CN113271949A - 用于治疗骨关节炎的西地那非 - Google Patents
用于治疗骨关节炎的西地那非 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113271949A CN113271949A CN201980086589.2A CN201980086589A CN113271949A CN 113271949 A CN113271949 A CN 113271949A CN 201980086589 A CN201980086589 A CN 201980086589A CN 113271949 A CN113271949 A CN 113271949A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sildenafil
- glucose
- dose
- treatment
- mepivacaine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- BNRNXUUZRGQAQC-UHFFFAOYSA-N sildenafil Chemical compound CCCC1=NN(C)C(C(N2)=O)=C1N=C2C(C(=CC=1)OCC)=CC=1S(=O)(=O)N1CCN(C)CC1 BNRNXUUZRGQAQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 201
- 229960003310 sildenafil Drugs 0.000 title claims abstract description 78
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 title claims abstract description 40
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 46
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 55
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 55
- INWLQCZOYSRPNW-UHFFFAOYSA-N mepivacaine Chemical compound CN1CCCCC1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C INWLQCZOYSRPNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 37
- 229960002409 mepivacaine Drugs 0.000 claims abstract description 37
- 241000283086 Equidae Species 0.000 claims abstract description 31
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 claims abstract description 20
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 46
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 46
- 230000007709 intracellular calcium signaling Effects 0.000 claims description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 20
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 10
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 claims 1
- 102000011016 Type 5 Cyclic Nucleotide Phosphodiesterases Human genes 0.000 abstract description 15
- 108010037581 Type 5 Cyclic Nucleotide Phosphodiesterases Proteins 0.000 abstract description 15
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 abstract description 2
- 229960005015 local anesthetics Drugs 0.000 abstract 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract 1
- 229940123333 Phosphodiesterase 5 inhibitor Drugs 0.000 description 43
- 239000002590 phosphodiesterase V inhibitor Substances 0.000 description 43
- 102100027473 Cartilage oligomeric matrix protein Human genes 0.000 description 26
- 101710176668 Cartilage oligomeric matrix protein Proteins 0.000 description 26
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 18
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 16
- 208000030175 lameness Diseases 0.000 description 15
- LEBVLXFERQHONN-UHFFFAOYSA-N 1-butyl-N-(2,6-dimethylphenyl)piperidine-2-carboxamide Chemical compound CCCCN1CCCCC1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C LEBVLXFERQHONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 13
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 12
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 12
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 12
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 12
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 10
- 230000028956 calcium-mediated signaling Effects 0.000 description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 229960003150 bupivacaine Drugs 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 8
- 229960003105 metformin Drugs 0.000 description 8
- XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N metformin Chemical compound CN(C)C(=N)NC(N)=N XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 6
- SECKRCOLJRRGGV-UHFFFAOYSA-N Vardenafil Chemical compound CCCC1=NC(C)=C(C(N=2)=O)N1NC=2C(C(=CC=1)OCC)=CC=1S(=O)(=O)N1CCN(CC)CC1 SECKRCOLJRRGGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 229960002381 vardenafil Drugs 0.000 description 6
- ZOOGRGPOEVQQDX-UUOKFMHZSA-N 3',5'-cyclic GMP Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=C(NC2=O)N)=C2N=C1 ZOOGRGPOEVQQDX-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WEAJZXNPAWBCOA-INIZCTEOSA-N avanafil Chemical compound C1=C(Cl)C(OC)=CC=C1CNC1=NC(N2[C@@H](CCC2)CO)=NC=C1C(=O)NCC1=NC=CC=N1 WEAJZXNPAWBCOA-INIZCTEOSA-N 0.000 description 4
- 229960000307 avanafil Drugs 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 210000000707 wrist Anatomy 0.000 description 4
- 210000003857 wrist joint Anatomy 0.000 description 4
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 3
- 101100296726 Caenorhabditis elegans pde-5 gene Proteins 0.000 description 3
- 208000034657 Convalescence Diseases 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 3
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 3
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 210000003976 gap junction Anatomy 0.000 description 3
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 3
