JPH07509461A - アミノ酸を結合したナイトロジェンマスタード誘導体及び腫瘍の治療におけるプロドラッグとしてのそれらの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 アミノ酸を結合したナイトロジエンマスタード誘導体及び腫瘍の治療におけるプ ロドラッグとしてのそれらの使用本発明は、抗体によって指向された酵素とプロ ドラッグを用いる療法（ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｄｉｒｅｃｔｅｄ　ｅｎｚｙｍｅ　 ｐｒｏｄｒｕｇ　ｔｈｅｒａｐｙ）（ＡＤＨＰＴ）に使用する化合物、それら化 合物の製造方法、それら化合物を含有する医薬組成物及びそれらの使用方法に関 し、さらにまた１）酵素と抗体又は抗体断片との抱合又は複合体（ｃｏｎｊｕｇ ａｔｅ）と、２）本発明の化合物とからなる２成分系に関する。本発明の化合物 は、カルボキシペプチダーゼＧ酵素、特にカルボキシペプチダーゼＧ　２（ＣＰ Ｇ２）と組合わせて使用されるプロドラッグとして特に興味あるものである。

癌化学療法において使用可能性のある多数の細胞毒性化合物（ｃｙｔｏｔｏｘｉ ｃ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ）が発見されている。ナイトクジエンマスタード類はかか る細胞毒性化合物のうちの一つの重要な群を形成する。

一般的に細胞毒性化合物、特にナイトクジエンマスタード類の臨床使用は、腫瘍 細胞と正常細胞との間の細胞毒性効果における選択性が乏しいという理由から制 限されている。

この問題を克服するための一つの試みは、いわゆるプロドラッグの開発に関連し ている。プロドラッグは細胞毒性薬物（ｄｒａｇ）の誘導体であり、比較的単純 な誘導体である場合が多く、その細胞毒性は親薬物（ｐａｒｅｎｔ　ｄｒｕｇ） の細胞毒性に比べてかなり軽減されている。

かかるプロドラッグを治療中の患者に投与し、それによって目的作用部位の領域 においてプロドラッグをただ単に細胞毒性薬物に転化させるという提案がなされ ている。

一つの試みは、細胞毒性をもつ親代合物であるナイトロジエンマスタードをアミ ノ酸に連結させてプロドラッグを形成することに関連する。該プロドラッグは酵 素の影響下で目的作用部位において親代合物であるナイトロジエンマスタードに 転化し得る。この試みは抗体／酵素の複合体をプロドラッグと組合わせて使用す ることによって実施できる。抗体／酵素の複合体は、腫瘍に選択性をもつ抗体と 、プロドラッグを細胞毒性薬物に転化させる酵素とから形成される。臨床実施に おいては、抗体／酵素の複合体を先ず患者に投与し、腫瘍に結合させる。適当な 時間をおいて体のその他の部分から抗体／酵素の複合体が排泄（ｃｌｅａｒａｎ ｃｅ）された後に、プロドラッグを患者に投与する。プロドラッグの細胞毒性薬 物への転化は、局在された酵素の影響下において主として腫瘍の領域で行われる 。かかる方式（ｓｙｓｔｅｍ）は、国際公開第ＷＯ３８１０７３７８号として公 開された国際特許出願第ＰＣＴ／Ｇ３８８１００１８１号明細書及び米国特許第 ４．９７５．２７８号明細書に記載されている。

ＣＰＧによって切断される公知のＡＤＥＰＴ用プロドラッグは、その活性薬物と して安息香酸マスタードを生成する。しかしながら、腫瘍細胞に対する治療効力 を高めるためには、ＣＰＧによる切断によってさらに一層活性な薬物が生成され るべき必要がある。ＣＰＧを用いるＡＤＥＰＴ療法の選択性を高めたい、すなわ ち健常細胞と比べて癌細胞に対する毒性の比率を高めたいという別の要求が生じ る。

本発明はＡＤＥＰＴ療法において使用される新規なプロドラッグであって、ＣＰ Ｇによって切断されるがしかもＣＰＧ触媒反応の公知生成物よりもさらに著しく 活性の大きな細胞毒性薬物を産生ずる新規なプロドラッグを発見したことに基づ くものである。ＣＰＧは本来、葉酸誘導体からグルタミン酸とアスパラギン酸と を特異的に加水分解により生成する葉酸分解酵素として機能する（Ｓｈｅｒｖｏ ｏｄ　Ｒ，Ｆ、らの論文、Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、　１４８，４４ ７−４５３（１９８５））　、カルボキシペプチダーゼＧ酵素は典型的でない葉 酸構造類似体（ａｎａｌｏｕｇｅ）を認識しない（Ｋａｌｇｈａｔｇｉ　Ｋ、に 、らの論文、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　３９．３４４１−３４４５（ １９７９））、従って、カルボキシペプチダーゼＧ酵素は基質特異性において保 守的であるとみなされる。本発明のプロドラッグがＣＰＧ酵素例えばＣＰＧＩ酵 素、特にＣＰＧ２酵素についての基質であることは驚くべきことである。ＣＰＧ ２はＬ−グルタミン酸誘導体（ｇｕ　ｌ　ｕｔａｍａｔｅ）に対して特異性をも つエキソペプチダーゼである。ＣＰＧ２酵素は葉酸及びその構造類似体並びにグ ルタミル−ｐ−アミノ安息香酸から、その部分構造体の−芳香環−Ｃｏ−ＮＨ− Ｇｌｕの−Ｃ０−ＮＨ−の所での切断によってグルタミン酸部分を生ずるよう加 水分解することが知られている。本発明においては、切断が起こると比較される 部分構造体は一芳香環−Ｘ−Ｃｏ−ＮＵ−Ｇｌｕ（式中、Ｘは−ＮＨ−１−〇− 又は−ＣＨ，−である）であり、従って切断点と芳香環との間の距離が変わり、 しかも特にＸが−ＮＨ−又は−〇−である時には−ＣＯ−ＮＨ−結合の内部の電 子分布が変わっている。ＣＰＧ２が前記の構造空間的な変差と電子的的な変差と を許容（ａｃｃｏｍｏｄａｔｅ）　Ｌ、たことは予測され得なかったことである 。

本発明の一つの要旨によれば、ＣＰＧ酵素に対する基質でありプロドラッグであ る化合物であって、次の式（Ｉ）式中、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して塩素原 子、臭素原子、沃素原子、基−Ｏ３Ｏ２Ｍｅ又は基−０８０２フェニル（但し、 フェニル基は０１〜４アルキル基、ハロゲン原子、−ＣＮ基又は−ＮＯ，基から 独立して選択される置換基の１個、２個、３個、４個又は５個で置換されていて もよい）を表わし。

Ｒｌａ及びＲ２″はそれぞれ独立して水素原子、０１〜．アルキル基又はＣ１〜 ４ハロアル千ル基を表わし。

Ｒ３及びＲ１はそれぞれ独立して水素原子、０１−４アルキル基又はＣ８〜４ハ ロアルキル基を表わし； Ｒ５″、Ｒ５ｂ、　Ｒ”及びＲ”はそれぞれ独立して水素原子、Ｃ３〜４アルキ ル基であって二重結合を１個又は三重結合を１個有していてもよい０１〜４アル キル基、０１〜４アルコキシ基、ハロゲン原子、シアノ基、−Ｎｌ２基、基−Ｃ ＯＮＲ７Ｒ８（但し、Ｒ７及びＲ８は下記に記載の意義を有する）、基−ＮＨ（ Ｃ，〜４アルキル）、基−Ｎ（Ｃ，〜４アルキル）２及び０２〜。

アルカノイル基を表わすか；あるいは Ｒ５＋１及びＲ５ｂは一緒になって下記のａ）、ｂ）又はＣ）に記載の基：すな わち ａ）二重結合を１個有していてもよいＣ４アルキレン基；ｂ）ｃ、アルキレン基 ：又は Ｃ）基−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−１−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−もしくは−ＣＨ２ −ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ但し、これらの基のそれぞれは置換基の１個、２個、３個又は ４個により置換されていてもよく、これらの置換基はそれぞれ独立してＣト４ア ルキル基、Ｃｌ−４アルコキシ基、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、Ｃ２〜 ５アルカノイル基及び基−ＣＯＮＲ’Ｒ８（基中のＲ７及びＲ８は下記に記載の 意義を有する）からなる群から選択されるものである〕を表わし； ＸはＯ原子、基−ＮＨ−又は基−ＣＨ２−を表わし；ＹはＯ原子を表わし； Ｚは基−Ｖ−Ｗを表わし、該基においてＶは基−ＣＨ２−Ｔ−であり、基中のＴ は基−ＣＨ２−１−〇−１−Ｓ−１−（ＳＯ）−又は−（ＳＯ２）−であり（但 し、■がその第２の原子として硫黄原子又は酸素原子を有する場合にはＷが基− ＣＯＯＨ以外のものであることを条件とする）、また前記の基Ｖはさらに炭素原 子上に１個又は２個の置換基Ｑ１及び／又はＱ２を有していてもよ（； ここてＱｌ及びＱ２はそれぞれ独立してＣ１〜４アルキル基又はハロゲン原子を 表わすものであるか、あるいはＱ’及びＱ２か隣り合った炭素原子に結合してい る場合には、Ｑｌ及びＱ２は一緒になって（Ｃ３〜Ｃ４）アルキレン基であって 、０１〜４アルキル基及びハロゲン原子からなる群から独立して選択される置換 基の１個、２個、３個又は４個で置換されていてもよい（Ｃ３〜Ｃ４）アルキレ ン基を表わし得るものであり：且っ Ｗは下記の定義（１）〜（９）に記載の基を表わす、すなわちＷは（１）　Ｃ０ ＯＨ基； （２）基−（ｃ＝ｏ）Ｌｏ−ｒ　Ｃ但し、Ｒ６はＣ１〜６アルキル基、Ｃ３〜６ シクロアルキル基又は（下記の定義（３）に記載の意義を有する）アリール基を 表わす〕　； （３）基−（Ｃ＝０）−ＮＲ’Ｒ８Ｃ但し、Ｒ７及びＲ８はそれぞれ独立して水 素原子を表わすか、あるいはＣ１〜６アルキル基、０３〜６シクロアルキル基、 アリール基、ヘテロアリール基であって前記Ｎ原子に対して炭素原子を介して連 結されるヘテロアリール基、又は０７〜９アラルキル基を表わし、 ここで、前記アリール基はフェニル基であり：前記へテロアリール基は窒素原子 及び硫黄原子からなる群から選択される異種原子を１〜３個含有する５員環又は ６員環であり；前記アリール部分それ自体、ヘテロアリール部分及び前記アラル キル基のアリール部分は基−ＣＯＯＨ，−０ｆ（、−Ｎｌ２、−ＣＨ２−ＮＦ２ 、−（ＣＨ２）１〜４−ｃｏｏＨ，テトラゾール−５−イル及び−３Ｏ３Ｈから なる群から選択される置換基の１〜４個により炭素原子上で置換されていてもよ く且つアルキル部分はメチル基を有していてもよい〕　； （４）基−８Ｏ□ＮＨＩ？９（但し、Ｒ９はＲ７について定義した意義を有する が、ざらに−ＣＦ３基、−ＣＨ１２−ＣＦ３基又は前記アリール基を表わし得る ）。

（５）基−３０３Ｒ１０（但し、Ｒ１０はＮ原子、Ｃ１〜６アルキル基又は０３ 〜６シクロアルキル基を表わす）； （６）基ＰＯＪ１０Ｒ”　（但し、２つの基Ｒ”はそれぞれ同一であってもよい し又は異なっていてもよく前記の意義を有する）；（７）テトラゾール−５−イ ル基； （８）基−ＣＯＮＨ−３ＯＪ”　（但し、Ｒ”は下記の（ａ）〜（ｃ）に記載の 基：すなわち、 （ａ）Ｃ３〜７シクロアルキル基； （ｂ）Ｃ１〜６アルキル基であって、下記に定義するアリール基、０１〜４アル キル基、−ＣＦ３基又はハロゲン原子からなる群から選択される複数の置換基で 置換されていてもよいＣＩ〜６アルキル基；及び （Ｃ）ペルフルオロ−０１〜６アルキル基を表わし；ここで上記アリール基はフ ェニル基であるか又は１〜５個の置換基を有するフェニル基であり、該置換基は ハロゲン原子、−Ｎ０２基、−ＣＦ３基、０１〜４アルキル基、０１〜４アルコ キシ基、−Ｎｌ（２基、−ＮＨＣＯＣＨｓ基、−ＣＯＮＨ２基、基−ＱＣ）Ｉ　 ２ＣＯＯＨ，基−Ｎｕ（Ｃ，〜４アルキル）、基−Ｎ（Ｃ，〜４アルキル）２及 び基−ＮＨＣＯＯＣ、〜４アルキル、−ＯＨ基、−ｃｏｏＨ基、−ＣＮ基及び基 −ＣＯＯＣｒ〜４アルキルからなる群から選択されるものである〕　；及び （９）基−トＥｌｅｔ　（但し、ＭはＳ原子、基ＳＯ又は基Ｓ０２を表わし、且 つＨｅｔは５員又は６員複素環式芳香環であって該芳香環の炭素原子を介して基 Ｍに連結される複素環式芳香環を表わし、該複素環式芳香環は０原子、Ｎ原子及 びＳ原子からなる群から選択される異種原子を１個、２個、３個又は４個含有す るものであり、また該複素環式芳香環は一０１１基、−３）］基、−ＣＮ基、− ＣＦ、基、−Ｎｉｌ　２基及びハロゲン原子からなる群から選択される置換基の １個、２個、３個又は４個により環の炭素原子上で置換されていてもよい）を表 わす）で示される化合物及び鎖式（Ｉ）で示される化合物の塩が提供される。

前記の式（Ｉ）の化合物は非対称炭素原子を少なくとも１個有する。該非対称炭 素原子は、式Ｉにおいて置換基−ＣＯＯＨを有する炭素原子である。さらに、Ｒ １、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｑ’及びＱ２の意義に応じて、式（Ｉ）の化合物はさら に追加の非対称炭素原子を有していてもよい。本発明が式（Ｉ）の化合物のかか る形の全て、例えば本明細書に記載の本発明の組成物の有用な生理学的性質をも つラセミ体並びにその個々の光学異性体を包含することが理解されるであろう。

かかる異性体をどのようにして分離し得るか及びそれらの生理学的性質をどのよ うにして決定し得るかは当業者にはありふれた一般的知識である。本発明の化合 物は、式（Ｉ）中の置換基−ＣＯＯＨを有する炭素原子においてＬ配置をもつも のであるのが好ましい。

本発明は前記の式（Ｉ）で示される化合物の塩を包含する。しかしながら、医薬 用途については、前記に挙げた塩は製薬学的に許容し得るものであるが、別の塩 が例えば式ＣＩ）の化合物及びそれらの製薬学的に許容し得る塩の製造に用途を 見出だし得ることが認められるであろう。本発明の化合物の多形体（ｐｏｌｙｏ ｏｒｆｉｃ　ｆｏｒｍ）を調製し得るし、しかもこれらの多形体もまた本発明に 包含される。

本明細書に挙げた置換基がアルキル基を表わすか又は含んでいる場合には、かか る基は直鎖であってもよいし又は分岐鎖であってもよい。本明細書中に挙げた置 換基がＣ１〜６アルキル基を表わすか又は含んでいる場合には、かかる基は炭素 原子を１〜４個有するのが都合かよく、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピ ル基又はイソプロピル基、好ましくはメチル基及びエチル基、特にメチル基であ るのか都合かよい。本明細書に挙げた置換基が０１〜４アルキル基を表わすか又 は含んでいる場合には、かかる基は例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基 又はイソプロピル基、好ましくはメチル基及びエチル基、特にメチル基であり得 る。

Ｒ１及びＲ２として好ましい置換基（ｖａ　１ｕｅ）はＩ原子、Ｂｒ原子、ＣＩ 原子、基−Ｏ３Ｏ２Ｍｅ及び基−０８０２フェニル〔但し、フェニル基は２位及 び／又は４位において（本明細書で定義しだ）置換基の１個又は２個（特に１個 ）で置換されている〕である。Ｒ１及びＲ２について特に好ましい置換基はＩ原 子、Ｂｒ原子、Ｃ１原子及び基−０３Ｏ２１！ｅである。

Ｒ”及びＲ”″として好ましい置換基は−ＣＨ，基又は水素原子であるが、特に 水素原子である。

Ｒ３及びＲ４として好ましい置換基は水素原子、メチル基及びＣＦ３基であるが 、特に水素原子である。

Ｒ”、Ｒ５ｂＳＲ５Ｃ及びＲ５″として好ましい置換基は水素原子、弗素原子、 塩素原子、メチル基、−ＣＯＮＨ２基及びＣＮ基である。Ｒｏｌｌ、Ｒｓｂ、　 Ｒ５ｃ及びＲ”のうちの少なくとも１つが水素原子以外のものであるようにフェ ニル環上に置換基が存在する場合には　ＲＳｍ。

Ｒ５ｂ％　Ｒ５ｃ及びＲ”のうちの１つ又は２つのみが水素原子以外の置換基で あることが好ましい。かかる状況においては、Ｒ５ｂ及びＲ”が水素原子であり 且つＲ５″及び／又はＲ５Ｃは水素原子以外のものであることがさらに好ましい 。しかしながら、Ｒ５ａＳＲ５ｂ、　Ｒ５Ｃ及びＲ５ｄは水素原子であるのが特 に好ましい。

Ｘとして好ましい置換基は０原子又はＮ原子、特にＯ原子である。

本発明の別の態様においては、Ｘとして特に好ましい置換基はＮ原子である。

■として好ましい置換基は−ＣＨ２−Ｃ）１２−である。本発明の別の態様にお いては、■として好ましい置換基は、Ｗがテトラゾール−５−イル基である場合 には−ＣＨ２−３−である。

Ｗが前記の定義（３）に記載の基を表わす場合には、アリール基は置換フェニル 基であるのが好ましく、ヘテロアリール基は異種原子を１個又は２個含有してい る５員環又は６員環であるのが都合がよく、かかる異種原子はピリジル基又はピ リミジル基のように窒素原子であるのが好ましい。アリール部分それ自体、ヘテ ロアリール部分、又はアラルキル基のアリール部分上の好ましい置換基は−ＣＯ ＯＨ基、−ＣＨ２−Ｃ００ｔ１基又はテトラゾール−５−イル基である。

Ｗが前記の定義（８）　（ｂ）に記載の基であってＷがアリール基で置換されて いてもよい０１〜６アルキル基を表わす場合には、この置換されていてもよいア リール基は−ＣＯＮＨ２基、−０ＣＨ２−ＣＯＯｆ１基及び／又は−Ｃｏｏｌ基 で置換されたフェニル基であるのが好ましいが、特に非置換フェニル基であるの が好ましい。

Ｗが前記の定義（９）に記載の基を表わす場合には、Ｈｅｔは窒素原子を１個、 ２個、３個又は４個含んでいる５員又は６員複素環式芳香環を表わすのが都合が よい。窒素原子は前記の環中に存在する唯一の異種原子であるのが好ましい。従 って、具体的な基としてはピリジル基、ピロリル基、１，２．３−トリアジニル 基及び１．２．４−トリアジニル基が挙げられる。

Ｗとしての具体的な置換基が前記の定義（１）、（２）、（３）、（５）、（６ ）、（７）及び（９）に記載の基である場合には、好ましい置換基は前記に詳述 した定義（１）、（２）、（３）、（７）及び（９）に記載の基である。

Ｗとしての具体的な置換基は、−ＣＯＯ■基、−ＣＯＮＬ基、基−ＣＯＮＨＲ８ （基中のＲ８は前記に定義したものであり、特にＲ８はフェニル基である）、テ トラゾール−５−イル基、基−ＣＯＮＨ−３ＯＪ”　Ｃ基中のＲ”は前記に詳述 した定義（ｂ）又は（ｃ）に記載の基を表わす〕及び基−Ｍ−Ｂｅｔ（基中のＭ は異種原子を３個又は４個有する５員複素環式芳香環であり、該複素環が異種原 子を３個有する場合には炭素原子上でハロゲン原子又はシアノ基で置換されてい てもよい）である。

Ｗが基−ＣＯＮＨ−３ｏ２Ｒｌ　＋を表わし、基中のＲ目がペルフルオロ−ＣＩ 〜６アルキル基を表わす場合には、該ペルフルオロアルキル基は炭素原子を１〜 ４個、特に炭素原子を１個又は２個有するものであるのが好ましい。

Ｗとしてのさらに具体的な置換基は−ＣＯＯＨ基、テトラゾール−５−イル基又 は基−ＣＯＮＩＩ（アリール）〔基中のアリール基は前記の定義（３）に記載の 意義を有する〕である。このような状況においては、アリール基は置換フェニル 基であるのが好ましく、好ましい置換基は−ＣＯＯＨ基、−ＣＨ２−Ｃｏｏｌ基 又はテトラゾール−５−イル基である。

ＡＤＥＰＴにおける実用性により、本発明の好ましい特定の化合物としては、（ Ｓ）−２−（４−［ビス（２−クロロエチル）アミノコフェノキシカルボニルア ミノ）−４−（ＬＨ−１，２，３，４−テトラゾール−５−イル）酪酸及びその 塩；Ｎ−（４−［ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３−フルオロフェニルカ ルバモイル）−Ｌ−グルタミン酸及びその塩、Ｎ−（４−［ビス（２−クロロエ チル）アミノコフェニルカルバモイル）−Ｌ−グルタミン酸及びその塩が挙げら れるが、本発明の特に好ましい化合物はＮ−（４−［ビス（２−クロロエチル） アミノコフェノキシカルボニル）−Ｌ−グルタミン酸及びその塩である。

別の好ましい化合物であって試験において良好な活性を示した化合物は、Ｎ−（ ４−［ビス（２−ヨードエチル）アミノコフェノキシカルボニル）−Ｌ−グルタ ミン酸及びその塩である。

興味ある本発明の化合物の具体的な小群（ｓｕｂ−ｇｒｏｕｐ）は、Ｒ１−Ｒ４ 、Ｒ５ａ−Ｒ５’ＳＸ、ＹＳＷＳＱ’又はＱ２として前記の特定的又は一般的な 定義のいずれか一つを単独でとるか、あるいはＲ１−Ｒ４、Ｒ５″〜Ｒ”ＳＸ、 Ｙ、Ｗ、Ｑ’又はＱ２の別の特定的又は一般的な定義と組み合わせてとることに よって得られ得る。

