JPH07509215A

JPH07509215A - ジヒドロ葉酸還元酵素の特異的阻害およびそのための化合物

Info

Publication number: JPH07509215A
Application number: JP4502293A
Authority: JP
Inventors: コンピス，アイバン; ブレイニー，ジェフリー　エム．; マーロウ，チャールズ　ケイ．
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1990-11-14
Filing date: 1991-11-14
Publication date: 1995-10-12
Also published as: EP0639075A1; EP0639075A4; CA2095518A1; AU657348B2; PT99514A; PT99514B; WO1992008461A1; AU2202792A; IE913974A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】ジヒドロ葉酸還元酵素の特異的阻害およびそのための化合物技術分野本発明は病原体に特異的な酵素の薬理学および阻害に関する。さらに特定すると、本発明は菌の病原体中のジヒドロ葉酸還元酵素という酵素を特異的に阻害する方法およびそのための化合物に関する。

発明の背景Ｐｎｅｕｍｏｃ　ｓｔｉｓ　ｃａｒ’ｎ　ｉ肺炎ＣＰＣＰ＞は、免疫の弱ま９た患者への生命を脅かす重要な感染であり、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）である患者の疾病率および死亡率の主要な原因である。

ＡＩＤＳ流行の始まり以来、ＰＣＰの発生率は米国で１年につき約２００症例から１年につき２ｓ，　ｏｏｏ症例を超える数に上昇した。

連続的なインビトロ培養系がないことおよびＰＣＰのラットモデルの厄介な性質のため、抗し」Ｌ■■治療は、ム」１己ＪＬＬＬが原生動物の一種であり、そのため抗原生動物薬が有効であるらしいという仮定で大いに発達した。２つの主要な治療様式、トリメトプリム／スルファメトキサゾール（ｔｒｉｍｅｔｈｏｐｒｉｍ／ｓｕｌｆａｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｅ）およびペンタミジンは経験的に発達した。しかしながら、ＬＪＬｌ■は最近、その代わりにキングダムフンジ（ｔｈｅ　Ｋｉｎｇｄｏｍ　Ｆｕｎｇｉ）に属することが示唆された（Ｊ．Ｃ．Ｅｄｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ　（１９８８）　ｉｌ：５１９−２２）。

トリメトプリム（米国特許Ｎｏ．　２，　９０９，　５２２＞およびピリメタミン、ならびに他のジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＰＲ）阻害剤は、核酸前駆体の代謝合成中でＤＩ（ＦＲによって中心的役割を果たすための有効な抗バクテリアおよび抗原生動物薬として知られている。スルフォンアミドとともに用いられるときの効能を除いて、トリメトプリムおよびピリメタミンは単独ではｍａｉｌのＤＨＰＲに対しては不十分な阻害剤である。例えば、トリメトプリムおよびピリメタミンはＥ、ｃｏｌｉ　ＤＢＰＲに対して８および２．５００　ｎＭの５０％阻害濃度（ＩＣ５Ｇ）を示すが、一方、Ｌｊ五〇１月２のＤＨＰＲに対する［Ｃｓｓはそれぞれ３９．６００および２，４００　ｎＭである。

他の抗葉酸塩類はＰ、　ｃａｒｉｒ＋４　ｉのＤＨＰＲのより有効な阻害剤であることが示されているが、宿主への毒性を防ぐためにロイコボリンの同時投与が必要である。Ａｌｌｅｇｒａらは、この病原体中のＤＨＰＲ酵素が原核生物のＤＩＩＰＲよりも哺乳類のＤＨＰＲにより類似しているという説に基づき、２．４ −ジアミノ−５−メチル−６−［（３，４゜５−トリメトキシアニリノ）メチル］キナゾリン　（トリメトレキサート）　（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）を用いるＰ、　ｃａｒｉｎｉｉおよびト牛ソブラズ７　（Ｔｏｘｏｐｌａｓ＋ｍｏｓｉｓ　ｇｏｎｄｉｉ）の処置を示唆した（米国特許ＮＯ、４，６９４，００７）。

ＡＩＤＳの流行以前は、これらのタイプの薬はＰ、ｃエム１Ｌ２肺炎の稀な症例の処置に十分であった。しかしながら、ＩＩＩＶ陽性患者では、標準的な抗Ｐ　ｃａｒｉｎｉｉ薬での治療および予防がしばしば起こる毒性およびアレルギー性の副作用により複雑になる。

ＰＣＰの治療での周知の抗葉酸塩の効能に優る新しい化合物が望まれており、特にトリメトプリムのような周知の阻害剤よりも、宿主の（特にヒトの）　ＤＨＰＲに比較してＰ、　ｃａｒｉｎｉ　１ＤｔｌＦＲに対して、より高い選択性を有する阻害剤が望まれている。

１９８９年１２月７日に提出された同一出願人による同時係属中の米国特許出願Ｎｏ、　４４７．１８１はＬＢｊ１■ＤＨＰＲに対して良い選択性を示す数種のＤＨＦＲＨＦ側を開示した。