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 3
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- MVYUCRDXZXLFSB-UHFFFAOYSA-N lodenafil Chemical compound CCCC1=NN(C)C(C(N=2)=O)=C1NC=2C(C(=CC=1)OCC)=CC=1S(=O)(=O)N(CC1)CCN1CCOC(=O)OCCN(CC1)CCN1S(=O)(=O)C(C=1)=CC=C(OCC)C=1C(N1)=NC(=O)C2=C1C(CCC)=NN2C MVYUCRDXZXLFSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- 229960000835 tadalafil Drugs 0.000 description 3
- IEHKWSGCTWLXFU-IIBYNOLFSA-N tadalafil Chemical compound C1=C2OCOC2=CC([C@@H]2C3=C([C]4C=CC=CC4=N3)C[C@H]3N2C(=O)CN(C3=O)C)=C1 IEHKWSGCTWLXFU-IIBYNOLFSA-N 0.000 description 3
- 229960000438 udenafil Drugs 0.000 description 3
- IYFNEFQTYQPVOC-UHFFFAOYSA-N udenafil Chemical compound C1=C(C=2NC=3C(CCC)=NN(C)C=3C(=O)N=2)C(OCCC)=CC=C1S(=O)(=O)NCCC1CCCN1C IYFNEFQTYQPVOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- REZGGXNDEMKIQB-UHFFFAOYSA-N zaprinast Chemical compound CCCOC1=CC=CC=C1C1=NC(=O)C2=NNNC2=N1 REZGGXNDEMKIQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229950005371 zaprinast Drugs 0.000 description 3
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RRBRQNALHKQCAI-UHFFFAOYSA-N Acetildenafil Chemical compound CCCC1=NN(C)C(C(N2)=O)=C1N=C2C(C(=CC=1)OCC)=CC=1C(=O)CN1CCN(CC)CC1 RRBRQNALHKQCAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 108010090254 Growth Differentiation Factor 5 Proteins 0.000 description 2
- 102000012966 Growth Differentiation Factor 5 Human genes 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- GMRQFYUYWCNGIN-NKMMMXOESA-N calcitriol Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@@H](CCCC(C)(C)O)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)C[C@H](O)C1=C GMRQFYUYWCNGIN-NKMMMXOESA-N 0.000 description 2
- 235000020964 calcitriol Nutrition 0.000 description 2
- 239000011612 calcitriol Substances 0.000 description 2
- 210000003010 carpal bone Anatomy 0.000 description 2
- 230000022159 cartilage development Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 2
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 102000003977 fibroblast growth factor 18 Human genes 0.000 description 2
- 108090000370 fibroblast growth factor 18 Proteins 0.000 description 2
- YFHXZQPUBCBNIP-UHFFFAOYSA-N fura-2 Chemical compound CC1=CC=C(N(CC(O)=O)CC(O)=O)C(OCCOC=2C(=CC=3OC(=CC=3C=2)C=2OC(=CN=2)C(O)=O)N(CC(O)=O)CC(O)=O)=C1 YFHXZQPUBCBNIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- TZJALUIVHRYQQB-UHFFFAOYSA-N icariine Natural products C1=CC(OC)=CC=C1C1=C(OC2C(C(O)C(O)C(C)O2)O)C(=O)C2=C(O)C=C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CC=C(C)C)=C2O1 TZJALUIVHRYQQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- -1 milnafil Chemical compound 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 229960002639 sildenafil citrate Drugs 0.000 description 2
- DEIYFTQMQPDXOT-UHFFFAOYSA-N sildenafil citrate Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.CCCC1=NN(C)C(C(N2)=O)=C1N=C2C(C(=CC=1)OCC)=CC=1S(=O)(=O)N1CCN(C)CC1 DEIYFTQMQPDXOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 2
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- ZKMNUMMKYBVTFN-HNNXBMFYSA-N (S)-ropivacaine Chemical compound CCCN1CCCC[C@H]1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C ZKMNUMMKYBVTFN-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- GMRQFYUYWCNGIN-UHFFFAOYSA-N 1,25-Dihydroxy-vitamin D3' Natural products C1CCC2(C)C(C(CCCC(C)(C)O)C)CCC2C1=CC=C1CC(O)CC(O)C1=C GMRQFYUYWCNGIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YIEAVVIJPFEHCX-UHFFFAOYSA-N 5-ethyl-2-[5-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]sulfonyl-2-propoxyphenyl]-7-propyl-4a,7a-dihydro-3H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-one Chemical compound CCCOC1=CC=C(C=C1C1=NC2C(N(CC)C=C2CCC)C(=O)N1)S(=O)(=O)N1CCN(CCO)CC1 YIEAVVIJPFEHCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- QTGIAADRBBLJGA-UHFFFAOYSA-N Articaine Chemical compound CCCNC(C)C(=O)NC=1C(C)=CSC=1C(=O)OC QTGIAADRBBLJGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000010228 Erectile Dysfunction Diseases 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102100035323 Fibroblast growth factor 18 Human genes 0.000 description 1
- OZLGRUXZXMRXGP-UHFFFAOYSA-N Fluo-3 Chemical compound CC1=CC=C(N(CC(O)=O)CC(O)=O)C(OCCOC=2C(=CC=C(C=2)C2=C3C=C(Cl)C(=O)C=C3OC3=CC(O)=C(Cl)C=C32)N(CC(O)=O)CC(O)=O)=C1 OZLGRUXZXMRXGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 1
- 102100035379 Growth/differentiation factor 5 Human genes 0.000 description 1
- 101000878128 Homo sapiens Fibroblast growth factor 18 Proteins 0.000 description 1
- 101001023988 Homo sapiens Growth/differentiation factor 5 Proteins 0.000 description 1