また、効果的なＡＤＥＰＴ用の本発明の供試化合物のＣＰＧ切断によって生成さ れる薬物は、生理学的条件下ではＣＰＧ２触媒反応の公知の薬物生成物よりも不 安定である。腫瘍部位で生成された活性薬物の一部が全身循環（ｇｅｎｅｒａｌ 　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）の中に漏れ出る（１　ｅａｋ）場合には、この低減 された安定性は、薬物がＡＤＥＰＴ用のＣＰＧ触媒反応の公知生成物と同様の安 定性をもつ場合よりも健全細胞に対して低い毒性を生じる。従って、本発明者ら が行った試験は、薬物（活性薬物であり、プロドラッグではない）の静脈内投与 後であっても、すなわち１５分後であっても薬物は血漿中で検出されなかったこ とを証明する。

本発明の化合物は種々の無機及び有機性の酸及び塩基と塩を形成し、かかる塩類 は本発明の範囲内にある。かかる塩類としては、アンモニウム塩、アルカリ金属 塩例えばナトリウム塩及びカリウム塩、アルカリ土類金属塩例えばカルシウム塩 及びマグネシウム塩、有機塩基との塩例えばジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ−メ チル−Ｄ−グルカミン、アミノ酸例えばアルギニン、リジンとの塩などが挙げら れる。

また、有機酸及び無機酸、例えばＨＣｌ、　ＨＢｒ、　Ｈ□Ｓｏ４、Ｈ，ＰＯ４ 、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸及びカンファースルホン酸との塩類も 調製し得る。前記の酸はｐＫａ値が２に相当するかそれよりも小さいｐＫａ値、 特にｐＫａ値が１に相当するかそれよりも小さいｐＫａ値をもつ強酸である。生 理学的に許容し得る塩類が好ましいが、別の塩類が例えば生成物の単離及び精製 において有用であり得る。

前記塩類は慣用の方法で、例えば遊離酸又は遊離塩基の形態の生成物と、１当量 又はそれ以上の適当な塩基又は酸とを、前記塩類が溶解しない溶媒又は媒体中で 、あるいは後に減圧下で除去される溶媒、例えば水中で反応させることにより形 成し得るし、あるいは凍結乾燥することにより形成し得るし又は適当なイオン交 換樹脂上で別のカチオン用の存在するカチオン類を交換することにより形成し得 る。

本発明の別の要旨によれば、前記の式（Ｉ）で示される化合物及びその塩の製造 方法であって、次の式：〔式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｌ　ａ、　Ｒ２龜、Ｒ３、Ｒ４ 、Ｒ”、、Ｒ５ｂ、　Ｒ５Ｃ。

Ｒ５ｄ、Ｘ、Ｙ、Ｑｌ及びＱ２は前記の意義を有し、Ｚｌは前記の意義Ｚを表わ すが、Ｗがカルボキシル基である場合にはＷが保護された形（Ｐｒ２と表示され る）で存在することを条件とし、Ｐｒ’もまた保護された形（Ｐｒ２と同一であ ってもよいし又は異なっていてもよい）のカルボキシル基を表わす〕で示される 化合物を脱保護し且つ所望ならばこのようにして得られた式（Ｉ）で示される化 合物をその塩に転化させることからなる、前記の式（Ｉ）で示される化合物及び その塩の製造方法が提供される。

従って、Ｐｒ’及びＰｒ２は、例えばベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブチル オキシカルボニル基、２−（トリメチルシリル）エチルエステル、ジメチル−ｔ ｅｒｔ−ブチルシリルエステル、ジフェニルメチルエステル、テトラヒドロピラ ンエステル、テトラヒドロフランエステル、メトキシエトキシメチルエステル又 はベンジルオキシメチルエステルであってもよいし、あるいは水添分解又は酸触 媒反応による脱保護用の一般的に知られているカルボキシ保護基、例えばエステ ル形成性の保護基であってもよい［Ｇｒｅｅｎｅ　Ｔ、Ｗ、及びｔｕｔｓ　Ｐ、 　Ｇ、　Ｍの著作、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉ ｃ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、　２ｎｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ。

Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ発行、　１９９０年〕。

Ｐｒ’及び／又はＰｒ２がベンジルオキシカルボニル基を表わす場合には、脱保 護は水素添加によって行うのか好ましい。かかる水素添加は慣用の方法、例えば 白金又はラネーニッケルの存在下における方法により行い得るが、炭素の存在下 で白金を使用することにより行うのが好ましい。水素添加は、不活性溶媒好まし くは非プロトン性溶媒、特に酢酸エチル、テトラヒドロフランの存在下で、ある いは極性非プロトン性溶媒例えばジメチルホルムアミドの存在下で、好ましくは ０〜１００℃の温度、さらに好ましくは１５〜５０℃の温度、特に周囲温度で、 好ましくは１〜２４時間行うのが都合がよい。

Ｐｒ’及び／又はＰｒ２がｔ−ブチルオキシカルボニル基を表わす場合には、脱 保護反応は、酸、都合よ（は強酸例えばトリフルオロ酢酸、ＨＣＩ、ＨＢｒ、　 ＨＩ又はギ酸の存在下で都合よ（行い得る。溶媒を使用することが望まれる場合 には、不活性な非プロトン性溶媒例えばジクロロメタン又はジエチルエーテルが 好ましい。反応は０〜１００℃の温度、さらに都合よくは０〜３０℃の温度、特 には周囲温度で行うのが都合がよい。

（前記に定義した）式（Ｉａ）の化合物及びその塩は新規であり、従って本発明 の別の要旨を構成する。

本発明の別の要旨によれば、前記の式（Ｉａ）で示される化合物（但し、Ｘが０ 原子であり且っＹがＯ原子である）及びその塩の製造方法であって、次の式。

（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ”、Ｒ”、Ｒ３、Ｒ４、Ｒｏｌｌ、Ｒ５ｂ、　Ｒ５ｃ及 ヒＲ５ｄは前記の意義を有し、Ｘは０原子であり、Ｙは０原子であり且つＬは脱 離性の原子又は基である）で示される化合物を次の式＝（式中、Ｐｒ’及びＺｌ は前記の意義を有する）で示される化合物と反応させて、それによって前記の式 （Ｉａ）の化合物を生成させ、且つ所望ならば得られた式（Ｉａ）の化合物をそ の塩に転化させることからなる、前記の式（Ｉａ）で示される化合物（但し、Ｘ が０原子であり且っＹがＯ原子である）及びその塩の製造方法が提供される。前 記のしはＣＩ原子、Ｂｒ原子、■原子、４−ニトロフェノキシ基又はペンタフル オロフェノキシ基である。上記反応は溶媒の存在下で一１０℃〜１００℃、好ま しくは２０〜５０℃の温度で行うのが都合がよい。

好ましい反応条件は、有機溶媒（特に、クロロホルム、酢酸エチル、トルエン、 ジメチルホルムアミド及びジクロロメタン）の存在下で、好ましくは５〜５０℃ で、好ましくは１〜２４時間反応を行うことを包含する。前記の式（ｎ）で示さ れる化合物は本発明の別の要旨を構成し、該化合物は例えばアニリノマスタード 基を含有する対応するフェノールを、クロルギ酸アリールエステル例えばクロル ギ酸ニトロフェニルエステル（特に、クロルギ酸４−ニトロフェニルエステル） か又はホスゲンのいずれかと反応させて式（ｎ）で示される化合物を生成させる ことによって製造し得る。

好ましい反応条件は、有機溶媒（特に、酢酸エチル又はクロロホルム）の存在下 で、好ましくは１５〜５０℃で（特に周囲温度で）、好ましくは１〜１０時間反 応を行うことを包含する。

前記の式（Ｉ［［）の化合物であって式中のＷが前記の定義（３）に記載の基を 表わす場合の化合物は、式（ＩＩＩ）の化合物であって式中のＷが前記の定義（ ２）に記載の基を表わす化合物から標準条件を使用して製造し得る。好ましい標 準条件は、窒素親核試薬（特に、アンモニア、第１級アミン又は第２級アミン） を用いる反応であって好ましくは２５〜５０℃で、好ましくは約２４時間の反応 を包含する。

前記の式（ＩＩ［）の化合物であって式中のＷがテトラゾール−５−イル基を表 わす場合の化合物は、対応するニトリルから、公知の方法例えばＦｉｎｎｅｇａ ｎ　Ｗ　Ｇらの論文、ＪＡＣＳ、　ｓｏ、　３９Ｃ１９（１９７８）に記載の方 法によりアミンを生成させ、次いで得られたアミン（Ｐｒ’）を脱保護し、それ によって式（ｍ）の化合物であって式中のＷがテトラゾール−５−イル基である 化合物を製造し得る。

前記の式（ｍ）の化合物であって式中のＷが前記の定義（９）に記載の基を表わ す場合の化合物は、本明細書に記載の式（ＸＶ）の化合物を標準的条件（特に、 シボロン使用するか、又は混成無水物反応、次いで水素化硼素ナトリウム還元を 使用する）を使用して対応する第１級アルコールに還元することによって製造し 得る。対応する第１級アルコールは、標準方法により例えばメタンスルホニルク ロリドとトリメチルアミンとを使用することによりジクロロメタンの存在下に０ ℃で脱離性基例えばＢｒ、　Ｉ又はメシレートに転化される。

該脱離性基は次の式。

ＨＳ−１１ｅｔ　（χＶＩ） 〔式中、）ｌｅｔは前記のＷの定義（９）に記載の意義を有する〕で示される基 で交換され、それによって酸化条件下で処理された後に次の式：〔式中、Ｚｌｌ ｌはＷが−３−Ｈｃｔ、　−（Ｓ＝Ｏ）−Ｈｅｔ又は−３Ｏ２−Ｈｅｔを表わす ことを条件として前記のＺを表わし、Ｐｒ’及びＰｒ３は前記の保護されたカル ボキシル基又は−ＮＨ，基それぞれである〕で示される化合物を生成する。適当 な酸化条件としては酸化剤（特に、３−クロロ過安息香酸）を用いる処理が挙げ られる。前記の標準条件下における式（Ｘ■）の化合物の−Ｎ８２基の脱保護は 、前記の式（ｍ）の化合物であって式中のＷが前記の定義（９）に記載の基を表 わす場合の化合物を生成させるのに効果的である。

本発明の別の要旨によれば、前記の式（Ｉａ）で示される化合物（但し、ＸかＮ 原子てあり且っＹかＯ原子である）及びその塩の製造方法であって、次の式。

（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ”、Ｒ”、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５＆、Ｒ５ｂ、　ＲＳＣ及ｒ ｊＲ”は前記の意義を有する）で示される化合物又はその塩を、前記の式（ｍ） の化合物と反応させそれによって式（Ｉａ）の化合物を生成させ、且つ所望なら ば得られた式（Ｉａ）の化合物をその塩に転化させることからなる、前記の式（ Ｉａ）で示される化合物（但し、ＸがＮ原子であり且つＹがＯ原子である）及び その塩の製造方法が提供される。上記の反応は例えば有機溶媒（好ましくは極性 非プロトン性溶媒、特にジクロロメタン又は酢酸エチル）の存在下に好ましくは 室温で、好ましくは１〜５時間行い得る。

本発明の別の要旨によれば、前記の式（ＩＶ）で示される化合物及びその塩の製 造方法であって、次の式。

（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１ｍ５Ｒ２ａ、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ”、Ｒ５ｂ、　Ｒ５Ｃ及 ヒＲ５６は前記の意義を有する）で示される化合物を、式Ｌｌ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｌ ｌ（式中、Ｌｌ及びＬｌは脱離性基を表わす）で示される化合物と反応させてそ れによって式（ＩＶ）で示される化合物を生成させることからなる、前記の式（ ＩＶ）で示される化合物及びその塩の製造方法が提供される。Ｌｌ及びＬｌとし ての置換基としては、ＣＩ原子、基ＣＣＩ、、イミダゾリルン基及びアリールオ キシ基（特にフェノキシ基）が挙げられる。好ましい反応条件としては有機溶媒 （好ましくは極性非プロトン性溶媒、特に酢酸エチル）の存在下に５〜２５℃で 約１５分間反応を行うことが挙げられる。

本発明の別の要旨によれば、前記の式（Ｉａ）で示される化合物（但し、Ｘが基 −ＣＯ２−であり且っＹがＯ原子である）及びその塩の製造方法であって、前記 の式（ｎ）の化合物又はその塩〔但し、Ｘが基−ｃｎ　２−であり、ＹがＯ原子 であり且つＬが都合よくはペンタフルオロフェノキシ基、Ｃ１原子、基−ｏ−（ ｃｏ）−ｃ　、〜６アルキル、好ましくは分岐アルキル、特に０１〜４アルキル 、及び対応するフェニル酢酸の生成物であってカルボジイミド（特に、ジシクロ へキシルカルボジイミド）と反応させたアニリノマスタード基を含有するフェニ ル酢酸の生成物であることを条件とする〕と、前記の式（ｍ）の化合物とを、標 準的反応条件（例えば、極性非プロトン性溶媒例えばジメチルホルムアミド、酢 酸エチル又はテトラヒドロフランの存在下に２０〜５０℃で１〜２４時間反応を 行う）を使用して反応させ、それによって式（Ｉａ）の化合物を生成させ且つ所 望ならば得られた式（Ｉａ）の化合物をその塩に転化させることからなる、式（ Ｉａ）で示される化合物（但し、Ｘが基−ＣＨ２−であり且つＹがＯ原子である ）化合物及びその塩の製造方法が提供される。式（ＩＩ）の化合物は、アニリノ マスタード基を含有する対応するフェニル酢酸から標準的方法を使用して製造し 得る。

本発明の別の要旨によれば、前記の式（Ｉａ）で示される化合物〔但し、Ｗは前 記の定義（８）に記載の基（すなわち基−ＣＯＮＨ−ＳＯＪ’つを表わす〕又は その塩の製造方法であって、前記の式（ｍ）の化合物〔但し、Ｗは前記の定義（ ８）に記載の基を表わすことを条件とする〕と、前記の式（ｎ）の化合物とをそ れ自体公知の反応条件を使用して反応させ、それによって前記の式（Ｉａ）で示 される化合物〔但し、Ｗは前記の定義（８）に記載の基を表わす〕を生成させ、 且つ所望ならば得られた式（Ｉａ）で示される化合物をその塩に転化させること からなる、前記の式（Ｉａ）で示される化合物〔但し、Ｗは前記の定義（８）に 記載の基を表わす〕及びその塩の製造方法が提供される。好ましい反応条件とし ては、有機溶媒（好ましくは極性非プロトン性溶媒、特に酢酸エチル又はジクロ ロメタン）の存在下に５〜５０℃（特に周囲温度）で１〜５時間の反応を行うこ とが挙げられる。

前記の式（ｍ）で示される化合物は本発明の別の要旨を構成し、かかる化合物は 次の式。

Ｐｒ　’　−ＣＨ−Ｚ　’　（ＸＩ） 〔式中、Ｐｒ’は前記の保護された形のカルボキシル基を表わし、Ｐｒ３は保護 された形の−ＮＨ２基、特にベンジルオキシカルボニル誘導体又はフタルイミド 誘導体を表わし且つＺｌはＷが前記の定義（８）に記載の基を表わすことを条件 として前記の２を表わす〕で示される化合物のアミノ基を、それ自体公知の反応 条件下で脱保護し、それによって前記の式（ＩＩＩ）の化合物〔但し、Ｗは前記 の定義（８）に記載の基を表わす〕を生成させ、且つ所望ならば得られた式（ｍ ）の化合物をその塩に転化させることによって製造し得る。好ましい反応条件と しては、炭素上のパラジウムの存在下で、有機溶媒（好ましくは極性非プロトン 性溶媒、特に酢酸エチル又はテトラヒドロフラン）中で好ましくは周囲温度で、 好ましくは１〜２４時間の水素添加が挙げられる。別の好ましい反応条件として は、酢酸中でＨＢｒの存在下に好ましくは周囲温度で、好ましくは１〜２４時間 脱保護を行うことが挙げられる。

前記の式（ＸＩ）で示される化合物は、次の式：（式中、Ｐｒ’及びＰｒ３は前 記の意義を有し、ＺｌｌはＷが−Ｃｏｏｌを表わすことを条件として前記のＺを 表わす）で示される化合物と、式Ｒ１ｌ５Ｏ２Ｎ［１２Ｃ式中、Ｒ”は前記のＷ の定義（８）に記載の意義を有する〕で示される化合物とを、標準的反応条件下 で反応させることによって製造し得る。標準的反応条件としては、カルボジイミ ド（特に、ジシクロへキシルカルボジイミド）及び塩基〔特に、４−（Ｎ、Ｎ− ジメチルアミノ）ピペリジン〕の存在下に不活性溶媒（特に、ジクロロメタン） 中で反応を行うことが挙げられる。

本発明の別の要旨によれば、前記の式（Ｉ）で示される化合物〔但し、Ｗは前記 の基（４）（すなわち基−３Ｏ２Ｎ）ＩＲ’）　、基（５）（すなわち基−３Ｏ ３Ｒ”）及び基（６）（すなわち基ＰＯ１ｌ？’°Ｒ１０）を表わす〕の製造方 法であって、次の式： ％式％（） 〔式中、Ｚｌｌｌは前記の基Ｚを表わすが、Ｗが前記の基（４）（すなわち、基 −８Ｏ□ＮＨＲ９）　、基（５）（すなわち、基−３Ｏ，Ｒ”）及び基（６）（ すなわち、基ＰＯ３Ｒ”Ｒ１０）を表わすことを条件とする〕で示される化合物 を、前記の式（ＩＩ）で示される化合物と標準条件下で反応させるか、あるいは 前記の式（Ｖ）で示される化合物と標準条件下で反応させて、それによって式（ Ｉ）で示される化合物であって式中のＷが前記の定義（４）、（５）及び（６） に記載の基を表わす化合物を生成させ、且つ所望ならば得られた式（Ｉ）で示さ れる化合物をその塩に転化させることからなる、前記の式（Ｉ）で示される化合 物〔但し、Ｗは前記の基（４）（すなわち基−８０２ＮＨＲ９）、基（５）（す なわち基−３ｏ３Ｒ１０）及び基（６）（すなわち基ＰＯ，Ｒ”　Ｒ”　）を表 わす〕の製造方法が提供される。標準的条件としては、有機溶媒（例えば、非プ ロトン性極性溶媒、特にジクロロメタン）中で、好ましくは周囲温度での塩基と の反応を行うことが挙げられる。前記の式（Ｘ■）の化合物は公知である（Ｓｉ ｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、社から入手し得る）し、又は公知化合物から 標準的方法によって製造し得る。

本発明の別の要旨によれば、前記の式（１ａ）で示される化合物〔但し、式中の ＸはＮ原子又はＯ原子であり、Ｙは０原子であり、Ｒ１及びＲ２はＣ１原子、Ｂ ｒ原子、■原子又は基−Ｏ３Ｏ２Ｍｅ　（特にＣＩ原子）であり、Ｒ１・はＮ原 子てあり、Ｒ２ａはＮ原子であり、Ｒ３はＮ原子であり且つＲ４はＮ原子である 〕及びその塩の製造方法であって、次の式− （式中、Ｒ５ａ、Ｒ５ｂＳＲ５ＣＸＲ５ｄＳｐｒＩ及びＺＩは前記の意義を有し 、Ｘは０原子又は基ＮＨである）で示される化合物を、燐ハロゲン化剤（特に五 塩化燐）又は塩化チオニルと有機溶媒（好ましくは非極性非プロトン性溶媒、特 にジクロロメタン）の存在下に好ましくは還流温度で１〜２時間（特に９０分間 ）加熱して反応させるか：あるいはメチルスルホニルクロリドと有機溶媒（好ま しくは極性非プロトン性溶媒、特にビリンン）の存在下で反応させ、それによっ て前記の式（Ｉａ）で示される化合物〔但し、式中のＸはＯ原子又は基ＮＨであ り、Ｙは０原子であり、Ｒ１及びＲ２はＣＩ原子、Ｂｒ原子、■原子又は基−０ ３Ｏ□Ｍｅであり、Ｒ１″はＮ原子であり、Ｒ”はＮ原子であり、Ｒ３はＮ原子 であり且つＲ４はＮ原子である〕を生成させ、且つ所望ならば得られた式（Ｉａ ）の化合物をその塩に転化させることからなる、前記の式（Ｉａ）で示される化 合物〔但し、式中のＸはＮ原子又はＯ原子てあり、ＹはＯ原子であり、Ｒ１及び Ｒ２はＣＩ原子、Ｂｒ原子、■原子又は基−Ｏ３Ｏ２Ｍｅ　（特にＣＩ原子）で あり、Ｒ１″はＮ原子であり、Ｒ２″はＮ原子てあり、Ｒ３はＮ原子てあり且つ Ｒ４はＮ原子である〕及びその塩の製造方法か提供される。メチルスルホニルク ロリドを使用する場合には、式（ＸＩＸ）の化合物中の水酸基は反応に使用する 温度に応してＣ１原子及び／又は基−０８Ｏ□Ｍｅに転化させ得る。ジクロロ化 合物（すなわち、Ｒ’＝Ｒ２＝ＣＩ）は反応を７０°Ｃて１５分間行うことによ り都合よく取得し得るし、しかもＲゝ＝Ｃ１且つＲ２−２−−０３Ｏ２である対 応する化合物は反応を５０°Ｃで１０分間行うことにより都合よく取得し得る。

Ｒ１及びＲ２がＢｒ原子である場合及びＲ１及びＲ２が１原子である場合には、 メタンスルホニル無水物は、これが反応において競争ハロゲンの問題を除くとい う理由から、メタンスルホニルクロリドに取って代わるのが好ましい。式（ＸＩ Ｘ）の化合物（０，００２Ｍ）をＣＨＣ１３（３０ｍｌ）に溶解した。トリエチ ルアミン（１，１２ｍ１）とメタンスルホニル無水物（０，００８Ｍ）を周囲温 度で添加し、混合物を２時間撹拌し、次いで水洗する。このようにして得られた 生成物をＭｇＳＯ４上で乾燥し、濾過し、蒸発させて油状物を得た。得られた油 状物を乾燥ＤＭＦに溶解し、沃化リチウム（又は臭化リチウム；　０．００５Ｍ ）を添加し、８０℃で２時間撹拌し、冷却し、水に庄加し次いでエーテルで抽出 した。このようにして得られた生成物をＭｇＳＯ４上で乾燥し、濾過し、蒸発乾 固し次いてフランシュクロマトグラフィーにより精製した。

