FI115048B - Menetelmä aminohappoon liitettyjen typpisinappijohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Menetelmä aminohappoon liitettyjen typpisinappijohdannaisten valmistamiseksi Download PDF

Info

Publication number
FI115048B
FI115048B FI950230A FI950230A FI115048B FI 115048 B FI115048 B FI 115048B FI 950230 A FI950230 A FI 950230A FI 950230 A FI950230 A FI 950230A FI 115048 B FI115048 B FI 115048B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
amino
bis
chloroethyl
formula
compound
Prior art date
Application number
FI950230A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI950230A (fi
FI950230A0 (fi
Inventor
Robert Ian Dowell
Philip John Burke
Anthony Brian Mauger
Caroline Joy Springer
Original Assignee
Astrazeneca Ab
Cancer Res Campaign Tech
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB929215636A external-priority patent/GB9215636D0/en
Priority claimed from GB939310884A external-priority patent/GB9310884D0/en
Application filed by Astrazeneca Ab, Cancer Res Campaign Tech filed Critical Astrazeneca Ab
Publication of FI950230A publication Critical patent/FI950230A/fi
Publication of FI950230A0 publication Critical patent/FI950230A0/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI115048B publication Critical patent/FI115048B/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D257/00—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D257/02—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D257/04—Five-membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6891—Pre-targeting systems involving an antibody for targeting specific cells
    • A61K47/6899—Antibody-Directed Enzyme Prodrug Therapy [ADEPT]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
    • C07C237/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C237/20—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton containing six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/40—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings
    • C07C271/42—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/54—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C275/00—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C275/04—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C275/20—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton
    • C07C275/24—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C275/00—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C275/28—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton
    • C07C275/40—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C309/00—Sulfonic acids; Halides, esters, or anhydrides thereof
    • C07C309/63—Esters of sulfonic acids
    • C07C309/64—Esters of sulfonic acids having sulfur atoms of esterified sulfo groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C309/65—Esters of sulfonic acids having sulfur atoms of esterified sulfo groups bound to acyclic carbon atoms of a saturated carbon skeleton
    • C07C309/66—Methanesulfonates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C311/00—Amides of sulfonic acids, i.e. compounds having singly-bound oxygen atoms of sulfo groups replaced by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C311/50—Compounds containing any of the groups, X being a hetero atom, Y being any atom
    • C07C311/51—Y being a hydrogen or a carbon atom