- MJEXYQIZUOHDGY-UHFFFAOYSA-N Homosildenafil Chemical compound CCCC1=NN(C)C(C(N=2)=O)=C1NC=2C(C(=CC=1)OCC)=CC=1S(=O)(=O)N1CCN(CC)CC1 MJEXYQIZUOHDGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TZJALUIVHRYQQB-XFDQAQKOSA-N Icariin Natural products O(C)c1ccc(C2=C(O[C@H]3[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O3)C(=O)c3c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)c(C/C=C(\C)/C)c3O2)cc1 TZJALUIVHRYQQB-XFDQAQKOSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 206010022562 Intermittent claudication Diseases 0.000 description 1
- NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N Lidocaine Chemical compound CCN(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 1
- 208000036110 Neuroinflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 1
- 102000000033 Purinergic Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010080192 Purinergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 235000012545 Vaccinium macrocarpon Nutrition 0.000 description 1
- 235000002118 Vaccinium oxycoccus Nutrition 0.000 description 1
- 244000291414 Vaccinium oxycoccus Species 0.000 description 1
- 102000016913 Voltage-Gated Sodium Channels Human genes 0.000 description 1
- 108010053752 Voltage-Gated Sodium Channels Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- NFSWSZIPXJAYLR-GASCZTMLSA-N aildenafil Chemical compound CCCC1=NN(C)C(C(N=2)=O)=C1NC=2C(C(=CC=1)OCC)=CC=1S(=O)(=O)N1C[C@H](C)N[C@H](C)C1 NFSWSZIPXJAYLR-GASCZTMLSA-N 0.000 description 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 1
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229960003831 articaine Drugs 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940090047 auto-injector Drugs 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 229960005084 calcitriol Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000008355 cartilage degradation Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 229960002023 chloroprocaine Drugs 0.000 description 1
- VDANGULDQQJODZ-UHFFFAOYSA-N chloroprocaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1Cl VDANGULDQQJODZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000024980 claudication Diseases 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 238000002247 constant time method Methods 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 235000004634 cranberry Nutrition 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 239000007933 dermal patch Substances 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000001317 epifluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000001856 erectile effect Effects 0.000 description 1
- 230000008622 extracellular signaling Effects 0.000 description 1
- HJUFTIJOISQSKQ-UHFFFAOYSA-N fenoxycarb Chemical compound C1=CC(OCCNC(=O)OCC)=CC=C1OC1=CC=CC=C1 HJUFTIJOISQSKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 1
- 238000003633 gene expression assay Methods 0.000 description 1
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 238000010842 high-capacity cDNA reverse transcription kit Methods 0.000 description 1
- 210000000003 hoof Anatomy 0.000 description 1
- XPXMKIXDFWLRAA-UHFFFAOYSA-N hydrazinide Chemical compound [NH-]N XPXMKIXDFWLRAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- TZJALUIVHRYQQB-XLRXWWTNSA-N icariin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C1=C(O[C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O2)O)C(=O)C2=C(O)C=C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)C(CC=C(C)C)=C2O1 TZJALUIVHRYQQB-XLRXWWTNSA-N 0.000 description 1
- 201000001881 impotence Diseases 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000006749 inflammatory damage Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229960004194 lidocaine Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 1
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229950002245 mirodenafil Drugs 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- DTAKXJYYAUWRND-CALCHBBNSA-N n-[2-[5-[5-[(3r,5s)-3,5-dimethylpiperazin-1-yl]sulfonyl-2-ethoxyphenyl]-1-methyl-3-propylpyrazolo[4,3-d]pyrimidin-7-yl]oxy-1,3-thiazol-5-yl]-n-methylnitrous amide Chemical compound N1=C(C=2C(=CC=C(C=2)S(=O)(=O)N2C[C@@H](C)N[C@@H](C)C2)OCC)N=C2C(CCC)=NN(C)C2=C1OC1=NC=C(N(C)N=O)S1 DTAKXJYYAUWRND-CALCHBBNSA-N 0.000 description 1
- 230000003959 neuroinflammation Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 229940124624 oral corticosteroid Drugs 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003349 osteoarthritic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 229960001807 prilocaine Drugs 0.000 description 1
- MVFGUOIZUNYYSO-UHFFFAOYSA-N prilocaine Chemical compound CCCNC(C)C(=O)NC1=CC=CC=C1C MVFGUOIZUNYYSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000002601 radiography Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 229960001549 ropivacaine Drugs 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 1