λ肌旦回示我々は現在、Ｐ、ｃａｒｉｎｉｉのような菌の病原体からのＤＨＰＲに対してより優れた活性を示し、哺乳類のくヒトの）酵素と比較して菌の酵素に対して、より高い選択性を示す化合物を見いだした。これらの化合物は一般に式Ｉおよびそれらの低級アルキルエーテル類、アミド類ならびに薬学的に受容され得る付加の塩類で表される：ここで、Ｒ１は３−Ｒ３４−Ｒ４−５−Ｒ６−ベンジルまたは（Ｎ−Ｒｅ）−８ −アザビシクロ［３，２，１１オクト−３−イルであり；そしてＲ２はＨであるかおよびＲ５は独立してＨ１低級アルコキシ、低級アルキルチオ、低級アルキルスルフィニル、ビニル、カルボキシ−低級アルキル、カルボキシ−低級アルコキシ、ジカルボキシ−低級アルキル、ジカルボキシ−低級アルコキシ、アリール− 低級アルコキシ、アリールスルホニル−低級アルコキシ、アリールスルファミド −低級アルコキシおよび式−〇　（ＣＨ２）。−ＣＯＲｓ　（ここでｎは０から６の整数であり、モしてＲ８は１つのアミノ酸である）の基、からなる群から選択されｉＲ４は低級アルコ牛シ、アリール−低級アルコキシ、低級アルキルチオ、ハロ、低級アルケニル、低級アルケニルオキシおよびピロリルからなる群から選択され；ただしＲ３、Ｒ４およびＲ５は同時にメトキシではなり；Ｒ６は非置換アリール、ならびにハロ、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルキルチオ、カルボキシ、カルバミド、カルボキシ−低級アルキルおよびカルバミド−低級アルキルからなる群から選択される１個から３個の基で置換されたアリールからなる群から選択され；そしてＲ７はアリールおよびアリール−低級アルキルからなる群から選択され、ここでアリールは７〜口、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルキルチオ、カルボキシ、カルバミド、カルボキシ−低級アルキルおよびカルバミド−低級アルキルからなる群から選択される１個から３個の基で置換されてもよい。

本発明の１つの局面は、式Ｉの化合物の有効量を投与することにより、哺乳類での（Ｐ、ｃａｒｉｎｉｉのような）菌の感染を治療するための方法である。

本発明のもう１つの局面は、薬学的に受容され得る賦形剤とともに式Ｉの化合物の有効量を含有する、哺乳類での（Ｌｃａｒｉｎｉｉのような）菌の感染を治療するための組成物である。

本発明のもう１つの局面は、薬学的に受容され得る賦形剤とともに式Ｉの化合物の有効量を含有する、哺乳類での（Ｌ。

ｃａｒｉｎｉｉのような）菌の感染を治療するための組成物を調製するための式 ■の化合物の使用である。

日を　るためのＡ、２豊「菌の感染」および「菌の病原体」という用語は、例えばｈ坦眩町旦ｉｓ　ｃ肛江ユ、アスペルギルス属、カンジダ属、フザリウム属などのキングダムフンジの生物による哺乳類の感染を指す。本発明の現在の好ましい方法は、本発明の化合物を用いるＩ咀眩旺扛ｎ工肛江且の治療である。

「薬学的に受容され得る」という用語は、過度の毒性な（哺乳類に投与し得る化合物および組成物を指す。典型的な薬学的に受容され得る塩類は、塩酸塩類、臭化水素酸塩類、リン酸塩類、硫酸塩類などのような鉱酸塩類；ならびに酢酸塩類、プロピオン酸塩類、マロン酸塩類、安息香酸塩類などの有機酸塩類を包含する。

「有効量」という用語は、検知できる治療上の効果を示すのに十分な化合物の量を指す。治療上の効果は、例えば、限定されないが、病原体の成長を阻害すること、病原体による毒素の放出を阻害することまたは妨げること、病原体を殺すことおよび感染の定着を妨げること（予防）を包含し得る。

患者に対する正確な有効量は、患者の大きさおよび健康状態、病原体の性質、感染のひどさなどによる。したがって、あらかじめ正確な有効量を記載することはできない。しかしながら、一定の状態に対する有効量は、ここで記載した情報に基づく日常の実験により決定し得る。

「低級アルキル」という用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、１−プロピル、ｎ−ブチル、Ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ヘキシルなどを含む１〜６個の炭素原子を有する炭素および水素からなる飽和の直鎖または分枝鎖の基を指す。「低級アルコキシ」は、Ｒ−０−の形の基を指し、ここでｒＲＪは上述のような低級アルキルである。適当な例はメトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシなどを包含する。同様に、「低級アルキルチオ」はＲ−Ｓ−の形の基を指し、「低級アルキルスルフィニル」はＲ−３（＝Ｏ）−の形の基を指す。例えば、メチルチオ、エチルチオ、メチルスルフィニル、ｔ−プチルスルフイニルナトヲ使用シ得る。「低級アルケニル」は、エチニル（ビニル）、２−プロペニル、１−メチルエチニル、２−ブテニル、３−フチニルなどのような２〜６個の炭素原子および少なくとも１組の炭素原子間に１つの二重結合を有する炭素および水素からなる直鎖または分枝鎖の基を指す。

「カルボキシ−低級アルキル」という用語は−（ＣＨ２）。−ＣＯＯＨの形を有する基を指し、ここでｎは１から６までの整数である。

「ジカルボキンー低級アルキル」は２つのＣ０ＯＨが付加した基を有する低級アルキル鎖を指す。

「アリール」は芳香族の性質を示す６〜１０個の炭素原子の環状炭化水素の基を示し、例えばフェニルおよびナフチル（ｎａｐｔｈｙｌ）である。

「ハロ」という用語はフルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを指す。「アミノ酸」という用語は、２０個はどの一般に存在するアミノ酸のいずれかを指し、例えば、グリシン、アラニン、アルギニン、フェニルアラニン、グルタミン酸、バリン、ヒスチジン、プロリン、オルニチン、ノルロイシンなどである。−〇　（ＣＨ２）。−ｃｏＲｓの形の基中でＲ８のように付加したとき、アミノ酸は好ましくはペプチド結合によって、すなわちアミノ酸のアミノ基とその基のアシル炭素との間の結合によって付加される。

