JPH07509227A - 生物学的ターゲッティングのための極性脂質−ペプチドの共有結合的複合体 - Google Patents

Abstract

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Description

【発明の詳細な説明】 生物学的ターゲツティングのための極性脂質−ペプチドの共有結合的複合体１、 発明の分野 本発明は、細胞内への生物学的に活性な化合物の侵入を促進し、細胞内の特定の 細胞小器官（細胞性有機体）へとその様な化合物をターゲツティングする方法に 関する。この発明は、特に、その様な生物学的に活性な化合物が、極性の脂質担 体分子と共有結合した複合体を有する合成物及びその様な合成物の医薬的具体物 を提供する。その様な複合体の特定の具体例は、薬物動力学的に有用なレベルで の、その様な薬の細胞内への侵入を促進するための、及びまた、細胞内の特定の 細胞小器官へとその様な化合物をターゲツティングするための、抗ウィルス薬又 は抗腫傷薬（抗新生物薬）を含有する。本発明方法を用いると、細胞内の薬の濃 度が、他の方法により達成される濃度よりも、マグニチュードのオーダーで、よ り高いレベルに達する。また、本発明は、ペプチドによる、免疫学的反応を特異 的に生産させるためのに、細胞及び細胞内の特定の細胞小器官へのその様なペプ チドの侵入を促進するための、抗原的に活性なペプチドの極性の脂質複合体を提 供する。この様に、この発明は、病原性微生物に対抗する改善されたワクチン生 産方法及びインビボ系の予防接種及び自己免疫病を緩和するための及び、組織及 び器官の移植の拒絶を改良するための改善された方法を提供する。

２、関連する技術的背景 薬理学分野における重要なゴールは、治療の及び他の試薬の、その様な処置から 利益を得るであろう適切な細胞及び組織への特異的な分配（デリバリ−）を促進 するための、及びその様な試薬の、体の他の細胞又は組織への不適切な分配の全 身的な生理学的効果の回避を促進するための方法及び合成物の開発であった。

その様な特異性が必要な最も通常の例は、抗腫瘍の治療の分野に存在し、本分野 では、種々の抗腫傷薬（抗新生物剤）の、患者に安全に投与され得る量は、それ らの細胞毒性効果によって制限されている。

さらに、ある組織は、通常の方法を用いて投与された薬に対して接触し難いか又 は接触が制限されていることが分かった。特定の具体例は、脳であり、脳は、「 血液−脳関門」により保護され、これは、血流経由で脳へ運搬され得るある種の 医薬物質の量を制限する。血液−脳関門の存在は、周囲の毒素、病原菌及び他の 毒性勧賞から脳を保護するために有利であると考えられているが、この構造は、 また、悪性腫瘍（例えば神経芽細胞腫）又は感染（例えば髄膜炎）の場合におい て、臨床的介入の効果をも制限する。

最後に、医療の分野においては、ある種の細胞下の細胞小器官（細胞性有機体） が、ある種の薬の薬理学的作用の部位であるか又は、ある種の刺激に対する生物 学的反応に包含されていることが認識されている。診断又は治療用の化合物のそ の様な細胞小器官への特異的な分配は、それゆえに、その様な臨床の診断の又は 治療の技術の特異性及び効果を増加するために望まれている。

Ａ、薬のターゲツティング 種々の病理学上の段階において、関連する組織の細胞への治療薬の投与の効果及 び特異性を増加することが望ましい。これは、特に、抗ウィルス又は抗腫傷薬に 関して重要である。これらの薬は、通常、多面発現性の抗生物質の効果及びウィ ルスに感染した又は悪性腫瘍の細胞と同様に、感染していない又は形質転換され ていない細胞をも傷害し又は破壊する細胞毒性の効果を有している。それゆえ、 その様な薬を感染した又は悪性腫瘍の細胞へと特異的に分配できる効果的な分配 システムは、処置の効果を増強し、その様な薬の処置に付随する「副作用」を減 少するであろうし、また、その様な薬の臨床的投与に付随する罹病率及び死亡率 の減少を提供するだろう。

抗ウィルス及び抗腫傷薬の細胞毒性活性及び特異性を高めるための多数の方法が 提供された。ある方法は、受容体ターゲツティングであり、治療試薬と、望まれ る標的細胞表面上に表出された受容体に対する親和性を有するリガンドとの結合 物を包含している。このアプローチを用いると、抗ウィルス薬又は抗腫傷薬は、 標的細胞に付着し、次にリガンド−受容体複合体を細胞表面に形成すると考えら れている。細胞内への侵入後、リガンド−受容体複合体の内面化が結果として続 く。内面化の後、抗ウィルス薬又は抗腫傷薬は、次に、細胞に直接的に治療効果 を発揮できる。

受容体ターゲツティングのアプローチの１つの限界は、標的細胞の表面上には有 限数の受容体しか存在しないという事実にある。細胞上の受容体の最大数は、約 １００万であると見積もられている（Ｄａｒｎｅｌｌら、１９８６、Ｍｏ１ｅｃ ｕｌａｒ　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ、第２版、Ｗ、Ｈ，Ｆｒｅｅｍａｎｎ編集 、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、１９９０）。この見積もりは、いかなる与えられた細胞上 においても、最大１００万の薬と結合したりガント−受容体複合体が存在しうろ ことを予想する。全てのりガント−受容体複合体が内面化され得るわけではない ので、及び、いかなる与えられたりガント−受容体システムも、与えられた細胞 表面上の多重に折り畳まれた、より少ない受容体を表出するかもしれないので、 このアプローチを用いた細胞内の薬分配の効果は不明確である。他の細胞内の既 知のりガント−受容体複合体（ステロイドホルモン受容体の様な）は、１細胞に ついて１万ホルモン分子と同じ位、少ししか表出しない。従って、リガンド−受 容体アプローチは、生物学的制限の数により、悩まされている。

受容体ターゲ、ティングプロセスにより達成され得るよりも、より高い濃度にて 治療試薬を分配する他の方法は、特定の生物膜（生物学的膜）に対して選択的親 和性を有する脂質複合体の使用を包含している。これらの方法は少し成功した（ 例えば、Ｒｅｍｙら、１９６２、Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、２ヱ：　２４９１−２ ５００、Ｍｕｋｈｅｒｇｅｅ＆Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇｅｒ、１９６２、Ｃａｎｃ ｅｒ　Ｒｅｓ。

２２、８１５−２２、Ｂｒｅｗｓｔｅｒら、１９８５、Ｊ、Ｐｈａ　ｒｍ、ｓｃ 　ｉ、７７．９８１−９８５参照）。　リポソームもまた、細胞のターゲツティ ングを試みるために使用された。Ｒａｈｍａｎら、１９８２、Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ 　旦１　：　２０６１−７１は、脂質の一部としてガラクトリピソド（ｇａｌａ ｃｔｏｌｉｐｉｄ）を含むリポソームが、ガラクトリピノドを欠くリポソームよ りも、実質組繊細胞に対してより高い親和性を有するらしいことを発見した。し かし、現在までのところ、薬−被包性リポソームを使用することにより、効果的 な又は特異的な薬の分配が達成されているとは断言できない。

Ｂ、免疫学的−活性なペプチドのターゲツティング及びワクチンの生産抗原性の 刺激に対する、を推動物の免疫学的反応は、抗原の提示と呼ばれる現象に依存し ている。提示は、主要組織適合複合体（ＭＭＣ）蛋白質に付随する免疫系の抗原 −提供細胞の細胞表面上の抗原性エピトープの出現を具現化する。ＭＨＣ蛋白質 は２つのクラス（Ｉ及びＩＩ）に分けられ、各々のクラスは異なる源に由来する 抗原を提示する。ＭＭＣ分子の２つのタイプに由来する提示に対応する２つのタ イプの免疫反応は、ＭＨＣクラス！又はクラスＩＩに拘束されると呼ばれている 。ＭＨＣクラスＩ及びＩＩ拘束免疫の両者は、ＭＨＣ分子に関連するペプチド抗 原の提示を必要とする［Ａｂｂａｓ、Ｌｉｃｈｔｍａｎ及びＰｏｂｅｒ、１９９ １、Ｃｅｌ　Ｉｕｌａｒ　ａｎｄ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （Ｗ、Ｂ、５ａｕｎｄｅｒｓ　Ｃｏ　フィラデルフィア）、レビュウのための、 ｐｐ１１６−１３６参照］。

クラスＩ−拘束免疫反応において、ＭＨＣクラス！分子は、細胞内にて作られた 蛋白質由来のペプチド抗原と結合している。その様な蛋白質は、ウィルス及び他 の細胞内病原体によってコードされた蛋白質を含む。これらの蛋白質は、感染し た細胞の細胞質内において分解され、この分解のペプチド生産物は、ＥＲ膜に位 置するペプチド−特異的輸送分子の作用によって小胞体（ＥＲ）へ移動されるＣ クラス１分子は、適切なペプチド抗原が存在する場合のみ、結合して機能的提示 蛋白質となる。完全に結合したＭＨＣクラス■複合体は、次にゴルジ装置によっ て、細胞表面に転送され、そこで、抗原提示複合体は、ＣＤ８’細胞毒性Ｔ−細 胞との相互作用により、細胞性（Ｔ−細胞に仲介される）免疫反応を活性化する Ｎ　ａ　ｔ　ｕ　ｒ　ｅ　３５１：　２９０−２９６参照）。