- 208000018320 severe joint pain Diseases 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M sodium bicarbonate Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M sodium octadecanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/53—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with three nitrogens as the only ring hetero atoms, e.g. chlorazanil, melamine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7004—Monosaccharides having only carbon, hydrogen and oxygen atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
Abstract
提供了一种用于马的骨关节炎的新疗法，其涉及向患者施用5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂，例如低剂量的西地那非。优选地，西地那非与局部麻醉剂甲哌卡因和葡萄糖组合。
Description
技术领域
本发明涉及骨关节炎，特别是人和马的骨关节炎的新疗法。
背景技术
骨关节炎(OA)是一种低级的慢性全身性炎症性疾病，由关节软骨和底层骨的破坏引起。该疾病从早期阶段发展为更严重的阶段，早期阶段通常以受影响的关节中基质蛋白的炎症和组织破坏为特征，而更严重的阶段具有底层骨的破坏。主要症状是关节疼痛。骨关节炎是一个主要的临床难题，因为它影响了约3.8％的人口，并且是严重关节痛后的主要疾病。据估计，NSAID止痛药处方中有50％与OA有关。应当指出，骨关节炎是与类风湿性关节炎完全不同的疾病，类风湿性关节炎是一种罕见的自身免疫性疾病。
马的骨关节炎对于马主来说是一个很大的难题。拥有一匹马的主要原因是能够使用它，并且经常用它竞争。OA是不能使用马匹的最常见原因，并且是马匹行业中最大的单一经济损失。
马和人的OA由类似的机制引起。在人和马中，OA从以炎症为特征的早期阶段经过数月和数年发展到具有广泛的组织损伤的晚期阶段(Goldring,M.B.,Otero M.CurrentOpinion in Rheumatology(2011)23(5):471)。人和马的OA疾病机制在分子水平上也非常相似(Stenberg J,Rüetschi U,
E,
J,Lindahl A.Proteome Sci.(2013)Oct 4；11(1):43)(Svala E,
M,Sihlbom C,Rüetschi U,Lindahl A,EkmanS,
E.Connect Tissue Res.(2015)；56(4):315-25)。在炎性软骨细胞中，细胞内钙信号传导增加(
E,Thorfe A,
U,Johansson P,WickelgrenR,Lindahl A,Hansson E.Heliyon.(2018)Feb 1；4(1):e00525)。
如今，人类OA的治疗受限于生活方式的改变(诸如减肥和锻炼)和镇痛药的使用，并且在严重的情况下，还有关节置换手术。糖皮质激素(诸如氢化可的松)的关节注射导致了短期疼痛减轻，这种减轻可持续数周至数月。
可以通过，例如注射糖皮质激素、透明质酸或自体条件血清(ACS)来治疗马的OA。
然而，对于人或马，不存在任何改善疾病的药物。因此，需要OA的改善治疗。
本发明解决了这些和其他问题。
发明内容
本申请的发明人惊奇地发现，5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂，诸如西地那非(sildenafil)或西地那非类似物，尤其是低浓度，可以用于治疗OA。西地那非(CAS编号139755-83-2)通常用于治疗勃起功能障碍，并以
商标出售。令人惊讶地，低剂量的西地那非和西地那非类似物能够抑制细胞内钙信号传导，特别是ATP诱发的细胞内钙信号传导。不受任何理论的束缚，据信西地那非能够实现通过间隙连接的细胞内钙信号传导与由细胞外ATP介导的细胞外信号传导之间的平衡。由于增加的ATP释放和随后的嘌呤能受体的激活，ATP诱发的钙信号传导非常重要。
在本发明的第一方面，提供一种用于治疗骨关节炎的5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂或包含PDE5抑制剂的药物组合物。PDE5抑制剂可以是西地那非或西地那非类似物。西地那非的剂量可以是低剂量，例如0.01mg至10mg，或更优选0.01mg至0.1mg。该剂量优选施用至少一次，更优选至少两次。该剂量可以施用一次、两次或三次。在一个优选的实施方案中，该剂量施用一次，在甚至更优选的实施方案中，施用两次。在一个实施方案中，将PDE5抑制剂注射到受影响的关节中，特别是注射一次、两次或三次。
在一个实施方案中，PDE5抑制剂或西地那非类似物与至少一种选自以下的化合物一起施用：局部麻醉剂和葡萄糖，优选局部麻醉剂和葡萄糖两者。在某些实施方案中，可以用二甲双胍代替葡萄糖。因此，PDE5抑制剂可以与二甲双胍一起施用。
在一个优选的实施方案中，PDE5抑制剂是西地那非，局部麻醉剂是甲哌卡因，西地那非的剂量为0.01mg至0.1mg，葡萄糖的剂量为100mg至1000mg，甲哌卡因的剂量为10mg至200mg。在一个实施方案中，葡萄糖的剂量为150mg至400mg，而甲哌卡因的剂量为10mg至30mg。
在本发明的第二方面，提供一种药物组合物，其包含PDE5抑制剂或西地那非类似物以及葡萄糖和局部麻醉剂中的一种，优选葡萄糖和局部麻醉剂两者，或者PDE5抑制剂、二甲双胍和局部麻醉剂。该药物组合物可以是注射溶液。
在本发明的第三方面，提供一种用于治疗受试者的骨关节炎的方法，该方法包括向所述受试者施用诸如西地那非或西地那非类似物的PDE5抑制剂或包含诸如西地那非或西地那非类似物的PDE5抑制剂的药物组合物。该方法可以包括将PDE5抑制剂或包含PDE5抑制剂的药物组合物注射到受影响的关节中的步骤。PDE5抑制剂可以是西地那非，特别是剂量为0.01mg至10mg的西地那非。
还提供了PDE5抑制剂或西地那非类似物在制备用于治疗骨关节炎的药物中的用途。
附图说明
图1A-E是显示丁哌卡因和西地那非对软骨细胞的治疗作用的图。
图2显示了低剂量的甲哌卡因和葡萄糖对患有OA的马的治疗效果。图2A显示了在用葡萄糖/甲哌卡因治疗后腕关节的临床跛行等级。图2B是显示在用葡萄糖/甲哌卡因(GM)治疗后滑液中COMP新表位浓度降低的图。图2C是显示在用葡萄糖/甲哌卡因治疗后和在康复期间血清中COMP新表位浓度降低的图。
图3显示了西地那非治疗患有OA的马的效果。图3A显示了在用葡萄糖/甲哌卡因/西地那非(GMS)治疗后腕关节的临床跛行等级。图3B是显示在用葡萄糖/甲哌卡因/西地那非(GMS)治疗后滑液中COMP新表位浓度降低的图。图3C是显示在用葡萄糖/甲哌卡因/西地那非(GMS)治疗后和在康复期间血清中COMP新表位浓度降低的图。
图4显示了西地那非治疗患有OA的马的效果。图4A是显示在用葡萄糖/甲哌卡因/西地那非(GMS)治疗之前和之后腕关节的临床跛行等级的图。图4B是显示在用葡萄糖/甲哌卡因/西地那非(GMS)治疗后滑液中COMP新表位浓度降低的图。图4C是显示在用葡萄糖/甲哌卡因/西地那非(GMS)治疗后和在康复期间血清中COMP新表位浓度降低的图。
图5显示了西地那非治疗患有OA的马的效果。图5A是显示在用皮质类固醇或葡萄糖/甲哌卡因/西地那非(GMS)治疗之前和之后的临床跛行等级的图。图5B是显示在用葡萄糖/甲哌卡因/西地那非(GMS)治疗后滑液中COMP新表位浓度降低的图。图5C是显示在用葡萄糖/甲哌卡因/西地那非(GMS)治疗之前和之后和在康复期间血清中COMP新表位的浓度的图。
详细描述
提供了一种骨关节炎的治疗，特别是一种通过减少关节中的炎症，尤其是通过降低关节中的软骨细胞内部和之间的炎症信号传导，比如钙信号传导的治疗。优选地，该治疗具有以下中的至少一种效果：减轻疼痛，诱导关节愈合，基质重新生长和减少炎症。
OA的诊断可以用本领域已知的方法，例如本领域已知的临床检查、放射线照相术进行，或者使用生物标志物，诸如例如WO2017216289中描述的COMP蛋白片段进行，该专利通过引用并入本文。体液例如血清或滑液中COMP片段的存在指示OA，特别是在OA期间的软骨降解。可以通过使用特异性结合包含氨基酸序列N-末端-SGPTH的肽的抗体来检测COMP片段。有关细节参考WO2017216289。因此，在一个实施方案中，如本文所述治疗患者并且检测COMP片段的存在。可以将COMP片段的检测用于追踪患者对治疗的响应如何。
患者可以是人或动物。当患者是动物时，优选地其为马，但是许多不同种类的动物，包括狗、猫和牛都可以从治疗中受益。
提供了PDE5抑制剂，特别是西地那非或西地那非类似物用于治疗骨关节炎的用途。PDE5抑制剂可以选自下组：批准的药物西地那非，阿伐那非(avanafil)，洛地那非(lodenafil)，米罗那非(mirodenafil)，他达拉非(tadalafil)，伐地那非(vardenafil)和乌地那非(udenafil)，其中西地那非是优选的。也可以使用这些物质的修饰变体以及这些物质的类似物(见下文)。目前尚未被批准用作药物但显示PDE5抑制活性的化合物的实例包括：红地那非(hongdenafil)，爱地那非(aildenafil)，苯甲酰胺那非(benzamidenafil)，豪莫西地那非(homosildenafil)，淫羊藿苷(icariin)，亚硝基布洛那非(nitrosoprodenafil)，硫代艾地那非(sulfoaildenafil)和扎普司特(zaprinast)。
PDE5是一种催化cGMP分解的酶，cGMP是细胞中重要的第二信使。PDE5抑制剂可能会与cGMP竞争结合PDE5的活性位点。优选地，PDE5抑制剂是与PDE5蛋白直接相互作用的分子，优选通过与PDE5的cGMP结合口袋结合而直接相互作用。PDE5抑制剂可以是这样一种物质，该物质对PDE5比对cGMP具有更高的亲和力。PDE5抑制剂优选是选择性PDE5抑制剂。
PDE5抑制剂可以通过其体外抑制PDE5的能力来鉴定。例如，在基于细胞的测定中，使用表达PDE5的细胞，或通过使用本领域已知的纯化的PDE5。可以筛选化合物文库以发现他们抑制PDE5的能力。可以筛选的化合物的实例包括WO9428902中公开的化合物。具有抑制PDE5磷酸二酯酶活性的其他化合物描述于例如j.Med.Chem.1993,36:3765ff.和j.Med.Chem.1994,37:2106ff中。cGMP的结构也是设计PDE5抑制剂的合适起点。
在一个实施方案中，将PDE5抑制剂，特别是西地那非用作单一药剂，即作为药物组合物中的单一活性化合物。不将赋形剂看作是活性化合物。
西地那非类似物是一种具有与西地那非相似的结构的化合物，其能够在体外细胞中，特别是在软骨细胞中减少细胞内钙信号传导，特别是由ATP诱发的钙信号传导。如本文所用，“细胞内钙信号传导”是指胞质溶胶中的钙离子从内质网中释放。细胞内钙信号传导可以是ATP诱发的，这意味着它是由向由间隙接合连接的合适细胞的细胞生长培养基中添加ATP引起的。ATP的这种添加将引起细胞内钙的波从细胞内质网释放。因此，西地那非类似物能够抑制这种钙信号传导。优选地，抑制可以在体外，例如在细胞培养中确定。
