分離方法および装置に
関し、さらに詳しくは末梢血液リンパ球を高純度および
高収率で遠心分離する方法および装置に関する。

体液例えば１ｍ液の臨床的検査は医療において極めて重
要である。かがる検査は体液の特定成分について行なわ
れ、体液供給者の医学的状態の指釦を与えるものである
。

血液試料を採取した場合、分析すべき血液試料の特定成
分ができるだげ純粋な形で技術者に渡されることがしば
しば必要である。かがる成分の分離に遠心分離かしばし
ば使用される。遠心分離の際、血液は容器内で、懸濁し
ている赤血球、白血球および血小板が血漿または血清と
分離される迄所定の時間「遠心沈降」にかげられる。血
清の方はその中に存在する臨床的に重要な司溶性成分に
ついて検査することができろ。遠心後、分離した血清お
よび細胞（および血小板）はデカンテーション、サイホ
ン、ピペット法のいずれかによって分離する。血清は例
えば米国特Ｊ１第４３２１４３２号明細書に記載の如き
自動分析装置によって分析しその中の特定の成分例えば
グルコース、コレステロール等の濃度を測定することが
できる。また、分離された細胞および血小板を検査して
臨床的に重要な知見を得ることもてきる。例えば異種の
白血球および血小板の絶対数および相対値は供給者の医
学１賓状態に関する極めて重要な知見を与えるものであ
る。通常白血球の分離は遠心分離によって行なわれ、こ
の場合白血球と赤血球との中間の比重を有する生理的に
不活性な障壁を血液試料な入れた管に最初に導入する。

従って遠心分離において白ｍ１球は上澄液と共に、障壁
によって赤血球と分離される。白血球の比重はザブセッ
トが異っても類似しているので、白血球の一サシセット
であるリンパ球をこの技法で純粋に分離することは固唾
である。かがる技法は例えば米国特許第４１９０５３５
じ明細書に記載されている。

以後純度という語は、分離後の上澄液中に存在′するリ
ンパ球の数を、その血液試料画分中に存在するすべての
種類の白血球の合ｄ１数で除した値の意味で使用する。

収率とは分離された試料中に存在するリンパ球の総数を
原全血液試料中のリンパ球の数で除した値を意味する。

生活力とは分離された試料中のトリパン青排除性リンパ
球の数をこの試料中のリンパ球の総数で除した値を意味
する。

（ｖ１究室においても臨床試験室においても、純粋な末
梢血液リンパ球の取得の必要性が型盤増大している。

血液試料中のリンパ球の数の検査により臨床的に極めて
重要な知見が得られる。例えば組織適合性の判定ンこお
いて、ある種の試剤（抗原）に対するリンパ球の反応は
、ヒトのある器官が移植の際に受容されるが拒否される
かを知るのに有用である。また免疫能の試験においては
リンパ球を特定の物質（抗原）と混合１−で両者間の反
応を調べる。

反応の程度により患者の免疫不全性疾患、自己免疫性疾
患等の存在に関する指標が得られる。しかし有意義な結
果を得るためには血液試料から得たリンパ球が高度に純
粋、ずなわち他のサブセットの白血球を含まず、原血液
試料中のリンパ球の総数を正確に反映することが重要で
ある。検査結果が患者の医学的状態を正確に示すために
は高い収率と純度とが極めて重要である。

リンパ球の分離のためには従来多数の方法が知られてい
る。例えば米国特３１″第３７０９７９１号明細書には
全血液試料中のリンパ球を他の細胞性成分と分離する方
法および装置が記載されている。

その記載によれば、血液試料を使い捨て注射筒内で磁性
粒子と混合しインキュベートすると、粒チは単球および
好中球の食作用を受けるがリンパ球には捕食されない。

その結果食作用を有する白血球は「磁気的に標ＭＡＵさ
れる。さらに、赤血球の沈降促進のため沈降剤が注射筒
内に導入される。

次で、沈降した赤血球を除く血液試料を注射筒がら、高
強度不均一磁界内を通る導管に通す。標議された白血球
および遊離の磁性粒子は口の磁界によって導管内に残り
、精製リンパ球を採取することができる。