Description

115048
Menetelmä aminohappoon liitettyjen typpisinappijohdannaisten valmistamiseksi
Keksintö koskee menetelmiä sellaisten yhdisteiden 5 valmistamiseksi, joita käytetään vasta-ainekohdennetussa entsyymiesilääketerapiassa (ADEPT). Yhdisteet ovat erityisen mielenkiintoisia käytettäväksi esilääkkeinä yhdessä karboksipeptidaasi G -entsyymien kanssa, erikoisesti kar-boksipeptidaasi G2 -entsyymin (CPG2) kanssa.
10 On löydetty useita sytotoksisia yhdisteitä, joita on mahdollista käyttää syövän kemoterapiassa. Typpisinapit muodostavat yhden sellaisten sytotoksisten yhdisteiden tärkeän ryhmän. Yleisesti sytotoksisten yhdisteiden ja erityisesti typpisinappien kliinistä käyttöä on rajoittanut syto-15 toksisen vaikutuksen huono selektiivisyys kasvain- ja nor-maalisolujen välillä.
Eräs lähestymistapa tämän ongelman ratkaisemiseksi sisältää niin kutsuttujen esilääkkeiden kehityksen, jotka ovat sytotoksisen lääkkeen johdannaisia, usein suhteellisen 20 yksinkertaisia johdannaisia, joiden sytotoksiset ominaisuu det ovat merkittävästi alentuneet verrattuna emolääkkeen vastaaviin. On tehty ehdotuksia sellaisten esilääkkeiden antamiseksi potilaille sellaisella hoito-ohjelmalla, että ’,· esilääke muuttuu sytotoksiseksi lääkkeeksi ainoastaan sillä 25 alueella, jossa sen halutaan vaikuttavan.
•
Eräs lähestymistapa sisältää sytotoksisen emotyp-pisinapin liittämisen aminohappoon niin, että muodostetaan • · esilääke, joka voi muuttua emotyppisinapiksi halutulla toi-, minta-alueella entsyymin vaikutuksesta. Tämä lähestymistapa » i · 30 voidaan suorittaa käyttämällä hyväksi vasta-aine/ent- ♦ ··1 syymikonjugaattia yhdessä esilääkkeen kanssa. Vasta- ·,· aine/entsyymikonjugaatti muodostetaan vasta-aineesta, joka ..j on selektiivinen kasvaimille, ja entsyymistä, joka muuttaa esilääkkeen sytotoksiseksi lääkkeeksi. Kliinisessä suori- • · 35 tuksessa vasta-aine/entsyymikonjugaatti annetaan ensin po- tilaalle ja sen annetaan sitoutua kasvaimeen. Sopivan ajan 1 1 5048 2 kuluttua, jona aikana vasta-aine/entsyymikonjugaatin annetaan poistua muualta kehosta, potilaalle annetaan esilääke. Esilääkkeen muuttuminen kohdentuneen entsyymin toimesta sy-totoksiseksi lääkkeeksi tapahtuu pääasiassa kasvaimen alu-5 eella. Sellainen systeemi on kuvattu kansainvälisessä patenttihakemuksessa, jonka numero on PCT/GB88/0 0 181, joka on julkaistu numerolla WO88/07 378, ja US-patentissa numero 4 975 278.
ADEPT-terapiassa käytettävät tunnetut esilääkkeet, 10 jotka CPG-entsyymi katkaisee, tuottavat bentsoehapposinap-peja aktiivisina lääkkeinä. On kuitenkin olemassa tarve aktiivisemmista lääkkeistä, jotka CPG-katkaisu tuottaa, terapeuttisen vaikutuksen kohottamiseksi kasvainsoluja vastaan. Lisäksi on olemassa tarve kohottaa CPG-entsyymiä käyttävän 15 ADEPT-terapian selektiivisyyttä, se tarkoittaa, toksisuuden suhdetta kasvainsoluja kohtaan verrattuna terveisiin soluihin .
Esillä oleva keksintö perustuu sellaisten uusien esilääkkeiden löytämiseen, joita voidaan käyttää ADEPT- 20 terapiassa, jotka CPG-entsyymi katkaisee ja jotka tuottavat merkittävästi aktiivisemmat sytotoksiset lääkkeet kuin CPG- katalysoimien reaktioiden tunnetut tuotteet. CPG toimii : : luonnossa folaattia hajottavan entsyyminä, joka hydrolysoi · spesifisesti glutamiini- ja asparagiinihapot folaattijoh- • · 25 dannaisista (Sherwood, R.F. et ai., Eur. J. Biochem.
• · : ,·. (1985) , 148, 447 - 453) . Karboksipeptidaasi G -entsyymit » * · eivät tunnista ei-klassisia folaattianalogeja (Kalghatgi, • * * K.K. et ai., Cancer Research (1979), 39, 3441 - 3445) ja niitä pidetään sen vuoksi konservatiivisina substraattis-30 pesifisyyden suhteen. Yllättävästi esillä olevat esilääk- • ♦ keet ovat CPG-entsyymien, kuten CPG1-entsyymin, mutta eri-koisesti CPG2-entsyymin, substraatteja. CPG2 on eksopepti-daasi, jolla on spesifisyyttä L-glu-tamaattia kohtaan. Sen tiedetään hydrolysoivan glutamiinihappo-osan foolihaposta 35 ja sen analogeista ja glutamyyli-p-aminobentsoehaposta kat-' ’ kaisemalla osittaisen -aromaattinen rengas-CO-NH-Glu-raken- 3 115048 teen kohdasta -CO-NH-. Esillä olevassa keksinnössä osittainen rakenne vertailutarkoituksia varten on -aromaattinen rengas-X-CO-NH-Glu, jossa X on -NH-, -O- tai -CH2; joka näin muuttaa katkaisukohdan ja aromaattisen renkaan väli-5 matkaa kuin myös elektronijakautumaa -CO-NH-sidoksen yli erikoisesti silloin, kun X on NH tai O. CPG2-entsyymin ei voida ennustaa mukautuvan näihin avaruudellisiin ja elektronisiin eroihin. Yhdisteet, joissa X on -CH2-, on kuvattu julkaisuissa Chemical Abstracts TS (5), 2.8.1971, abstrakti 10 numero 36603m, ja Karpavicius et ai., Izv. Acad. Nauk. SSSR, Ser Khim, numero 9, 1970, 2150 - 2153 (katso taulukon 1 yhdisteet VI, VIII, IX ja XI).
Esillä olevan keksinnön mukaisesti on esitetty menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten, aminohappoon 15 liitettyjen typpisinappijohdannaisten valmistamiseksi, joilla on kaava I
Rl R3
\ R5a. RSb Y COzH
\ )M JL /
XN__^/ -X^^N-CH
r2. / >4 H \z f1' .· ·. R50 ; ·, ·. R2 R* • · • · * 20 jossa R1 ja R2 ovat kumpikin toisistaan riippumattomasti '·*·' kloori, bromi, jodi tai 0S02Me (jossa Me on metyyli); Rla, : R2a, R3 ja R4 ovat vetyjä; R5a, R5b, R5c ja R5d ovat kukin toi- ·' sistaan riippumattomasti vety, Ci-4-alkyyli, Ci-4-alkoksi, halogeeni tai syaani tai R5a ja Rsb ovat yhdessä _ :· 25 -CH=CH-CH=CH- ; X on O, NH tai -CH2-; , , Y on O; * ; Z on -V-W, jossa V on -CH2T-, jossa T on -CH2- tai -S- (edellyttäen, että kun V:ssä on rikki toisena atomina, 3 0 W on muu kuin -COOH) ja W on 4 115048 (1) COOH; (2) - (C=0) -NR7R8, jossa R7 ja R8 ovat kumpikin toisistaan riippumattomasti vety, Ci-6-alkyyli, C3-6-sykloalkyy-li, aryyli tai C7-9-aralkyyliryhmä, 5 jolloin aryyli on fenyyli; aryyliosa per se ja aralkyyliryhmän aryyliosa voi olla substituoitu 1-4 substituentilla, jotka valitaan ryhmästä, jossa on -COOH, -OH, -NH2, -CH2-NH2, - (CH2) 1-4-COOH ja tetratsol-5-yyli; 10 (3) tetratsol-5-yyliryhmä; ja mainitun kaavan I mukaisen yhdisteen suolojen valmistamiseksi , sillä edellytyksellä, että seuraavat yhdisteet jätetään ulkopuolelle: 15 2- (2-{4- [bis-(2-klooripropyyli)amino]fenyyli}asetyyliami- no)pentaanidihappo; 2- (2-{4-[bis-(2-kloorietyyli)amino]fenyyli}asetyyliamino)-pentaanidihapon 5-metyyliesteri; 2- (2-{4-[bis-(2-kloorietyyli)amino]fenyyli}asetyyliamino)- 20 pentaanidihappo; 2-(2-{4-[bis-(2-kloorietyyli)amino]fenyylijasetyyliamino)-; : pentaanidihapon 5-etyyliesteri; ja 2-(2-{4-[bis-(2-kloorietyyli)amino]fenyyli}asetyyliamino)-4 -karbamoyy li voi happo sekä niiden suolat.
25 Kaavan I mukaiset yhdisteet sisältävät ainakin yh- < · ; ,·# den asymmetrisen hiiliatomin sen ollessa se hiiliatomi, jo- ' ka sisältää substituentin -COOH kaavassa I. Lisäksi riippu en R1:n, R2:n, R3:n ja R4:n merkityksistä, kaavan I mukaiset yhdisteet voivat sisältää lisää asymmetrisiä hiiliatomeja.
> » · - 30 On ymmärrettävä, että esillä olevan keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettuihin yhdisteisiin sisältyy kaikki sellaiset kaavan I mukaisen yhdisteen muodot, sisältäen ra-j seemisen muodon kuin myös sen yksittäiset optiset isomee rit, jotka sisältävät kaavan I koostumusten tässä määritel- * » Ί 35 lyt käyttökelpoiset fysiologiset ominaisuudet alan asian tuntijalle ollessa yleisesti selvää, kuinka sellaiset iso- 1 1 5048 5 meerit voidaan erottaa ja kuinka niiden fysiologiset ominaisuudet voidaan määrittää. Kaavan I mukaiset yhdisteet sisältävät suositeltavasti L-konfiguraation siinä hiiliatomissa, joka sisältää kaavan I mukaiset substituentin -COOH.
5 Esillä oleva keksintö sisältää kaavan I mukaisten yhdisteiden suolojen valmistuksen. On ymmärrettävä kuitenkin, että farmaseuttista käyttöä varten viitattujen suolojen täytyy olla farmaseuttisesti hyväksyttäviä, mutta muut suolat voivat myös olla käyttökelpoisia esimerkiksi kaavan 10 I mukaisten yhdisteiden ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistuksessa. Kaavan I mukaisten yhdisteiden polymorfiset muodot voidaan valmistaa ja nämä muodot kuuluvat myös esillä olevaan keksintöön.
Kun mikä tahansa tässä viitattu substituentti on 15 alkyyliryhmä tai sisältää sellaisen, sellainen ryhmä voi olla suoraketjuinen tai haarautunut. Kun mikä tahansa tässä viitattu substituentti on Ci-6-alkyyliryhmä tai sisältää sellaisen, sellaisessa ryhmässä on suositeltavasti 1-4 hiiliatomia, esimerkiksi metyyli, etyyli, n-propyyli tai 20 isopropyyli, suositeltavasti metyyli ja etyyli, mutta erityisesti metyyli. Kun mikä tahansa tässä viitattu substi- < ' ,· tuentti on Ci-4-alkyyliryhmä tai sisältää sellaisen, sellai- • .* nen ryhmä voi olla esimerkiksi metyyli, etyyli, n-propyyli : * tai isopropyyli, suositeltavasti metyyli ja etyyli, mutta ; ; 25 erityisesti metyyli.
; Suositeltavat arvot R^klle ja R2:lle ovat I, Br, Cl , ja 0S02Me. Suositeltava arvo Rla:lle ja R2a:lle on -CH3 tai » » vety, mutta erityisesti vety.
Suositeltavat arvot R3:lle ja R4:lle ovat vety, me-3 0 tyyli ja CF3, mutta erityisesti vety.
Suositeltavat arvot R5a"d:lle ovat vety, fluori, ; ,· kloori, metyyli ja CN. Kun substituutio on läsnä yhdessä ;·· fenyylirenkaassa niin, että ainakin yksi RSa:sta, R5b:stä, , *, R5c : stä ja R5d:stä on muu kuin vety, on suositeltavaa, että f · ’ 35 ainoastaan yksi tai kaksi R5a:sta, R5b:stä, R5c:stä ja ‘ R5d:stä on muu kuin vety. Sellaisissa tapauksissa on edel- 6 115048 leen suositeltavaa, että R5b ja Rsd on vety ja että R5a ja/tai R5c on muu kuin vety. On erityisen suositeltavaa kuitenkin, että R5a'd on vety.
Suositeltavat arvot X:lle ovat O ja NH, erityisesti 5 O. Eräässä keksinnön suoritustavassa erityisen suositeltava arvo X:lle on NH.
Suositeltava arvo V:lle on -CH2-CH2-. Eräässä keksinnön suoritustavassa suositeltava arvo V:lle silloin, kun W on tetratsol-5-yyli, on -CH2-S-.
10 Kun W on määritelmän 2 mukainen ryhmä, aryyli on suositeltavasti substituoitu fenyyli ja heteroaryyli on suositeltavasti 5- tai 6-jäseninen rengas, joka sisältää 1 tai 2 heteroatomia sellaisten heteroatomien ollessa suositeltavasti typpi, kuten pyridyyli tai pyrimidinyyli. Suosi-15 teltavat substituentit aralkyyliryhmän aryyliosassa per se, heteroaryyliosassa tai aryyliosassa ovat -COOH, -CH2-COOH tai tetratsol-5-yyli.
Erikoisemmat arvot W:lle ovat -COOH, 2 0 -CONH2, -CONHR8 (jossa R8 on, kuten tässä on aiemmin määritelty, : erikoisesti R on fenyyli), ·' -tetratsol-5-yyli, j Erikoisemmat arvot W:lle ovat -COOH, tetratsol-5- *. 25 yyli tai -CONH (aryyli) (jossa aryyli on määritelty yllä : olevassa määritelmässä 3). Tässä yhteydessä aryyli on suo- .1 siteltavasti substituoitu fenyyli suositeltavien substi- tuenttien ollessa -COOH, -CH2-COOH tai tetratsol-5-yyli.
Keksinnön mukaiset suositeltavat yhdisteet, mitä - : 30 tulee niiden käyttökelpoisuuteen ADEPT-terapiassa, sisältä- '. .· vät: | (S)-2-(4-[bis (2-kloorietyyli) amino] fenoksikarbonyyliamino) - 4- (1H-1,2,3,4-tetratsol-5-yyli) voihapon ja sen suolat; N-(4- [bis(2-kloorietyyli)amino]-3-fluorifenyylikarbamoyy-: ·1 35 li)-L-glutamiinihapon ja sen suolat; 1 5 1 1 # 1 1 5048 7 N- (4- [bis(2-kloorietyyli)amino]fenyylikarbamoyyli)-L-glutamiinihapon ja sen suolat; mutta erityisen suositeltava keksinnön mukainen yhdiste on N-(4-[bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyyli)-L-5 glutamiinihappo ja sen suolat.
Toinen suositeltava yhdiste, joka on osoittanut hyvän aktiivisuuden testeissä, on N-(4-[bis(2-jodietyyli)-amino]fenoksikarbonyyli)-L-glutamiinihappo ja sen suolat.
Esillä olevan keksinnön mielenkiintoisten yhdistei-10 den alaryhmät voidaan saada aikaan ottamalla mikä tahansa yllä mainituista erityisistä tai geneerisistä määritelmistä R1 - R4:lle, R5a"d:lle, X:lle, Y:lle tai W:lle joko yksittäin tai yhdistelmänä minkä tahansa muun R1 - R4:lle, R5a~d:lle, X:lle, Y:lle tai W:lle annetun erityisen tai geneerisen 15 määritelmän kanssa.
Lisäksi esillä olevan keksinnön CPG-katkaisulla tuotetut testatut lääkkeet tehokasta ADEPT-terapiaa varten ovat vähemmän stabiileja fysiologisissa olosuhteissa kuin tunnetut CPG2-katalysoimien reaktioiden lääketuotteet. Tämä 20 alentunut stabiilisuus aiheuttaa vähemmän toksisuutta terveille soluille kuin jos lääkkeillä olisi samanlaiset sta-: : biilisuudet kuin tunnetujen CPG-katalysoimien reaktioiden tuotteilla ADEPT-terapiassa silloin, jos osa aktiivisesta j lääkkeestä, joka on muodostunut kasvaimen kohdalla, vuotaa . ", 25 yleiseen verenkiertoon. Näin ollen testit, jotka olemme suorittaneet osoittavat, että jopa lääkkeen suonensisäisen annon (aktiivisen lääkkeen, ei esilääkkeen) jälkeen 15 minuuttia myöhemmin lääkettä ei havaittu plasmassa.
Tämän keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet : 30 muodostavat suoloja erilaisten epäorgaanisten ja orgaanis ten happojen ja emästen kanssa ja sellaiset suolat kuuluvat •(j keksinnön piiriin. Suolat sisältävät ammoniumsuolat, alka- limetallisuolat, kuten natrium- ja kaliumsuolat, alkalimaa-metallisuolat, kuten kalsium- ja magnesiumsuolat, orgaanis- * · ·’ 35 ten emästen kanssa muodostetut suolat, esim. disykloheksyy- 1 liamiinisuolat, N-metyyli-D-glukamiinin, suolat aminohappo- 8 115048 jen kanssa, kuten arginiinin, lysiinin ja niiden kaltaisten kanssa. Voidaan myös valmistaa suolat orgaanisten ja epäorgaanisten happojen kanssa, esim. HCl-, HBr-, H2S04-, H3P04-, metaanisulfoni-, tolueenisulfoni- ja kamforisulfonisuolat.
5 Hapot ovat suositeltavasti vahvoja happoja, joiden Κ,η-arvot ovat vähemmän kuin 2 tai tasan 2, ja erikoisesti sellaiset, joiden pKa-arvot ovat vähemmän kuin 1 tai tasan 1. Fysiologisesti hyväksyttävät suolat ovat suositeltavia, vaikka muutkin suolat voivat olla käyttökelpoisia, esim. eristet-10 täessä tai puhdistettaessa tuote.
Suolat voidaan valmistaa tavanomaisin menetelmin, kuten antamalla tuotteen vapaan happo- tai vapaan emäsmuo-don reagoida yhden tai useamman ekvivalentin kanssa sopivaa emästä tai happoa liuottimessa tai alustassa, jossa suola 15 on liukenematon, tai sellaisessa liuottimessa, kuten vesi, joka sitten poistetaan tyhjiössä tai jäädytyskuivattamalla tai vaihtamalla olemassa olevan suolan kationit toiseen kationiin sopivalla ioninvaihtoresiinillä.
Esillä olevan keksinnön mukaisesti esitetään mene-20 telmä kaavan I mukaisten yhdisteiden ja niiden suolojen valmistamiseksi, joka sisältää vaiheen, jossa poistetaan
t : I
suojaus kaavan • · * • ti • « *, , . 1 Λ. £h> ··:· ä R β e .
i «">—s-*· < >Οτζ » · ·. mukaisesta yhdisteestä (jossa R1, R2, Rla, R2a, R3, R4, R5a, 25 Rsb, R5c, R5d, X ja Y ovat sellaisia, kuten tässä on aiemmin
• H
t määritelty, ja Z on Z, kuten tässä on aiemmin määritelty sillä edellytyksellä, että kun W on karboksyyliryhmä, se on läsnä suojattuna muotona (merkitään Pr2:11a) ja Pr1 on myös karboksyyli ryhmä suojatussa muodossa (joka voi olla sama 9 115048 tai erilainen kuin Pr2) ja, jos halutaan, muutetaan näin saatu kaavan I mukainen yhdiste sen suolaksi.
Pr1 ja Pr2 voivat näin ollen olla esimerkiksi bent-syylioks ikarbonyyliryhmiä, t-butyylioks ikarbonyyliryhmiä, 5 2 - (trimetyylisilyyli)etyyliesteri , dimetyyli-tert-butyyli- silyyliesteri, difenyylimetyyliesteri , tetrahydropyraanies-teri, tetrahydrofuraaniesteri, metoksietoksimetyyliesteri tai bentsyylioksimetyyliesteri tai muu yleisesti tunnettu karboksisuojausryhmä, esimerkiksi esteri, joka muodostaa 10 suojausryhmiä, joissa suojauksen poisto tapahtuu hydrogeno-lyysillä tai happokatälyysillä (Greene, T.W. ja Wuts, P.G.M. teoksessa Protective Groups in Organic Synthesis, 2. painos, Wiley-Interscience, 1990).
Kun Pr1 ja/tai Pr2 on bentsyylioksikarbonyyliryhmä, 15 suojauksen poisto tapahtuu suositeltavasti hydrogenaatiol-la. Sellainen hydrogenaatio voidaan suorittaa millä tahansa sopivalla menetelmällä, kuten platinan tai Raneyn nikkelin läsnä ollessa, mutta se suoritetaan suositeltavasti käyttäen palladiumia hiilen läsnä ollessa. Hydrogenaatio suorite-20 taan suositeltavasti inertin liuottimen läsnä ollessa, suositeltavasti ei-protonisen liuottimen, erikoisesti etyyli- i ,· * asetaatin, tetrahydrofuraanin tai polaarisen aproottisen : liuottimen, kuten dimetyyliformamidin, läsnä ollessa; suo- siteltavasti lämpötilassa 0 - 100 °C, suositeltavammin läm-25 pötilassa 15 - 50 °C ja erikoisesti ympäristölämpötilassa; ·, ja suositeltavasti 1-24 tunnin ajan.
t Kun Pr1 ja/tai Pr2 on t-butyylioksikarbonyyliryhmä, suojauksen poistoreaktio suoritetaan suositeltavasti hapon, , suositeltavasti vahvan hapon, kuten trifluorietikkahapon, - · · ; 30 HCl:n, HBr:n, Hirn tai muurahaishapon, läsnä ollessa. Kun halutaan käyttää liuotinta, inertit ei-protoniset liuotti-·.· met, kuten CH2CI2 tai dietyylieetteri, ovat suositeltavia.
..j Reaktio suoritetaan suositeltavasti lämpötilassa 0 - 100 °C, suositeltavammin 0 - 30 °C ja erikoisesti ympäris- ·' 35 tölämpötilassa.
10 115048
Kaavan Ia mukaiset yhdisteet (kuten tässä on aiemmin määritelty) ja niiden suolat ovat uusia.
Esillä olevan keksinnön lisäominaisuuden mukaisesti esitetään menetelmä kaavan Ia mukaisten yhdisteiden, jossa 5 X on 0 ja Y on 0, ja niiden suolojen valmistamiseksi, joka sisältää vaiheen, jossa annetaan kaavan s»»
D „3 fi B
\ R \_/ Ϊ y*-c~L <»>
_/ W
10 (jossa R1, R2, Rla, R2a, R3, R4, R5a, R5b, RSc ja R5d ovat sellaisia, kuten tässä on aiemmin määritelty, X on 0, Y on 0 ja L on poistuva atomi tai -ryhmä) mukaisen yhdisteen reagoida kaavan
Pr1 \* Nf^-CH-Z1 (III) • 15 (jossa Pr1 ja Z1 on, kuten tässä on aiemmin määritelty) mu-kaisen yhdisteen kanssa niin, että muodostuu kaavan Ia mu-kainen yhdiste ja, jos halutaan, muutetaan kaavan Ia mukai- • nen yhdiste sen suolaksi. L on suositeltavasti Cl, Br, I, 4-nitrofenoksi tai pentafluorifenoksi. Reaktio suoritetaan . 20 suositeltavasti liuottimen läsnä ollessa lämpötilassa '.!! -10 °C - 100 °C ja suositeltavasti 20 - 50 °C:ssa.
;· Suositeltavat reaktio-olosuhteet sisältävät reakti- on suorittamisen orgaanisen liuottimen (erikoisesti kloro-·*: formin, etyyliasetaatin, tolueenin, dimetyyliformamidin ja 25 CH2Cl2:n) läsnä ollessa suositeltavasti 5-50 °C:ssa suosi-teltavasti 1-24 tunnin ajan. Kaavan (II) mukaiset yhdis- i i » teet voidaan valmistaa esimerkiksi antamalla vastaavan fe- 11 115048 nolia sisältävän anilinosinappiryhmän reagoida joko aryyli-klooriformaatin, esimerkiksi nitrofenyyliklooriformaatin (erikoisesti 4-nitrofenyyliklooriformaatin), tai fosgeenin kanssa muodostaen näin kaavan (II) mukainen yhdiste.
5 Suositeltavat reaktio-olosuhteet sisältävät reakti on suorittamisen orgaanisen liuottimen (erikoisesti etyyliasetaatin tai kloroformin) läsnä ollessa suositeltavasti 15 - 50 °C:ssa (erikoisesti ympäristölämpötilassa) suosi teltavasti 1-10 tunnin ajan.
10 Kaavan (III) mukaiset yhdisteet, joissa W on ryhmä (2) , kuten tässä on aiemmin määritelty, voidaan valmistaa kaavan (II) mukaisista yhdisteistä, joissa W on -(C=0)-0-R6, jossa R6 on Ci-6-alkyyli-, C3-6-sykloalkyyli- tai aryyli-ryhmä (kuten on määritelty kohdassa 2), käyttäen standardi-15 olosuhteita. Suositeltavat standardiolosuhteet sisältävät reaktion typpinukleofiilien (erikoisesti ammoniakin tai primaarisen tai sekundaarisen amiinin) kanssa suositeltavasti 25 - 50 °C:ssa suositeltavasti noin 24 tunnin ajan.
Kaavan (III) mukaiset yhdisteet, joissa W on tet-20 ratsol-5-yyliryhmä, voidaan valmistaa vastaavasta nitrii- listä tunnetuilla menetelmillä, esimerkiksi sillä, jonka : ,·' ovat kuvanneet Finnegan, W.G. et ai., JACS, 8JD, 1978, 3909, | ' jota seuraa amiinin (Pr1) suojauksen poisto niin, että muo- : ,· dostuu kaavan (III) mukaiset yhdisteet, joissa W on tetrat- : 25 sol-5-yyli.
: *, Tässä on esitetty menetelmä kaavan Ia mukaisten yh disteiden ja niiden suolojen, joissa X on NH ja Y on O, valmistamiseksi, joka sisältää vaiheen, jossa kaavan
!· r,1 β1 « R
> hi a2- ? ( / N-c-° (IV) ;-i "M.
0 mukaisen yhdisteen tai sen suolan (jossa R1, R2, Rla, R2a, 1 1 5048 12 netaan reagoida kaavan (III) mukaisen yhdisteen, kuten tässä on aiemmin määritelty, kanssa niin, että muodostuu kaavan Ia mukainen yhdiste ja, jos halutaan, muutetaan kaavan Ia mukainen yhdiste sen suolaksi. Reaktio voidaan esimer-5 kiksi suorittaa orgaanisen liuottimen (suositeltavasti polaarinen aproottinen, erikoisesti CH2CI2 tai etyyliasetaatti) kanssa suositeltavasti huoneenlämpötilassa suositeltavasti noin 1-5 tunnin ajan.
Tässä esitetään menetelmä kaavan (IV) mukaisten yh-10 disteiden ja niiden suolojen valmistamiseksi, joka sisältää vaiheen, jossa annetaan kaavan (V) mukaisen yhdisteen (jossa R1, R2, Rla, R2a, R3, R4 ja R5a'd ovat, kuten tässä on aiemmin määritelty) reagoida kaavan L1-(C=0)-L2 (jossa L1 ja L2 ovat poistuvia ryhmiä) mukaisen yhdisteen kanssa niin, että 15 muodostuu kaavan (IV) mukainen yhdiste. l/in ja L2:n arvot sisältävät Cl:n, CCl3:n, imidatsolyylin ja aryylioksin (erikoisesti fenoksin). Suositeltavat reaktio-olosuhteet sisältävät reaktion suorittamisen orgaanisen liuottimen (suositeltavasti polaarinen aproottinen, erikoisesti etyy-20 liasetaatti) läsnä ollessa 5-25 °C:ssa noin 15 minuutin aj an.
. * 1
: ·; R R
’ ^ (V) \>-^ >=( . : o4 i svc
*. CT K
Esillä olevan keksinnön lisäominaisuuden mukaisesti esitetään menetelmä kaavan (Ia) mukaisten yhdisteiden ja ‘ 25 niiden suolojen, kuten tässä on aiemmin määritelty, joissa ,·. : X on -CH2- ja Y on O, valmistamiseksi, joka sisältää vai- * » _ heen, jossa kaavan (II) mukaisen yhdisteen tai sen suolan, kuten tässä on aiemmin määritelty, sillä edellytyksellä, ’ *,· että X on -CH2-, Y on O ja L on suositeltavasti pentafluo- c'*: 30 rifenoksi, Cl, -O-(CO)-Ci-e-alkyyli, joka on suositeltavasti 13 115048 haaroittunut alkyyli, erikoisesti Ci-4-alkyyli, ja vastaavan fenyylietikkahapon tuote, joka sisältää anilinosinappia, jonka on annettu reagoida karbodi-imidin (erikoisesti di-sykloheksyylikarbodi-imidin) kanssa, annetaan reagoida kaa-5 van (III) mukaisen yhdisteen, kuten tässä on aiemmin määritelty, kanssa käyttäen standardeja reaktio-olosuhteita (esimerkiksi suorittamalla reaktio polaaristen aproottisten liuottimien, kuten dimetyyliformamidin, etyyliasetaatin tai tetrahydrofuraanin läsnä ollessa 1-24 tunnin ajan 20 -10 50 °C:ssa) niin, että muodostuu kaavan (Ia) mukainen yhdis te ja, jos halutaan, muutetaan kaavan (Ia) mukainen yhdiste sen suolaksi. Kaavan (II) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa käyttäen standardimenetelmiä vastaavista fenyy-lietikkahapoista, jotka sisältävät anilinosinappiryhmän.
15 Tässä esitetään menetelmä tässä aiemmin määritellyn kaavan (Ia) mukaisten yhdisteiden ja niiden suolojen valmistamiseksi, joissa X on N tai O, Y on O, R1 ja R2 on Cl, Br, I tai 0S02Me (erikoisesti Cl) , Rla on H, R2a on H, R3 on H ja R4 on H, joka sisältää vaiheen, jossa annetaan kaavan 20 «e ** Pr· '-\ /T'iy 1 N-Γ 'Vx-CO-NH-CH-r' ,-' V/ <ra>
. , ho gcJ
Il · < I · t (jossa RSa"d, Pr1 ja Z1 on, kuten tässä on aiemmin määritel-,,)** ty, ja X on O tai NH) mukaisen yhdisteen reagoida joko: ha- :>>#i 25 logenoivan fosforiaineen (erikoisesti fosforipentakloridin) ,·, ; tai tionyylikloridin kanssa orgaanisen liuottimen (suosi- ' I teltavasti ei-polaarinen aproottinen, erikoisesti CH2C12) , läsnä ollessa suositeltavasti kuumentaen takaisinvirtautuk- ’ sessa 1-2 tuntia (erikoisesti 90 minuuttia); tai metyyli- 30 sulfonyylikloridin kanssa orgaanisen liuottimen (suositeltavasti polaarinen aproottinen, erikoisesti pyridiini) läs- 14 115048 nä ollessa niin, että muodostetaan kaavan (Ia) mukainen yhdiste, jossa X on O tai NH, Y on O, R1 ja R2 on Br, I, 0S02Me tai Cl, Rla on H, R2a on H, R3 on H ja R4 on H ja, jos halutaan, muutetaan kaavan (Ia) mukaiset yhdisteet niiden 5 suolaksi. Kun käytetään metyylisulfonyylikloridia, kaavan (XIX) mukaisen yhdisteen hydroksiryhmät voidaan muuttaa joko Cl:ksi ja/tai 0S02Me:ksi riippuen reaktiossa käytetystä lämpötilasta. Diklooriyhdisteet (se on R1 = R2 = Cl) voidaan helposti saada aikaan suorittamalla reaktio 70 °C:ssa 10 15 minuutin ajan; ja vastaava yhdiste, jossa R1 = Cl ja R2 = 0S02Me, voidaan saada aikaan helposti suorittamalla reaktio 50 °C:ssa 10 minuuttia.
Kun R1 ja R2 on Br ja R1 ja R2 on I, metaanisulfo-nyylikloridi korvataan suositeltavasti metaanisulfonyylian-15 hydridillä, koska tämä poistaa kaikki ongelmat, jotka johtuvat kilpailevasta halogeenista reaktiossa. Kaavan XIX mukainen yhdiste (0,002 M) liuotettiin CHCl3:iin (30 ml). Lisättiin trietyyliamiinia (1,12 ml) ja metyylisulfonyylian-hydridiä (0,008 M) ympäristölämpötilassa, seosta sekoitet-20 tiin kaksi tuntia ja sitten pestiin vedellä. Näin saatu tuote kuivattiin MgS04:n yllä, suodatettiin ja haihdutet- i tiin öljyksi. Öljy liuotettiin vedettömään DMF:ään ja li- sättiin litiumjodidia (tai -bromidia, 0,005 M), sekoitet- * * tiin 80 °C:ssa kaksi tuntia, jäähdytettiin, kaadettiin ve- • · .···. 25 teen ja uutettiin eetterillä. Näin saatu tuote kuivattiin : MgS04:n yllä, suodatettiin, haihdutettiin kuivaksi ja puh- • · · [·'.* distettiin nopealla pylväskromatografiällä.
« * ·
Kaavan (XIX) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa antamalla kaavan *>· * » * · * · * · · * » t * » · 15 115048 5α. bTb ίΖ β °2 ^ y— ^ Υ\ (ΧΧ) ί- ' 4ίί β Ρ.
(jossa RSa'd on, kuten tässä on aiemmin määritelty, ja R* on -N=C=0 tai -O-CO-L, jossa L on tässä aiemmin määritelty 5 poistuva ryhmä) mukaisen yhdisteen reagoida tässä aiemmin määritellyn kaavan (III) mukaisen yhdisteen kanssa saaden kaavan Λ. „ Λ R_* pj // \\ Ϋ — co — N H e.** ΟχΝ—(/ η Ä (XXI) l- ' iU β (jossa RSa"d, Pr1 ja Z1 on, kuten tässä on aiemmin määritel-’ 10 ty, ja X on O tai NH) mukainen yhdiste. Näin saatu yhdiste : * hydrogenoidaan (suositeltavasti palladium-hiilen läsnä ol- *. *: lessa) saaden kaavaa (XXI) vastaava yhdiste, mutta jossa on -NH2 -N02:n asemesta. Näin saadun yhdisteen annetaan rea- ♦ * '·/· .* goida etyleenioksidin kanssa happamissa vesipohjaisissa ! 15 olosuhteissa (suositeltavasti etikkahappo/vesi, 1:1) suosi teltavasti 1-2 vuorokauden ajan suositeltavasti ympäris-tölämpötilassa niin, että muodostuu kaavan (XIX) mukainen « t I ! » ,··, yhdiste. Esimerkki menetelmästä on esitetty kaaviossa 5.
* · '·* Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden, joissa W on tet-
♦ I
* * · *: 20 ratsol-5-yyliryhmä, valmistusmenetelmä sisältää vaiheen, ’ jossa annetaan kaavan i i » i » ' » » * = · 16 115048
NHX