「共投与（ｃｏａｄｍｌｎｌｓｔｅｒｌｎｇ）　Ｊとは、本発明の化合物を第２の治療薬と共に投与することを意味する。第２の治療薬はジヒドロブチロイン酸シンターゼ阻害剤であり、好ましくはダブソーンまたはスルファ剤である。適当なスルファ剤は、限定されないが、スルファダイアジン、スルファメトキサゾールなどを包含する。共投与は、例えば治療薬の混合物を投与することにより同時に起こり得、または短時間内に薬を別々に投与することにより果たされ得る。

Ｌニジ１１ガ広本発明の化合物は構造的にトリメトプリム（２，４−ジアミノ−５−（３，４，５−トリメトキシベンジル）ピリミジン）という化合物に関連し、その合成は当該分野で周知である。例えば米国特許Ｎｏ、　２．９０９．５２２ではトリメトプリムおよび関連化合物の合成が記載されている。式Ｉの化合物は当業者により同様に合成され得る。このような化合物の合成は以下の米国特許にｇ己載されている：Ｈｉｔｃｈｉｎｇｓ　！：、　（２，６５８，８９７）；　Ｈｉｔｃｈｉｎｇｓら（２，９０９，５２２）；　Ｈａｆｆｅｒ　（３，３４１C５４１）；（３，９３１，１８１）；　Ｈｅｒｒｕｎｇ（３，９８０，６４９）；　Ｌｉｅｂｅｎｏｗ　５　（３，９９２，３７９）；　Ｋｏｍｐｆｓ（４，０２４，１４５）；　Ｒｏｓｅｎ（４，０３３，９６２）；　Ｋｏｍｐｉｓ　５　（４，０３９５４３）；　Ｊｅｍｏｗ　５（４，０７５，２０９）；　Ｐｅｒｕｎ　；　（４，０８７，５２８）；　Ｆｒｔｔｓｃｈｉ　５　（４，１８０，５７８）；　ＫｏｍｐＬ刀A　５（４，２０３，９８０）ＨＰｏｅら（４，２５８，０４５）；　Ｄａｌｕｇｅ　＝　（４，４３８，２６７）；　Ｄａｕ’Ａｓｔａ（４，４８５，２４８）；　Ｋｏｍｐｉｓ　４う　（４，５１５，９４８）ＨＳｗａｒｉｎｇｅｎ　ら　（４，５６８，７４４）；　Ｒｏｔ■@；ｙ（４，５８７，３４１）ＨＫｏｍｐｉｓら（４，５９０，２７０）；　Ｄａｌｕｇｅ　５　（４，６０３，１３６）；　Ｋｏｍｐｉｓ　５（４，７９２，５５７）；　ａｎｄ　５ｅｙｄｅｌう　（４，９１２，１１２）。

本発明の現在の好ましい化合物は：２．４−ジアミノ−５−［３，５−ジメトキシ−４−（２−ヒドロキシプロプ− ２−イル）ベンジルコピリミジン；２．４−ジアミノ−５−（３，５−ジメト牛シー４−Ｎ−ピロｌノルベンジルリミジン；２、４−ジアミノ−５−（３．５−ジェトキシ−４−Ｎ−ピロ１ノルベンジルリミジン；２、４−ジアミノ−５−（３．５−ジプロポキシ−４−Ｎ−ピロ１ノルベンジルピリミジン；２、４−ジアミハＳ−（３．５−ジブトキンー４ーＮーピロ１ノルベンジル）ピリミジン；２、４−ジアミノ−５−（３．５−ジビニル−４−ビニルオ牛ジベンジル）ピリミジン；２、４−ジアミノ−５−［３−（４−Ｎ−アセトアミノフェニル）スルフォンアミノエトキシ−４．５−ジメトキシベンジルコピリミジン；２、４−ジアミノ− ５−［３−（４−アミノフェニル）スルフォンアミノエトキシ−４−メトキシベンジルコピリミジン；２、４−ジアミノ−５−［３−（４−Ｎ−アセトアミノフェニル）スルフォンアミノエトキシ−４−ブロモ−５−メトキシベンジルコピリミジン；２、４−ジアミノ−５−［３−（４−アミノフェニル）スルフォンアミノエトキシ−４−ブロモ−５−メトキシベンジルコピリミジン：２、４−ジアミノ−５−（３−メトキシ−４．５−ジベンジルオキシベンジル）ピリミジン；２、４−ジアミノ−５−（４−ベンジルオキシベンジル）ピリミジン；２、４− ジアミノ−５−（３．　４−ジベンジルオキシ−５−メトキシベンジル）ピリミジン；２、４−ジアミノ−５−（３．４−ジメトキシ−５−ベンジルオキシベンジル）ピリミジン；２、４−ジアミノ−５−［３．５−ジェトキシ−４−（プロペン−２−イル）ベンジルコピリミジン；２、４−ジアミノ−５−［３，Ｓ−ジメトキシ−４−（プロペン−２−イル）ベンジルコピリミジン；２、４−ジアミノ−Ｓ−（３．５−ジメトキシ−４−メチルチオベンジル）ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−（３−メチルスルフィニル−４−メトキシ−５−メチルチオベンジル）ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３−（４，６−ジカルボキシへキシルオキシ）−４− ブロモ−５−メトキシベンジルコピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３−（３−カルボキシメチルアミノ−３−オキソプロポキシ）−４−メトキシベンジルコピリミジン；２．４−ジアミノ−５−（３−［３−（１，３−ジカルボキシプロビル）アミノ−３−オキソプロポキン］−４−ブロモ−５−メトキシベンジル）ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３，５−ジメトキシ−４−（（２−フェニルスルフィニル）アセチル）ベンジルコピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３−アミノ −４−メチル−５−（Ｎ−ピロリル）ベンジルコピリミジン；２．４−ジアミノ−５−（３，５−ジ−Ｎ−ピロリル−４−メトキシベンジル）ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３，５−ジメトキシ−４−（３−ヒドロカルボキシ− １＝オキソプロピルアミノ）ベンジルコピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３，５−ジメトキシ−（４−アセトアミノフェニルスルフォンアミノ）ベンジルコピリミジン；２．４−ジアミノ−５−（３，５−ジメトキシ−４−プロピルベンジル）ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−（３，５−ジクロロ−４−Ｎ−ピロリルベンジル）ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３，５−ジメトキシ−４−（２−（２−（２−メトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシベンジルコピリミジン；２．４−ジアミノ− ５−［３−（３−ベンジルオキシカルボニルメチルアミノ−３−オキソプロポキシ）−４−ブロモ−５−メトキシベンジルコピリミジン；２．４−ジアミノ−５−（３−（３−カルボキシメチルアミノ−３−オキソプロポキシ）−４−ブロモ−５−メトキシベンジルコピリミジン；２．４−ジアミノ −５−［３−メト牛シー４−ブロモ−５−（４−メチルアミノベンズアミドエトキシ）ベンジルコピリミジン；３−（２，４−ジアミノピリミジン−５−イルメチル）−８−（３，５−ジメトキシフェニル）−８−アザビシクロ［３，２，１１オクタン；２Ｈ，３１（−ジヒドロ−５−（２，４−ジアミノピリミジン−５ −イルメチル）−６，７−ジメト牛ジベンゾフラン；５−（２，４−ジアミノピリミジン−５−イルメチル）−７−メドキシー８−ブロモ−１，２−ベンゾピラン；５−（２，４−ジアミノピリミジン−５−イルメチル）−７，８−ジメトキシ− １，２−ベンゾピラン；２．４−ジアミノ−５−（３−フェニルー５−（３−メトキシプロポキシ）ベンジルコピリミジン；２．４−ジアミノ−７−（３，５−ジメトキシベンジル）ピロロ［２，３−ｆ］キナゾリン；２．４−ジアミノ−５−［６−（４−メトキシブトキシ）ナフト−１−イル］ビリ　ミ　ジン　；２．４−ジアミノ−５−（２，７−シメチルベンズビラゾールー５−イルメチル）ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−（４，５，６−ドリメトキシー２．３−ジヒドロインデン−１−イル）ピリミジン；および２．２−ジメチル−５−（２，４−ジアミノピリミジン−５−イルメチル）−７ −メドキシベンズ［ｂ］ジオキソランである。現在量も好ましい化合物は２．４ −ジアミノ−５−（３，５−ジェトキシ−４−Ｎ−ピロリルベンジル）ピリミジンおよび２．４−ジアミノ−５−［３，５−ジメトキシ−４−（２−ヒドロキシプロブ−２−イル）ベンジルコピリミジンである。

