KR20210084565A - 골관절염의 치료에 사용하기 위한 실데나필 - Google Patents

골관절염의 치료에 사용하기 위한 실데나필 Download PDF

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Abstract

말의 골관절염의 신규한 치료가 제공되며, 이는 환자에게 포스포디에스테라제 5형(PDE5) 억제제, 예를 들어 실데나필을 저용량으로 투여하는 것을 포함한다. 바람직하게는, 실데나필은 국소마취제 메피바카인 및 글루코스와 조합된다.

Description

골관절염의 치료에 사용하기 위한 실데나필
본 발명은 골관절염, 특히 인간 및 말의 골관절염의 신규한 치료에 관한 것이다.
골관절염(OA)은 관절 연골 및 하부골의 파괴로 인한 저등급 만성 전신 염증성 질환이다. 상기 질환은 종종 감염된 관절의 기질 단백질의 염증 및 해체를 특징으로 하는 초기 단계에서 하부골이 손상되는 중증 단계로 진행한다. 주요 증상은 관절통이다. 골관절염은 인구의 약 3.8%에 영향을 미치는 주요 임상 문제이며, 중증 관절통의 원인이 되는 주요 질환이다. NSAID 진통제 처방의 50%가 OA와 관련이 있는 것으로 추정된다. 골관절염은 희귀 자가면역 질환인 류머티스성 관절염과는 완전히 상이한 것임을 유의해야 한다.
말의 골관절염은 말의 소유자에게 큰 문제이다. 말을 소유하는 주된 이유는 말을 사용하고 종종 말을 경쟁시키는 것이다. OA는 말을 사용하지 못하는 가장 빈번한 이유이며 말 산업에서 가장 큰 단일 경제 손실을 차지한다.
말 및 인간의 OA는 유사한 메커니즘에 의해 유발된다. 인간과 말 모두에서 OA는 수 개월 및 수 년간에 걸친 염증을 특징으로 하는 초기 단계에서 광범위한 조직 손상의 후기 단계로 진행한다(Goldring, M.B., Otero M. Current Opinion in Rheumatology (2011) 23(5):471). 인간 및 말의 OA 질환 메커니즘은 분자 수준에서도 매우 유사하다(Stenberg J, Rueetschi U, Skioeldebrand E, Kaerrholm J, Lindahl A. Proteome Sci. (2013) Oct 4;11(1):43) (Svala E, Loefgren M, Sihlbom C, Rueetschi U, Lindahl A, Ekman S, Skioeldebrand E. Connect Tissue Res. (2015);56(4):315-25). 염증성 연골세포에서 세포내 칼슘 신호전달이 증가한다(Skioeldebrand E, Thorfe A, Bjoerklund U, Johansson P, Wickelgren R, Lindahl A, Hansson E. Heliyon. (2018) Feb 1;4(1):e00525).
오늘날 인간의 OA 치료는 생활 방식의 변화(예컨대 체중 감소 및 운동) 및 진통제 사용, 및 중증의 경우 관절 대체 수술로 한정된다. 글루코코르티코이드(예컨대 히드로코르티손)의 관절 주사는 수 주 내지 수 개월 지속될 수 있는 단기 통증 완화로 이어진다.
말의 OA는 예를 들어 글루코코르티코이드, 히알루론산 또는 자가 배양 혈청(ACS)의 주사로 치료될 수 있다.
그러나, 인간 또는 말을 위한 질환 조절 약물은 존재하지 않는다. 따라서, 개선된 OA의 치료가 필요하다.
본 발명은 이러한 문제 및 다른 문제를 해결한다.
본 발명자들은 놀랍게도 실데나필 또는 실데나필 유사체와 같은 포스포디에스테라제 5형(PDE5)의 억제제를, 특히 저농도로 OA를 치료하는 데 사용할 수 있음을 발견하였다. 실데나필(CAS 번호 139755-83-2)은 통상적으로 발기 부전의 치료에 사용되며 상표명 Viagra®로 판매된다. 놀랍게도, 저용량의 실데나필 및 실데나필 유사체로 세포내 칼슘 신호전달, 특히 ATP 유발 세포내 칼슘 신호전달을 억제할 수 있다. 어떠한 이론에도 얽매이지 않고, 실데나필은 간극 결합을 통한 세포내 칼슘 신호전달과 세포외 ATP에 의해 매개되는 세포외 신호전달 사이의 균형을 달성할 수 있다고 여겨진다. ATP 방출 증가 및 이후 퓨린성 수용체의 활성화로 인해 ATP 유발 칼슘 신호전달은 중요하다.