他の場合、ＭＨＣクラスＩＩ拘束免疫反応においては、細胞外抗原（自由に生き ている病原体又はそれらの蛋白質成分を包含する）が、エンドサイト−シスによ り、免疫系の細胞（マクロファージの様な）に包み込まれ、分解のためにエンド サイトの（リソソームの）コンパートメントへと転送される。その様な分解のペ プチド生産物は、次にＭＨＣクラ刈Ｉ分子（その分子は、細胞−表面発現のため にペプチドが結合する必要が無い；Ｇｅｒｍａｉｎ及びＨｅｎｄｒｉｘ、１９９ １、Ｎ　ａ　ｔ　ｕ　ｒ　ｅ　３５３　：　１３４−１３９参照）と結合し、細 胞表面上に現れる（Ｓａｄ照）。ＭＨＣクラスＩＩ抗原−提示経路は、ホルモン の（抗体−依存）免疫反応の導入及びＣＤ４”Ｔ−ヘルパー細胞の活性化を導く 。

病原生物に対する免疫を刺激するためのワクチンの調製及び使用において、適切 なＭＨＣ拘束が、二者択一の戦略を用いて達成される［Ａｂｂａｓ、Ｌｉｃｈｔ ｍａｎ及びＰｏｂｅｒ、１９９１、Ｃｅ１ｌｕｌａｒ　ａｎｄ　Ｍｏ１ｅｃｕｔ ａｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　（Ｗ、Ｂ、５ａｕｎｄｅｒｓ　Ｃｏ、：フィラデ ルフィア）レビュウのための９．３１５以下参照］。ＭＨＣクラス！拘束免疫は 、非−生産的に宿主細胞に感染する弱められた病原生物（通常ウィルス）の使用 を必要とする。病原生物の蛋白質抗原は細胞内にて分解され、生産されたペプチ ド抗原はＥＲへと転送され、結合して機能的ＭＨＣクラス！提示複合体となる。

細胞毒性Ｔ−細胞への抗原の提示は、細胞性免疫において、病原微生物に対抗し て生じる。

ＭＨＣクラスＩＩ拘束経路を用いた予防接種は、不活性化された（例えば、化学 的に不活性化された）病原体の接種を含み、その病原体は次に、マクロファージ によって包み込まれ、細胞内でリポソーム内に分解される。適切なＭＨＣクラス ＩＩ複合体と結合したペプチド抗原は次に、Ｔ−ヘルパー細胞に提示され、この 細胞は、サイトカイン及び他の免疫系刺激因子を遊離し、それらは、提示された ペプチド抗原に特異的な抗体−産生Ｂ細胞を活性化する。

病原生物に対する免疫を生産するための両者の経路は、インビボ系における動物 の免疫系の細胞による適切なペプチド抗原の分解及び選択を必要とする。このこ とは、免疫反応の生産能率における可変性を許容し、弱められたウィルスを使用 する場合には、病原体が逆転する可能性を許容する（これは、ワクチンが機先を 制するつもりであった病気を、ワクチンが起こしてしまう結果となる）。従って 、適切な拘束ＭＨＣ複合体との結合において、Ｔ−細胞に対する提示のために、 免疫系の細胞に直接的に、ペプチド抗原を効率的に分配するための方法の開発の 必要性がある。

同様に、自己免疫病は、内因性の細胞蛋白質由来のペプチド抗原（自己−抗原と 呼ばれる、Ｊａｒｄｅｔｚｋｙら、１９９１、Ｎ　ａ　ｔ　ｕ　ｒ　ｅ　３５３ 　：　３２６−３２９　；Ｆａｕｓｔｍａｎら、１９９１、サイエンス２５４　 ：　１７５６−１７７１参照）の提示及び免疫的認識に関係がある。自己−抗原 は、ＭＨＣクラスＩ又はエエクラス拘束経路のいずれによっても提示される可能 性があり、その結果、細胞性又はホルモンの自己免疫のいずれか、又は両方が、 起こり得る。自己−抗原の提示をブロックし、それによって、自己免疫病の進行 の開始を改善し、または防ぐための方法及び試薬を開発する必要がある。

さらに、組織又は器官移植の拒絶は、ＭＨＣクラスＩ及びクラスエＩ拘束免疫反 応の両方によって仲介される。非−自己抗原は、移植受取人の免疫系によって、 処理及び認識され、移植に対して免疫的攻撃を起こし、宿主による移植拒絶に至 る。移植拒絶の阻止の最近の方法論は、サイクロスポリンＡの様な薬を用いた免 疫系の無差別的な抑制を含む。これらの方法は、宿主の免疫−妥協及び病原体に よる二次感染の危険を放置する。組織及び器官移植に対抗する宿主ＭＭＣ拘束免 疫反応を選択的にブロックし、全身的な免疫抑制の結果を生じない方法の必要性 が存在する。

免疫原としてのペプチド抗原の使用は、先行技術において企画され、インビボ系 における成功には限界があった。

Ｈｏｐｐ、１９８４、Ｍｏ　１．Ｉｍｍｕｎｏ　１．２１　：１３−１６は、脂 肪酸分子によってアシル化された人工の肝炎ウィルスの、インビボ系の免疫原と しての使用を開示している。

Ｎｅｕｒａｔｈら、１９８４、Ｊ、Ｇ　ｅ　ｎ、Ｖ　ｉ　ｒ　ｏ　１．６５　： 　１００９−１０１４は、インビトロ系において化学的にリポソームに固定され た肝炎表面抗原−由来ペプチド免疫原を利用する。

Ｄｅｒｅｓら、１９８９、Ｎ　ａ　ｔ　ｕ　ｒ　ｅ　３４２　：　５６１−５６ ４は、リポ蛋白質アジュバントに化学的に結合したインフルエンザペプチドエビ トープの、インビボ系における免疫原としての使用を開示している。

５ｅｉｆｅｒｔら、１９９０、Ｊ　、　Ｂ　ｉ　ｏ　ｃ　ｈ　ｅ　ｍ、　２６７ 　：　７９５−８０２は、インビトロ系におけるヒト好中球を活性化するための リボ蛋白質由来の人工の抗原の使用を教示している。

Ｂｒｙｎｅｓｔａｄら、１９９０、Ｊ、Ｖｉ　ｒｏ　１．６４＋６８０−６８５ は、ヘルペス単純ウィルスグリコプロティンＤ由来のバルミトイル化されたペプ チド抗原をインビボ系における免疫原として使用している。

ＷｉｅｓｍｏＩｉｅｒら、Ｉ　ｍｍ　ｕ　ｎ　ｏ　Ｉ　ｏ　ｇ　ｙ　？２：１０ ９−１１３は、人工のリポ蛋白質アナログが、サイトカインの放出を刺激し、イ ンビトロ系におけるＢ細胞及びマクロファージを活性化することを表明している 。

Ｆｒ１ｓｃｈら、１９９１、Ｅｕｒ、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、２１：１８５−１９ ３は、インビボ系においてマウスを免疫するために、ヒストンＨ３由来の、ホス ファチジルエタノールアミンに共有的に結合され、リポソーム内に内包されたヘ キサペプチド抗原の使用を開示している。

ペプチドもまた、免疫反応をブロックするために使用された。

Ｖａｎｄｅｎｂａｒｋら、１９８９、Ｎ　ａ　ｔ　ｕ　ｒ　ｅ　３４１：８４１ −８４４は、Ｔ−細胞受容体Ｖβ８ｉａ由来のペプチドが、インビボ系において 実験的に誘導された自己免疫脳炎（ＥＡＥ）をブロックするために使用できるこ とを表明した。

Ｌａｍｏｎｔら、１９９０、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏ　１．１４４＋２４９３−２４ ９８は、抗原提示のペプチドＭＨＣクラスＩＩ阻害物を開示している。

Ｇｕｅｒｙら、１９９２、Ｊ、ＥｘｐＪｌｅｄ、１７５：１３４５−１３５２は 、ペプチド抗原のブロックを用いた、インビボ系における抗原提示の阻止を開示 している。

ＤｅＭａｇｒｉａｔｉｓら、１９９２、Ｃｅ　Ｉ　Ｉ　６８　：　６２５−６３ ４は、Ｔ−細胞が仲介する免疫をインビトロ系においてブロックするための、イ ンフルエンザペプチドの使用を開示している。

発明の概要 本発明は、インビボ系及びインビトロ系における、細胞及び細胞小器官へ、生物 学的に活性な化合物を分配するための改善された方法に関する。この分配システ ムでは、その化合物と極性脂質担体とを結合させることにより、生物学的活性化 合物のその様な特異的分配を達成する。本発明は、極性脂質担体によって、その 様な化合物の細胞内への侵入を促進し、伝統的な分配システムよりもより効果的 に及びより特異的に、その様な化合物の有効細胞内濃度を達成するという特異的 な利点を有している。

この発明は、極性の脂質担体分子と共有結合している生物学的活性化合物を含有 する合成物を提供する。好ましい具体例は、また、２つのリンカ−の官能基を有 するスペーサー分子を包含し、そのスペーサーは第１の末端（端末）及び第２の 末端を有し、極性指貫は、第１のリンカ−官能基によって、スペーサーの第１の 末端に結合し、生物学的活性化合物は、第２のリンカ−官能基によって、スペー サーの第２の末端に結合する。本発明の好ましい具体例においては、生物学的に 活性な化合物はペプチドであり、抗原的に活性なペプチドが最も好ましい。他の 好ましい具体例においては、生物学的に活性な化合物は薬であり、抗ウィルス又 は抗腫傷薬が最も好ましい。好ましい極性の脂質には、スフィンゴシン、セラミ ド、ホスファチジル　コリン、ホスファチジル　グリセロール、ホスファチジル 　エタノールアミン、ホスファチジル　イノシトール、ホスファチジル　セリン 、カルシオリピン（ｃａｒｄｉｏｌ　１ｐｉｎ）及びホスファチジン酸が包含さ れるが、これらに限定されない。

本発明は、また、スペーサー分子を介して極性脂質担体分子と共有結合した生物 学的活性化合物を含有する合成物を提供し、そのスペーサーは、細胞内部位にお いて、遊離されることなく、生物学的活性化合物が作用することを可能にする。