投与についての本発明の組成物は、一般に、薬学的に受容され得る賦形剤に加えて式Ｉの化合物の有効量を包含する。

適当な賦形剤は、水、生理食塩液、リンゲル液、ハンクス液、ならびにグルコース、ラクトース、デキストロース、エタノール、グリセロール、アルブミンなどの溶液を包含する経口的または非経口的な投与について容認されたほとんどの担体を包含する。これらの組成物は、安定剤、抗酸化剤、抗菌剤、防腐剤、緩衝剤、界面活性剤および他の補助添加剤を任意に包含し得る。現在好ましい賦形剤は、リン酸緩衝化生理食塩液（ＰＢＳ）巾約１＋ｍｇ／ｍＬの血清アルブミンを包含する。非経口投与についての適当な賦形剤の詳細な論議はＥ、Ｗ、Ｍａｒｔｊｒ＋＋７）　ｒ　Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｊｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓｊ　（Ｍａｃｋ　Ｐｕｂ、　Ｃｏ、、現行版）に見られ得る。

正確な必要量は患者の年齢、大きさおよび状態、治療される病気の性質およびひどさなどで異なる：したがって、正確な有効量はあらかじめ記載し得ない。しかしながら、適切な量は動物モデルを用いた日常の実験により決定し得る。一般の条件では、式■の化合物の有効投与量は約１０μｇ／Ｋｇから約５０ｍｇ／ＫＨの範囲である。適当な動物モデルは下記の実施例で例示されるマウスモデルを包含する。ラットおよび他のげっ書類はヒトの酵素と非常に類似したＤＨＰＲを有し、したがって適当な動物モデルになる。実験動物の１群は１０〜１００ＬＤｓ＠の論ｕｍｏ。５ｔｉｓ　ｃａｒｌｎ　を接種し、続いて試験化合物の溶液で処理する。陰性対照群は未処置のものを置き、一方、陽性対照群はトリメトプリムのような標準治療で処理する。化合物の投与は好ましくは経口（例えば摂餌を使用する）であるが、例えば皮下または筋肉内注射による、あるいはエーロゾルの吸入による非経口であり得る。動物は治療の間モニターされ、感染して６０日後に屠殺されおよび検査される。

虹二（ｉ桝以下に示す実施例は、当業者にさらなる指針を提供し、どの様な方法においても本発明の限定を意図するものではない。

実」１例」− （活性の証明）Ａ、［１緩衝剤を以下のように調製した：４ＸＤＨＦＲ−：　２００ｍＭ　Ｔｅｓ、　３００ｍＭ　ＢＭＥ、　４ｍＭ　ＥＤＴＡＳｐＨ７゜０゜土邸Ｌ」１遍：　２．５ａ＋ｇ／ｍＬ　ＢＳＡ、　０．２５ｍＭ　ＮＡＤＰＨ，６２，５ＨＭジヒドロ葉酸、２．５　Ｘ　ＤＨＦＲＨＦ側。