さらに遠心分離法も白血球の分離に使用されてきた。広
く使用されるーっの方法は、例えば、Ｔｒａｎｓｐｌａ
ｎｔａｔｉｏｎ　ｓ　２２巻、２１号、１０１ペー？）
（７９７６年）に記載されている。この方法では、希釈
血液試料をフィコルータ、イパソク（Ｆｊ−ｃｏｌｌ−
Ｈｙｐ　ａｑ１λｅ）液−にに層状に置く。この液は密
度障壁どして使用するもので、単核白血球（および血漿
□ならびに血小板）と赤血球および分裂自１Ｉ）１球と
のそれぞれの比重の中１ｆＪＪに寵！Ｉケされた比重分
有している。フィ為ルーハイバック（ま水性液体である
ので希釈血液でその表面上に層を作る際には相互に混り
合わぬよう注意して行なわなければならない’Ｅ　タ、
上澄液オよび細胞性成分はフィ：Ｉ　＃　−／、イパツ
ク液と混合１〜得るので、遠心分離後の相分離も慎重に
行なう必要がある。一般に試料は希釈され（１：１ない
し１：４）、得られる収率は比較的低くその原因の少く
とも一部は希釈の微妙な影響のためである。また白血球
のサブセットの比重が互いに類似しているので分離した
リンパ球の純度が低い。

密度障壁−希釈血漿界面においてよりシャーシな細胞帯
を得られるよう遠心分離前に試料を希釈することによっ
てリンパ球の分離を改善することが試みられた。シャー
プな帯形成により採収は容易になりリンパ球収率は若干
改善される。しかし収穫されたリンパ球の収率、純度は
なお理想の段階に達しない。

さらに、遠心分離法においてヵ用な密度障壁オオ料に閃
しても改良が７テなわれている。例えば米国特許第４０
２１３４０号および米１月特許第４３３３５６４号明細
財には、チキソトロピー′４：を有する疎水性ゲル状不
活性組成物の使用が記載されている。かがる材料は、分
離用容器への試料の導入が容易な点でフィコルーハイバ
ック液に優っている。これらの材料は疎水性であるた゛
め試料が導入時にこの材“料と混合する傾向はほとんど
無い。しかもこれらの材料は遠心力によって比較的容易
に変形および移動するが、遠心後には比較的変形し難い
障壁となるため、上澄液の分離が著しく容易になる。

本発明の目的とする所は、例えば高収率で実質的に単球
、好中球およびその池の食作用性細胞（以下食作用性細
胞と総称する）の混入していないリンパ球画分を得るた
めの、凝固防止血液試料中のリンパ球を遠心分離するた
めの方法および装置である。周知の如く白血球の一リプ
セットの比重は相互にほとんど差が無い。例えば単球の
比重（浮遊密度）の範囲はリンパ球と重なっており、前
者はリンパ球の数の約２５％存在する。このため通常の
遠心分離法を使用する場合白血球の一リブクラスないＩ
−サブセット間の分離は比較的良くない。従ってリンパ
球のみを収穫することは極めて困難である。

本発明によれば、生理的で親水性の媒質によって湿潤ま
たは懸濁した高密度の粒子と、疎水性不活性障壁層材料
との両者分適当な容器または管内に置くことにより、高
収率および高純度で典型的には一段工程のリンパ球分離
を達成することができる。もしこれらの成分間の相反作
用または混合が生ずれば高密度粒子が障壁材料内に捕捉
される恐れがあるがこれは、実質的にすべての粒子が食
作用を受は得るようにすること匠よって防止することが
できる。全血液試料を予備希釈の必要なしに管内に導入
ｔ〜、食作用増進のためにインキユベートシながら粒子
と混合する。インキュベーション後管を遠心操作にかけ
ると、赤血球および食細胞（後者は食作用の結果昆虫が
増加している）は容易に障壁層を通過し、またはその付
近に集る。

得られた上澄液は血小板と、実質的に単球および顆粒球
の混在しない高収率および高純度のリンパ球層とを含有
する。その後リンパ球は容易に分離して所望の目的に使
用することができる。操作の全所要時間は、従来技術に
よるリンパ球分離が１時間以上であるのに対し４０分未
満である。