これらの本発明の具体例においては、スペーサー分子の各々の末端の間の共有結 合が壊される傾向を参照すると、スペーサーの第１の末端に結合した第１のリン カ−官能基は、「強い」と特徴づけられ、スペーサーの第２の末端に結合した第 ２のリンカ−官能基は、「弱い」と特徴づけられる。

本発明合成物の他の具体例においては、スペーサーは、細胞内部位における、生 物学的活性化合物の、促進された加水分解的な遊離を許容する。スペーサーの他 の具体例は、細胞内部位における生物学的活性化合物の、酵素的な遊離を促進す る。

本発明のこの側面の他の具体例においては、スペーサー分子は、式＝　（アミノ 酸）。、（式中、ｎは、２から２５までの整数である）で示されるペプチドであ り、このペプチドは、特定のアミノ酸のポリマーを有するのが好ましい。

本発明の合成物の他の具体例においては、本発明の生物学的活性化合物は第１の リンカ−官能基を有し、極性の脂質担体は第２の官能リンカ−基を有し、化合物 は、第１の及び第２の官能リンカ−基の間の化学結合によって、直接的に極性脂 質担体と共有結合している。好ましい具体例においては、第１の及び第２の機能 的なリンカ−官能基の各々は、水酸基、第１級又は第２級のアミノ基、リン酸基 又はそれらの置換誘導体又はカルボン酸基である。

本発明の他の側面においては、極性脂質担体分子に共有結合した薬を含有する合 成物が提供される。好ましい具体例はまた、２つのリンカ−官能基を有するスペ ーサー分子を有し、そのスペーサーは、第１の末端及び第２の末端を有し、その 極性脂質は、第１のリンカ−官能基によって、スペーサーの第１の末端と結合し 、薬は、第２のリンカ−官能基によって、スペーサーの第２の末端と結合する。

、　本発明の好ましい具体例においては、この薬は、抗ウィルス又は抗腫瘍薬で あり、アットチミジン又はメトトレキセートであるのが最も好ましい。好ましい 極性の口論質には、スフィンゴシン、セラミド、ホスファチジル　コリン、ホス ファチジル　グリセロール、ホスファチジル　エタノールアミン、ホスファチジ ル　イノントール、ホスファチジル　セリン、カルシオリビン（ｃａｒｄｉｏｌ ｉｐｉｎ）及びホスファチジン酸が包含されるが、これらに限定されない。

本発明は、また、分子内部位において遊離されることなく、薬が作用することを 許すスペーサー分子により、極性脂質担体分子と共有結合した抗ウィルス又は抗 腫瘍薬を含有する合成物を提供する。本発明のこれらの具体例においては、スペ ーサー分子の各々の末端の間の共有結合が壊される傾向を参照すると、スペーサ ーの第１の末端に結合した第１のリンカ−官能基は、「強い」と特徴づけられ、 スペーサーの第２の末端に結合した第２のリンカ−官能基は、「弱い」と特徴づ けられる。

本発明合成物の他の具体例においては、スペーサーは、細胞内部位における、抗 ウィルス又は抗腫瘍薬の、促進された加水分解的な遊離を可能にする。スペーサ ーの他の具体例は、細胞内部位における、本発明の抗ウィルス又は抗腫瘍薬の酵 素的な遊離を促進する。

本発明の合成物のさらなる具体例においては、本発明の抗ウィルス又は抗腫瘍薬 は第１のリンカ−官能基を有し、極性の脂質担体は第２の官能リンカ−基を有し 、その薬は、第１の及び第２の官能リンカ−基の間の化学結合によって、直接的 に極性脂質担体と共有結合している。好ましい具体例においては、第１の及び第 ２の官能リンカ−基の各々は、水酸基、第１級又は第２級のアミノ基、リン酸基 又はそれらの置換誘導体又はカルボン酸基である。

本発明のこの側面の他の具体例においては、スペーサー分子は、式：　（アミノ 酸）１、（式中、ｎは、２から２５までの整数である）で示されるペプチドであ り、このペプチドは、特定のアミノ酸のポリマーを有するのが好ましい。

本発明のこの側面の好ましい具体例は、１−フェニル−２−（アラニルアラニル ）アミノ−３−ヒドロキシーペンタノイルバリニルバリニルグリシルグリシルグ リンルグリ／ル　セレミド　エステル、３°−アジド−３′−デオキシチミジン モノホスフェート−［ｔ　ｒ　ｉ−β−ヒドロキシプロピニルエステル］−０’ −セレミドエステル、３゛　−アジド−３゛−デオキシチミジンモノホスフェー トグリンルグリンルグリシルグリシル　セレミド　エステル、Ｎ−［１−（３° 　−アジド−３゛−デオキシチミジンモノホスフェート）アミノヘキサノイル］ スフィンゴシン　アミド、１−フェニル−２−（アラニルアラニル）アミノ−３ −ヒドロキシーペンタノイル−バニリルバニリルスフィンゴシン　アミド、３゛ 　−アジド−３′−デオキシチミジンモノホスフェート−０８−セレミドエステ ル、５−フルオロウリジン　デオキシリボースモノホスフェート−〇８−セレミ ドエステル、ホスフェチリルコリン−３°−アジド−３°　−デオキシチミジン モノホスフェート、ホスフェチジルグリセロール−３°　−アジド−３′−デオ キシチミジンモノホスフェート、Ｎ−メトトレキセート　セレミド及びホスファ チジルエタノールアミン−３゛−アジド−３°　−デオキシチミジンモノホスフ ェートである合成物を包含する。

ここに開示される様に、本発明は、脂質−薬複合体を包含し、その脂質は、ある 種の生物膜と選択的に結合することになり、これによって、細胞及び細胞小器官 内への、その薬の侵入を促進することになる。本発明の複合体のスペーサー成分 は、脂質から薬を遊離し、その複合体を細胞へとターゲツティングし、薬をウィ ルスのエンベロープ内に侵入させるか又は薬の有効性を最大とするための他の機 能を達成するために作用するのが好ましい。

このタイプの複合体は、多数の利点を有している。まず第１に、本発明の薬−極 性脂質複合体は、現在達成され得ない薬物動力学速度にて、潜在的に有用な種々 の抗ウィルス及び抗腫瘍薬の細胞内への侵入を進め得る。第２に、標的とされる 細胞のタイプの範囲は、受容体−特異的薬ターゲッティング方法の様に、細胞表 面上に表出される特異的な受容体分子の数及びタイプの様な、特異的な、制限さ れた生物学的特性自身によっては制限されない。第３に、単純に、薬を特定の細 胞へとターゲツティングするための伝統的な試みとは対照的に、この方法は、薬 を特定の細胞内小器官及び他の細胞内コンパートメントへとターゲツティングし 得る。第４に、本発明の合成物は、可変的なスペーサー領域を包含し、これは、 本発明の合成物内に含有するよう設計される極性脂質担体分子からの、薬の薬理 学的に適切な遊離速度を可能にし、これによって、薬の臨床的な効果及び有用性 が増加する。従って、適切な分解酵素を表出している細胞内における時間−依存 的な薬の遊離及び特異的な薬の遊離は、本発明の薬−脂質複合体を使用すること による、独特の可能性である。最後に、本発明の複合体は、他のドラッグデリバ リ−のアプローチと併用して、さらに特異性を高め、本分野において有用な進歩 を利用することができる。抗ウイルス治療の１つの実施例は、本発明の複合体を 、ウィルスのエンベロープ内に侵入させ、それによって、直接的にその脂質構成 を修飾し及びウィルスの感染性に影響を与えることが包含され得る。

本発明はまた、動物、好ましくはヒトにおける免疫反応を引き出すか又は阻止す る方法に関する。本発明は、極性脂質担体分子と共有結合した抗原的に活性なペ プチドを含有する試薬を提供する。抗原的に活性なペプチドと極性脂質との複合 体は、スペーサー分子によって仲介され得る。本発明の抗原的に活性なペプチド と共役する極性の脂質の選択は、その様なペプチド／脂質複合体がターゲツティ ングする細胞内部位に影響を与え得る。

本発明は、極性脂質担体によって、免疫系の細胞内への抗原的に活性なペプチド の侵入を促進し、その様なペプチドの細胞内の生産無しに、そして、その様なペ プチドのその様な細胞内の分解的コンパートメントへのエンドサイト−シスの必 要なしに、細胞内へのその様なペプチドの導入を可能にするという特異的な利点 を有している。本明細書にて開示される様に、本発明は、極性脂質／ペプチド複 合体を包含し、その極性の脂質は、ある種の生物膜と選択的にして、その中のペ プチドの細胞内局在化を促進することになる。

その極性脂質もまた、スペーサーの使用によって、抗原的に活性なペプチドと結 合し得るので、スペーサーは、脂質からペプチドを遊離し、複合体を適切な細胞 内のコンパートメントへとターゲツティングするか又は細胞による免疫的処理の 効果を最大にするための他の機能を遂行するために作用できる。

このタイプの複合体は、多数の理由により有利である。第１に、薬物力学速度で の、細胞内への、抗原的に活性なペプチドの侵入を許すという本発明の能力は、 主要組織適合複合体クラスＩ抗原提示経路により提示されるべきウィルスのペプ チド抗原の細胞内合成のための伝統的な予防接種の方法を使用する必要性を消失 する。第２に、主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原提示経路により提示された抗 原のために、ペプチド抗原の連結タンパク質の細胞内の加水分解の必要無しに、 特異的な抗原性エピトープが、発生期のＭＨＣクラスＩＩ分子との結合のために 、細胞のリゾソームのコンパートメントへと運搬され得る。第３に、可変するこ とができ、それによって、抗原提示細胞における、免疫的に適切な速度の抗原の 遊離を許容するスペーサー領域を、本発明の試薬に挿入することができる。