西地那非类似物可以是或可以不是PDE5抑制剂，因此它们可具有或可不具有抑制PDE5信号传导的能力。可以通过其减少体外钙信号传导的能力，特别是在体外培养的细胞(例如软骨细胞)中ATP诱发的钙信号转导的能力来识别西地那非类似物。可以使用任何合适的方法来评估钙信号传导。方法包括：用于细胞内钙信号传导的高通量筛选系统，例如Flexstation3微孔板读板机(Microplate Reader)，其中将细胞与钙敏感探针一起温育；具有例如Simple PCI软件和倒置落射荧光显微镜的钙成像系统，其中将细胞与钙敏感探针一起温育；具有所采用的软件、倒置落射荧光显微镜和钙敏感探针的SPEX Fluoromax成像系统；具有所采用软件、倒置落射荧光显微镜和钙敏感探针的PTI成像系统。可用的钙敏感探针的实例包括Fluo-3/AM或Fura-2/AM(分子探针，Eugene,Oregon,USA)。
西地那非类似物对钙信号传导的减少可以是50％或更多，70％或更多，或更高，例如80％或更多。
用于测试化合物抑制ATP诱发的钙信号传导能力的合适方案如下：在DMEM中使星形胶质细胞或软骨细胞生长至汇合，从而成为以单层偶联的间隙接合。然后在室温下将细胞与Ca2+敏感的荧光团Fura-2/AM(分子探针,Eugene,OR,USA)一起温育30分钟(990μl HankHEPES缓冲盐水溶液(HHBSS)中为8μl，由溶解于蒸馏水中的137mM NaCl、5.4mM KCl、0.4mMMgSO4、0.4mM MgCl2、1.26mM CaCl2、0.64mM KH2PO4、3.0mM NaHCO3、5.5mM葡萄糖和20mMHEPES组成，pH 7.4)。实验中使用的所有物质均在相同溶液中稀释。将荧光团溶解在40μl二甲基亚砜(DMSO)和10μl的普朗尼克酸中(分子探针，Leiden,The Netherlands)。温育后，将细胞用HHBSS冲洗3次。从实验开始一分钟后，将ATP(10-4M)用作刺激物。使用Ca2+成像系统和简单的软件PCI(Compix Inc.，成像系统，Hamamatsu Photonics ManagementCorporation,Cranberry Twp,PA,USA)和倒置落射荧光显微镜(Nikon ECLIPSE TE2000-E)在室温下进行实验。通过蠕动泵(Instech Laboratories,Plymouth Meeting,PA,USA)以600μl/min的流速提供ATP。用ORCA-12AG相机(C4742-80-12AG)，高分辨率数码冷却的CCD(Hamamatsu Photonics Corporation,Hamamatsu,Japan)捕捉图像。然后确定总的曲线下面积(AUC)，从而反映对所释放的Ca2+的量进行分析，以提供Ca2+响应的测量值。使用Origin程序(Microcal Soft-ware Inc.,Northampton,MA,USA)计算AUC和振幅(峰值)。以合适的浓度添加候选物质，并测试其减少ATP诱导的细胞内钙信号传导的能力。
作为替代方案，可以使用以下设备：通过用于细胞内Ca2+信号传导的高通量筛选系统，Flexstation 3微孔板读板机(Molecular Devices,San José,USA)，将细胞与Ca2+敏感探针FLIPR钙6(Molecular Devices)一起温育，并在实验开始前立即使用ATP(10-4M)(Sigma Aldrich Saint Louis,USA)进行刺激。将细胞内Ca2+释放确定为总的曲线下面积(AUC)，其反映了释放的Ca2+的量。振幅(峰值)表示为最大增加量(Hansson E,
U,
E,
L.J Neuroinflammation(2018)；15:321。https://doi.org/10.1186/s12974-018-1361-8)。
西地那非类似物在结构上类似于西地那非。结构上相似的化合物是相对于西地那非的分子结构具有四个、三个、两个或优选一个取代的化合物。可能的取代包括相对于西地那非的结构，用其他基团替换基团或增加基团。“基团”可以指例如甲基基团或其他烷烃、卤素原子、酰胺或胺，或在药物化学领域中使用的任何其他类型的可用基团。尽管有许多可能的化合物在结构上与西地那非相似，但采用本文所述的方法可以直接验证它们能够在体外减少细胞内钙信号传导。许多PDE5抑制剂，诸如例如伐地那非，在结构上与西地那非相似。以下示出了西地那非和伐地那非的分子结构，显示了它们的不同之处仅在于伐地那非中的氮原子被碳原子取代。
合适的西地那非类似物可以包括阿伐那非、洛地那非、米罗那非、他达拉非、伐地那非和乌地那非、红地那非、爱地那非、豪莫西地那非、亚硝基布洛那非、硫代艾地那非和扎普司特。
施用途径
PDE5抑制剂或西地那非类似物可以以任何合适的方式施用，包括口服、局部、静脉内、皮内、或关节内、肌肉内、鼻内或施用到脑脊液中。
在一个优选的实施方案中，将PDE5抑制剂或西地那非类似物局部递送到受影响的关节。在一个甚至更优选的实施方案中，该制剂被关节内递送，特别是通过一种或多种关节内注射剂递送到受影响的关节中，即注射到关节中。
PDE5抑制剂或西地那非类似物可以通过经由例如透皮施用的局部施用来施用。就简单性和从患者舒适性的角度而言，透皮制剂是特别有利的。例如，它可以采取透皮贴剂的形式。
在一个实施方案中，递送PDE5抑制剂或西地那非类似物，从而实现PDE5抑制剂的至少一些全身分布。这可以通过药物在体内扩散的局部施用或全身施用来实现，例如口服施用或静脉内施用。
除了上述提及的施用方法外，肠胃外、鼻内和直肠施用以及通过吸入施用也可能是有用的。
根据本发明的PDE5抑制剂或西地那非类似物的施用时间将取决于所用的制剂和/或施用途径。
当PDE5抑制剂或西地那非类似物通过局部注射施用时，可以进行一次或多次注射。合适的注射次数可以是一次、两次、三次或更多次。可以以2至60天，更优选5至30天，甚至更优选8至25天，最优选10至18天的间隔进行多次注射。可以使用WO2017216289中描述的COMP片段的测量，例如通过监测血清或滑液中COMP片段的存在，来监测关节的恢复。可以使用本领域中已知的其他方法，例如放射学。
通常，向有此需要的患者提供药理学有效量的PDE5抑制剂或西地那非类似物。可以在常规实验中确定化合物的合适剂量范围。该剂量可能低于用于治疗勃起功能障碍的西地那非剂量(通常为约100mg)。给予马的每次施用西地那非的剂量可以是0.001mg至1000mg，特别是0.01mg至10mg，特别是0.01mg至1mg，特别是0.01mg至0.1mg，最优选地是0.01mg至0.05mg或0.01mg至0.03mg。因此，剂量可以是至少0.001mg，或至少0.01mg，或至少0.1mg，或至少1mg，或至少10mg。特别是在局部施用的情况下，例如当使用关节内注射时，给予人的剂量大致相同。可替代地，将大约为给予马的剂量的五分之一的较低剂量给予人。
该剂量可以施用一次，但是也可以施用适当的次数，例如一次、两次、三次或更多次。该剂量可以施用至少一次或更优选地至少两次。在一个优选的实施方案中，该剂量施用一次，在甚至更优选的实施方案中，该剂量施用两次。
PDE5抑制剂或西地那非类似物可以与一种或多种其他药剂联合用于治疗骨关节炎。优选地，PDE5抑制剂或西地那非类似物与局部麻醉剂或葡萄糖或两者组合。局部麻醉剂可以是与电压门控钠通道的细胞内部分结合并阻断钠流入神经细胞的化合物。实例包括丁哌卡因、甲哌卡因、利多卡因、丙胺卡因、罗哌卡因、氯普鲁卡因和阿替卡因。局部麻醉剂可以是氨基酰胺类型或氨基酯类型的局部麻醉剂。在优选的实施方案中，制剂中包括局部麻醉剂和葡萄糖。
局部麻醉剂的剂量可以是低剂量。剂量可以如此低以至于无法实现对与局部麻醉剂相关联的电压门控通道的正常抑制。当使用甲哌卡因时，一次施用的剂量可以是1mg至1000mg，特别是5mg至200mg，甚至更优选地是8mg至100mg，最优选地是10mg至30mg。一次施用的葡萄糖的剂量可以是10mg至10000mg，特别是100mg至1000mg，其中150mg至400mg是甚至更优选的范围。
在一个实施方案中，将低剂量的局部麻醉剂(例如甲哌卡因)与葡萄糖(或二甲双胍)一起施用，但不含PDE5抑制剂或西地那非类似物。如本文所述，优选通过注射施用，甚至更优选通过关节内注射施用。局部麻醉剂的剂量可以是1mg至1000mg，特别是5mg至200mg，甚至更优选地是8mg至100mg并且最优选地是10mg至30mg。因此，药物组合物可以仅包含局部麻醉剂和葡萄糖。注射可以进行一次、两次、三次或更多次，其中每次注射之间间隔5至30天，更优选10至18天，。对于患有早期骨关节炎的患者，特别是马，这种治疗可能是优选的。
在一个实施方案中，通过关节内注射将以优选0.01mg至0.1mg的剂量的PDE5抑制剂或西地那非类似物(优选西地那非)，与优选10mg至200mg的剂量的局部麻醉剂(优选甲哌卡因)一起，以及与优选100mg至1000mg的剂量的葡萄糖一起施用。该剂量可以施用一次，但也可以施用多次，例如2、3、4或5次或更多次，其中优选2或3次，最优选2次。在一个优选的实施方案中，注射进行1、2或3次。该剂量可以至少施用一次，或更优选至少两次。
当给予多次剂量时，合适的剂量间隔是2至60天，更优选5至30天，甚至更优选8至25天，最优选10至18天。
如上所述，可以通过测量COMP片段的存在或其他手段来监测治疗后和治疗期间从OA的恢复。
如本领域中已知的那样进行关节内注射。可以用任何合适的技术进行注射，例如一次性注射器和针头、自动注射器、注射笔或输液泵。适用于马关节内注射的针头的实例是0.90x40 mm或70mm(20G x11/2”)，0.80x40mm(21G x11/2”)和用于注入非常大的关节的脊椎穿刺针120mm x152/200mm(18G x6.00”)。
注射适当体积的注射溶液，其中用于马的体积通常比用于人的体积更大。
药物组合物
PDE5抑制剂或西地那非类似物可以包含在合适的药物组合物中。通常，该组合物应适合于施用方式，并且包含PDE5抑制剂或西地那非类似物的各种组合物是本领域已知的。该组合物合适地包含治疗有效量的PDE5抑制剂以及合适量的载体或媒介，以便提供适合于向患者施用的形式。该组合物可以具有固体、半固体、凝胶状或水凝胶状，液体，并且可以是片剂、液体、注射溶液、悬浮液、粉剂、胶囊剂、缓释形式、皮肤贴剂、凝胶、霜剂、软膏、喷雾剂或气雾剂的形式。
组合物可以例如包含一种或多种药理学上可接受的赋形剂，包括本领域已知的载体、稀释剂、稳定剂、填充剂、崩解剂、防腐剂、胶凝或增稠剂、控释剂。可以在组合物中使用的化合物的实例包括：淀粉，纤维素和纤维素衍生物，明胶，硅胶，碳酸镁，硬脂酸镁，硬脂酸钠，单硬脂酸甘油酯，滑石粉，氯化钠，甘油，乙二醇，水和乙醇。
西地那非的经口制剂是本领域已知的，例如