본 발명의 제1 측면에서, 골관절염의 치료에 사용하기 위한 포스포디에스테라제 5형(PDE5) 억제제 또는 PDE5 억제제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다. PDE5 억제제는 실데나필 또는 실데나필의 유사체일 수 있다. 실데나필의 용량은 저용량, 예를 들어 0.01 mg 내지 10 mg, 보다 바람직하게는 0.01 mg 내지 0.1 mg일 수 있다. 상기 용량은 바람직하게는 1회 이상, 보다 바람직하게는 2회 이상 투여된다. 상기 용량은 1회, 2회 또는 3회 투여될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 상기 용량은 1회, 보다 바람직한 실시양태에서는 2회 투여된다. 한 실시양태에서, PDE5 억제제는 감염된 관절에 특히 1회, 2회 또는 3회 주사된다.
한 실시양태에서, PDE5 억제제 또는 실데나필 유사체는 국소마취제 및 글루코스로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 화합물, 바람직하게는 국소마취제와 글루코스 둘 다와 함께 투여된다. 특정 실시양태에서, 글루코스는 메트포르민으로 대체될 수 있다. 따라서, PDE5 억제제는 메트포르민과 함께 투여될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, PDE5 억제제는 실데나필이고 국소마취제는 메피바카인이고 실데나필의 용량은 0.01 mg 내지 0.1 mg이며, 글루코스의 용량은 100 mg 내지 1,000 mg이고 메피바카인의 용량은 10 mg 내지 200 mg이다. 한 실시양태에서, 글루코스의 용량은 150 mg 내지 400 mg이고 메피바카인의 용량은 10 mg 내지 30 mg이다.
본 발명의 제2 측면에서, PDE5 억제제 또는 실데나필 유사체, 및 글루코스 및 국소마취제 중 1종, 바람직하게는 글루코스와 국소마취제 모두, 또는 PDE5 억제제, 메트포르민 및 국소마취제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다. 약학 조성물은 주사 용액일 수 있다.
본 발명의 제3 측면에서, 실데나필 또는 실데나필 유사체와 같은 PDE5 억제제, 또는 실데나필 또는 실데나필 유사체와 같은 PDE5를 포함하는 약학 조성물을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상의 골관절염을 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 PDE5 억제제, 또는 PDE5 억제제를 포함하는 약학 조성물을 감염된 관절에 주사하는 단계를 포함할 수 있다. PDE5 억제제는 실데나필, 특히 0.01 mg 내지 10 mg 용량의 실데나필일 수 있다.
또한 골관절염 치료용 의약의 제조를 위한 PDE5 억제제 또는 실데나필 유사체의 용도가 제공된다.
도 1의 A 내지 E는 연골세포에 대한 부피바카인 및 실데나필 치료의 효과를 도시하는 그래프이다.
도 2는 OA를 가진 말의 저용량 메피바카인 및 글루코스 치료의 효과를 도시하는 것이다. 도 2의 A는 글루코스/메피바카인 치료 후의 수근 관절의 임상 파행 등급을 도시하는 것이다. 도 2의 B는 글루코스/메피바카인(GM) 치료 후 활액 중 COMP 네오 에피토프의 농도 감소를 도시하는 그래프이다. 도 2의 C는 글루코스/메피바카인 치료 후 및 재활 동안 혈청 중 COMP 네오 에피토프의 농도 감소를 도시하는 그래프이다.
도 3은 OA를 갖는 말의 실데나필 치료의 효과를 도시하는 것이다. 도 3의 A는 글루코스/메피바카인/실데나필(GMS) 치료 후의 수근 관절의 임상 파행 등급을 도시하는 것이다. 도 3의 B는 글루코스/메피바카인/실데나필(GMS) 치료 후 활액 중 COMP 네오 에피토프의 농도 감소를 도시하는 그래프이다. 도 3의 C는 글루코스/메피바카인/실데나필(GMS) 치료 후 및 재활 동안 혈청 중 COMP 네오 에피토프의 농도 감소를 도시하는 그래프이다.