この側面の第１の具体例においては、この発明は、ペプチド、極性脂質担体、２ つのリンカ−官能基及びスペーサーを含有する合成物を提供し、そのスペーサー は、第１の末端及び第２の末端を有し、その極性脂質は、第１のリンカ−官能基 によって、スペーサーの第１の末端と結合し、ペプチドは、第２のリンカ−官能 基によって、スペーサーの第２の末端と結合する。好ましい具体例においては、 このペプチドは、抗原的に活性なペプチドである。他の好ましい具体例において は、スペーサーは、細胞内部位において遊離されることがなく、ペプチドが作用 することを可能にする。本発明のこの具体例においては、スペーサーの第１の末 端に対する第１のリンカ−官能基の共有結合は、弱く、スペーサーの第２の末端 に対する第２のリンカ−官能基の共有結合は、強い；他の場合には、両方の共有 結合は強い。他の具体例においては、スペーサーは、細胞内部位における、ペプ チドの加水分解的な又は酵素的な遊離を促進する。この具体例においては、スペ ーサーの第１の末端に対する第１のリンカ−官能基の共有結合は強く、スペーサ ーの第２の末端に対する第２のリンカ−官能基の共有結合は弱い。好ましい極性 の脂質には、スフィンゴシン、セラミド、ホスファチジル　コリン、ホスファチ ノル　グリセロール、ホスファチジル　エタノールアミン、ホスファチジル　イ ノシトール、ホスファチジル　セリン、カルシオリビン（ｃａｒｄｉｏｌｉｐｉ ｎ）及びホスファチジン酸が包含される。

本発明の、この側面の第２の具体例は、第１の官能リンカ−基を有するペプチド 及び第２の官能リンカ−基を有する極性脂質担体を含有する合成物を提供し、そ のペプチドは、第１の及び第２の官能リンカ−基の間の化学結合によって、極性 脂質担体と共有結合している。好ましい具体例においては、ペプチドは、抗原的 に活性なペプチドである。好ましい第１の及び第２の官能リンカ−基は、各々独 立して、水酸基、第１級又は第２級のアミノ基、リン酸基又はそれらの置換誘導 体又はカルボン酸基を包含する。

好ましい極性の脂質には、スフィンゴシン、セラミド、ホスファチジル　コリン 、ホスファチジル　グリセロール、ホスファチジル　エタノールアミン、ホスフ ァチノル　イノシトール、ホスファチジル　セリン、カルシオリビン（ｃａｒｄ ｉｏｌｊｐｉｎ）及びホスファチノン酸が包含される。

本発明のこの側面の他の具体例においては、スペーサー分子は、式：　（アミノ 酸）７、（式中、ｎは、２から２５までの整数である）で示されるペプチドであ り、このペプチドは、特定のアミノ酸のポリマーを有するのが好ましい。

本発明は、病原性微生物に対抗して動物を免疫する方法であって、医薬的に許容 される担体内にある本発明の合成物である試薬を、その動物において、免疫的反 応を引き出す効果が生じる量、その動物に接種するステップを包含する方法を提 供する。好ましい動物はヒトである。

本発明はまた、動物の自己免疫病を緩和する方法であって、医薬的に許容される 担体内にある本発明の合成物である試薬を、その動物において、自己免疫病を緩 和する効果が生じる量、その動物に接種するステップを包含する方法を提供する 。好ましい動物はヒトである。

本発明はさらに、動物における組織又は器官の移植拒絶を妨げる方法であって、 医薬的に許容される担体内にある本発明の合成物である試薬を、その動物におい て、組織又は器官の移植拒絶を阻止する効果が生じる量、その動物に接種するス テップを包含する方法を提供する。好ましい動物はヒトである。

本発明の特に好ましい具体例は、以下の、ある好ましい具体例及びクレームのさ らに詳しい記載から明白となるだろう。

図面の簡単な説明 図面１は、実施例１にて提示された合成の概要を表している。

図面ＩＡは、実施例ＩＡにて提示された合成の概要を表している。

図面２は、実施例２にて提示された合成の概要を表している。

図面３は、実施例３にて提示された合成の概要を表している。

図面３Ａは、実施例３Ａにて提示された合成の概要を表している。

図面４は、実施例４にて提示された合成の概要を表している。

図面４Ａは、実施例４Ａにて提示された合成の概要を表している。

図面５は、実施例５にて提示された合成の概要を表している。

図面５Ａは、実施例５Ａにて提示された合成の概要を表している。

図面６は、実施例６にて提示された合成の概要を表している。

図面７は、実施例７にて提示された合成の概要を表している。

図面８は、実施例８にて提示された合成の概要を表している。

図面９は、実施例９にて提示された合成の概要を表している。

図面］０は、実施例１０にて提示された合成の概要を表している。

図面１１は、実施例１１にて提示された合成の概要を表している。

図面１２は、実施例１２にて提示された合成の概要を表している。

好適な態様の詳細な記載 本発明は合成物および生物学的活性化合物の細胞への取込みを促進する方法を提 供する。本発明の目的のためには、用語「生物学的活性化合物」には生物系、殊 に細胞および細胞性有機体に対して生物学的反応を引出すこと、または有益か細 胞毒かいずれかの効果を持つことができる天然産または合成化合物総てを含むこ とが！図されている。これらの化合物には、これに限定されるものではないが、 総ての種類の医薬、殊に抗ウィルス剤、殺菌剤および抗プロトシア剤のような抗 微生物剤、特に抗マラリア原虫剤および抗新生物剤、殊にメトトレキセートおよ び５−フルオロウラノルおよび他の抗新生物剤ならびにペプチドホルモンおよび 蛋白質のペプチド断片を含むペプチド、殊に例えばワクチンおよび他のもののよ うな有用な病原性および微生物的に生産された蛋白質を含むことが意図されてい る。ここに本発明の実施において有用として記載する特別の例はＨＩＶＩプロテ アーゼ阻害剤（化合物８と命名、Ｄ　ｒ　ｅ　ｙ　ｅ　ｒなど、１９８６年、Ｐ ｒｏｃ、Ｎａｒｃ、、へｃａｄ、Ｓｃ　ｉ、ＵＳ、Ａ、８６巻：９７５２〜５６ 頁）である。

不発明により提供される合成物は極性脂質担体に共有結合的に連結する本発明の 生物学的に活性な化合物を含有する。ここに定義する極性脂質担体は当業界で理 解されているように（Ｌｅｂｎｉｎｇｅｒ、ｒ生化学（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ ｙ）Ｊ、第２版、１１および２４章、Ｗｏｒｔｈ−Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ：ニュ ーヨーク、１９７５年参照）、生物学的膜に親和性を持つが通過できる極性脂賞 総てを意味し、これに限られるものではないが、スフィンゴシン、セラミド、ホ スファチジルコリン、ホスファチジルグリセリン、ホスファチジルエタノールア ミン、ホスファチジルコリントール、ホスファチジルセリン、カルシオリビン、 ホスファチジン酸、スフィンゴミエリンおよび他のスフィンゴ脂質を含む。

本発明の合成物はさらにスペーサの各端が官能的結合基を持つ第一末端および第 二末端を含んでいるスペーサ部分を含みつる。本発明の目的では、用語「スペー サ」または「スペーサ部分」は生物学的活性化合物と極性脂質とを連結する化学 的ｒｒ在総てを含むことが意図されている。このようなスペーサ部分は標的細胞 への本発明の複合体の付着を促進するかまたは所期の標的部位での生物学的活性 化合物の放出を促進し、影響し、調節しまたは制御するように設計しつる。この ようなスペーサは成る細胞内部位で酵素的放出も促進しつる。ここに記載するス ペーサ基は、これに限定されるものではないが、アミノヘキサン酸、ポリグリシ ン、ポリアミド、ポリエチレンおよび長さ１がら約１２炭素分子である炭素骨格 を持つ短い官能化ポリマーを含む。このスペーサ部分の殊に好適な態様は、式（ アミノ酸）ｎで示されるペプチドで、ｎが２と２５の間の整数であり、ペプチド が特定なアミノ酸のポリマーであるものを含む。

用語「リンカ−官能基」はここでは極性脂質担体または生物学的活性剤をスペー サ基に共有結合で連結するための官能基総てとして定義される。これらの基はリ ンカ−官能基がスペーサと極性脂質担体か生物学的活性化合物との間に形成され よう共有結合の安定性に基づいて「弱」または「強」と示すことができる。弱官 能基は、これに限定されるものではないが、ホスホルアミド、ホスホエステル、 カーボネート、アミド、カルボキシル−ホスホリル無水物、エステルおよびチオ エステルを含む。強官能基は、これに限定されるものではないが、エーテル、チ オエーテル、アミン、アミドおよびエステルを含む。スペーサ基と生物学的活性 化合物との間に強リンカー官能基を使用することは標的部位で化合物が放出され る速度を減少させるが、一方、スペーサ基と化合物との間に弱リンカー官能基を 使用することは標的部位で化合物の放出を促進するように作用しつる。酵素的放 出は、勿論、可能であるが、しかし、そのような酵素を介する放出機作は本発明 の態様においては結合強度との間が必ずしも相関するとは限らない。蛋白質分解 的切断部位を中に持つペプチドからなるスペーサ基のような酵素活性部位認識基 からなるスペーサ部分は、本発明の範囲内にあるものとする。

本発明はまた抗原的活性ペプチドの細胞への取入れ促進および免疫学的処理およ び抗原提供のために適当な細胞内有機体へペプチドを放出するための合成物と方 法を提供する。これは所期の抗原的活性ペプチドを極性脂質担体に複合させ、こ の複合体を標準的技術により動物に投与することによって達成される。

実験により、螢光セラミドが細胞により異なって分布することが発見された。

この結果は極性脂質複合体の正当な選択により、抗原的活性ペプチドの細胞内照 準が達成できることを示唆する。この結果は初期の主要組織結合性複合体蛋白質 分子両型（Ｉ型およびＩＩ型）への抗原的活性ペプチドの放出を可能にする。そ こで、抗原的活性ペプチドの抗原提供を、体液的および細胞性免疫双方を活性化 させて、達成することができる。