前記の式（ＸＩＸ）の化合物は、次の式。

〔式中、Ｒ５″、Ｒ５ｂ、　Ｒ５Ｃ，Ｒ”、　Ｐｒ’及びＺｌは前記の意義を有 し、Ｒ゛は基−Ｎ＝Ｃ＝０又は基−０−Ｃｏ−Ｌ（但し、Ｌは前記の脱離性基を 表わす）〕で示される化合物を前記の式（ＩＩ［）の化合物と反応させて、次の 式。

（式中、Ｒ５″、Ｒ５ｂＳＲ５ＣＸＲ５ｄ、　Ｐｒ’及びＺｌは前記の意義を有 し、ＸはＯ原子又は基Ｎｌ（である）で示される化合物を得ることによって製造 し得る。このようにして得られた化合物を（好ましくは炭素上のパラジウムの存 在下で）水素添加して式（ＸＸＩ）に対応するが基−Ｎｏ２の代わりに−ＮＨ２ を有する化合物を得る。このようにして得られた化合物をエチレンオキシドと、 水性酸条件（好ましくは、酢酸／水１：１）下で、好ましくは周囲温度で１〜２ 日間反応させ、それによって式（ＸＩＸ）の化合物を生成させる。

前記の式（Ｉ）で示される化合物であって式中のＷがテトラゾール−５−イル基 を表わす化合物の製造方法は、次の式：％式％（） （式中、ｚ　Ｉ　Ｉ　１は前記の基Ｚを表わすが、Ｗはテトラゾール−５−イル 基を表わすことを条件とする）で示される化合物と、前記の式（ｎ）で示される 化合物とを標準的条件下で反応させ、それによって前記の式（Ｉ）で示される化 合物であって式中のＷがテトラゾール−５−イル基を表わす化合物を生成させ、 且つ所望ならば得られた式（Ｉ）の化合物をその塩に転化させることからなる。

標準的条件としては、極性非プロトン性溶媒（特に、ＤＭＦ）中で塩基（好まし くは、ジメチルアミノピリジン、特にトリエチルアミン）の存在下における２０ 〜５０℃（特に２５℃）で少なくとも２時間（好ましくは２０時間）の反応が挙 げられる。

プロドラッグ及び薬物の生体外細胞毒性効果５ｋｅｈａｎらによって報告された 細胞毒性検定法り、　Ｎａｔｌ、　ＣａｎｃｅｒＩｎｓｔ、　、蔓、　１１０７ −１１１２（１９９０））と同様の細胞毒性検定法で、プロドラッグ、プロドラ ッグと酵素、及び薬物の生体外細胞毒性効果を測定した。９６ウエル（ｗｅｌｌ ）のマイクロタイター（ｍｉｃｒｏｔｉｔｒｅ）プレート中に移植したＤＭＥＭ 培地（ＦＣＳ　１０％と、グルタミン１％と、ゲンタマイシン０．２％とを含有 する）中に、ＬｏＶｏ細胞（ＥＣＡＣＣＮｏ、８７０６０１０１）を細胞２．５ ００個／ウェルの濃度で希釈し、５％ｃｏ２中で３７℃で１夜培養した。種々の 濃度の、プロドラッグ、対照としての対応する薬物、又はプロドラッグと酵素（ Ｉ　Ｕ　ＣＰＧ２活性／ウェル−１単位の酵素は３７℃でメトトレキセート１μ モル／分／ｍｌを加水分解するのに必要とされる量である）を前記細胞に加え、 培養時間１時間又は２４時間のいずれかの後に、細胞を洗浄し、新鮮な培地を加 え、次いで該細胞を５％ＣＯ□中で３７℃で培養した。化合物の添加後３日目に 、前記ウェルにＴＣＡを加え（最終濃度１６％）、次いでＳＲ８色素（Ｓｋｅｈ ａｎらの論文）を添加することにより、プレートに付着する細胞タンパク質の量 を検定した。５４０　ｎｍで光学密度を測定し、化合物を入れていない対照ウェ ル中の０ＤＳ４０のパーセントとして測定した。効果は細胞の生育を５０％阻止 するのに必要とされる濃度（ＩＣ，。）として表わした。プロドラッグ単独は一 般的に試験においてＣＰＧ２の存在下のプロトラッグに比べて低い活性を有する であろう（すなわち、ＣＰＧ２酵素はプロドラッグを薬物に活性化するのに必要 である）。化学的に合成した薬物（ＣＰＧ２活性化を必要としない）の直接添加 は検定において対照として働く。

前記の方法を使用して、本発明の代表的な供試化合物を評価し、且つ１時間後の ＣＰＧ２の不存在下の活性と比べてＣＰＧ２の存在下における活性が少な（とも １０倍大きい活性比を示すことが認められ、それによって本発明の化合物の実用 性を効果的であると証明し且つ確認した。　本発明の別の要旨によれば、プロド ラッグ成分として前記の式（Ｉ）で示される化合物の少なくとも１種又は該化合 物の生理学的に許容し得る塩を、製薬学的に許容し得る担体又は希釈剤と一緒に 含有してなる医薬組成物が提供される。該組成物は、すでに腫瘍に配置されてい る（ｌｏｃａｌｌｉｚｅｄ）　ＣＰＧ　（好ましくはＣＰＧ２）−腫瘍選択性抗 体の複合体と共に使用すべき有効量のプロドラッグを含有してなるのが都合かよ い。

本発明の別の要旨によれば、プロドラッグ成分として前記の式（Ｉ）で示される 化合物の少なくとも１種又は該化合物の生理学的に許容し得る塩を、製薬学的に 許容し得る担体又は希釈剤と一緒に含有してなる注射用の無菌医薬組成物が提供 される。該組成物は有効量のプロドラッグを含有してなるのが都合がよい。

本発明の別の要旨によれば、各々の成分を他方の成分と一緒に使用する２成分系 であって、 ｉ）所定の抗原を結合し得る抗体又はその断片であって、しかも前記の式（Ｉ） の化合物又はその生理学的に許容し得る塩を細胞毒性薬物に転化し得るＣＰＧ　 （好ましくはカルボキシペプチダーゼＧ２）酵素に複合されである該抗体又はそ の断片である第１の成分と、１１）前記ＣＰＧ（好ましくはカルボキシペプチダ ーゼＧ２）酵素の影響下で細胞毒性薬物に転化し得る前記の式（Ｉ）の化合物又 はその生理学的に許容し得る塩である第２の成分 とからなる２成分系が提供される。

前記の抗体又はその断片は腫瘍に関連した抗原と結合し得るものであるのが好ま しい。

腫瘍に関連した抗原と結合し得る具体的な抗体は、マウスのモノクロナール抗体 Ａ３Ｂ７である。抗体＾５Ｂ７はヒト癌胎児性抗原（ＣＥＡ）に結合し、しかも 結腸癌腫を標的とするのに特に適している。Ａ３Ｂ７は１６　Ｍａｎｏｒ　Ｃｏ ｕｒｔｙａｒｄ、　Ｈｕｇｈｅｎｄｅｎ　Ａｖｅｎｕｅ、　Ｈｉｇｈ　Ｗｙｃｏ ｍｂｅ、　Ｂｕｃｋｓ　ＨＰ１３５ＲＥ、　Ｅｎｇｌａｎｄ、　Ｌｌｎｉｔｅｄ 　Ｋｉｎｇｄｏｍ所在のＤＡＫＯＬｔｄ、社から入手し得る。抗体断片は完全（ ｗｈｏｌｅ）なＩｇＧ抗体から慣用の方法、例えばＭａｒｉａｎｉ　Ｍ、らの論 文、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、　２８．６９−７７（１９９ １）に記載のＦ（ａｂ’）２断片により調製し得る。一般的に、抗体（又は抗体 断片）−酵素の複合体は少なくとも２価であるべきである、すなわち少なくとも ２個の腫瘍関連抗原（これらは同一であってもよいし、異なっていてもよい）に 結合し得るものであるべきである。抗体分子は公知の方法により、例えば欧州特 許第２３９４００号明細書に記載の“ＣＤＲ移植（ｇｒａｆｔｉｎｇ）”によっ て又は米国特許第４８１６５６７号明細書に記載の人間の定常部上の完全な可変 部を移植することによって人間化（ｈｕｍａｎｉｚｅ）Ｌ、得る。人間化された 抗体は抗体（又は抗体断片）の免疫原性を下げるのに有効であり得る。抗体＾５ Ｂ７の人間化された変形（ｖｅｒｓｉｏｎ）は国際特許出願国際公開第１０９２ １０１０５９号明細書に記載されている。

モノクロナール抗体Ａ３Ｂ７を産生ずるハイブリドーマはＰｏｒｔｏｎＤｏｗｎ 、　５ａｌｉｓｂｕｒｙ、　Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ　ＳＦ３０ＪＧ、　Ｕｎｉｔｅ ｄ　Ｋｉｎｇｄｏｍ所在のＥｕｒｏｐｅａｎ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａ ｎｉｍａｌ　Ｃｅ１ｌ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ、　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ　ｏｆＢｉｏｌ ｏｇｉｃｓ、　ＰＨＬＳ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏ ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈに寄託しである。寄託臼は１９９３ 年７月１４日であり、寄託番号はＮｏ。

９３０７１４１１である。抗体Ａ３Ｂ７は、寄託したハイブリドーマから当該技 術において知られている標準的な技法例えばＦｅｎｇｅ　Ｃ，Ｆｒａｕｎｅ　Ｅ 　＆Ｓｃｈｕｅｇｅｒｌ　Ｋの著作″Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏ ｇｉｃａｌｓ　ｆｒｏｍ　ＡｎｉｍａｌＣｅｌｌｓ　ｉｎ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ”　 （Ｓｐｉｒｅ　ＲＥ、　Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ　ＪＲ＆　Ｍｅｉｇｎｉｅｒ　Ｂ編 ）、Ｂｕｔｔｅｒｖｏｒｔｈ−Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ発行、１９９１年、第２６２ −２６５頁及びＡｎｄｅｒｓｏｎＢＬ　＆　Ｇｒｕｅｎｂｅｒｇ　ｌ！Ｌの著作 、“Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａ ｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”　（Ｓｅａｖｅｒ　Ｓ編）　、Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅ ｋｋｅｒ発行、１９８７年、第１７５−１９５頁に記載された方法を使用して取 得し得る。細胞は抗体産生の良好な水準を維持するために、限定された期間で時 々再りローニングする必要があり得る。

ＡＤＥＰＴに有用な別の抗体は下記の文献に記載されている。抗体ＢＹ４３１／ ２６がＨａｉｓｍａ　Ｈ，Ｊ、らの論文、Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｉ ｍｍｕｎｏｔｈｅｒ、、３４゜３４３−３４８（１９９２）に記載されている。

抗体Ｌ６．９６．５及びＩＦ５が欧州特許第３０２．４７３号明細書に記載され ている。抗体１６．８８が国際特許出願第Ｗ０９０１０７９２９号明細書に記載 されている。抗体Ｂ７２．３が欧州特許第３９２、７４５号明細書に記載されて いる。抗体ＣＥＭ２３１が欧州特許第３８２、４１１号明細書に記載されている 。抗体ＨＭＦＧ−１と抗体ＨＭＦＧ−１１（Ｕｎｉｐａｔｈ　Ｌｔｄ、社（英国 ハンプシャー州Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ所在）製〕は乳脂球状膜上でムチン様糖 タンパク質と反応し、しかも乳癌及び卵巣癌を標的とするのに使用し得る。抗体 ＳＭ３　（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉ。

ｎａｌ　Ｌｔｄ、社（英国ロンドン所在）製〕はムチンのコアタンパク質と反応 し、しかも乳癌及び卵巣癌を標的とするのに使用し得る。抗体８５Ａ１２　（Ｕ ｎｉｐａｔｈ　Ｌｔｄ、社（英国ハンプシャー州Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ所在） 製〕及び抗体ＺＣＥＡＩ　（Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｌｐａ ｎｙ社（英国ＣｈｅｓｔｅｒＳ所在）製〕は腫瘍抗原ＣＥＡと反応する。抗体Ｐ Ｒ４ＤＩ　Ｃ３ｅｒｏｔｅｃ社（英国オックスフォード所在）製〕は結腸腫瘍関 連抗原と反応する。抗体Ｅ２９［ＤＡＫＯＬｔｄ９社（英国Ｈｉｇｈ　Ｗｙｃｏ ｍｂｅ所在）〕は上皮膜抗原と反応する。抗体Ｃ２４２はＣＡＮＡＧ　Ｄｉａｇ ｎｏｓｔｉｃｓ社（スウェーデン国Ｇｏｔｈｅｎｂｅｒｇ所在）から入手し得る 。

一般的に、ＡＤＥＰＴにおいて有用な抗体は、それらが認識する腫瘍細胞によっ てほとんど取り込まれない。このことは標的指向化された（ｔａｒｇｅｔｅｄ） プロドラッグ活性化性の酵素が細胞表面に存在することを可能にし、従って循環 するプロドラッグから腫瘍部位において活性薬物を生成させる。抗体のインター ナリゼーション（ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ）は公知の方法、例えばＪａ ｆｒｅｚｏｕらの論文、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ。

５２、１３５２（１９９２）及びＰｒｅｓｓらの論文、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅ ａｒｃｈ、　４８．２２４９（１９８８）に記載の方法によって検定し得る。

シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）　Ｒ３−１６からのＣＰＧ２の大規 模精製はＳｈｅｒｗｏｏｄらの論文、Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、１４ ８，４４７−４５３（１９８５）に記載されている。ＣＰＧ酵素に連結されるＦ （ａｂ’）２抗体及びＩｇＧ抗体の調製は公知の方法によって行い得、しかも例 えば国際特許国際公開第１０８９／１０１４０号明細書に記載されている。ＣＰ ＧはＰｏｒｔｏｎ　Ｄｏｗｎ、　５ａｌｉｓｂｕｒｙ。

Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ　ＳＦ３０ＪＧ、　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｋｉｎｇｄｏｍ所在のＣ ｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　ＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｒｅ ５ｅａｒｃｈから取得し得る。またＣＰＧは組換え技術によっても取得し得る。

ＣＰＧ２に関するヌクレオチドコード化配列は、［Ｃｈａｍｂｅｒｓ　Ｓ、Ｐ、 らの論文、＾ｐｐ１．　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、、２９ ，５７２Ａ、０．　ＭａｒｓｔｏｎによってＤＮＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ｖｏ、　 ｍ、　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　ＡｐｐｒｏａｃｈＳｅｒｉｅｓ、　ＩＲＬ　Ｐｒｅ ｓｓ発行（Ｄ　Ｍ　Ｇｌｏｖｅｒ編）、１９８７年、第５９〜８８頁に概説され ている。酵母中でのタンパク質の発現は、ｃ、　ＧｕｔｈｒｉｅとＧＲＦｉｎｋ によって編集されたＭｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　Ｖｏｌｕｍ ｅ　１９４゜Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ発行、１９９１年に概説されている ０ＣＰＧ酵素はＳｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ社（Ｆａｎｃｙ 　Ｒｏａｄ、Ｐｏｏｌｅ、　Ｄｏｒｓｅｔ。

Ｕ、　Ｋ、所在）から入手し得る。ＣＰＧ酵素は、Ｇｏｌｄｍａｎ　ＰとＬｅｖ ｙ　Ｃ，Ｃ，の論ボキシペプチダーゼＧ３酵素はＹａｓｕｄａ　Ｎらの論文、Ｂ ｉｏｓｃｉ、　Ｂｉｏｔｅｃｈ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　、　５６．１５３６−１５４０（１９９２）に記載されてい る。カルボキシペプチダーゼＧ２酵素は、欧州特許第１２１．３５２号明細書に 記載されている。

本発明の別の要旨によれば、第１の成分〔該第Ｊ、の成分は、所定の抗原を結合 し得る抗体又はその断片であってしかも前記の式（Ｉ）の化合物又はその生理学 的に許容し得る塩を細胞毒性薬物に転化し得るＣＰＧ酵素に複合されである抗体 又はその断片からなるものである〕を宿主に投与し、次いで第２の成分〔該第２ の成分は、ＣＰＧ酵素の影響下で細胞毒性化合物に転化し得る前記の式（Ｉ）の 化合物又はその生理学的に許容し得る塩からなるものである〕を宿主に投与する ことからなる、ある部位への細胞毒性薬物の配送方法が提供される。

細胞毒性薬物を配送する（ｄｅｌｉｖｅｒ）べき部位は、腫瘍細胞であって一般 的に腫瘍を有する哺乳類宿主例えば人に存在する腫瘍細胞であるのが好ましい。

前記第１の成分が腫瘍を有する宿主に投与されると、前記複合体の抗体又は抗体 断片部分は該複合体を腫瘍の部位に指向させ（ｄｉｒｅｃｔ）、該複合体を腫瘍 細胞に結合させる。

結合されない複合体が治療されるべき宿主から、例えば適当な時間の経過後に宿 主からの排泄によるか又は例えばＢｒ、　Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ、６１゜６５９− ６６２（１９９０）に記載のようにして加速排泄（ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ　ｃ ｌｅａｒａｎｃｅ）後に実質的に除去されると、前記第２の成分が宿主に投与さ れ得る。第２の成分を投与する前に、結合されていない複合体を宿主から実質的 に除去することが極めて望ましい。その理由は、さもなければ細胞毒性薬物が腫 瘍の部位以外の部位で生成され得、従って部位特異的毒性よりもむしろ宿主に対 して一般毒性をもたらすからである。

本発明の化合物は、組成物例えば経口投与用の錠剤、カプセル又はエリキシル、 直腸投与用の座薬、非経口投与又は筋肉内投与用の無菌溶液又は懸濁液などで使 用し得る。

本発明の化合物は、かかる治療を必要とする患者（動物又は人間）に対して最適 な薬効を提供するような投与量で投与できる。投与量は、病気の性質や苦しさく ５ｅｖｅｒｉｔｙ）、患者の体重、患者に伴う特殊な食事療法（ｄｉｅｔｓ）、 同時に行われる薬物治療（ｍｅｄｉｃａｔａｉｏｎ）、当業者によって認められ る他の因子に応じて患者、患者に合わせて変化させ得るが、投与量範囲は一般的 に１日当たり患者の体重ｋｇ当たりにつき約１ｍｇ〜１５０ｍｇであり、−回投 与又は頻回投与で投与できる。

投与量範囲は１日当たり患者の体重ｋｇ当たりにつき約１０ｍｇ〜７５ｍｇであ るのが好ましく、１日当たり患者の体重ｋｇ当たりにつき約１０ｍｇ〜４０ｍｇ であるのがさらに好ましい。

もちろん、これらの投与量範囲は分割された１日当たり投与量を可能にすること が必要な単位基準で調整でき、しかも前記のように病気の性質や苦しさ、患者の 体重、特殊な食事療法（ｄｉｅｔｓ）及び他の因子に応じて変化させ得る。

典型的には、これらの投与量は以下に記載の医薬組成物に製剤化できる。

前記の式（Ｉ）の化合物又はその混合物あるいはその生理学的に許容し得る塩の 約５０〜５００ｍｇを、生理学的に許容し得るビヒクル、担体、賦形剤、結合剤 、防腐剤、安定剤、風味剤などと共に、許容された製薬学的実施にふされしいよ うな単位投与体に調合される。

これらの組成物又は製剤中の活性物質の量は、前記に示された範囲内の適当な投 与量が得られるような量である。

錠剤、カプセルなどに配合できる補助剤の例は下記のもの：すなわち、結合剤例 えばトラガカントゴム、アラビアゴム、コーンスターチ、又はゼラチン：賦形剤 例えば微品質セルロース；崩壊剤例えばコーンスターチ、予備ゼラチン化スター チ、アルギン酸など；潤滑剤例えばステアリン酸マグネシウム；甘味剤例えばシ ョ糖、ラクトース又はサッカリン；風味剤例えばペパーミント、冬緑油又はチェ リー浦（ｏｉｌ　ｏｆ　ｃｈｅｒｒｙ）である。投与単位形がカプセルである場 合には、前記の種類の物質のほかに液状担体例えば脂肪油を含有し得る。別の種 々の物質を被覆剤として存在させ得るし、又は投与単位の物理的形態を別の状態 に変えるために存在させ得る。例えば、錠剤はシェラツク（ｓｈｅｌｌａｃ）、 砂糖あるいは両方で被覆し得る。シロップ又はエリキシルは、活性化合物、甘味 剤としてのショ糖、防腐剤としてのｐ−ヒドロキシ安息香酸のメチルエステル及 びプロピルエステル、色素あるいは風味剤例えばチェリーアレーンく−又はオレ ンジフレーバーを含有し得る。

前記のように、式（Ｉ）の化合物及びその生理学的に許容し得る塩、並びに前記 に挙げた複合体は慣用の投与方法、例えば以下の方法に限定されないが筋肉内投 与法、腹腔的投与法、経口投与法、リンパ管内投与法又は腫瘍中への直接投与法 を使用して投与し得る。

静脈内投与例えば静脈内注入が好ましい。

注射又は注入用の無菌組成物は、慣用の製薬方法に従って、ビヒクル例えば注射 用の水、天然産の植物油例えば胡麻油、ヤシ油、落花生油、綿実油など、あるい は合成脂肪性ビヒクル例えばオレイン酸エチルなどに活性化合物を溶解するか又 は懸濁させることによって製剤化し得る。緩衝液、防腐剤、酸化防止剤などを必 要に応じて配合できる。慣用の製薬方法に従って製剤化した好ましい注射又は注 入用無菌組成物は、ビヒクル例えば場合によっては塩、砂糖（特にデキストラン ）、緩衝剤及び／又は共溶剤〔特にポリエチェレングリコール、プロピレングリ コール又はジメチルイソソルビド（ｉｓ。

５ｏｒｂｉｄｅ）］を含有していてもよい水にプロドラッグを溶解することを包 含する。

本発明の一つの態様によれば、前記の式（Ｉ）で示される化合物は遊離酸の形態 で提供され、該遊離酸はその場合に患者に投与する直前に非経口投与用の形態に 製剤化され得る。従って、例えば、遊離酸の形態の前記の式（Ｉ）の化合物は緩 衝剤と混合され得、それによって投与する直前に生理学的に許容し得る塩に転化 される。

本発明の化合物の好ましい単位投与形態は、アンプル中の注射／注入可能な溶液 中に再構成用の無菌凍結乾燥体の式（Ｉ）の化合物又はその生理学的に許容し得 る塩を含有してなる。アンプルは前記化合物を５００　ｍｇ〜２ｇ（特に、Ｉｇ ）を含有する。

以下の実施例は前記の式（１）で示される化合物の製造及び該化合物の医薬組成 物中への配合を例証するものであるが、それ自体は本発明を限定するものではな い。実施例においては、特に明記しない限りは標準操作は下記の通りであった。