t nti H00C.— CH—2. (xviii) (jossa Z1111 on tässä aiemmin määritelty Z sillä edellytyksellä, että W on tetratsol-5-yyliryhmä) mukaisen yhdisteen reagoida tässä aiemmin määriteltyjen kaavan (II) mukaisten 5 yhdisteiden kanssa standardiolosuhteissa niin, että muodostuu kaavan I mukainen yhdiste, jossa W on tetratsol-5-yyliryhmä ja, jos halutaan, muutetaan kaavan I mukainen yhdiste sen suolaksi. Standardiolosuhteet sisältävät reaktion polaarisessa aproottisessa liuottimessa (erikoisesti DMF) 10 emäksen (suositeltavasti dimetyyliaminopyridiini, erikoisesti trietyyliamiini) läsnä ollessa ainakin kaksi tuntia (suositeltavasti 20 tuntia) 20 - 50 °C:een lämpötilassa (erikoisesti 25 °C:ssa). Kaavan (XVIII) mukaiset yhdisteet tunnetaan (saatavana tuottajalta Sigma Chemical Co.) tai ne 15 voidaan valmistaa tunnetuista yhdisteistä standardimenetelmillä.
Esilääkkeiden ja lääkkeiden sytotoksinen vahvuus in vitro
Esilääkkeiden, esilääkkeiden plus entsyymin ja lääk- * · ,1 l 20 keiden sytotoksinen vahvuus in vitro mitattiin sytotok- • t · \ ·] sisuustestillä, joka oli samanlainen kuin se, jonka ovat ** *·' kuvanneet Skehan et ai. (J. Natl. Cancer Inst. 82, 1107 - 1112, 1990). LoVo-solut (ECACC numero 87060101) laimennet- ·,: * tiin DMEM-alustaan (joka sisälsi 10 % FCS:ia, 1 % glutamii- ! 25 nia ja 0,2 % gentamysiiniä), maljattiin 96-kuoppaisille mikrotiitterilevyille tiheyteen 2 500 solua/kuoppa ja inku-· boitiin yli yön 37 °C:ssa 5 % C02:ssa. Näille soluille li- * 1 t » sättiin eri konsentraatiot esilääkettä, vastaavaa lääkettä • · » * * ,* t verrokiksi ja esilääkettä plus entsyymiä (1 U CPG2- » * · ’· 30 aktiivi suut ta/kuoppa - yksi yksikkö entsyymiä on se määrä, ’ ‘ joka tarvitaan hydrolysoimaan 1 μπιοοίχ metotreksaat- tia/min/ml 37 °C:ssa) ja joko 1 tai 24 tunnin inkubaation jälkeen solut pestiin, lisättiin tuoretta alustaa ja soluja inkuboitiin 37 °C:ssa 5 % CCbrssa. Kolme vuorokautta yhdis- 17 115048 teen lisäyksen jälkeen kuoppiin lisättiin TCA:ta (loppukon-sentraatioksi 16 %) ja levyille kiinnittyneen soluproteii-nin määrä arvioitiin lisäämällä SRB-väriä (Skehan et ai.). Mitattiin optinen tiheys 540 nm:ssa ja se ilmaistiin OD540-5 prosenttina verrokkikuopista, joihin ei lisätty yhdistettä. Vahvuus ilmaistiin sinä konsentraationa, joka tarvittiin inhiboimaan solukasvu 50 %:lla (IC50) . Esilääkkeen yksinään tulisi sisältää matala aktiivisuus testissä verrattuna esi-lääkkeeseen yhdessä CPG2-entsyymin kanssa (se tarkoittaa, 10 että CPG2-entsyymi on tarpeellinen esilääkkeen aktivoimiseksi lääkkeeksi). Kemiallisesti syntetisoidun lääkkeen (joka ei tarvi CPG2-aktivaatiota) suora lisäys toimii testissä verrokkina.
Käyttäen yllä kuvattua menetelmää arvioitiin kek-15 sinnössä testatut edustavat yhdisteet ja niiden havaittiin sisältävän ainakin 10 kertaa suuremman aktiivisuussuhteen CPG2-entsyymin läsnä ollessa verrattuna aktiivisuuteen silloin, kun CPG2-entsyymiä ei ollut läsnä, yhden tunnin kuluttua, joka näin osoitti ja varmisti keksinnön mukaisella 20 menetelmällä valmistettujen yhdisteiden tehokkaan käyttökelpoisuuden .
• Tässä esitetään myös farmaseuttiset koostumukset,
: jotka sisältävät esilääkeainesosana ainakin jonkin kaavan I
mukaisen yhdisteen tai mainitun yhdisteen fysiologisesti > 25 hyväksyttävän suolan yhdessä farmaseuttisesti hyväksyttävän ; .·. kantajan tai laimentimen kanssa. Koostumus sisältää suosi- * · teltavasti tehokkaan määrän esilääkettä CPG-kasvain- * » selektiivisen vasta-ainekonjugaatin (suositeltavasti CPG2) kanssa käytettäväksi, joka on jo paikantunut kasvaimeen.
1 · · '"· 30 Esitämme myös steriilit farmaseuttiset koostumukset injektiota varten, jotka sisältävät esilääkeainesosana ai-nakin jonkin kaavan I mukaisen yhdisteen tai mainitun yh-disteen fysiologisesti hyväksyttävän suolan yhdessä farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan tai laimentimen kans- * » · : 35 sa. Koostumus sisältää suositeltavasti tehokkaan määrän ' * esilääkettä.
18 115048
Lisäksi esitämme kaksikomponenttisysteemin kummankin komponentin ollessa käytettävissä yhdessä toisen kanssa, joka sisältää: i) ensimmäisen komponentin, joka on vasta-aine tai 5 sen fragmentti, joka kykenee sitoutumaan annettuun antigeeniin, vasta-aineen tai sen fragmentin ollessa konjugoitu CPG-entsyymiin (suositeltavasti karboksipeptidaasi G2 -entsyymiin), joka kykenee muuttamaan kaavan I mukaisen yhdisteen tai sen fysiologisesti hyväksyttävän suolan syto- 10 toksiseksi lääkkeeksi; ja ii) toisen komponentin, joka on kaavan I mukainen yhdiste tai sen fysiologisesti hyväksyttävä suola, joka on muutettavissa CPG-entsyymin (suositeltavasti karboksipeptidaasi G2 -entsyymin) vaikutuksesta sytotoksiseksi lääkkeek- 15 si.
Vasta-aine tai sen fragmentti kykenee suositeltavasti sitoutumaan kasvaimeen liittyvään antigeeniin.
Tietty vasta-aine, joka kykenee sitoutumaan kasvaimeen liittyvään antigeeniin, on hiiren monoklonaalinen 20 vasta-aine A5B7. Vasta-aine A5B7 sitoutuu ihmisen karsi-noembryonaaliseen antigeeniin (CEA) ja se on erikoisen so-: : piva paksu-peräsuolikarsinooman kohdennukseen. A5B7-vasta- ainetta on saatavissa tuottajalta DAKO Ltd., 16 Manor Cour- ;'>(j tyard, Hughenden Avenue, High Wycombe, Bucks HP13 5RE, Eng- • 1 ,·1, 25 lanti, Yhdistynyt kuningaskunta. Vasta-ainefragmentit voi- ; daan valmistaa kokonaisesta IgG-vasta-aineesta tavanomaisin • ► · menetelmin, kuten esimerkiksi F (ab') 2-fragmentteina, kuten ovat kuvanneet Mariani, M. et ai. (1991), Molecular Immuno-logy 2_8, 69 - 77. Vasta-aine-entsyymikonjugaatin (tai vas- *<>: 30 ta-ainefragmentti-entsyymikonjugaatin) tulisi yleensä olla ainakin divalentti, se tarkoittaa, kykenevä sitoutumaan ai- » nakin kahteen kasvaimeen liittyvään antigeeniin (jotka voi- • · vat olla samoja tai erilaisia). Vasta-ainemolekyylit voi-daan humaanistaa tunnetuilla menetelmillä, kuten esimerkik- * t « : 35 si "CDR-siirrolla", kuten on kuvattu julkaisussa > f 1 1 · EP-239 400, tai siirrostamalla kokonaiset variaabelialueet 19 115048 ihmisen vakioalueisiin, kuten on kuvattu julkaisussa US-4 816 567. Humaanistetut vasta-aineet voivat olla käyttökelpoisia alentamaan vasta-aineen (tai vasta-ainefrag-mentin) immunogeenisyyttä. Vasta-aineen A5B7 humaanistettu 5 muoto on julkaistu julkaisussa PCT-WO-92/01 059.
Hybridooma, joka tuotti monoklonaalista vasta-ainetta A5B7, talletettiin kokoelmaan European Collection of Animal Cell Cultures, Division of Biologies, PHLS Centre for Applied Microbiology and Research, Porton Down, Salis-10 bury, Wiltshire SP4 OJG, Yhdistynyt kuningaskunta. Talle-tuspäivämäärä oli 14.7.1993 ja koodinumero on 93071411. Vasta-ainetta A5B7 voidaan saada talletetusta hybridoomasta käyttäen alalla tunnettuja standardimenetelmiä, kuten ovat julkaisseet Fenge C., Fraune, E. & Schuegerl, K. teoksessa 15 "Production of Biologicals from Animal Cells in Culture" (Spier, R.E., Griffiths, J.R. & Meignier, B., toim.), But-terworth-Heinemann, 1991, 262 - 265, ja Anderson, B.L. &
Gruenberg, M.L. teoksessa "Commercial Production of Monoclonal Antibodies" (Seaver, S. toim.), Marcel Dekker, 1987, 20 175 - 195. Solut voivat tarvita jatkokloonauksen ajoittain rajoitetulla laimennuksella vasta-ainetuoton hyvien tasojen > i ί^ί ylläpitämiseksi.
: ’': ADEPT-terapiassa käyttökelpoiset muut vasta-aineet * | on kuvattu seuraavasti. Vasta-aineen BW 431/26 kuvasivat i · .2 5 Haisma, H.J. et ai., Cancer Immunol. Immunother., 34, 343 -• · ; , ·, 348 (1992) . Vasta-aineet L6, 96.5 ja 1F5 kuvattiin * t « /!,' EP-patentissa 302 473. Vasta-aine 16.88 kuvattiin Kansain välisessä patenttihakemuksessa WO-90/07 929. Vasta-aine B72.3 kuvattiin EP-patentissa numero 392 745. Vasta-aine s » · 30 CEM231 kuvattiin EP-patentissa numero 382 411. Vasta-aineet HMFG-l ja HMFG-11 (Unipath Ltd., Basingstoke, Hants, Yhdis- * tynyt kuningaskunta) reagoivat musiinin kaltaisen glykopro- * · teiinimolekyylin kanssa maitorasvapallosten membraaneilla ja niitä voidaan käyttää rinta- ja munasarjasyöpien kohden- * » > ** 35 nuksessa. Vasta-aine SM3 (Chemicon International Ltd., Lon- 1 too, Yhdistynyt kuningaskunta) reagoi musiinin ydinproteii- 20 115048 nin kanssa ja sitä voidaan käyttää rinta- ja munasarjasyöpien kohdennuksessa. Vasta-aineet 85A12 (Unipath Ltd., Basingstoke, Hants, Yhdistynyt kuningaskunta) ja ZCEA1 (Pierce Chemical Company, Chester, Yhdistynyt kuningaskun-5 ta) reagoivat kasvainantigeenin CEA kanssa. Vasta-aine PR4D1 (Serotec, Oxford, Yhdistynyt kuningaskunta) reagoi paksusuolen kasvaimeen liittyvän antigeenin kanssa. Vasta-aine E29 (Dako Ltd., High Wycombe, Yhdistynyt kuningaskunta) reagoi epiteelimembraanin antigeenin kanssa. Vasta-aine 10 C242 on saatavissa tuottajalta CANAG Diagnostics, Göteborg,
Ruotsi.
ADEPT-terapiassa käyttökelpoiset vasta-aineet menevät yleisesti huonosti sisään niihin kasvainsoluihin, jotka ne tunnistavat. Tämä sallii kohdennetun esilääkettä akti-15 voivan entsyymin olevan läsnä solun pinnalla ja näin muodostavan aktiivisen lääkkeen verenkierrossa kiertävästä esilääkkeestä kasvaimen kohdalla. Vasta-aineen sisäänottoa soluun voidaan testata tunnetuilla menetelmillä, esimerkiksi sellaisella, jonka ovat kuvanneet Jafrezou et ai., Can-20 cer Research 5_2, 1352 (1992) ja Press et ai., Cancer Re search 48, 2249 (1988).
> » : : CPG2-entsyymin suurimittakaavainen puhdistus Pseu- domonas RS-16 -kannasta kuvattiin julkaisussa Sherwood et j ai. (1985), Eur. J. Biochem., 148, 447 - 453. CPG-entsyy- 25 miin liitettävien F(ab1)2- ja IgG-vasta-aineiden valmistus » J » • , voidaan suorittaa tunnetuilla tavoilla ja sen on kuvattu esimerkiksi julkaisussa PCT-WO-89/10 140. CPG-entsyymi voi- » · daan saada kokoelmasta Centre for Applied Microbiology and Research, Porton Down, Salisbury, Wiltshire SP4 OJG, Yh- 1 * t 30 distynyt kuningaskunta. CPG2-entsyymi voidaan myös saada yhdistelmä-DNA-menetelmillä. CPG2-entsyymiä koodittavan ;\j nukleotidisekvenssin ovat julkaisseet Minton, N.P. et ai., ,,: Gene 3_1 (1984), 31 - 38. Koodittavan sekvenssin ekspressio E. coli -bakteerissa (Chambers, S.P. et ai., Appi. Micro- ; ·’ 35 biol. Biotechnol. (1988), 29, 572 - 578) ja Saccharomyces • · cerevisiae -hiivassa (Clarke, L.E. et ai., J. Gen. Micro- 21 115048 biol. (1985), 131, 897 - 904) on julkaistu. Geenin koko- naissynteesin on kuvannut M. Edwards julkaisussa Am. Biotech. Lab. (1987), 5, 38 - 44. Heterologisten proteiinien ekspressiosta E. coli -bakteerissa ovat tehneet yhteenvedon 5 F.A.O. Marston julkaisussa DNA Cloning, osa III, Practical Approach Series, IRL Press (toimittaja D.M. Glover), 1987, 59 - 88. Proteiinien ekspressiosta hiivassa on tehty yh teenveto teoksessa Methods in Enzymology, osa 194, Academic Press 1991, toimittaneet C. Guthrie ja G.R. Fink.
10 CPG-entsyymi on saatavissa tuottajalta Sigma Chemi cal Company, Fancy Road, Poole, Dorset, U.K. CPG-entsyymi kuvattiin julkaisuissa Goldman, P. ja Levy C.C., PNAS USA 58, 1299 - 1306 (1967) ja Levy, C.C. ja Goldman P. , J.
Biol. Chem., 242, 2933 - 2938 (1967). Karboksipeptidaasi G3 15 -entsyymin ovat kuvanneet Yasuda, N. et ai., Biosci. Biotech. Biochem., 56, 1536 - 1540 (1992). Karboksipeptidaasi G2 -entsyymi on kuvattu EP-patentissa 121 352.
Menetelmä sytotoksisen lääkkeen kuljettamiseksi kohtaan sisältää vaiheet, joissa annetaan isännälle ensim-20 mäinen komponentti, joka sisältää vasta-aineen tai sen fragmentin, joka kykenee sitoutumaan annettuun antigeeniin, :s vasta-aineen tai sen fragmentin ollessa konjugoitu CPG-ent- ; syymiin (suositeltavasti karboksipeptidaasi G2 -entsyy- miin) , joka kykenee muuttamaan kaavan I mukaisen yhdisteen • · .25 tai sen fysiologisesti hyväksyttävän suolan sytotoksiseksi ; *, lääkkeeksi; jonka jälkeen isännälle annetaan toinen kompo- * * ( ·’ nentti, joka sisältää kaavan I mukaisen yhdisteen tai sen • · fysiologisesti hyväksyttävän suolan, joka on muutettavissa , CPG-entsyymin (suositeltavasti karboksipeptidaasi G2 -ent- • · ; 30 syymin) vaikutuksesta sytotoksiseksi lääkkeeksi.
Kohta, johon sytotoksinen lääke kuljetetaan, on ·,· suositeltavasti kasvainsolut, jotka ovat yleisesti läsnä I kasvaimen sisältävässä nisäkäsisännässä, kuten ihmisessä.
Kun mainittu ensimmäinen komponentti annetaan kas-35 vainta sisältävälle isännälle, konjugaatin vasta-aine- tai • < » * 22 115048 vasta-ainefragmenttiosa ohjaa konjugaatin kasvaimen kohtaan ja sitoo konjugaatin kasvainsoluun.
Kun sitoutumaton konjugaatti on oleellisesti poistettu hoidettavasta isännästä, esimerkiksi siten, että an-5 netaan sopivan ajanjakson kulua tai nopeutetulla poistolla, esimerkiksi kuten on kuvattu julkaisussa Br. J. Cancer (1990), 61, 659 - 662, isännälle voidaan antaa toinen kom ponentti. On erittäin suositeltavaa poistaa sitoutumaton konjugaatti isännästä oleellisesti ennen toisen komponentin 10 antoa, koska muuten sytotoksinen lääke voi muodostua muualla kuin kasvaimen kohdalla johtaen näin yleiseen isännän vastaiseen toksisuuteen mieluummin kuin kohtaspesifiseen toksisuuteen.
Esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistettuja 15 yhdisteitä voidaan käyttää koostumuksissa, kuten tableteissa, kapseleissa tai eliksiireissä suun kautta antoa varten, peräpuikoissa peräsuolen kautta antoa varten, steriileissä liuoksissa tai suspensioissa parenteraalista tai lihaksen sisäistä antoa varten, ja niiden kaltaisissa koostumuksis-2 0 sa.
Esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistetut yh-!(i|l disteet voidaan antaa sellaisen hoidon tarpeessa oleville potilaille (eläimet ja ihmiset) annoksina, jotka antavat optimaalisen farmaseuttisen tehokkuuden. Vaikka annos voi » · 25 vaihdella potilaasta toiseen riippuen taudin luonteesta ja : ·, vakavuudesta, potilaan painosta, potilaan tällöin noudatta- ' · masta erikoisruokavaliosta, samanaikaisesta lääkityksestä ja muista tekijöistä, jotka alan asiantuntija tietää, an- , nosrajat ovat yleisesti välillä noin 1 - 150 mg per kg po- 1 1' · 30 tilasta per vuorokausi, joka voidaan antaa yksittäisenä tai t useana annoksena. Annosrajat ovat suositeltavasti noin 10 -·,· 75 mg per kg per potilas per vuorokausi, suositeltavammin noin 10 - 40 mg per kg per potilas per vuorokausi.
Nämä annosrajat voidaan luonnollisesti säätää tar-·* 35 peen mukaan yksikkömuotoon jaetun päiväannoksen antamiseksi ‘ ja, kuten yllä on huomautettu, annos riippuu taudin luon- 23 115048 teestä ja vakavuudesta, potilaan painosta, erikoisruokavaliosta ja muista tekijöistä.
Nämä annokset voidaan tyypillisesti formuloida farmaseuttisiksi koostumuksiksi, kuten alla on kuvattu.
5 Noin 50 - 500 mg kaavan I mukaista yhdistettä tai sen fysiologisesti hyväksyttävää suolaa tai kaavan I mukaisten yhdisteiden seosta tai niiden fysiologisesti hyväksyttävien suolojen seosta yhdistetään fysiologisesti hyväksyttävän vehikkelin, kantajan, täyteaineen, sitojan, säilö löntäaineen, stabiloijan, makuaineen, jne., kanssa yksikkö-annosmuodoksi hyväksytyn farmaseuttisen käytännön mukaisesti. Aktiivisen aineen määrä näissä koostumuksissa tai valmisteissa on sellainen, että saadaan aikaan osoitetuissa rajoissa oleva sopiva annos.
15 Kuvaavat adjuvantit, joita voidaan sisällyttää tab- letteihin, kapseleihin ja niiden kaltaisiin, ovat seuraa-via: sitoja-aine, kuten traganttikumi, akaasiakumi, maissi-tärkkelys tai gelatiini; täyteaine, kuten mikrokiteinen selluloosa; disintegroiva aine, kuten maissitärkkelys, esi-20 gelatinisoitu tärkkelys, algiinihappo ja niiden kaltaiset; liukastusaine, kuten magnesiumstearaatti; makeutusaine, ku- ‘t ten sakkaroosi, laktoosi tai sakkariini; makuaine, kuten piparminttu, gaulteriöljy tai kirsikkaöljy. Kun annosyksik-kömuoto on kapseli, se voi sisältää yllä olevien materiaa- • i 25 lityyppien lisäksi nestemäisen kantajan, kuten rasvaöljyn.
: 1. Useita muita erilaisia materiaaleja voi olla läsnä päällys- . teinä tai muuten modifioimassa annosyksikön fysikaalista ' 9 muotoa. Tabletit voidaan esimerkiksi päällystää sellakalla, sokerilla tai molemmilla. Siirappi tai eliksiiri voi sisäl- I 9 · 30 tää aktiivisen yhdisteen, sakkaroosin makeutusaineena, » » 9 etyyli- tai propyyliparabeenit säilöntäaineina, väri- ja » ’· j makuaineen, kuten kirsikka- tai appelsiinimaun.
* 9
Kuten yllä on keskusteltu, kaavan I mukaiset yhdisteet ja niiden fysiologisesti hyväksyttävät suolat kuin * · 35 myös yllä viitatut konjugaatit voidaan antaa käyttäen ta- vanomaisia antotapoja sisältäen, mutta ei rajoittuen, suo- 24 115048 nensisäisen, vatsaontelonsisäisen, suun kautta, imunesteen-sisäisen annon tai annon suoraan kasvaimeen. Suonensisäinen anto on suositeltava, esimerkiksi suonensisäinen infuusio.
Steriilit koostumukset inhektiota tai infuusiota 5 varten voidaan formuloida tavanomaisen farmaseuttisen käytännön mukaisesti liuottamalla tai suspendoimalla aktiivinen aine vehikkeliin, kuten veteen injektiota varten, luonnossa esiintyvään kasviöljyyn, kuten seesamiöljyyn, kookos-pähkinäöljyyn, maapähkinäöljyyn, puuvillan siemenöljyyn, 10 jne., tai synteettiseen rasvavehikkeliin, kuten etyyliole-aattiin tai sen kaltaiseen. Puskureita, säilöntäaineita, antioksidantteja ja niiden kaltaisia voidaan lisätä tarvittaessa. Suositeltavat steriilit koostumukset injektiota tai infuusiota varten, jotka on formuloitu tavanomaisen far-15 maseuttisen käytönnön mukaisesti, sisältävät esilääkkeen liuottamisen vehikkeliin, kuten veteen, joka vaihtoehtoisesti sisältää suoloja, sokeria (erikoisesti dekstraania), puskuroivia aineita ja/tai lisäliuottimia (erikoisesti po-lyetyleeniglykolia, propyleeniglykolia tai dimetyyli-20 isosorbidia).
Erään suoritustavan mukaisesti kaavan I mukainen : l yhdiste esitetään vapaan hapon muodossa, joka voidaan sit- Γ ten formuloida parenteraalista antoa varten olevaksi muo- J doksi juuri ennen antoa potilaalle. Näin ollen vapaan hapon * · 25 muodossa oleva kaavan I mukainen yhdiste voidaan esimerkik- * * .* ·, si sekoittaa puskuriin, jossa se muuttuu fysiolofisesti hy- * · . väksyttäväksi suolaksi juuri ennen antoa.
* ·
Esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistetun yhdisteen suositeltava annosyksikkömuoto sisältää kaavan I
> · · 30 mukaisen yhdisteen tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan ampullissa steriilissä jäädytyskuivatussa muodossa, :\j joka voidaan muodostaa uudelleen injektoitavaksi/infu- soitavaksi liuokseksi. Ampulli sisältää suositeltavasti 500 mg - 2 g (erikoisesti 1 g) mainittua yhdistettä.
*" 35 Seuraavat esimerkit kuvaavat kaavan I mukaisten yh- ‘ * disteiden valmistusta ja niiden sisällyttämistä farmaseut- 25 115048 tisiin koostumuksiin ja niitä ei sellaisenaan pidä pitää keksintöä rajoittavina. Esimerkeissä, jollei muutoin ole ilmoitettu, seuraavat kohdat olivat standardimenetelmiä: i) Kaikki haihdutukset suoritettiin pyöröhaihdutta-5 jassa tyhjiössä ja suoritusmenetelmät suoritettiin sen jälkeen, kun jäljelle jäänyt kiinteä aine oli poistettu suodattamalla; ii) suoritukset tehtiin huoneenlämpötilassa, se tarkoittaa 18 - 25 °C välillä ja inertin kaasun, kuten ar- 10 gonin, alla; iii) pylväskromatografia (nopealla menetelmällä) suoritettiin Merck Kieselgel -silikalla (tuote 9385), joka hankittiin tuottajalta E. Merck, Darmstadt, Länsi-Saksa; iv) saannot on annettu ainoastaan kuvaavia tarkoi-15 tuksia varten eivätkä ne välttämättä ole suurimpia mahdollisia saatavissa olevia; v) kaavan I mukaisilla lopputuotteilla oli tyydyttävät mikroanalyysit ja niiden rakenteet varmistettiin NMR:llä ja massapektrimenetelmillä; 20 vi) välimuotoja ei yleisesti karakterisoitu täydel lisesti ja puhtaus arvioitiin ohutkerroskromatografia-, ,ί infrapuna (IR) - tai NMR-analyysillä; ; : vii) sulamispisteet ovat korjaamattomia ja ne mää- ,· ritettiin käyttäen öljyhaudelaitetta; kaavan I mukaisten ; 25 lopputuotteiden sulamispisteet määritettiin sen jälkeen, ’ ·. kun ne oli kiteytetty tavanomaisesta orgaanisesta liuotti- mesta, kuten etanolista, metanolista, asetonista, eetteristä tai heksaanista, yksinään tai seoksena.
, Esimerkki 1 ;; 30 N-(4-[Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli) amino]-fenoksikarbo- nyyli) -L-glutamiinihappo
Liuosta, jossa oli dibentsyyli-N- (4-[Ν,Ν-bis (2-..j kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyyli)-L-glutamaattia (katso kohta (2) kaaviossa 1) (6 g) etyyliasetaatissa (100 ml) , 35 hydrogenoitiin 30 % palladium-hiilen (0,6 g) yllä kaksi * tuntia. Kun teoreettinen määrä vetyä oli kulutettu, kata- I ► · 26 115048 lyytti poistettiin suodattamalla ja suodos haihdutettiin kuivaksi. Jäännös otettiin kuumaan eetteriin (25 ml) ja lisättiin heksaania, kunnes seos muuttui sameaksi. Jäähdytettäessä saatiin N-(4-[N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]fenok-5 sikarbonyyli)-L-glutamiinihappo (katso kohta (3) kaaviossa 1) valkoisena kiteisenä kiinteänä aineena (3,4 g) saanto 79 %, sp. 87 - 89 °C. NMR 7,0 (d) 2H; 6,6 (d) 2H; 6,2 (d) 1H; 4,4 (m) 1H; 3,5 - 3,7 (m) 8H; 2,0 - 2,6 (m) 4H.
Alkuaineanalyysi - odotettu C = 47,2, H = 4,95, N = 6,88 10 löydetty C = 47,5, H = 5,1, N = 6,7.
Otsikon yhdiste valmistettiin myös erilaisena poly-morfisena muotona, joka ei ollut eetteriin liukeneva, jonka sulamispiste oli 128 - 130 °C.
Lähtömateriaali dibentsyyli-N-(4-[Ν,Ν-bis(2-kloori-15 etyyli)amino]fenoksikarbonyyli)-L-glutamaatti valmistettiin, kuten on kuvattu alla.
Liuos, jossa oli 4-nitrotenyyliklooriformaattia (1,43 g) kloroformissa (15 ml), lisättiin seokseen, jossa oli 4-[bis-(2-kloorietyyli)amino]fenolihydrokloridia 20 [Biochem. Pharmacol. 17, 893 (1968)] (1,93 g), trietyyli- amiinia (2 ml) ja kloroformia (20 ml). Kun oli pidetty kak-si tuntia ympäristölämpötilassa, seos haihdutettiin kuivak-: si ja jäännös kromatografoitiin Merck-silikageelissä, jonka tuotenumero on 9385. Kun eluoitiin heksaani/etyyliasetaat- * * 25 tiliuoksella ja kiteytettiin uudelleen bentseeni:pet-rolieetteriliuoksesta (3:1), tuote O-(4-[Ν,Ν-bis(2-kloori- « i » etyyli) amino] fenyyli)-O 1 - (4-nitrofenyyli) karbonaatti [katso t * t kohta (1) kaaviossa 1] saatiin kellertävänä kiinteänä ai-, neena (1,4 g) (50 %), sp. =66-7 °C.
*;;; 30 5,5 g:aan näin saatua tuotetta, joka oli klorofor- t * missä (40 ml), lisättiin trietyyliamiinia (3,8 ml), jonka jälkeen lisättiin L-glutamiinihappo-dibentsyyliesteritosy- 1 · laattia (13,75 g). Seosta sekoitettiin ja kuumennettiin 60 °C:ssa neljä tuntia ja haihdutettiin kuivaksi. Jäännös * 35 kromatografoitiin silikageelissä (Merck-tuotenumero 9385) • * * ja eluoitiin kloroformissa olevalla 3 % etyyliasetaatilla 27 115048 saaden 6,2 g tarvittavaa lähtömateriaalia dibentsyyli-2-([bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyyli)glutamaattia [katso kohta (2) kaaviossa 1] (77 % saanto) valkoisena kiinteänä aineena, sp. 85 - 7 °C.
5 Esimerkki 2 N- (4- [N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]-3-metyylifenoksikarbonyyli) -L-glutamiinihappo
Esimerkin 1 menetelmä toistettiin käyttäen dibentsyyli-N- (4-[N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]3-metyylifenoksi-10 karbonyyli)-L-glutamaattia dibentsyyli-N-(4-[N,N,-bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyyli)-L-glutamaatin tilalla saaden N-(4- [N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]-3-metyylifenoksikarbonyyli) -L-glutamiinihappo valkoisena kiinteänä aineena, sp. 160 - 162 °C.
15 NMR: 7,3 (d) 2H; 6,7 (d) 2H; 6,0 (d) 1H; 4,2 (m) 1H; 3,7 (m) 8H; 2,3 - 2,0 (m) 4H.
Alkuaineanalyysi - odotettu C = 47,3, H = 5,2, N = 10,3, Cl = 17,5 löydetty C = 46,8; H = 5,2, N = 10,3, Cl = 18,0.
20 Lähtömateriaalina käytetty dibentsyyli-N-(4-[N,N- (2-kloorietyyli)amino]-3-metyylifenoksikarbonyyli)-L-gluta- » » » • ' maatti valmistettiin samalla tavalla kuin on kuvattu esi- * i merkissä 1 käyttäen 4-[N,N-bis (2-kloorietyyli) amino]-3-metyyli fenolia 4-[N,N-bis (2-kloorietyyli) amino] fenolin ti- • » .*·*. 25 lalla.
* < * : .·. 4- [N,N-bis (2-kloorietyyli) amino]-3-metyylifenoli t·;^ saatiin seuraavasti (katso kaavio 2).
(a) Etyleenioksidia (40 g) kuplitettiin liuokseen, jossa oli 4-amino-m-kresolia (12,3 g) etikkahappo/vesi- * » · 30 liuoksessa (1:1) (500 ml). Seoksen annettiin olla huoneen- ’···’ lämpötilassa 48 tuntia ja sitten se haihdutettiin kuivaksi.
Jäännös kromatografoitiin silikageelissä, eluoitiin etyyli-.;..j asetaatilla saaden 4-[N,N-bis(2-hydroksietyyli)amino]-3- metyylifenolia (6,2 g) öljynä.
35 NMR: katso taulukko 2.
28 115048 (b) Seokseen, joka sisälsi näin saatua tuotetta (6 g), kaliumhydroksidia (1,6 g) ja etanolia (40 ml), lisättiin bentsyylibromidia (4,24 g). Seosta sekoitettiin ja kuumennettiin takaisinvirtautuksella kaksi tuntia, jäähdy- 5 tettiin ja konsentroitiin haihduttamalla. Jäännös kaadettiin veteen (100 ml), uutettiin kahdesti etyyliasetaatilla, kuivattiin ja haihdutettiin saaden 2,2'-(4-bentsyylioksi-2-toluidino)dietanolia kiinteänä aineena (7,2 g), sp = 70 -72 °C.
10 NMR: taulukko 3.
(c) Kloroformissa (50 ml) olevaan näin saatuun tuotteeseen (7 g) lisättiin pieninä annoksina fosforipenta-kloridia (11,4 g) 10 - 20 °C:ssa. Sitten seosta kuumennettiin takaisinvirtautuksella 90 minuuttia, jäähdytettiin ja 15 se kaadettiin veteen. Orgaaninen faasi erotettiin ja pestiin vesipohjaisella batriumbikarbonaattiliuoksella, vedellä ja haihdutettiin kuivaksi. Jäännös kromatografoitiin si-likageelissä. Kun oli eluoitu heksaani/etyyliasetaatti-liuoksella (2:1), saatiin 2,2 g 4-bentsyylioksi-3-metyyli-20 Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)-aniliinia öljynä.
NMR: katso taulukko 4.
Il» •,,,ί Vaihtoehtoinen reaktio, jota käytetään juuri yllä j * : olevan reaktion asemesta, on seuraava. Metaanisulfonyyli- kloridia (2,5 ml) lisättiin 0-5 °C:ssa liuokseen, jossa • « 25 oli vaiheessa (b) saatua tuotetta (2,6 g) pyridiinissä (8 : ,·. ml). Sitten seosta kuumennettiin 70 °C:ssa 15 minuuttia, • · · i · · · jäähdytettiin ja se kaadettiin laimeaan sitruunahappoliuok- i * » seen (100 ml) . Seos uutettiin kahdesti etyyliasetaatilla, , kuivattiin ja haihdutettiin saaden 2,6 g (84 %) * i · ;;; 30 4-bentsyylioksi-3-metyyli-N,N-bis (2-kloorietyyli) -aniliinia öljynä.
t NMR: taulukko 4.
• (d) Näin saatuun etanolissa (25 ml) olevaan tuot teeseen (2 g) lisättiin eetterissä olevaa HCl:oa (kylläs- ! » 35 tetty), kunnes muodostui täydellinen liuos. Lisättiin 300 mg 30 % palladium-hiilikatalyyttiä ja seosta sekoitettiin * i ► · 29 115048 vedyn alla, kunnes sopiva määrä vetyä oli kulutettu. Katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodos haihdutettiin saaden 4- [Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)]amino-3-metyylifenoli-vetykloridia kiinteänä aineena (950 mg), sp. = 164 - 7 °C.
5 Esimerkki 3 N-(4- [Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)amino]- fenyylikarbamo-yyli)-L-glutamiinihappovetykloridi