本発明は特に病原性微生物に対するワクチンの製造および投与の方法およびその ワクチンからなる組成物を提供する。本発明により提供されるワクチンは、これ に限定されるものではないが、小児麻痺ウィルス、天然痘ウィルス、狂犬病ウィ ルス、風疹ウィルス、ヒト免疫不全ウィルス、ニブシュタイン−パールウィルス 、水痘ウィルス、単純庖疹ウィルス、肝炎ウィルス、ヒト乳頭腫ウィルスおよび ジフテリア、マラリア、狸紅熱、ウィルス性および細菌性肺炎、百日咳、スクラ ビーなどの疾患の病原微生物に対するワクチンを含む。

あるいは、病理学的症状（自己免疫疾患のような）も適当な極性脂質担体に共有 結合的に連結した適当な阻害ペプチドの投与による自己抗原提供の選択的阻害に より１１和するであろう。この処置のために意図される自己免疫疾患は、これに 限定されるものではないが、■型糖尿病、紅斑性狼瘉、リューマチ性関節炎、脳 を髄膜炎、ハシモト病、卵巣炎、精巣炎、重症筋無力症、多発性神経炎、多発性 筋炎、皮膚筋炎、硬皮症、リュ−マチ性関節炎、スジョグレン症候群および自己 免疫性溶血性貧血を含む。

同様に、組織および器官移植拒絶は適当な極性脂質担体へ共有結合的に連結した 適当な阻害ペプチドの投与による非自己抗原機供の選択的阻害によって阻害でき る。この発明の方法は、本発明のこの側面のための使用総ての列挙であるとの意 図ではないが、腎臓、肝臓、膵臓、肺臓、心臓、角膜、骨髄、皮膚、内分泌器官 および消化管の一部分を含む移植された器官と組織の拒絶を阻害するために有用 であることが意図されている。

本発明方法を用いる極性脂質抗原的活性ペプチドで処置されるべき動物は総ての を推動物、好ましくは牛、馬、羊、山羊、鶏、魚、愛玩動物などのような家畜動 物ならびに野生動物および最も好ましくはヒトを含むことが意図されている。

抗原的活性ペプチドはこれに限定するものではないが、ここでは動物、好ましく はヒトにおける免疫学的反応を引出すまたは阻止することができるアミノ酸４〜 １００個（天然アミノ酸、アミノ酸類似体およびそれらの誘導体を含む）を含む ペプチド総てを含むとして定義される。特に、この抗原的活性ペプチドは生体内 でその体液性および／または細胞性免疫反応を誘発し、増大しまたは阻止（すな わち、ダウンレギュレート）する能力により特徴付けられる。このようなペプチ ドにはアミノ酸配列が公知で試験管内で化学的に合成できるか、または組換え遺 伝子手段を用いて製造できるペプチドならびにこれらのペプチドの混合物を含む 。あるいは、抗原的蛋白質を試験管内で化学的または酵素的に分解し、次に得ら れたペプチド混合物を用いて本発明のペプチド−極性脂質複合体を製造する。

共有結合的に連結したこの抗原的活性ペプチドの多重体も本発明により包含され る。

代表的な抗原的活性ペプチド配列は、これに限定されるものではないが、次のも のを包含する： ワクチン類 ＰＫＹＶＫＱＮＴＬＫＬＡＴ　（インフルエンザウィルスへマグルチニン、残基 ３０７〜３１９） ＩＹＡＴＶＡＧＳＬ　（インフルエンザウィルスへマグルチニン、残基５２３〜 ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥ　（テタヌストキソイド、残基８３０〜８４３） ＳＬＳＤＬＲＧＹＶＹＱＧＬＫＳＧＮＶＳ　（ＶＳＶｌし、ｌプシド、残基４７ 〜６５） ＴＹＱＲＴＲＡＬＶＲＴＧ　（インフルエンザウィルスヌクレオプロティン、残 基１４７〜１５８） ＩＡＳＮＥＮＭＥＴＭＥＳＳＴＬＥ　（インフルエンザウィルスヌクレオプロテ ィン、残基３６５〜３８０） ＳＲＹＷＡＩＲＴＲ（インフルエンザウィルスヌクレオプロティン、残基３８３ 〜３９１） Ｓ”ｉ’ＶＰＳＡＥＱＩ　（Ｐ、ｙｏｅ　］　ｉ　ｊｃｓＰ、残基２７６〜２８ ８）Ｓ’ｌ’１ＰＳＡＥＫＩ　（Ｐ、ｂｅｒｇｈｉＣ５Ｐ、残基２４９〜２６０ ）ＮへＮＰ　（Ｐ、ｆ　ａ　ｌ　ｃ　ｉ　ｐａ　ｒｕｍＣ３Ｐ）ＩＬＫＥＰＶＨ ＧＶ　（ＨＩＶ逆転写酵素、残基４６１〜４６９）ＦＬＱＳＲＰＥＰＴ　（ＨＩ Ｖｇａｇ蛋白質、残基４４６〜４５４）ＡＭＱＭＬＫＥ　（］１１Ｖｇａｇｍ白 質、残基１９３〜１９９）１’ｌＡＰＧＱＭＲＥ　（ＨＩＶｇａｇ蛋白質、残基 ２１９〜２２７）Ｑ〜ＩＫＤＣＴＥＲＱ　（ＨＩＶｇａｇ蛋白質、残基４１８〜 ４２６）ＫＲＷＩ　ＩＬＧＬＮＫＩ”Ｖ’　（ＨＩＶｇａｇ蛋白質、残基２６５ −２７６）ＧＲＡＦＶＴＩＧＫ　（ＨＩＶｇｐ１２０、残基３１４〜３２２）Ｃ ＣＴＫＰＴＥＧＮＣＴＣ（Ｂ型肝炎表面抗原、残基１３８〜１４９）ＫＹＡＬＡ ＥＡＳＬＫＭＡＥＰＮＱＦＲＧＫＥＬＰ　（Ｈ３ＶグリコプロティンＤ−１、残 基１〜２３） ＫＹＡＬＡＥＰＳＬＫＭＡＥＰＮＱＦＲＧＫＮＬＰ　（Ｈ３Ｖグリコプロティン Ｄ−２、残基１〜２３） Ｒ’ｌ’　Ｎ　ＲＮ　Ａ　Ｖ　Ｐ　Ｎ　Ｌ　ＲＧ　Ｅ　Ｌ　Ｑ　Ｖ　Ｌ　、Ａ　 Ｑ　Ｋ〜’ＡＲＴＬＰ　（ＦＭＤＶ　・　ＶＰ　１、残基１３５〜１６０） Ｓ　Ｇ　Ｖ　ＥλＰＧＧ’ｒ”ＣＬ（リンパ球性脈絡膵炎ウィルスグリコプロテ ィン、残基２７２〜２８２） 自己免疫 ＤＭＧＨＧＬＲＬＩＨＹＳＹＤＶＮＳＴＥＫＧ　（Ｔ−細胞受容体−Ｖβ８）Ａ ＰＧＧＴＬＱＱＬＦＹＳＦＮＶＧＱＳＥＬＶ　（Ｔ−１［Ｂ胞受容体・ＶＪ８） ＧＲＴＱＤＥＮＰＶＶＨＰＰＫＮＩＶＴＰＲＴＰＰＰ　（ミニリン塩基性蛋白質 ）ＡＳＱＫＲＰＳＱＲＨＧ　（ミニリン塩基性蛋白質）ＩＲＧＥＲＡ　（ヒトヒ ストンＨ３） ＲＲＹＱＫＳ置　（ヒトヒストンＨ３）ＲＲＩＫＥＩＶＫＫ　（ヒト熱シヨツク 蛋白質８９α）ＲＲＶＫＥＶＶＫＫ　（ヒト熱シｙ　ツク蛋白質８９β）ＮＬＬ ＤＧＤＰＲＤＦＶＤＮＳ　（ＥＧＦ受容体、残基５１６〜５２９）ＰＥＦＬＥＱ ＲＲＡＡＶＤＴＹＣ（Ｅｓβ鎖）移植 ＲＹＬＥＮＧＫＥＴ　（ＨＬＡ−Ａ２４、残基１７０〜１７９）ＲＹＬＫＮＧＫ ＥＴ　（ＨＬＡ−Ｃｗ３、残基１７０〜１７９）ＰＰＫＴＨＶＴＨＨＰ　（ＨＬ Ａ−Ｂ２７、残基１８２〜１９１）ＧＳＨ３ＭＲＹＦＨＴＳＶ　（ＨＬＡ−Ｂ２ ７、残基１−１２）ＳＹＦＰＥＩＴＨＩ　（セルフペプチド１）ＫＲＦＥＧＬＴ ＱＲ（セルフペプチド２）ＲＲＦＴＲＰＥＨ（セルフペプチド２）ＲＲＩ　５Ｇ ＶＤＲＹ　（（？に７ベブチド２）ＡＲＬＦＧＩＲＡＫ　（セルフペプチドリ（ ’Ｆａｌｋなど、１９９１年、Ｎａｔｕｒｅ、３５１巻＝２９０〜２９６頁）。

（’Ｊａｒｄｅｔｚｋｙなど、１９９１年、Ｎａｔｕｒｅ、３５３巻＝３２６〜 ３２９頁）。

［アミノ酸の１文字表記はＺｕｂａｙ、１９８８年、「生化学（Ｂｉｏｃｈｅｍ ｉｓｔｒｙ）Ｊ、第２版、（ＭａｃＭｉ　Ｉ　Ｉａｎ−Ｐｕｂｌ　ｉｓｈｉｎｇ ＋ニューヨーク）、３３頁に見出せる〕 下記の実施例は前記方法および有利な結果の側面の一部を例示する。以下の実施 例を示すのは例示のためであって限定のためではない。