１）蒸発操作は全てロタリーエバポレターにより減圧下で（ｉｎｖａｃｃｕｏ） 行い、仕上げ（ｗｏｒｋ　ｕｐ）操作は残留固形物を濾過することによって除去 した後に行った。

１１）各操作は室温、すなわち１８〜２５℃の範囲内で、且つ不活性ガス例えば アルゴンの雰囲気下で行った。

１ｉｉ）カラムクロマトグラフィー（フラッシュ操作による）はＥ。

Ｍｅｒｋ社（西ドイツ国Ｄａｒｍｓｔａｄｔ所在）から入手したＭｅｒｋ　Ｋｉ ｅｓｅｌｇｅｌｓｉｌｉｃａ（＾ｒｔ、　９３８５）を用いて行った。

ｉｖ）収量、収率は単に例示のために示したものであり、必ずしも得られる最大 収量、収率を示したものではない。

■）前記の式（Ｉ）で示される最終生成物は十分に微量分析して、その構造はＮ ＭＲスペクトル法及び質量スペクトル法によって確認した。

ｖｉ）中間体は一般的に十分に特定しなかったが、その純度は薄層クロマトグラ フィー分析、赤外線（ＩＲ）分析又はＮＭＲ分析により測定した。

ｖｌｌ）融点は補正しておらず且つ油浴装置を使用して測定した。前記の式（１ ）で示される最終生成物の融点は、慣用の有機溶媒例えばエタノール、メタノー ル、アセトン、エーテル又はヘキサン単独又はこれらの混合物から再結晶した後 に測定した。

Ｎ−＋４−　［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェノキシカルボ ニル）−Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステル〔反応工程図１の化合物（２）参 照：ｌ　（６ｇ）を酢酸エチル（１００ｍｌ）に溶解した溶液を、３０％ノ々ラ ジウム担持炭素（０，６ｇ）上で２時間水素添加した。理論量の水素が吸収され てしまった際に、触媒を濾過し、濾液を蒸発乾固した。得られた残留物を熱エー テル（２５ｍｌ）に溶解し、濁るまでヘキサンを加えた。これを冷却して、Ｎ− （４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェノキシカルボニル）− Ｌ−グルタミン酸〔反応工程図１の化合物（３）参照〕を白色結晶質固体（３， ４ｇ）として得た。収率７９％、融点８７〜８９℃。間Ｒニア、０（ｄ）２Ｈ； 　６．６（ｄ）　２Ｈ；　６．２（ｄ）　ＩＨ；　４．４（ｍ）　ＩＨ；　３． ５−３．７（ｍ）　８Ｈ；２、　Ｏ−２，６（ｍ）４Ｈ元素分析値−子測値　Ｃ ＝４７．２．　Ｈ＝４．９５．　Ｎ＝６．８８実測値　Ｃ＝４７．５．　Ｈ＝５ ．１．　Ｎ＝６．７また、標記化合物はエーテルに溶解しない異なる多形体であ って融点１２８〜１３０℃をもつ多形体としても製造した。

出発原料であるＮ−（４−［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェ ノキシカルボニル）−Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステルは以下に記載のよう にして製造した。

クロルギ酸４−ニトロフェニルエステル（１，４３ｇ）をクロロホルム（１５ｍ ｌ）に溶解した溶液を、４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチニル）アミノコフ ェノール塩酸塩（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、、１７，８９３（１ ９６８））　（１，９３ｇ）、トリエチルアミン（２ｍｌ）及びクロロホルム（ ２０ｍｌ）の混合物に加えた。

周囲温度で２時間経過した後に、得られた混合物を蒸発乾固し、残留物をＭｅｒ ｋ社製のシリカゲル＾ｒｔ、　９３８５を用いてクロマトグラフィーにより分離 した。ヘキサン／酢酸エチルで溶出し、次いでベンゼン：石油エーテル（３・１ ）から再結晶すると、生成物として０−（４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチ ル）アミノコフェニル）−０°−（４−ニトロフェニル）カーボネート〔反応工 程図１の化合物（１）参照〕を融点６６〜６７℃の黄色固体（１，４ｇ）　（収 率５０％）として得た。

このようにして得られた生成物５．５ｇをクロロホルム（４０ｍｌ）に溶解した 溶液に、トリエチルアミン（３，８ｍ１）を加え、次いでＬ−グルタミン酸シヘ ンジルエステルトシレート（１３，７５ｇ）を加えた。混合物を撹拌し、６０℃ で４時間加熱し次いで蒸発乾固した。得られた残留物をシリカゲル（Ｍｅｒｋ　 Ａｒｔ　９３８５）を用い、３％酢酸エチル／クロロホルムで溶出してクロマト グラフィー分離して、必要とする出発原料Ｎ−（４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロ ロエチル）アミノコフェノキシカルボニル）−Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエス テル〔反応工程図１の化合物（２）参照〕６．２ｇ（収率７７％）を融点８５〜 ８７℃の白色固体として得た。

Ｎ−（４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェノキシカルボニル ）−Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステルの代わりにＮ−（４−［Ｎ、　Ｎ−ビ ス（２−クロロエチル）アミノコ−３−メチルフェノキシカルボニル）−Ｌ−グ ルタミン酸ジベンジルエステルを使用して実施例１に記載の方法を反復して、Ｎ −（４−［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３−メチルフェノキ シジカルボニル）−Ｌ−グルタミン酸を融点１６０〜１６２℃の白色固体として 得た。

ＮＭＲ：　７．３（ｄ）　２Ｈ；　６．７（ｄ）　２Ｈ；　６．０（ｄ）　ＩＨ ；　４．２（ｍ）　ＩＨ；　３．７（ｍ）　８Ｈ；２．３−２．０（ｍ）　４■ 元素分析値−予測値　Ｃ＝４７．３；　Ｈ＝５．２；　Ｎ＝１０．３；　Ｃ１＝ １７．５実測値　Ｃ＝４６．８．８＝５．２．　Ｎ＝１０．３．　ＣＩ＝１８． １出発原料として使用したＮ−（４−［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）ア ミノコ−３−メチルフェノキシカルボニル）−Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエス テルは、４−［Ｎ、Ｎ−［ビス（２−クロロエチニル）アミノコフェノールの代 わりに４−　［Ｎ、　Ｎ−［ビス（２−クロロエチニル）アミノコ−３−メチル −フェノールを使用して実施例例１に記載の方法と同様の方法で製造した。

上記の４−［Ｎ、Ｎ−［ビス（２−クロロエチニル）アミノコ−３−メチルフェ ノールは次のようにして得た（反応工程図２参照）。

（ａ）４−アミノ−ロークレゾール（１２，３ｇ）を酢酸／水（１：　ｌＸ５０ ０　ｍｌ）に溶解した溶液に、エチレンオキシド（４０ｇ）を吹き込んだ。混合 物を室温で４８時間保持し、次いで蒸発乾固した。得られた残留物をシリカゲル を用いて酢酸エチルで溶出してクロマトグラフィー分離して、４−［Ｎ、Ｎ−［ ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノコ−３−メチル−フェノールを油状物（６ ，２ｇ）として得た。

ＮＭＲ：　第２表参照。

（ｂ）　このようにして得られた生成物（６ｇ）、水酸化カリウム（１，６ｇ） 及びエタノール（４０ｍｌ）の混合物に臭化ベンジル（４，２４ｇ）を加えた。

得られた混合物を撹拌し、還流温度で２時間加熱し、冷却し次いで蒸発させるこ とにより濃縮した。得られた残留物を水（１００ｍｌ）に注ぎ、酢酸エチルで２ 回抽出し、乾燥し次いで蒸発させて２，２°−（４−ベンジルオキシ−２−トル イジノ）ジェタノールを融点７０〜７２℃の固体（７，２ｇ）として得た。

川：　第３表参照。

（Ｃ）　このようにして得られた生成物（７ｇ）にクロロホルム（５０ｍｌ）中 で１０〜２０℃で五塩化リン（１１，４ｇ）を少しずつ加えた。次いで、混合物 を還流温度で９０分間加熱し、冷却し次いで水に注加した。有機層を分離し、炭 酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、水洗し次いで蒸発乾固した。得られた残留物 をシリカゲルを用いてクロマトグラフィー分離した。ヘキサン／酢酸エチル（２ ：　１）で溶出した後に、４−ベンジルオキシ−３−メチル−Ｎ、Ｎ−ビス（２ −クロロエチル）アニリン（２，２ｇ）を油状物として得た。

ＮＭＲ：　第４表参照。

上記の反応の代わりに使用される別の反応は次の通りである。前記の工程（ｂ） で得た生成物（２，６ｇ）をピリジン（８ｍｌ）に溶解した溶液に０〜５℃でメ タンスルホニルクロリド（２，５＋ｎｌ）を加えた。次いで、混合物を７０℃で １５分間加熱し、冷却し次いで希クエン酸溶液（１００ｍｌ）に注加した。得ら れた混合物を酢酸エチルで２回抽出し、乾燥し次いて蒸発させて４−ベンジルオ キシ−３−メチル−Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アニリン２．６ｇ（収率 ８４％）を油状物として得た。

ＮＭＲ：　第４表参照。

（ｄ）　このようにして得られた生成物（２ｇ）にエタノール（２５ｍｌ）中で エーテル性ＨＣＩ（飽和）を完全な溶液が認められるまで加えた。３０％パラジ ウム担持炭素触媒３００　ｍｇを加え、水素雰囲気下で水素の適量が吸収される まで混合物を撹拌した。触媒を濾過することにより除去し、次いで濾液を蒸発さ せて４−［Ｎ、Ｎ−［ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３−メチルフェノー ル塩酸塩を融点１６４〜１６７℃の固体（９５０ｍｇ）Ｎ−（４−［Ｎ、Ｎ−ビ ス（２−クロロエチル）アミン］フェニルカルバモイル）−Ｌ−グルタミン酸塩 酸塩 Ｎ−（４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェニルカルバモイル ）−Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステル（４，４ｇ）を酢酸エチル（２０ｍｌ ）に溶解した溶液に、エーテル（１２０ｍｌ）に溶解した塩化水素の飽和溶液を 加えた。周囲温度で１時間後に、得られた混合物を蒸発させて固体を得た。この 固体をエーテルと共に磨砕して（ｔｒｉｔｕｒａｔｅ）　Ｎ−（４−ＥＮ、　Ｎ −ヒス（２−クロロエチル）アミノコフェニルカルバモイル）−Ｌ−グルタミン 酸塩酸塩（３，５ｇ）を融点１４８〜１５０℃の灰色固体として得た〔反応工程 図３参照〕。

ＮＭＲニア、２（ｄ）　２Ｈ；　６．７（ｄ）　２Ｈ；　４．２（ｍ）　ＩＨ； ３．７（ｍ）　８８；　２．４−１．８（ｍ）　４Ｈ元素分析値： 実測値　Ｃ＝４６．７．　Ｈ＝６．８．　Ｎ・７．０予測値　Ｃ＝４７．１．８ ・６．５５．Ｎ・７．５出発原料であるＮ−（４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロ エチル）アミノコフェニルカルバモイル）−Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステ ルは次のようにして得た。

ｐ−フルオロニトロベンゼン（１４，１ｇ）とジェタノールアミン（３０ｍｌ） の混合物を撹拌し、１３０℃で２時間加熱した。上記混合物を約６０℃まで冷却 し、４８％水酸化ナトリウム溶液１０ｍ１を含有する水１リットルに注加した。

１５℃まで冷却した後に、沈殿を濾取し、次いで乾燥して２，２°−（４−ニト ロアニリノ）ジェタノール（２０，７ｇ）　（収率９２％）を得た。融点１０２ 〜１０４℃。

このようにして得た生成物（２０ｇ）と、ジクロロメタン（２００ｍｌ）と、ピ リジン（７ｍｌ）との混合物に、冷却しながら塩化チオニル（３９ｍｌ）を加え た。塩化チオニルの添加後に、混合物を還流温度で１時間加熱した。冷却後に、 混合物をそれと等容量のジクロロメタンで希釈して、注意しながら２回水洗し、 乾燥し次いで蒸発させてＮ、　Ｎ−ヒス（２−クロロエチル）−４−ニトロアニ リンを融点８１〜８３℃の固体２１ｇとして得た。

再蒸留したテトラヒドロフラン（２０ｍｌ）にこのようにして得た生成物（０， ５３ｇ）を溶解した溶液に、３０％パラジウム担持炭素触媒（１００ｍｇ）を加 えた。混合物を水素の雰囲気下で２時間撹拌し、次いで触媒を濾過することによ り除去した。濾液を蒸発乾固し、得られた残留物をエーテル（２０ｍ　ｌ　）に 再溶解し、次いで塩化水素をエーテルに溶解した溶液を若干過剰になるまで加え た。生成した４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコアニリニウムク ロリドを固体として得、乾燥した。収量０．５ｇ、融点２３８〜２４０℃（分解 ）。

トリホスゲン（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）　２００ｍｇをクロロホルム（１０ｍｌ） に溶解した溶液に０〜５℃で、上記のようにして得た生成物（５３９ｍｇ）、次 いてトリエチルアミン（０，８３ｍ１）を加えた。室温で１５分経過した後に、 Ｌ−グルタミン酸ジｔｅｒｔ−ブチルエステル（０，３１ｇ）をクロロホルム（ ５ｍｌ）に溶解した溶液を加えた。得られた混合物を周囲温度で１８時間放置し 、水洗し、乾燥し次いで蒸発乾固した。得られた残留物をＭｅｒｋ社製のシリカ ゲルを用いて、ヘキサン−酢酸エチル（３：　１）で溶出してクロマトグラフィ ー分離し、所望の出発原料Ｎ−（４−［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）ア ミノコフェニルカルバモイル）−Ｌ−グルタミン酸ジｔｅｒｔ−ブチルエステル ０．４４ｇを油状物として得た〔反応工程図３参照〕。

ＮＭＲ：δ７．２ｄ及びδ６．６５（ｄｄ）　４Ｈ芳香族性δ４．１（ｍ）　Ｉ Ｈ δ３．６６（ｓ）　８Ｈ δ１、？−２，２（ｍ）　４１ ６１．３８（ｓ）　９Ｈ及びδ１．４２（ｓ）　９ＨＯＮ−（４−［Ｎ、　Ｎ− ビス（２−クロロエチル）アミノコフェニルカルバモイル１−Ｌ−グルタミン酸 の製造に関して実施例３に記載の方法と別の方法を以下に記載する。

出発原料であるＮ−（４−［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェ ニルカルバモイル）−Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステルを実施例３の対応す る工程と同様の方法で製造した。

Ｎ−（４−［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェニルカルバモイ ル）−Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステル（１，１３８ｇ）をＤＭＦ（１５の ｌ）に溶解した溶液を、１０％Ｐｄ／Ｃ上で１６時間水素添加した。濾過し、減 圧下で蒸発させた後に、得られた残留物をクロロホルム（２０ｍｌ）に溶解した 。１８時間後に、結晶質沈殿を濾取し、減圧下で乾燥してＮ−（４−［Ｎ。

Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェニルカルシくモイル）−Ｌ−グルタ ミン酸を得た。収量７３０ｍｇ（収率９３％）。アセトン／クロロホルムから再 結晶した後に、微細棒状物を形成した。融点１１６〜１１８℃。

ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＯＣＤ３）δ８．０（ｓ）　ＩＨ；　７．２（ｄ）　２Ｈ；　 ６．６（ｄ）　２８　ＮＨ；　４．４（ｍ）ＩＨ；３．６（ｍ）　８Ｈ；　２． ５−１．９（ｍ）　４ｔｌ。

実施例５ Ｎ−（４−［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３−フルオロフェ ニルカルバモイル）−Ｌ−グルタミン酸 Ｎ−（４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３−フルオロフェニ ルカルバモイル）−Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステル（０，４ｇ）を酢酸エ チル（１０ｍｌ）に溶解した溶液に３０％パラジウム担持炭素（５０％湿潤物） （１６０ｍｇ）を加え、混合物を水素雰囲気下で１時間撹拌した。触媒を濾過し た後に、濾液を蒸発乾固した。得られた油状残留物を酢酸エチル／ヘキサンと共 に磨砕した後に、Ｎ−（４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３ −フルオロフェニルカルバモイル）−Ｌ−グルタミン酸を白色粉末として得た（ ２１０ｍｇ、融点１１１〜１１４℃）。

出発原料であるＮ−（４〜［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３− フルオロフェニルカルバモイル）−Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステルは次の ようにして得た。

無水酢酸エチル（２００ｍｌ）及び炭酸カリウム（５，５ｇ）にＮ−（４−［Ｎ 、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３−フルオロアミリニウムオキサレ ート（ｏｘａｌａｔｅＸ３．５　ｇ）を懸濁させた懸濁液をアルゴン雰囲気下で ５℃に冷却した。この混合物に、ホスゲンのトルエン溶液（１，９Ｍ；５．５ｍ １）を加えた。添加後に、混合物を室温で１０分間撹拌し、濾過し次いで濾液を 硫酸マグネシウム上で乾燥した。得られた乾燥濾液を、グルタミン酸ジベンジル エステルｐ−トルエンスルホン酸塩（５ｇ）と、炭酸カリウム（２ｇ）と、酢酸 エチル（１００ｍｌ）との混合物に一度に加えた。トリエチニルアミン（２ｍｌ ）を加え、混合物を周囲温度で２０分間撹拌した。得られた混合物を濾過し、濾 液を蒸発乾固した。得られた残留物をシリカゲルを用いて、酢酸エチル／ヘキサ ン（１：　２）で溶出してクロマトグラフィー分離し、所望の前記出発原料を油 状物として得た。これは結晶化した。収量５．５ｇ、融点８１〜８４℃。

出発原料としてｐ−フルオロニトロベンゼンの代わりに３．４−ジフルオロニト ロベンゼンを使用して４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノコ− ３−フルオロニトロベンゼン融点９９〜１０１℃を得た以外は、実施例３に記載 のようにして４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３−フルオロ アミリニウムオキサレートを製造した。

このようにして得た生成物を実施例３に記載のようにして塩化チオニルで処理し て、４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３−フルオロニトロベ ンゼンを得た。融点６６〜６８℃。

このようにして得た生成物を、溶媒として酢酸エチルを使用して実施例３に記載 のようにして水素添加した。得られた混合物を濾過し、濾液を蒸発させて小容量 とし、次いでエーテルに再溶解した。

エーテルに溶解したシュウ酸の飽和溶液を過剰になるまで加え、所望の生成物４ −［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３−フルオロアミリニウムオ キサレートを採取した。融点１４６〜１４８℃。

実施例６ Ｎ−（４−［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３−クロロフェニ ルカルバモイル１−Ｌ−グルタミン酸 ３０％パラジウム担持炭素７０ｍｇ（５０％湿潤物）を含有する酢酸エチル（３ ０ｍｌ）にＮ−（４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３−クロ ロフェニルカルバモイル）−Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステル（３５０ｍｇ ）を溶解した溶液を、水素雰囲気下で１時間撹拌した。触媒を濾過した後に、濾 液を蒸発乾固し、得られた残留物を酢酸エチル／ヘキサンと共に磨砕して、Ｎ− （４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３−クロロフェニルカル バモイル）−Ｌ−グルタミン酸を油状物として得た。

ＮＭＲ：　８．７（ｓ）　１１（；　７．６（ｓ）　Ｉｔｌ；　７．１−７．４ （ｍ）　２Ｈ；　６．５（ｄ）　ＩＨ；　４．２（ｍ）ＩＨ；　３．３−３．６ （ｍ）　８８；　１．７−２．４（ｍ）　４Ｈ０出発原料であるＮ−（４−［Ｎ 、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３−クロロフェニルカルバモイル） −Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステルは、出発原料として４−フルオロニトロ ベンゼンの代わりに４−フルオロ−３−クロロニトロベンゼンを使用して４−［ Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノコ−３−クロロニトロベンゼンを 橙色油状物として得た以外は実施例３と同様の方法によって得た。ＮＭＲ：　８ ．　Ｏ−８，２（ｍ）　２８　；７．３（１）ＩＨ；　４．７（ｔ）　２）１； 　３．５（ｍ）　８Ｈ。

このようにして得た上記生成物を、実施例３に記載のようにして塩化チオニルで 処理して、４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３−夕ロロニト ロベンゼンを油状物として得た。ＮＭＲ（ＣＨＣｌｉ）：　８．３（ｄ）ＩＨ； 　８．１（ｑ）　ＩＨ；　７．２５（ｄ）　ｉＨ；　３．８（ｔ）　４Ｈ；　３ ．６　ｔ）　４Ｌこのようにして得た生成物を、溶媒として酢酸エチルを使用し て実施例３に記載のようにして水素添加した。触媒を濾過することにより除去し 、濾液を蒸発させて小容量にし、エーテルに再溶解し次いで飽和エーテル性シュ ウ酸を過剰になるまで加えた。濾過することによってシュウ酸塩を得た。融点１ １８〜１２１℃。

このようにして得た上記生成物を実施例５に記載のようにして、Ｎ−（４−［Ｎ 、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３−クロロフェニルカルバモイル） −Ｌ−グルタミン酸に転化させた。油状物が得られた。ＮＭＲニア、　１−７． ４（ｍ）　１３８　；　５．１（Ｓ）　２Ｈ；　５．０（ｓ）　２Ｈ；　４．６ （ｍ）　ＩＨ；　３．５（ｓ）　８Ｈ。

２．０−２．６（ｍ）　４Ｈ 実施例７ 本発明の化合物を含有する典型的な医薬組成物酸　分　カプセル当たりの量（ｍ ｇ） 化合物　１００ カプセル（サイズＮｏ、　１）　２５０化合物をＮｏ、　６０粉末に粉砕し、次 いで該粉末上にラクトースとステアリン酸マグネシウムとをＮｏ、　６０プロツ テイングクロス（ｂｌｏｔｔｉｎｇｃｌｏｔｈ）の中を通した。次いで、−緒に した成分を約１０分間混合物し、Ｎ０９１乾燥ゼラチンカプセルに充填した。

Ｂ：　級煎 典型的な錠剤は化合物（１００ｍｇ）、予備ゼラチン化デンプンＵＳＰ（８２ｍ ｇ）、微品質セルロース（８２ｍｇ）及びステアリン酸マグネシウム（１ｍｇ） を含有する。