制剂。为了制备用于经口施用的其他制剂，参考《药物剂型：片剂》，第1-3卷，H A Lieberman等人编辑，Marcel Dekker，New York and Basel，1989-1990(Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets.Vol.1-3,H ALieberman et al.,Eds.Marcel Dekker,New York and Basel,1989-1990)。尤其是特别参考第7章(Special Tablets,JW Conine和M J Pikal)、第8章(Chewable Tablets,R WMendes,OA Anaebonam和J B Daruwala)和第9章(Medicated Lozenges；D Peters)。可以以药学上可接受的盐提供PDE5抑制剂。可以例如以柠檬酸西地那非提供西地那非。
包含西地那非的注射溶液在本领域中也是已知的。包含西地那非的注射溶液的一个实例是
注射溶液优选为水性溶液。注射溶液可以包含以下药理学上可接受的试剂中的一种或多种：PH调节剂，盐水，渗透压控制剂，稳定剂，防腐剂，螯合剂，增溶剂，抗菌剂和乳化剂。注射溶液可以例如仅包含PDE5抑制剂(例如西地那非)和药理学级的水，以及任选地防腐剂。注射溶液还可以包含局部麻醉剂和葡萄糖中的一种或两种。
注射溶液优选是无菌的和等渗的。可以在诸如小瓶的容器中，比如注射小瓶、小药囊或药筒中提供注射溶液。可以在用于单次使用的注射装置中，比如自动注射装置或注射笔提供用于注射的溶液。用于注射的溶液可以预先混合或为例如通过添加药理学上可接受的水来重构的形式。
当制剂是用于例如通过注射的局部递送的制剂时，它还可以优选包含葡萄糖和局部麻醉剂之一。
在上述的一个实施方案中，该制剂仅包含葡萄糖和局部麻醉剂。当制剂仅包含局部麻醉剂和葡萄糖作为活性药剂时，该制剂优选是注射溶液。
特别是在施用低剂量西地那非的情况下，注射溶液中西地那非或西地那非类似物的优选浓度为0.001mg/ml至0.1mg/ml，更优选为0.001mg/ml至0.01mg/ml。局部麻醉剂(例如甲哌卡因)的优选浓度为0.1mg/ml至50mg/ml，更优选为1mg/ml至5mg/ml。葡萄糖的优选浓度为1mg/ml至200mg/ml，更优选为10mg/ml至100mg/ml。在施用更高剂量的情况下，这些物质的浓度可以更高。制剂中西地那非比甲哌卡因比葡萄糖的浓度比优选为0.001：1：10。
包含西地那非的制剂描述于WO 02/060449和WO 02/062343中。西地那非的合成描述于EP463756和US5250534中。在美国专利7,501,409中描述了阿伐那非的合成。
实施例1-分离的软骨细胞中炎症减少
体外实验表明，用低浓度局部麻醉剂丁哌卡因对马软骨细胞的治疗降低了细胞内钙信号传导，并上调了对于软骨生成至关重要的生长因子。低浓度西地那非的添加增加了效果。
在用于检测细胞内Ca2+随时间变化的基于荧光的测定法中，用ATP(10-4M)刺激来自OA马的马软骨细胞。在整个培养期间，将细胞在5.5mM葡萄糖中培养。在将细胞与二甲双胍(1mM)和丁哌卡因(10-12M)温育24小时后，测量Ca2+响应。对照是未经处理的软骨细胞。计算每个Ca2+瞬变(transient)的Ca2+峰下面积(AUC)(图1A)，并将振幅(峰值)(图1B)表示为最大增加量。从4个实验中获得细胞，每个实验中有四个孔。使用单因素方差分析(one-wayANOVA)分析显著性水平，然后进行Dunnett的多重比较检验。**P<0.01，**P<0.001。对于人软骨细胞获得了相似的数据。
材料和方法
细胞模型系统-软骨细胞的分离和培养
在安乐死的24小时内，从六匹马(1至8岁)的中间腕关节获得关节软骨样品。三匹马的宏观关节表面正常，三匹马的中间腕骨的辐关节面中有轻度的结构性OA。由于与这项研究无关的原因，对这些马匹实施了安乐死，瑞典斯德哥尔摩市动物实验伦理委员会(Ethical Committee on Animal Experiments,Stockholm,Sweden)批准了该研究方案(Dnr:N378/12)。
无菌准备后，用解剖刀切开第三腕骨的辐关节面背侧的软骨，并用钳子收集全厚度的软骨样品。将组织置于含有硫酸庆大霉素(50mg/l)和两性霉素B(250μg/ml)的无菌盐水(0.9％NaCl)溶液中。将软骨样品冷藏(约5℃)运输到实验室。如先前所述进行软骨细胞的分离和扩增(Ley C,Svala E,Nilton A,Lindahl A,Eloranta M,Ekman S,
E.Connect Tissue Res.(2011)；52(4):290-300)。在第1代中扩增细胞，并将细胞以20000个细胞/cm2的浓度接种在维持表型的软骨形成培养基中达5天直至汇合，所述培养基为补充有14μg/ml抗坏血酸(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO，USA)、10-7M地塞米松(Sigma-Aldrich)、1mg/ml人血清白蛋白(Equitech Bio，Kerville，TX，USA)、1×胰岛素-转铁蛋白-硒(Gibco，Life Technologies，Carlsbad，CA，USA)、5μg/ml亚油酸(Sigma-Aldrich)、1×青霉素-链霉素(PEST)(Sigma-Aldrich)和10ng/ml人转化生长因子(TGF)β-1(R&DSystems，Abingdon，UK)的高糖DMEM(DMEM-HG)(Thermo Fisher Scientific；Waltham，MA，USA)，，在96孔培养板中检测Ca2+或在6孔培养板中进行免疫印迹分析。
为了恢复，在培养的第4天将细胞与二甲双胍和丁哌卡因一起培养24小时。在第5天，进行Ca2+测量，收集培养基用于免疫印迹分析，收获细胞并在分析前立即在-80℃下冷冻。
为了进行抗炎恢复，将细胞与药理物质的不同组合温育24小时。
药物恢复
进行恢复，以便将细胞与药物物质1mM二甲双胍(Sigma Aldrich，St.Louis，MO，USA)温育24小时。药物物质包括：丁哌卡因(Marcain，麻卡因)(Astra Zeneca,
Sweden)(10-12M)(Block L,
P,
U,Westerlund A,Biber B,HanssonE.Eur.J.Neurosci.(2013)；38:3669-3678)，柠檬酸西地那非盐(Sigma Aldrich)(1μM)(Nunes AKS,Raposo C,
U,
MA,Peixoto CA,Hansson E,Neurosci.Lett.(2016)；630:59-65)和1α,25-二羟基维生素D3(骨化三醇，calcitriol)(Sigma-Aldrich)(100nM)(Li F,Zhang A,Shi Y,Ma Y,Du Y.Int.J.Mol.Med.(2015)；36:967-974)。在各个实验开始之前，将细胞培养物与上述物质一起温育24小时。
钙成像
借助用于细胞内和细胞外Ca2+信号传导的高通量筛选系统，Flexstation 3微孔板读板机(Molecular Devices,San José,USA)，，将细胞用Ca2+敏感探针FLIPR钙6(MolecularDevices)进行温育并用不同的神经递质暴露；5-HT(10-5M)或ATP(10-4M)均来自SigmaAldrich(Saint Louis，USA)。
收获单层软骨细胞用于RNA分析
将旨在用于RNA分离的细胞(人软骨细胞)用无菌PBS洗涤两次，然后在裂解缓冲液(Qiagen)中添加1M DL-二硫苏糖醇溶液(Sigma Aldrich)。在转移到无RNA酶、无内毒素的样品管中之前，目测检查细胞以确保裂解，在液氮中速冻，并在-80℃下储存以用于RNA分离。使用市售试剂盒(Rneasy迷你试剂盒，Qiagen)按照制造商的规程，提取并纯化总RNA。简而言之，在添加70％乙醇(1∶1)之前，将裂解缓冲液中的细胞解冻并涡旋1分钟。将样品混合后添加到旋转柱中，进行离心。然后洗涤该柱，然后用DNase(Qiagen)移除基因组DNA。用严格的洗涤缓冲液(stringent wash buffer)重复洗涤步骤，然后用温和的缓冲液洗涤膜结合的RNA。总RNA用50μl无RNase的水洗脱。用微量分光光度计(ND-1000分光光度计，NanoDrop Technologies，Wilmington，DE)测量RNA浓度，并使用Agilent2100生物分析仪系统(Agilent Technologies Inc，Palo Alto，CA)评估RNA质量。
定量实时聚合酶链反应分析
使用高容量cDNA反转录试剂盒(Applied Biosystems,Foster City,CA,USA)由总RNA制备cDNA。使用全部购自Applied Biosystems的可商购TaqMan基因表达测定(成纤维细胞生长因子18(FGF-18)和生长分化因子5(GDF-5))。一式两份分析样品。将相对比较CT方法用于分析实时聚合酶链反应(PCR)数据。
分析反映释放的Ca2+的量(Berridge MJ.Biochem.Soc.Symp.(2007)；74:1-7)的总曲线下面积(AUC)以测量Ca2+响应。将振幅(峰值)表示为最大增加量。
总之，图1A-B中所示的数据表明低浓度丁哌卡因与二甲双胍一起将炎性骨关节炎软骨细胞中的细胞内Ca2+释放降低至生理水平。西地那非增加了该效果。D3本身没有作用(图1E)。
图1C-D表明丁哌卡因和西地那非的治疗如何上调对于在人类软骨细胞中产生至关重要的生长因子GDF5和FGF18。
实施例2
注射溶液的制备如下：
1ml甲哌卡因，20mg/ml＝20mg
4ml葡萄糖50mg/ml＝200mg
5ml无菌H2O
甲哌卡因的终浓度为2mg/ml。葡萄糖的终浓度为20mg/ml。
在下面的实施例4-6中，将10ml用作通过关节内注射施用至1-3号马的剂量(在图2-4中用GM表示)。
实施例3
注射溶液的制备如下：
将
(0.8mg/ml西地那非)在无菌水中稀释200倍以获得0.004mg/ml。将5ml的该溶液(0.02mg西地那非)与以下混合：
1ml甲哌卡因，20mg/ml＝20mg葡萄糖。
4ml葡萄糖50mg/ml＝200mg葡萄糖。
得到10ml。
终浓度为：西地那非：0.002mg/ml，甲哌卡因：2mg/ml，葡萄糖：20mg/ml。
将10ml(西地那非：0.02mg，甲哌卡因：20mg，葡萄糖200mg)用作实施例4-6中通过关节内注射给予2-4号马的剂量(在图2-5中用GMS表示)。
实施例4–1号马
1号马是一匹瑞典温血马，母马，生于2006年。这是一匹骑术学校的马，于2018年1月4日在两个球节中被诊断出双侧跛行。该马用关节内透明质酸(HA)和口服皮质类固醇治疗。在第二次探视之后，跛行加重，然后该马用实施例1的10ml葡萄糖/甲哌卡因(GM)关节内注射溶液治疗。再次检查时，该马是非跛行的，但仍使用相同类型的注射溶液再一次治疗。自从第一次接受GM治疗以来，这匹马是非跛行的，并且在所有复查中都完全是非跛行的。这匹马在骑术学校重新工作，状况良好。
一位兽医进行了用屈曲试验的跛行检查和治疗，其结果如图2A所示。
在图2B和2C所示的时间点从该马中提取滑液和血清样品。滑液和血清中COMP表位浓度的分析根据WO2017216289进行，分别示于图2B和2C中。COMP表位的存在表明关节中正在进行的炎症和组织损伤。