障壁材料は好ましくは水に不溶（疎水性）のチキントロ
ピー性材料であって、化学的に不活性であり、比重が分
離すべきリンパ球よりやや大きいが赤血球および食作用
を行った白血球の比重よりは小さいものである。障壁材
料は最明は容器の底部に置く。粒子は親水性媒質によっ
て被覆（湿潤）するかその中［懸濁して障壁材料上に導
入する。

従ってこれら粒子が障壁材料に耐着またはこれと混合し
て食作用を受けられ／よくなったψり障壁材料の比重を
増加させたりする恐れはない。それ故、障壁材料および
粒子を入れた管は長期間貯蔵することができ、唯一の必
要条件は粒子を湿潤または被覆している親水性材料が、
例えは蒸発防止のため管を密封することにより、保持さ
れろことである。

本発明の大きな利点は、添付図面による以−ドの詳細説
明により明かとなるであろう。ここで第１図はリンパ球
分離装置の縦断面図であり、第２図はリンパ球分離装置
の別の態様の部分縦断面図であり、 第３図は血液試料添加後、混合およびインキュペーショ
ン工程中における第１図の装置を示１．、第４図は遠心
分離後の第ろ図の装置を示す。

第１図について説明すると、遠心分離器に装着するのに
適当な型の容器または管１はゴム栓３によって封しられ
る。密栓に先立って、調節された比重すなわち約１．０
６０−１．０８７を有するデル状で不活”１判ミな障壁
材料５と、不活性粒子例え、ば鉄、白金、金、銀、鉛等
またはそれらの合金の粒子の懸濁物７とを管１内に入れ
ろ。これら粒子は食作用を受けた場合に食細胞の１実効
」比重を障壁材料５の比重より犬とするに十分な比重を
有している。例えばこれら粒子の比重は約６．　Ｑ　ｇ
ｍ　／　ｔｙｎ”より犬であってよい。全血液試料は患
者から直接注射釧採取法で通常ＥＤＴＡ抗凝固剤と共に
採取してｖｉｖｃ導入する。

障壁材料５の選定は、これが疎水性であり、かつ、チキ
ントロピー性を示すかまたは適当な温度例えば室温より
やや高温度の融点を有し室温では液状で遠心分離でき次
に遠心分離後室温よりやや低温に冷却すると固化して比
較的固い障壁を形成し得るように行なう。

障壁ｖＪ利５は好ましくはヂギソトロピー性を有し、か
つ液状シリコーン（例えばジメチルポリシロキャン）と
非常に微細な疎水性シリカ粉末とから成るもの２あって
よい。液状シリコーンとシリカ粒子とを混合してデル状
の二１ンシステンシーと少くとも約２　Ｄ　Ｄ、０００
　ｃｓ　の初期粘度とを有するようにする。また障壁材
料５の比重は約１．０３０から１．０８７の範囲に設定
することができ、この調節は混合物中の液状シリコーン
とシリカ粉末との比を変えることにより行なうことがで
きる。理解し得る如く、障壁４オ料５の比重は、例えば
、１．０７すなわち血液試料中に存在するリンパ球（お
よび血小板）の比重より僅か大きいが赤血球および粒子
を捕食した顆粒球および単球の比重よりは小さい値に設
定することができろ。

あるいはまた、障壁材料５は低密度液体例えばｎ−ヘギ
サデカンまたはｎ−オクタデカン等と高密度ハロゲン化
炭化水素油（例えばニューシャーシー、ハラケンザック
所在へロカーボンプロダクツ社の２７／　１００−７０
０／１００シリーズ）とがらの密度１−０３０−１．０
８７で融点が室温より伜か低い混合物から成っていても
よい。

いずれの場合にも障壁材料５の量は図に示す如く遠心連
管１の軸に直角に連続障壁層をＪし成するのに十分でな
ければならない。例えば、管１の太さによるか、この量
は１．フないし２．０グラムの範囲であることができる
。

リンパ球以外の白血球の特定ヴグセットは本質的に食作
用を有するので、かかるサブセットの細胞は、これと接
触する異物にロイコアドヒジョン（１ｅｕｋｏａ、ｄｈ
ｅｓｉｏｎ　）により耐着させ食作用を起させることが
できる。本発明の好ましい態様においては鉄粒子をその
高い比重すなわち約７−５　ｇｍｌｏｎ３のために使用
するが、比重が約６−Ｑ　（１ｍ／ｃｍ３より人で白血
球が捕食し得る大きさの、比較的不活性な任意の粒子を
使用し得ることは明らかである。これらの粒子の目的は
要するに食細胞を１−標識」しそれによって細胞の「実
効比重」を障壁材料５の比重より大きくすることである
。これによって食作用のある白血球と無い白血球との比
重の差が大幅に増大し、後述の如くその分離が容易とな
る。