Ｃ：　匡遍 直腸投与用の典型的な座薬製剤は化合物（５０ｍｇ）と、ジナトリウムカルシウ ムニブテート（ｅｄｅｔａｔｅ）　（０，２５〜０．５ｍｇ）と、ポリエチレン グリコール（７７５〜１６００ｍｇ）とを含有する。別の座薬製剤は、例え′ば ジナトリウムカルシウムニブテートをブチル化ヒドロキシトルエン加した植物油 （６７５〜１４００ｍｇ）例えば５ｕｐｐｏｃｉｒｅ　ＬＳＷｅｃｏｂｅｅ　Ｆ Ｓ。

Ｗｅｃｏｂｅｅ　Ｍ、　Ｗｉｔｅｐｓｏｌｓなどに置き換えることによって調製 した。

Ｄ：　注射剤 典型的な注射剤は化合物（５００ｍｇ）と、ベンジルアルコール（０，０５ｍ１ ）と、注射剤用の０．１５Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液（５，０ｍ１）とを含有 する。

実施例８（反応工程図４参照） Ｎ−（４−［Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ−（２−メシルオキシエチル）アミ ノコフェノキシカルボニル）−Ｌ−グルタミン酸Ｎ−（４−［Ｎ−（２−クロロ エチル）−Ｎ−（２−メシルオキシエチル）アミノコフェノキシカルボニル）− Ｌ−グルタミン酸ジ−ｔ−ブチルエステル（反応工程図４の化合物６、式中）Ｒ ’＝ＣＩ及ヒＲ”Ｏ３Ｏ２Ｍｅ）（１１０１１１ｇ）ヲトリフルオロ酢酸（ＴＦ Ａ）（２，２ｍ１）に懸濁させ、周囲温度で４０分間撹拌した。ＴＦＡを減圧下 で除去し、残った油状物を酢酸エチル（１ｍｌ）で希釈し、次いで蒸発させてＮ −（４−ＥＮ−（２−クロロエチル）−Ｎ−（２−メシルオキシエチル）アミノ コフェノキシカルボニル）−Ｌ−グルタミン酸−１、０２ＴＦＡ　−０，１６Ｅ ｔＯＡｃ（反応工程図４の化合物９、式中のＲ’＝Ｃ１及びＲ２＝Ｏ３Ｏ２Ｍｅ ）　９０ｍｇ　（収率９５％）を得た。

川：　−Ｃ−ＣＨ２−ＣＨ２−０ＳＯ２／−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＩ２、１５（ｓ ）　３Ｈ、３，７０（ｍ）　６Ｈ；その他　４．３０（ｔ）　ＩＨ；　４．４９ （ｔ）　ＩＨ；芳香族６．７５（ｄ）　２Ｈ；　６．９２（ｄ）　２［１；１． ８−２．３（ｍ）　４Ｈ；　４．０２（ｍ）　ＩＨ；　７．９０（ｄ）　ＩＨ出 発原料であるＮ−（４−［Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ−（２−メシルオキシ エチル）アミノコフェノキシカルボニル）−Ｌ−グルタミン酸ジ−ｔ−ブチルエ ステルは以下に記載のようにして製造した。

乾燥クロロホルム（３０ｍｌ）にＬ−グルタミン酸ジ−ｔ−ブチルエステル塩酸 塩（４，２６ｇ）とトリエチルアミン（４ｍｌ）とを溶解した溶液を、ギ酸４− ニトロフェニルエステル（２，９２ｇ、　Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手し得る）の 冷却溶液と共に５分間撹拌した。周囲温度で５時間後に、溶媒を蒸発させ、残留 物を酢酸エチル（７０ｍｌ）に溶解し、濾過し次いで蒸発乾固した。得られた残 留物をシリカゲルを用いて、クロロホルムで溶出してクロマトグラフィー分離し て、４−ニトロフェニルオキシカルボニル−し−グルタミン酸ジ−ｔ−ブチルエ ステル（反応工程図４の化合物２）を油状物として得た。収量５．０２ｇ（収率 ８２％）。

ＮＭＲ：　７．３３（ｄ）　２Ｈ；　８．２４（ｄ）　２Ｈ；　１．４６（ｓ） 　９Ｈ；　１．５０（ｓ）　９Ｈ；　２．０−２．４（ｍ）　４Ｈ；　４．３２ （ｍ）　ＩＨ；　５．９０（ｄ）　ＬＨ。

このようにして得られた生成物（反応工程図４の化合物２　）（５，０１ｇ）を 酢酸エチル（３０ｍｌ）に溶解した溶液を、１０％パラジウム担持炭素上で３日 間水素添加した。触媒を濾過した後に、得られた溶液を冷却し、エチレンオキシ ド（５ｍｌ）を加え、次いて周囲温度で２２時間放置した。溶媒を蒸発させ、残 留物を酢酸エチルと水の間で分配した。

有機層を分離し、水洗し、乾燥しく硫酸マグネシウムで）次いで蒸発乾固した。

得られた残留物をシリカゲルを用いて、酢酸エチル／クロロホルム（２：　１） で溶出してクロマトグラフィー分離して４−［ビス（２−ヒドロキシエチル）ア ミノコフェニルオキシカルボニル−Ｌ−グルタミン酸ジ−ｔ−ブチルエステル（ 反応工程図４の化合物４）３．９３ｇ（収率６９％）を得た。融点９１〜９３℃ 。

このようにして得た生成物（反応工程図４の化合物４　）　（０，８６ｇ）をピ リジン（３ｍｌ）に溶解した溶液を、メタンスルホニルクロリド（０，６ｍ１） と共に２℃で２０分間、次いて５０℃で１０分間撹拌した。得られた反応混合物 を酢酸エチルと水の間で分配した。有機層を分離し、水洗し、乾燥しく硫酸マグ ネシウムで）次いで蒸発乾固した。得られた残留物をシリカゲルを用いて、酢酸 エチル／ジクロロメタン（１：９）で溶出してクロマトグラフィー分離して４− ［（２−クロロエチル）（２−メシルオキシエチル）コアミノフェニルオキシカ ルボニル−Ｌ−グルタミン酸ジ−ｔ−ブチルエステル（反応工程図の化合物６） 　０．４４ｇ（収率４３％）を油状物として得た。

ＮＭＲ：　３．１５（ｓ）　３Ｈ；　３．７０（ｍ）６Ｈ；　４．２９（ｔ）　 ２Ｈ；　６．７５（ｄ）　２Ｈ；　６．９２（ｄ）２Ｈ；　１．４１（ｓ）　９ Ｈ；　１．４２（ｓ）　９８；　１．８−２．３（ｍ）　２Ｈ；　３．９７（ｍ ）　ＩＨ；　７．９２実施例２に従って以下の第２表〜第８表に記載の出発原料 及び中間体を使用して第１表に記載の下記の化合物を製造した。

すなわち、実施例２に記載の方法と同様の方法で実施例９〜１５の化合物を製造 した。すなわち、実施例１０の化合物は、工程（ａ）で使用した４−アミノ−ｍ −クレゾールを４−アミノ−３−イソプロピルフェノール［Ｇｌｉｍａｎ　Ｈら の論文、Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、、１９．１０６７−１０７８（１９５４） ）に置き換えることにより製造した。実施例１１の化合物は４−アミノ−ｍ−ク レゾールを４〜アミノ−２−メチルフェノール（Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手し得 る）に置き換えることにより製造し、実施例１２の化合物は４−アミノ−ローク レゾールを４−アミノ−３−フルオロフェノール（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈ ｅＣｈｅｍｉｃａｌ　５ｏｃｉｅｔｙ（１９６４）、ｐ４７３に従って製造した 〕に置き換えることにより製造した。実施例１３の化合物は４−アミノ−ｍ−ク レゾールを４−アミツナフタ−１−オール（Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ 　Ｃｏ、　、　Ｌｔｄ、社から入手し得る）に置き換えることにより製造し、且 つ実施例１４の化合物は４−アミノ−ｍ−クレゾールを４−アミノ−２−クロロ フェノールＤｏｕｒｎａｌｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ 　５ｏｃｉｅｔｙ、４５，２１９２（１９２３）に従って製造した〕に置き換え ることにより製造した。実施例１５の化合物は４−アミノ−ロークレゾールを４ −アミノ−３−クロロフェノール（Ｂｅｒｉｃｈｔｅ　：ｐ、　２０６５（１９ ３８）　；及びＯｒｇａｎｉｃ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ；　Ｃｏ１１ｅｃｔｅｄ　 Ｖｏｌ、　４．　ｐ、　１４８に従って製造した〕に置き換えることにより製造 した。

実施例９〜１５で用いた出発原料及び中間体並びにそれらの性質を以下の第２表 〜第８表に記載する。

第２表 Ｈｅ（Ｒ５ａ）　＋７６−９°（ＡｌｄｒｉｃｈＰｒ’　（Ｒ５ａ）　１７２− ５°Ｃ ８，８（ｓ）ＩＨＯＨ； ４．６（ｂｒ　５）２８　Ｎ）１２； １５９．５°Ｃ Ｍｅ　（Ｒ５ｂ）　１７４−６°（ＡｌｄｒｉｃｈＣｌ　（Ｒ５ｂ）　１４６− ８°Ｃ Ｄｚ。Ｒ３（Ｒ５”　、Ｒ５ｂ＝　２６０−２°Ｃ（Ａｌｄｒｉｃｈ社がら入手 しｔ：塩酸塩とＬＴ）Ｃ）Ｉ３） 枳パとＲ５１１は一緒１：？ｊｉｒ　□７３゜。（Ａｌｄｒｉｃｈ社７、ら入手 した塩酸塩とし−Ｃ）−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＩ（雰ＣＨ− を表わ（１） 第６表 Ｍｅ　（Ｒ５ｂ）　１２２−４ を表わ力　１８０−４ Ｃ１（Ｒ５ａ）　１１９−１２１ 実施例１６ Ｎ−＜４−　［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェノキシカルボ ニル１−Ｌ−グルタミン酸−γ−アニリドα−ベンジル４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２ −クロロエチル）アミノコフェノキシカルボニル−し一グルタミン酸−γ−アニ リド（２，０ｇ）を酢酸エチル（５０ｍｌ）に懸濁した懸濁液を、１０％パラジ ウム担持炭素（０，１５ｇ）上で４時間水素添加した。触媒を濾過することによ り除去し、濾液を３５℃で減圧下で蒸発乾固した。生成物すなわち４−［Ｎ、Ｎ −ビス（２−クロロエチル）アミノコフェノキシカルボニル−Ｌ−グルタミン酸 −γ−アニリド（反応工程図６の化合物ＩＨ，４ｇ’（収率８３％）を白色結晶 質固体として得た。融点１１０℃。

元素分析値−予測値％　Ｃ＝５４．８．　Ｈ＝５．２２．　Ｎ＝８．７１実測値 ％　Ｃ＝５４．５．　Ｈ＝５．６２．　Ｎ＝８．３１出発原料である前記のα− ベンジル４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェノキシカルボニ ル−Ｌ−グルタミン酸−γ−アニリドは下記のようにして製造した。

ジクロロメタン（３０ｍｌ）中のα−ベンジル−ｐ−１−シル−し〜グルタミン 酸−γ−アニリド（２，８ｇ）とＯ−（４−［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチ ル）アミノコフェニル）−０’−（４−ニトロフェニル）カーボネート（２，０ ｇ）の混合物に、トリエチルアミン（２ｍｌ）を加えた。混合物を室温で１６時 間撹拌し、次いで溶媒を減圧下で除去した。得られた残留物をシリカゲル（Ｍｅ ｒｋ　Ａｒｔ　９３８５）を用いて１０％酢酸エチル／クロロホルムで溶出して クロマトグラフィー分離して、α−ベンジル４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエ チル）アミノコフェノキシカルボニル−Ｌ−グルタミン酸−γ−アニリドを白色 固体として得た。収量１．９ｇ（収率６４％）。

出発原料である上記０−　（４−［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノ コフェニル）−０°−（４−ニトロフェニル）カーボネートは下記のようにして 製造した。

ジクロロメタン（１００ｌ！ｌｌ）中でギ酸４−ニトロフェニルエステル（７， ２５ｇ）と４−　［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェノール塩 酸ｍ（１０ｇ）との混合物に、トリエチルアミン（１０ｍｌ）をジクロロメタン （１０ｍｌ）に溶解した溶液を２時間にわたって加えた。室温で１６時間撹拌し た後に、溶媒を減圧下で除去し゛、得られた残留物をシリカゲル（Ｍｅｒｋ　Ａ ｒｔ　９３８５）を用いてクロマトグラフィー分離した。ジクロロメタンで溶出 し、得られた溶出液を蒸発させて生成物を赤色油状物として得た。ヘキサンで磨 砕して黄色固体を得、これをベンゼン／ヘキサンから再結晶して０−（４−［Ｎ 、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェニル）−０°−（４−二トロフェ ニル）カーボネートを橙色結晶として得た。収量１０．４ｇ（収率７１％）、融 点６８℃。

出発原料である上記のｐ−トシル−α−ベンジル−し−グルタミン酸−γ−アニ リドは下記のようにして製造した。

Ｎ−ｔ−ＢＯＣ−Ｌ−グルタミン酸α−ベンジルエステル（１０ｇ）とジシクロ へキシルカルボジイミド（６，１ｇ）とをジクロロメタン（１２０ｍｌ）に溶解 し、室温で１０分間撹拌した。アニリン（２，８ｍ１）を加え、混合物を室温で １６時間撹拌した。得られた混合物を濾過し、得られた沈殿をジクロロメタン（ ２ｘ１５ｍｌ）で洗浄した。得られた濾液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２ Ｘ１００ｍｌ）及び水（１００ｍｌ）で連続的に洗浄し、次いで蒸発させた。生 成した固体を酢酸エチル／ヘキサンから再結晶して無色板状結晶８．２ｇ（収率 ６７％）を得た。得られたγ−アニリド（１２，０ｇ）とｐ−トルエンスルホン 酸（５，４ｇ）とをベンゼン（３００ｍｌ）中で４０分間還流し、次いで１夜放 置して冷却した。生成した沈殿を濾過し、ポンプ吸引で乾燥し、次いで酢酸エチ ル／メタノールから再結晶してｐ−トシル−α−ベンジル−し−グルタミン酸− γ−アニリドの無色板状晶を得た。”８．２ｇ（収率５８％）。

実施例１フ ル１−Ｌ−グルタミン酸−γ−１−ブチルアミドカルボニル−し−グルタミン酸 −γ−アニリドに代えてα−ベンジル４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル） アミノコフェノキシカルボニル−Ｌ−グルタミン酸−γ−ｔ−ブチルアミド使用 して実施例１６に記載の方法を反復して、Ｎ−（４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロ ロエチル）アミノコフェノキシカルボニル）−Ｌ−グルタミン酸−γ−ｔ−ブチ ルアミド（反応工程図６の化合物２）を得、これを酢酸エチル／ヘキサンから再 結晶して無色結晶を得た。融点１２９℃。

元素分析値−予測値％　Ｃ＝５１．９．　Ｈ＝６，３２．　Ｎ＝９．０９実測値 ％　Ｃ＝５２．１．　）ｌ＝６．３３．　Ｎ＝８．９６前記α−ベンジル４−［ Ｎ、Ｎ−ビス（２−りＰロエチル）アミノコフェノタン（６ｍｌ）に溶解した溶 液を０℃に冷却し、トリフルオロ酢酸（１５ｍｌ）を加えた。次いで、この溶液 を０℃で３日間放置しておいた。

次いて、この溶液を蒸発乾固して４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミ ノコ−３−メチルフェニルカルバモイル−Ｌ−グルタミン酸を油状物として得た 。収量０．４９ｇＯ ＮＭＲ：　８．４６（ｓ）　１８；　７．１５（ｍ）　３８；　４．１８（ｍ） 　ＩＨ；　３．５５（ｍ）　４Ｈ；　３．３５（ｍ）４Ｈ；　２．３　（ｍ）　 ２８；　２．２３（ｓ）　３ｔｌ；　２．０（ｍ）　２ｇ０出発原料である前記 ４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３−メチルフェニルカルバ モイル−Ｌ−グルタミン酸ジｔ−ブチルエステルは下記のようにして製造した。

３−メチル−４−ニトロアニリン（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃ ｈｅｍｉｓｔｒｙ、３３゜３４９８（１９６８））　（７，６ｇ）を酢酸エチル （１５０ＩＩｌｌ）に溶解した溶液に、炭酸カリウム（２７，５ｇ）を加え、次 いでトルエンに溶解したホスゲンの１．９Ｍ溶液（２’７．５ｍ１）を３０℃以 下の温度に維持しながら滴下した。次いで、混合物を周囲温度で１時間撹拌した 。この混合物ｉこＬ−グルタミン酸ジｔ−ブチルエステル（１３ｇ）を加え次い で周囲温度で１夜撹拌した。

次いで、得られた溶液を濾過し、水洗し、有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥し 、蒸発して油状物を得た。次いで、これをシリカを用いてヘキサン：酢酸エチル が３：１の混合溶液で溶出してクロマトグラフィー分離し、３−メチル−４−ニ トロフェニルカルバモイル−し−グルタミン酸ジｔ−ブチルエステルを油状物と して得た。収量１１．１９ｇ（収率５１％）。ＮＭＲ：　９．１６（ｓ）　ＩＨ ；　８．０（ｄ）ｌＨ；　７．４３（ａ１５２Ｈ；６．７０（ｄ）１８；　４］ １（ｍ）　ＩＨ；’　２’、５１（ｓ）　３’Ｈ；　２．２５（ｍ）　２Ｈ；’ 　１．８（ｍ）　２Ｈ；　１．４１（ｄ）　８g０ ３−メチル−４−ニトロフェニルカルバモイル−し−グルタミン酸ジｔ−ブ。

チルエステル（４，７ｇ５を酢酸エチル（１２５ｍｌ）に溶解した溶液を３０％ ｐｄ７ｃ（０，５ｇ）上で水素添加した。次いで、得られた混合物をセライト発 させて暗黒色固体を得た。この固体を、シリカ上を酢酸エチル：メチル−４−ア ミノフェニルカルバモイル−し−グルタミン酸ジｔ“−ブチル土ステルを油状物 として得た。収量３．７１ｇ（収率８３％）。

ＮＭ’Ｒ：　７．’９８’（ｓ）　’ＩＨ；　６．９（ａｒ）　２Ｈ；　６．５ ２（ｄ）　１８；　６．１５（ｄ）’　１８；　４．５３（刀j ２Ｈ；　４．１５（ｍ）　ＩＨ；　２．２５（ｍ）　２Ｈ；　２．０４（ｓ）　 ３Ｅｌ；　１．８（ｍ）２Ｈ；　１．４５（ｄ）１８Ｈ０３−メチル−４−アミ ノフェニルカルバモイル−し−グルタミン酸ジｔ−ブチルエステル（５ｇ）を氷 酢酸（２５ｍｌ）と水（２５ｍｌ）とに溶解した溶液にエチレンオキシド（４， ８ｇ）を吹き込んだ。次いで、得られた溶液を周囲温度で２４時間撹拌した。蒸 発乾固した後に、残留物を酢酸エチルに再溶解し、水洗し、有機層を硫酸マグネ シウム上で乾燥し、次いで蒸発させて４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチ ル）アミノコ−３−メチルフェニルカルバモイル−し−グルタミン酸ジｔ−ブチ ルエステルを得、これをさらに精製することなしに使用した。ＮＭＲ：　８．３ ５（ｓ）　ＩＨ；　７．１（ｍ）３■；　６．３５（ｄ）　ＩＨ；　４．１５（ ｍ）　ＩＨ；　３．３５（ｍ）　４Ｈ；　３．０５（Ｉ＋＋）　４Ｈ；　２．２ ５（ｍ）　２Ｈ；　２．２０（ｓ）　３Ｈ；　１．８（ｍ）　２■；　１．４５ （ｄ）　１８Ｈ０４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノコ−３− メチルフェニルカルバモイル−Ｌ−グルタミン酸ジｔ−ブチルエステル（４ｇ） をピリジン（６０ｍｌ）に溶解した溶液に、アルゴン雰囲気下で３０℃以下に温 度を維持しながらメタンスルホニルクロリド（３，８ｍ１）を滴下した。添加後 に、上記溶液を８０℃で２時間撹拌した。得られた溶液を冷却し、１０％クエン 酸（５００ｍｌ）に注加し、酢酸エチルで抽出し、水洗し、有機層を硫酸マグネ シウム上で乾燥し、次いで蒸発させて褐色油状物を得た。この油状物を、シリカ ゲル上をヘキサン：酢酸エチル（５：　１）を使用して溶出してクロマトグラフ ィー分離し、４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−３−メチルフ ェニルカルバモイル−Ｌ−グルタミン酸ジｔ−ブチルエステルを油状物として得 た。収量７．２３ｇ、収率２８％。ＮＭＲ：　８．４２（ｓ）　ＩＨ；　７．１ （ｍ）　３Ｈ；　６．３６（ｄ）　１■；　４．１３（ｍ）　ＩＨ；３．５０（ ｍ）　４Ｈ；　３．３１（ｍ）　４８；　２．３（ｍ）　２Ｈ；　２．２３（ｓ ）　３１（；　１．９（ｍ）２Ｈ；１．４（ｓ）　９１（；　１．３５（ｓ）　 ９■０本実施例に関する反応工程を反応工程図７に示す。

実施例１９ Ｎ−（４−［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノベンジルカルボニルル ［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノ］ベンジルカルボニルーＬ−グルタ ミン酸ジｔ−ブチルエステル（０，５ｇ）をジクロロメタン（１，５ｍ１）に溶 解し、トリフルオロ酢酸（１，５ｍ１）を加えた。得られた溶液を周囲温度で２ 時間撹拌した。次いで、上記溶液を蒸発させて標記化合物を油状物（０，８ｇ） として得た。ＮＭＲ：　８．２２（ａ）　ＩＨ；　７．１０（ｄ）　２Ｈ；６． ６６（ｄ）　２０；　４．１９（ｍ）　ＩＨ；　３．６９（ｓ）　８ｔｌ；　２ ．２４（ｍ）　２Ｈ；　１．９（ｍ）２Ｈ；２．３２（ｓ）　２ｔ１０ 出発原料である前記４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコベンジル カルボニル−し一グルタミン酸ジｔ−ブチルエステルは以下に記載のようにして 製造した。

４−ニトロフェニル酢酸（５，４ｇ）をジメチルホルムアミド（７５ｍｌ）に溶 解した溶液に、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（４，０５ｇ）を加えた。