Ｊ　：　２．５ｍｇ／ｍＬ　ＢＳＡ、　０．２５＋ｎＭ　ＮＡＤＰＨ，２，５Ｘ　ＤＨＦＲ緩衝１聚葭１互：　５０ｍＭ　Ｔｅｓ、　ＳｍＭ　ＤＴＴ、　１＋＊Ｍ　ＥＤＴＡ、　２０％グリセロール、１■ｇ／■Ｌ　ＢＳＡ、　ｐＨ７，０゜ｍ：　５０ｍＭ　Ｔｅ５ｓ　５１１Ｍ　ＤＴＴ％　１■Ｍ　ＥＤＴＡ、　１ｍｇ／ｍＬ　ＢＳＡＳｐＢ７．０゜な吐■：酵素緩衝剤中に５μｇ／■Ｌ　Ｌ」」１■ＤＨＰＲ。

批■ｌ■：酵素緩衝剤中に組紐換えヒトＤＨＰＲ（Ｈｏｆ　ｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅから得た）（総タンノくり質９．９１ｇ／ｓＬ）。

１動」］：酵素緩衝剤中に組紐換えヒトＤＨＰＲ（Ｈｏｆｆ＋＊ａｎｎ−ＬａＲａｃｈｅから得た）（総タン／（り質３．５ｍｇ／ｍＬ）。

試験化合物は調製され、Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅより提供された。

原液を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）　ｌこ２〜８ｍｇ溶解して５０ｍＭ溶液を調製した。５０ｍＭで溶解しな（１化合物（よ、連続的１こ２５．１６．６または１２．５ｓ＋Ｍに希釈した。

Ｂ、７エ皇工８つの化合物（各６．７μＬ）をＦａｌｃｏｎＯの９６−ウェルシミクロ滴定プレートの１カラムのウェルに加え、１６０μＬの水で希釈した。

残りのウェルに水１２６μＬを入れた。その後最初のカラムの溶液を、対照試料を含むカラム１０および水のブランクを含むカラム１１〜１２で、カラム２〜９を連続的（こ希釈した（４×）。最終イし合物濃度は１ｍＭからＩＳｎＭ　（残りの試薬を加えた後）であった。

８−径ピペットを用いて、−ＤＨＦ緩衝剤１００μＬをカラム１１および１２（水のみを含むブランク）の各つｘ）し；こ加えた。次に、＋　ＤＨＦ緩衝剤１００μＬをカラム１〜１０の各ウェル（こ加えた。その後ＰｃＤＢＦＲあるいは粗または精製ｒｈＤＨＦＲ酵素（２５μＬ）を各ウェルに加え、Ｔｉｔｅｒｔｅｋ　５ｈａｋｅｒを用いてプレート内容物を混合した。

このプレートを、３４０ｎｍの吸収、−０，０５０，Ｄ、スケールで、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｄｅｖｉｃｅｓ　Ｐｌａｔｅ　Ｒｅａｄｅｒで、１０秒毎に１０分間読み取った。

速度論的データはＤｅｌｔａ　５ｏｆｔソフトウエア（Ｂｉｏｍｅｔａｌｌ　１ｃｓ）を用いて分析し、ヒトおよびＬカニ１Ｈの両方の酵素に対するＩＣ５１１およびＫｌを計算した。選択性はＫｉｎニド＋／Ｋｌ＋ｐ、ｃａｒ＋ｎ＋＋＋とじて計算した；したがって、より高い値の選択性は、化合物がヒトの酵素よりもより大きい程度でＬ９ＬｌＨの酵素を阻害することを示す。結果を下記の表１に示す。比較のために、本アッセイにおいてトリメトプリムは１ｃ６１Ｉは２０μ Ｍ１選択性は０．１を示す。