Kyllästettyä liuosta, jossa oli vetykloridia eetterissä (120 ml), lisättiin liuokseen, jossa oli ditertbutyy-10 li-N- (4- [Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)amino]fenyylikarbamoyyli)-L-glutamaattia (4,4 g) etyyliasetaatissa (20 ml). Kun oli pidetty yksi tunti ympäristölämpötilassa, seos haihdutettiin saaden kiinteää ainetta. Tämä kiinteä aine trituroi-tiin eetterillä saaden N-(4-[Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli) -15 amino]fenyylikarbamoyyli)-L-glutamiinihappovetykloridia
(3,5 g) harmaana kiinteänä aineena, sp. = 148 - 150 °C
(katso kaavio 3). NMR: 7,2 (d) 2H; 6,7 (d) 2H; 4,2 (n) 1H; 3,7 (m) 8H; 2,4 - 1,8 (m) 4H.
Alkuaineanalyysi: 20 Löydetty C = 46,7, H = 6,8, N = 7,0.
Odotettu C = 47,1, H = 6,5, N = 7,5.
Lähtömateriaali ditertbutyyli-N- (4-[Ν,Ν-bis (2-kloo- • * * I' .* rietyyli) amino] fenyylikarbamoyyli)-L-glutamaatti saatiin seuraavasti: • · 25 Seosta, jossa oli p-fluorinitrobentseeniä (14,1 g) ja dietanoliamiinia (30 ml), sekoitettiin ja kuumennettiin 130 °C:ssa 2 tuntia. Seos jäähdytettiin noin 60 °C:seen ja * » * se kaadettiin 1 litraan vettä, joka sisälsi 10 ml 48 % li- , peäkiviliuosta. Kun oli jäähdytetty 15 °C:seen, saostuma « * * '| 30 suodatettiin pois ja kuivattiin saaden 2,2'- (4-nitro- anilino) dietanolia (20,7 g) (92 %) , sp. = 102 - 104 °C.
:*·.· Seokseen, jossa oli näin saatua tuotetta (20 g) , * · :·· dikloorimetaania (200 ml) ja pyridiiniä (7 ml), lisättiin tionyylikloridia (30 ml) jäähdyttäen. Lisäyksen jälkeen 1 *’ 35 seosta kuumennettiin takaisinvirtautuksella yksi tunti.
’ t 11 t Jäähdytyksen jälkeen seos laimennettiin samalla tilavuudel- 30 115048 la dikloorimetaania ja pestiin huolellisesti kahdesti vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin saaden 21 g [N,N-bis(2-kloorietyyli)-4-nitroaniliinia kiinteänä aineena, sp. = 81-3 °C.
5 Liuokseen, jossa oli näin saatua tuotetta (0,53 g) uudelleen tislatussa tetrahydrofuraanissa (20 ml), lisättiin 30 % palladium-hiilikatalyyttiä (100 mg) . Seosta sekoitettiin vedyn alla kaksi tuntia ja sitten katalyytti poistettiin suodattamalla. Suodos haihdutettiin kuivaksi ja 10 jäännös liuotettiin uudelleen eetteriin (20 ml) ja lisättiin pienenä ylimääränä liuosta, jossa oli suolahappokaasua eetterissä. Tuloksena syntynyt 4-[N,N-bis(2-kloorietyy-li)amino]aniliniumkloridi saatiin kiinteänä aineena ja se kuivattiin. Saanto = 0,5 g, sp. 238 - 40 °C (haj.).
15 Liuokseen, jossa oli 200 mg trifosgeenia (Aldrich) kloroformissa (10 ml) 0 - 5 °C:ssa, lisättiin näin saatua tuotetta (539 mg), jonka jälkeen lisättiin trietyyliamiinia (0,83 ml). Kun oli pidetty 15 minuuttia huoneenlämpötilassa, lisättiin liuosta, jossa oli L-glutamiinihappo-ditert-20 butyyliesteriä (0,31 g) kloroformissa (5 ml). Seoksen annettiin seistä ympäristölämpötilassa 18 tuntia, pestiin ve- i \ dellä, kuivattiin ja haihdutettiin kuivaksi. Jäännös kroma-
* ' I
: : tografoitiin Merck-silikageelissä ja eluoitiin heksaani- 31 115048 amino]fenyylikarbamoyyli)-L-glutamaatti valmistettiin samalla tavalla kuin on kuvattu vastaavassa vaiheessa esimerkissä 5.
Liuosta, jossa oli dibentsyyli-N-(4-[Ν,Ν-bis(2-5 kloorietyyli)amino]fenyylikarbamoyyli)-L-glutamaattia (1,138 g) DMF:ssä (15 ml), hydrogenoitiin 10 % Pd/C:n yllä 16 tuntia. Kun oli suodatettu ja haihdutettu tyhjiössä, jäännös liuotettiin CHCl3:iin (20 ml). 18 tunnin kuluttua saostuma suodatettiin pois ja kuivattiin tyhjiössä saaden 10 N-(4-[Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)amino]fenyylikarbamoyyli)-L- glutamiinihappoa. Saanto 730 mg (93 %) . Kun oli kiteytetty uudestaan asetoni/CHCl3-liuoksesta, muodostui mikroskooppisia sauvoja, sp. 116 - 118 °C. NMR (CD3COCD3) : δ 8,0 (s) 1H; 7,2 (d) 2H; 6,6 (d) 2H; 6,2 (d) 2H NH; 4,4 (m) 1H; 3,6 (m) 15 8H; 2,5 - 1,9 (m) 4H.
Esimerkki 5 N-(4- [Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)amino]-3-fluorifenyylikarbamoyyli) -L-glutamiinihappo
Liuokseen, jossa oli dibentsyyli-N-(4-[Ν,Ν-bis(2- 20 kloorietyyli)amiini]-3-fluorifenyylikarbamoyyli)-L-gluta- maattia (0,4 g) etyyliasetaatissa (10 ml), lisättiin 30 % :<t>: palladium-hiiltä (50 % kostea) (160 mg) ja seosta sekoitet- : tiin vedyn alla yksi tunti. Kun katalyytti oli suodatettu :*·.· pois, suodos haihdutettiin kuivaksi. N-(4-[Ν,Ν-bis (2- • » 25 kloorietyyli)amiini]-3-fluorifenyylikarbamoyyli-L-glutamii-: nihappo saatiin sen jälkeen, kun oli trituroitu öljyinen • 1 · .·;». jäännös etyyliasetaatti/heksaaniliuoksella, valkoisena jau- • · · heena (210 mg, sp. 111 - 114 °C) . Lähtömateriaali dibent syyli-N- (4-[Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)amino]-3-fluorifenyyli- ·;;; 30 karbamoyyli)-L-glutamiinihappo saatiin seuraavasti: • ·
Suspensio, jossa oli 4-[Ν,Ν-bis (2-kloorietyyli) -amino]-3-f luorianiliniumoksalaattia (3,5 g) vedettömässä » · • etyyliasetaatissa (200 ml) ja kaliumkarbonaatissa (5,5 g), jäähdytettiin argonin alla 5 °C:seen. Tähän seokseen lisät- 1 » ·’ 35 tiin liuosta, jossa oli fosgeenia tolueenissa (1,9 M; 5,5 ml). Lisäyksen jälkeen seosta sekoitettiin huoneeniämpöti- 32 115048 lassa 10 minuuttia, se suodatettiin ja suodos kuivattiin magnesiumsulfaatin yllä. Saatu kuivattu suodos lisättiin yhtenä annoksena seokseen, jossa oli dibentsyyliglutamaat-ti-p-tolueenisulfonaattia (5 g) , kaliumkarbonaattia (2 g) 5 ja etyyliasetaattia (100 ml). Lisättiin trietyyliamiinia (2 ml) ja seosta sekoitettiin 20 minuuttia ympäristölämpöti-lassa. Seos suodatettiin ja suodos haihdutettiin kuivaksi. Jäännös kromatografoitiin silikageelissä eluoiden etyyli-asetaatti/heksaaniliuoksella (1:2) saaden haluttu lähtöma-10 teriaali öljynä, joka kiteytyi. Saanto = 5,5 g, sp. 81 -84 °C.
4-[N,N-bis(2-kloorimetyyli)amino]-3-fluorianilini-umoksalaatti valmistettiin esimerkin 3 mukaisesti paitsi, että 3,4-difluorinitrobentseeniä käytettiin lähtömateriaa-15 Iina p-fluorinitrobentseenin tilalla saaden 4-[Ν,Ν-bis (2-hydroksietyyli)amino]fluorinitrobentseeni, sp. = 99 - 101 °C.
Näin saatua tuotetta käsiteltiin tionyylikloridil-la, kuten on kuvattu esimerkissä 3, saaden 4-[Ν,Ν-bis(2-20 kloorietyyli)-3-fluorinitrobentseeni, sp. 66-8 °C.
Näin saatu tuote hydrogenoitiin, kuten on kuvattu ν,,ϊ esimerkissä 3, käyttäen etyyliasetaattia liuottimena. Seos : : suodatettiin ja suodos haihdutettiin pieneen tilavuuteen ja .· liuotettiin uudelleen eetteriin. Kyllästettyä liuosta, jos- » · 25 sa oli oksaalihappoa eetterissä, lisättiin ylimääränä ja ; haluttu tuote 4-[Ν,Ν-bis (2-kloorimetyyli) amino] -3-fluori- ’ ·’ aniliniumoksalaatti kerättiin, sp. = 146 - 8 °C.
Esimerkki 6 N-(4-[Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli) amino]-3-kloorifenyy-' 30 likarbamoyyli)-L-glutamiinihappo ’->* Liuosta, jossa oli dibent syyl i-N- (4-[Ν,Ν-bis (2- kloorietyyli) amino] -3-kloorifenyylikarbamoyyli) -L-gluta-..j maattia (350 mg) etyyliasetaatissa (30 ml), joka sisälsi 70 mg 30 % palladium-hiiltä (50 % kostea), sekoitettiin vedyn ' 35 alla yksi tunti. Kun katalyytti oli suodatettu pois, suodos ' > · haihdutettiin kuivaksi ja jäännös trituroitiin eette- 33 115048 ri/etyyliasetaattiliuoksella saaden N-(4-[Ν,Ν-bis(2-kloori-etyyli)amino]-3-kloorifenyylikarbamoyyli)-L-glutamiinihap-poa öljynä. NMR: 8,7 (s) 1H; 7,6 (s) 1H; 7,1 - 7,4 (m) 2H; 6.5 (d) 1H; 4,2 (m) 1H; 3,3 - 3,6 (m) 8H; 1,7 - 2,4 (m) 4H. 5 Lähtömateriaali dibentsyyli-4 -[Ν,Ν-bis(2-kloori- etyyli)amino]-3-kloorikarbamoyyli)-L-glutamaatti saatiin esimerkin 3 mukaisella menetelmällä paitsi, että 4-fluori- 3- kloorinitrobentseeniä käytettiin lähtömateriaalina 4- fluorinitrobentseenin tilalla saaden 4-[Ν,Ν-bis(2-10 hydroksietyyliamino)]-3-kloorinitrobentseeniä oranssin värisenä öljynä. NMR 8,0 - 8,2 (m) 2H; 7,3 (1) 1H; 4,7 (t) 2H; 3,5 (m) 8H.
Näin saatua tuotetta käsiteltiin tionyylikloridillä, kuten on kuvattu esimerkissä 3, saaden 4-[N,N-bis-2-15 kloorietyyliamino)-3-kloorinitrobentseeni öljynä. NMR (CHC13) 8,3 (d) 1H; 8,1 (q) 1H; 7,25 (d) 1H; 3,8 (t) 4H; 3.6 (t) 4H.
Näin saatu tuote hydrogenoitiin käyttäen etyyliasetaattia liuottimena, kuten on kuvattu esimerkissä 3. Kata-20 lyytti poistettiin suodattamalla ja suodos haihdutettiin pieneen tilavuuteen, liuotettiin uudelleen eetteriin ja • it’ kyllästettyyn eetterissä olevaan oksaalihapoon, jota lisät- tiin ylimääränä. Oksalaattisuola saatiin suodattamalla, sp. = 118 - 21 °c.
• · 25 Näin saatu tuote muutettiin dibentsyyli-N-(4- [N,N- • · < t t ; bis (2-kloorietyyli) amino]-3-kloorifenyylikarbamoyyli) -L- "!. glutamiinihapoksi, kuten on kuvattu esimerkissä 5. Saatiin • * « ‘ öljy. NMR 7,1 - 7,4 (m) 13H; 5,1 (s) 2H; 5,0 (s) 2H; 4,6 (m) 1H; 3,5 (s) 8H; 2,0 - 2,6 (m) 4H.
• * « ··” 3 0 Esimerkki 7 • · ·
Tyypilliset farmaseuttiset koostumukset, jotka si- .*. j sältävät keksinnön mukaisen yhdisteen • · • t > * >
i I i I
34 115048 A: Kuivat täytetyt kapselit, jotka sisältävät 100 mg esilääkettä per kapseli
Ainesosa Määrä per kapseli (mg) 5 Yhdiste 100
Laktoosi 149
Magnesiumstearaatti 1
Kapseli (koko nro 1) 250 10
Yhdiste voidaan pienentää numeron 60 kokoiseksi jauheeksi ja sitten laktoosi ja magnesiumstearaatti voidaan viedä numeron 60 kokoisen imukankaan läpi jauheeseen. Sitten yhdistettyjä ainesosia voidaan sekoittaa noin 10 mi-15 nuuttia ja täyttää niillä numeron 1 kokoinen kuiva gela-tiinikapseli.
B: Tabletti
Tyypillinen tabletti sisältää yhdistettä (100 mg), esigelatinisoitua tärkkelystä USP (82 mg), mikrokiteistä 20 selluloosaa (82 mg) ja magnesiumstearaattia (1 mg).
C: Peräpuikko ,* Tyypilliset peräpuikkoformulaatiot peräsuoleen an- • ,· toa varten voivat sisältää yhdistettä (50 mg) , dinatrium- kalsiumedetaattia (0,25 - 0,5 mg) ja polyetyleeniglykolia ; 25 (775 - 1 600 mg) . Muut peräpuikkof ormulaatiot voidaan val- ·’ mistaa korvaamalla dinatriumkalsiumedetaatti esimerkiksi • · • « I · butyloidulla hydroksitolueenilla (0,04 - 0,08 mg) ja poly-etyleeniglykoli hydrogenoidulla kasviöljyllä (675 - 1 400 mg), kuten Suppocire L, Wecobee FS, Wecobee M, Witepsols ja Ί ; 30 niiden kaltaisella öljyllä.
; D: Injektio ! t‘.j Tyypillinen injektoitava formulaatio sisältää yh-
v: distettä (500 mg), bentsyylialkoholia (0,05 ml) ja 0,15 M
Λ natriumbikarbonaattia injektiota varten (5,0 ml).
: ( 35 115048
Esimerkki 8 (katso kaavio 4) N- (4-(N-(2-kloorietyyli)-N-(2-mesyylioksietyyli)-amino]-3 - fenoksikarbonyyli)-L-glutamiinihappo N- (4- ( [N-(2-kloorietyyli), N-(2-mesyylioksietyyli)-5 ]amino)fenyylioksikarbonyyli)-L-glutamiinihappo-di-t-butyy- liesteri (6, jossa R1 = Cl ja R2 = 0S02Me) (110 mg) suspen- doitiin trifluorietikkahappoon (TFA) (2,2 ml) ja sekoitettiin 40 minuuttia ympäristölämpötilassa. TFA poistettiin alennetussa paineessa, jäljelle jäänyt öljy laimennettiin 10 etyyliasetaatilla (1 ml) ja haihdutettiin saaden 90 mg yhdistettä N-(4- [N-(2-kloorietyyli)-N-(2-mesyylioksietyyli)-amino]fenoksikarbonyyli)-L-glutamiinihappo - 1,02 TFA - 0,16 EtOAc (9, jossa R1 = Cl ja R2 = 0S02Me) , saanto 95 %. NMR : - CH2 - CH2 -0S02Me/ - CH2 - CH2C1 15 3,15 (s) 3H; 3,70 (m) 6H;
Muut 4,30 (t) 1H; 4,49 (t) 1H;
Aromaattiset 6,75 (d) 2H; 6,92 (d) 2H; 1,8 - 2,3 (m) 4H; 4,02 (m) 1H; 7,90 (d) 1H.
Lähtömateriaali 4-([N-(2-kloorietyyli), N-(2-mesyy-20 lioksietyyli)]amino)fenyylioksikarbonyyli-L-glutamiinihap-po-di-t-butyyliesteri valmistettiin, kuten alla on kuvattu. ·,,,· Liuosta, jossa oli L-glutamiinihappo-di-t-butyyli- • \· esterivetykloridia (4,26 g) ja trietyyliamiinia (4 ml) ve- dettömässä kloroformissa (30 ml) , sekoitettiin jäähdytetyn • · 25 4-nitrofenyyliklooriformaattiliuoksen (2,92 g, saatavissa : tuottajalta Aldrich) kanssa viisi minuuttia. Kun oli pidet- • · · t ty ympäristölämpötilassa viisi tuntia, liuotin haihdutet- * · 0 tiin ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (70 ml), suo- . datettiin ja haihdutettiin kuivaksi. Jäännös kromatografoi- *;;j 30 tiin silikageelissä, eluoitiin kloroformilla saaden 5,02 g ’;·* 4-nitrofenyylioksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-di-t-butyy- : ·.: liesteriä (2) öljynä (82 %) .
• · ·:·: NMR: 7,33 (d) 2H; 8,24 (d) 2H; 1,46 (s) 9H; 1,50 (s) 9H; 2,0 - 2,4 (M) 4H; 4,32 (m) 1H; 5,90 (d) 1H.
' ·[ 35 Liuosta, jossa oli näin saatua tuotetta (2) (5,01 g) etikkahapossa (30 ml), hydrogenoitiin 10 % palladium- 36 115048 hiilen yllä kolme vuorokautta. Suodatuksen jälkeen liuos jäähdytettiin ja lisättiin etyleenioksidia (5 ml) ja se jätettiin ympäristölämpötilaan 22 tunniksi. Liuotin haihdutettiin ja jäännös jaettiin etyyliasetaatin ja veden kes-5 ken. Orgaaninen faasi erotettiin, pestiin vedellä, kuivattiin (Na2S04) ja haihdutettiin kuivaksi. Jäännös kromato-grafoitiin silikageelissä, eluoitiin kloroformissa olevalla etyyliasetaatilla (2:1) saaden 4 -[bis(2-hydroksietyyli) amino]fenyylioksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-di-t-bu-10 tyyliesteriä (4) (3,93 g) 69 % saannolla, sp. 91 - 93 °C.
Liuosta, jossa oli näin saatua tuotetta (4) (0,86 g) pyridiinissä (3 ml) , sekoitettiin metaanisulfonyyliklo-ridin (0,6 ml) kanssa 2 °C:ssa 20 minuuttia, jonka jälkeen sekoitettiin 50 °C:ssa 10 minuuttia. Reaktioseos jaettiin 15 etyyliasetaatin ja veden kesken. Orgaaninen faasi erotettiin, pestiin vedellä, kuivattiin (Na2S04) ja haihdutettiin kuivaksi. Jäännös kromatografoitiin silikageelissä, eluoitiin dikloorimetaanissa olevalla etyyliasetaatilla (1:9) saaden 4-[(2-kloorietyyli) [2 -(mesyylioksi)etyyli]aminofe-2 0 nyylioksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-di-1-butyyliesteriä (6) (0,44 g) öljynä, saanto 43 %.
: ,**: NMR: 3,15 (s) 3H; 3,70 (m) 6H; 4,29 (t) 2H; 6,75 (d) 2H; 6,92 (d) 2H; 1,41 (s) 9H; 1,42 (s) 9H; 1,8 - 2,3 (m) 2H; 3,97 (m) 1H; 7,92 (d) 1H.
• 1 2 5 Esimerkit 9-15
• I
» I
; /, Seuraavat taulukossa 1 luetellut yhdisteet valmis- * i · tettiin esimerkin 2 mukaisesti käyttäen alla olevissa tau- ♦ » · lukoissa 2-8 lueteltuja lähtömateriaaleja ja välimuotoja.
f 1 1 * · t · · • · 37 115048
fN
ro ro C 5 U =
^ O
ro x cn r: ^ — ·—.ro -P w ^ *U ^ p — E — ui 3 r-% ^ ^ 6 cM r-* ~ f «·., r, Ϊ·.
cm ro —« CM
I? <T ~ <T ~ m „ . .,—.. <r . mj* -—· •5 5 e ε ε e ~ — i cr. —- on --- — ό Q _CM|ir> ~r n <r Ln n P 0|ο1<-μγμγμοιγνγμ , CN| i i i ' ' 1 1 y “ q O Cr- O — CJv CT» [j .-v .-. . . . · · r X I CvJ ΓΜ — CVJ CM - — 8
x. "e Je T E E
7 -- - · · · ^ m<r <r <r <r <r Mr <r i a - = 0=-<J - X n ^
4-1 ro m CC S 2C
J <u .—. E n n vo n n
Ή o -H w· co E E E E E
+J 04 oj — ^ O X I 4J01 . - cr\ n O —< <r M Ti, ^ <0 1— ·' ·'· “' ·· ·'
Ai ^ (S o- 1 vo r— co r- r- 3 I E 1 cr» 1 1 < » 1 ή I Οσ> crv en co vo i~~ o 3 I M .-v -v ·,*-·-'- o ro ^ ^ Ij (0 vo vO vo vo vD vO o»
V Λχ T
• < x x _ .. , 00 00 —
· ._. ,—. CO
:, ·: ^ , 5 a e • « · N. 3C ^ uo ' * · f 1 CM Juo UO ΞΞ 2C 3Ξ — <r s:| *x co co co co m ,*,s, o ro m ^ ^ ^ ^ *...* -5s11 1 S 3. -£- -S. *7 ; , *, ---- L Un n r- vo vo vo <r ··· · ^ On n n n n n n u *.* ' 0 OOO 00
000 o l/~V
04 CO vo CO —V
Q, I I I 11 ,;, ir o ό -» vo 00
• UJ VO vO 04 O VT
: *: G
. , Il
, X
. , — — — O
! · ro ro .0 1---- —· . 5, to in 10 - - x xi jQ ro , .aciesecrooimin >·> 1 __ — — to 11 ro oc x · ro n -ι-i n oi X Ln -— —- LTO X M X --- O CC »—I ~1 osu o- o cv- 1 — o o .,,,: g
» · *»Ί O
cn μ O — n n n M C σν — — — — — — 38 115048 Näin ollen esimerkkien 9-15 mukaiset yhdisteet valmistettiin samalla tavalla kuin on kuvattu esimerkissä 2. Esimerkin 10 yhdiste valmistettiin näin ollen korvaamalla vaiheessa (a) käytetty 4-amino-m-kresoli 4-amino-3-5 isopropyylifenolilla [Gilman, H. et ai., J. Org. Chem. 19, (1954), 1067 - 78]. Esimerkin 11 yhdiste valmistettiin korvaamalla 4-amino-m-kresoli 4-amino-2-metyylifenolilla (saatavissa tuottajalta Aldrich) ja esimerkin 12 yhdiste valmistettiin korvaamalla 4-amino-m-kresoli 4-amino-3-10 fluorifenolilla [valmistettiin julkaisun Journal of the Chemical Society (1964), sivu 473, mukaisesti]. Esimerkin 13 yhdiste valmistettiin korvaamalla 4-amino-m-kresoli 4-aminonaft-l-olilla (Aldrich Chemical Co. Ltd.) ja esimerkin 14 yhdiste valmistettiin korvaamalla 4-amino-m-kresoli 15 4-amino-2-kloorifenolilla [valmistettiin julkaisun Journal of the American Chemical Society 45, 2192 (1923), mukaisesti] . Esimerkin 15 yhdiste valmistettiin korvaamalla 4-amino-m-kresoli 4-amino-3-kloorifenolilla [Berichte, sivu 2065 (1938) ja Organic Synthesis, kokoomaosa 4, sivu 148]. 20 Esimerkkien 9-15 yhdisteiden valmistuksessa käy tetyt lähtömateriaalit ja välimuodot ja niiden ominaisuudet I i · ·,,,· on lueteltu alla olevissa taulukoissa 2 - 8.
• 1 * 1 • 1 · • · * · * · ! I t * · · » » · 1 « I t * · ·
* I I
I t · * • · * · > I · ► · · » t « * ‘ » 1 · > · t ! 5 » s t · » = » I » 39 115048
Taulukko 2 o H *"·
H2N-/ y-OH
R5- tai — sp. tai NMR-tulokset viite
Me (R5a) 176-9°C Aldrich
Pr1 (R5a) 172-5°C
Cl (R5 ) 6r5-6.7(m)3H aromaat- J. Chem. Soc.
a tiset (1928), 2703 8?8(s)lH OH; 4?6(br s)2H NH2 ;
159?5°C
Me (R5b) 174-6°C Aldrich
Cl (R5b) 146-8°C
F (R5 ) 6.6-6.9(m)3H aromaat- ί i a tiset 9;4(s)lH OH; ·': i 4;4(m)2H NH2 1 * ·
DiCH., (R5a = R5b = 260-2°C {vetykloridina , J Aldrich'lta) ch3) • (R5a ja R5b 273°C (vetykloridina ; Aldrich’lta) * · yhdessä on ' ! f -CH=CH-CH=CH-)
' I
40 115048
U
Cm “ <-3 O ___ -3 m HT </> ro — ro <"sj O S oj ro « co ~ , — ro to -—' *Λ „__ zr —., uo +j ro — O ^
2 O o O O
g γν ro r^ OJ
-° ?
'/ι I
oi ,V1 ro ro ro ro ro ro ro *""· O ^ 2 m £ £ £ I £ ! ^ 5 £j σ\ — rsi Ό co CTv 0_^ n
3 _J NtC vrP r-T ’ r- v£>' vO vO r- CO
2 :x °n I I I I I I I 1
~ T^ -^x Ό 1—· -T UO LTV v£> CO
£ *-. , . — .-. *"> ^ ^ Ό Ό O O O vO Ό
* * t I
I · · « »
I . . CO
* » 22 = χ; 2: S! 2C
* » » * * CO co -—» mr CO co CO CO
, , a co ^ ^ _ ;,;: ι e e ~ e_ ££ ££ . * ! * . CM I \T\ —- * * » ·ύ~ I ro <r rs uo vo <r <r * (j| λ λ n »n .·- .' ·ν rs* I ro ro ι ro ro ro ro ro χ ι ι uo ι ι » 1 1 O co CD ·—* ro cn * ‘ Ctn cnj , O f' ^ ^ Γ ’" t t · 2C rsj ro ro ro ro ro rsi ro 1 * · » ro * · * ΠΤ ι : o & = ··* II oo (_) » JD C£ C »> * » uo 0 2:
I *,* .—. rc JD — CO O
* · rC uO ro uO *—' 15 ί<Τ3 » • lO CO uO DC uOC3 roil ’Π [/) r * · ’ I _a | os — ps -- cs lo = wu * * „__ __.. ._, cC Or3 ro d) il
, ml .m ro s-. tn in TJ X
,, uol Qj u «—< — 1 -f~< £C CO rC cj ,· χ: c- (_) O O O'—·—‘ 1 •‘111 115048 ; 41 ·.-« m
k-. ZZ
c_ o o m ΙΛ ro — — O ^ ro 1o o — 2 rs u ro — m ro j LO £ LT} (Λ | 3 rs o rs rs ^ .-v ..
£ rs ro rs rs I rs rs rs rs rs es rs rs
rs J LO LO LO CO LO LO LO LO
G 00-0000 ro I r> ^ rN .λ <^N «-', ·-.
uo uo uo uo uo uo uo uo
oT
rs 2
O
f O
^ = = = = = = =: =
J . J CO CO CO CO CO CO CO SD
^ Li -Λχ il “ s' e" ’i' IT F "iT 1Γ e O S ^ ^ ~ ~ ~ ~ ~ ^ Lnmmn-jLa^T n 3 ,, = Ό <-> z-' ^ ^ .-.
r-j \ [5 r^i— r~ f'- /— co
P I n I i I I I I I I
<β / I H co cd σ\ ca co co co cr\ H 0-J I S ^ r· VJ V u VO 'vO 'D VD ·Ό 'O vo • · • 1 • f 1 « · > t
I 1 X
, , CO
* » 1 1 — — ZZ 3^ ZZ
.,♦ CO CO -—' CO CO CO CO CO
: ; ; e __
* 2; EH ΕΞΕΕ E
21 ro
Cjj rs ro · v <r uo ro , rs | - . ro ^ 1-♦ **» 2roroirororororo . 1 C_> i j uo i i i · i O ooo—«rorscrv rs II rocsrorocororsro · -—- i » ro -Q 2
! » » 1 1 jz uo O
U K C II
* .— ra — 2 — joJ ° G
: 1 cc uo ra UO JZ1 —. UO 03 :rö i > · _c j uo cc uo cc: uo ra ne -n i/) x
* » I CZ '—· CC. —- CZ uO ZZ II U) O
» 031 —- — - CC LJra ra φ II
1 1 · 1 » uo I ·1-( ro —- uO uo TD 2 ‘ 1 <X | φ ^ < 2 1—ι Ή cc Q3 x: u
30 C~ O o O U, O'—' ·— >1 I
j I 115048 42 m x to o — 04 cu ·\ x x: —· o~> x w ΓΟ —' i _ Ξ * CO —- ΓΜ ! ^ ^ ^ : 3 m r- ! «"< *” * ; ?= 04 m I ε cocococococor-.-—.
m sSSiiiS 5 4-1 4j -^r <r --x <r -r <r m ίϋ r ' ~ ^ ‘ ‘ ' ($r^r^-r~^r— co
: g t 1 I I i I I I
\ 0 COCOCOCOCOCDCO — M -. *·' ' - -— Π3 Ο Ο ίΟ Ο Ο Ο Ό) r~.
CO
i <04 o -A O _ _ „ „
ry .r—\ r4 ΓΜ X X X ΓΝ r\J X
\. 04 04 <04 CN
^ / // CO CO -—* .—· ---- CO to .
4 j Ml ' w (Λ ΙΛ ΙΛ *—r - to O 1/} J \ ΐ|θ>| CO -T ^ '' '—" Μθ Ό -—· -¾ Cy NX so oo-^^-^oo m ^ CJ «o ro ·ν ·% ·. .x r .
p / j Ln tn tn en Ln lTi tn m 2 -- B - J i.
<* « * « ΓΥ X X X X X 02 20
* , , ’ CO CO CO CO CO CO CO
: 1 I e'e'e'e^e^'i' ,, 2: co * * 4 ojf m m c Λ uo m r-- * * 32) - ·« ·' — (Jj mnmroEmm m
! ! 0Ή I I I I I '—- \ i I
* * X mcM'-rrO'-O-^fNi-sT
o ··* ~ «- ^ , I mmmromromm
C\41 rH ^H r~i >—I *-H t—I r—H r-H
;» xoljcjcjcjcjcjo
* —4 j r-j rH r-H r-H /—H f—H rH i—H
; X ocjcjcjcjcjcjcj , η o x
- » X lTi CJ
* CJ pi C II
II 0 X
— —* JO CJ
*—. ro 'jo -—· Ln^Otfdt » rc in aj in jD -—s r-'-pl -n (/} x . * XI in χ m c2 in X) χ n to Cj co -—' x -—* co ιΛ Cjco oj On * rc ) - -rH --- { Ί -—- cC m in 'ΰ x
* ιΛ| QJ k-> '—l X >—< — -r-( 02 02 ,C CJ
DC I X CU CJ CJ CJ u- O'— ·—· >1 I
43 115048
Taulukko 6
So. st> CL & ft
' v/V
Λ”7 W
α R5~—b HCl-suolan sp. (°C)
Pr1 (R5a) 124-7
He (R5a) 164-7
He (R5b) 122-4
Cl (R5b) 156-8 F (R5a) 123-5 (R5a=R5b=CH3) di-CH3 144-6 » » ,-l·! (R5 ja R5b yhdessä on -CH=CH-CH=CH- 180-4 ·:*’ Cl (R5a) 119-121 i * « t >M| 44 115048 ro ro ~ ππ m ο π: o re — u ^ o - tN n *— £ Ό i/) 4J OnI — —' ' p fO Γ-- ·—« ΓΜ
D -V
£ ΓΝ O") —* ΟΊ 0*4 o
Z X
I _ XX 3= X O --- .Av. *-* r— Γ"- Γ"- *—* ΓΠ {s il I e Έ E I £ i | "H <r vt >-i *r <r I -*Z . - f- <· ^ '-
/ 5 CD CO CO CO CO CO
v/ 2 II I I I I
5 N (N i— cn r^i r~~ / s 0 = 0 \ ^ o
M
3 l| <r = X
^ O' ^ X
p £ C* O' «s ^ — e e en in —r ro <T ΓΜ i -v ro ro
Z ro »-N -'IS
' · j ro ro co co
ZfMi X - - ε" ε' X
L =| sr X = ^ r 00 • ~Γ\^ \0 oi — <r -o- f". m o o» <-vi i a — "" — ·'- ε ~r- '—'E £ ro ro -—* * : 0 r- — i i uo r~4 uO UO ·— uo uo r- , . o ·' '> *' * * i ro ro ro ro ro ro * t^J (ϊ -O ^ , * ! 4 , UO LH uo Hi
* ♦ * JD C£ C£ CC C
rz oh ro <r r-H
U~\ ϋΠ ^ __ Lo, ~ o CX ( o e- o ro — rs» II» t » Σ ί * I » i · 45 115048 m _
J3 G
S ^ ΙΛ = ” JP ^ 4J rn o —- O —H Γ"» 3 ^ ^ X -x r
3 ΓΝ P") <—« PJ CM O
5 5 5 ? 7 £ £ £ "e E- e- £ £ £ £ _<-ί I ·— “ 7-~ 7-^ 7-^ 7-, £-^.
Dl «n" ^ 7 7 7 7 7 =7' - - g £. - ^ 7.
V rT <7' C-M <~m fN CM <-J
o s' a - — J1 — Ή- U _ £ £" ^ C^J 04 ΓΊ I / b<r<r <r<r-cr-r<r
O
\ -
t* \X
cQ O
O _5 7 oi oi oi r: o. oj oi 04 oi \ 0 7777 ^w7777^w_«_^ XZ £ £ £ £ _T g ^ ^ rs - o_^ - o^ -- 7-^ 5-, 7-, 7. 7.
°— V 7 m'' κΓ ιλ' k7 u-Γ ltT u-ι m u-ι in u-ι in ui in ω ^ 7 0 ^oi X ^ I s; 3 _ _ _ 1 «15 =||||
zn^C-SEEEO
r P 7 7 7. r ^ Τ' - : ... ^ ^ £ 7 7' oT »' rT 7 : : o ^ e £ £ ό 7 7 7, σν • *» u o 7. 7. «o f - · ' “v ...
• · ·...· s s g > * £ ^ g i,: : z _ ^ ^ — if ·;·, a7' 5 n oi “ § 7.
! ! ! UI ^ „ p n =7' ~ "e £ I £ Λ ^ 7 ίΓ - £ £ 7^ 7 7 ^ m ‘ 7, , * >1 ; ^ ^-v —* -p » · » · «Ό Π2 -° ^ ^ * · » u“S u~\ ^' 5 w~,
J J JD Oi & ^ ^ CC
i > -Γ =r u. £ o t .*. ; s, G - » 1 « i > * ‘ t 46 115048
Esimerkki 16 N- (4- [N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyy-li)-L-glutamiinihappo-gamma-anilidi
Suspensiota, jossa oli a-bentsyyli-4-[N,N-bis(2-5 kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-gam-ma-anilidia (2,0 g) etyyliasetaatissa (50 ml), hydrogenoi-tiin 10 % palladium-hiilen (0,15 g) yllä neljä tuntia. Katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodos haihdutettiin kuivaksi alennetussa paineessa 35 °C:ssa. Tuote 4-[N,N-10 bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyyli-L-glutamiinihap-po-gamma-anilidi (1 kaaviossa 6) saatiin valkoisena kiteisenä kiinteänä aineena, 1,4 g (83 %), sp. 110 °C. Alkuaineanalyysi - % odotettu C = 54,8, H = 5,22, N = 8,71 % löydetty C = 54,5, H = 5,62, N = 8,31.
15 Lähtömateriaali Q!-bentsyyli-4-[N,N, -bis (2-kloorie- tyyli)amino]fenoksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-gamma-ani-lidi valmistettiin, kuten alla on kuvattu.
Trietyyliamiinia (2 ml) lisättiin seokseen, jossa oli a-bentsyyli-p-tosyyli-L-glutamiinihappo-gamma-anilidia 20 (2,8 g) ja O-(4-[N,N,-bis(2-kloorietyyli)amino]fenyyli-O'- (4-nitrofenyyli)karbonaattia (2,0 g) dikloorimetaanissa (30 ! ml) . Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 16 tuntia ja • ; liuottimet poistettiin tyhjiössä. Jäännös kromatografoitiin ; silikageelissä (Merck-tuotenumero 9385) ja eluoitiin di- , 25 kloorimetaanissa olevalla 10 % etyyliasetaatilla saaden ; a-bentsyyli-4-[N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbo- nyyli-L-glutamiinihappo-gamma-anilidi valkoisena kiinteänä aineena, 1,9 g (64 %).
Lähtömateriaali 0-(4-[N,N-bis(2-kloorietyyli)ami-30 no]fenyyli-O1-(4-nitrofenyyli)karbonaatti valmistettiin, .* kuten alla on kuvattu.
, ·,· Liuosta, jossa oli trietyyliamiinia (10 ml) dikloo- rimetaanissa (10 ml), lisättiin seokseen, jossa oli 4-nit- * rofenyyliklooriformaattia (7,25 g) ja 4-[N,N-bis(2-kloori-35 etyyli)amino]fenolivetykloridia (10 g) dikloorimetaanissa ·· > * · ‘ ‘ (100 ml), kahden tunnin aikana. Kun oli sekoitettu huoneen- 47 115048 lämpötilassa 16 tuntia, liuottimet poistettiin alennetussa paineessa ja jäännös kromatografoitiin silikageelissä (Merck-tuotenumero 9385). Eluutio dikloorimetaanilla ja eluaattien haihdutus antoi tuotteen punaisena öljynä. Tri-5 turaatio heksaanilla antoi keltaisen kiinteän aineen, joka kiteytettiin uudelleen bentseeni/heksaanista saaden O-(4-[Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)amino]fenoli-O'-(4-nitrofenyyli)-karbonaatin oranssinvärisinä kiteinä, 10,4 g (71 %), sp.
68 °C.
10 Lähtömateriaali p-tosyyli-cx-bentsyyli-L-glutamiini- happo-gamma-anilidi valmistettiin, kuten alla on kuvattu.
N-t-BOC-L-glutamiinihappo-a-bentsyyliesteri (10 g) ja disykloheksyylikarbodi-imidi (6,1 g) liuotettiin dikloo-rimetaaniin (120 ml) ja sekoitettiin huoneenlämpötilassa 10 15 minuuttia. Lisättiin anilidia (2,8 ml) ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 16 tuntia. Seos suodatettiin ja saostuma pestiin dikloorimetaanilla (2 x 15 ml). Suodos pestiin peräkkäin kyllästetyllä NaHC03-liuoksella (2 x 100 ml) ja vedellä (100 ml) , sitten haihdutettiin. Tuloksena 20 syntynyt kiinteä aine kiteytettiin uudelleen EtO-Ac/heksaanista saaden värittömiä levyjä, 8,2 g (67 %) . Bentseenissä (300 ml) olevia gamma-anilidia (12,0 g) ja , p-tolueenisulfonihappoa (5,4 g) takaisinvirtautettiin 40 ; minuuttia ja niiden annettiin jäähtyä yli yön. Saostuma ’ 25 suodatettiin, kuivattiin pumpussa ja kiteytettiin uudelleen
EtOAc/MeOH-liuoksesta saaden värittömiä tosyyli-a-/ bentsyyli-L-glutamiinihappo-gamma-anilidilevyjä, 8,2 g (58 %) .
Esimerkki 17 30 N-(4-[N,N-bis(2-kloorietyyli) amino]fenoksikarbonyy- li) -L-glutamiinihappo-gamma-t-butyyliamidi .: Esimerkissä 16 kuvattu menetelmä toistettiin käyt- täen a-bentsyyli-4-[N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksi- . karbonyyli-L-glutamiinihappo-gamma-t-butyyliamidia a-bent- 35 syyli-4-[N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-gamma-anilidin sijasta saaden 4-[N,N-bis(2- 48 115048 kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyyli)-L-glutamiinihappo-gamma-t-butyyliamidia (2 kaaviossa 6) , joka kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/heksaanista saaden värittömiä kiteitä, sp. 129 °C.
5 Alkuaineanalyysi - % odotettu C = 51,9, H = 6,32, N = 9,09 % löydetty C = 52,1, H = 6,33, N = 8,96. of-bentsyyli-4- [N,N-bis (2-kloorietyyli) amino] fenok-sikarbonyyli-L-glutamiinihappo-gamma-t-butyyliamidi saatiin samalla tavalla kuin on kuvattu esimerkissä 16 gamma-anili-10 dijohdannaiselle.