得られた混合物にＬ−グルタミン酸ジｔ−ブチルエステル（７，７７ｇ）、次い でジシクロへキシルカルボジイミド（６，２ｇ）を加えた。次いで、この混合物 を周囲温度で１８時間撹拌した。得られた混合物を濾過し、濾液を飽和炭酸水素 ナトリウム水溶液、水及び０．５Ｍ塩酸で洗浄し、次いで乾燥し、蒸発乾固した 。得られた残留物を、シリカゲルを用いてヘキサン／酢酸エチル（２：　１）で 溶出することによりクロマトグラフィー分離して、４−ニトロベンジルカルボニ ル−し−グルタミン酸ジｔ−ブチルエステル９．７ｇ（収率７７％）を油状物と して得た。

ＮＭＲ：　８．２（ｄ）　２Ｈ；　７．４５（ｄ）　２Ｈ；　６．４５（ｄ）　 １８；　４．４５（ｍ）　ＩＨ；　３．１５（ｄ）２Ｈ；　２．１（ｍ）　４Ｈ ；　１．４（ｄ）　９Ｈ；　１．３５（ｓ）　９Ｈ０４−ニトロベンジルカルボ ニル−Ｌ−グルタミン酸ジｔ−ブチルエステル（９，７ｇ）を酢酸エチル（２０ ０ｍｌ）に溶解した溶液を３０％Ｐｄ／Ｃ（９００ｍｇ）上で水素添加した。次 いで、得られた混合物をセライトを通して濾過して黄色油状物（４−アミノベン ジルカルボニル−し−グルタミン酸ジｔ−ブチルエステル）を得、これを精製す ることなしに使用した。

収量８．２ｇ、収率９０％。ＮＭＲ：　８．２３（ｄ）　ＩＨ；　６．９２（ｄ ）　２Ｈ；　６．５０（ｄ）　２１゜４．８６（ｓ）　２８；　４．１５（ｍ） 　１８；　３．２４（ｓ）　２Ｈ；　２．２２（ｍ）　２ｔｌ；　１．８（ｍ） 　２ｔｌ；１．４５（ｄ）　１８Ｈ０ ４−アミノベンジルカルボニル−し−グルタミン酸ジｔ−ブチルエステル（８， ２ｇ）を氷酢酸（４０ｍｌ）と水（４０ｍｌ）とに溶解した溶液にエチレンオキ シド（７，１ｇ）を加えた。次いで、得られた混合物を周囲温度で２４時間撹拌 した。得られた溶液を蒸発乾固し、エーテルに再溶解し、水洗し、有機層を硫酸 マグネシウム上で乾燥し、次いで蒸発させて油状物（４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２− ヒドロキシエチル）アミノコベンジルカルボニル−し一グルタミン酸ジｔ−ブチ ルエステル）　（６，３ｇ）を得、これをさらに精製することなしに使用した。

ＮＭＲ：　８．１６（ｄ）　ＩＨ；　７．０２（ｄ）　２Ｈ。

６．５８（ｄ）　１８；　４．１（ｍ）　ＩＨ；　３．４（ｍｌ）　８Ｈ；　３ ．２５（ｓ）　２８；　２．２５（ｍ）　２８　。

１．８（ｍ）　２Ｈ；　１．４（ｓ）　１８Ｈ。

４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノコベンジルカルボニル−し 一グルタミン酸ジｔ−ブチルエステル（２，８８ｇ）をピリジン（４５ｍｌ）に 溶解した溶液に、アルゴン雰囲気下で２５℃以下に温度を維持しながらメタンス ルホニルクロリド（２，９１ａ＋１）を滴下した。添加後に、上記溶液を８０℃ で１時間撹拌した。次いで、得られた溶液を冷却し、１０％クエン酸（５００ｍ ｌ）に注加し、エーテルで抽出し、水洗し、有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥 し、次いで蒸発させて褐色油状物を得た。

この油状物を、シリカゲルを用いてヘキサン：酢酸エチル（２：　１）で溶出し てクロマトグラフィー分離して、４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミ ノコベンジルカルボニル−し一グルタミン酸ジｔ−ブチルエステルを油状物とし て得た（１．３ｇ、収率４２％）。

ＮＭＲ：　８．１９（ｄ）　ＩＨ；　７．１０（ｄ）　２８；　６．６６（ｄ） 　２８；　４．１０（ｏ＋）　ＩＨ；　３．６９（ｓ）８Ｈ；　３．３２　（ｓ ）２Ｈ；　２．２１（ｍ）　２８；　１．９（ｍ）２Ｈ；　１．３７（ｄ）　１ ８Ｈｏ’収量１，３２、収率４２％。

本実施例に関する反応工程を反応工程図８に示す。

実施例２Ｏ Ｎ−（４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェニルカルバモイル ）−Ｌ−グルタミン酸 ４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェニルカルバモイル−し一 グルタミン酸ジｔ−ブチルエステル（実施例３に記載のようにして製造したもの ）　（５００ｍｇ）を９８％ギ酸（１０ｍｌ）に溶解した溶液を周囲温度で２４ 時間放置しておいた。得られた溶液を蒸発乾固し、残留物をＭｅｒｋ社製シリカ ゲルＡｒｔ　９３８５を用いてジクロロメタン／酢酸エチル／ギ酸（７：２：１ ）でクロマトグラフィー分離して標記化合物を油状物として得た。該油状物は結 晶化した。融点１１７〜１１９℃。

実施例２１ Ｎ−（４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−ブロモエチル）アミノコ−３−フルオロフェニ ルカルバモイル）−Ｌ−グルタミン酸 ４−　［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−ブロモエチル）アミノコ−３−フルオロフェニル カルバモイル−し−グルタミン酸ジベンジルエステル（０，５ｇ）を酢酸エチル （１０ｍｌ）に溶解した溶液に３０％Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）を加え、水素雰囲 気下で６時間撹拌した。触媒を濾過し、濾液を蒸発させて油状物として標記化合 物を得た。ＮＭＲ：　８．６（ｓ）　ｌｔｌ；　７．３５（ｄｄ）１８；　７． １−６．８（ｍ）　２１１；６．５（ｄ）　１８；　４．２（ｍ）　ＩＨ；　３ ．７−３．２（ｍｌ）　８Ｈ；　２．４−１．６（ＩＩ）　４８０この反応の出 発原料は、塩化チオニルの代わりに臭化チオニルを用いた以外は実施例５に記載 の方法と同様の方法で製造した。

第９表 ズ ２２　ＣＩ　Ｆ　１ｌｌ−１１４＠ｃ ２３ＣＩＣ１油状物 ２４　ＣＩ　ＣＮ　１０５−７’Ｃ 実施例２３の化合物のＮＭＲデータは次の通りである。６８．６（幅広）ＩＨ１ ６７，６（ｍ）　ＩＨ；δ７．２（ｍ）　２Ｈ，６４，２５（ｍ）　ｉｌｌ　； δ３．６−３．３（ｍ）　８Ｈ；６２．４−１．７　（ｍ）　４Ｈ０ 実施例２１〜２４の化合物の製造に使用した出発物質及び中間体並びにそれらの 物性を以下の第１０表〜第１３表に示す。

Ｃ１油状物 ＣＮ　１５１−４ −ＩＩＭＲｌ５１−４−ＩＩ　８．１５（ｄ）ＩＨ：　８．０５（ｑ）ｌ）ｌ； 　７．３（ｄ）ＩＨＨ４，６５（ｔ）２）１（Ｏｆ（）；　P５（ｍ）８Ｈ。

第１１表 ＣＩ　Ｆ　６６−８＠Ｃ ＣＩ　Ｃ１油状物★ ＣＩ　ＣＮ　１０６−９ Ｂｒ　Ｆ　６６−６８”Ｃ。

＊ＮＭＲ（ｃｏｃ１３）：　８３（ｄ　）　ＩＨ；　Ｅｌ　ｌ（ｑ　）　ｌ）ｌ 　；　７゜２５（ｄ）ＩＨＨ１，７５（ｃ）４Ｈ；　３．６iｃ１４Ｈ。

Ｂｒ　Ｆ　１３４−６’Ｃ 第１３表 ＣＩ　Ｃ１油状物１ ＣＩ　ＣＮ　ＩＩＩＩ状物＊責 Ｂｒ　Ｆ　油状物☆冑肴 ＊　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）＋　７．４（ｍ）ＩＨ；　７ｊ（ｍｌｌＯＨ；　７． １（ｍ１２Ｈ；　５．２（Ｓ）２Ｈ；　５．０５（５）２ＨG ４．６（ｍ）ＩＨ；　１５−：１．４（ｍ）８Ｈ；　２．６−２．０（ｍ）４１ （、−、ＮＭＲ：　７．４−６．８（ｍ）１３Ｈ；　５．７（ｄｌｌＨ１５，２ （Ｓ）２Ｈ；　５．１（５）２Ｈ；　４．６（ｍ）ＩＩ（；以下に記載のように した以外は実施例１に記載の方法と同様の方法で次の化合物を製造した。

！囲者 Ｈ２ 実施例２５〜３２の化合物のそれぞれのＮＭＲデータを以下の表に示す。

実施例２５の化合物は、水素添加反応においてα−ベンジル−４−［Ｎ、Ｎ−ビ ス（２−クロロエチル）−アミノコフェノキシカルボニル−し−グルタミンを使 用した以外は実施例１に記載のようにして製造した。その製造について以下に記 載する。水素添加反応においては、前記α−ベンジル化合物を可溶化するのを促 進するために酢酸エチルにテトラヒドロフランを加えた。

実施例２６及び２７の化合物は、実施例１に記載のようにして中間体α−ベンジ ル４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェノキシカルボニル−Ｌ −メシルグルタミン及びα−ベンジル４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル） アミノコフェノキシカルボニル−Ｌ−（３−メチルフェニル）グルタミンそれぞ れを水素添加することにより製造した。

実施例２８の化合物は、実施例１に記載のようにして４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２− クロロエチル）アミノコフェノキシカルボニル−γ−（５−テトラゾリル）−α −アミノ−し−酪酸ベンジルエステルを水素添加することにより製造した。また 、実施例２８の化合物はすぐ後に記載するような第２の方法によっても製造した 。Ｏ−（４−［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェニル）−０− （４−ニトロフェニル）−カーボネートとの反応において、し−グルタミン酸ジ ベンジルエステルの代わりに（ｓ）−２−アミノ−４−（ＩＨ−１，２，３，４ −テトラゾール−５−イル）酪酸ＣＺ、　Ｇｒｚｏｎｋａらの論文、Ｔｅｔｒａ ｈｅｄｒｏｎ、　３３．２２９９−２３０２（１９７７））を使用した以外は実 施例１に記載の方法と同様の方法を実施した。反応は乾燥ＤＭＦ中で２当量のト リエチルアミンを用いて２５℃で２０時間行った。蒸発乾固した後に、得られた 残留物を酢酸エチルに溶解し、希クエン酸で洗浄し、乾燥し次いて蒸発乾固した 。得られた生成物は酢酸エチルから徐々に結晶化した。得られた残留物を酢酸エ チルから再結晶して実施例２８の化合物（融点１７３〜１７５°Ｃ）を得た。

実施例２９の化合物は、実施例２８の第１の製造法について記載の方法と同様の 方法によって製造したが４−　［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ フェノキシカルボニル−γ−（５−テトラゾリル）−α−アミノ−Ｌ−酪酸ベン ジルエステルの代わりに１−（４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノ コフェノキシカルボニルアミノ）−１−ベンジルオキシカルボニル−２−（５− チオテトラゾール）エタンを使用した。同様の反応操作によりゴム状物を得、こ れをカラムクロマトグラフィーによりシリカ上を４％ギ酸／酢酸エチル（容量） で溶出することにより精製、　した。

また、実施例２９の化合物はすぐ後に記載するような第２の方法によっても製造 した。

１−アミノ−１−カルボキシ−２−（５−チオテトラゾール）エタン（６００ｍ ｇ。

２、８９ｍＭ）を乾燥ＤＭＦ（４８ｍｌ）に懸濁し、トリエチニルアミン（０， ８０６ｍ１゜５７８ｍＭ）を加え、得られた懸濁液を撹拌した。０−（４−［Ｎ 、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェニル）−０°−（４−ニトロフェ ニル）カーボネート（１，１０ｇ、　２．８９ｍＭ）を固体として一度に加え、 得られた溶液を室温で２０時間撹拌した。ＤＭＦを減圧下で除去した。得られた 残留物を酢酸エチルと希クエン酸に溶解した。酢酸エチル層を水洗し、硫酸ナト リウムで乾燥し、濾過し次いで蒸発させた。得られた粗生成物をシリカを用いて ４％ギ酸／酢酸エチルで溶出してカラムクロマトグラフィー分離して、４−［Ｎ 、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェノキシカルボニル−１−カルボキ シ−２−（５−チオテトラゾール）エタンをガラス状固体（０，９６３ｇ）とし て得た。ＮＭＲ（ＤＭＳＯ６）　：　３．４６（ｄｄ、　１ｌｌ）　；３、６９ （ｓ、　８Ｈ）　；　３．８（ｄｄ、　ＬＨ）　；　４．３８（ｍ、　ＬＨ）　 ；　６．７２（ｄ、　２Ｈ）　；　６．９３（ｄ、@２Ｈ）　； ８、１２（ｄ、　１ｔｌ）。

実施例３０及び３１の化合物は、実施例１に記載のようにして、α−ベンジル４ −［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェノキシカルボニル−γ−［ ３−（ヘンシルオキシカルボニルメチル）−フェニル］−Ｌ−グルタミン及びα −ペンシル４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェノキシカルボ ニル−γ−［３−（５−テトラゾリル）−フェニル］−Ｌ−グルタミンそれぞれ を水素添加することにより製造した。

実施例３２の化合物は実施例１に記載のようにして、α−ベンジル４−［Ｎ、Ｎ −ビス（２−クロロエチル）アミノコフェノキシカルボニル−γ−［３−（ベン ジルオキシカルボニルアミノ）フェニル］−Ｌ−グルタミンを水素添加すること により製造した。

実施例２５〜３２の化合物の製造に使用される中間体実施例２５の化合物の製造 に使用するα−ベンジル４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−アミノコフ ェノキシカルボニル−し一グルタミンは、Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステル トシレートをα−ベンジル−し−グルタミン［Ｌ、　Ｚｅｒｖａｓらの論文、Ｊ 、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、８７（１）、９９−１０４（１９６５）’ ｌに置き換えた以外は実施例１に記載のようにして、０−（４−［Ｎ、Ｎ−ビス （２−クロロエチル）アミノコ−フェニル）−〇“−（４−ニトロフェニル）カ ーボネートから製造した。得られた生成物はシリカを用いてフラッシュカラムク ロマトグラフィーにより精製した。溶出は８０％ＥｔＯＡｃ／２０％ヘキサンを 用いて行った。エーテルと共に磨砕した後に、生成物を白色固体として得た。

実施例２６の化合物の製造に使用するα−ベンジル４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−ク ロロエチル）アミノコフェノキシカルボニル−γ−メシルーし一グルタミンは次 のようにして製造した。

乾燥ジクロロメタン５０ｍ１中のＮ−Ｂｏｃ−Ｌ−グルタミン酸α−ベンジルエ ステル［：Ｅ、　Ｋｌｉｅｇｅｒらの論文、＾ｎｎ、６７３，１９６−２０７（ １９６４））　（１０ｇ）を、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）　（３，９ ｇ）及びジシクロへキシルカルボジイミド（６，７３ｇ）で処理した。次いで、 この反応フラスコにメタンスルホンアミド（３，０４ｇ）を導入し、反応を２５ ℃で２０時間続けた。

ジクロロメタンを蒸発させ、残留物を酢酸エチルに再溶解した。次いて、酢酸エ チル溶液を０．２５Ｍクエン酸で洗浄し、その後に水洗し次いて硫酸マグネシウ ム（無水）上で乾燥した。酢酸エチルを蒸発させて残留物を得、これをフラッシ ュカラムクロマトグラフィーを使用して、シリカ上で溶出液として塩化メチレン 、次いで５％メタノール／塩化メチレン、次いで１０％メタノール／塩化メチレ ンを使用して精製し、次のＢｏａ−保護したアシルスルポンアミドを得た。

ｏ２Ｂｚ ｔＢｏｃ−ＮＨ−ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃｏ−ＮＨ３Ｏ２Ｍｅ（Ｌ） ＮＭＲ：６１．３７（ｓ）　９Ｈ；　１．９８（ｍ）　２Ｈ；　２．３４（ｔ） 　２Ｈ；　５．１１（ｄ）　２Ｈ；　７．２６（ｄ）ＩＨ；　７．３６（ｓ）　 ５Ｈ；　１１．６４（ｓ）　ＩＨ０得られたＢｏｃ−保護したアシルスルホンア ミド３．６ｇを酢酸エチル５００１１に懸濁し、次いで８当量のＨＣＩを飽和さ せた酢酸エチル（３，１Ｍ溶液２２．４ｍ１）を加えた。上記の出発原料スルポ ンアミドが溶液になった。反応をアルゴン雰囲気下に２５℃で２０時間続けた。

次の式：で示されるα−ベンジルγ−メシルーＬ−グルタミン・塩酸塩が白色固 体として生成し、これを濾取し、無水エーテルで洗浄した後にデシケータ−中で 乾燥した。ＮＭＲ：６２．０８（ｍ）　２Ｈ；　２．５２（ｍ）　２８　；　３ ．２０（ｓ）３Ｈ；　４．０９（ｔ）　ＩＨ；　５．１５−５．３５（ｄｄ）　 ２Ｈ；　７．３９−７．５０（ｍ）　５Ｈ；約９（幅広）Ｈ０ Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステルトシレートを上記α−ベンジルγ−メシル −し一グルタミン塩酸塩に置き換えた以外は実施例１に記載のようにして、０− （４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−フェニル）−０’−（４ −二トロフェニル）カーボネートがらα−ベンジル４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−ク ロロエチル）アミノコフェノキシカルボニル−Ｌ−メシルグルタミンを製造した 。得られた反応生成物をカラムクロマトグラフィーによりシリカ上を１０％ギ酸 の酢酸エチル溶液（容量％）で溶出することにより精製した。

実施例２７の化合物の製造に使用するα−ベンジル４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−ク ロロエチル）−アミノコフェノキシカルボニル−γ−（３−メチルフェニル）− Ｌ−グルタミンは、次のようにして製造した。

Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステルをＬ−グルタミン酸α−ベンジルエステル （Ｃ，Ｃｏｕｔｓｏｇｅｏｒｇｏｐｏｕｌｓらの論文、Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ 、　Ｓｏｃ、。

８３、１８８５（１９６１）参照〕に置き換えた以外は実施例１に記載のように して０−（４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコ−フェニル）−０ °−（４−ニトロフェニル）カーボネートからα−ベンジル４−［Ｎ、Ｎ−ビス （２−クロロエチル）−アミノコフェノキシカルボニル−γ−（３−メチルフェ ニル）−Ｌ−グルタミン製造した。また、反応は乾燥ＤＭＦ中で２５℃で２時間 行った。得られた生成物を酢酸エチル／ヘキサンの混合物をそれぞれ７０／３０ の割合から酢酸エチル１００％までの範囲で使用してカラムクロマトグラフィー （シリカ、Ｍｅｒｋ　ａｒｔ　９３８６）により精製した。得られた生成物のＮ ＭＲデータを第１７表に示す。

４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェノキシカルボニル−し− グルタミン酸α−ベンジルエステル（３００ｍｇ）を乾燥テトラヒドロフラン（ ５ｍｌ）中で１．１当量のトリエチニルアミンで処理した。乾燥テトラヒドロフ ラン（１０ｍｌ）に溶解したギ酸イソブチル（０，０８１１１１，ｌ、１当世） を反応混合物に一２５°Ｃて徐々に加えた。１５分後に、乾燥テトラヒドロフラ ン（５ｍｌ）に溶解したｍ−トルイジン１．１当量（０，０８ｍ１）を加えた。

得られた混合物を２５℃に加熱し、次いで１８時間継続的に撹拌した。次いて、 得られた反応混合物を濾過し、濾液を蒸発させて残留物を得、これをフラッシュ カラムクロマトグラフィーにより酢酸エチル／ヘキサンを溶出液として使用して 精製した。適切な画分を蒸発させて、α−ヘンンル４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−ク ロロエチル）アミノコフェノキシカルボニル−γ−（３−メチルフェニル）−Ｌ −グルタミンを白色結晶質固体として得た。この生成物から得られたＮＭＲデー タを第１７表に示す。

実施例２９の化合物の製造に使用する１−（４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエ チル）アミノコフェノキシカルボニルアミノ）−１−ベンジルオキシカルボニル −２−（５−チオテトラゾール）−エタンは、次のようにして製造した。

β−クロロアラニン（１８，５０ｇ、　１１５．６ミリモル）（Ｓｉｇｍａ　Ｃ ｈｅｍｉｃａｌＣｏ。

社製）と、５−チオテトラゾール（１１，７９ｇ、　１１５．６ミリモル、欧州 特許公告第３３９６５号明細書に記載のようにして製造したもの）とを２Ｍ水酸 化ナトリウム溶液２３０　ｍｌに撹拌しながら加えることによって、１−アミノ −１−カルボキシ−２−（５−チオテトラゾール）−エタンを製造した。次いで 、反応混合物を室温から９０℃まで１．５時間加熱した。次いて、反応混合物を 室温まで放置冷却し、さらに氷／メタノール浴で冷却することにより冷却し、反 応混合物を濃塩酸でｐＨ４，０まで酸性化し、撹拌を０．５時間続けた。生成し た沈殿物を濾取し、冷水で洗浄し、次いでエーテルで洗浄し、濾過し、吸引乾燥 して６．９ｇを得た。母液のｐＨを再チェックし、約５．５まで上昇しているこ とを認めた。上記の操作を反復し、さらに生成物２．３ｇを得た。これを高真空 下で乾燥した。

ＮＭＲδ３．３０−３．５０ｐｐｍ　（ｍ）　２Ｈ；　４．１６−４．２２ｐｐ ｍ　（ｑ）　ＩＨ；　７．４７ｐｐｍ（幅広）ＮＨ２と交換するＯ２０゜ 元素分析値−予測値Ｃ＝２３．２．　Ｈ・４．４．　Ｎ＝３３．８　（＋　Ｏ２ ０１モル）実測値Ｃ＝２３．１；　ＥＩ＝４．４；　Ｎ＝３３．７　（Ｏ２０９ ，６％）Ｌ−グルタミン酸ジベンジルエステルをγ＝（５−チオテトラゾリル） −α−ベンジルオキシカルボニル−アミノ−Ｌ−酪酸（Ｚ　Ｇｒｏｎｋａらの論 文、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ、　３３．２３９９−２４０２（ １９７７））に置き換えた以外はＯ−（４−ｇＮ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル ）アミノコ−フェニル）−０°−（４−ニトロフェニル）カーボネートから実施 例１に記載のようにして、１−（４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−ア ミノコフェノキシカルボニルアミノ）＝１−ベンジルオキシカルボニル−２−（ ５−チオテトラゾール）−エタンを製造した。乾燥ジメチルホルムアミドを溶媒 として使用し、反応を２５℃で行った。反応混合物を２時間後に処理し、得られ た生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによりシリカ上を酢酸エチル中 の２％ギ酸／塩化メチレン（容量比で３＝１）から調製した混合物で溶出するこ とにより精製した。この生成物のＮＭＲデータを第１６表に示す。