その結果分離されたリンパ球の収率および純度は実質的
に増大する。その上リンパ球の生活力は９５％のオーダ
ーに維持される。

食作用には遊離の二価陽荷電イオン例えばカルシウムま
たはマグネシウムイオンの存在が必要であ８ので、懸濁
液７中には塩類例えば塩化カルシウム、塩化マグネシウ
ム等が溶解含有されている。

抗凝固剤としてＥＤＴＡが使用されるときはががる塩の
添加は、ＥＤＴＡに結合した遊離イオンを置換すること
によりｒＥＤＴＡＪ血液のイオン含量を回復し、懸濁液
γ内のイオン濃度を正常とするのに役立つ。この場合、
ＩＩＣＤＴＡが添加イオンによって中和される結果血液
試料が凝固するのを防Ｌ１−するため、懸濁液７にはま
た適当な代用生理的抗凝固剤例えばヘパリンをも含有さ
せる。最初の抗凝固剤がヘパリンである場合は血液試料
のイオン含量は抗凝固剤によって実質的に変化Ｌ２ない
ので、かかるイオンの添加は不要であることは理解し得
るであろう。さらに懸濁液Ｔ内の粒子は通常食作用を促
進するため、粒子表面に沈着させた増感剤により増感さ
れる。かかる増感剤は、懸濁液γ中に含有されていてよ
いが、高度に陽に荷電したポリマー、例えば、Ｄ　、　
ＤＬまたは１」形のボ’Ｊ　ＩＪシン、ポリアルヤニン
等のような塩基性ポリアミノ酸またはポリペプチドを含
有して成っている。粒子上の陽電荷は食作用を実質的に
増進させる頻回がある。食作用についてさらに理解を深
めるには米国特許第３７００５５５号および米国特許第
３７０９７９１号明細書を参照されたい。

障壁材料５と懸濁液７を管１内に入れた後ゴム栓３で栓
をする。調製した管１は第１図に示す形で技術者に提供
される。粒子が水性媒質内に、それに湿潤されるように
含有されている限り、相当数の粒子が障壁材料５または
管１の壁に強く耐着することはあり得ない。従って懸濁
液γ内の粒子のほとんど全部が食作用を受けることがで
きろ状態にある。障壁材料の疎水性と粒子の実効的親水
性とによって上記の非耐着現象が確保され′る。

第２図は粒子が懸濁液中に含まれない、本発明の別の一
態様を示−「。図では粒子９０数が少なく粒度が大きい
が、これは単に説明の匣宜上である。

粒子−９は非常に薄い親水性材料９ａの層例えばアガロ
ースまたはポリアクリルアミド皮膜によって「湿潤」ま
たは被覆されている。従って粒子９は障壁倒斜５の表目
１にも管１の内壁にも強く耐着することはない。そのた
め血液試別を管１内に導入した場合粒子９は容易に試料
液中に懸濁されて食作用を受は得ろようになる。別の方
法として、「湿潤した」粒−ｒ−９を、Ｗｌに試別を加
えるのと同時にまたは加えた後に添加することができる
。

次に第６図において、栓３を除いて所定容態の血液試別
を針１゛１を通して管１に導入する。〔所望ならば金１
１１により直接栓３を通して試ｒ１を導入してもよい。

この場合には導入を可能とするため密栓した管１を真空
排気することができる」。

導入後管１に再び栓をし、管１内の血液試料および懸濁
液１３を例えば、矢印１５で記号的に示′す回転式混合
器内゛Ｃよく混合する。混合中、混合物１３を例えは６
７°Ｃで１５−３０分間インギュベートする。混合およ
びインキコーペーションは、混合物１３内の各食細胞が
多くの粒子と接触して確実に食作用が行なわれろように
なるに十分な時間継続する。また、粒子は実効的に親水
性であるので、混合工程中粒子のほとんど全部が食作用
を受は得ろ状態に保たれ、これにより食作用に必要な全
体の時間が短縮される。従って、かかる粒子・を「湿潤
〆ｌｊｌ性水性媒質中濁するか湿った親水性ｖＪ利によ
つで被覆することにより、これら粒子を管１因に時間の
制限なく存置し、しかも直ちに血液試別と混合し得る状
態とすることができる。