Esimerkki 18 N-(4-[Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)amino]-3-metyylifenyy-likarbamoyyli)-L-glutamiinihappo
Liuos, jossa oli di-t-butyyli-4-[N,N-bis(2-kloori-15 etyyli)amino]-3-metyylifenyylikarbamoyyli-L-glutamaattia (0,6 g) dikloorimetaanissa (6 ml), jäähdytettiin 0 °C:seen, lisättiin trifluorietikkahappoa (15 ml) . Sitten tämä liuos jätettiin 0 °C:seen kolmeksi vuorokaudeksi. Sitten liuos haihdutettiin kuivaksi saaden (4 -[N,N-bis(2-kloorietyyli)-20 amino]-3-metyylitenyylikarbamoyyli-L-glutamiinihappoa öljynä. Saanto 0,49 g. NMR: 8,46 (s) 1H; 7,15 (m) 3H; 6,4 (d) I 1H; 4,18 (m) 1H; 3,55 (m) 4H; 3,35 (m) 4H; 2,3 (m) 2H; 2,23 (s) 3H; 2,0 (m) 2H.
* *« f Lähtömateriaali di-t-butyyli-4-[Ν,Ν-bis(2-kloorie- .*··, 25 tyyli) amino]-3-metyylifenyylikarbamoyyli-L-glutamaatti val- ; ,·, mistettiin, kuten on kuvattu alla.
Kaliumkarbonaattia (27,5 g) lisättiin liuokseen, ta» jossa oli 3-metyyli-4-nitroaniliinia [Journal of Organic Chemistry (33, 3498 (1968)] (7,6 g) etyyliasetaatissa (150 30 ml), jonka jälkeen lisättiin tipoittain liuosta, jossa oli » * a 1,9 M fosgeenia tolueenissa (27,5 ml), pitäen lämpötila al-'· · le 30 °C:ssa. Sitten seosta sekoitettiin ympäristölämpöti- lassa yksi tunti. Seokseen lisättiin L-glutamiinihappo-di-1 t-butyyliesteriä (13 g), jota sitten sekoitettiin ympäris- 35 tölämpötilassa yli yön. Sitten liuos suodatettiin, pestiin vedellä ja orgaaninen kerros kuivattiin MgS04:n yllä ja 49 115048 haihdutettiin öljyksi. Sitten tämä kromatografoitiin sili-kassa, eluoitiin heksaani:etyyliasetaatti-liuoksella 3:1 saaden di-t-butyyli(3-metyyli-4-nitrofenyylikarbamoyyli-L-glutamaattia öljynä. Saanto = 11,19 g (51 %). NMR: 9,16 (s) 5 1H; 8,0 (d) 1H; 7,43 (m) 2H; 6,70 (d) 1H; 4,1 (m) 1H; 2,51 (s) 3H; 2,25 (m) 2H; 1,8 (m) 2H; 1,41 (d) 8H.
Liuosta, jossa oli di-t-butyyli-3-metyyli-4-nitro-fenyylikarbamoyyli-L-glutamaattia (4,7 g) etyyliasetaatissa (125 ml), hydrogenoitiin 30 % Pd/C:n (0,5 g) yllä. Sitten 10 saatu seos suodatettiin Celiten läpi (puhdistettuja ja kal-sinoituja piimaapartikkeleita, joiden koko on 20 - 45 μτα, joita on saatavissa muun muassa tuottajalta Fluka Chemicals Ltd.) ja haihdutettiin tummaksi kiinteäksi aineeksi. Tämä kiinteä aine kromatografoitiin silakassa eluoiden käyttäen 15 etyyliasetaatti:heksaaniliuosta (1:1) saaden di-1-butyyli-3-metyyli-4-nitrofenyylikarbamoyyli-L-glutamaatti öljynä saannon ollessa 3,71 g (83 %) . NMR: 7,98 (s) 1H; 6,9 (m) 2H; 6,52 (d) 1H; 6,15 (d) 1H; 4,53 (s) 2H; 4,15 (m) 1H; 2,25 (m) 2H; 2,04 (s) 3H; 1,8 (m) 2H; 1,45 (d) 18 H.
20 Etyleenioksidia (4,8 g) kuplitettiin liuoksen, jos sa oli di-t-butyyli-3-metyyli-4-nitrofenyylikarbamoyyli-L-:>f glutamaattia (5 g) jääetikkahapossa (25 ml) ja H20:ssa (25 * * · : ml), läpi. Sitten liuosta sekoitettiin ympäristölämpötilas- | sa 24 tuntia. Kun oli haihdutettu kuivaksi, jäännös liuo- • » 25 tettiin uudelleen etyyliasetaattiin, pestiin vedellä, or-; gaaninen kerros kuivattiin MgS04:n yllä ja haihdutettiin saaden di-t-butyyli-4-[Ν,Ν-bis (2-hydroksietyyli) amino] -3- > * t metyylitenyylikarbamoyyli-L-glutamaatti, jota käytettiin ilman lisäpuhdistusta. NMR: 8,35 (s) 1H; 7,1 (m) 3H; 6,35 ··:' 30 (d) 1H; 4,15 (m) 1H; 3,35 (m) 4H; 3,05 (m) 4H; 2,25 (m) 2H; 2,20 (s) 3H; 1,8 (m) 2H; 1,45 (d) 18 H.
;*.j Liuokseen, jossa oli di-t-butyyli-4-[Ν,Ν-bis (2- ! · ____: hydroksietyyli)amino]-3-metyylifenyylikarbamoyyli-L-gluta- - maattia (4 g) pyridiinissä (60 ml), lisättiin tipoittain 1 » · : .* 35 metaanisulfonyylikloridia (3,8 ml) argonin alla pitäen läm- · pötila alle 30 °C:ssa. Lisäyksen jälkeen liuosta sekoitet- 50 115048 tiin 80 °C:ssa kaksi tuntia. Liuos jäähdytettiin ja se kaadettiin 10 % sitruunahappoon (500 ml), uutettiin etyyliasetaatilla, pestiin vedellä, orgaaninen kerros kuivattiin MgSC>4:n yllä ja sitten haihdutettiin ruskeaksi öljyksi. Tä-5 mä öljy kromatografoitiin silikalla eluoiden käyttäen hek-saani:etyyliasetaattiliuosta 5:1 saaden di-t-butyyli-4-[Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)amino]-3-metyylifenyylikarbamoyyli-L-glutamaatti öljynä. Saanto = 7,23 g (28 %). NMR: 8,42 (s) 1H; 7,1 (m) 3H; 6,36 (d) 1H; 4,13 (m) 1H; 3,50 (m) 4H; 3,31 10 (m) 4H; 2,3 (m) 2H; 2,23 (s) 3H; 1,9 (m) 2H; 1,4 (s) 9H; 1,35 (s) 9H.
Tämän esimerkin reaktiojärjestys on kaaviossa 7. Esimerkki 19 N- (4- [N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]bentsyylikarbo-15 nyyli)-L-glutamiinihappo
Di-t-butyyli-4-[Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)amino]bent-syylikarbonyyli-L-glutamaatti (0,5 g) liuotettiin CH2CI2-:een (1,5 ml) ja lisättiin trifluorietikkahappoa (1,5 ml). Liuosta sekoitettiin ympäristölämpötilassa kaksi tuntia. 20 Sitten liuos haihdutettiin saaden otsikon yhdiste öljynä (0,8 g). NMR: 8,22 (d) 1H; 7,10 (d) 2H; 6,66 (d) 2H; 4,19 (m) 1H; 3,69 (s) 8H; 2,24 (m) 2H; 1,9 (m) 2H; 3,32 (s) 2H. ·*·’: Lähtömateriaali di-t-butyyli-4-[N,N-bis (2-kloori- ] etyyli) amino] bentsyylikarbonyyli-L-glutamaatti valmistet- .***. 25 tiin, kuten alla on kuvattu.
; t-t 1-hydroksibentsotriatsolia (4,05 g) lisättiin liu- okseen, jossa oli 4-nitrofenyylietikkahappoa (5,4 g) dime-1 tyyliformamidissa (75 ml) . Seokseen lisättiin L-glu- tamiinihappo-di-tert-butyyliesteriä (7,77 g) ja sitten di-*1 30 sykloheksyylikarbodi-imidiä (6,2 g). Seosta sekoitettiin 18 tuntia ympäristölämpötilassa. Seos suodatettiin ja suodos pestiin kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella, ve- » « dellä ja 0,5 M suolahapolla ja sitten kuivattiin ja haihdutettiin kuivaksi. Jäännös kromatografoitiin silikageelissä 35 eluoiden heksaani/etyyliasetaattiliuoksella (2:1) saaden * 9,7 g (77 %) di-t-butyyli-4-nitrobentsyylikarbonyyli-L- 51 115048 glutamaattia öljynä. NMR: 8,2 (d) 2H; 7,45 (d) 2H; 6,45 (d) 1H; 4,45 (m) 1H; 3,15 (s) 2H; 2,1 (m) 4H; 1,4 (d) 9H; 1,35 (s) 9H.
Liuosta, jossa oli di-t-butyyli-4-nitrobentsyyli-5 karbonyyli-L-glutamaattia (9,7 g) etyyliasetaatissa (200 ml) , hydrogenoitiin 30 % Pd/C:n (900 mg) yllä. Sitten seos suodatettiin Celiten läpi ja haihdutettiin saaden keltainen öljy (di-1-butyyli-4 -aminobent syy1ikarbonyyli-L-glutamaat-ti), jota sitten käytettiin ilman lisäpuhdistusta. NMR: 10 8,23 (d) 1H; 6,92 (d) 2H; 6,50 (d) 2H; 4,86 (s) 2H; 4,15 (m) 1H; 3,24 (s) 2H; 2,22 (m) 2H; 1,8 (m) 2H; 1,4 (d) 18H.
Saanto 8,2 g, 90 %.
Liuokseen, jossa oli di-t-butyyli-4-aminobentsyy-likarbonyyli-L-glutamaattia (8,2 g) jääetikkahapossa (40 15 ml) ja H20:ssa (40 ml), lisättiin etyleenioksidia (7,1 g). Sitten seosta sekoitettiin ympäristölämpötilassa 24 tuntia. Liuos haihdutettiin kuivaksi, liuotettiin uudelleen eetteriin, pestiin H20:lla, orgaaninen kerros kuivattiin MgS04:n yllä ja haihdutettiin öljyksi [di-t-butyyli-4-[N,N-bis(2-20 hydroksietyyli)amino]bentsyylikarbonyyli-L-glutamaatti] (6,3 g), jota käytettiin ilman lisäpuhdistusta. NMR: 8,16 ‘‘ : (d) 1H; 7,02 (d) 2H; 6,58 (d) 2H; 4,1 (m) 1H; 3,4 (m) 8H; 3,25 (s) 2H; 2,25 (m) 2H; 1,8 (m) 2H; 1,4 (s) 18H.
;*· ] Liuokseen, jossa oli di-t-butyyli-4-[N,N-bis (2- * » ,*·, 25 hydroksietyyli) amino] bentsyylikarbonyyli-L-glutamaattia > i ; ' t (2,88 g) pyridiinissä (45 ml), lisättiin tipoittain me- i t t taanisulfonyylikloridia (2,91 ml) argonin alla pitäen läm- * t i ’ pötila alle 25 °C:ssa. Lisäyksen jälkeen liuosta sekoitet tiin 80 °C:ssa yksi tunti. Sitten liuos jäähdytettiin ja se ; * • •ί 30 kaadettiin 10 % sitruunahappoon (500 ml) , uutettiin eette- riin, pestiin vedellä, orgaaninen kerros kuivattiin MgS04:n » ·’. j yllä ja sitten haihdutettiin ruskeaksi öljyksi. Tämä öljy * » ,kromatografoitiin silikassa eluoiden heksaani: etyy-> liasetaattiliuoksella 2:1 saaden di-t-butyyli-4-[N,N-bis(2- 35 kloorietyyli)amino]bentsyylikarbonyyli-L-glutamaatti öljynä (1,3 g) (42 %). NMR: 8,19 (d) 1H; 7,10 (d) 2H; 6,66 (d) 2H; 52 115048 4,10 (m) 1H; 3,69 (s) 8H; 3,32 (s) 2H; 2,21 (m) 2H; 1,9 (m) 2H; 1,37 (d) 18 H. Saanto 1,32 g (42 %) .
Tämän esimerkin reaktiojärjestys on kaaviossa 8.
Esimerkki 20 5 N-(4- [N#N-bis(2-kloorietyyli) amino]fenyylikarbamo- yyli)-L-glutamiinihappo
Liuoksen, jossa oli di-t-butyyli-4-[Ν,Ν-bis(2-kloo-rietyyli)amino]fenyylikarbamoyyli-L-glutamaattia (valmistettu, kuten on kuvattu esimerkissä 3) (500 mg) 98 % muura- 10 haishapossa (10 ml), annettiin seisoa ympäristölämpötilassa 24 tuntia. Liuos haihdutettiin kuivaksi ja jäännös kromato-grafoitiin Merck-silikageelissä tuotenumero 9385 dikloori-metaani/etyyliasetaatti/muurahaishappoliuoksessa (7:2:1) saaden otsikon yhdiste öljynä, joka kiteytyi, sp. = 117 -15 9 °C.
Esimerkki 21 N-(4- [N,N-bis(2-bromietyyli)amino]-3-fluorifenyyli-karbamoyyli)-L-glutamiinihappo
Liuosta, jossa oli dibentsyyli-4-[N,N,-bis(2-bromi-20 etyyli)amino-3-fluorifenyylikarbamoyyli-L-glutamaattia (0,5 g) etyyliasetaatissa (10 ml) ja 30 % Pd/C:ssä (100 mg), se-: koitettiin vedyn alla kuusi tuntia. Katalyytti suodatettiin pois ja suodos haihdutettiin öljyksi saaden otsikon yhdisti te. NMR: 8,6 (s) 1H; 7,35 (dd) 1H; 7,1 - 6,8 (m) 2H; 6,5 ·. 25 (d) 1H; 4,2 (m) 1H; 3,7 - 3,2 (m) 8H; 2,4 - 1,6 (m) 4H.
; Lähtömateriaali tähän reaktioon valmistettiin sa- maila tavalla kuin on kuvattu esimerkissä 5, mutta tionyy-
Iti likloridin tilalla käytettiin tionyylibromidia.
I I ·
» 1 I I
• · » I · t 1 I l · 53 115048
Taulukko 9 ' \ /Λ
N—(/ \VnH-C0-NH-CH-CH2-CH2-C02H
λ-7 )=7 X £
Esim.
nro_X_R_sp.
22 Cl F 111-114°C
23 Cl Cl öljy
24 Cl CN 105-7°C
Esimerkin 23 yhdisteen NMR-tulokset ovat seuraavan-5 laisia: δ 8,6 (leveä) 1H; δ 7,6 (m) 1H; δ 7,2 (m) 2H; δ 4,25 (m) 1H; δ 3,6 - 3,3 (m) 8H; δ 2,4 - 1,7 (m) 4H.
Esimerkkien 21-24 yhdisteiden valmistuksessa käytetyt lähtömateriaalit ja välimuodot ja niiden ominaisuudet on lueteltu alla olevissa taulukoissa 10 - 13.
10
Taulukko 10
,·*’ HO
h >=/ H0 a R_sp^ : F 99-101
Cl öljy CN 151-4 54 115048 *NMR (DMSOde) : 8,15 (d) 1H; 8,05 (q) 1H; 7,3 (d) 1H; 4,65 (t) 2H (OH); 3,5 (m) 8H.
Taulukko 11 5 * l X_R_sp.
Cl F 66-8 “C
Cl Cl öljy1
Cl CN 106-9
Br F 66-68°C.
s * NMR (CDC13) : 8,3 (d) 1H; 8,1 (q) 1H; 7,25 (d) 1H; 3,75 (t) 4H; 3,6 (t) 4H, 55 115048
Taulukko 12
X
'—\ N -(/ )-NHj
* R
X_R_sp. (oksalaattisuolan)
Cl F 146-8°C
Cl Cl 118-21 °C
Cl CN 112-6°C
Br F 13A-6°C
5
Taulukko 13
X
. \__ f, Λ C0_Bz * * ^ // \\ 1 ^ M v>-NH-C0-NH-CH-CH2-CH2-C02Bz ! x « : , , X_R_sp.
Cl F 81-A °C
^ ^ öljy* '!!! cl CN öljy**
Br F öljy*** 10 *NMR (CDC13) : 7,4 (m) 1H; 7,3 (m) 10H; 7,1 (m) 2H; 5,2 (s) 2H; 5,05 (s) 2H; 4,6 (m) 1H; 3,5 - 3,4 (m) 8H; 2,6 - 2,0 : ·' (m) 4H.
* · 56 115048 **NMR (CDC13) : 8,25 (s) 1H; 7,6 (m) 2H; 7,4 - 7,2 (m) 10H; 7,1 (d) 1H; 6,2 (d) 1H (NH) ; 5,2 (s) 2H; 5,1 (s) 2H; 4,6 (m) 1H; 3,7 - 3,5 (m) 8H; 2,7 - 2,2 (m) 4H.
***NMR: 7,4 - 6,8 (m) 13H; 5,7 (d) 1H; 5,2 (s) 2H; 5,1 (s) 5 2H; 4,6 (m) 1H; 3,7 - 3,3 (m) 8H; 2,6 - 1,9 (m) 4H.
• · • 1 » • ? » · 57 115048
Esimerkit 25 - 32
Seuraavat yhdisteet:
CL
\-v /-Λ O CO-H
N_'V-O-C-NH-C-Z
/ \ — / H
/ -'
CL
Taulukko 14
Esim.
nro_-Z_ 0 li 25 -CH2-CH2-C-NH2 0 n 26 -CH2-CH2-C-NHS02He ih S /T7\
• 27 -CH2-CH2-C-NH-r M
• ·
:T: /H
28 -CH2-CH2-<(j i| 'h ,,-a * · ! 29 -CI^-S-7 || :v.
* ·
1 *_ H
58 115048 CH9-CH2-CO-NH-^ // \ CH_-CH_-CO-NH—) u Λ-/ \/ || \\
X M- M
CH0-CH2-CO-NH-x(/ Y
V-^ NH2 valmistettiin samalla tavalla kuin on kuvattu esimerkissä 1 lukuunottamatta poikkeuksia, jotka on kuvattu tässä alla.
5 NMR-tulokset kullekin esimerkkien 25 - 32 yhdis- .· teille on kuvattu seuraavassa taulukossa.
• 1 * ♦ · • · » 1 ? • t • t * « · 1 · 59 115048 ^ Ξ v -—- IN Π fsjn—·—4 CN—«to CN Ifl y) -s ^ ^ ^ .— isi jd £ to td £ to "O to ϋ^σΤ w ^ rT Un <N σ\ O Lf~» O CT' ΓΟ ro ΓΌ r·1
4-J f-sj rs f-j CO 1>Τ CT> 'tT CN CO CO
J3 _ -w »1. 1-1 Λ nv -, /N
3 rsj \θ r-» r^« fN m r^. pj fN r» ^ roco-^ £
5. S = S
p — esi ·—· £ E - e
CTn ' ' ~ "C
^ r £ ^ CN ^ ^ XI I ™ ™ i <J\ ir\ I 1 cm | r-'· co o\ -r- - «-n. 'N 1v G - - - ™ -- s: » Ξ n: —· ^ l i l f-
r-^ w <r CO
rr1 o\ O O O
y < ^
LO
rH
5 <r S _ M ~ " -- — D +J i = ^ I—I O 1—1v s—"
2 ω = m co E
rö -H σ\ ro '—' E-I ·Ρ (7, ·"- ·1 O' +> ». VO X 1- ra vo i 1 ^ ra | o o' i E r~- VO r~- O /s ·"«. 1»
^ VO VO O '"O
rc * · 2 X X = g • · 1 rsll CO CO CO co^ 1‘ »1 1 tjl £ to to to
: 1 ΓΝ | '--' w w X
X erv o ^ Γ? • 1 i) ^o r** r- r^· ··· ^ «-s. ~» ^ *. ‘l O m ΓΟ ro ^ •«· « · • · * 1 · « » 1 .... e
. ·; ·. m 2 ^ ό ^ S
*,· · W S ^ 04 04 CV1 • · · * t liiti i i « · 60 115048 ΠΖ ojrszi™ ^ ^ ~ ~ £33 ,_, n_. ·*_* Ό · ιλ £ — _. .λ f—\ *- s.*» m "w* o CT' in -j- uo en en ^ en Lr^ r~~^ u~^ g co" to" to" to en —· to rs r-, en X _ _ 3 5 γν r-j “ ε" £ £ 3. to toto x 7 rT “τ'
Jr 41 5 CO 3 3 G n " ~ " xx Ξ Ξ 3 5 J 5
-— CO u-1 2 S
D 3; m O —h o 3 y -r ·»" < 4-» rö •ro tn T« ^ ^ _ !E Ä 0 -p = co CO Ξ ^ CU C. — — X ^ m E E —
3 -H S 5 — fM
rH -P 3. VO UI <~ 3 -M VO - <" ) S S i n. coi ! * ! e i λ a § «Γ - ^ 1 >1
4J
•P
:¾
CO
•H
rH
·.,,* 5-j| TO m 3 3 04 :v. 5| n <n « “> 8
• * CNl ·—' ^ _ CO
• t 3T ON o ^ F> Q
, , CJ VO Γ- 'O ^ CJ
• · * n ro co ro ηΊ 3
* * +J
* 4 » 4J
• * CJ
* * * Ό • * '« os :·: : e * | * * · -M O __ oj • · to H O' 2 _V ^ . . . M C ™ n TOTO * I < · * %
Hill
t » * 1 t * I
61 115048
Esimerkin 25 yhdiste valmistettiin, kuten on kuvattu esimerkissä 1, mutta käyttäen hydrogenaatioreaktiossa a-bentsyyli-4- [N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbo-nyyli-L-glutamiinia, jonka valmistus on kuvattu tässä seu-5 raavaksi. Hydrogenaatioreaktiossa etyyliasetaattiin lisättiin tetrahydrofuraania yllämainitun a-bentsyyliyhdisteen liukenemisen helpottamiseksi.
Esimerkkien 26 ja 27 yhdisteet valmistettiin, kuten on kuvattu esimerkissä 1, välimuotojen a-bentsyyli-4-[N,N-10 bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyyli-L-mesyyligluta-miinin ja a-bentsyyli-4-[N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]fe-noksikarbonyyli-L-(3-metyylifenyyli)glutamiinin hydrogeno-lyysillä, vastaavasti.
Esimerkin 2 8 yhdiste valmistettiin, kuten on kuvat-15 tu esimerkissä 1, hydrogenoimalla bentsyyli-4-[N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyyli-gamma-(5-tetratsolyy-li)-α-amino-L-butyraatti. Esimerkin 28 yhdiste valmistettiin myös toisella menetelmällä, kuten on kuvattu heti tämän jälkeen. Seurattiin esimerkin 1 kaltaista menetelmää, 20 mutta reaktiossa käytettiin (S)-2-amino-4-(1H-1,2,3,4- tetrasol-5-yyli)voihappoa [Z. Grzonka et ai., Tetrahedron 33_, 2299 - 2302 (1977)] L-glutamiinihappo-dibentsyylieste- : · : rin sijasta O-(4-[N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]fenyyli-0'- (4-nitrofenyyli)karbonaatin kanssa. Reaktio suoritettiin 25 vedettömässä DMF:ssä niin, että läsnä oli 2 ekvivalenttia ; ,·, trietyyliamiinia, 20 tuntia 25 °C:ssa. Kun oli haihdutettu kuivaksi, jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin, pestiin » » * laimealla sitruunahapolla, kuivattiin ja haihdutettiin kui- , vaksi. Tuote kiteytyi hitaasti etyyliasetaatista. Jäännös ; * * y* 30 kiteytettiin uudestaan etyyliasetaatista saaden esimerkin *..* 28 yhdiste (sp. 173 - 5 °C) .
>
Esimerkin 29 yhdiste valmistettiin samalla tavalla > · kuin on kuvattu esimerkin 28 ensimmäiselle valmisteelle, mutta 1-{4-[N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyyli-* *' 35 amino}-1-bentsyylioksikarbonyyli-2-(5-tiotetratsoli)etaania ' * käytettiin bentsyyli-4-[N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]fenok- 62 115048 sikarbonyyli-gamma-(5-tetratsolyyli)-a-amino-L-butyraatin tilalla. Samanlainen reaktiosuoritus antoi kumin, joka puhdistettiin pyiväskromatografiällä silikassa eluoiden 4 % muurahaishappo/etyyliasetaattiliuoksella (tilavuuden mu-5 kaan).
Esimerkin 29 yhdiste valmistettiin myös toisella menetelmällä, kuten tämän jälkeen on heti kuvattu.
l-amino-l-karboksi-2-(5-tiotetratsoli)etaani (600 mg, 2,89 mM) suspendoitiin vedettömään DMF:ään (48 ml), li-10 sättiin trietyyliamiinia (0,806 ml, 578 mM) ja suspensiota sekoitettiin. 0-(4- [Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)amino]fenyyli) -0'- (4-nitrofenyyli)karbonaattia (1,10 g, 2,89 mM) lisättiin yhtenä annoksena kiinteänä ja liuosta sekoitettiin 20 tuntia huoneenlämpötilassa. DMF poistettiin tyhjiössä. Jäännös 15 liuotettiin etyyliasetaattiin ja laimeaan sitruunahappoon. Etyyliasetaattikerros pestiin vedellä, kuivattiin natrium-sulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin. Saatu raaka-tuote kromatografoitiin silikageelissä ja eluoitiin etyyliasetaatissa olevalla 4 % muurahaishapolla saaden 4-[N,N-20 bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyyli-amino-1-karbok-si-2-(5-tiotetratsoli)etaani lasimaisena kiinteänä aineena (0,963 g). NMR (DMSOds) : 3,46 (dd, 1H) ; 3,69 (s, 8H) ; 3,8 :*·*: (dd, 1H) ; 4,38 (m, 1H) ; 6,72 (d, 2H) ; 6,93 (d, 2H) ; 8,12 • t (d, 1H) .
• « 25 Esimerkkien 30 ja 31 yhdisteet valmistettiin, kuten ; ,·, on kuvattu esimerkissä 1, hydrogenoimalla o!-bentsyyli-4- [Ν,Ν-bis (2-kloorietyyli) amino] fenoksikarbonyyli-Γ- [3- (bent- * « · syylioksikarbonyyl ime tyyli) fenyyli] -L-glutamiini ja cx-bent-syyli-4-[Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyyli- I I » ·;*! 30 gamma-[ [3-(5-tetratsolyyli) fenyyli]-L-glutamiini, vastaa- ·>' vasti.
',· Esimerkin 32 yhdiste valmistettiin, kuten on kuvat- tu esimerkissä 1, hydrogenoimalla o;-bentsyyli-4-[N,N-bis (2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyyli-gamma-[3-(bentsyyliok- i » 35 sikarbonyyliamino)fenyyli]-L-glutamiini.
: > t | 63 115048
Esimerkkien 25 - 32 yhdisteiden valmistuksessa käytettävät välimuodot a-bentsyyli-4[Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)amino]fenok-sikarbonyyli-L-glutamiini, jota käytettiin esimerkin 25 yh-5 disteen valmistuksessa valmistettiin, kuten on kuvattu esimerkissä 1 O-(4- [N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]fenyyli)-O'-(4-nitrofenyyli)karbonaatista, mutta korvaten L-glutamiini-happo-dibentsyyliesteritosylaatti o;-bentsyyli-L-glutamii-nilla [L. Zervas et ai., J. Am. Chem. Soc 8_7 (1), 99 - 104, 10 1965]. Tuote puhdistettiin nopealla kromatografiällä sili- kassa eluoiden 80 % EtOAc/20 % heksaani -liuoksella. Tuote saatiin valkoisena kiinteänä aineena, kun oli trituroitu eetterillä.
a-bentsyyli-4-[Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)amino]fenok-15 sikarbonyyli-gamma-mesyyli-L-glutamiini, jota käytettiin esimerkin 26 yhdisteen valmistuksessa, valmistettiin seuraavasti .
50 ml:ssa vedetöntä dikloorimetaania olevaa N-Boc-α-bentsyyli-L-glutamaattia (E. Klieger et ai., Ann. 673, 20 196 - 207, 1964) (10 g) käsiteltiin dimetyyliaminopyri- diinillä (DMAP) (3,9 g) ja disykloheksyylikarbodi-imidillä : : (6,73 g). Sitten reaktiopulloon lisättiin metaanisulfonami- j ; dia (3,04 g) ja reaktiota jatkettiin 25 °C:ssa 20 tuntia.
Dikloorimetaani haihdutettiin ja jäännös liuotettiin uudel-25 leen etyyliasetaattiin. Sitten etyyliasetaattiliuos pestiin ; , , 0,25 M sitruunahapolla, sen jälkeen vedellä ja kuivattiin ’!!/ Na2S04:n (vedetön) yllä. Etyyliasetaattiuutteen haihdutus antoi jäännöksen, joka puhdistettiin silikassa käyttäen nopeaa kromatografiaa käyttäen eluenttina metyleenikloridia,
I ! I
30 sitten 5 % metanoli/metyleenikloridiliuosta ja sitten 10 % • I I > » metanoli/metyleenikloridiliuosta saaden Boc-suojatun asyy-lisulf onamidin < » · i t · i » · < * 64 115048 CC^Bz tBoc-NH-CH-CH2-CH2-C0-NHS02He (L) NMR: δ 1,37 (s) 9H; 1,98 (m) 2H; 2,34 (t) 2H; 5,11 (d) 2H; 7,26 (d) 1H; 7,36 (s) 5H; 11,64 (s) 1H.
3,6 g Boc-suojattua asyylisulfonamidia suspendoi-5 tiin 50 ml: aan etyyliasetaattia, jonka jälkeen lisättiin 8 ekvivalenttia HCl:lla kyllästettyä etyyliasetaattia (22,4 ml 3,1 M liuosta). Sulfonamidilähtömateriaali liukeni ja reaktion annettiin jatkua 20 tuntia argonin alla 25 °C:ssa. Kaavan - t C02Bz
Cl.NH3-CH-CH2-CH2-C0-NHS02Me 10 mukainen a-bentsyyli-gamma-mesyyli-L-glutamiinivetykloridi tuotettiin valkoisena kiinteänä aineena, joka suodatettiin pois ja pestiin vedettömällä eetterillä ennen kuivausta ek-sikaattorissa. NMR: δ 2,08 (m) 2H; 2,52 (m) 2H; 3,20 (s) 15 3H; 4,09 (t) 1H; 5,15 - 5,35 (dd) 2H; 7,39 - 7,50 (m) 5H; noin 9 (leveä) 3H.
.·, : a-bentsyyli-4-[N,N-bis (2-kloorietyyli) amino] fenok- ,·**, sikarbonyyli-L-mesyyliglutamiini valmistettiin, kuten on kuvattu esimerkissä 1, O-(4 -[N,N-bis(2-kloorietyyli)- 20 amino] fenyyli) -01 - (4-nitrofenyyli) karbonaatista, mutta kor- * vaten L-glutamiinihappo-dibentsyyliesteritosylaatti a-bent- syyli-gamma-mesyyli-L-glutamiinivetykloridilla. Reaktiotuo- ·.: te puhdistettiin pyiväskromatografiällä silikassa eluoiden i · t etyyliasetaatissa olevalla 10 % muurahaishapolla (tilavuu-;*.(t 25 den mukaan) .
a-bentsyyli-4- [N,N-bis (2-kloorietyyli) amino] fenok-sikarbonyyli-gamma-(3-metyylifenyyli)-L-glutamiini, jota : .* käytettiin esimerkin 27 yhdisteen valmistuksessa, valmis- ’*”· tettiin seuraavasti.
1 1 5048 65 a-bentsyyli-4-[Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)amino]fenok-sikarbonyyli-L-glutamaatti valmistettiin, kuten on kuvattu esimerkissä 1, O-(4-[Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)amino]fenyyli)-O(4-nitrofenyyli) karbonaatista, mutta korvaten L-gluta-5 miinihappodibentsyyliesteri a-bentsyyli-L-glutamaatilla (viite C. Coutsogeorgopoulos et ai., J. Am. Chem. Soc 83, 1885, 1961) . Lisäksi reaktio suoritettiin vedettömässä DMF:ssä 25 °C:ssa kaksi tuntia. Tuote puhdistettiin pylväs-kromatografiällä (silika, Merck-tuotenumero 9385) käyttäen 10 etyyliasetaatti/heksaaniseoksia välillä 70/30, vastaavasti, 100 % etyyliasetaattiin. NMR-tulokset tuotteelle on kuvattu taulukossa 17.
Vedettömässä tetrahydrofuraanissa (5 ml) olevaa o;-bentsyyli-4- [Ν,Ν-bis (2-kloorietyyli) amino] fenoksikarbo-15 nyyli-L-glutamaattia (300 mg) käsiteltiin 1,1 ekvivalentilla trietyyliamiinia. Reaktioseokseen lisättiin hitaasti vedettömässä THF:ssa (10 ml) olevaa isobutyyliklooriformaattia (0,08 ml, 1,1 ekvivalenttia) -25 °C:ssa. 15 minuutin kuluttua lisättiin 1,1 ekvivalenttia (0,08 ml) vedettömässä 20 tetrahydrofuraanissa (5 ml) olevaa m-toluidiinia. Seoksen annettiin lämmetä 25 °C: seen ja sitten sitä sekoitettiin :>t>: jatkuvasti 18 tuntia. Sitten reaktioseos suodatettiin ja ·*·': suodos haihdutettiin saaden jäännös, joka puhdistettiin no- pealla kromatograf iällä käyttäen etyyliasetaatti/-.·**. 25 heksaaniseoksia eluenttina. Sopivien fraktioiden haihdutus ; >·ι antoi a-bentsyyli-4-[Ν,Ν-bis (2-kloorietyyli) amino] fenoksi- '11,* karbonyyli-gamma- (3-metyylifenyyli) -L-glutamiinin valkoise- * · t na kiteisenä kiinteänä aineena. Tämän tuotteen NMR-tulokset on kuvattu taulukossa 17.
•*1 3 0 Esimerkin 29 yhdisteen valmistuksessa käytetty * * t *...· 1- {4- [Ν,Ν-bis (2-kloorietyyli) amino] fenoksikarbonyyliamino} - l-bentsyylioksikarbonyyli-2-(5-tiotetratsoli) etaani valmis-tettiin seuraavasti.
l-amino-l-karboksi-2-(5-tiotetratsoli)etaani val-35 mistettiin lisäämällä β-kloorialaniinia (18,50 g, 115,6 ' * mmol) (Sigma Chemical Co.) ja 5-tiotetratsolia (11,79 g, 66 115048 115,6 mmol) (valmistettiin, kuten on kuvattu EP-patenttijulkaisussa numero 33 965) 230 mitään 2 M natrium- hydroksidiliuosta sekoittaen. Sitten reaktioseos lämmitettiin huoneenlämpötilasta 90 °C:seen 1¾ tunniksi. Sitten re-5 aktioseoksen annettiin jäähtyä huoneenlämpötilaan ja sitten se jäähdytettiin edelleen jää/metanolihaudejäähdytyksellä, seos tehtiin happamaksi pH 4,0 taan konsentroidulla suolahapolla ja sekoitusta jatkettiin % tuntia. Tuloksena syntynyt saostuma suodatettiin pois, pestiin kylmällä vedellä ja 10 sitten eetterillä ja suodatettiin kuivaksi imulla saaden 6,9 g. Emoliuoksen pH tarkistettiin uudelleen ja sen havaittiin nousseen noin 5,5:een. Yllä oleva menetelmä toistettiin ja saatiin 2,3 g tuotetta lisää. Tämä kuivattiin korkeassa tyhjiössä. NMR: h 3,30 - 3,50 ppm (m) 2H; 4,16 -15 4,22 ppm (q) 1H; 7,47 ppm (leveä) H20 vaihtelee NH2:n kans sa .
Alkuaineanalyysi - odotettu C = 23,2, H = 4,4, N = 33,8 (+1 mol H20:ta) löydetty C = 23,1, H = 4,4, N = 33,7 (9,6 % H20:ta) 20 1-{4-[N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyy- liamino}-l-bentsyylioksikarbonyyli-2-(5-tiotetratsoli)-: .* etaani valmistettiin, kuten on kuvattu esimerkissä 1, : O- (4 - [N, N-bis (2-kloorietyyli) amino] - f enyyli) -O ' - (4-nitro- ;\j fenyyli)karbonaatista, mutta korvaten L-glutamiinihappodi- 25 bentsyyliesteri gamma- (5-tiotetratsolyyli) - o;-bent syy li ok- : ,·, sikarbonyyliamino-L-voihapolla (viite Z. Grzonka et ai.,
Tetrahedron Letters 3J3, 2399 - 2302, 1977). Liuottimena käytettiin vedetöntä dimetyyliformamidia ja reaktio suoritettiin 25 °C:ssa. Reaktiota suoritettiin kaksi tuntia ja 30 tuote puhdistettiin nopealla kromatografiällä silikassa ja ‘ eluoitiin seoksella, joka oli 2 % muurahaishappoa etyyli- asetaatti/metyleenikloridiliuoksessa (3:1 tilavuuden mu- i · kaan) . Tämän tuotteen NMR-tulokset on kuvattu taulukossa 16.
35 Esimerkissä 27 käytetty a-bentsyyli-4-[N,N-bis(2- kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyyli-gamma-[3-(bentsyyli- 67 115048 oksikarbonyylimetyyli)fenyyli]-L-glutamiini valmistettiin seuraavasti.
3-aminofenyylietikkahappobentsyyliesteri-^-toluee-nisulf onihappo valmistettiin lisäämällä 3-aminofenyylietik-5 kahappoa (10 g) ja p-tolueenisulfonihappomonohydraattia (13,2 g) tolueenissa (30 ml) olevaan bentsyylialkoholiin (27,2 ml). Seosta kuumennettiin takaisinvirtautuksella ja muodostunut vesi kerättiin Dean-Stark-keräysastiaan. Kun kaikki vesi oli tislattu pois, seoksen annettiin jäähtyä 10 25 °C: seen ennen kuin se laimennettiin dietyylieetterillä ja sijoitettiin jäähauteeseen yhdeksi tunniksi. Kiteinen p-tolueenisulfonaatti suodatettiin pois ja kuivattiin eksi-kaattorissa (23,5 g). NMR: δ 2,31 (s) 3H, 3,82 (s) 2H, 5,11 (s) 2H, 7,11 (d) 2H, 7,25 - 7,45 (m) 8H, 7,52 (d) 2H.
15 oi-bentsyyli-4- [N,N-bis (2-kloorietyyli) amino] fenok- sikarbonyyli-Γ-[3-(bentsyylioksikarbonyylimetyyli)fenyyli]-L-glutamiini valmistettiin, kuten on kuvattu esimerkissä 27, mutta korvaten m-toluidiini 3-aminofenyylietikka-happobentsyyliesterillä.
20 Esimerkissä 31 käytetty a-bentsyyli-4-[N,N-bis(2- kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyyli-Γ-[3-(5-tetratsolyy-li) fenyyli]-L-glutamiini valmistettiin, kuten on kuvattu
tt I
• ' I esimerkissä 27, mutta korvaten m-toluidiini 3-(tetratsol-5- :**,· yyli) aniliinilla. Lähtömateriaalina tarvittava 3-(tetrat- 25 sol-5-yyli)aniliini valmistettiin seuraavasti. Liuokseen, : jossa oli 5-(3-nitrofenyyli) tetratsolia [Finnegan, W.G., ’»j.| Henry, R.A. ja Lolquist, R. , J.A.C.S. 80, 3908 (1958)] (52 » t · g) etanolissa (2,5 1), lisättiin 10 % palladium-hiiltä (5 g) ja seosta sekoitettiin vedyn alla 16 tuntia. Kata-
1 > I