実施例２７の化合物の製造に使用するα−ベンジル４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−ク ロロエチル）アミノコフェノキシカルボニル−γ−［３−（ベンジルオキシカル ボニルメチル）フェニル］−Ｌ−グルタミンは、次のようにして製造した。

３−アミノフェニル酢酸（１０ｇ）とｐ−トルエンスルホン酸−水和物（１３， ２ｇ）とを、トルエン（３０ｍｌ）中のベンジルアルコール（２７，２ｍ１）に 加えることによって、３−アミノフェニル酢酸ベンジルエステル・ｐ−トルエン スルホン酸塩を製造した。混合物を還流下で加熱し、生成した水をディーン・ス ターク（Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋ）受器中に集めた。水を全て蒸留した後に、混合 物を２５℃まで放置冷却し、その後に酢酸エチルで希釈し、水浴中に１時装置い た。結晶質ｐ−１−ルエンスルホン酸塩を濾取し、デシケーターン中で乾燥した （２３．５ｇ）。ＮＭＲ：δ２．３１（ｓ）３Ｈ；　３．８２（ｓ）　２Ｈ；　 ５．１１（ｓ）　２Ｈ；　７．１１（ｄ）　２Ｈ；　７．２５−７．４５（ｍ） 　８Ｈ；７．５２（ｄ）　２Ｌ α−ベンジル４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェノキシカル ボニル−γ−［３−（ベンジルオキシカルボニルメチル）フェニルコーム−グル タミンは、ｍ−）ルイジンを３−アミノフェニル酢酸ベンジルエステルに置き換 えた以外は実施例２７に記載のようにして製造した。

実施例３１で使用するα−ベンジル４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）ア ミノコフェノキシカルボニル−γ−［３−（５−テトラゾリル）フェニルコーし 一グルタミンは、ｏ−トルイジンを３−（テトラゾール−５−イル）アニリンに 置き換えた以外は実施例２７に記載のようにして製造した。出発原料として必要 する３−（テトラゾール−５−イル）アニリンは次のようにして製造した。エタ ノール（２，５リツトル）に５−（３−ニトロフェニル）テトラゾール［Ｆｉｎ ｎｅｇａｎ　Ｔ、Ｇ、　Ｈｅｎｒｙ　Ｒ，Ａ、及びＬｏｌｑｕｉｓｔ　Ｒの論文 、Ｊ、　Ａ、　Ｃ，Ｓ、　、靭、３９０８（１９５８））　（５２ｇ）を溶解し た溶液に１０％パラジウム担持炭素（５ｇ）を加え、混合物を水素の雰囲気下で １６時間撹拌した。触媒を濾過して除去し、得られた濾液を蒸発させて所望の出 発原料（４０，５ｇ　；融点１８８〜１８９°Ｃ）を得た。

実施例３２で使用するα−ベンジル４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）ア ミノコフェノキシカルボニル−γ−［３−（ベンジルオキシカルボニルアミノ） フェニル］−Ｌ−グルタミンは、ｍ−トルイジンを３−（ベンジルオキシカルボ ニルアミノ）アニリンに置き換えた以外は実施例２７に記載のようにして製造し た。

践Ｌ ＣＩＣＨ２ＣＨ２Ｎ：　３．６８　（ｍ）　８Ｈ芳香族：　６．６８−７．７４ 　（ｍ）　ＬＨ八へｃＩ（２０：　５．１２（ｓ）　２Ｈ；　５．１４　（ｓ） 　２ＢａＣＨ：　４．１８（ｍ）　ＬＨ− その他：　１．９２−２．１５（ｍ）　２Ｈ；　２．４５（ｍ）　２Ｈ；　８． １２（ｄ）　ＩＨ；　９．７（ｓ）　ＩＨ；９．９（ｓ）　ＩＨｏ 実施例３２の製造において中間体として使用する３−（ベンジルオキシカルボニ ルアミノ）アニリンは次のようにして製造した。ｍ−フ二二レンジアミン（１０ ｇ）を酢酸エチル（２００ｍｌ）に溶解した溶液の冷却溶液（０℃）に炭酸水素 カリウム溶液（水３００ｍ１に９ｇ溶解したもの）を撹拌しながら加えた。酢酸 エチル（１００ｍｌ）に溶解したクロルギ酸ベンジル（１３，２ｍ１）を１０分 間にわたって滴下し、０℃で１時間撹拌し、次いでＩＩ　１（ＣＩ　（水溶液） を加えて酸性（ｐＨ２）にした。生成物を酢酸エチル（２５０ｍｌ）中に抽出し 、食塩水で洗浄し、硫酸゛マグネシウム上で乾燥し次いで減圧留去して油状物を 得た。油状物をＭｅｒｋ社製シリカゲル人ｒｔ　９３８５上でヘキサン／酢酸エ チル（７：３）で溶出してクロマトグラフィー分離し、所望の中間体を低融点を もつ固体として得た（収率３５％）。

ＮＭＲ：　９．３２（ｓ）　ＩＨ；　７．３０（ｍ）　５Ｈ；　６．８０（ｔ） 　ＩＨ；　６．７０（ｍ）　ＩＨ；　６．５０（ｍ）ＩＨ；　６．１２（ロ）　 Ｉｌｌ；　５．０（ｓ）　２Ｈ；　４．８８（ｓ）　２Ｈ０実施例３３ Ｎ−（４−［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−ヨードエチル）アミノコフェノキシカルボニ ル）−Ｌ−グルタミン酸 ４−　［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−ヨードエチル）アミノコフェノキシカルボニル− Ｌ−グルタミン酸ジ−ｔ−ブチルエステル（１８８ｍｇ）　（反応工程図９の化 合物１４参照）をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）　（４ｍｌ）に懸濁し、周囲温度 で３０分間撹拌した。ＴＦＡを減圧下で除去し、残った油状物を酢酸エチル（３ ｍｌ）で希釈し、次いで蒸発させて４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヨードエチル）ア ミノコフェノキシカルボニル−し一グルタミン酸−１，４ＴＦ＾−０，８ＥｔＯ Ａｃ（反応工程図９の化合物１５）　（１６２ｍｇ）を得た。収率８２％。

ＮＭＲ：　１．８４−２．０１（ｍ）　ＩＨ；　２．３６（ｍ）　２Ｈ；　３． ３１（ｔ）　４Ｈ；　３．７２（ｔ）　４Ｈ；４．０２（ｍ）ＩＨ；　６．６６ （ｄ）　２Ｈ；　６．９４（ｄ）　２Ｈ；　７．９２（ｄ）　ＩＨ０中間体とし て使用した４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヨードエチル）アミノコフェノキシカルボ ニル−Ｌ−グルタミン酸ジ−ｔ−ブチルエステルは次のようにして製造した。

ａ）生成物ビス（２−メシルオキシエチル）アミノ−フェノキシカルボニル−Ｌ −グルタミン酸ジ−ｔ−ブチルエステル（反応工程図９の化合物１１参照！１． ０ｇ）をアセトニトリル（５０ｍｌ）に溶解した溶液を、沃化ナトリウム（１， ０ｇ）と共に７０℃で２０時間撹拌した。得られた反応混合物を濾過し、濾液を 減圧濃縮した。得られた残留物をシリカゲル上で酢酸エチル／シクロヘキサン（ １：５）で溶出してクロマトグラフィー分離して、４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヨ ードエチル）アミノコフェノキシカルボニル−Ｌ−グルタミン酸ジ−ｔ−ブチル エステル（反応工程図９の化合物１４参照）を油状物（０，７５ｇ）として得た 。収率６８％。ＮＭＲ：　１．４１（Ｓ）９Ｈ；　１．４３（ｓ）　９Ｈ；　１ ．８１−１．９５（ｍ）　ＩＨ；　２．３４（ｍ）　２Ｈ；　３．３１（ｔ）　 ４８；３．７２（ｔ）　４Ｈ；　４．００（ｍ）　ＩＨ；　６．６７（ｄ）　２ Ｈ；　６．９３（ｄ）　２Ｈ；　７．９１（ｄ）　１８０ｂ）ビス（２−メシル オキシエチル）アミノフェノキシカルボニル−Ｌ−グルタミン酸ジ−ｔ−ブチル エステル ４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノコフェノキシカルボニル− し一グルタミン酸ジーｔ−ブチルエステル（実施例８に記載のようにして得たち の一反応工程図４もまた参照のこと）　（２，５３ｇ）をピリジン（９ｍｌ）に 溶解した溶液を、メタンスルホニルクロリド（１，８の１）と共に２℃で２０分 間撹拌し、次いて８０℃で１１分間撹拌した。得られた反応混合物を酢酸エチル とクエン酸／水（１０％）との間で分配した。

有機層を分離し、水洗し、（硫酸ナトリウムで）乾燥し、次いで蒸発乾固した。

得られた残留物を、シリカゲル上で酢酸エチル／ジグ０ロメタン（１９）で溶出 してクロマトグラフィー分離して４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−メシルオキシエチル ）アミノコフェノキシカルボニル−Ｌ−グルタミン酸シーｔ−ブチルエステル（ 反応工程図９の化合物１１）を油状物（０，７５ｇ、収率２８％）として得た。

ＮＭＲ：　１．４１（ｓ）　９Ｈ；　１．４３（ｓ）　９Ｈ；１．８１−１．９ ９（ｍ）　ＩＨ；　２．３４（ｍ）　２Ｈ；　３．１６（ｓ）　６Ｈ；　３．７ ２（ｔ）４Ｈ；　３．９（ｍ）ＩＨ；４．３１（ｔ）　４１（；　６．７８（ｄ ）　２Ｈ；　６．９２（ｄ）　２Ｈ；　７．９（ｄ）　ＩＨ０４−［Ｎ、Ｎ−ビ ス（２−ブロモエチル）アミノコフェノキシカルボニル−■、−グルタミン酸ジ −ｔ−ブチルエステル〔反応工程図９の化合物（１２）参照’Ｊ　（１３３ｍｇ ）をＴＦＡ　（４ｍ　ｌ　）に懸濁し、周囲温度で３０分間撹拌した。

ＴＦＡを減圧下で除去し、残った油状物を酢酸エチル（３ｍｌ）で希釈し、次い て蒸発させて４−ＣＮ、Ｎ−ビス（２−ブロモエチル）アミノコフェノキシカル ボニルーし一グルタミン酸−１．３ＴＦＡ−０．９ＥｔＯＡｃ　（反応工程図９ の化合物（１３）参照〕（１，２６ｍｇ、収率８０％）を得た。ＮＭＲ：　１． ８３−２．０１（ｍ）ＩＨ；　２．３６（ｍ）　２Ｈ；　３．５８（ｔ）　４Ｈ ；　３．７６（ｔ）　４Ｈ；　４．０３（＋［１）　ＩＨ；　６．７１（ｄ）２ Ｈ；　６．９４（ｄ）　２＋１　；　７．９２（ｄ）　１８゜中間体として使用 した４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−ブロモエチル）アミノコフェノキシカルボニルー し一グルタミン酸シーｔ−ブチルエステルは次のようにして製造した。

ビス（２−メシルオキシエチル）アミノ−フェノキシカルボニル−Ｌ−グルタミ ン酸ジ−ｔ−ブチルエステル〔反応工程図９の化合物（１１）　一実施例８に記 載のようにして得たもの一反応工程図４も参照のこと〕（０，４８ｇ）をアセト ニトリル（３０ｍｌ）に溶解した溶液を、臭化リチウム（０，２６ｇ）と共に７ ０℃で２２時間撹拌した。得られた反応混合物を濾過し、濾液を減圧濃縮した。

得られた残留物を、シリカゲル上で酢酸エチル／ジクロロメタン（１：５）で溶 出してクロマトグラフィー分離して、４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−ブロモエチル） アミノコフェノキシカルボニル−Ｌ−グルタミン酸ジ−ｔ−ブチルエステル〔反 応工程図９の化合物（１２）参照〕を油状物（０，３７ｇ、収率８３％）として 得た。ＮＭＲ＋　１．４１（ｓ）９８；　１．４３（ｓ）　９Ｈ；　１．８−１ ．９８（ｍ）　ＩＨ；　２．３４（ｍ）　２Ｈ；　３．５８（ｔ）　４Ｈ：　３ ．７６（ｔ）　４Ｈ；　３．９７（ｍ）　ＩＨ；　６．７２（ｄ）　２８；　６ ．９３（ｄ）　２Ｈ；　７．９３（ｄ）　ＩＨ０中間体４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２ −クロロエチル）アミノコ−２−フルオロフェニルカルバモイル−し−グルタミ ン酸ジベンジルエステル（ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）　ニア、６２（ｔ）ＩＨ；　７． ３５（ｓ）　ＩＯＨ；　６．８（ｄ）　ＩＨ；　６．５７（ｍ）　２８；　５． １（ｄ）　４Ｈ；４．３３（ｍ）　ＩＨ；　３．７（ｓ）　８Ｈ；　２．４３（ ｍ）　２Ｈ；　２．０（ｍ）　２Ｈ）から実施例５の対応する工程と類似の方法 で、標記化合物（ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：　８．０（ｓ）ＩＨ；　７．６５（ｔ） 　ＩＨ；　６．６（ｍ）　３Ｈ；４．２（ｍ）　３Ｈ；　３．７（ｓ）　８８； 　２．２８（ｍ）　２Ｈ；１．８（ｍ）　２Ｈ）を製造した。

上記中間体は次のようにして製造した。

３−フルオロ−４−ニトロアニリン（１，３ｇ）に氷酢酸（３０ｍｌ）中でエチ レンオキシド（６，６ｇ）を加え、反応混合物を密閉フラスコ中で実験室温度で ７２時間保った。得られた溶液をその元の容量の半分まで減圧下で蒸発させ、塩 化ナトリウム飽和水溶液で希釈し、酢酸エチルで３回抽出した。酢酸エチル抽出 液を一緒にし、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、蒸発させ、次いで得ら れた残留物をシリカゲルを用いてフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精 製した。酢酸エチル５０％（容量比）を含有するヘキサンで溶出して未反応の出 発原料及びモノ置換生成物を除去した後に、酢酸エチルで溶出して、生成物２° 、２°−（３−フルオロ−４−ニトロアニリノ）ジェタノール（融点９９〜１０ １℃）を得た。

このようにして得られた生成物（２８０ｍｇ）をジクロロメタン（７，５ｍ１） に溶解し、ピリジン（０，１ｍ１）を加え、次いで得られた溶液を氷／水浴中で 冷却した。撹拌しながら塩化チオニル（０，２５ｍ１）を滴下した。

塩化チオニルの添加が完了した際に、反応混合物を還流下で１時間加熱し、次い で実験室温度で２０時間放置した。得られた反応溶液をジクロロメタン（１０ｍ ｌ）で希釈し、３回水洗し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発させ、次いで得ら れた残留物をメタノールから再結晶して生成物Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル ）−３−フルオロ−４−ニトロアニリン（融点９７〜９８℃）を得た。

このようにして得られた生成物（２００ｍｇ）をテトラヒドロフラン（７，５ｍ １）中で、パラジウム／炭素（５重量％のもの２０１１１ｇ）の存在下で水素雰 囲気中で１６時間撹拌した。触媒を濾過して除去し、溶媒を蒸発させた。得られ た残留物を最小限の容量のメタノールに溶解し、塩化水素を飽和させたジエチル エーテルを過剰量加えることにより粗生成物を沈殿させた。メタノール／ジエチ ルエーテルから再結晶して、生成物４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）ア ミノコ−２−フルオロアニリニウムクロリド（融点１９５〜２００℃、分解）を 得た。

得られた生成物を実施例５の対応する工程と同様の方法で所望の中間体に転化さ せた。

実施例３６〜４３ 実施例３６〜４３の化合物の構造分析データ及び元素分析データを第１７表に示 す。

第１７表に挙げた化合物は、実施例１６に記載の方法に従って製造した。すなわ ち、実施例３６の化合物は実施例１６におけるアユ１ルを４−アミノ安息香酸ベ ンジル（Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、　、　Ｌｔｄ、社製）に置 き換えることにより製造した。同様に、実施例３７〜４３の化合物は、実施例１ ６におけるアニリンを４−アミノ安息香酸ベンジル、５ｅｃ−ブチルアミン、ｎ −プロピルアミン、イソプロピルアミン、シクロヘキシルアミン、ベンジルアミ ン又はｐ−ベンジルオキシアニリンに置き換えることにより製造した。

３６　−ＣＯ−Ｎ）１−ｐ−Ｃ６１（５ＣＯＯＨ５１，５５，２６７，８３５１ ，７５，１０７，５０３８−ＣＯ−Ｎ）ｌ−ｓｅｃ−Ｃ４Ｈ９５１−９６−３２ ，９，０９５２，２６，３’　９．０９３９　−Ｃｏ−ＮＨ−ｎ−Ｃ］）！、　 ５０．９　６，０７　９．３７　５０．６　６ｊ５　８．９５４０　−ＣＯ−Ｎ Ｈ−１−Ｃ２Ｈ４５０，９６−０７９，３７５１−１６−０７９，４０４＋−Ｃ ｏ−ＮＨ−Ｃ６Ｈ１１５４，１６，４０８，６０’　５４．３６．７３８．７２ ４２　−Ｃｏ−ＨＮ−ＣＨ２Ｃ６Ｈ，、，５５，６５，４８８，４６５６，０５ ，５２８，２１４３−ＣＯ−ＮＨ−ｐ−Ｃ６Ｈ５０Ｈ５３，０５，０６Ｂ、０　 ５３．０５．２４７．９０実施例４４ Ｎ−（４−［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェニルカルバモイ ル）−Ｌ−グルタミン酸 前記中間体４−　［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェニルカル バモイル−し一グルタミン酸ジベンジル（１，１３８ｇ）をＤＭＦ（１５ｍｌ） に溶解した溶液を１０％Ｐｄ／Ｃ上で１６時間水素化した。濾過し、真空中で蒸 発させた後に、得られた残留物をクロロホルム（２０ｍｌ）に溶解した。１８時 間後に、結晶質沈殿を濾取し、真空中で乾燥して４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロ ロエチル）アミノコフェニルカルバモイル−Ｌ−グルタミン酸を得た。収ｆｆｉ ７３０ｍｇ（収率９３％）。アセトン／クロロホルムから再結晶した後に、極微 細棒状物を生成した。融点１１６〜１１８℃。

ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＯＣＤ３）　：６８．０（ｓ）ＩＨ；　７．２（ｄ）　２Ｈ； 　６．６（ｄ）　２８；　６．２（ｄ）　２ＨＮＨ；４．４（ｍ）　ＩＨ；　３ ．３（ｍ）　８Ｈ；　２．５−１．９（ｍ）　４Ｈ０前記ジベンジル中間体は次 のようにして製造した（反応工程図１０参照）。

グルタミン酸ジベンジル・ｐ−トルエンスルホン酸塩（Ｂａｃｈｅｍ　Ｌｌ、Ｋ 。

から入手し得る＋　０．２５ｇ）をアルゴン雰囲気下で乾燥塩化メチレン（１０ ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却した。ピリジン（０，１６２ｍ１）を加え、次いて トルエンに溶解したホスゲン（１，９３Ｍ、　０．３１１ｍ１）を迅速に加えた 。得られた溶液を０℃で２時間撹拌し、ピリジン（０，０５ｍ１）を加え、次い て４−　［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノ］アニリニウムクロリド を１度に加えた。混合物を０℃で１０分間撹拌し、次いで室温で１８時間撹拌し た。次いて、得られた反応混合物を酢酸エチルと水とで希釈した。次いて、有機 層を希クエン酸（２×）、水及び飽和食塩水で順々に洗浄し、乾燥し次いて蒸発 させて所望のジベンジル中間体を固体として得た。

前記ジベンジル中間体の別の合成経路は次の通りであるニトリホスゲン（１ｇ） をクロロホルム（８０ｍｌ）に溶解した溶液に、１０℃で４−［Ｎ、Ｎ−ビス（ ２−クロロエチル）アミノ］アニリニウムクロリド（２，７ｇ）を加えた。温度 を１０℃に保ちながら、トリエチルアミン（４，１５ｍ１）を加え、混合物を撹 拌し、周囲温度まで１５分間昇温させた。この混合物にグルタミン酸ジベンジル ・トシレートとトリエチルアミン（１，７ｍ１）とを一度に加えた。周囲温度で １．５時間経過した後に、得られた混合物をクロロホルム（１００ｍｌ）で希釈 し、２回水洗し、乾燥し次いで蒸発させて乾燥した。得られた残留物をＭｅｒｋ 社製のシリカゲル＾ｒｔ　９３８５上で、酢酸エチル／ヘキサンで溶出してクロ マトグラフィー分離してＮ−（４−［Ｎ、　Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミ ノコフェニルカルバモイル）−Ｌ−グルタミン酸ジベンジル（２，５ｇ）を得た 。融点１１９標記化合物は次のようにして製造した（反応工程図１１参照）。