食作用［二程が終ｒすると、第４図矢印１７て記号的に
示すようＶこ［遠心沈降−１さゼろために管１を遠心分
離器内に置く。遠心分離の間、容器１を比較的高速度、
例えば約１２００　ｇで回転すＺ）。

従って赤血球および捕食した粒子を含有する細胞は比重
が「高い」ため管１の底部に移動し、一方、より軽い血
小板および比重の変化しなかったリンパ球は容器１内で
上方に移動する。遠心分離゛の継続に伴い血液試料の細
胞性成分および障壁倒斜による比重勾配が生しぞＪ′１
ぞれ比重にｌｌａ、じた層をなす。障壁相別５は応力ｔ
″で流動して管１内を移動して第４図に示すように静止
障壁５ａを形成し、これ＆Ｊ低比比重よび高化重相１９
および２５を有効に分離する。低比重相１９は血漿（お
よび血小板）の層２１と障壁５ａのすぐ上のリンパ球層
２３とを含有する。高密度相２５は試別の他の成分全部
１なわぢ赤血球、捕食した粒子を含む白血球、および捕
食されなかった粒子全部を含冶する。

障壁５ａは低密度用１９の成分と非混合性であり、かつ
遠心応力が無くなると再びケゝル化するので、分離した
リンパ球の採収は極めて容易になる。

障壁層５ａは遠心分離後は固く比較的変形し難いので、
障壁５ａＥ攪乱することなしに低密度用１９をピペット
２７によって吸」二けたりＦけたすして血漿層２１とリ
ンパ球層２３とを混合１〜９２８球層２３を再懸濁させ
ることができる。、その後再懸濁したリンパ球をピペッ
トで採取し所望の任意の分析操作に（＝Ｊする。別の方
法として、血漿層２１０犬部分を最初にピペットで除き
、層２１の残りとリンパ球層２３とを採取して別の容器
に移し、所望の目的に使用する。

障壁層５が既述の如く室温よりやや高い融点を冶する低
および高比重材料の混合物から成る場合は、既述の通り
障壁５ａを固化させ層２３のリンパ球の収穫を容易とす
るに十分なだけ管１を冷却する。