·;·* 30 lyytti poistettiin suodattamalla ja suodos haihdutettiin *..* saaden haluttu lähtömateriaali (40,5 g, sp. = 188 - 9 °C) .
Esimerkissä 32 käytetty a-bentsyyli-4-[N,N-bis(2 - * * kloorietyyli) amino] fenoksikarbonyyli-gamma- [3- (bentsyyliok- * · sikarbonyyliamino)fenyyli]-L-glutamiini valmistettiin, ku-• *' 35 ten on kuvattu esimerkissä 27, mutta korvaten m-toluidiini ’’· 3- (bentsyylioksikarbonyyliamino) aniliinilla.
68 115048
NMR
C1CH2CH2N: 3,68 (m) 8H Aromaattiset: 6,68 - 7,74 (m) 1H ArCH20: 5,12 (s) 2H; 5,14 (s) 2H 5 aCH: 4,18 (m) 1H
Muut: 1,9 - 2,15 (m) 2H; 2,45 (m) 2H; 8,12 (d) 1H; 9,7 (s) 1H; 9,9 (s) 1H.
Esimerkin 32 yhdisteen valmistuksessa välimuotona käytetty 3 -(bentsyylioksikarbonyyliamino)aniliini valmis-10 tettiin seuraavasti. Kylmään (0 °C) liuokseen, jossa oli m-fenyleenidiamiinia (10 g) etyyliasetaatissa (200 ml), lisättiin vesipohjaista KHC03:a (9 g 300 ml: ssa H20:ta) sekoittaen. Lisättiin etyyliasetaatissa (100 ml) olevaa bent-syyliklooriformaattia (13,2 ml) tipoittain 10 minuutin ai-15 kana, sekoitettiin 0 °C:ssa yksi tunti ja sitten se tehtiin happamaksi (pH 2) lisäämällä M HCl:oa (vesipohjainen). Tuote uutettiin etyyliasetaattiin (250 ml) , pestiin suolavedellä, kuivattiin MgS04:n yllä ja tilavuus pienennettiin "tyhjiössä" saaden öljy. Öljy kromatografoitiin Merck-20 silikageelissä, jonka tuotenumero on 9385, ja eluoitiin heksaani/etyyliasetaattiliuoksella (7:3) saaden 8 g väli-muotoa matalan sulamispisteen omaavana kiinteänä aineena :V: (36 % saanto). NMR: 9,32 (s) 1H; 7,30 (m) 5H; 6,80 (t) 1H; 6,70 (m) 1H; 6,50 (m) 1H; 6,12 (m) 1H; 5,0 (s) 2H; 4,88 (s) 2 5 2H.
* · i » * » f f » i t I t 69 115048 ~ ~4 6i — — — -o H J-» oo ιλ -m ε_ ^2. 2L Ξ- -ϋ ±J αΓΰτΓ m co co σ' ov r~~ — ^ ^ H! ~ P Si! m r- c-M O _? ^ ^ E r-Γ oT" r-Γ vO~ r»~ co~~ rT n" - ω 04 oj CO Ov 3= 3= a;
~ 91 S S
£ £ e ? o S —
X cn" <N OJ CSJ
. , i I 1 CO CO^ c£ °£ 0 1—1 1—1 ^ ~ e" £ £ £ ^7- ^j- c-“i in ^ U — —' £ a ^ ^ ^ 33 33 31 cm oj £ £ rH O W W £ £ O £ in in co 3 y 3 m m m m
P
ITJ
Eh = — m ’P 33 CT' ^
Q> E ON — E
σι c £ e -^
•H £ c ·£ CN
t; ^ ro ro ~· π3 _ _ r-~ 1 'T -
*. ° S ri r- VO
• d -s. ^
» ft ^ vo SO VO
i » 1 I
:’1.: 541 S 5 £ £ !.,’ °cii e e s' 5 . . 33 ^ ^ w £ * · O ro -H ·— * 1 1 —t \0 ^ ^ * I · ^ ro n ro
* 1 » 0J
* · 1 ΣΓ * 1 1 ΓΜ
* O
r-i to » x = =? 5 ΓΜ "Z. 1ζ
O O O O
t 1 , Ö o u o
, <N __T\1 £N
|!i! x S ö o G
I »
t I
9 ί M t » 70 115048 χπ: =: = =: x ΧΧΞ rj M r-J (N —« ^ ^ ~ 'S' ΊΓ e ^ w y en rn un r-. m O un un r-4 g 04 O <r vo -h on ^ corn o4 m co ct> o-j co
x X S
04 (N ^ Ϊ Ϊ ^ m m fV^ χ 04 04 ^ ‘rsj | J- oy ^ O ^ Ξ * * ' - __ r—^ £ £ h n- m cr> w ° ^ ^ C3 ^ <r ^ ro o λ: 4-> n3 E XX 3Ξ
m 04 04 04 <N
O w> W 10 w
S ^Ρ1* ίΓ o’ rP
o u ~£ n. n, ^ c un un un Λ? ^
O
r-λ 3 ΠΙ _ ^ £ co ^ w 'e ^ 3 - £ £ £ ^ £_ “1 e £ 7 ? g r- vo g_ , 5 ’ # ^ \£) U3 ^ • ·
; , , I
: ‘ : zr^i = x S
• t 2-j CO oo ^5L
. ** t Nl E E ^ ’ * ‘; g 3 o o .,, -π p- Γ-. >" » · o ^ _Γ" » ^ * m m ^ f * *
! I I
I * » | 1 V * x 5
2 S
o °
, ϋ O
™ S* aT
;. x 5 u u • ·' * l » 71 115048
Esimerkki 33 N-(4-[N,N-bis(2-jodietyyli) amino]fenoksikarbonyy-li)-L-glutamiinihappo 4-[N,N-bis(2-jodietyyli)amino]fenoksikarbonyyli-L-5 glutamiinihappo-di-t-butyyliesteri (188 mg) (katso kaavio 9 - yhdiste 14) suspendoitiin trifluorietikkahappoon (TFA) (4 ml) ja sitä sekoitettiin 30 minuuttia ympäristölämpöti-lassa. TFA poistettiin alennetussa paineessa, jäljelle jäänyt öljy laimennettiin etyyliasetaatilla (3 ml) ja haihdu- 10 tettiin saaden 4-[Ν,Ν-bis(2-jodietyyli)amino]fenoksi- karbonyyli-L-glutamiinihappo-1,4 TFA-0,8 EtOAc -yhdistettä (162 mg) saannon ollessa 82 % (yhdiste 15 kaaviossa 9) . NMR: 1,84 - 2,01 (m) 1H; 2,36 (m) 2H; 3,31 (t) 4H; 3,72 (t) 4H; 4,02 (m) 1H; 6,66 (d) 2H; 6,94 (d) 2H; 7,92 (d) 1H.
15 Välimuotona käytetty 4-[Ν,Ν-bis(2-jodietyyli)ami no] fenoksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-di-t-butyyliesteri valmistettiin seuraavasti.
a) Liuosta, jossa oli bis(2-mesyylioksietyyli)amino] fenoksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-di-t-butyyliesteri - 20 tuotetta (1,0 g) (katso kaavio 9 - yhdiste 11) asetonitrii- lissä (50 ml), sekoitettiin natriumjodidin (1,0 g) kanssa ·' } 70 °C:ssa 20 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja suodos : : konsentroitiin tyhjiössä. Jäännös kromatografoitiin silika- ; ,· geelissä eluoiden sykloheksaanissa olevalla etyyliasetaa- * 25 tiliä (1:5) saaden 4-[Ν,Ν-bis (2-jodietyyli) amino] fenok- ; , sikarbonyyli-L-glutamiinihappo-di-t-butyyliesteri (katso ,· >_ kaavio 9 - yhdiste 14) öljynä (0,75 g) saannon ollessa 68 %. NMR: 1,41 (s) 9H; 1,43 (s) 9H; 1,81 - 1,95 (m) 1H; 2,34 (m) 2H; 3,31 (t) 4H; 3,72 (t) 4H; 4,00 (m) 1H; 6,67 ·;;; 30 (d) 2H; 6,93 (d) 2H; 7,91 (d) 1H.
b) bis (2-mesyylioksietyyli) amino] fenoksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-di-t-butyyliesteri 1 ♦ J Liuosta, jossa oli 4-[N,N-bis(2-hydroksietyyli)ami no] fenoksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-di-t-butyyliesteriä ‘ 35 (2,53 g) (saatiin, kuten on kuvattu esimerkissä 8 - katso myös kaavio 4) pyridiinissä (9 ml) , sekoitettiin metaani- 72 115048 sulfonyylikloridin (1,8 ml) kanssa 2 °C:ssa 20 minuuttia, jonka jälkeen sekoitettiin 80 °C:ssa 11 minuuttia. Reak-tioseos jaettiin etyyliasetaatin ja sitruunahap-po/vesiliuoksen (10 %) kesken. Orgaaninen faasi erotettiin, 5 pestiin vedellä, kuivattiin (Na2S04) ja haihdutettiin kuivaksi. Jäännös kromatografoitiin silikageelissä eluoiden dikloorimetaanissa olevalla etyyliasetaatilla (1:9) saaden 4-[Ν,Ν-bis(2-mesyylioksietyyli)amino]fenoksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-di-t-butyyliesteri (yhdiste 11 kaaviossa 9) 10 öljynä (0,95 g) saannon ollessa 28 %. NMR: 1,41 (s) 9H; 1,43 (s) 9H; 1,8 - 1,99 (m) 1H; 2,34 (m) 2H; 3,16 (s) 6H; 3,72 (t) 4H; 3,9 (m) 1H; 4,31 (t) 4H; 6,78 (d) 2H; 6,92 (d) 2H; 7,9 (d) 1H.
Esimerkki 34 15 N-(4-[Ν,Ν-bis(2-bromietyyli) amino]fenoksikarbonyy- li)-L-glutamiinihappo 4-[Ν,Ν-bis(2-bromietyyli)amino]fenoksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-di-t-butyyliesteri (133 mg) (katso kaavio 9 - yhdiste 12) suspendoitiin TFA:han (4 ml) ja sitä sekoi-20 tettiin 30 minuuttia ympäristölämpötilassa. TFA poistettiin alennetussa paineessa, jäljelle jäänyt öljy laimennettiin ! etyyliasetaatilla (3 ml) ja haihdutettiin saaden 4-[N,N- bis (2-bromietyyli) amino] fenoksikarbonyyli-L-glutamiinihap-;’·,· po-1,3 TFA-0,9 EtOAc -yhdiste (126 mg) saannon ollessa 80 % 25 (katso kaavio 9 - yhdiste 13). NMR: 1,83 - 2,01 (m) 1H; 2,36 (m) 2H; 3,58 (t) 4H; 3,76 (t) 4H; 4,03 (m) 1H; 6,71 "!/ (d) 2H; 6,94 (d) 2H; 7,92 (d) 1H.
* * i» ’ Välimuotona käytetty 4-[Ν,Ν-bis(2-bromietyyli)- amino]fenoksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-di-t-butyylieste- t · 30 ri valmistettiin seuraavasti.
Liuosta, jossa oli bis(2-mesyylioksietyyli)ami-<· no]fenoksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-di-t-butyyliesteriä (0,48 g) (yhdiste 11 kaaviossa 9 - saatiin, kuten on kuvat-tu esimerkissä 8 - katso myös kaavio 4) asetonitriilissä 35 (30 ml), sekoitettiin litiumbromidin (0,26 g) kanssa 70 °C:ssa 22 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja suodos 73 115048 konsentroitiin tyhjiössä. Jäännös kromatografoitiin silika-geelissä eluoiden dikloorimetaanissa olevalla etyyliasetaatilla (1:5) saaden 4-[Ν,Ν-bis(2-bromietyyli)amino]-fenok-sikarbonyyli-L-glutamiinihappo-di-t-butyyliesteri (yhdiste 5 12 kaaviossa 9) öljynä (0,37 g) saannon ollessa 83 %. NMR: 1,41 (s) 9H; 1,43 (s) 9H; 1,8 - 1,98 (ra) 1H; 2,34 (m) 2H; 3,58 (t) 4H; 3,76 (t) 4H; 3,97 (m) 1H; 6,72 (d) 2H; 6,93 (d) 2H; 7,93 (d) 1H.
Esimerkki 35 10 N-(4- [N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]-2-fluorifenyy- likarbamoyyli)-L-glutamaatti
Otsikon yhdiste [NMR (draso) : 8,0 (s) 1H; 7,65 (t) 1H; 6,6 (m) 3H; 4,2 (m) 3H; 3,7 (s) 8H; 2,28 (m) 2H; 1,8 (m) 2H] valmistettiin dibentsyyli-4-[Ν,Ν-bis(2-kloori- 15 etyyli)amino]-2-fluorifenyylikarbamoyyli-L-glutamaattiväli-muodosta [NMR (dmso) : 7,62 (t) 1H; 7,35 (s) 10H; 6,8 (d) 1H; 6,75 (m) 2H; 5,1 (d) 4H; 4,33 (m) 1H; 3,7 (s) 8H; 2,43 (m) 2H; 2,0 (m) 2H] samalla tavalla kuin vastaavassa vai heessa esimerkissä 5.
20 Välimuoto valmistettiin seuraavasti.
Liuokseen, jossa oli 3-fluori-4-nitroaniliinia (1,3 : : g) jääetikkahapossa (30 ml), lisättiin etyleenioksidia (6,6 ·**': g) ja reaktioseosta pidettiin suljetussa pullossa laborato- ;* j rion lämpötilassa 72 tuntia. Liuos haihdutettiin alennetus- 25 sa paineessa puoleen alkuperäisestä tilavuudestaan, laimen- * · ; >. nettiin kyllästetyllä vesipohjaisella natriumkloridiliuok- » * · '!!.* sella ja uutettiin kolme kertaa etyyliasetaatilla. Etyyli- * asetaattiuutokset yhdistettiin, pestiin kyllästetyllä vesi pohjaisella natriumbikarbonaatilla, haihdutettiin ja jään->· 30 nös puhdistettiin nopealla kromatograf iällä silikageelissä.
Kun oli eluoitu heksaanilla, joka sisälsi 50 % (v/v) etyy- liasetaattia, muuttumattoman lähtömateriaalin ja monosubs-tituoidun tuotteen poistamiseksi, eluutio etyyliasetaatilla » · antoi 2',2'-(3-fluori-4-nitroanilino)dietanolituotteen (sp.
• 35 99 - 101 °C) .
» < » 1 1 5048 74 Näin saatu tuote (280 mg) liuotettiin dikloorime-taaniin (7,5 ml), lisättiin pyridiiniä (0,1 ml) ja liuos jäähdytettiin jää/vesihauteessa. Lisättiin tipoittain tio-nyylikloridia (0,25 ml) sekoittaen. Kun kaikki oli lisätty, 5 reaktioseosta kuumennettiin takaisinvirtautuksella yksi tunti ja sitten jätettiin laboratorion lämpötilaan 20 tunniksi. Liuos laimennettiin dikloorimetaanilla (10 ml) ja pestiin kolme kertaa vedellä, kuivattiin natriumsulfaatin yllä, haihdutettiin ja jäännös kiteytettiin uudelleen me-10 tanolista saaden [N,N-bis(2-kloorietyyli)]-3-fluori-4-nit-roaniliinituote (sp. 97 - 98 °C) .
Näin saatua tetrahydrofuraanissa (7,5 ml) olevaa tuotetta (200 mg) sekoitettiin 16 tuntia vedyn alla palla-dium/hiilen (20 mg 5 prosenttista w/w) läsnä ollessa. Kata-15 lyytti poistettiin suodattamalla ja liuotin haihdutettiin. Tuloksena syntynyt jäännös liuotettiin pienimpään mahdolliseen määrään metanolia ja raakatuote saostettiin lisäämällä ylimäärä dietyylieetteriä, joka oli kyllästetty suolahapolla. Uudelleen kiteytys metanoli/dietyylieetteriliuoksesta 20 antoi 4-[N,N-bis(2-kloorietyyli)amino-2-fluorianiliniumklo-ridituotteen (sp. 195 - 200 °C, haj.).
‘itt' Tuloksena syntynyt tuote muutettiin halutuksi väli- muodoksi samalla tavalla kuin vastaavassa vaiheessa esimer- :' · kissä 5.
• · 25 Esimerkit 36 - 43 : ,·, Esimerkkien 36 - 43 yhdisteiden rakenne- ja alku- aineanalyysitulokset on kuvattu taulukossa 17.
Taulukossa 17 luetellut yhdisteet valmistettiin esimerkissä 16 kuvattujen menetelmien mukaisesti. Näin ol-•;y 30 Ien esimerkin 36 yhdiste valmistettiin korvaamalla aniliini esimerkissä 16 bentsyyli-4-aminobentsoaatilla (Aldrich Che-·*· mical Co., Ltd.). Samalla tavalla esimerkkien 37 -43 yhdis- teet valmistettiin korvaamalla aniliini esimerkissä 16 bentsyyli-4-aminobentsoaatilla, sec-butyyliamiinilla, 35 n-propyyliamiinilla, iso-propyyliamiinilla, sykloheksyyli- 75 115048 amiinilla, bentsyyliamiinilla tai p-bentsyylioksianilii-nilla.
Taulukko 17 5
COOH
cich2ch0 |
N -/ Λ- OCONHCH
cich2ch2 ' \_/ [ ch2ch2u
Esim.
nro U % odotettu % löydetty
C H N C H N
36 -CO-NH-p-CgH^COOH 51,5 5,26 7,83 51,7 5,10 7,50 37 -CO-NH-n-C4H9 51,9 6,32 9,09 52,0 6,38 8,97 38 -CO-NH-sec-C4H9 51,9 6,32 9,09 52,2 6,34 9;09 ' 39 -CO-NH-n-C^H-, 50,9 6,07 9,37 50;6 6,35 8,95 40 -CO-NH-i-C3H7 50,9 6, 07 9,37 51,1 6,07 9,40 /·;’ 41 -C0-NH-C6Hu 54,1 6,40 8, 60 54,3 6, 73 8, 72 V : 42 -C0-HN-CH2C6H5 55,6 5,48 8,46 56,0 5,52 8,21 43 -CO-NH-p-C6H5OH 53,0 5,06 8,43 53,0 5,24 7,90 > I I • | • ••ia : io 76 115048
Esimerkki 44 N- (4- [Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)amino]fenyylikarbamo-yyli)-L-glutamiinihappo
Liuosta, jossa oli dibentsyyli-4-[Ν,Ν-bis(2-kloo-5 rietyyli)amino]fenyylikarbamoyyli-L-glutamaattivälimuotoa (1,138 g) DMFrssä (15 ml), hydrogenoitiin 10 % Pd/C:n yllä 16 tuntia. Kun oli suodatettu ja haihdutettu tyhjiössä, jäännös liuotettiin CHCl3:een (20 ml). 18 tunnin kuluttua kiteinen saostuma suodatettiin pois ja kuivattiin tyhjiössä 10 saaden 4-[Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)amino]fenyylikarbamoyyli-L-glutamiinihappo. Saanto 730 mg (93 %). Kun oli kiteytetty uudelleen asetoni/CHCl3-liuoksesta, muodostuivat mikroskooppiset sauvat, sp. 116 - 118 °C. NMR (CD3COCD3) : δ 8,0 (s) 1H; 7,2 (d) 2H; 6,6 (d) 2H; 6,2 (d) 2H NH; 4,4 (m) 1H; 15 3,6 (m) 8H; 2,5 - 1,9 (m) 4H.
Dibentsyylivälimuoto valmistettiin seuraavasti (katso kaavio 10).
Dibentsyyliglutamaatti-p-tolueenisulfonaatti (saatavissa tuottajalta Bachem UK; 0,25 g) liuotettiin vedettö-20 mään metyleenikloridiin (10 ml) argonin alla ja jäähdytettiin 0 °C:seen. Lisättiin pyridiiniä (0,162 ml), jonka jäl-keen lisättiin nopeasti tolueenissa olevaa fosgeenia (1,93 M, 0,311 ml). Liuosta sekoitettiin 0 °C:ssa kaksi tuntia, • · ;*>,· lisättiin pyridiiniä (0,05 ml) ja sen jälkeen 4- [N,N-bis (2- 25 kloorietyyli) amino] aniliniumkloridia yhtenä eränä. Seosta ; ,*, sekoitettiin 10 minuuttia 0 °C:ssa ja sitten 18 tuntia huo- neenlämpötilassa. Sitten reaktioseos laimennettiin etyyli-asetaatilla ja vedellä. Sitten orgaaninen kerros pestiin vuoron perään laimealla sitruunahapolla (2 x) , vedellä ja ' > » *··· 30 kyllästetyllä suolavedellä, kuivattiin ja haihdutettiin * i t saaden haluttu dibentsyylivälimuoto kiinteänä aineena.
;\· Vaihtoehtoinen reitti dibentsyylivälimuodon valmis- • · tamiseksi on seuraava.
• ·
Liuokseen, jossa oli trifosgeenia (1 g) klorofor- * · · : *’ 35 missä (80 ml), lisättiin 10 °C:ssa 4-[Ν,Ν-bis(2-kloori- • Mi» * * etyyli)amino]aniliniumkloridia (2,7 g). Pitäen lämpötila 77 115048 10 °C:ssa lisättiin trietyyliamiinia (4,15 ml) ja seosta sekoitettiin ja sen annettiin lämmetä ympäristölämpötilaan 15 minuutiksi. Tähän seokseen lisättiin yhtenä eränä di-bentsyyliglutamaattitosylaattia ja trietyyliamiinia (1,7 5 ml). Kun oli ollut 1,5 tuntia ympäristölämpötilassa, seos laimennettiin kloroformilla (100 ml) , pestiin kahdesti vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin kuivaksi. Jäännös kroma-tografoitiin Merck-silikageelissä, jonka tuotenumero on 9385, eluoiden etyyliasetaatti-heksaaniliuoksella saaden 10 dibentsyyli-4-[N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]fenyylikarbamo-yyli-L-glutamaatti (2,5 g), sp. 119 - 22 °C.
Esimerkki 45 4-[N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]fenyylikarbamoyyli-gamma-[N(3-karboksimetyyli)anilino]-L-glutamaatti (yhdiste 15 7 kaaviossa 11)
Otsikon yhdiste valmistettiin seuraavasti (katso kaavio 11). Liuosta, jossa oli välimuotoa (yhdiste 6 kaaviossa 11; 1 g) 20 ml THF:ää, hydrogenoitiin 30 % Pd/C-.n (100 mg) yllä neljä tuntia. Sitten seos suodatettiin Celiten lä-20 pi ja haihdutettiin saaden ruskea öljy, joka sitten puhdistettiin nopealla kromatografiällä käyttäen 1 % ja 3 % muu-·, : rahaishappo/etyyliasetaattiseoksia eluenttina, haihdutet- i : tiin sopivat fraktiot ja annettiin reagoida eetterin kanssa saaden 300 mg otsikon yhdistettä. NMR: CICH2CH2N: 3,66 (s) .·*. 25 8H; aromaattiset: 6,66 - 7,46 (m) 8H; aCH: 4,22 (m) 1H; muut: 1,66 - 2,06 (m) 2H; 2,39 (m) 2H; 3,49 (s) 2H; 6,29 « » » (d) ih; 8,33 (s) m,· 9,93 (s) m,· 12,5 (b,s) 2h.
« * · Välimuoto valmistettiin seuraavasti.
, (a) 3-aminofenyylietikkahappobentsyyliesteri-p-to- • f · ·· 30 lueenisulfonihappo valmistettiin lisäämällä 3-aminofenyyli- • · ’··* etikkahappoa (10 g) p-tolueenisulfonihappomonohydraattia (13,2 g) tolueenissa (30 ml) olevaan bentsyylialkoholiin • · (27,2 ml). Seosta kuumennettiin takaisinvirtautuksessa ja . muodostunut vesi kerättiin Dean-Stark-keräysastiaan. Kun » t * ·* 35 kaikki vesi oli tislattu pois, seoksen annettiin jäähtyä il»»* ' * 25 °C:seen ennen kuin laimennettiin dietyylieetterillä ja 1 1 5048 78 sijoitettiin jäähauteeseen yhdeksi tunniksi. Kiteinen p-tolueenisulfonaatti suodatettiin pois ja tuote kuivattiin eksikaattorissa (23,5 g). NMR δ 2,31 (s) 3H; 3,82 (s) 2H; 5,11 (s) 2H; 7,11 (d) 2H; 7,25 - 7,45 (m) 8H; 7,52 (d) 2H.
5 (b) Liuosta, jossa oli N-Boc-a-bentsyyli-L-gluta- maattia (5 g 20 ml:ssa) vedettömässä DMF:ssä 5 °C:ssa, kuumennettiin hydroksibentsotiatsolin (HOBT) (1,1 eksivalent-tia; 2,45 g) kanssa ja reaktioseosta sekoitettiin tässä lämpötilassa argonin alla 10 minuuttia. Sitten lisättiin 10 disykloheksyylikarbodi-imidiä (DCCI) (1,1 ekvivalenttia; 3,37 g) ja reaktiota sekoitettiin 10 minuuttia lisää 5 °C:ssa ennen kuin sen annettiin lämmetä 25 °C:seen ja sitä sekoitettiin lisää 45 minuuttia. Sitten lisättiin liuosta, jossa oli 3-aminofenyylietikkahappobentsyyliesteri-p-15 tolueenisulfonihappoa [vaiheessa (a) saatu tuote] (1,1 ekvivalenttia; 6 g) yhdessä 1,1 ekvivalentin kanssa trietyy-liamiinia (2,23 ml) 10 ml:ssa vedetöntä DMF:ää, ja reaktioseosta sekoitettiin 25 °C:ssa 20 tuntia lisää. Sitten disykloheksyyliureasaostuma suodatettiin pois ja DMF-suo-20 dokset haihdutettiin kuiviksi. Sitten jäännös liuotettiin uudelleen EtOAc:iin. Sitten etyyliasetaattiliuos pestiin ί4ιιί NaHC03:lla (vesipohjainen), sitten suolavedellä ja sitten kuivattiin Na2S04:n (vedetön) yllä. Etyyliasetaattiuutoksen haihdutus antoi jäännöksen, joka puhdistettiin sitten nope- • · 25 alla pylväskromatografiällä käyttäen 30, 40 ja 50 % EtO- * * » : .*, Ac/heksaaniseoksia eluenttina. Sopivien fraktioiden haihdu- I I t * * · * * tus antoi 5 g tuotetta (yhdiste 4 kaaviossa 11) .
• · · NMR-tulokset: 1,39 (s) 9H; 1,81 - 2,10 (m) 2H; 2,38 (m) 2H; , 3,69 (s) 8H; 4,03 (m) 1H; 5,12 (m) 4H; 6,92 (d) 1H; 7,21 • * · *;;; 30 (m) 1H; 7,35 (m) UH; 7,42 (d) 1H; 7,52 (s) 1H; 9,89 (s) 1H.
(c) Vaiheessa (b) saatu tuote (5 g) suspendoitiin • · 10 ml:aan eetteriä ja lisättiin 5 ml dikloorimetaania (liu kenemisen helpottamiseksi), jonka jälkeen lisättiin 8 ekvi- t t 35 valenttia kyllästettyä eetteri/HCl:oa. Sitten reaktioseok-sen annettiin sekoittua 20 tuntia 25 °C:ssa. Tuote oli täs- 79 115048 sä vaiheessa sekoittumatonta öljyä. Sitten eetteri haihdutettiin ja jäännös atseotropoitiin kahdesti tolueenilla ennen kuin lisättiin eetteriä ja haihdutettiin saaden 5 g tuotetta (yhdiste 5 kaaviossa 11) keltaisena vaahtona. NMT-5 tulokset CDC13: δ 2,35 (m) 2H; δ 2,65 (m) 2H; δ 3,50 (s) 2H; δ 4,22 (bs) 1H; δ 5,01 (s) 2H; δ 6,8 - 7,6 (m) 14H; δ 8,65 (bs) 3H; δ 9,35 (s) 1H.
(d) Liuosta, jossa oli 1,1 ekvivalenttia (0,66 g) 1,1-karbonyylidi-imidatsolia 20 ml:ssa vedetöntä DMF:ää 10 5 °C:ssa, käsiteltiin liuoksella, joka sisälsi 1 g:n 4- [N,N-bis (2-kloorietyyli)amino]aniliniumkloridia. Sitten reaktioseosta sekoitettiin 5 °C:ssa 15 minuuttia ennen kuin lisättiin 1 ekvivalentti (1,84 g) vaiheessa (c) saatua tuotetta yhdessä 1,1 ekvivalentin (0,56 ml) kanssa trietyyli-15 amiinia 10 ml:ssa vedetöntä DMF:ää, ja sitä sekoitettiin kaksi tuntia lisää 25 °C:ssa. Sitten trietyyliamiinivety-kloridi ppt poistettiin suodattamalla ja THF-suodokset haihdutettiin ja jäännös liuotettiin uudelleen EtOAc:iin. Sitten etyyliasetaattiliuos pestiin vedellä, sen jälkeen 20 0,25 M sitruunahapolla, sitten suolavedellä ja kuivattiin
Na2S04:n (vedetön) yllä. Etyyliasetaatin haihdutus antoi jäännöksen, joka puhdistettiin nopealla pylväskromatografi-alla käyttäen 30, 40 ja 50 % etyyliasetaatti/heksaani- seoksia eluenttina. Sopivien fraktioiden haihdutus antoi 2 5 halutun välimuodon (yhdiste 6 kaaviossa 11) . NMR-tulokset: CICH2CH2N: 365 (s) 8H; aromaattiset: 6,63 - 7,5 (m) 18 H; * *
ArCH20: 5,10 (s) 2H; 5,12 (s) 2H; o;CH: 4,32 (m) 1H; muut: ’ ’ 1,83 - 2,13 (m) 2H; 2,41 (m) 2H; 6,42 (d) 1H; 8,25 (s) 1H; 9,91 (s) 1H.
·’· 3 0 Esimerkki 46 i * ft **·* 4- [N,N-bis (2-kloorietyyli) amino] fenoksikarbonyyli- L-glutamiinihappo-gamma- (3,5-dikarboksi) anilidi * ·
Esimerkissä 16 kuvattu menetelmä toistettiin käyt-täen a-bentsyyli-4-[N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksi- • ·' 35 karbonyyli-L-glutamiinihappo-gamma-anilidin sijasta a-bent- syyli-4-[N,N-bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyyli-L- 80 115048 glutamiinihappo-gamma-(3,5-dikarboksibentsyyli)anilidia saaden 4- [Ν,Ν-bis (2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-gamma-(3,5-dikarboksi)anilidi värittöminä kiteinä (sp. 167 - 170 °C) .
5 Alkuaineanalyysi - % odotettu C = 49,6, H = 4,87, N = 6,68 % löydetty C = 49,7, H = 4,9, N = 6,7 a-bentsyyli-4-[Ν,Ν-bis(2-kloorietyyli)amino]fenok-sikarbonyyli-L-glutamiinihappo-gamma-(3,5-dikarboksibentsyyli) anilidi saatiin samalla tavalla kuin on kuvattu esi-10 merkissä 16 gamma-anilinojohdannaiselle.
• · • ·
• « I
• · • | * · # * · • · · • · • * • · · (Il • * · · • « » • · · « * · » t · • · I · » · * * · ***** > * 81 115048
Kaavio 1 5 ciN ^ ciN o N——OH -H——O—^—O—N02 c/ / c/ 10 15
CL
\ O C02Bz _y/~°~U~NHO/^CQ2Bz cr 2 20 • · 4 · • · * 1 * 25 v : ci.
\_ /_χ o co2h _/N~\, ^-0^-nh-J^^co2h ·. Ci^ ; 30 2 1 ·
' I I
» » » 82 115048
Kaavio 2 OH
5 il OH Me X —~ x>~ nh2 oh 10
V
OH Me 15 /_^N~V)>“0B2
OH
20
O V
OH^_^ Me _ Cl^_ Me _ 25 /N—{X-01 _ /''‘“{X-0132 oh ci^ •»· • · * 1 » • · » 83 115048
Kaavio 3 5
OH
\_ F—->- ~)Ν_<θ>_Νθ2
OH
10 'f
CL
C\_ N-3 /=\ _^yNH2 -— /N vJ^N°2 15 s-> c/
Cl \ i : Cl· • : N-\ /=\ 9°2Bu ; N^-^ LIHCONH — 25 a/-7 ^COjBu' 30 » I · v
.; CL
• ^-\ /=\ co2h : N—^ V-NHCONH—l
iv: ^,/ / C02H
• ·, 35 Cl 2 1 »
X
84 115048
— CM
3 O
p o ( m ( o_y § ) °"f
° I
X
X
*b i o crt ^ O ?
o , o I
o J o V / Φ £ 2 Z / 0{-
O X
o O CMI ^ . 9
O CM
O
> z: w 3 3 m - .5 W 3 « O £Ω
X OJ
·= f 8 ;· P 8-/ 4 f o o
. . CT) CO
i o o i O 1 o o - ~- • * · · O f ·\ <D( Jb: h; ö I -^ o “ “ :: 1 9 Φ 5.’
? Λ A
X »-'cc
X
i » 85 115048
X
04
O
CD o -/° ( IJ 8ί i g
5 O
*=> O x °ä, O f >/ / Λ Φ
i - T A
0 O
i φ nj *Ö ™ « 9 ,r 3 3 21 CQ —j • ‘ CM rt O °£, P o 5 * IJ 4( o Jl °η δγ : 2 x ·’· · O x o o s i Φ
Φ f\ A
. ' : ™ o x / — o x Jo , : x o > » 86 115048
Kaavio 6 CL
N-^ / v O / λ CO2BZ
5 /N^_^0J1-0-\_/-N02 + NH2-( < CONHPh 10 C,\_ O C02Bz 15 _
Cl^ H \ CONHPh 20
F 7 CI\_ O CO? H
S „ >0>M
Cr H / CONHPh I » 87 115048 τ r
X CM
- _ “b I
3 13 CD
-r QD CD <m t1 S~ _ 8 8" I ,
ϋγ^ 1 «I
S - h <Χ,
&" & A
1 ^ CM C') — o' i , u
1 I
— A __ ~b r- 3 cq 3 ω CQ cm CD cm
Λ CM O ^ O
2--, o o o^o > CQ CM N-/
·’ « n ° I I
<d H ,ο I I
; x x ° o ., * : « y y rt , ! x -1- x ^ ' :: '1 A--& ,1 , X 2^ 2^ -' ά A /1 ^ x ^ o
... CM
» 1 o
\,A X
I · • 1 t
Iti» ( 1 t I t » » 88 115048 x X ™ ~ ο ο ^ ·υ ~b ω m ^
® Λ* “ Ο I
.I
I ^- I wl A ml
φ φ R
ο I ου 00 2 -=> m 'S m ~ 2 ~ Ο 3 Ό Ο _ ο => ω * Ϊ4 f « Ο -V Ο _ ο ; , "b m ‘ ^ ' £0 ~ φ |
• oj Ο I
Ο _ ο Ο ' * ο Φ , : “τ ™ _ I -ci ,’ , L ό ο φ ;· φ - f ° η ^ f 8 8 Α- φ " "
* (V
·:· : § > * » » » 1 1 5048 i 89 ~ 3 3 5 =* * = S- S. ~ ^ = 3 8 3 s g; 3 g =5 q. g, n -D g· <c ο -r· ϋ = _ r: ϋ = yr n ^ o' 3 o o H, o o g. g. ns g. g« o = q* — O — ^ Ο r: rj o O'-3 8 -3 U _ U g UV-/ \=/ \ = / , Ng/ \δ/ £ ΝδΧ g g
2 2 <D g g O
O O \ ° 0-0 O U ΰ O O -r. °
Ο < Ο π , I c I
I ? . I / I c ] H, ~ I
T "T "Ύ i ' i o’ = -" = = 3 g g.
0 3 3 o —- -- V ^
^ '3 O
ο -h\ - _? Ή -f h ri\ 0 35 u ^ « ·η\ ^ g ^ H. o § • · Its Vi\^;0_r>R 3 * £\ 5 g< 3 g- £· :*.'. ^ \ g. g. g. g. =" g, • * o\{fs^ 0=0 -7 • ’ J \ D Ο ο ο υ ·. : g. \ \g/ XS/ Νδχ ΰ \ ! § § • · Soy ·, ,· o o o
• · κ1.-ΐι:1<ό: JL
::: )£ “-ή *.8 * cr ίζ c ( h n rt »--s ..—.. /"—* _*» r* _r* v * , 0 0¾ Ί’’ π o ö • » o o o * ^ ^ w * * j n
. ’ O
* * SV
' ' ' t » 90 115048
CNJ
Φ
A
Ο Ον \
\ CQ
\ CNJ
+ \ 8 \ Ν ( \ CQ \ Ν \ OJ \ N CD \ Ο / ^ Ο \ Ο-/ ο .. ο λ |
‘"""Ι X
X
ο X ο
II X
Ο X
11 / : ·. Φ
> X
; 3 a • ο ο :ί ΝΙ n m m ™ • OJ Ο •;; · ι t
* t I OJ
• · X
,,: z > · « · 91 115048 in
CD
<V
o b „ i w| ω ä
cw O
0-0
VA
CV j O
. V (υ i £ o~ o' / Ά k/ ,-'Γ
- + 5. o I h I
: 4 sy^ 's- s
::1 A"'1 bA
* * * X / 'rr ί·: ‘ Vs //\ ., i .* 2 • : 0 , , X 0
O* I
, * 0 r
P -1 V
_A
f O 5 » t WO 94/02450 1 Ί 50 4 8 PCI7GB93/01560 92
INDICATIONS RELATING TO A DEPOSITED MICROORGANISM
(PCT Rule 13 bis) A. Tbc indications made below relate to the microorganism referred to in tbe description on page 21 9-1¾ (hybridoma A5B7)_ B. IDENTIFICATION OF DEPOSIT Further deposits are identified on an additional sheet □
Name of depositary institution
EUROPEAN COLLECTION OF ANIMAL CELL CULTURES
Address of depositary institution (including postal code and country) PELS Centre for Applied Microbiology and Research Porton Down, Salisbury Wiltshire SPii OJG, U.K.
Date of deposit Accession Number lit JULY 1993 93071^11 C. ADDITIONAL INDICATIONS (leave blank if not applicable) This information is continued on an additional sheet □ D. DESIGNATED STATES FOR WHICH INDICATIONS ARE MADE Of the indications arc not for all designated States) • — • _
In respect of all designated stales In which such action is possible and to I the extent that it is legally permissible under the law of the designated state.
, if is requested that a sample of the deposited micro-organism(s) be made • available only by the issue thereof to an independent expert in accordance ,with the relevant patent legislation, e.g. EPC Rule 28(4). U.K. Rule 17(3).
1 * Australian Regulation 3.25(3) and generally similar provisions mutatis ί ', mutandis (or any other designated state".
;' ’; E. SEPARATE FURNISHING OF INDICATIONS (leave blank if not applicable)
The indications listed below will be submitted to the International Bureau later (specify the general nature ofthe indications e.g., 'Accession Number of Deposit') > · ! * » ; * * » • t ? » * ...... For receiving Office use only —. For International Bureau use only - ’,' , | | This sheet was received with the international application | ] This sheet was received by the International Bureau on: :·:__ ___
Authorr/.cd officer Authorized oflicei _\SpxJ~ ____________ form I’CT/KO/134 (July 1992) ,.
SUBSTITUTE SHEET
93 115048
Liite I
Esilääkkeet CPG2-substraatteina
Cl^_ N —^ ^ ~ ^ c\ / ^ X Km (μΜ) -* 3;4 O 1,9 NH 3 CH2 16 3 » ·/· * Julkaisusta WO 88/07 378
I I
S « f * » t * 94 115048
Liite II
Esilääkkeistä muodostuneiden lääkkeiden vahvuus N —iX‘- C0 ' ^'u ¢1./ π ....... , Lääkkeen aktiivisuus 1 tunnin
Esilaakerakenne .
kohdalla paksu-perasuolikas- ---------------------------------- vainsoluja (LoVo) vastaan - _ IC50 uM:na
R1 R^ RJ X
tunnettu* Cl Cl H - >500
Cl mesyyli H 86 uusi I I H 0 0,26
Cl Cl Me 0 0,75
Cl Cl F NH 2,38
Cl Cl H 0 0,3-3 : Cl Cl H NH 0,3-3
Cl Cl H CH2 40 : * Julkaisusta WO 88/07 378 * > 95 115048
Liite III
Lääkkeen puoliajan vertailutulokset ja puskurissa ja plasmassa (paljaat hiiret) e1 y— co - qiu ^ '
Esilääke tornin) 1 2 R R X puskuri plasma tunnettu1 Cl mesyyli ~ 17 30 uusi Cl Cl 0 4,5 <5^
Cl Cl NH 2,8 <5 I I 0 0,3 ! 1 Julkaisusta WO 88/07 878 : 2 Ei havaittavissa 5 minuutin kohdalla (lyhin mitattavissa oleva aika) » I »

Claims (8)

115048
1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten, aminohappoon liitettyjen typpisinappijohdannaisten valmistami-5 seksi, joilla on kaava I R\ R3 \ R5a, R5b Y C02H X / X-X^^N-CH / >4 H \z (I) ^7-[ R* R» R2 „ R4 jossa R1 ja R2 ovat kumpikin toisistaan riippumattomasti 10 kloori, bromi, jodi tai 0S02Me (jossa Me on metyyli); Rla, R2a, R3 ja R4 ovat vetyjä; R5a, R5b, R5c ja R5d ovat kukin toisistaan riippumattomasti vety, Ci-4-alkyyli, Ci_4-alkoksi, halogeeni tai syaani tai RSa ja R5b ovat yhdessä -CH=CH-CH=CH-; 15. on O, NH tai -CH2-; Y on O; Z on -V-W, jossa V on -CH2T-, jossa T on -CH2- tai - ! -S- (edellyttäen, että kun V:ssä on rikki toisena atomina, W on muu kuin -COOH) ja W on ';7* 2 0 (1) COOH; '...· (2) - (C=0)-NR7R8, jossa R7 ja R8 ovat kumpikin toi- • 4 · sistaan riippumattomasti vety, C1_6-alkyyli, C3.6-sykloalkyy- !.· ! li, aryyli tai C7-9-aralkyyliryhmä, jolloin aryyli on fenyyli; ·· 25 aryyliosa per se ja aralkyyliryhmän aryyliosa voi olla substituoitu 1-4 substituentilla, jotka valitaan _ p ryhmästä, jossa on -COOH, -OH, -NH2, -CH2-NH2, - (CH2) i-4-COOH * · ’· ja tetratsol-5-yyli; 1*11» ' * (3) tetratsol-5-yyliryhmä; ja 3. mainitun kaavan I mukaisen yhdisteen suolojen val- mistamiseksi, » » 115048 sillä edellytyksellä, että seuraavat yhdisteet jätetään ulkopuolelle: 2- (2-{4- [bis-(2-klooripropyyli)amino]fenyyli}asetyyliami-no)pentaanidihappo; 5 2-(2-{4-[bis-(2-kloorietyyli)amino]fenyyli}asetyyliamino)- pentaanidihapon 5-metyyliesteri; 2-(2-{4-[bis-(2-kloorietyyli)amino]fenyyli}asetyyliamino)-pentaanidihappo; 2- (2-{4- [bis-(2-kloorietyyli)amino]fenyyli}asetyyliamino)-10 pentaanidihapon 5-etyyliesteri; ja 2- (2-{4- [bis-(2-kloorietyyli)amino]fenyyli}asetyyliamino)- 4-karbamoyylivoihappo sekä niiden suolat, tunnettu siitä, että (a) poistetaan suojaus yhdisteestä, jolla on kaava
15 Ia ^ ^ ^ - £-*· da) Rl K" «*· «“ : (jossa R1, R2, Rla, R2a, R3, R4, R5a, R5b, RSc, R5d, X ja Y ovat • kuten edellä on määritelty, Z1 on Z, kuten edellä on määri- : 20 telty, sillä edellytyksellä, että kun W on karboksyyliryh- ,· ·, mä, se on läsnä suojatussa muodossa (merkitään merkillä : ·, Pr2) ja Pr1 on myös karboksyyli ryhmä suojatussa muodossa *!!,’ (joka voi olla sama tai erilainen kuin Pr2), ja jos halu- ’ taan, muutetaan näin saatu kaavan I mukainen yhdiste sen 25 suolaksi; tai >··: (b) kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa W on tetrat soi -5-yyliryhmä, saatetaan yhdiste, jolla on kaava XVIII » · 1 t * * AfHz f /in Nooc- CH— Z (XVIII) :··: 30 115048 (jossa Z1111 on Z, kuten edellä on määritelty, sillä edellytyksellä, että W on tetratsol-5-yyliryhmä) reagoimaan yhdisteiden kanssa, joilla on kaava II ' , ^ β β B H « /~vv”x"”c”L (II) «* 5 (jossa R1, R2, Rla, R2a, R3, R4, R5a, R5b, R5c, R5d, X ja Y ovat kuten edellä on määritelty ja L on poistuva atomi tai ryhmä) standardiolosuhteissa niin, että muodostuu kaavan I mu-10 kainen yhdiste, jossa W on tetratsoi-5-yyliryhmä ja, jos halutaan, muutetaan kaavan I mukainen yhdiste sen suolaksi.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa R5a, Rsb, R5c ja R5d ovat toisistaan riippumatto- 15 masti vetyjä.
3. Minkä tahansa edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa X on O tai NH.
',· 4. Minkä tahansa edellä olevan patenttivaatimuksen : *·[ 20 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan : ^ : kaavan I mukainen yhdiste, jossa V valitaan ryhmästä, jossa ; on -CH2-CH2- ja, kun W on tetratsol-5-yyli-, -CH2-S-. .‘P.
5. Minkä tahansa edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 25 kaavan I mukainen yhdiste, jossa W on -COOH, tetratsol-5-yyli tai -CONH (aryyli) (jossa aryyli on patenttivaatimuksen • * *Γ 1 määritelmän (2) mukainen).
·/·· 6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun- nettu siitä, että valmistetaan jokin seuraavista yhdis-*.’ 30 teistä: t * · i » » I » » I I · 115048 a) (S)-2-(4-[bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbo-nyyliamino)-4-(1H-1,2,3,4-tetratsol-5-yyli)voihappo ja sen suolat; b) N-(4-[bis(2-kloorietyyli)amino]-3-fluorifenyyli-5 karbamoyyli)-L-glutamiinihappo ja sen suolat; c) N-(4-[bis(2-kloorietyyli)amino]fenyylikarbamo-yyli)-L-glutamiinihappo ja sen suolat; ja d) N-(4-[bis(2-kloorietyyli)amino]fenoksikarbonyy-li)-L-glutamiinihappo ja sen suolat.
7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että valmistetaan N-(4-[bis(2-jodietyyli)-amino]fenoksikarbonyyli)-L-glutamiinihappo tai sen suola.
8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan N-(4-[bis[kloorietyyli)-15 amino]fenoksikarbonyyli)-L-glutamiinihappo-gamma(3,5-di-karboksi)anilidi tai sen suola. • » tr· » 1 · · • · · • · » » ·
FI950230A 1992-07-23 1995-01-19 Menetelmä aminohappoon liitettyjen typpisinappijohdannaisten valmistamiseksi FI115048B (fi)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB9215636 1992-07-23
GB929215636A GB9215636D0 (en) 1992-07-23 1992-07-23 Chemical compounds
GB9310884 1993-05-26
GB939310884A GB9310884D0 (en) 1993-05-26 1993-05-26 Chemical compounds
PCT/GB1993/001560 WO1994002450A1 (en) 1992-07-23 1993-07-23 Amino acid linked nitrogen mustard derivatives and their use as prodrugs in the treatment of tumours
GB9301560 1993-07-23