前記中間体（反応工程図１１の化合物６　；　Ｉｇ）をＴＨＦ２０ｍｌに溶解し た溶液を３０％Ｐｄ／Ｃ（１０ｍｇ）上で４時間水素化した。次いで、得られた 混合物をセライトを通して濾過し、蒸発させて褐色油状物を得、次いでこれを溶 出液として１％ギ酸／酢酸エチルの混合物及び３％ギ酸／酢酸エチルの混合物を 使用してフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、得られた適当な画 分を蒸発させ、酢酸エチルを相互作用させて標記化合物３００　ｍｇを得た。Ｎ ＭＲ：　ＣＩＣＨ２ＣＨ２Ｎ：　３．６６（ｓ）　８Ｈ；芳香族：６．６６−７ ．４６（ｍ）　８Ｈ；　αｃｔｌ：４．２２（ｍ）　ＩＨ；その他＋１．６６− ２．０６（ｍ）　２８；　２．３９（ｍ）　２Ｈ；　３．４９（ｓ）　２Ｈ；　 ６．２９（ｄ）　ＩＨ；　８．３３（ｓ）　ＩＨ；９．９３（ｓ）　ＩＨ；　１ ２．５（ｂ、ｓ）　２Ｈ０前記中間体は次のようにして製造した：（ａ）トルエ ン（３０口１）中のヘンシルアルコール（２７，２ｍ１）に３−アミノフェニル 酢酸（１０ｇ）と、ｐ−トルエンスルホン酸−水和物（１３，２ｇ）とを加える ことによって、３−アミノフェニル酢酸ベンジルエステル・ｐ−トルエンスルホ ン酸塩を製造した。混合物を還流下に加熱し、生成した水をシーンスターク（Ｄ ｅａｎ−３ｔａｒｋ）受器中に集めた。全ての水が留去し終わった際に、混合物 を２５℃まで自然冷却し、その後にジエチルエーテルで希釈し、水浴中に１時間 置いた。結晶質ｐ−トルエンスルホン酸塩を濾取し、得られた生成物をデシケー タ−中で乾燥した（収量２３．５ｇ）。ＮＭＲδ２．３１（ｓ）　３Ｈ；　３． ８２（ｓ）　２Ｈ；　５．１１（ｓ）　２Ｈ；７．１１（ｄ）　２Ｈ；　７．２ ５−７．４５（０１）　８８；　７．５２（ｄ）　２Ｈ０（ｂ）乾燥ＤＭＦ２０ ＋ｎ　ｌ中でＮ−Ｂｏｃ−ａ−ベンジル−し−グルタメート（５ｇ）をヒドロキ シベンゾチアゾール（ＨＯＢＴ）　（１，１当量；　２．４５ｇ）と共に５℃で 加熱し、得られた反応混合物をこの温度でアルゴン雰囲気下に１０分間撹拌した 。次いで、ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣＩ）　（１，１当ｌｋ　＋ 　３．３７ｇ）を加え、反応混合物を５℃でさらに１０分間撹拌し、その後に２ ５℃まで自然昇温させ、さらに４５分間撹拌した。次いで、３−アミノフェニル 酢酸ベンジルエステル・ｐ−ｔ−ルエンスルホン酸塩［（ａ）で得た生成物］（ １，１当量：６ｇ）を乾燥ＤＭＦ　２０ｍ１中の１．１当量のトリエチルアミン （２，２３ｍｌ）と−緒に加え、得られた反応混合物を２５℃でさらに２０時間 撹拌した。次いで、ジシクロヘキシル尿素の沈殿を濾取し、ＤＭＦ濾液を蒸発乾 固した。次いで、得られた残留物を酢酸エチルに再溶解した。次いで、得られた 酢酸エチル溶液を炭酸水素ナトリウム水溶液次いで食塩水で洗浄し、次いて硫酸 ナトリウム（無水）上で乾燥した。得られた酢酸エチル抽出液を蒸発させて残留 物を得、これを溶出液３０％、４０％及び５０％酢酸エチル／ヘキサン混合物を 使用してフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。適当な画分を蒸 発させて生成物（反応工程図１１の化合物４）５ｇを得た。

ＮＭＲデータ：　１．３９（ｓ）　９Ｈ；　１．８１−２．１０（ｍ）　２Ｈ； 　２．３８（ｍ）　２Ｈ；　３．６９（ｓ）８Ｈ；　４．０３（ｍ）　１１；　 ５．１２（ｍ）　４８；　６．９２（ｄ）　ＩＨ；　７．２１（ｍ）　１８　； 　７．３５（ｍ）１１Ｈ；　７．４２（ｄ）　Ｉｌｂ　７．５２（ｓ）　ＩＨ； 　９．８９（ｓ）　ＩＨｏ（ｃ）　（ｂ）で得られた生成物（５ｇ）をエーテル １０ｍ１に懸濁し、ジクロロメタン５ｍｌを（溶解性を促進するために）加え、 次いで飽和エーテル／ＨＣ１８当量を加えた。次いで、得られた反応混合物を２ ５℃で２０時間撹拌した。生成物はこの段階では不溶性油状物であった。次いで 、エーテルを蒸発させ、得られた残留物をトルエンを用いて２回共沸させ、その 後にエーテルを加え、次いで蒸発させて生成物（反応工程図１１の化合物５）５ ｇを黄色フオーム状物として得た。

ＮＭＲデータ：δ２．３５（ｍ）　２１１　；δ２．６５（ｍ）　２Ｈ；δ３． ５０（ｓ）　２Ｈ；　４．２２（ｂｓ）ＩＨ１δ５．０１（ｓ）　２Ｈ；δ６． ８−７．６（ｍ）　１４８　；δ８．６５（ｂｓ）　３！ｌ；δ９．３５（ｓ） １Ｈ０ （ｄ）乾燥ＴＨＦＦ　２０ｍ１中の１．１−カルボニルジイミダゾール１．１当 量（０，６６ｇ）を５°Ｃで、４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノ ］アニリニウムクロリド１ｇを含有する溶液で処理した。次いで、反応混合物を ５℃で１５分間撹拌し、その後に（ｃ）で得た生成物１当量（１，８４ｇ）を乾 燥ＤＭＦ　２０ｍ１中の１，１当量のトリエチルアミン（０，５６ｍ１）と−緒 に加え、２５℃でさらに２時間撹拌した。次いで、トリエチルアミン塩酸塩の沈 殿を濾過して除去し、ＴＩ（Ｆ濾液を蒸発させ、得られた残留物を酢酸エチルに 再溶解した。次いで、得られた酢酸エチル溶液を水洗し、その後に０．２５Ｍク エン酸次いで食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム（無水）上で乾燥した。酢酸エチ ルを蒸発させて残留物を得、これを溶出液として３０％、４０％及び５０％酢酸 エチル／ヘキサン混合物を使用してフラッシュカラムクロマトグラフィーにより 精製した。

適当な画分を蒸発させて所望の中間体（反応工程図１１の化合物６）を得た。

ＮＭＲデータ：　ＣＩＣＨ２ＣＨ２Ｎ：　３．６５（Ｓ）　８Ｈ；芳香族＋６． ６３−７．５（ｍ）　１８Ｈ；＾ｒｃＨ２０：　５．１０（ｓ）　２Ｈ，；　５ ．１２（ｓ）　２Ｈ；αｃＨ：４．３２（ｍ）　ＩＨ；その他：１．８３−２、 １３（ｍ）　２８　；　２．４１（ｍ）　２！Ｉ　；　６．４２（ｄ）　ＩＨ； 　８．２５（ｓ）　ＩＨ；　９．９１（ｓ）　ＩＨ０αベンジル４−［Ｎ、Ｎ− ビス（２−クロロエチル）アミノコフェノキシカルボニル−Ｌ−グルタミン酸− γ−アニリドの代わりに、α−ベンジル４−［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル ）アミノコフェノキシカルボニル−Ｌ−グルタミン酸−γ−（３，５−ジカルボ キシ）アニリドを使用して実施例１６に記載の方法を反復して、４−［Ｎ、Ｎ− ビス（２−クロロエチル）アミノコフェノキシカルボニル−し−グルタミン酸− γ−（３，５−ジカルボキシ）アニリドを無色結晶（融点１６７〜１７０°Ｃ） として得た。

元素分析値ニー　予測値％　Ｃ＝４９．６　）１＝４．８７　Ｎ・６．６８実測 値％　Ｃ＝４９．７　＋＋＝４．９　Ｎ＝６．７前記のαベンジル４−［Ｎ、Ｎ −ビス（２−クロロエチル）アミノコフェノキシカルボニル−Ｌ−グルタミン酸 −γ−（３，５−ジカルボキシ）アニリドは、γ−アニリノ誘導体に関する実施 例１６に記載の方法と同様の方法で製造した。

反応工程図１ 反応工程図２ 反応工程図３ ↓ コ　〜 反応工程図６ 反応工程図７ 反応工程図８ 反応工程図９ 反応工程図１０ 反応工程図１１ 補正書の翻訳文の提出帯（特許法第１８４条の８）平成７年１月２０日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ＣＰＧ酵素に対する基質でありプロドラッグである化合物であって、次の式 （Ｉ）： 式（Ｉ）▲数式、化学式、表等があります▼｛式中、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独 立して塩素原子、臭素原子、沃素原子、基−ＯＳＯ２Ｍｅ又は基−ＯＳＯ２フェ ニル（但し、フェニル基はＣ１〜４アルキル基、ハロゲン原子、−ＣＮ基又は− ＮＯ２基から独立して選択される置換基の１個、２個、３個、４個又は５個で置 換されていてもよい）を表わし； Ｒ１ａ及びＲ２ａはそれぞれ独立して水素原子、Ｃ１〜４アルキル基又はＣ１〜 ４ハロアルキル基を表わし； Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立して水素原子、Ｃ１〜４アルキル基又はＣ１〜４ハ ロアルキル基を表わし； Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、Ｒ５ｃ及びＲ５ｄはそれぞれ独立して水素原子、Ｃ１〜４アル キル基であって二重結合を１個又は三重結合を１個有していてもよい５アルキル 基、５アルコキシ基、ハロゲン原子、シアノ基、−ＮＨ２基、基−ＣＯＮＲ７Ｒ ８（但し、Ｒ７及びＲ８は下記に記載の意義を有する）、基−ＮＨ（Ｃ１〜４ア ルキル）、基−Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２及びＣ２〜５アルカノイル基を表わす か；あるいは Ｒ５ａ及びＲ５ｂは一緒になって下記のａ）、ｂ）又はｃ）に記載の基；すなわ ち ａ）二重結合を１個有していてもよいＣ４アルキレン基；ｂ）Ｃ３アルキレン基 ；又は ｃ）基−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−もしくは−ＣＨ２ −ＣＨ＝ＣＨ−〔但し、これらの基のそれぞれは１個、２個、３個又は４個の置 換基により置換されていてもよく、これらの置換基はそれぞれ独立してＣ１〜４ ′アルキル基、Ｃ１〜４アルコキシ基、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、Ｃ ２〜５アルカノイル基及び基−ＣＯＮＲ７Ｒ８（基中のＲ７及びＲ８は下記に記 載の意義を有する）からなる群から選択されるものである〕を表わし； Ｘは０原子、基−ＮＨ−又は基−ＣＨ２を表わし；Ｙは０原子を表わし； Ｚは基−Ｖ−Ｗを表わし、該基においてＶは基−ＣＨ２−Ｔ−であり、基中のＴ は基−ＣＨ２−、−Ｏ−、−Ｓ−、−（ＳＯ）−又は−（ＳＯ２）−であり（但 し、Ｖがその第２の原子として硫黄原子又は酸素原子を有する場合にはＷが基− ＣＯＯＨ以外のものであることを条件とする）、また前記の基Ｖはさらに炭素原 子上に１個又は２個の置換基Ｑ１及び／又はＱ２を有していてもよく； ここで、Ｑ１及びＱ２はそれぞれ独立してＣ１〜４アルキル基又はハロゲン原子 を表わすものであるか；あるいはＱ１及びＱ２が隣り合った炭素原子に結合して いる場合には、Ｑ１及びＱ２は一緒になってＣ３〜Ｃ４アルキレン基であって、 Ｃ１〜４アルキル基及びハロゲン原子からなる群から独立して選択される置換基 の１個、２個、３個又は４個で置換されていてもよいＣ３〜Ｃ４アルキレン基を 表わし得るものであり；且つ Ｗは下記の定義（１）〜（９）に記載の基を表わす、すなわちＷは（１）ＣＯＯ Ｈ基； （２）基−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６〔但し、Ｒ６はＣ１〜６アルキル基、Ｃ３〜６ シクロアルキル基又は（下記の定義（３）に記載の意義を有する）アリール基を 表わす〕； （３）基−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ７Ｒ８〔但し、Ｒ７及びＲ８はそれぞれ独立して水 素原子を表わすか、あるいはＣ１〜６アルキル基、Ｃ３〜６シクアルキル基、ア リール基、ヘテロアリール基であって前記Ｎ原子に炭素原子を介して連結される ヘテロアリール基、又はＣ７〜９アラルキル基を表わし、 ここで、前記アリール基はフェニル基であり；前記ヘテロアリール基は窒素原子 及び硫黄原子からなる群から選択される異種原子を１〜３個含有する５員環又は ６員環であり；前記アリール部分それ自体、ヘテロアリール部分及び前記アラル キル基のアリール部分は基−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＨ２−ＮＨ２、 −（ＣＨ２）１〜４−ＣＯＯＨ、テトラゾール−５−イル及び−ＳＯ３Ｈからな る群から選択される置換基の１〜４個により炭素原子上で置換されていてもよく 且つアルキル部分はメチル基を有していてもよい〕； （４）基−ＳＯ２ＮＨＲ９（但し、Ｒ９はＲ７について定義した意義を有するが 、さらに−ＣＦ３基、−ＣＨ２−ＣＦ３基又は前記アリール基を表わし得る）； （５）基−ＳＯ３Ｒ１０（但し、Ｒ１０はＨ原子、Ｃ１〜６アルキル基又はＣ３ 〜６シクロアルキル基を表わす）； （６）基ＰＯ３Ｒ１０Ｒ１０（但し、２つの基Ｒ１０はそれぞれ同一であっても よいし又は異なっていてもよく前記の意義を有する）；（７）テトラゾール−５ −イル基； （８）基−ＣＯＮＨ−ＳＯ２Ｒ１１〔但し、Ｒ１１は下記の（ａ）〜（ｃ）に記 載の基：すなわち、 （ａ）Ｃ３〜７シクロアルキル基； （ｂ）Ｃ１〜６アルキル基であって、下記に定義するアリール基、Ｃ１〜４アル キル基、−ＣＦ３基又はハロゲン原子からなる群から選択される複数の置換基で 置換されていてもよいＣ１〜６アルキル基；及び （ｃ）ペルフルオロ−Ｃ１〜６アルキル基を表わし； ここで上記アリール基はフェニル基であるか又は１〜５個の置換基を有するフェ ニル基であり、該置換基はハロゲン原子、−ＮＯ２基、−ＣＦ３基、Ｃ１〜４ア ルキル基、Ｃ１〜４アルコキシ基、−ＮＨ２基、−ＮＨＣＯＣＨ３基、−ＣＯＮ Ｈ２基、基−ＯＣＨ２ＣＯＯＨ、基−ＮＨ（Ｃ１〜４アルキル）、基−Ｎ（Ｃ１ 〜４アルキル）２及び基−ＮＨＣＯＯＣ１〜４アルキル、−ＯＨ基、−ＣＯＯＨ 基、−ＣＮ基及び基−ＣＯＯＣ１〜４アルキルからなる群から選択されるもので ある〕；及び （９）基−Ｍ−Ｈｅｔ（但し、ＭはＳ原子、基ＳＯ又は基ＳＯ２を表わし、且つ Ｈｅｔは５員又は６員複素環式芳香環であって該芳香環の炭素原子を介して基Ｍ に連結される複素環式芳香環を表わし、該複素環式芳香環はＯ原子、Ｎ原子及び Ｓ原子からなる群から選択される異種原子を１個、２個、３個又は４個含有する ものであり、また該複素環式芳香環は−ＯＨ基、−ＳＨ基、−ＣＮ基、−ＣＦ３ 基、−ＮＨ２基及びハロゲン原子からなる群から選択される置換基の１個、２個 、３個又は４個により環の炭素原子上で置換されていてもよい）を表わす｝で示 される化合物及び該式（Ｉ）で示される化合物の塩。 ２．Ｒ１及びＲ２がそれぞれ独立してＩ原子、Ｂｒ原子、ＣＩ原子、基−ＯＳＯ ２Ｍｅ又は基−ＯＳＯ２フェニル（但し、フェニル基はその２位及び／又は４位 において請求項１に記載の置換基の１個又は２個で置換されるものである）を表 わすものである請求項１記載の化合物。 ３．Ｒ１ａ及びＲ２ａがそれぞれ独立して−ＣＨ３基又は水素原子を表わすもの である請求項１記載の化合物。 ４．Ｒ３及びＲ４がそれぞれ独立して水素原子、メチル基及び−ＣＦ３基を表わ すものである請求項１記載の化合物。 ５．Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、Ｒ５ｃ及びＲ５ｄがそれぞれ独立して水素原子、弗素原子 、塩素原子、メチル基、−ＣＯＮＨ２基及び−ＣＮ基を表わすものである請求項 １記載の化合物。 ６．Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、Ｒ５ｃ及びＲ５ｄがそれぞれ独立して水素原子を表わすも のである請求項１記載の化合物。 ７．Ｘが０原子又は基ＮＨである請求項１記載の化合物。 ８．Ｖが基−ＣＨ２−ＣＨ２−及び（Ｗがテトラゾール−５−イル基である場合 には）−ＣＨ２−Ｓ−からなる群から選択されるものである請求項１記載の化合 物。 ９．Ｗが請求項１に記載の定義（１）、（２）、（３）、（７）及び（９）に記 載の基を表わすものである請求項１記載の化合物。 １０．Ｗが−ＣＯＯＨ基、テトラゾール−５−イル基又は基−ＣＯＮＨ（アリー ル）〔但し、アリール基は請求項１に記載の定義（３）に記載の意義を有する〕 を表わすものである請求項１記載の化合物。 １１．下記の化合物：すなわち 化合物（ａ）（Ｓ）−２−｛４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］フェノキ シカルボニルアミノ｝−４−（１Ｈ−１，２，３，４−テトラゾール−５−イル ）酪酸及びその塩； 化合物（ｂ）Ｎ−｛４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ｝−３−フルオロフ ェニルカルバモイル｝−Ｌ−グルタミン酸及びその塩；化合物（ｃ）Ｎ−｛４− ［ビス（２−クロロエチル）アミノ］フェニルカルバモイル｝−Ｌ−グルタミン 酸及びその塩；並びに化合物（ｄ）Ｎ−｛４−［ビス（２−ヨードエチル）アミ ノ］フェノキシカルボニル｝−Ｌ−グルタミン酸及びその塩。 １２．Ｎ−｛４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］フェノキシカルボニル｝ −Ｌ−グルタミン酸及びその塩。 １３．請求項１記載の式（Ｉ）で示される化合物及びその塩の製造方法であって 、 （ａ）次の式： ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉａ）｛式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１ａ、Ｒ２ ａ、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、Ｒ５ｃ、Ｒ５ｄ、Ｘ、Ｙ、Ｑ１及びＱ２は請 求項１に記載の意義を有し、またＺ１は請求項１に記載の意義Ｚを表わすが、Ｗ がカルボキシル基である場合にはカルボキシル基が保護された形（Ｐｒ２と表示 される）で存在することを条件とし、且つＰｒ１もまた保護された形（Ｐｒ２と 同一であってもよいし又は異なっていても）のカルボキシル基を表わす｝で示さ れる化合物を脱保護し且つ所望ならばこのようにして得られた式（Ｉ）で示され る化合物をその塩に転化させることからなるか；あるいは （ｂ）次の式： ▲数式、化学式、表等があります▼（ＸＶＩＩＩ）〔式中、Ｚ１１１は前記の基 Ｚを表わすが、Ｗが請求項１に記載の定義（４）に記載の基（すなわち、基−Ｓ Ｏ２ＮＨＲ９）、定義（５）に記載の基（すなわち、基−ＳＯ３Ｒ１０）及び定 義（６）に記載の基（すなわち、基ＰＯ３Ｒ１０Ｒ１０）を表わすことを条件と する〕で示される化合物を、前記の式（ＩＩ）で示される化合物と標準条件下で 反応させるかあるいは前記の式（Ｖ）で示される化合物と標準条件下で反応させ て、それによって式（Ｉ）で示される化合物〔但し、Ｗは前記の定義（４）、（ ５）及び（６）に記載の基を表わすものである〕を生成させ且つ所望ならば得ら れた式（Ｉ）の化合物をその塩に転化させることからなる、前記の式（Ｉ）で示 される化合物であって式中のＷが請求項１に記載の定義（４）に記載の基（すな わち、基−ＳＯ２ＮＨＲ９）、定義（５）に記載の基（すなわち、基−ＳＯ３Ｒ １０）及び定義（６）に記載の基（すなわち、基−ＰＯ３Ｒ１０Ｒ１０）を表わ す化合物の製造方法；あるいは（ｃ）次の式： ▲数式、化学式、表等があります▼（ＸＶＩＩＩ）（式中、Ｚ１１１は前記の基 Ｚを表わすが、但し、Ｗがテトラゾール−５−イル基を表わすことを条件とする ）で示される化合物と、前記の式（ＩＩ）で示される化合物とを標準条件下で反 応させ、それによって式（Ｉ）で示される化合物であって式中のＷがテトラゾー ル−５−イル基を表わす化合物を生成させ且つ所望ならば得られた式（Ｉ）で示 される化合物をその塩に転化させることからなる、前記の式（Ｉ）で示される化 合物（但し、Ｗはテトラゾール−５−イル基を表わす）の製造法 からなる式（Ｉ）で示される化合物及びその塩の製造方法。 １４．プロドラッグ成分として請求項１記載の式（Ｉ）で示される化合物の少な くとも１つ又は該化合物の薬理学的に許容し得る塩と、製薬学的に許容し得る担 体又は希釈剤とを一緒に含有してなる医薬組成物。 １５．各々の成分が他方の成分と一緒に使用されるものである２成分系であって 、 ｉ）所定の抗原を結合し得る抗体又はその断片であって、しかも請求項１記載の 式（Ｉ）の化合物又はその生理学的に許容し得る塩を細胞毒性薬物に転化し得る ＣＰＧ酵素に複合されてある該抗体又はその断片である第１の成分と、 ｉｉ）ＣＰＧ酵素の影響下で細胞毒性薬剤に転化し得る請求項１記載の式（Ｉ） の化合物又はその生理学的に許容し得る塩である第２の成分と からなる２成分系。 １６．第１の成分〔該第１の成分は、所定の抗原を結合し得る抗体又はその断片 であってしかも請求項１記載の式（Ｉ）の化合物又はその生理学的に許容し得る 塩を細胞毒性薬物に転化し得るＣＰＧ酵素に複合されてある抗体又はその断片か らなるものである〕を宿主に投与し、次いで第２の成分〔該第２の成分は、ＣＰ Ｇ酵素の影響下で細胞毒性化合物に転化し得る請求項１記載の式（Ｉ）の化合物 又はその生理学的に許容し得る塩からなるものである〕を宿主に投与することか らなる、ある部位への細胞毒性薬物の配送方法。