如图2A中所见，用低浓度的局部麻醉剂与葡萄糖一起治疗引起临床恢复，这与如图2B和2C所示的COMP水平降低至正常生理水平相关。
实施例5-2号马
2号马是标准竞赛用马(trotter)，公马，生于2012年。自2016年8月以来，该马跛行严重，伴有腕关节骨关节炎。自2016年8月以来，其腕关节内多次用10ml葡萄糖/甲哌卡因(根据实施例1)关节内注射溶液治疗，被认为治疗失败。
他于2018年6月12日和25日在相同关节内接受两次关节内10ml葡萄糖/甲哌卡因/西地那非的关节内注射溶液(如实施例3所述)，并于2018年10月完全恢复，临床检查未见跛行。这匹公马在2018年8月和9月的快跑赛中进行了比赛，然后在比赛中获得第2、5和2名，表明已完全恢复。
一位兽医进行了用屈曲试验的跛行检查和治疗，其结果如图3A所示。
滑液和血清中COMP表位浓度的分析如实施例4所述进行，并分别示于图3A和3B中。
如图3A所示，将西地那非添加到治疗中导致临床恢复，这与如图3B和3C所示的COMP水平降低至正常生理水平相关。
实施例6-3号马
3号马是标准竞赛用马，母马，生于2012年。三岁时，她的两个腕关节第一次跛行。从那时起，在两个腕关节内，用葡萄糖/甲哌卡因关节内对其治疗了17次，并被认为治疗失败。
在2018年5月，她的两个腕关节接受与实施例5相同的葡萄糖/甲哌卡因/西地那非的关节内注射。这匹马现在在2018年5月和2018年9月的跛行检查中均为非跛行，并此后一直定期比赛。
如实施例4所述进行滑液和血清中COMP表位浓度的分析。来自临床跛行检查和COMP水平的数据示于图4A-C中。如图4A所示，将西地那非添加到治疗中导致临床恢复，这与COMP水平降低有关，如图4B和4C所示。
实施例7-4号马
4号马是小型马，阉马，在右蹄关节处严重跛行，并伴有经磁共振成像(MRI)诊断的骨关节炎。自2018年4月以来，已用皮质类固醇的关节内注射对这匹马进行了3次治疗，但跛行等级未降低。在2018年6月和7月，这匹马接受葡萄糖/甲哌卡因/西地那非(GMS)的治疗，之后是非跛行的(图5A)。首次用GMS治疗后，滑液和血清中COMP新表位的浓度明显降低(图5B和5C)。如实施例4中所述进行滑液和血清中COMP表位浓度的分析。
尽管已经参考特定的示例性实施例描述了本发明，但是该描述一般仅旨在说明发明构思，而不应视为限制本发明的范围。本发明总体上由权利要求限定。
Claims (13)
1.能够降低ATP诱发的细胞内钙信号传导的西地那非或西地那非类似物，用于治疗马的骨关节炎，其中剂量为0.01mg至0.1mg，并且其中所述剂量施用至少一次。
2.根据权利要求1所述的用途的能够降低ATP诱发的细胞内钙信号传导的西地那非或西地那非类似物，其中将西地那非或西地那非类似物注射到受影响的关节中。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的用途的能够降低ATP诱发的细胞内钙信号传导的西地那非或西地那非类似物，其中所述剂量施用一次、两次或三次。
4.根据权利要求3所述的用途的能够降低ATP诱发的细胞内钙信号传导的西地那非或西地那非类似物，其中所述剂量施用两次。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的用途的能够降低ATP诱发的细胞内钙信号传导的西地那非或西地那非类似物，其中西地那非或西地那非类似物与选自以下的至少一种化合物一起施用：局部麻醉剂和葡萄糖。
6.根据权利要求5所述的用途的能够降低ATP诱发的细胞内钙信号传导的西地那非或西地那非类似物，其中西地那非或西地那非类似物与局部麻醉剂和葡萄糖一起施用。
7.根据权利要求6所述的用途的能够降低ATP诱发的细胞内钙信号传导的西地那非或西地那非类似物，其中所述局部麻醉剂为甲哌卡因，葡萄糖的剂量为100mg至1000mg，甲哌卡因的剂量为10mg至200mg。
8.根据权利要求7所述的用途的能够降低ATP诱发的细胞内钙信号传导的西地那非或西地那非类似物，其中葡萄糖的剂量为150mg至400mg，甲哌卡因的剂量为10mg至30mg。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的能够降低ATP诱发的细胞内钙信号传导的西地那非或西地那非类似物，其中能够降低ATP诱发的细胞内信号传导的西地那非或西地那非类似物为西地那非。
10.一种药物，其包含能够降低ATP诱发的细胞内钙信号传导的西地那非或西地那非类似物，以及葡萄糖和局部麻醉剂中的一种。
11.根据权利要求10所述的药物，其包含葡萄糖和局部麻醉剂两者。
12.根据权利要求10或11中任一项所述的药物，其是注射溶液。
13.根据权利要求10至12中任一项所述的药物，其用于治疗马的骨关节炎。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE1851333A SE542968C2 (en) | 2018-10-26 | 2018-10-26 | Treatment of osteoarthritis |
| SE1851333-3 | 2018-10-26 | ||
| PCT/EP2019/079170 WO2020084113A1 (en) | 2018-10-26 | 2019-10-25 | Sildenafil for use in the treatment of osteoarthritis in horses |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113271949A true CN113271949A (zh) | 2021-08-17 |
Family
ID=68503074
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201980086589.2A Pending CN113271949A (zh) | 2018-10-26 | 2019-10-25 | 用于治疗骨关节炎的西地那非 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20210386744A1 (zh) |
| EP (2) | EP3870180B1 (zh) |
| JP (1) | JP2022512258A (zh) |
| KR (1) | KR20210084565A (zh) |
| CN (1) | CN113271949A (zh) |
| AU (1) | AU2019365117A1 (zh) |
| CA (1) | CA3117747A1 (zh) |
| ES (1) | ES2967812T3 (zh) |
| SE (1) | SE542968C2 (zh) |
| WO (1) | WO2020084113A1 (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE2150815A1 (en) | 2021-06-23 | 2022-12-24 | SGPTH Life Science AB | Biglycan peptide and antibodies |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090131442A1 (en) * | 2007-11-16 | 2009-05-21 | Joseph Bernstein | Method of Treating Bone Pain Caused by Osteoarthritis |
| CN103068394A (zh) * | 2010-04-15 | 2013-04-24 | 皇家学习促进学会/麦吉尔大学 | 对于疼痛的局部治疗 |
| WO2013122855A1 (en) * | 2012-02-14 | 2013-08-22 | University Of Rochester | Methods of increasing lymphatic transport |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5250534A (en) | 1990-06-20 | 1993-10-05 | Pfizer Inc. | Pyrazolopyrimidinone antianginal agents |
| GB9013750D0 (en) | 1990-06-20 | 1990-08-08 | Pfizer Ltd | Therapeutic agents |
| GB9311920D0 (en) | 1993-06-09 | 1993-07-28 | Pfizer Ltd | Therapeutic agents |
| AU739384B2 (en) * | 1997-07-02 | 2001-10-11 | Euro-Celtique S.A. | Prolonged anesthesia in joints and body spaces |
| TWI223598B (en) * | 1998-06-22 | 2004-11-11 | Pfizer Ireland Pharmaceuticals | An intranasal pharmaceutical composition for the treatment of male erectile dysfunction or female sexual disorders, an intranasal delivery system or device and sildenafil mesylate |
| CN1264574C (zh) | 2000-09-06 | 2006-07-19 | 田边制药株式会社 | 口服制剂 |
| WO2002060449A2 (de) | 2001-01-31 | 2002-08-08 | Merck Patent Gmbh | Pharmazeutische formulierung enthaltend pyrazolo[4,3-d]pyrimidine und nitrate oder thienopyrimidine und nitrate |
| KR20030071880A (ko) | 2001-02-02 | 2003-09-06 | 메르크 파텐트 게엠베하 | 피라졸로[４,３-ｄ]피리미딘과 엔도델린 수용체 길항제또는 티에노피리미딘과 엔도델린 수용체 길항제를포함하여 이루어지는 약제학적 조성물 |
| DE10118306A1 (de) * | 2001-04-12 | 2002-10-17 | Bayer Ag | Imidazotriazinonhaltige Zusammensetzungen zur nasalen Applikation |
| US20080152640A1 (en) * | 2003-07-29 | 2008-06-26 | Peter Prehm | Means and Methods For Treating a Disease Which is Associated With an Excess Transport of Hyaluronan Across a Lipid Bilayer |