（以下余白）表１二式■の化合物Ｒ３Ｒ４Ｒ５工Ｃ５０Ｍ１尺・Ｈｌ −ＯＭｅ　−ＯＭｅ−○（ＣＨ，）、ＮＨ３０，φＮＨＡＣ２，４１ＬＭ　３５０−ＯＭａ　−ＣＭｅ、０１（−ＯＭｅ　２５１ＬＭ３５０−Ｏｎ　ピロリル　 −ＯＥｔ　２．４　１．ＬＭ　３４０−ＯＭａ　ｌｌ：。０　＋）　、Ｌ、　− ＯＭａ　２９　ｊｓｋ４　３０ビニ＋１−　ビ“二１しオキシ　ビ゛ニル　３．４　跡Ｈ２５０１（ＢｚＯ−）ｔ　１６　１．ＬＭ　５０−ＯＭｅ　ＢｚＯ−ＢｚＯ−８，３ｐ　１００−ＯＭｅ−Ｃ（Ｈｅ）１００−Ｏ−ＯＭａ　２４ｐ　１６０−ＯＥｌ６０−０Ｅｔ−Ｃ（、−０Ｅｔ　２．５　ｌＬＭ　１６０−ＯＭｅ　−５Ｍｅ　−ＯＭｅ　１９　μＨ１４５−５Ｍｅ　−ＯＭａ　−５（０）Ｍｅ　１８１ＬＭ　４９０−ＯＭｅ　Ｂｒ　−○（Ｃ）Ｉ２）２Ｃｏ（Ｎ−Ａｓｐ）　２　４　４３００Ｈ−ＯＭｅ　−０（ＣＨ，）、Ｃｏ（Ｎ−Ｇｌｙ）　９．３　１．ＬＭ　８０（以下４？：臼す実施例２上記の実施例１に記載のように続けて、以下に記載した化合物をアッセイし、以下の表■に挙げたように高い活性および選択性を示すことを見いだした：Ａ）　２．４−ジアミノ−５−（４−ベンジルオキシベンジル）ピリミジンＢ）　２．４−ジアミノ−５−（３，４−ジメトキシ−５−ベンジルオキシベンジル）ピリミジン；Ｃ）　２．４−ジアミノ−５−（３，４−ジベンジルオキシ−５−メトキシベンジル）ピリミジン；Ｄ）　２．４−ジアミノ−５−［３，５−ジメトキシ−４−（２−ヒドロキシプロブ−２−イル）ベンジルコピリミジン；Ｅ）　２．４−ジアミノ−５−（３，５−ジメトキシ−４−Ｎ−ピロリルベンジル）ピリミジン；Ｆ）　２．４−ジアミノ−５−（３，５−ジェトキシ−４−Ｎ−ピロリルベンジル）ピリミジン；Ｇ）　２．４−ジアミ／　−５−（３，５−ジビニル−４−ビニルオキシベンジル）ピリミジン；Ｈ）　２．４−ジアミノ−５−［３−（４−Ｎ−アセトアミノフェニル）スルフォンアミノエトキシ−４，５−ジメトキシベンジルコピリミジン；１）　２．４ −ジアミノ−５−［３−（４−アミノフェニル）スルフォンアミノエトキシ−４ −メトキシベンジルコピリミジン；Ｊ）　２．４−ジアミノ−５−［３−＜４− Ｎ−アセトアミノフェニル）スルフォンアミノエトキシ−４−ブロモ−５−メトキシベンジル］ピリミジ［）　２．４−ジアミノ−５−［３−（４−アミノフェニル）スルフォンアミノエトキシ−４−ブロモ−５−メトキシベンジルコピリミジン；Ｌ）　２．４−ジアミノ−５−［３，５−シェド牛シー４−（プロペン− ２−イル）ベンジルコピリミジン：Ｍ）　２．４−ジアミノ−５−［３，５−ジメトキシ−４−（プロペン−２−イル）ベンジルコピリミジン：Ｎ）　２．４−ジアミノ−５−（３，５−ジメトキシ−４−メチルチオベンジル）ピッミジン；０）　２．４−ジアミノ−５−（３−メチルスルフィニル−４−メトキシ−５− メチルチオベンジル）ピリミジン；Ｐ）　２．４−ジアミノ−５−［３−（４，６−ジカルボキシへキシルオキシ） −４−ブロモ−５−メトキンベンジルコピリミジン；Ｑ）　２．４−ジアミノ− ５−［３−（３−カルボキシメチルアミノ−３−オキソプロポキシ）−４−メトキシベンジルコピリミジン；Ｒ）　２．４−ジアミノ−５−（３−［３−（１，３−ジカルボキシプロビル）アミノ−３−オキソプロポキシ］−４−ブロモ−５ −メトキシベンジル）ピリミジン；Ｓ）　２．４−ジアミノ−５−［３，５−ジメトキシ−４−（（２−フェニルスルフォニル）アセチル）ベンジルコピリミジン；Ｔ）　２．４−ジアミノ−５− ［３−アミノ−４−メチル−５−（Ｎ−ピロリル）ベンジルコピリミジン；Ｕ）　２．４−ジアミノ−５−（３，５−ジ−Ｎ−ピロリル−４−メトキシベンジル）ピリミジン；Ｖ）　２．４−ジアミノ−５−［３，５−ジメトキシ−４−（３−ヒドロカルボキシ−１−オキソプロピルアミノ）ベンジルコピリミジン；Ｗ）　２．４−ジアミノ−５−［３，５−ジメトキシ−（４−アセトアミノフェニルスルフォンアミノ）ベンジルコピリミジン；Ｘ）　２．４−ジアミノ−５−（３，５−ジメトキシ−４−プロピルベンジル）ピッミジン；Ｙ）　２．４−ジアミノ−５−（３，５−ジクロロ−４−トビロリルベンジル）ピリミジン；Ｚ）　２．４−ジアミノ−５−［３，５−ジメト牛シー４−（２−（２−（２− メトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシベンジルコピリミジン；ＡＡ）　２．４−ジアミノ−５−［３−（３−ベンジルオキシカルボニルメチルアミノ−３− オキソプロポキシ）−４−ブロモ−５−メトキシベンジルコピリミジン；ＢＢ）　２．４−ジアミノ−５−［３−（３−カルボキシメチルアミノ−３−オキソプロポキシ）−４−ブロモ−５−メトキシベンジルコピリミジン；ＣＣ）　２．４−ジアミノ−５−［３−メトキシ−４−ブロモ−５−（４−メチルアミノベンズアミドエトキシ）ベンジルコピリミジン；ＤＤ）　３−（２，４−ジアミノピリミジン−５−イルメチル）−８−（３，５−ジメトキシフェニル）−８− アザビシクロ［３，２，１１オクタン；ＥＥ）　２Ｈ，３Ｈ−ジヒドロ−５−（２，４−ジアミノピリミジン−５−イルメチル）−６，７−シメトキシベンゾフラン；ＦＦ）　５−（２，４−ジアミノピリミジン−５−イルメチル）−７−メドキシー８−ブロモ−１，２−ベンゾピラン；ＧＧ）　５−（２，４−ジアミノピリミジン−５−イルメチル）−７，８−ジメトキ７−１．２−ベンゾビラン；Ｈ）　２．４−ジアミノ−５−［３−フェニル−５−（３−メトキシプロポキシ）ベンジルコピリミジン；！＋）　２．４−ジアミノ−？−（３，５−ジメトキシベンジル）ピロロ［２，３−（］キナゾリン；ＪＪ）　２．４−ジアミノ−５−［６−（４−メトキシブトキシ）ナフト−１− イル］ピリミジン；ＩＨ）　２．４−ジアミノ−５−（４，５，６−トリメトキシ−２，３−ジヒドロインデン−１−イル）ピリミジン；ＬＬ＞　２．２−ジメチル−５−（２，４−ジアミノピリミジン−５−イルメチル）−７−メドキシベンズ［ｂｌジオキソラン；ＭＭ）　２゜４−ジアミノ−５ −（３，Ｓ−ジェトキシ−４−カルボエトキシベンジル）ピリミジン；およびＮＮ）　２．４−ジアミノ−５−（２，７−シメチルベンズビラ・／−ル−５− イルメチル）ピリミジンである。