実施例１ 下記のように抗原的活性ペプチドをスフィンゴシンと複合させる。スフィンゴシ ンを１．３−ビス（トリメチルシリル）尿素とＶｅｒｂｌｏｏｍなど（１９８１ 年、５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、１０３２巻：８０７〜８０９頁）により記載されたよ うに反応させてスフィンゴシンのトリメチルシリル誘導体を得る。スフィンゴシ ン誘導体を次に端末アミンと構成アミノ酸側鎖の活性アミンをキンモト（１９７ ５年、Ｃｈｅｍ、Ｐｈｙｓ、Ｌｉｐｉｄｓ、１５巻：３３〜３６頁）が記載した ようにアゾンカルボン酸ジエチル（ＤＥＡＤ）とトリフェニルホスフィンとの存 在下にｔ−ブトキノカルボニル（ｔ−Ｂｏａ）保護基で保護した抗原的活性ペプ チドと反応させる。このスフィンゴシン／ペプチド複合体を次にピリジンフッ化 水素塩の存在下ニマツウラなど（１９７６年、Ｊ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、Ｃｈｅｍ 、Ｃｏｍｍ、４５１〜４５９頁）により記載されたように反応させてｔ−Ｂ。

Ｃ保護基を除いて、アミド結合を経てスフィンゴシンに共有結合で連結した抗原 的活性ペプチドを得る。この反応式を図１に示す。

実施例ＩＡ 抗ウィルス化合物（ＨＩＶ１プロテアーゼ阻害剤、化合物８）を図Ｉ八に示すよ うにして実施例１に記載したようにスフィンゴシンと複合させる。

実施例２ 抗ウィルス化合物（化合物８）を図２八に示すようにして次の通りにポリグリノ ンスペーサを経てセラミドと複合させる。ポリグリシンのアミノ端末をｔ−ＢＯ Ｃ基で保護する。ポリグリシンをそのカルボキン端末を経て前出ＡｎｄｅｒｓＯ ｎなどが記載のようにしてエステル結合を形成してセラミドと複合させる。得ら れた化合物を次にポリグリシン残基のアミノ端末と複合させる。化合物８のアミ ノ端末もｔ−Ｂｏｃ保護基で保護する。ポリグリシル−スフィンゴシンとの複合 をポリエステルスペーサ部分のアミノ端末とＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤のカ ルボキン端末との間に起こさせる。この反応は実施例１記載のようにＤＥＡＤお よびトリフェニルホスフィンの存在下に行う。この複合に続き、ＨＩＶ−１プロ テアーゼ阻害剤残基のアミノ端末を前出マツウラなどの方法に従って脱保護する 。

実施例３ 抗原的活性ペプチド化合物を３−ヒドロキシプロパン酸オリゴマースペーサを経 てセラミドと複合し、ここではオリゴマースペーサの第一端末がセラミドとエス テル官能基を経て複合し、抗原的活性ペプチドはポリエステルスペーサの第二端 末に抗原的活性ペプチドのアミノ端末にアミド結合を経て複合する。ポリエステ ルスペーサはまず、第一端末にカルボキシ基があり、第二端末をトリフェニルメ チル基でエステル化されたものとして得る。このスペーサをセラミドと第一端末 でＡｎｄｅｒｓｏｎなど（１９６３年、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、　、８５ 巻・３０３９頁）の方法に従ってエステル連結基を経て複合する。この化合物を 次にスペーサ化合物の第二端末を経て抗原的活性ペプチドとＶｅｒｂｌｏｏｍな ど（１９８１年、５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、１０３２巻：８０７〜８０９頁）の方法 に従ってアミド結合によって複合する。この反応式を図３に示す。

実施例３Ａ セラミドをまず３−ヒドロキシプロパン酸オリゴマースペーサの第一端末にエス テル官能基を経て複合し、ＡＺＴを該ポリエステルスペーサにホスホジエステル 結合を経て複合したものである抗ウィルス化合物を製造する。まず、第一端末に カルボキシルが持ち、第二端末をトリフェニルメチル基でエステル化したポリエ ステルスペーサを得る。このスペーサを第一端末で前出Ａｎｄｅｒｓｏｎなどの 方法に従ってエステル官能リンカ−基を経てセラミドと複合する。この化合物を 次にスペーサ化合物の第二端末を経てＡＺＴモノホスフェートにＢａｅｒ（１９ ５５年、Ｃａｎ、Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｐｈｙｓ、　、３４巻、２８８頁）の方 法に従ってホスホジエステル結合により複合する。この抗ウィルス化合物におい て、スペーサと医薬との間の結合開裂はホスホヒドロラーゼの不在下では遅いで あろう。この反応式は図３Ａに示す。

ホスファチジン酸、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチ ノルイノシトール、ホスファチジルグリセロールまたはホスファチジルエタノー ルアミンがホスホエステルリンカ−官能基を経て抗原的活性ペプチドに連結する 抗原的活性ペプチド化合物。ホスファチジン酸、ホスファチジルコリン、ホスフ ァチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロールま たはホスファチジルエタノールアミンを５ａｌｏｒｄなど（１９８６年、Ｂｉｏ ｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ、８６６巻：６４〜７５頁）の方法に従っ て抗原的活性ペプチドのカルボキシル端末に複合する。この反応式は図４に示す 。

実施例４Ａ 実施例４に記載したようにして、図４Ａに示すようにホスファチジン酸、ホスフ ァチジルコリン、ホスファチノルグリセリンまたはホスファチジルエタノールア ミンをホスホエステルリンカ−官能基を経てＡＺＴに連結している抗ウィルス化 合物を製造する。

実施例５ アミノヘキサノイルスフィンゴシンが抗原的活性ペプチドのカルボキシルペプチ ド端末に複合する抗原的活性ペプチド化合物を製造する。アミノヘキサノイルス フィンゴノンをキンモト（１９７５年、Ｃｈｅｍ、Ｐｈｙｓ、Ｌｉｐｉｄ、１５ 巻　３３〜３６頁）の方法に従って抗原的活性ペプチドに複合させる。この反応 式を図５に示す。

実施例５Ａ アミノヘキサノイルスフィンゴノンがＡＺＴに複合している抗ウィルス化合物を 製造する。アミノヘキサノイルスフィンゴシンをＡＺＴモノホスホイミダゾール と図５に記載したようにして、図５Ａに示すように複合してホスホルアミド結合 を経てＡＺＴに結合しているアミノヘキサノイルスフィンゴシンを得る。

実施例６ エステルリンカ−官能基またはアミドリンカ−官能基を経て抗原的活性ペプチド の第一端末に複合したセラミドからなる抗原的活性化合物を製造する。抗原的活 性ペプチドはカルボキシル端末とアミノ端末を持ち、アミノ端末はｔ−Ｂｏａ基 で保護しである。抗原的活性ペプチドをＡｎｄｅｒｓｏｎなど（１９６３年、Ｊ 、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、Ｃｈｅｍ、Ｃｏｍｍ、　、８５巻：　３０３９頁）が記載 したようにしてそのカルボキシル端末を経てエステル連結を形成してセラミドに 複合する。抗原的活性ペプチドのアミノ端末を次にマツウラなど（１９７６年、 Ｊ。

Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、Ｃｈｅｍ、Ｃｏｍｍ、４５１頁）の方法に従って脱保護する 。

この反応式を図６に示す。

実施例７ ＡＺＴ−モノホスフェートに複合したセラミドからなる抗ウィルス化合物を提供 する。セラミドをＡＺＴ−モノホスフェートとＳｍ１ｔｈとＫｈｏｒａｎａ　（ １９５８年、Ｊ、Ａｍｅｒ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、　、８０巻、１１４１頁）に記 載したようにしてジシクロへキシルカルボジイミドの存在下に反応させてホスホ ジエステル結合を経てＡＺＴ−モノホスフェートに複合しているセラミドを得る 。

この反応式を図７に示す。

実施例８ スフィンゴシンがホスフォジエステル結合を経て５−フルオロデオキシウリジン に複合する抗新生物化合物を製造する。スフィンゴシンを５−フルオロデオキシ ウリジンと前出Ｂａｅｒの方法に従ってジシクロフェニルホスフェートの存在下 に反応させてホスフォジエステル結合を経て５−フルオロデオキシウリジンに複 合するスフィンゴシンを得る。この反応式を図８に示す。

実施例９ スフィンゴノンがアジピン酸スペーサを経て抗原的活性ペプチドのアミノ端末に 複合する抗原的活性ペプチドを製造する。スフィンゴシンの一部アミノおよびヒ ドロキシル基をアジピン酸物メチルエステルと一夜４０〜５０℃で反応させてア ンル化し、続いてエステルの塩基性加水分解（０，ＩＮ−メタノール性ＫＯＨ中 ）する。この中間体の遊離ヒドロキシル基をｔ−ブチルジメチルシラン（ＴＢＤ ＭＳ）を用いて室温で一夜反応させて保護する。抗原的活性ペプチドを次にカル ポニルノイミダゾールの存在下に４０〜５０℃での反応により活性化したアジピ ン酸スペーサの遊離カルボキシル端末に共有結合的に連結する（この反応の詳細 はＥｎｚｙｍｅ、１８巻、３１０頁、１９７４年に見出しうる）　。ＴＢＤＭＳ 保護基を次にフッ素化テトラブチルアンモニウムを用いて除去して抗原的活性ペ プチド生成物を得る。この反応式を図９に示す。

実施例１０ セラミドがポリグリシンスペーサの第一端末にエステル官能基を経て複合し、Ａ ＺＴがポリグリシンスペーサの第二端末にホスホエステル官能基を経て複合する 抗ウィルス化合物を製造する。セラミドをまず（実施例２に記載のように）ポリ グリシンスペーサの第一端末にエステル官能基を経て複合する。セラミド−ポリ グリノン化合物を次に前出ＰａｕｌとＡｎｄｅｒｓｏｎの方法に従ってＡＺＴモ ノホスフェートにホスホエステル結合を経てポリグリシンスペーサの第二端末で 複合する。この反応式を図１０に示す。