| EP3472199B1 (en) | 2016-06-16 | 2023-11-01 | SGPTH Life Science AB | Comp- peptide and antibodies thereto for diagnosing osteoarthritis |
-
2018
- 2018-10-26 SE SE1851333A patent/SE542968C2/en unknown
-
2019
- 2019-10-25 JP JP2021547903A patent/JP2022512258A/ja active Pending
- 2019-10-25 CN CN201980086589.2A patent/CN113271949A/zh active Pending
- 2019-10-25 EP EP19801226.2A patent/EP3870180B1/en active Active
- 2019-10-25 US US17/288,609 patent/US20210386744A1/en active Pending
- 2019-10-25 ES ES19801226T patent/ES2967812T3/es active Active
- 2019-10-25 KR KR1020217015982A patent/KR20210084565A/ko not_active Application Discontinuation
- 2019-10-25 AU AU2019365117A patent/AU2019365117A1/en active Pending
- 2019-10-25 WO PCT/EP2019/079170 patent/WO2020084113A1/en active Search and Examination
- 2019-10-25 CA CA3117747A patent/CA3117747A1/en active Pending
- 2019-10-25 EP EP23202770.6A patent/EP4282477A3/en active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090131442A1 (en) * | 2007-11-16 | 2009-05-21 | Joseph Bernstein | Method of Treating Bone Pain Caused by Osteoarthritis |
| CN103068394A (zh) * | 2010-04-15 | 2013-04-24 | 皇家学习促进学会/麦吉尔大学 | 对于疼痛的局部治疗 |
| WO2013122855A1 (en) * | 2012-02-14 | 2013-08-22 | University Of Rochester | Methods of increasing lymphatic transport |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| FAOI HASSAN等: "The effectiveness of prolotherapy in treating knee osteoarthritis in adults: a systematic review", BRITISH MEDICAL BULLETIN, vol. 122, no. 1, pages 7 * |
| MIGLLORE ALBERTO等: "Comparative, double-blind , controlled study of intra-articular hyaluronic acid (HyalubrixA ) injections versus local anesthetic in osteoarthritis of the hip", ARTHRITIS RESEARCH AND THERAPY, vol. 11, no. 6, pages 2 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2967812T3 (es) | 2024-05-03 |
| KR20210084565A (ko) | 2021-07-07 |
| EP3870180C0 (en) | 2023-11-22 |
| EP3870180A1 (en) | 2021-09-01 |
| US20210386744A1 (en) | 2021-12-16 |
| EP3870180B1 (en) | 2023-11-22 |
| WO2020084113A8 (en) | 2021-05-27 |
| EP4282477A3 (en) | 2024-02-21 |
| AU2019365117A1 (en) | 2021-06-10 |
| SE1851333A1 (en) | 2020-04-27 |
| SE542968C2 (en) | 2020-09-22 |
| EP4282477A2 (en) | 2023-11-29 |
| WO2020084113A1 (en) | 2020-04-30 |
| CA3117747A1 (en) | 2020-04-30 |
| JP2022512258A (ja) | 2022-02-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Distler et al. | Systemic sclerosis and localized scleroderma—current concepts and novel targets for therapy | |
| RU2746000C2 (ru) | Состав для ингибирования образования агонистов 5-ht2b и способы его применения | |
| Chevalier et al. | Safety study of intraarticular injection of interleukin 1 receptor antagonist in patients with painful knee osteoarthritis: a multicenter study. | |
| EP3043789B1 (en) | Use of a ppar-delta agonists for treating muscle atrophy | |
| Chen et al. | Steady augmentation of anti-osteoarthritic actions of rapamycin by liposome-encapsulation in collaboration with low-intensity pulsed ultrasound | |
| ES2425482T3 (es) | Antagonista del receptor de angiotensina II para el tratamiento de enfermedades sistémicas en gatos | |
| EP1482962A2 (en) | Method of treating trx mediated diseases | |
| NZ531693A (en) | Method for reducing hypertension and heart failure | |
| US6696480B2 (en) | Upregulation of type III endothelial cell nitric oxide synthase by agents that disrupt actin cytoskeletal organization | |
| US20150164901A1 (en) | Compounds, compositions and methods for treating or preventing neurodegenerative disorders | |
| US20110009412A1 (en) | Macrophage migration inhibitory factor antagonists and methods of using same | |
| CA3034257A1 (en) | Compositions and methods for treatment of prostate cancer | |
| EP3132803B1 (en) | Preventive or therapeutic agent for pain associated with herpes zoster in acute phase | |
| CN113271949A (zh) | 用于治疗骨关节炎的西地那非 | |
| Chen et al. | Experimental study on the inhibition of RANKL-induced osteoclast differentiation in vitro by metformin hydrochloride | |
| KR20080108156A (ko) | 유기 화합물의 조합물 | |
| US20100260772A1 (en) | Methods for treating or preventing diseases associated with low bone mass | |
| CN112206324B (zh) | Fhl2在制备治疗多囊卵巢综合征排卵障碍药物中的应用 | |
| US20100216778A1 (en) | Pain remedy containing rock inhibitor | |
| KR20210062023A (ko) | Crac 억제제 및 코르티코스테로이드를 포함하는 조성물 및 그의 사용 방법 | |
| Kjaer et al. | Glucagon-like peptide-2 analogue ZP1849 augments colonic anastomotic wound healing | |
| JP2020530462A (ja) | 治療製剤およびその使用 | |
| WO2015028673A1 (en) | Cav3 CHANNEL BLOCKING AGENT FOR PAIN TREATMENT | |
| WO2023182342A1 (ja) | 骨格筋増強剤 | |
| Vigil | The Role of Aconitate Decarboxylase 1 in Inflammation and Disease |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |