JPH09505288A

JPH09505288A - 酸化窒素合成の誘導をブロックするためのテトラヒドロビオプテリンのブロッキング誘導

Info

Publication number: JPH09505288A
Application number: JP7514434A
Authority: JP
Inventors: グロス、スティーブン・エス
Original assignee: コーネル・リサーチ・ファウンデーション・インコーポレイテッド
Priority date: 1993-11-15
Filing date: 1994-11-08
Publication date: 1997-05-27
Also published as: EP0729355A4; WO1995013803A1; US6153615A; CA2176143A1; US5877176A; US5880124A; EP0729355A1; AU1038595A; EP1477165A2

Abstract

(57)【要約】グアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニストおよび／またはプテリン再利用経路テトラヒドロビオプテリン合成アゴニストを、そのような阻害を必要とする対象に投与して、（例えば、エンドトキシンまたはサイトカイン誘導化低血圧に対する予防または治療作用、またはかかる低血圧の処置における昇圧剤に対する血管収縮感受性の回復のため）血管細胞においてアルギニンからの酸化窒素合成を阻害する。テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニストは、α₁−アドレナリン作動性アゴニストと共に、または酸化窒素シンターゼ阻害因子と共に投与できる。テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニストはまた、免疫細胞における誘導化酸化窒素産生により引き起こされる炎症を減弱するためにも、投与する。望ましくない逆効果佐用または副作用は、更にレボドーパを、カルビドーパと共にまたはカルビドーパなしで、およびＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを、それぞれ投与することにより排除または緩和できる。

Description

【発明の詳細な説明】酸化窒素合成の誘導をブロックするためのテトラヒドロビオプテリンのブロッキング誘導本発明は、ナショナル・インスティチュート・オブ・ヘルス（National Insti tute of Health）からの援助ＨＬ４６４０３に基づく政府の支持によりその少なくとも一部が行われた。関連出願の相互参照本願は、１９９１年１２月２６日出願のＵＳ第０７／８１３,５０７号の継続出願である１９９３年５月２０日出願のＵＳ第０８／０６３,０６７号の一部継続出願である。技術分野本発明は、細菌エンドトキシンおよびサイトカインによる生物学的システムにおける酸化窒素（nitric oxide）生成の誘導を阻害する方法に関する。発明の背景数十年間、ニトログリセリンは、心臓血管系疾患の治療における血管拡張剤としてヒトに投与されてきた。最近、そのように投与されたニトログリセリンが、体内で、薬理学的に活性のある代謝物である酸化窒素に変換されることが示された。さらに最近になって、酸化窒素は、血管内皮由来の弛緩因子（ＥＤＲＦｓ）の重要成分である通常の代謝物としてのアルギニンから酵素的に形成されることが示された。ＥＤＲＦｓは、血流および血管抵抗の調節に関与するものとして現在熱心に研究されている。血管内皮のほかに、マクロファージも、その細胞殺傷および／または細胞増殖抑制機能を行う成分である酸化窒素を体内で産生することが示されている。アルギニンから酸化窒素を生成する酵素、すなわち酸化窒素シンターゼは２種の異なるタイプ、すなわち、構成性形態群および誘導性形態として存在することが確認されている。構成性形態群は通常の血管内皮細胞、ある種のニューロンおよびいくつかの他の組織に存在する。血管内皮細胞における構成性形態群による酸化窒素の生成は、正常な血圧調節において役割を果たしていると考えられている。酸化窒素シンターゼの誘導性形態は、活性化されたマクロファージに存在し、血管内皮細胞および血管細胞において、例えば、種々のサイトカインおよび／または微生物生産物により誘導されることが見いだされた。敗血症またはサイトカインにより誘導されるショックにおいて、酸化窒素シンターゼの誘導性形態による酸化窒素の過剰産生は、生命を脅かす低血圧において重要な役割を果たすと考えられている。さらにそのうえ、誘導性形態の酸化窒素シンターゼによる酸化窒素の過剰産生は、患者における敗血症またはサイトカインにより誘導されるショックの治療に用いられるα₁−アドレナリン作動性アゴニストのような昇圧剤に対する無応答の元であると考えられている。そのうえ、誘導性形態の酸化窒素シンターゼによる酸化窒素の過剰産生は、免疫応答に対する炎症の発生に関与していると考えられている。酸化窒素合成活性の阻害剤を発見するためにかなりの努力が行われてきた。本明細書記載の研究以前に、酸化窒素シンターゼ活性を阻害するアルギニンアンタゴニストの発見に該研究努力が向けられていた。この目的のためのアルギニンアンタゴニストの使用に伴う問題は、かくして発見されたアンタゴニストが誘導性酸化窒素シンターゼ活性のみならず構成性酸化窒素シンターゼ活性をもブロックするということ、および、誘導性酸化窒素シンターゼ活性に対する特定のアルギニンアンタゴニストのいずれの阻害特異性も、低血圧を引き起こす病因となる酸化窒素過剰産生（誘導酵素によるプロセス）を治療的に十分な程度ブロックし（すなわち、通常は敗血症またはサイトカインにより誘導されるショックにおいて生じる臨床的に重大な低血圧を回避する、あるいは昇圧剤感受性を回復させる）、同時に神経機能および正常な血圧調節において役割を果たしていると考えられる病理学的な酸化窒素合成（構成酵素によるプロセス）を阻害せず、それにより病理学的酸化窒素合成の妨害に関連した毒性（例えば、神経毒性および高血圧）を回避するほどには高くないということである。発明の概要本発明は、アルギニンアンタゴニストに主として依存するのではなく、病理学的（構成酵素による）酸化窒素産生に対する阻害作用が減少したサイトカインおよび／または微生物生産物（例えば、細菌エンドトキシン）により酸化窒素合成の誘導を選択的にブロックする新規アプローチを採用するものである。本発明は、テトラヒドロビオプテリンが酸化窒素合成の誘導におけるコファクターであるという最近の知見（ノーン，Ｎ.Ｃ.等、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、第２６４巻：２０４９６〜２０５０１頁、１９８９年、およびタイエー，Ｍ.Ａ.等、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、第２６４巻：１９６５４〜１９６５８頁、１９８９年）に基づく。本発明はまた、サイトカイン、例えば、ガンマーインターフェロンをはじめとするインターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１、およびインターロイキン−２は、様々な細胞におけるテトラヒドロビオプテリンレベルを顕著に増大することが分かったという知見（ワーナー，Ｅ．等、バイオケミカル・ジャーナル、２６２巻：８６１〜８６６頁、１９８９年；カーラー，Ｆ.等、エクスペリメンタル・セル・リサーチ、１８９巻、１５１〜１５６頁、１９９０年；ツィーグラー，Ｉ.等、ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、２６５巻、２８号、１７０２６〜１７０３０頁、１０／０５／９０）、テトラヒドロビオプテリン合成が、細菌エンドトキシン類により誘導されるという本発明途上における知見、テトラヒドロビオプテリン合成が、グアノシントリホスフェート経路を介し、さらにプテリン再利用経路を介して起こるという知見（ニコル，Ｃ.等、アナリティカル・レビュー・オブ・バイオケミストリー、５４巻、７２９〜７６４頁、１９８５年；ミルステイン，Ｓ.等、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ、１２８巻、３号、１０９９〜１１０７頁、１９８５年；カウフマン，Ｓ.等、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、２３４巻、２６８３〜２６８８頁、１０／５９；カウフマン，Ｓ.、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、２４２巻、３９３４〜３９４３頁、９／１０／６７）、および、グアノシントリホスフェート経路またはプテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリンの連続産生は、構成性酸化窒素シンターゼ活性を少なくともある一定時間維持することを必要としないという本発明途上における知見に基づく。ここで、グアノシントリホスフェート経路および／またはプテリン再利用経路を介して血管細胞中でテトラヒドロビオプテリンの合成を阻害することにより、細菌エンドトキシン類およびサイトカイン類による該細胞中での酸化窒素合成を選択的に阻害すること、即ち、病理学的構成酵素−媒介酸化窒素合成に影響を与えることなく、かかる阻害を行うことが見い出された。本発明に従う、平滑筋細胞中での酸化窒素合成の阻害は、“正常”である、即ち、酸化窒素合成の場合には誘導されないマクロファージ類が、既に最大速度の酸化窒素合成に十分なテトラヒドロビオプテリンを含有していること（ノーン，Ｎ.Ｃ.等、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、２６４巻：２０４９６〜２５０１頁、１９８９年参照）が示されていることから、予想外の結果である。第一の実施態様では、本発明は、酸化窒素合成の阻害を必要とする対象の血管細胞中においてアルギニンから誘導される酸化窒素合成を阻害する方法（例えば、全身低血圧の予防または治療の場合、またはα₁−アドレナリン作動性剤のような昇圧剤の作用に対する血管収縮感受性を回復する）に関し、該方法は、対象に、(ａ)プテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質ではない、少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、または(ｂ)少なくとも一つのプテリン再利用経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、または(ａ)および(ｂ)の両方を、それぞれ酸化窒素合成を阻害する治療上有効量投与することを含んでなる。第二の実施態様では、本発明は、酸化窒素合成の阻害を必要とする対象の血管細胞中においてアルギニンから誘導される酸化窒素合成を阻害する方法（例えば、全身低血圧の予防または治療の場合、またはα₁−アドレナリン作動性剤のような昇圧剤の作用に対する血管収縮感受性を回復する）に関し、該方法は、対象に、プテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質である還元プテリンである、少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、および少なくとも一つのプテリン再利用経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニストを、それぞれ酸化窒素合成を阻害する治療上有効量投与することを含んでなる。各実施態様の特徴は、サイトカイン類、例えば、ガンマ−インターフェロンをはじめとするインターフェロン類、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１、インターロイキン−２での治療、例えば、腫瘍壊死因子またはインターロイキン−２による化学療法処置、により誘導される酸化窒素の産生により生じる全身低血圧に対する対象の予防または治療に関し、該方法は、該テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト（類）の治療上有効量をかかる全身低血圧を発症する可能性のある、または有する対象に投与することを含む。各実施態様の更なる特徴は、例えば、免疫抑制治療から生じる、細菌感染由来のエンドトキシンまたは他の細菌毒素により誘導される酸化窒素の産生により生じる全身低血圧に対する対象の予防または治療に関し、該方法は、該テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト（類）の治療上有効量をかかる全身低血圧を発症する可能性のある、または有する対象に投与することを含む。各実施態様の更なる特徴は、サイトカイン類、例えば、ガンマ−インターフェロンをはじめとするインターフェロン類、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１またはインターロイキン−２での治療、例えば、腫瘍壊死因子またはインターロイキン−２による化学療法処置、により誘導される酸化窒素の産生により引き起こされる全身低血圧に対する対象の予防または治療に関し、該方法は、該対象に、治療上有効用量のα₁−アドレナリン作動性アゴニストなどの昇圧剤、例えば、フェニレフリン、エピネフリン、ノルエピネフリン、ドーパミン、メタラミノール、メトキサミン、エフェドリン、またはメフェンテルミン、および、該昇圧剤の作用に対する血管感受性を回復する（即ち、α₁−アドレナリン作動性アンタゴニストの効力を増大および／または延長する）量の該テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト(類)、をそれぞれ投与することを含む。また、各実施態様の更なる特徴は、例えば、免疫抑制治療から生じる、細菌感染由来のエンドトキシンまたは他の細菌毒素により誘導される酸化窒素の産生により生じる全身低血圧に対する対象の予防または治療に関し、該方法は、かかる全身低血圧を発症する可能性のある、または発症している対象に、治療上有効量（即ち、血圧を増大する量）のα₁−アドレナリン作動性アゴニストなどの昇圧剤、例えば、フェニレフリン、エピネフリン、ノルエピネフリン、ドーパミン、メタラミノール、メトキサミン、エフェドリン、またはメフェンテルミン、および該昇圧剤の作用に対する血管感受性を回復する（即ち、α₁−アドレナリン作動性アンタゴニストの効力を増大および／または延長する）量の該テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト(類)、を投与することを含む。また、各実施態様の更なる特徴は、サイトカイン類、例えば、ガンマ−インターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１またはインターロイキン−２での治療、例えば、腫瘍壊死因子またはインターロイキン−２による化学療法処置、により誘導される血管細胞中の酸化窒素の産生により生じる全身低血圧に対する対象の予防または治療に関し、該方法は、かかる全身低血圧を発症する可能性のある、または発症している対象に、治療上有効量（即ち、酸化窒素産生制限量、即ち、血圧上昇量）の該テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト(類) 、および、治療上有効量（即ち、酸化窒素産生制限量、即ち、血圧上昇量）の酸化窒素合成阻害因子、例えば、Ｎ^G−メチル−Ｌ−アルギニン、Ｎ^G−アミノ−Ｌ −アルギニン、Ｎ^G−ニトロ−Ｌ−アルギニン、Ｎ^G−ニトロ−Ｌ−アルギニンメチルエステル、Ｎ^δ−イミノメチル−Ｌ−オルニチン、またはカナバニンを含む、アルギニンまたはシトルリン類似体、を投与することにより、血管細胞中の酸化窒素産生を阻害することを含む。また、各実施態様の更なる特徴は、例えば、免疫抑制治療から生じる、細菌感染由来のエンドトキシンまたは他の細菌毒素により誘導される血管細胞中の酸化窒素の産生により生じる全身低血圧に対する対象の予防または治療に関し、該方法は、かかる全身低血圧を発症する可能性のある、または発症している対象に、治療上有効量（即ち、酸化窒素産生制限量、即ち、血圧上昇量）の該テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト（類）、および、治療上有効量（即ち、酸化窒素産生制限量、即ち、血圧上昇量）の酸化窒素合成阻害因子、例えば、Ｎ^G− メチル−Ｌ−アルギニン、Ｎ^G−アミノ−Ｌ−アルギニン、Ｎ^G−ニトロ−Ｌ−アルギニン、Ｎ^G−ニトロ−Ｌ−アルギニンメチルエステル、Ｎ^δ−イミノメチル −Ｌ−オルニチン、またはカナバニンを含む、アルギニンまたはシトルリン類似体、を投与することにより、血管細胞中の酸化窒素産生を阻害することを含む。異なる実施態様は、免疫学的に誘導される酸化窒素産生により生じる、慢性関節リウマチをはじめとする自己免疫症状、および宿主防御免疫機構、例えば、同種移植片拒絶反応、に由来する炎症、例えば、接触皮膚炎を含む非急性アレルギー反応より生じる炎症に対する対象の予防または処置に関し、該方法は、かかる炎症を発症する可能性のある、または発症している対象に、(ａ)プテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質ではない、少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、または(ｂ)少なくとも一つのジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子の酸化窒素合成阻害治療上有効（炎症減弱）量を投与することにより、該酸化窒素産生を阻害することを含む。その他の異なる実施態様は、免疫学的に誘導される酸化窒素産生により生じる、慢性関節リウマチをはじめとする自己免疫症状、および宿主防御免疫機構、例えば、同種移植片拒絶反応、に由来する炎症、例えば、接触皮膚炎を含む非急性アレルギー反応より生じる炎症に対する対象の予防または処置に関し、該方法は、かかる炎症を発症する可能性のある、または発症している対象に、プテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質である還元プテリンである、少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、および少なくとも一つのジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子の酸化窒素合成を阻害する治療上有効（炎症減弱）量を投与することにより、該酸化窒素産生を阻害することを含む。上記全ての方法は、該対象に、カテコールアミン置換性非毒性量のレボドーパを、カルビドーパと共にまたはカルビドーパなしで、およびセロトニン置換性非毒性量のＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを投与し、テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニストを投与することによって生ずる、対象中のレボドーパおよびセロトニンの消耗に適応するという改良も含む。 “対象”という用語は、本明細書では、アルギニンからの酸化窒素産生が起こる、ヒトを含むあらゆる哺乳類を意味するものとして使用する。本明細書では対象への使用方法は、予防的使用、並びに、存在する症状の治療における治癒的使用を意図する。グアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニストとプテリン再利用経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニストの組み合わせを用いる場合、それぞれの使用量は、その組み合わせがアルギニンから誘導される酸化窒素合成を阻害する量であるべきである。テトラヒドロビオプテリン合成の場合のグアノシントリホスフェート経路（テトラヒドロビオプテリン経路として引用されることもある）は、ニコール，Ｃ．等、アナリティカル・レビュー・オブ・バイオケミストリー、５４巻、７２９〜７６４頁、１９８５年に記載されている。それは下記を含むと考えられる：グアノシントリホスフェートを、グアノシントリホスフェートシクロヒドロラーゼＩ（ＧＴＰＣＨＩ；ＥＣ３.５.４.１６）により触媒される反応において、ジヒドロネオプテリントリホスフェートに変換する。第２の工程において、ジヒドロネオプテリンを、６−ピルボイルテトラヒドロビオプテリン合成により触媒される反応における、不安定な中間体に変換する。第３および第４の工程においては、この不安定な中間体を、セピアプテリンレダクターゼおよび別の使用可能な酵素により媒介される反応で、テトラヒドロビオプテリンに還元する。ＧＴＰＣＨＩは、誘導化グアノシントリホスフェート経路に対する律速酵素である。テトラヒドロビオプテリン合成の場合のプテリン再利用経路（ジヒドロプテリン経路として引用されることもある）は、ニコール，Ｃ.等、アナリティカル・レビュー・オブ・バイオケミストリー、５４巻、７２９〜７６４頁、１９８５年に記載されている。プテリン再利用経路の最終工程は、ジヒドロホレートレダクターゼにより触媒される反応で、ジヒドロビオプテリンをテトラヒドロビオプテリンに変換するものである。以下、ＬＰＳは、細菌リポポリサッカライドを意味するものとして使用し、ＩＦＮは、ガンマ−インターフェロンを意味するものとして使用し、ＤＡＨＰは、２,４−ジアミノ−６−ヒドロキシピリミジンを意味するものとして使用し、ＭＴＸは、メトトレキセートを意味するものとして使用し、さらに、ＳＥＰは、セピアプテリンを意味するものとして使用する。図面の簡単な説明図１の挿入図部分は、細菌リポポリサッカライド／ガンマ−インターフェロンにより誘導されるラット大動脈平滑筋細胞の細胞培養培地中の、ＤＡＨＰ（２, ４−ジアミノ−６−ヒドロキシピリミジン）による２４時間の亜硝酸塩（ニトライト）蓄積の阻害に対する濃度−応答関係を表すグラフであり、実施例Ｉの結果を示すものである。図１の主要部分は、ＤＡＨＰ（２,４−ジアミノ−６−ヒドロキシピリジン）、ＳＥＰ（セピアプテリン）、およびＭＴＸ（メトトレキセート）を含む添加物を添加した際の、ＬＰＳ（細菌リポポリサッカライド）およびガンマ−インターフェロンに対する応答における亜硝酸塩合成の時間経過を表したものであり、実施例IIの結果を示す。図２の左側部は、細菌リポポリサッカライドおよびガンマ−インターフェロンに対するラット大動脈平滑筋細胞の亜硝酸塩産生応答が、セピアプテリン単独（対照）により、およびメトトレキセート存在下のセピアプテリンにより、双方どのように影響されるかを表しており、実施例IIIの結果を示す。図２の右側部分は、細菌リポポリサッカライドおよびガンマ−インターフェロンに対する亜硝酸塩産生応答が、メトトレキセート単独（対照）により、およびセピアプテリン存在下のメトトレキセートにより、双方どのように影響されるかを表しており、実施例ＩＶの結果を示す。図３は、ラット大動脈平滑筋細胞のＬＰＳ（細菌リポポリサッカライド）およびＩＦＮ（ガンマ−インターフェロン）誘導化亜硝酸塩合成の時間経過、およびそれが、ＳＥＰ（セピアプテリン）単独により、およびＭＴＸ（メトトレキセート）存在下のＳＥＰにより、双方どのように影響されるかを表しており、実施例Ｖの結果を示す。図４は、細菌リポポリサッカライドおよびガンマ−インターフェロンに対するラット大動脈平滑筋細胞の亜硝酸産生応答が、Ｎ−アセチルセロトニン単独（対照）により、およびＭＴＸ(メトトレキセート)存在下のＮ−アセチルセロトニンにより、双方どのように影響されるかを表しており、実施例ＶIIの結果を示す。図５は、基底条件下の、またＬＰＳ（細菌リポポリサッカライド）、ＩＦＮ（ガンマ−インターフェロン）、およびＤＡＨＰ（２,４−ジアミノ−６−ヒドロキシピリミジン）を含む様々な添加物で１２時間処置後の、平滑筋細胞のビオプテリン含量を表しており、実施例ＶIIIの結果を示す。図６は、ラットにおける血漿ビオプテリンレベル、およびそれらが、ＤＡＨＰ（２,４−ジアミノ−６−ヒドロキシピリミジン）およびＬＰＳ（細菌リポポリサッカライド）を含む薬剤によりどのように影響されるかを表しており、実施例 IＸの結果を示す。誤差バーの上のアスタリスクは、ステューデントＴ検定により測定したｐ＜０.０１を有する、統計的に（対照と比較して）有意なビオプテリン減少を示している。図７は、ラットにおける血漿硝酸塩／亜硝酸塩レベル、およびそれらが、ＬＰＳ（細菌リポポリサッカライド）、ＭＴＸ（メトトレキセート）、およびＤＡＨＰ（２,４−ジアミノ−６−ヒドロキシピリミジン）を含む薬剤によりどのように影響されるかを表しており、実施例Ｘの結果を示す。かっこ内の数字は、測定用ラットの数を示す。図８は、ＬＰＳ（細菌リポポリサッカライド）、ＭＴＸ（メトトレキセート）、およびＤＡＨＰ（２,４−ジアミノ−６−ヒドロキシピリミジン）を含む薬剤で前処理したラットから調製した単離大動脈輪のフェニレフリン誘導化収縮応答を表しており、実施例ＸIの結果を示す。図９は、セピアプテリンで処理前（対照）および処理後の、単離したラット大動脈輪のＡＣh（アセチルコリン）に対する血管拡張応答を表す。全ての図において、データ記号およびバーは、平均値であり、誤差バーは、平均の標準誤差である。発明の詳細な説明上記第一の実施態様によると、プテリン再利用経路の基質ではないグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト類は、グアノシントリホスフェートシクロヒドロラーゼＩ阻害因子類、６−ピルボイルテトラヒドロビオプテリンシンターゼ阻害因子類、およびセピアプテリンレダクターゼ阻害因子類からなる群から選択される因子類を含む。グアノシントリホスフェートシクロヒドロラーゼＩ阻害因子には、例えば、置換ピリミジン類、酸化プテリン類、およびプテリン再利用経路の基質ではない還元プテリン類がある。置換ピリミジン類には、ヒドロキシル、アミノ、およびハロゲン置換ピリミジン類、例えば、２,４−ジアミノ−６−ヒドロキシピリミジン、２,５−ジアミノ−６− ヒドロキシピリミジン、４,５−ジアミノ−６−ヒドロキシピリミジン、４,５− ジアミノピリミジン、および４,６−ジアミノ−２−ヒドロキシピリミジンがある。酸化プテリン類には、例えば、ネオプテリン、キサントプテリン、イソキサントプテリン、およびビオプテリンがある。プテリン再利用経路の基質ではない還元プテリン類には、例えば、７,８−ジヒドロ−Ｄ−ネオプテリン、（６Ｒ,Ｓ）−５,６,７,８−テトラヒドロ−Ｄ−ネオプテリン、７,８−ジヒドロ葉酸、および５,６,７,８−テトラヒドロ葉酸がある。６−ピルボイルテトラヒドロビオプテリンシンターゼ阻害因子については、現在のところ何も知られていない。セピアプテリンレダクターゼ阻害因子については、これらは、Ｎ−アセチルセロトニン、Ｎ−アセチルドーパミン、Ｎ−アセチル−ｍ−チラミン、Ｎ−クロロアセチルドーパミン、Ｎ−クロロアセチルセロトニン、Ｎ−メトキシアセチルドーパミン、およびＮ−メトキシアセチルセロトニンがある。上記第二の実施態様によると、プテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質である還元プテリンであるグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト類には、７,８−ジヒドロ−Ｌ− ビオプテリン、およびＬ−セピアプテリンがある。基質７,８−ジヒドロ−Ｌ− ビオプテリンは、(６Ｒ)−５,６,７,８−テトラヒドロ−Ｌ−ビオプテリンの酸化により得ることができる。プテリン再利用経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニストについて、これらは、第一および第二の実施態様の場合と同一であり、ジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子である。これらには、例えば、メトトレキセート、アミノプテリン、１０−プロパルギル−５,８−ジデアザホレート；２,４−ジアミノ−５ −(３',４'−ジクロロフェニル)−６−メチルピリミジン；トリメトレキセート；ピリメタミン；トリメトプリム；ピリトレキシム；５,１０−ジデアザテトラヒドロホレート；および１０−エチル−１０−デアザ−アミノプテリンがある。血管細胞における酸化窒素過剰産生の結果生じる血管機能不全、例えば、低血圧および血圧応答低下を阻害し、かつ免疫細胞における酸化窒素過剰産生の結果生じる炎症を減弱するためのテトラヒドロビオプテリン合成阻害因子の投与量は、選択する阻害因子によって実際の投与量は変わるが、一般に、１μg／kgから３００mg／kg範囲である。既に臨床的に使用されているジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子の場合では、癌化学療法に対する常用投与量は、急性症状の場合にあてはまるものであり、慢性関節リウマチの処置に使用される常用投与量は、炎症を処置する場合にあてはまるものである。必要ならば、テトラヒドロホレート（即ち、ロイコボリン）を、再利用経路阻害因子に続いて投与して、癌化学療法での現在の用法に従い毒性を緩和することができ、または、それを同時に投与して、テトラヒドロホレート合成阻害から毒性が生じるのを妨げることができる。好ましくは、阻害因子は、全身低血圧の場合、迅速な応答を必要とするため静脈内投与する。例えば、炎症、免疫拒絶現象、および神経変性疾患を処置するのに誘導化酸化窒素合成が有害であるようなその他の症状には、他の投与方法、例えば、経口、滑液内、皮下、または筋肉内投与法が適切である場合もある。炎症の場合、上記に挙げた投与用量は、通常、毎日用量であり、免疫細胞において通常存在する非常に高レベルのテトラヒドロビオプテリンを消耗するのに必要な期間、即ち、２日またはそれ以上、例えば、２日ないし３週間、投与される。 α₁−アドルナリン作動性アゴニスト類について述べる。α₁−アドレナリン作動性アゴニスト類は、同じ目的（即ち、低血圧患者において血圧を上げること）で使用されるが、血管収縮感受性を損ねるため、最終的には、使用を止める。α₁ −アドレナリン作動性アゴニスト類は、現在のところ、敗血症患者、およびサイトカイン処理患者における低血圧を処置するために使用する。本明細書では、これらが現在使用されているのと同じ投与量で、即ち、常用の治療上有効量で、これらを用いている。上記にの示したとおり、適切なα₁−アドレナリン作動性アゴニスト類には、例えば、エピネフリン、ノルエピネフリン、ドーパミン、フェニレフリン、メタラミノール、メトキサミン、エフェドリン、およびメフェンテルミンがある。ドーパミンの用量は、典型的には、２μg／kg／分から５０μg／ kg／分の範囲である。エピネフリンの用量は、典型的には、０.２５mgから１.０ mgの範囲である。ノルエピネフリンの用量は、典型的には、２μg／分から４μg ／分の範囲であり、典型的には、ドーパミン用量が２０μg／kg／分を越える場合に使用される。フェニレフリンの用量は、０.１から１１μg／kgの範囲であることができる。最も一般的なα₁−アドレナリン作動性アゴニスト類（エピネフリン、ノルエピネフリン、およびドーパミン）の投与経路は、静脈内であり、その他の場合の投与経路は、静脈内であるか、または皮下であり得る。酸化窒素シンターゼ阻害因子について述べる。これらの投与量は、一般に、０ .１から１００mg／kgであるが、選択する阻害因子によってその正確な投与量は変わる。Ｎ^G−メチル−Ｌ−アルギニンの用量は、１から４０mg／kgの範囲である。投与経路は、好ましくは、静脈内、または迅速な応答を与える他の経路である。上記に示したとおり、実施態様は、血管細胞において、酸化窒素合成の阻害を必要とする対象、例えば、該細胞においてサイトカイン類および／または細菌エンドトキシン類により誘導される酸化窒素の病理学的過剰産生のために血管機能不全を罹症している対象において、アルギニンからの酸化窒素合成を阻害するために、テトラビオプテリン合成をブロックすることに関するものである。このことは、対象に、(ａ)プテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質ではない少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、例えば、２，４−ジアミノ−６−ヒドロキシピリミジン（ＤＡＨＰ）、または（ｂ）少なくとも一つのプテリン再利用経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、例えば、メトトレキセートなどのジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子、または（ａ）および（ｂ）の両方を、それぞれ酸化窒素合成を阻害する治療上有効量投与することにより、または、対象に、プテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質である還元プテリンである少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、例えば、Ｌ−セピアプテリン、および少なくとも一つのプテリン再利用経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、例えば、メトトレキセートなどのジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子を、酸化窒素合成を阻害する治療上有効量投与することにより、達成される。上記に示したとおり、その他の実施態様は、免疫細胞における酸化窒素過剰産生が原因である炎症の予防または処置のために、免疫細胞において、酸化窒素産生を阻害するために、テトラビオプテリン合成をブロックすることに関するものである。テトラヒドロビオプテリンは、血管細胞におけるアルギニンからの酸化窒素合成および免疫細胞におけるアルギニンからの酸化窒素合成に関連するだけでなく、他の細胞におけるカテコールアミン類（エピネフリン、ノルエピネフリン、およびドーパミン）の合成およびセロトニンの合成（カテコールアミンは、神経細胞、副腎細胞、肝細胞、および腎細胞で合成され、セロトニンは、神経細胞、マスト細胞および肝細胞で合成される）にも関連し、各実施態様におけるテトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニストの投与は、血管細胞および免疫細胞におけるテトラヒドロビオプテリン合成をブロックすること以外に、該他の細胞におけるテトラヒドロビオプテリン合成もブロックでき、それにより、さらに、結果として望ましくない逆効果作用および／または副作用を伴う、カテコールアミン類（ノルエピネフリン、エピネフリン、およびドーパミン）、および／またはセロトニンの合成の欠如を引き起こす。ノルエピネフリンは、神経により放出される交感神経伝達物質であり、健常者の血管における緊張性収縮トーン（tonic costrictory tone）を維持する。エピネフリンは、緊張性収縮トーンを増加する要請があった際に産生される副腎由来のホルモンである。これらは、通常は血圧を正常範囲に維持する。従って、これらの産生を妨げるものであるテトラヒドロビオプテリン合成の阻害は、血圧を下げるので、血圧を上げるために酸化窒素産生を妨げるには逆効果である。ノルエピネフリン、エピネフリン、およびドーパミンを含むカテコールアミン類は、脳における神経伝達物質であり；これらの消耗は、神経学的症状、例えば、痙攣、トーンおよび姿勢の撹乱、嗜眠状態、被刺激性、異常運動、再発性高熱（感染なし）、過流涎、および飲み込み困難、を引き起こし得る。本発明の改良点は、上記方法により処置されている対象に、カテコールアミン置換性非毒性量のレボドーパ、を、典型的には約１から約１７５mg／kg／日の範囲、好ましくは５から２０mg／kg／日の範囲で投与することを含む。投与は、神経学的症状が続く間、およびカテコールアミン消耗投与を実施する間の日数である。好ましくは、投与は、静脈内で実施する。ヒトの場合、各日の用量は、好ましくは、２ないし２４時間にわたる連続注入として投与される。レボドーパは、好ましくはカルビドーパとの組み合わせ、例えば、レボドーパ：カルビドーパの重量比率２：１から１５：１の範囲で投与され、これにより、レボドーパの投与量を２ないし１０mg／kg ／日の好ましい範囲まで低減可能である。セロトニンは、神経伝達物質である。これの産生を妨げるものであるテトラヒドロビオプテリン合成の阻害は、セロトニン受容体との相互作用を妨げることができ、かつ神経学的症状を起こし、またセロトニン産生が続いて阻害された場合は、死さえも引き起こし得る。上記した方法の改良点は、上記した方法により処置されている対象に、セロトニン置換性非毒性量のＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを、典型的には約１から約５０mg／kg／日の範囲、好ましくは５から２０ mg／kg／日の範囲で投与することを含む。投与は、神経学的症状が続く間、およびセロトニン消耗投与を実施する間の日数である。好ましくは、投与は、静脈内で実施する。ヒトの場合、各日の用量は、好ましくは、２ないし２４時間にわたる連続注入として投与される。 “カテコールアミン置換性量”という用語は、レボドーパを投与しなかった場合に、テトラヒドロビオプテリン合成をブロックすることによるカテコールアミン欠如により生じるあらゆる症状を除去または改善するのに十分な量を意味するものとして使用する。 “セロトニン置換性量”という用語は、Ｌ−５−ヒドロキシトリプトファンを投与しなかった場合に、テトラヒドロビオプテリン合成をブロックすることによるセロトニン欠如により生じるあらゆる症状を除去または改善するのに十分な量を意味するものとして使用する。望ましくない副作用を低減または除去するために本発明を改良することにより、下記のような方法を提供する：第一の実施態様は、サイトカイン類および／または細菌エンドトキシン類により血管細胞において誘導される酸化窒素の病理学的過剰産生のため血管機能不全を罹症している対象の血管細胞において、アルギニン由来の酸化窒素合成を阻害する方法に関し、該方法は、該対象に、(ａ)プテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質ではない、少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、または(ｂ)少なくとも一つのジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子、または(ａ)および(ｂ)の両方の酸化窒素合成阻害治療上有効量を投与し、さらに、また、該対象に、カテコールアミン置換性非毒性量のレボドーパを、カルビドーパと共にまたはカルビドーパなしで、およびセロトニン置換性非毒性量のＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを投与することを含んでなる。第二の実施態様は、サイトカイン類および／または細菌エンドトキシン類により血管細胞において誘導される酸化窒素の病理学的過剰産生のため血管機能不全を罹症している対象の血管細胞において、アルギニン由来の酸化窒素合成を阻害する方法に関し、該方法は、該対象に、プテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質である還元プテリンである、少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、および少なくとも一つのジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子の酸化窒素合成阻害治療上有効量を投与し、さらに、また、該対象に、カテコールアミン置換性非毒性量のレボドーパを、カルビドーパと共にまたはカルビドーパなしで、ならびにセロトニン置換性非毒性量のＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを、それぞれ投与することを含んでなる。これら２つの実施態様は、テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト（類）を唯一の酸化窒素産生阻害因子として、または、酸化窒素シンターゼ阻害因子と共に、またはα₁−アドレナリン作動性アゴニストと共に、投与することを意図するものである。第三の実施態様は、免疫細胞においてアルギニンから誘導される酸化窒素の産生により生じる炎症に対する対象の予防または治療法に関し、該方法は、かかる炎症を発症する可能性のある、または発症している対象に、(ａ)プテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質ではない、少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、または(ｂ)少なくとも一つのジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子、または (ａ)および(ｂ)の両方を、酸化窒素産生制限（炎症減弱）量投与し、さらに、また、該対象に（ｃ）カテコールアミン置換性非毒性量のレボドーパを、カルビドーパと共にまたはカルビドーパなしで、および（ｄ）セロトニン置換性非毒性量のＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを投与することにより、該細胞中の酸化窒素産生を阻害することを含む。第四の実施態様は、免疫細胞においてアルギニンから誘導される酸化窒素の産生により生じる炎症に対する対象の予防または治療法であって、該方法は、かかる炎症を発症する可能性のある、または発症している対象に、プテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質である還元プテリンである、少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、および少なくとも一つのジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子の酸化窒素産生阻害（炎症減弱）量を投与し、さらに、また、該対象にカテコールアミン置換性非毒性量のレボドーパを、カルビドーパと共にまたはカルビドーパなしで、およびセロトニン置換性非毒性量のＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを投与することにより、該細胞における酸化窒素産生を阻害することを含む。以下の実施例は、本発明の概念の例示説明であり、現時点で本発明者が知っている最善の様式を表している。実施例Ｉ大動脈平滑筋細胞は、成体雄フィッシャー３４４ラット由来の大動脈の中間層のセグメントを外植することにより、培養した。大動脈を無菌的に取り出し、管腔表面および管腔の反対側表面の両方を解体することにより、動脈血管外膜細胞および内皮細胞をばらばらにした。中間フラグメント（１−２mm）を、細胞が発生するまで、成長培地で水分を保持した乾燥プリマリア２５cm²組織培養フラスコ（ファルコン；オックスナード、ＣＡ）に付着させた。培養物には、週に２回、１０％ウシ胎児血清、２５mＭＨＥＰＥＳ、２mＭＬ−グルタミン、４０μg／m l内皮細胞成長補足剤（バイオメディカル・テクノロジーズ、ストウトン、ＭＡ）、および１０μg／mlゲンタマイシン（ＧＩＢＣＯ；グランド・アイランド、ＮＹ）を含有する培地１９９を供給した。主要な培養物が集密的になったら、それらをトリプシン処理により継代し、外植体を捨てた。継代１０−１５の細胞を９６−ウェルプレートに２０,０００／ウェルで接種した。細胞が集密的（ウェル中６０−８０×１０³の密度）になったら、培地を吸引により除去し、１０％子ウシ血清、２.５mＭグルタミン、およびペニシリン（８０Ｕ／ml）、ストレプトマイシン（８０μg／ml）、およびフギゾン（２μg／ml ）を含有するＲＰＭＩ１６４０（ウィッタカー・ラボラトリーズ）２００μlからなる新鮮な培地を各ウェルにピペットを介して加えた。ウェル４つのグループそれぞれに、一定濃度の２,４−ジアミノ−６−ヒドロキシピリミジン（ＤＡＨＰ）、即ち、３０μg／ml、１００μg／ml、３００μg ／ml、１０００μg／ml、および３０００μg／mlを加え、対照には、ＤＡＨＰ無添加のウェルを用意した。また、それぞれに、細菌リポポリサッカライド（エンドトキシン；抗原型：Ｅ．Ｃoli．０１１１：Ｂ４、５０μg／ml）にラットのガンマ−インターフェロン（５０mg／ml）を補足したものを加えた。次いで、ウェルを加湿インキョベーター中３７℃で２４時間インキュベートした。この後、細胞培養培地における亜硝酸塩蓄積を測定した。亜硝酸塩は、細胞培養培地１００ μlをグレイス試薬（２.５％リン酸中、０.５％スルファニルアミドおよび０.０５％ナフチルエチレンジアミンジヒドロクロリド）を加えることにより測定し、ＯＤ₅₅₀nm（５５０nmの光学密度）をマイクロプレートリーダー（メレキュラー・デバイシィズ；メンロ・パーク、ＣＡ）を用いて直ちに測定した。亜硝酸塩濃度は、培養培地中に調製された亜硝酸ナトリウムの標準溶液と比較することにより、測定した。サイトカイン類にさらしていない平滑筋細胞培養物におけるバックグラウンドの亜硝酸塩レベルを実験値から引いた。亜硝酸塩産生は、図１の挿入図に示している。その結果は、ＤＡＨＰの濃度が上昇したことにより、亜硝酸塩産生を累進的に阻害することを示している。別の実験（ここでは説明しない）では、亜硝酸塩産生が酸化窒素合成の直接のインジケーターであることが示された。従って、この実験は、ＤＡＨＰが酸化窒素産生を阻害することを示すものである。実施例II 細胞培養培地の試料を１４時間、２０時間、および４０時間で集めた以外は、実施例Ｉを繰り返した。細胞を２mＭＤＡＨＰと共に、またはＤＡＨＰなしでインキュベートした（各時間に対し、同一のものが４つ）。その結果は、図１の主要図に、対照およびＤＡＨＰと記した曲線で示している。その結果は、ＤＡＨＰが経時的に酸化窒素の放出を低減したことを示した。その他の場合では、ＤＡＨＰを１００μmセピアプテリン（ＳＥＰ）と共に加えた。その結果は、図１の主要図に、ＤＡＨＰ＋ＳＥＰと記した曲線で示している。その結果は、セピアプテリンがＤＡＨＰにより引き起こされる酸化窒素合成の遮断を克服したことを示した。このことは、ＤＡＨＰ阻害のメカニズムが、特に、グアノシントリホスフェートからのテトラヒドロビオプテリン合成をブロックすることによるものであることを示しており、なぜならば、セピアプテリンが別のプテリン再利用経路によりテトラヒドロビオプテリンを形成できることが知られているからである。その他の場合では、メトトレキセート（１０μＭ）をＤＡＨＰおよびセピアプテリンと共に加えた。その結果は、図１に、ＤＡＨＰ＋ＳＥＰ＋ＭＴＸと記した曲線で示している。その結果は、セピアプテリンがＤＡＨＰにより引き起こされる酸化窒素合成の阻害を克服できなかったことを示した。メトトレキセートは、ジヒドロホレートレダクターゼの強力かつ選択的な阻害因子であり、それ故に、プテリン再利用経路をブロックすることがよく知られていることから、この結果は、テトラヒドロビオプテリン合成の両方の経路をブロックすることは、エンドトキシンおよびサイトカインの組み合わせによる平滑筋細胞における酸化窒素合成の誘導を排除することを示している。実施例III 実験は、セピアプテリンをＤＡＨＰの変わりに、１０μＭメトトレキセートの存在下または不在下（対照）で、３、１０、３０、１００、および３００μＭの濃度で加えた以外は、実施例Ｉと同様に実施した。その結果は、図２の左側に示している。その結果は、セピアプテリンが誘導化酸化窒素産生の増大を引き起こすことを示す。セピアプテリンは、プテリン再利用経路において直接テトラヒドロビオプテリンを形成するため、このことは、テトラヒドロビオプテリンが血管細胞中での酸化窒素合成を律速するものであることを示している。反対に、メトトレキセートが存在した場合、セピアプテリンは、誘導化酸化窒素合成を完全に阻害した。このことは、プテリン再利用経路が（メトトレキセートにより）ブロックされるとき、セピアプテリンは、グアノシントリホスフェート経路をブロックするためのＧＴＰＣＨＩ阻害因子として機能すること、およびテトラヒドロビオプテリン合成の両方の経路がブロックされるとき、誘導化酸化窒素合成は起こらないことを示している。実施例IＶ実験は、メトトレキセートをＤＡＨＰの変わりに、１００μＭセピアプテリンの存在下または不在下（対照）で、０.３、１、３、１０、および３０μＭの濃度で加えた以外は、実施例Ｉと同様に実施した。その結果は、図２の右側に示している。その結果は、最大限に効果的な濃度のメトトレキセートが誘導化酸化窒素合成の３０−４０％を阻害し、かつセピアプテリンが存在するとき、メトトレキセートは、誘導化酸化窒素合成を完全に阻害することを示しており、セピアプテリンは、グアノシントリホスフェート経路をブロックすること、およびテトラヒドロビオプテリン合成の両方の経路がブロックされると、血管細胞における誘導化酸化窒素合成は起こらないことを示している。実施例Ｖ誘導化酸化窒素合成の時間経過を調べるために実験を行った。酸化窒素合成は、実施例Ｉにおけるように、細菌リポポリサッカライドおよびラットのガンマ− インターフェロンにより誘導した。酸化窒素合成は、約８時間遅れの後に始まった。同様の実験を１００μＭセピアプテリンの存在下に実施すると、酸化窒素産生は、より早くに始まり、全研究時間で増加し、その量はテトラヒドロビオプテリンの利用性（アベイラビリティー）が、開始（オンセット）および誘導化酸化窒素産生の程度を律速するものであることを示していた。メトトレキート（１０ μＭ濃度で使用した）をセピアプテリンと組み合わせると、前実施例の結果と一致する、誘導化酸化窒素合成のほぼ完全な阻害を引き起こした。本実施例の結果は、図３に表している。実施例ＶI 実験は、テトラヒドロビオプテリンをＤＡＨＰの変わりに、１０μＭメトトレキセートの存在下または不在下（対照）で、３、１０、３０、１００、および３００μＭの濃度で加えた以外は、実施例Ｉと同様に実施した。その結果は、テトラヒドロビオプテリン単独は、誘導化酸化窒素合成における少量の増加を引き起こすというものである。しかしながら、メトトレキセートが存在する場合、テトラヒドロビオプテリンは誘導化酸化窒素合成を阻害しており、テトラヒドロビオプテリンが細胞中に直接入らずに、まず酸化されること、さらに、テトラヒドロビオプテリンが血管細胞のグアノシントリホスフェート経路を阻害することを示している。実施例VII 実験は、Ｎ−アセチルセロトニンをＤＡＨＰの変わりに、１０μＭメトトレキセートの存在下または不在下（対照）で、１、３、１０、３０、１００、および３００μＭの濃度で用いた以外は、実施例Ｉと同様に実施した。その結果は、図４に示している。その結果は、Ｎ−アセチルセロトニンを単独で与えた場合、誘導化酸化窒素合成が最大でおよそ５０％まで阻害されることを示している。しかしながら、メトトレキセートが存在すると、ほぼ完全な阻害が示されている。このことは、Ｎ−アセチルセロトニンがグアノシントリホスフェート経路をブロックすること、およびテトラヒドロビオプテリン合成の両方の経路の阻害が、最大酸化窒素合成阻害には必要であることを示すものである。実施例VIII ラット大動脈平滑筋細胞は、それらを７５cm²組織培養フラスコ中で集密的になるまで生育させる以外は、実施例Ｉのようにして調製する。各グループのフラスコ（１グループに対し６個）を、添加物なし（ＢＡＳＡＬ）、実施例Ｉの細菌リポポリサッカライド（ＬＰＳ）、実施例ＩのＬＰＳおよび実施例Ｉのガンマーインターフェロン（ＩＦＮ）、実施例ＩのＬＰＳおよびＩＦＮおよびＤＡＨＰ（３mＭ）、および（実施例Ｉの）ＩＦＮ単独、で処理した。加湿インキュベーター中３７℃で１２時間インキュベーション後、細胞をテフロン細胞スクレーパーで集め、凍結および液体窒素中および３７℃水浴での解凍を３サイクル行うことにより、溶解させた。細胞溶解物をベックマン・マイクロフュージ中、１２０００ＲＰＭで遠心分離した。上清を回収し、１ＮＨＣlで酸性化し、存在するプテリンを、ＫＩ／Ｉ₂溶液（１ＮＨＣl中１％Ｉ₂、２％ＫＩ）の添加により酸化し、暗所で３７℃で１時間インキュベートした。過剰のＩ₂を、０.１Ｍアスコルビン酸で処理して除去した。試料を、１ＮＮａＯＨおよび２００mＭトリス緩衝液を用いてｐＨ７.８にし、逆相Ｃ₁₈カラム（ベックマン、３ミクロン）を用いて総合ビオプテリン含量についてＨＰＬＣ分析にかけ、さらに３５６nmで励起させ、４４５nmで放出させる蛍光検出にかけた。その結果は図５に示している。図５に示した通り、未処理の平滑筋細胞およびインターフェロン処理平滑筋細胞は、検出可能レベルのビオプテリンを持たない。しかしながら、図５に示したとおり、エンドトキシン（ＬＰＳ）処理平滑筋細胞は、顕著な量のビオプテリンを含有し、このビオプテリン含量は、更に、インターフェロン（ＩＦＮ）により増加した。最も重要なのは、図５に示されているとおり、ＤＡＨＰが、ＬＰＳおよびＩＦＮにより引き起こされる細胞の増加を完全に止めたということである。実施例IＸスプラーグ−ダウレイラット（２５０〜３００ｇ）６匹ないし２０匹のグループに、試薬なし（対照）、ＤＡＨＰ（１g／kg腹腔内）、ＬＰＳ（１５mg／kg、腹腔内）、およびＤＡＨＰと５ＬＰＳの組み合わせを注射した。６時間後、各動物をエーテル麻酔し、血液を心臓穿刺により抜き取った。遠心分離により血漿が得られ、総ビオプテリンレベルを実施例VIIIのようにして測定した。その結果は、図６に示している。図６に示したとおり、ＤＡＨＰは、血漿ビオプテリンの対照濃度を５０％以上も低減し、ＬＰＳにより引き起こされる血漿ビオプテリン濃度上昇を完全に止めた。このことは、ＤＡＨＰが、テトラヒドロビオプテリン合成のブロックにおいてイン・ビボで有効であることを示している。実施例Ｘスプラーグ−ダウレイラット（２５０〜３００ｇ）６匹ないし１５匹のグループに、試薬なし（ＢＡＳＡＬ）、ＬＰＳ（１５mg／kg）、ＬＰＳ１５mg／kg足すメトトレキセート（ＭＴＸ）１０mg／kg、ＬＰＳ（１５mg／kg）足すＤＡＨＰ（１g／kg）、およびＬＰＳ（１５mg／kg）足すＤＡＨＰ(１g／kg）足すＭＴＸ（１０mg／kg）を注射した。６時間後、各動物をエーテル麻酔し、血液を心臓穿刺により抜き取った。遠心分離により血漿が得られ、硝酸塩および亜硝酸塩の総濃度を自動比色定量アッセイにより測定した。アッセイでは、自動試料注射器を用いて、試料を、硝酸塩を亜硝酸塩へと触媒還元するため銅被覆化カドミウムカラムにかけた。次いで、試料を、（１０g／lスルファニルアミド、１g／lナフタリンジアミン、および５％オルソーリン酸を含有する）緩衝液流でオンラインで混合した。硝酸塩／亜硝酸塩濃度は、指示標準として実物の亜硝酸塩を用いて、５４６nmでの光学密度（Ｏ.Ｄ.）に基づき、測定した。その結果は、図７に示している。図７に示したとおり、ＬＰＳは、血清硝酸塩／亜硝酸塩において２８倍の増加を引き起こし、これは、メトトレキセートによって僅かに低減されたが、ＤＡＨＰによって、メトトレキセートの不在下または存在下で顕著に低減された。このことは、ＤＡＨＰが、イン・ビボにおいて、ＬＰＳ−誘導化酸化窒素産生の有効な阻害因子であることを示している。実施例ＸI 各グループのラット（グループあたり６匹〜１０匹）を、未処理、ＬＰＳ（１５mg／kg）を腹腔内注射、ＬＰＳ足すＤＡＨＰ（１g／kg）を腹腔内注射、ＬＰＳ足すＭＴＸ（１０mg／kg）を腹腔内注射、およびＬＰＳ、ＤＡＨＰ、およびＭＴＸの組み合わせを腹腔内注射のいずれかで処理した。６時間後、ラットを屠殺し、それらの胸大動脈を除去し、酸素化したクレブス溶液に３７℃で浸けた。クレブス溶液は、下記の組成をmＭで有した：ＮａＣl、１１０；ＫＣl、４.８；Ｃ aＣl₂、２.５；ＫＨ₂ＰＯ₄、１.２；ＮａＨＣＯ₃、２５；およびデキストロース、１１。２ないし３mm幅の輪を大動脈から切り取り、収縮伸長（contractile te nsion）測定中、組織浴にマウントした。輪を、酸素化クレブス溶液中２gmの伸長下に、平衡化させた。１時間平衡化後、フェニレフリンに対する収縮応答を累積用量応答分析により測定した。その結果は、図８に示している。図８に示したとおり、ＬＰＳは、α₁−アドレナリン作動性アゴニストフェニレフリンにより引き起こされる収縮筋応答をほとんど完全に排除し、ＤＡＨＰは、ＬＰＳによるフェニレフリン応答のこの阻害を僅かに克服したが、ＭＴＸは、フェニレフリン感受性を著しく回復し、ＤＡＨＰとＭＴＸの組み合わせは、各薬剤単独の場合よりも効果的であった。このことは、テトラヒドロビオプテリン合成阻害因子が、酸化窒素産生をイン・ビボでブロックでき、それによって、昇圧剤に対する血管収縮感受性を回復できることを示している。実施例ＸII 実施例ＸIにおけるように、ラットを屠殺し、胸大動脈を単離して、伸長記録の間、輪を組織浴中で調製した。輪をフェニレフリン（０.３μＭ）で予め収縮させ、組織浴にアセチルコリン（ＡＣｈ）を連続的かつ蓄積的に添加することにより、弛緩を測定した。実験は、セピアプテリン（１００μＭ）にさらす前、およびさらした後３０分に、４ないし８個の同様に処理した輪を用いて実施した。その結果は、図９に示している。図９に示したとおり、セピアプテリンは、アセチルコリンが血管弛緩を引き起こす能力に全く変化をもたらさなかった。このことは、内皮細胞に存在する構成性の酸化窒素シンターゼがテトラヒドロビオプテリン利用性（アベイラビリティー）によって制限されないことを示している。メトトレキセート（１０μＭ）をセピアプテリンの代わりに用いても、同様の結果が得られる。従って、テトラヒドロビオプテリンのドゥ・ノボ合成（グアノシントリホスフェート経路合成）は、構成性の酸化窒素合成を内皮細胞において少なくとも数時間にわたり維持することを必要としない。上記実施例において、Ｎ−アセチルセロトニンをＤＡＨＰの代わりに用いると、イン・ビボにおいてＤＡＰＨの場合に得られるのと同様の結果を得ることができる。上記実施例において、他のピリミジン類、例えば、２,５−ジアミノ−６−ヒドロキシピリミジン、２,４−ジアミノ−６−ヒドロキシピリミジン、または４, ６−ジアミノ−２−ヒドロキシピリミジンをＤＡＨＰの代わりに用いると、グアノシントリホスフェート経路をブロックする同様の結果が得られる。上記実施例において、他のプテリン類、特に還元プテリン類、例えば、（６Ｒ）−５,６,７,８−テトラヒドロ−Ｌ−ビオプテリン、７,８−ジヒドロ−Ｌ−ビオプテリン、または７,８−ジヒドロ−Ｄ−ネオプテリン、５,６,７,８−テトラヒドロ−Ｄ−ネオプテリン、またはジヒドロ葉酸、またはテトラヒドロ葉酸、またはＤ,Ｌ−６−メチル−５,６,７,８−テトラヒドロプテリン、または２−アミノ−６,７−ジメチル−４−ヒドロキシ−５,６,７,８−テトラヒドロプテリジンをセピアプテリンの代わりに用いると、グアノシントリホスフェート経路をブロックする同様の結果が得られ、同じように、還元プテリンも、プテリン再利用経路の基質として働く。上記実施例において、他のジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子、例えば、アミノプテリン、または１０−プロパルギル−５,８−ジデアザホレート、または２,４−ジアミノ−５−（３’,４’−ジクロロフェニル）−６−メチルピリミジントリメトレキセート、またはピリメタミン、またはトリメトルプリム、またはピリトレキシム、５,１０−ジデアザテトラヒドロホレートまたは１０−エチル−１０−デアザ−アミノプテリンをセピアプテリンの代わりに用いると、プテリン再利用経路をブロックする同様の結果が得られる。その他の昇圧剤、問えば、アンギオテンシンII、ノルエピネフリン、またはトロンボキサン類似体(即ち、ｕ４６６１９)を実施例ＸIにおけるフェニレフリンの代わりに用いると、実施例ＸIにおいて得られたのと同様の結果が得られる。実施例ＸIII 経時的にＤＡＨＰは、脳においてテトラヒドロビオプテリンを消耗するが、末梢（即ち、脳以外）においては、よりゆっくりと消耗する。この実施例は、本発明の中でも、脳におけるあらゆるテトラヒドロビオプテリン消耗の改善作用に関するものである。スプラーグ−ダウレイラットのグループ（１グループ当たり６〜１０匹）に、塩水中、レボドーパ（２００g／kg）およびＬ−５−ヒドロキシトリプトファン（１０mg／kg）を大量に腹腔内に注射する。その後直ちに、ラットのグループに、一方にＤＡＨＰ（１g／kg）を、もう一方にＭＴＸ（１０mg／kg）を、両方にＬＰＳ（１５mg／kg）を腹腔内注射する。１２時間後、各動物をエーテル麻酔し、血液硝酸塩レベルを、５０％以上低減する。他のグループのラットには、ＬＰＳ（１５mg／kg）のみを与える。他のグループのラットには、ＭＴＸ（１０mg／kg）およびＬＰＳ（１５mg／kg ）のみを与える。他のグループのラットには、ＤＡＨＰ（１g／kg）およびＬＰＳ（１５mg／kg ）のみを与える。ＭＴＸおよびＤＡＨＰを注射する場合、酸化窒素レベルは、ＬＰＳを単独で与えた場合と比較して５０％以上低減し、ＬＰＳ投与による血圧低下を顕著に低減する。レボドーパおよびＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを投与する場合、カテコールアミンおよびセロトニン消耗の結果得られる症状が、顕著に減弱する。その他の場合では、レボドーパ５mg／kgをカルビドーパと共に（レボドーパ：カルビドーパ１０：１の重量比率で）投与する。カテコールアミンおよびセロトニン消耗の結果得られる症状の低減という同様の結果が得られる。その他の場合では、ＬＰＳをＤＡＨＰおよびＭＴＸと同時に投与する代わりに、レボドーパおよびＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを投与する１時間前に投与する。同時投与に比べて、血圧低下の低減は幾分低いが、ＬＰＳを単独で投与した場合に比べれば、依然、有意な改善が見られる。更にその他の場合では、ＬＰＳをＤＡＨＰおよびＭＴＸと同時に投与する代わりに、レボドーパおよびＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを投与する３時間前に投与し、ＤＡＨＰおよびＭＴＸを単独で、およびＮ^G−メチル−Ｌ−アルギニン２０mg／kgと共に投与し、その他の場合では、Ｎ^G−メチル−Ｌ−アルギニンをＤＡＨＰおよびＭＴＸなしで投与する。ＭＴＸおよびＤＡＨＰをＮ^G−メチル −Ｌ−アルギニンと共に投与する場合では、Ｎ^G−メチル−Ｌ−アルギニンをＤＡＨＰまたはＭＴＸなしで投与する場合と比較して、さらにＤＡＨＰおよびＭＴＸをＮ^G−メチル−Ｌ−アルギニンなしで投与する場合と比較して、ＬＰＳ投与による血圧低下の低減において有意な改善が見られ、かつ、死に至らない。実施例ＸIＶヒトにインターロイキン−２（１０×１０⁶単位）を５日間続けて投与する。この全期間中、レボドーパおよびＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを、それぞれ２０mg／kg／日および１０mg／kg／日のレベルで、それぞれ連続注射により投与する。ＤＡＨＰ（１g／kg／日）またはＭＴＸ（１０mg／kg／日）を連続注射により投与する。インターロイキン−２治療の結果である深刻な低血圧および血管漏出という特徴が、有意に低減される。神経学的症状は穏やかである。実施例ＸＶ脳脊髄を穿刺したスプラーグ−ダウレイラットに、まず、レボドーパ（２０mg ／kg）およびＬ−５−ヒドロキシトリプトファン（１０mg／kg）を、次いで、L ＰＳ（１５mg／kg）を単独またはＤＡＨＰ（３００mg／kg）と一緒に、腹腔内注射する。３時間後、ＬＰＳは、劇的な血圧低下を引き起こすが、ＤＡＨＰを与えた動物ではさほどではない。この時点で、フェニレフリン（６μg／kg）の大量（ボーラス）注射により、ＤＡＨＰで処理した動物における有意な血圧応答を引き出すことができるが、ＤＡＨＰで処理していない動物における血圧応答はさほどではない。ＤＡＨＰおよびフェニレフリンの注射は、ＬＰＳ投与により引き起こされる血圧低下を有意に克服するものである。実施例ＸＶI スプラーグ−ダウレイラットに、空気嚢炎症モデル(セリイ，Ｈ.、プロシーディングス・オブ・ソサイエティー・フォア・エクスペリメンタル・バイオロジー・アンド・メディシン、８２巻、３２８−３３３頁(１９５３年))に従い、２５c cの空気を背側領域に皮下注射する。形成された空気嚢内に、炎症刺激クロトン油（コーン油０.５ml中０.５％）を注射する。同時に、１グループのラットにＤＡＨＰ（０.３g／kg）足すＭＴＸ（５mg／kg）を腹腔内投与し、この投与を５日間１２時間毎に繰り返す。ＤＡＨＰ足すＭＴＸを投与されたラットに、レボドーパ（２０mg／kg／日）およびＬ−５−ヒドロキシトリプトファン（２０mg／kg／日）もまた腹腔内投与する。５日終了時点で、ＤＡＨＰおよびＭＴＸを与えたラットのグループは、他のグループのラットよりも、肉腫外傷に含まれる液体滲出物中の亜硝酸塩が有意に少なく、肉腫組織のホモジェネートにおける酸化窒素シンターゼ活性が低く、さらに炎症も低い。神経学的症状は穏やかである。その他の場合では、ＤＡＨＰ、ＭＴＸ、レボドーパ、およびＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを、空気およびクロトン油の注射２日後に始める以外は、同一の毎日用量で腹腔内注射する。炎症は、５日終了時点で有意に改善されるが、ＤＡＨＰ足すＭＴＸを、空気およびクロトン油注射時点で与え始める場合ほどではない。当業者には、上記の様々なバリエーションが明らかであろう。従って、本発明は、請求の範囲により定義される。

Claims

【特許請求の範囲】１．サイトカイン類および／または細菌エンドトキシン類により、血管細胞中において誘導されるアルギニンからの酸化窒素の病理学的過剰産生に基づく血管機能不全に罹患している対象の血管細胞中における、アルギニンからの酸化窒素合成を阻害する方法であって、該対象に、(ａ)プテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質ではない、少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、または(ｂ)少なくとも一つのジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子、または(ａ)および(ｂ)の両方を、酸化窒素合成を阻害する治療上有効量投与し、さらに、該対象に、カテコールアミン置換性非毒性量のレボドーパを、カルビドーパと共にまたはカルビドーパなしで、およびセロトニン置換性非毒性量のＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを、それぞれ投与することをも含んでなる、方法。２．サイトカイン類および／または細菌エンドトキシン類により血管細胞中において誘導されるアルギニンからの酸化窒素の病理学的過剰産生に基づく血管機能不全に罹患している対象の血管細胞中における、アルギニンからの酸化窒素合成を阻害する方法であって、該対象に、プテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質である還元プテリンである、少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、および少なくとも一つのジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子を、酸化窒素を合成する阻害治療上有効量投与し、さらに、該対象に、カテコールアミン置換性非毒性量のレボドーパを、カルビドーパと共にまたはカルビドーパなしで、ならびにセロトニン置換性非毒性量のＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを、それぞれ投与することをも含んでなる、方法。３．サイトカインでの治療により、またはエンドトキシンにより、血管細胞中に誘導されるアルギニンからの酸化窒素の産生により引き起こされる全身低血圧に対する対象の予防または治療法であって、かかる全身低血圧を発症する可能性のある、または発症している対象に、α₁−アドレナリン作動性アゴニストを治療上有効量、ならびに(ａ)プテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質ではない、少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、または(ｂ)少なくとも一つのジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子、または(ａ)および(ｂ)の両方を、α₁−アドレナリン作動性アゴニストに対する血管感受性を回復する治療上有効量、投与することを含む、方法。４．更に、該対象に、カテコールアミン置換性非毒性量のレボドーパを、カルビドーパと共にまたはカルビドーパなしで、および、セロトニン置換性非毒性量のＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを、それぞれ投与することを含んでなる、請求の範囲第３項記載の方法。５．サイトカインでの治療により、またはエンドトキシンにより、血管細胞中に誘導されるアルギニンからの酸化窒素の産生により引き起こされる全身低血圧に対する対象の予防または治療法であって、かかる全身低血圧を発症する可能性のある、または発症している対象に、α₁−アドレナリン作動性アゴニストを治療上有効量、およびプテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質である還元プテリンである、少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニストを治療上有効量、ならびに、少なくとも一つのジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子を、α₁−アドレナリン作動性アゴニストに対する血管感受性を回復するために、それぞれ投与することを含む、方法。６．更に、該対象に、カテコールアミン置換性非毒性量のレボドーパを、カルビドーパと共にまたはカルビドーパなしで、および、セロトニン置換性非毒性量のＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを、それぞれ投与することを含んでなる、請求の範囲第５項記載の方法。７．サイトカインでの治療により、またはエンドトキシンにより、血管細胞中に誘導されるアルギニンからの酸化窒素の産生により引き起こされる全身低血圧に対する対象の予防または治療法であって、かかる全身低血圧を発症する可能性のある、または発症している対象に、酸化窒素合成阻害因子を治療上有効量、および(ａ)プテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質ではない、少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、または(ｂ)少なくとも一つのジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子、または(ａ)および(ｂ)の両方を治療上有効量、それぞれ投与することを含む、方法。８．更に、該対象に、カテコールアミン置換性非毒性量のレボドーパを、カルビドーパと共にまたはカルビドーパなしで、および、セロトニン置換性非毒性量のＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを、それぞれ投与することを含んでなる、請求の範囲第７項記載の方法。９．サイトカインでの治療により、またはエンドトキシンにより、血管細胞中に誘導されるアルギニンからの酸化窒素の産生により引き起こされる全身低血圧に対する対象の予防または治療法であって、かかる全身低血圧を発症する可能性のある、または発症している対象に、酸化窒素合成阻害因子の治療上有効量、およびプテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質である還元プテリンである、少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、および、少なくとも一つのジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子を治療上有効量、それぞれ投与することを含む、方法。 10．更に、該対象にカテコールアミン置換性非毒性量のレボドーパを、カルビドーパと共にまたはカルビドーパなしで、および、セロトニン置換非毒性量のＬ −５−ヒドロキシトリプトファンを、それぞれ投与することを含んでなる、請求の範囲第９項記載の方法。 11．免疫細胞中においてアルギニンから誘導される酸化窒素の産生により引き起こされる炎症に対する対象の予防または治療法であって、かかる炎症を発症する可能性のある、または発症している対象に、(ａ)プテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質ではない、少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、または(ｂ) 少なくとも一つのジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子の炎症減弱量を投与することを含む、方法。 12．免疫細胞中においてアルギニンから誘導される酸化窒素の産生により引き起こされる炎症に対する対象の予防または治療法であって、かかる炎症を発症する可能性のある、または発症している対象に、(ａ)プテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質ではない、少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、または(ｂ) 少なくとも一つのジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子、または(ａ)および( ｂ)の両方を、炎症減弱量投与し、さらに、該対象にカテコールアミン置換性非毒性量のレボドーパを、カルビドーパと共にまたはカルビドーパなしで、さらびに、セロトニン置換性非毒性量のＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを、それぞれ投与することをを含む、方法。 13．免疫細胞中においてアルギニンから誘導される酸化窒素の産生により引き起こされる炎症に対する対象の予防または治療法であって、かかる炎症を発症する可能性のある、または発症している対象に、プテリン再利用経路を介するテトラヒドロビオプテリン合成の基質である還元プテリンである、少なくとも一つのグアノシントリホスフェート経路テトラヒドロビオプテリン合成アンタゴニスト、および少なくとも一つのジヒドロホレートレダクターゼ阻害因子を、それぞれ炎症減弱量投与することを含む、方法。 14．更に、該対象に、カテコールアミン置換性非毒性量のレボドーパを、カルビドーパと共にまたはカルビドーパなしで、および、セロトニン置換性非毒性量のＬ−５−ヒドロキシトリプトファンを、それぞれ投与することを含んでなる、請求の範囲第１３項記載の方法。