（以下余白）表　ｍ国際調査報告フロントページの続き（８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＮＬ、ＳＥ）、ＡＴ、ＣＡ、ＪＰ（７２）発明者　マーロウ、チャールズ　ケイ。

アメリカ合衆国　カリフォルニア　９４１３１サンフランシスコ、エイス　アベニュー

Claims

【特許請求の範囲】１．哺乳類における菌の感染の治療の方法であって、菌の病原体で感染された哺乳類に、下式Ｉの化合物およびそれらの低級アルキルエーテル類、アミド類ならびに薬学的に受容され得る付加の塩類の有効量を投与することを包含する、方法： ▲数式、化学式、表等があります▼ ここで、Ｒ１は３−Ｒ３−４−Ｒ４−５−Ｒ５−ベンジルまたは（Ｎ−Ｒ６）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イルであり；そしてＲ２はＨであるか；またはＲ１とＲ２とが共に▲数式、化学式、表等があります▼を形成し；ここでＲ３およびＲ５は独立してＨ、低級アルコキシ、低級アルキルチオ、低級アルキルスルフィニル、ビニル、カルボキシ−低級アルキル、カルボキシ−低級アルコキシ、ジカルボキシ−低級アルキル、ジカルボキシ−低級アルコキシ、アリール− 低級アルコキシ、アリールスルホニル−低級アルコキシ、アリールスルファミド −低級アルコキシおよび式−Ｏ（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＲ８（ここでｎはＯから６の整数でありＲ８は１つのアミノ酸である）の基、からなる群から選択され；Ｒ４は低級アルコキシ、アリール−低級アルコキシ、低級アルキルチオ、ハロ、低級アルケニル、低級アルケニルオキシおよびピロリルからなる群から選択され；ただしＲ３、Ｒ４およびＲ５は同時にメトキシではなく；Ｒ６は非置換アリール、ならびにハロ、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルキルチオ、カルボキシ、カルバミド、カルボキシ−低級アルキルおよびカルバミド−低級アルキルからなる群から選択される１個から３個の基で置換されたアリールからなる群から選択され；そしてＲ７はアリールおよびアリール−低級アルキルからなる群から選択され、ここでアリールはハロ、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルキルチオ、カルボキシ、カルバミド、カルポキシ−低級アルキルおよびカルバミド−低級アルキルからなる群から選択される１個から３個の基で置換されてもよい。２．Ｒ２がＨであり、そしてＲ１が３−Ｒ３−４−Ｒ４−５−Ｒ５−ベンジルである、請求項１に記載の方法。３．Ｒ３がメトキシである、請求項２に記載の方法。４．Ｒ４がプロモである、請求項３に記載の方法。５．Ｒ５が−Ｏ（ＣＨ２）２ＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）２ＣＯＯＨあるいは薬学的に受容され得るそのモノ−またはジエステルである、請求項４に記載の方法。６．Ｒ５が−Ｏ（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＲ８である、請求項４に記載の方法。７．ｎが２であり、およびＲ８が−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨあるいはそのモノ−またはジ−エステルである、請求項６に記載の方法。８．ｎが２であり、そしてＲ８が−ＮＨＣＨ２ＣＯＯＨあるいはそのエステルである、請求項６に記載の方法。９．Ｒ５がメトキシである、請求項３に記載の方法。１０．Ｒ４が２−ヒドロキシプロプ−２−イルである、請求項９に記載の方法。１１．Ｒ４がプロペン−２−イルである、請求項９に記載の方法。１２．Ｒ４がＮ−ピロリルである、請求項９に記載の方法。１３．Ｒ４がメチルチオである、請求項９に記載の方法。１４．Ｒ４がベンジルオキシである、請求項３に記載の方法。１５．Ｒ５がベンジルオキシである、請求項１４に記載の方法。１６．Ｒ４がメトキシであり、そしてＲ５が一ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＳ０２（Ｃ６Ｈ６）ＮＨＣＯＣＨ３である、請求項３に記載の方法。１７．Ｒ３がＨである、請求項２に記載の方法。１８．Ｒ４がメトキシである、請求項９に記載の方法。１９．請求項１０に記載の方法であって、Ｒ５が−Ｏ（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＲ８であり、ここでｎが２であり、そしてＲ８が−ＮＨＣＨ２ＣＯＯＨまたはそのエステルである、方法。２０．Ｒ４がベンジルオキシであり、そしてＲ５がＨである、請求項９に記載の方法。２１．Ｒ３およびＲ５がそれぞれエトキシである、請求項２に記載の方法。２２．Ｒ４がピロリルである、請求項２１に記載の方法。２３．Ｒ４がプロベン−２−イルである、請求項２１に記載の方法。２４．Ｒ３およびＲ５がそれぞれビニルである、請求項２に記載の方法。２５．Ｒ３がメチルチオであり、Ｒ４がメトキシであり、そしてＲ５がメチルスルフィニルである、請求項２に記載の方法。２６．Ｒ２がＨであり、そしてＲ１が（Ｎ−Ｒ６）−８−アザビシクロ［３．２１］オクト−３−イルである、請求項１に記載の方法。２７．請求項２６に記載の方法であって、Ｒ６が、２−ナフチル、３．５−ジメトキシフェニルおよび４−カルボエトキシフェニルからなる群から選択される、方法。２８．Ｒ１とＲ２とが共に▲数式、化学式、表等があります▼を形成する、請求項１に記載の方法。２９．Ｒ７がベンジルである、請求項２８に記載の方法。３０．Ｒ７が３．５−ジメトキシフェニルである、請求項２８に記載の方法。３１．Ｒ３およびＲ５がプロポキシであり、そしてＲ４がＮ−ピロリルである、請求項２に記載の方法。３２．前記菌の病原体がＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓｃａｒｉｎｉｉである、請求項１に記載の方法。３ａ．ジヒドロプテロイン酸シンターゼ阻害剤を共投与することをさらに包含する、請求項１に記載の方法。３４．前記ジヒドロプテロイン酸シンターゼ阻害剤がダプソーンおよびスルファ剤からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。３５．請求項１に記載の方法であって、前記式Ｉの化合物が、２．