本発明の特定の態様について説明１．だが、本特許請求
の囲を逸脱することなく多くの改変を加え得ろことは明
かであろう。

【図面の簡単な説明】

第１図はリンパ球分離装置の縦断面図であり、第２図は
リンパ球分離装置の別の態様の部分断面図であり、 第６図は血液試料添加後、混合およびインキコーベーシ
ョン工程中における第１図の装置を示し、第４図は遠心
分離後の第６図の装置ａを示す。 手　　続　　補　　正　　訂 昭和５９年５１−］１１７ 日許庁　　長　　　官　　　殿 １、事件の表示　　　　昭和５９年％訂願第２２０５８
月３　補正をする者　事件との間作　　　特許出願人テ
クニコン、インストルメンツ、−１−ホレーショノ４　
代　理　人　　東京都港区赤坂１丁１」１番１４　＞３
・ｌＫ１池東１急ビル８、補正の内容　　　　　　別紙
の　と　お　り補正の内容（特願昭５９−２２０５８　
）明、細書に次のとおり補正を加えます。 １、　特許請求の範囲を次のとおり訂正１〜ます。 Ｉ′２、特許請求の範囲 （１）開放容器中に疎水性で化学的に不活性な障壁材料
を導入して前記容器の底部に位置させ、 前記容器中の前記障壁材料トに食細胞の作用を受は得ろ
不活性粒子を導入し、ここで前記障壁材料の比重は血液
試料中のリンパ球よりも大きく、前配粒子および赤血球
よりも小さいものどじ、 前記粒子をそのまま保持し、かつ前記障壁材料と混合さ
せないように前記粒子を親水性材料により湿潤し、 前記血液試料を前記容器中に導入し２て前記粒子と混合
し、 前記混合物をインキユベートシ、これにより前記粒子の
少くとも一部は前記試料中の食作用性白血球により食作
用を受けるものとし、前記容器を、遠心分離して前記障
壁層を前記試料中の前記リンパ球と、食作用を受けた粒
子を含有する前記白血入食作用を受けていない粒子およ
び赤血球との間に移動させ、そして 前記遠心分離の後、前記リンパ球を収集する ことを特徴とする、凝固防止血液試料中のりンパ球を他
の白血球から分離する方法。 （２）前記漫潤丁程が、前記粒子の生理的親水性媒質中
の懸濁液を形成ずろことから成る、前項（１，１に記載
の方法。 （３）　　前記湿潤工程が前記粒子な親水性材料により
被覆することから成る、前項（１）に記載の方法。 （４）　　さらに、前記遠心工程ののち前記障壁材料を
固化するため冷却を行なうことから成る、前項（１）に
記載の方法。 （５）　　さらに、前記試料と前記粒子とを混合するた
め前記容器を回転することから成り、ここで前記回転工
程と前記インキュベーション工程とは同時に行なわれる
ものとする、前項（１）に記載の方法。 （６）　前記回転工程とインキュベーション工程とを６
７°Ｃにおいて約１５ないし６０分間行なう、前項（５
）に記載の方法。 （７）　　血液試料導入時にその受入を行なうための開
放端を有する容器、 前記容器内の閉鎖端に位置する疎水性で化学的に不活性
な障壁材料、 前記試料中の食作用性白血球による食作用を受は得る大
きさの、親水性材料により湿潤されたそして前記障壁材
ネ」上に位置する不活性粒子、および 遠心分離にかげるまでは前記粒子がそのまま保持され、
かつ前記障壁材料と混合しないように、その比重が前記
試料中の前記リンパ球より犬であるが前記粒子および赤
血球より小である前記障壁材料 から成る、凝固防止血液試料中のリンパ球を他の白血球
から遠心分離するための内蔵一体型分離装置。 （８）　　前記障壁材料が、前記容器の遠心操作後に前
記試料の比重の異る相の間に障壁層を形成するに十分な
容積を有するものである、前項（７）に記載の分離装置
。 （９）前記障壁材料が室温よりわずかに低い温度では固
体であるような液体である、前項（７）に記載の分離装
置。 （１０）　　前記障壁材料の比重が約１．０６０ないし
１．０８７である前項（７）に記載の分離装置。 ０υ　さらに前記開口端を封するための栓を含有する前
項（７）に記載の分離装置。 （１２）前記容器が真空排気される、前項（１，１）に
記載の分離装置。 ０３）前記不活性粒子が生理的親水性媒質中に含有され
ている、前項（７）に記載の分離装置。 （１４）　　前記粒子が親水性材料によって被覆されて
いる、前項（７）に記載の分離装置。 （１勺　前記親水性材料がアガロースまたはポリアクリ
ルアミドである、前項（７）に記載の分離装置。 ０６）　　前記粒子の比重が約３．０　ｇｍ、／Ｃｍ”
より犬である、前項（刀に記載の分離装置。 ０７）＠記障壁材料が、少くとも約２０ｏ、ｏｏ。 Ｃ８の初期粘度を有しかつチキントロピー性を示す、前
項（７）に記載の分離装置。 （１８）　　前記粒子が鉄、白金、金、銀、鉛およびそ
れらの合金から成る群から選ばれる材料から形成される