実施例１１ ホスファチジン酸、ホスファチジルコリン、ホスファチンルグリセロールまたは ホスファチジルエタノールアミンが抗原的活性ペプチドにリソホスフォリピドの ５ｎ−２または５ｎ−１−ヒドロキシルを経て連結する抗原的活性ペプチド化合 物をＭａｒｇｉｎとＪｏｓｅｙ（１９８８年、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ−Ｌｅｔ 　ｔ、　、２９巻＋３６３１〜３６３４頁）の方法を用いて製造する。この反応 式を図１１に示す。要するに、抗原的活性ペプチド（スペーサ部分に共有結合的 に連結していると否とに関わらず）か、あるいは脂肪酸を３−ｓｎ−ベンジルグ リセロールの５ｎ−１−ヒドロキシルにツメチルアミノピリノン／シンクロへキ シルカルボッイミド／塩化メチレン（ＤＭＡＰ／ＤＣＣ／ＣＨｚＣＩｔ）の存在 下に０℃で反応させて複合する。脂肪酸が、あるいは抗原的活性ペプチド（スペ ーサ部分に共有結合的に連結していると否とに関わらず）を次に３−ｓｎ−ベン ジル−１−ｓｎ−置換グリセロールの５ｎ−２−ヒドロキシルに２０℃でＤＭＡ Ｐ／ＤＣＣ／ＣＨ２Ｃｌ２）の存在下に複合する。次に３−ｓｎ位を４５℃でエ タノール／酢酸中、白金黒と水素の存在下に脱保護する。この適切な極性末端基 を次に５ｎ−３位にフェニルジクロロホスファイト／ジイソプロピルエチルアミ ン／テトラヒドロフランの存在下に一７８℃でホスホ−エステル化する。

あるいは、抗原的活性ペプチド（スペーサ部分に共有結合的に連結していると否 とに関わらず）をホスホリピドに複合でき、このジアシルホスホリピドにＥｉｂ ｉなど（１９８３年、Ｍｅｔｈ、Ｅｎｚｙｍｏｌ　、９８巻：６２３頁）の方法 を用いるホスホリパーゼＡ、による酵素的脱アシル化を行うことができる。

実施例１２ 抗新生物剤メトトレキセート（Ｍｔｘ）が６−アミノカプロン酸スペーサを経て スフィンゴシンに複合する抗原的活性ペプチドを製造する。この反応式を図１２ に示す。スフィンゴシンの一級アミノおよびヒドロキシル基を活性化Ｎ−（メト トレキセート）アミノカプロン酸と４０〜５０℃で一夜反応させてアシル化し、 ０、ＩＮ−メタノール性ＫＯＨ中の塩基性加水分解を続ける。６−アミノカプロ ン酸のＭｔｘ誘導体はＭｔｘのカルポキシル部分を活性化し、６−アミノカプロ ン酸と６０〜７０℃で２日間反応させて合成する。この反応を酸性条件下に止め ればこの条件下に生成する無水物を遊離する。

実施例１３ 本発明の抗原的活性ペプチド−極性腸質複合体は次のように使用される。ワクチ ンとしての使用のためには、複合体、裸のペプチドおよび負の対照（食塩水）の 最適および準最適用量を最適投与経路を用いて動物に投与する。最適期間（引出 すべき免疫反応の性質から決定される）後、血清およびリンパ球を動物から採取 し、抗原に対する反応性を検査する。リンパ球細胞は常法（フィニル・ハイパツ ク（Ｆｉ　ｃｏ　］　］−Ｈｙｐａｑｕｅ）密度勾配遠心分離）を用いて単離し 、原ペプチド抗原に接触し、続いてこれを加えた対照自己由来のマクロファージ ／モノサイト調整物に対する細胞毒性について検査する。検査はＭａｌｋｏｖｓ ｋｙなど（１９８２年、Ｎａｔｕｒｅ、３００巻：６５２〜６５５頁）の３１（ ：、放出検定を用いて行った。抗体反応は標準的放射免疫検定法（Ｂｒｅｎｎｅ ｒなど、１９８４年、Ｅｕｒ、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　、１４巻：１０２１〜１ ０２７頁）を使用して検査した。要するに、Ｌｉｎｂｒｏフレキンプル板を特異 的ペプチド抗原で燐酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）中のペプチド溶液（１ｍｇ／ｍＬ ）に−夜インキュベーションして被覆する。次に板を０２％牛血清アルブミンと ０．２％ゼラチンのＰＢＳ溶液で処理して非特異的結合を閉鎖する。板を次に洗 浄し、次に検査すべき血清を添加し、インキュベーション後に板に付着した血清 を再洗浄する。次１１Ｈｌで標識した抗１ｇＧおよび抗１ｇＭ抗体を添加し、板 を洗浄し、結合した放射能をカウントする。次に各板上に存在するペプチド抗原 特異性抗体の量を抗ペプチド抗体既知量で作った標準曲線から算出する。これら の実験から検査した各実験血清について各ペプチド抗原に対する特異的抗体のタ イターを算出する。

移植拒絶反応の予防における、または自己免疫疾患の処！における使用のために は、前記のように動物の免疫により適当な投与プロトコールを決定する。実験的 に決定した最適期間（引出すべき免疫学的反応の性質から決定する）後、動物か ら血清とリンパ細胞を採取し、前記のように自己抗原（自己免疫疾患用途のため に）か外来性移植抗原かのどちらかに対する反応性を検査する。

前記開示は本発明の成る特定の態様を強調するものであって、均等な修飾または 別法は総て添付する請求項に述べる本発明の特質と範囲の内にあることを理解す べきである。

３　工 ／（Ｊ　−Ｊ Ｕ１ Ｕ） １　ｏ　２ スペーサ フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、Ｃ１，６識別記号　６庁内整理番号Ａ６１Ｋ　３８１００　 ＡＤＹ ３９／３８５　９２８４−４Ｃ ＣＯ７Ｆ　９／６５５８　９１５５−４Ｈ／／　Ｃ０７Ｋ　１４１００　８３１ ８−４Ｈ（７２）発明者　マルコブスキー、ミロスラブアメリカ合衆国５３７０ ５　ライスコンシン、マディソン、サンセット・ドライブ　３４３６番 （７２）発明者　マックラード、ロナルド・ダブり二−アメリカ合衆国９７２１ ５　オレゴン、ポートランド、ニス・イー・ギルハム・アベニュー２４６番 Ｉ Ａ６１Ｋ　３７／２２　ＡＤＵ （７２）発明者　バークス、ディピッド・ウェイースンアメリカ合衆国９８１１ ５　ワシントン、シアトル、エフ・イー、トウニンティーサード・アベニュー　 ７５４４番 （７２）発明者　ウィツト、ジョン・エフアメリカ合衆国９７２０２　オレゴン 、ポートランド、ナンバー２、ニス・イー・バーディ−４０３０番

Claims (71)