４−ジアミノ −５−（４−ベンジルオキシベンジル）ピリミジン；２．４−ジァミノ−５−（３．４−ジメトキシ−５−ベンジルオキシペンジル）ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−（３．４−ジべンジルオキシ−５−メトキシベンジル）ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３．５−ジメトキシ−４−（２−ヒドロキシプロプ− ２−イル）ベンジル］ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−（３．５−ジメトキシ−４−Ｎ−ピロリルベンジル）ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−（３．５ −ジエトキシ−４−Ｎ−ピロリルベンジル）ピリミジン；２．４−ジアミノ−５ −（３．５−ジビニル−４−ビニルオキシベンジル）ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３−（４−Ｎ−アセトアミノフェニル）スルフォンアミノエトキシ −４．５−ジメトキシベンジル］ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３−（４−アミノフェニル）スルフォンアミノエトキシ−４−メトキシベンジル］ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３−（４−Ｎ−アセトアミノフエニル）スルフォンアミノエトキシ−４−プロモ−５−メトキシベンジル］ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３−（４−アミノフェニル）スルフォンアミノエトキシ− ４−プロモ−５−メトキシベンジル］ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３．５−ジエトキシ−４−（プロベン−２−イル）ベンジル］ピリミジン；２．４ −ジアミノ−５−［３．５−ジメトキシ−４−（プロベン−２−イル）ベンジル］ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−（３．５−ジメトキシ−４−メチルチオベンジル）ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−（３−メチルスルフィニル−４ −メトキシ−５−メチルチオベンジル）ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３−（４．６−ジカルボキシヘキシルオキシ）−４−プロモ−５−メトキシペンジル］ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３−（３−カルボキシメチルアミノ−３−オキソプロポキシ）−４−メトキシベンジル］ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−（３−［３−（１．３−ジカルボキシプロピル）アミノ−３−オキソプロポキシ］−４−プロモ−５−メトキシベンジル）ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３．５−ジメトキシ−４−（（２−フェニルスルフォニル）アセチル）ペンジル］ピリミジン；２．４−ジアミノ−ト［３−アミノ−４−メチル −５−（Ｎ−ピロリル）ベンジル］ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−（３．５−ジ−Ｎ−ピロリル−４−メトキシベンジル）ピリミジン；２．４−ジアミノ −５−［３．５−ジメトキシ−４−（３−ヒドロカルボキシ−１−オキソプロピルアミノ）ベンジル］ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３．５−ジメトキシ−（４−アセトアミノフェニルスルフォンアミノ）ベンジル］ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−（３．５−ジメトキシ−４−プロピルベンジル）ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−（３．５−ジクロロ−４−Ｎ−ピロリルベンジル）ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３．５−ジメトキシ−４−（２−（２− （２−メトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシペンジル〕ピリミジン；２．４ −ジアミノ−５−［３−（３−ベンジルオキシカルボニルメチルアミノ−３−オキソプロポキシ）−４−プロモー５−メトキシベンジル］ピリミジン；２．４− ジアミノ−５−［３−（３−カルポキシメチルアミノ−３−オキソプロポキシ） −４−プロモ−５−メトキシベンジル］ピリミジン；２．４−ジアミノ−５−［３−メトキシ−４−ブロモ−５−（４−メチルアミノベンズアミドエトキシ）ベンジル］ピリミジン；３−（２．４−ジアミノピリミジン−５−イルメチル）− ８−（３．５−ジメトキシフエニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン；２Ｈ．３Ｈ−ジヒドロ−５−（２．４−ジアミノピリミジン−５−イルメチル）−６．７−ジメトキシベンゾフラン；５−（２．４−ジアミノピリミジン− ５−イルメチル）−７−メトキシ−８−プロモー１．２−ベンゾピラン；５−（２．４−ジアミノピリミジン−５−イルメチル）−７．８−ジメトキシ−１．２ −ベンゾピラン；２．４−ジアミノ−５−［３−フェニル−５−（３−メトキシプロポキシ）ベンジル］ピリミジン；２．４−ジアミノ−７−（３．５−ジメトキシベンジル）ピロロ［２．３−ｆ］キナゾリン；２．４−ジアミノ−５−［６ −（４−メトキシブトキシ）ナフト−１−イル］ピリミジン；２．４−ジアミノ −５−（４．５．６−トリメトキシ−２．３−ジヒドロインデン−１−イル）ピリミジン；２．２−ジメチル−５−（２．４−ジアミノピリミジン−５−イルメチル）−７−メトキシベンズ［ｂ］ジオキンラン；２．４−ジアミノ−５−（３．５−ジエトキシ−４−カルボエトキシベンジル）ピリミジン；および２．４− ジアミノ−５−（２．７−ジメチルベンズピラゾール−５−イルメチル）ピリミジンからなる群から選択される、方法。