、前項（力に記載の分離装置。 （１ω　前記生理的媒質中に陽に荷電した重合体を食作
用促進用増感剤として含有する、前項Ｏａに記載の分離
装置。 （２０）前記媒質がヘパリンおよび二価の陽に荷電した
イオンを含有する、前項１１９に記載の分離装置。」 ２、　第１４頁下から第４〜３行の「室温では液状で」
を「、液状で容易に」と訂正します。 ろ、　第１６頁第１〜２行の「低い」を「高い」と訂正
します。 ４、　第１９頁下かも第８行の「〔」および丁ｈ・ら第
５行の「〕」を削除します。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　　容器中に疎水性で化学的に不活性な障壁材料
   。を導入し、 前記容器中に食細胞の作用を受は得る不活性粒子を導入
   し、ここで前記障壁材料の比重は血液試料中のリンパ球
   よりも大きく、前記粒子および赤血球よりも小さいもの
   とし、 前記粒子を親水性材料圧より湿潤し、 前記血液試料を前記容器中に導入して前記粒子と混合し
   、 前記混合物をインキユペートシ、これにより前記粒子の
   少くとも一部は前記試料中の食作用性白血球により食作
   用を受けるものとし、そして前記容器を、前記障壁層が
   前記試料中の前記リンパ球と、食作用を受けた粒子を含
   有する前記白血球および赤血球との間に移動するに十分
   な時間遠心操作に付する ことを特徴とする、凝固防止血液試料中のリンパ球を他
   の白血球から分離する方法。 （２）前記湿潤工程が、前記粒子の生理的親水性媒質中
   の懸濁液を形成することから成る、前項（１）に記載の
   方法。 （３）前記湿潤工程が前記粒子を親水性相料により被覆
   することから成る、前項（１）Ｋ記載の方法。 （４）　　さらに、前記遠心工程ののち前記障壁材料を
   固化するため冷却を行なうことから成る、前項（１）に
   記載の方法。 （５）　　さらに、前記試料と前記粒子とを混合するた
   め前記容器を回転することから成り、こ〜で前記回転工
   程と前記インキュベーション工程とは同時に行なわれる
   ものとする、前項（１）に記載の方法。 （６）前記回転工程とインキュベーション］：桿とを３
   ７℃において約１５ないし６０分間行なう、前項（５）
   に記載の方法。 （７）　　さらに、前記遠心工程ののち前記リンパ球を
   採収痺する工程から成る、前項（１）に記載の方法。 （８）血液試料粒入荷にその受入を行なうための開放端
   を有する容器、 前記容器内の疎水性で化学的に不活性な障壁材料および ＲｉＪ記試料中の食作用性白血球による食作用を受は得
   る大きさの、親水性材刺眞より湿潤された不活性粒子− から成り、前記障壁材料の比重は前記試料中の前記リン
   パ球より大であるが前記粒子および赤１１７１球より小
   であるものとする、凝固防止［ｎ１液試料中のリンパ球
   を他の白血球から遠心分離するための内蔵一体型分離装
   置。 （９）　　ｉｌＪ記障壁材料が、前記容器の遠心操作後
   に前記試料の比重の異る相の間に障壁層を形成するに十
   分な容積を有するものである、前項（８）に記載の分離
   装＠。 （１０）前記１雛壁材料が室温より若干低く冷却するこ
   と区より固化する液体である、前項（８）に記載の分離
   装置。 （１１）前記Ｉ諭壁利料の比重が約１．０３０ないし１
   ０８７である前項（８）に記載の分離装置。 （１２）　　さらに前記開０端を封するための栓を含有
   する前項（８１Ｋ記載の分離装置。 （１３）前記容器が真空排気される、前項（［２１に記
   載の分離装置。 ０４）前記不活性粒子が生理的親水性媒質中に含有され
   ている、前項（８）に記載の分離装置。 ０５）前記粒子が親水性材料によって被覆されている、
   前項（８）Ｋ記載の分離装置。 （１６）前Ｓ己親水性材料がアガロースまたりまポリア
   クリルアミドである、前項（８）に記載の分離装置。 （１７）前記粒子の比重が約３−　Ｏｇｍ　７ｃｍ３　
   　より大である、前項（８）に記載の分離装置。 Ｑ８ｉ　　前記障壁材料が、少くとも約２００．ＤＯＯ
   ｃｓの初期粘度を有しかつチキソトロピー性を示ス、前
   項（８）に記載の分離装置。 （１９）前記粒子が鉄、白金、金、銀、鉛およびそれら
   の合金から成る群から選ばれる材料から形′成される、
   前項（８）に記載の分離装置。 （２１１ＪｉＪ記生理的媒質中に陽に荷′市１−だ重合
   体を食作用促進用増感剤どして含有する、前項（［５）
   に記載の分離装置。 Ｑ＋＞　　前、尼媒質がヘパリンおよび二佃１のｊ場に
   荷電したイオンを含有する、前項（例に記載の分離装置
   。