【特許請求の範囲】
1. １．生物学的活性化合物、極性脂質担体、２つのリンカー官能基およびスペーサ を含むものである合成物であって、スペーサが第一末端と第二末端を持ち、極性 脂質がスペーサの第一末端に第一リンカー官能基を経て結合し、生物学的活性化 合物がスペーサの第二末端に第二リンカー官能基を経て結合している合成物。
2. ２．生物学的活性化合物がペプチドである請求項１の合成物。
3. ３．ペプチドが抗原的活性ペプチドである請求項２の合成物。
4. ４．生物学的活性化合物が医薬である請求項１の合成物。
5. ５．医薬が抗ウイルスまたは抗新生物剤である請求項４の合成物。
6. ６．スペーサが細胞内部位で生物学的活性化合物の放出なしに作用させるもので あって、スペーサの第一末端に結合する第一リンカー官能基が強で、スペーサの 第二末端に結合する第二リンカー官能基が弱である請求項１の合成物。
7. ７．スペーサが細胞内部位で生物学的活性化合物の加水分解的放出を促進するも のであって、スペーサの第一末端に結合する第一リンカー官能基が強で、スペー サの第二末端に結合する第二リンカー官能基が弱である請求項１の合成物。
8. ８．スペーサが細胞内部位で生物学的活性化合物の酵素的放出を促進するもので あって、スペーサの第一末端に結合する第一リンカー官能基が強で、スペーサの 第二末端に結合する第二リンカー官能基が弱である請求項１の合成物。
9. ９．極性脂質がスフィンゴシン、セラミド、ホスファチジルコリン、ホスファチ ジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシト ール、ホスファチジルセリン、カルジオリピン又はホスファチジン酸である請求 項１の合成物。
10. １０．第一官能リンカー基を持つ生物学的活性化合物および第二官能リンカー基 を持つ極性脂質担体を含むものである合成物であって、第一および第二官能リン カー基の間の化学結合により化合物が極性脂質担体に共有結合的に連結している 合成物。
11. １１．第一官能リンカー基が水酸基、一級または二級アミノ基、リン酸基または それらの置換誘導体またはカルボン酸基である請求項１０の合成物。
12. １２．第二官能リンカー基が水酸基、一級または二級アミノ基、リン酸基または これらの置換誘導体またはカルボン酸基である請求項１０の合成物。
13. １３．極性脂質がスフィンゴシン、セラミド、ホスファチジルコリン、ホスファ チジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシ トール、ホスファチジルセリン、カルジオリピン又はホスファチジン酸である請 求項１０の合成物。
14. １４．生物学的活性化合物がペプチドである請求項１０の合成物。
15. １５．ペプチドが抗原的活性ペプチドである請求項１４の合成物。
16. １６．生物学的活性化合物が医薬である請求項１０の合成物。
17. １７．医薬が抗ウイルスまたは抗新生物剤である請求項１６の合成物。
18. １８．ペプチド、極性脂質担体、２つののリンカー官能基およびスペーサを含む ものである合成物であって、スペーサが第一末端と第二末端を持ち、極性脂質が スペーサの第一末端に第一リンカー官能基を経て結合し、ペプチドがスペーサの 第二末端に第二リンカー官能基を経て結合している合成物。
19. １９．ペプチドが抗原的活性ペプチドである請求項１８の合成物。
20. ２０．スペーサが細胞内部位でペプチドを放出することなく作用させるものであ って、スペーサの第一末端に結合する第一リンカー官能基が強であり、スペーサ の第二末端に結合する第二リンカー官能基が弱である請求項１８の合成物。
21. ２１．スペーサが細胞内部位でペプチドの加水分解的放出を促進させるものであ って、スペーサの第一末端に結合する第一リンカー官能基が強であり、スペーサ の第二末端に結合する第二リンカー官能基が弱である請求項１８の合成物。
22. ２２．スペーサが細胞内部位でペプチドの酵素的放出を促進するものであって、 スペーサの第一末端に結合する第一リンカー官能基が強であり、スペーサの第二 末端に結合する第二リンカー官能基が弱である請求項１８の合成物。
23. ２３．極性脂質がスフィンゴシン、セラミド、ホスファチジルコリン、ホスファ チジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシ トール、ホスファチジルセリン、カルジオリピン又はホスファチジン酸である請 求項１８の合成物。
24. ２４．第一リンカー官能基を持つペプチドおよび第二官能リンカー官能基を持つ 極性脂質担体を含むものである合成物であって、ペプチドが極性脂質担体に第一 および第二官能リンカー基間の化学結合により共有結合的に連結している合成物 。
25. ２５．第一官能リンカー基が水酸基、一級または二級アミノ基、リン酸基または それらの置換誘導体またはカルボン酸基である請求項２４の合成物。
26. ２６．第二官能リンカー基が水酸基、一級または二級アミノ基、リン酸基または それらの置換誘導体またはカルボン酸基である請求項２４の合成物。
27. ２７．極性脂質がスフィンゴシン、セラミド、ホスフアチジルコリン、ホスファ チジルグリセロール、ホスフアチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシ トール、ホスファチジルセリン、カルジオリピン又はホスファチジン酸である請 求項２４の合成物。
28. ２８．ペプチドが抗原的活性ペプチドである請求項２４の合成物。
29. ２９．医薬的に許容しうる担体中の、動物中に免疫反応を引出せるに十分な量の 請求項１９の合成物を、動物に接種する段階を含むものである病原微生物に対し て動物を免疫する方法。
30. ３０．動物がヒトである請求項２９の方法。
31. ３１．動物中に免疫反応を引出すのに十分な量の、医薬的に許容しうる担体中の 請求項２８の合成物を動物に接種する段階を含むものである病原微生物に対して 動物を免疫する方法。
32. ３２．動物がヒトである請求項３１の方法。
33. ３３．動物中で自己免疫反応を阻害するのに十分な量の、医薬的に許容しうる担 体中の請求項１９の合成物を動物に接種する段階を含むものである動物の自己免 疫疾患を緩和する方法。
34. ３４．動物がヒトである請求項３３の方法。
35. ３５．動物中で自己免疫反応を阻害するのに十分な量の、医薬的に許容しうる担 体中の請求項２８の合成物を動物に接種する段階を含むものである動物の自己免 疫疾患を緩和する方法。
36. ３６．動物がヒトである請求項３５の方法。
37. ３７．動物中で移植拒絶を阻害するに十分な量の、医薬的に許容しうる担体中の 請求項１９の合成物を動物に接種する段階を含むものである動物の組織または器 官移植拒絶を予防する方法。
38. ３８．動物がヒトである請求項３７の方法。
39. ３９．動物中で移植拒絶を阻害するに十分な量の、医薬的に許容しうる担体中の 請求項２８の合成物を動物に接種する段階を含むものである動物の組織または器 官移植拒絶を予防する方法。
40. ４０．動物がヒトである請求項３９の方法。
41. ４１．抗ウイルスまたは抗新生物剤、極性脂質担体、２つのリンカー官能基およ びスペーサを含むものである合成物であって、スペーサが第一末端および第二末 端を持ち、極性脂質がスペーサの第一末端に第一リンカー官能基を経て結合し、 医薬がスペーサの第二末端に第二リンカー官能基を経て結合している合成物。
42. ４２．スペーサが細胞内部位での医薬の放出なしに作用させるものであって、ス ペーサの第一末端に結合する第一リンカー官能基が強で、スペーサの第二末端に 結合する第二リンカー官能基が弱である請求項４１の合成物。
43. ４３．スペーサが細胞内部位での医薬の加水分解的放出を促進させるものであっ て、スペーサの第一末端に結合する第一リンカー官能基が強で、スペーサの第二 末端に結合する第二リンカー官能基が弱である請求項４１の合成物。
44. ４４．スペーサが細胞内部位で医薬の酵素的放出を促進させるものであって、ス ペーサの第一末端に結合する第一リンカー官能基が強で、スペーサの第二末端に 結合する第二リンカー官能基が弱である請求項４１の合成物。
45. ４５．極性脂質がスフィンゴシン、セラミド、ホスファチジルコリン、ホスファ チジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシ トール、ホスファチジルセリン、カルジオリピン又はホスファチジン酸である請 求項４１の合成物。
46. ４６．第一官能リンカー基を持つ抗ウイルスまたは抗新生物剤および第二官能リ ンカー基を持つ極性脂質担体を含むものである合成物であって、第一および第二 官能リンカー基間の化学結合により医薬が極性脂質担体に共有結合的に連結して いる合成物。
47. ４７．第一官能リンカー基が水酸基、一級または二級アミノ基、リン酸基または それらの置換誘導体またはカルボン酸基である請求項４６の合成物。
48. ４８．第二官能リンカー基が水酸基、一級または二級アミノ基、リン酸基または これらの置換誘導体またはカルボン酸基である請求項４６の合成物。
49. ４９．極性脂質がスフィンゴシン、セラミド、ホスファチジルコリン、ホスファ チジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシ トール、ホスファチジルセリン、カルジオリピン又はホスファチジン酸である請 求項４６の合成物。
50. ５０．スペーサが式（アミノ酸）ｎで示されるペプチドであって、ｎが２と２５ との間の整数であり、ペプチドが特定のアミノ酸のポリマーを含むものである請 求項４１の合成物。
51. ５１．１−フェニル−２−（アラニルアラニル）アミノ−３−ヒドロキシルーペ ンタノイル−バリニルバリニル−グリシルグリシルグリシルグリシル−セラミド エステルである請求項５０の合成物。
52. ５２．３′−アジド−３′−デオキシチミジン・モノホスフェートー［トリ−β −ヒドロキシプロビオニルエステル］−Ｏ２−セラミドエステルである請求項４ １の合成物。
53. ５３．３′−アジド−３′−デオキシチミジン・モノホスフェートーグリシルグ リシルグリシルグリシルーセラミドエステルである請求項５０の合成物。
54. ５４．Ｎ−［１−（３′−アジド−３′−デオキシチミジン・モノホスフェート ）アミノヘキサノイル］スフィンゴシン・アミドである請求項４１の合成物。
55. ５５．［１−フェニル−２−（アラニルアラニル）アミノ−３−ヒドロキシルー ペンタノイル］バリニルバリニル−スフィンゴシン・アミドである請求項５０の 合成物。
56. ５６．３′−アジド−３′−デオキシチミジン・モノホスフェートーＯ２−セラ ミドエステルである請求項４１の合成物。
57. ５７．５−フルオロウリジンデオキシリボースモノホスフェートーＯ２−セラミ ドエステルである請求項４１の合成物。
58. ５８．ホスファチジルコリン−３′−アジド−３′−デオキシチミジン・モノホ スフェートである請求項４１の合成物。
59. ５９．ホスファチジルグリセロールー３′−アジド−３′−デオキシチミジン・ モノホスフェートである請求項４１の合成物。
60. ６０．ホスファチジルエタノールアミン−３′−アジド−３′−デオキシチミジ ン・モノホスフェートである請求項４１の合成物。
61. ６１．スペーサが式（アミノ酸）ｎで示されるペプチドであって、ｎが２と２５ との間の整数であり、ペプチドが特定のアミノ酸のポリマーを含むものである請 求項１の合成物。
62. ６２．スペーサが式（アミノ酸）ｎで示されるペプチドであって、ｎが２と２５ との間の整数であり、ペプチドが特定のアミノ酸のポリマーを含むものである請 求項１８の合成物。
63. ６３．動物に対して医薬的に許容しうる担体中の請求項４１の合成物を、動物中 で治療的効果を引出すのに十分な量で動物に投与する段階を含むものである抗ウ イルスまたは抗新生物剤を動物に投与する方法。
64. ６４．動物がヒトである請求項６３の方法。
65. ６５．動物に対して医薬的に許容しうる担体中の請求項４６の合成物を、動物中 で治療的効果を引出すのに十分な量で動物に投与する段階を含むものである抗ウ イルスまたは抗新生物剤を動物に投与する方法。
66. ６６．動物がヒトである請求項６５の方法。
67. ６７．動物に対して医薬的に許容しうる担体中の請求項１の合成物を、動物中で 治療的効果を引出すのに十分な量で動物に投与する段階を含むものである生物学 的活性化合物を動物に投与する方法。
68. ６８．動物がヒトである請求項６７の方法。
69. ６９．動物に対して医薬的に許容しうる担体中の請求項１０の合成物を、動物中 で治療的効果を引出すのに十分な量で動物に投与する段階を含むものである生物 学的活性化合物を動物に投与する方法。
70. ７０．動物がヒトである請求項６９の方法。
71. ７１．Ｎ−メトトレキセ−ト・セラミドである請求項４１の合成物。