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI950230A FI950230A (fi) 1995-01-19
FI950230A0 FI950230A0 (fi) 1995-01-19
FI115048B true FI115048B (fi) 2005-02-28

Family

ID=26301303

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI950230A FI115048B (fi) 1992-07-23 1995-01-19 Menetelmä aminohappoon liitettyjen typpisinappijohdannaisten valmistamiseksi

Country Status (25)

Country Link
US (6) US5405990A (fi)
EP (1) EP0651740B1 (fi)
JP (1) JP3541037B2 (fi)
KR (1) KR100268654B1 (fi)
AT (1) ATE172450T1 (fi)
AU (1) AU681349B2 (fi)
CA (1) CA2101104C (fi)
CZ (1) CZ287028B6 (fi)
DE (1) DE69321729T2 (fi)
DK (1) DK0651740T3 (fi)
ES (1) ES2123662T3 (fi)
FI (1) FI115048B (fi)
GB (1) GB9314960D0 (fi)
HK (1) HK1002683A1 (fi)
HU (1) HUT69288A (fi)
IL (1) IL106459A (fi)
MY (1) MY111635A (fi)
NZ (1) NZ254864A (fi)
PH (1) PH30004A (fi)
PL (1) PL174617B1 (fi)
RU (1) RU2129542C1 (fi)
SK (1) SK281338B6 (fi)
TW (1) TW272971B (fi)
WO (1) WO1994002450A1 (fi)
ZW (1) ZW9293A1 (fi)

Families Citing this family (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9314960D0 (en) 1992-07-23 1993-09-01 Zeneca Ltd Chemical compounds
HUT74451A (en) * 1993-07-15 1996-12-30 Cancer Res Campaign Tech Prodrugs of protein tyrosine kinase inhibitors, systems contg. them and process for preparing them
GB9315494D0 (en) * 1993-07-27 1993-09-08 Springer Caroline Improvements relating to prodrugs
GB9415167D0 (en) 1994-07-27 1994-09-14 Springer Caroline J Improvements relating to cancer therapy
GB9426133D0 (en) * 1994-12-23 1995-02-22 Zeneca Ltd Chemical compounds
GB9501052D0 (en) * 1995-01-19 1995-03-08 Cancer Res Campaign Tech Improvements relating to prodrugs
GB9510830D0 (en) * 1995-05-27 1995-07-19 Zeneca Ltd Proteins
GB9516943D0 (en) * 1995-08-18 1995-10-18 Cancer Soc Auckland Div Nz Inc Novel cyclopropylindoles and their secoprecursors,and their use as prodrugs
GB9517001D0 (en) * 1995-08-18 1995-10-18 Denny William Enediyne compounds
US6451995B1 (en) 1996-03-20 2002-09-17 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Single chain FV polynucleotide or peptide constructs of anti-ganglioside GD2 antibodies, cells expressing same and related methods
US6130237A (en) * 1996-09-12 2000-10-10 Cancer Research Campaign Technology Limited Condensed N-aclyindoles as antitumor agents
GB9709421D0 (en) * 1997-05-10 1997-07-02 Zeneca Ltd Chemical compounds
US6962702B2 (en) 1998-06-22 2005-11-08 Immunomedics Inc. Production and use of novel peptide-based agents for use with bi-specific antibodies
AU772153B2 (en) * 1999-02-12 2004-04-08 Molecular Insight Pharmaceuticals, Inc. Matrices for drug delivery and methods for making and using the same
GB9907414D0 (en) 1999-03-31 1999-05-26 Cancer Res Campaign Tech Improvements relating to prodrugs
US6765019B1 (en) * 1999-05-06 2004-07-20 University Of Kentucky Research Foundation Permeable, water soluble, non-irritating prodrugs of chemotherapeutic agents with oxaalkanoic acids
GB0001653D0 (en) * 2000-01-26 2000-03-15 Astrazeneca Uk Ltd Chemical compound
US8101200B2 (en) 2000-04-13 2012-01-24 Angiotech Biocoatings, Inc. Targeted therapeutic agent release devices and methods of making and using the same
US6656718B2 (en) 2000-07-07 2003-12-02 Cancer Research Technology Limited Modified carboxypeptidase enzymes and their use
WO2002008174A1 (en) * 2000-07-26 2002-01-31 Patrick Anthony Riley Phenylethylamine derivatives and their use in the treatment of melanoma
GB0102239D0 (en) 2001-01-29 2001-03-14 Cancer Res Ventures Ltd Methods of chemical synthisis
KR20030033007A (ko) * 2001-05-31 2003-04-26 코울터 파머수티컬, 인코포레이티드 세포독소, 약물전구체, 링커 및 이에 유용한 안정화제
WO2003050124A1 (en) * 2001-12-13 2003-06-19 Ranbaxy Laboratories Limited Crystalline cefdinir potassium dihydrate
US7446190B2 (en) * 2002-05-28 2008-11-04 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acids encoding chimeric T cell receptors
ES2358730T3 (es) 2002-07-15 2011-05-13 Board Of Regents, The University Of Texas System Anticuerpos seleccionados y péptidos de duramicina que se enlazan a fosfolípidos aniónicos y aminofosfolípidos y sus usos en el tratamiento de infecciones virales y del cáncer.
US20040092735A1 (en) * 2002-11-08 2004-05-13 Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Limited Process for the preparation of cefuroxime sodium
JP2007500245A (ja) * 2003-06-10 2007-01-11 スミスクライン ビーチャム コーポレーション 化合物
EP1648512A4 (en) 2003-07-31 2009-01-21 Immunomedics Inc ANTI-CD19 ANTIBODIES
US7902338B2 (en) 2003-07-31 2011-03-08 Immunomedics, Inc. Anti-CD19 antibodies
US7691962B2 (en) * 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
CA2564076C (en) * 2004-05-19 2014-02-18 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
US7714016B2 (en) 2005-04-08 2010-05-11 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates
BRPI0617546A2 (pt) * 2005-09-26 2011-07-26 Medarex Inc conjugado de fÁrmaco-anticorpo, formulaÇço farmacÊutica, mÉtodo para matar uma cÉlula de tumor, mÉtodo para retardar ou interromper o crescimento de um tumor em um sujeito mamÍfero e composto
CA2627046C (en) 2005-10-26 2015-09-15 Medarex, Inc. Methods and compounds for preparing cc-1065 analogs
CA2627190A1 (en) 2005-11-10 2007-05-24 Medarex, Inc. Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates
BRPI0717902A2 (pt) 2006-12-01 2013-10-29 Medarex Inc "anticorpo monoclonal humano isolado, composição, conjugado anticorpo-molécula parceria, imunoconjugado, molécula de ácido nucléico isolada, vetor de expressão, célula hospedeira, método para prepar um anticorpo anti-cd22, método para inibir o desenvolvimento de uma célula tumoral que expressa cd22 e método para tratar uma doença inflamatória ou autoimuneem um indivíduo"
CL2007003622A1 (es) 2006-12-13 2009-08-07 Medarex Inc Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales.
MX2009006277A (es) 2006-12-14 2009-07-24 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se enlazan a cd70 y usos de los mismos.
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
TW200900059A (en) 2007-02-21 2009-01-01 Medarex Inc Chemical linkers with single amino acids and conjugates thereof
WO2009060198A1 (en) 2007-11-09 2009-05-14 Peregrine Pharmaceuticals, Inc. Anti-vegf antibody compositions and methods
JP6133431B2 (ja) 2012-11-24 2017-05-24 ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー．，エルティディ．Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｄａｃ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． 親水性連結体及び薬物分子と細胞結合分子との共役反応における親水性連結体の使用
US10464955B2 (en) 2014-02-28 2019-11-05 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Charged linkers and their uses for conjugation
AU2015242213A1 (en) 2015-07-12 2018-03-08 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Bridge linkers for conjugation of cell-binding molecules
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
KR20220147720A (ko) 2016-11-14 2022-11-03 항저우 디에이씨 바이오테크 씨오, 엘티디 결합 링커, 그러한 결합 링커를 함유하는 세포 결합 분자-약물 결합체, 링커를 갖는 그러한 결합체의 제조 및 사용
EP3626704B1 (en) * 2017-05-15 2021-11-24 Asahi Kasei Kabushiki Kaisha Isocyanate production method
CN113845448B (zh) * 2021-10-20 2023-07-07 厦门大学 一种放射性18f标记化合物及其应用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8705477D0 (en) * 1987-03-09 1987-04-15 Carlton Med Prod Drug delivery systems
US4975278A (en) * 1988-02-26 1990-12-04 Bristol-Myers Company Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells
GB8809616D0 (en) * 1988-04-22 1988-05-25 Cancer Res Campaign Tech Further improvements relating to drug delivery systems
GB8820850D0 (en) * 1988-09-05 1988-10-05 Cancer Res Campaign Tech Improvements relating to pro-drugs
GB8920011D0 (en) * 1989-09-05 1989-10-18 Mann J New route of synthesis for tertiary butyl esters
WO1993008288A1 (en) * 1991-10-23 1993-04-29 Cancer Research Campaign Technology Limited Bacterial nitroreductase for the reduction of cb 1954 and analogues thereof to a cytotoxic form
GB9314960D0 (en) * 1992-07-23 1993-09-01 Zeneca Ltd Chemical compounds

Also Published As

Publication number Publication date
HU9500145D0 (en) 1995-03-28
US5587161A (en) 1996-12-24
RU2129542C1 (ru) 1999-04-27
US5958971A (en) 1999-09-28
DK0651740T3 (da) 1999-06-28
SK281338B6 (sk) 2001-02-12
EP0651740A1 (en) 1995-05-10
CZ287028B6 (en) 2000-08-16
HUT69288A (en) 1995-09-28
TW272971B (fi) 1996-03-21
KR100268654B1 (ko) 2000-10-16
AU4715693A (en) 1994-02-14
GB9314960D0 (en) 1993-09-01
US5660829A (en) 1997-08-26
ZW9293A1 (en) 1994-03-30
US5405990A (en) 1995-04-11
FI950230A (fi) 1995-01-19
IL106459A (en) 1998-02-08
AU681349B2 (en) 1997-08-28
PH30004A (en) 1996-10-29
JP3541037B2 (ja) 2004-07-07
FI950230A0 (fi) 1995-01-19
RU95105246A (ru) 1997-04-27
MY111635A (en) 2000-10-31
PL307226A1 (en) 1995-05-15
CA2101104A1 (en) 1994-01-24
ATE172450T1 (de) 1998-11-15
DE69321729D1 (de) 1998-11-26
CZ15195A3 (en) 1995-11-15
US6277880B1 (en) 2001-08-21
US5714148A (en) 1998-02-03
JPH07509461A (ja) 1995-10-19
DE69321729T2 (de) 1999-03-18
NZ254864A (en) 1996-11-26
ES2123662T3 (es) 1999-01-16
EP0651740B1 (en) 1998-10-21
HK1002683A1 (en) 1998-09-11
PL174617B1 (pl) 1998-08-31
SK6995A3 (en) 1995-07-11
IL106459A0 (en) 1994-11-11
CA2101104C (en) 2007-01-23
WO1994002450A1 (en) 1994-02-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI115048B (fi) Menetelmä aminohappoon liitettyjen typpisinappijohdannaisten valmistamiseksi
US5728868A (en) Prodrugs of protein tyrosine kinase inhibitors
US6005002A (en) Nitrogen mustard prodrugs with novel lipophilic protecting groups, and processes for their production
KR20140135832A (ko) 아미노산 지질
WO2004020400A1 (en) Enzyme activated self-immolative n-substituted nitrogen mustard prodrugs
US20160251320A1 (en) Compounds
EP0853623A1 (en) Enediyne compounds
US20100240747A1 (en) Motuporamine Mimic Agents
JP2002530364A (ja) 両親媒性ポリアミン化合物
WO1998035982A1 (en) Compounds for use in adept
EP1165493B1 (en) Nitrogen mustard compounds and prodrugs therefor

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Ref document number: 115048

Country of ref document: FI

MA Patent expired