도 4는 OA를 갖는 말의 실데나필 치료의 효과를 도시하는 것이다. 도 4의 A는 글루코스/메피바카인/실데나필(GMS) 치료 전과 후의 수근 관절의 임상 파행 등급을 도시하는 그래프이다. 도 4의 B는 글루코스/메피바카인/실데나필(GMS) 치료 후 활액 중 COMP 네오 에피토프의 농도 감소를 도시하는 그래프이다. 도 4의 C는 글루코스/메피바카인/실데나필(GMS) 치료 후 및 재활 동안 혈청 중 COMP 네오 에피토프의 농도 감소를 도시하는 그래프이다.
도 5는 OA를 갖는 말의 실데나필 치료의 효과를 도시하는 것이다. 도 5의 A는 코르티코스테로이드 또는 글루코스/메피바카인/실데나필(GMS) 치료 전과 후의 임상 파행 등급을 도시하는 그래프이다. 도 5의 B는 글루코스/메피바카인/실데나필(GMS) 치료 후 활액 중 COMP 네오 에피토프의 농도 감소를 도시하는 그래프이다. 도 5의 C는 글루코스/메피바카인/실데나필(GMS) 치료 전과 후 및 재활 동안 혈청 중 COMP 네오 에피토프의 농도를 도시하는 그래프이다.
골관절염 치료, 특히 관절의 염증 감소, 특히 관절의 연골세포 내의 및 관절의 연골세포 사이의 염증 신호전달, 예컨대 칼슘 신호전달의 감소에 의한 치료가 제공된다. 치료는 바람직하게는 통증 감소, 관절의 치유 유도, 기질의 재성장, 및 염증 감소 중 하나 이상의 효과를 갖는다.
OA 진단은 당업계에 공지된 방법, 예를 들어 임상 검사, 당업계에 공지된 방사선 촬영, 또는 본원에 참조로 포함된 WO2017216289에 기술된 COMP 단백질 단편과 같은 바이오마커의 사용으로 수행될 수 있다. 체액, 예를 들어 혈청 또는 활액 중 COMP 단편의 존재는 OA, 특히 OA 동안의 연골 퇴화를 나타낸다. COMP 단편은 아미노산 서열 N 말단 SGPTH를 포함하는 펩타이드에 특이적으로 결합하는 항체를 사용하여 검출될 수 있다. 세부 사항은 WO2017216289를 참조한다. 따라서, 한 실시양태에서, 환자는 본원에 기술된 바와 같이 치료되고 COMP 단편의 존재가 검출된다. COMP 단편의 검출을 사용하여 환자가 치료에 어떻게 반응하는지 추적할 수 있다.
환자는 인간 또는 동물일 수 있다. 환자가 동물인 경우, 바람직하게는 말이지만, 개, 고양이 및 소를 포함하는 여러 다양한 종류의 동물이 치료를 통해 혜택을 얻을 수 있다.
골관절염의 치료를 위한 PDE5 억제제, 특히 실데나필, 또는 실데나필 유사체의 용도가 제공된다. PDE5 억제제는 승인된 약물인 실데나필, 아바나필, 로데나필, 미로데나필, 타달라필, 바르데나필 및 유데나필로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으며, 실데나필이 바람직하다. 이러한 물질의 변형된 변형체 뿐만 아니라 이러한 물질의 유사체도 사용할 수 있다(이하 참조). 현재 약물로 승인되지는 않았지만 PDE5 억제 활성을 나타내는 화합물의 예는 홍데나필, 아일데나필, 벤즈아미데나필, 호모실데나필, 이카리인, 니트로소프로데나필, 술포아일데나필 및 자프리나스트를 포함한다.
PDE5는 세포의 중요한 2차 전달자인 cGMP의 파괴를 촉매하는 효소이다. PDE5 억제제는 PDE5의 활성 부위에 결합하는 것에 대하여 cGMP와 경쟁할 수 있다. 바람직하게는, PDE5 억제제는 바람직하게는 PDE5의 cGMP 결합 포켓에 결합하여 PDE5 단백질과 직접 상호작용하는 분자이다. PDE5 억제제는 cGMP보다 PDE5에 대한 친화도가 높은 물질일 수 있다. PDE5 억제제는 바람직하게는 선택적 PDE5 억제제이다.
PDE5 억제제는 시험관 내에서 PDE5를 억제하는 능력에 의해 확인될 수 있다. 예를 들어, 세포 기반 어세이에서, PDE5를 발현하는 세포를 사용하거나, 당업계에 공지된 정제된 PDE5를 사용한다. 화합물 라이브러리는 PDE5를 억제하는 능력에 대하여 스크리닝될 수 있다. 스크리닝될 수 있는 화합물의 예는 WO9428902에 개시된 화합물을 포함한다. PDE5 포스포디에스테라제 억제 활성을 갖는 추가적인 화합물은 예를 들어 문헌 [j. Med. Chem. 1993, 36:3765 ff.] 및 문헌 [j. Med. Chem. 1994, 37:2106 ff.]에 기술되어 있다. cGMP의 구조는 또한 PDE5 억제제의 설계를 위한 적절한 시작점이다.
한 실시양태에서, PDE5 억제제, 특히 실데나필은 단일 작용제, 즉 약학 조성물 중의 단일 활성 화합물로 사용된다. 부형제는 활성 화합물로 간주되지 않는다.
실데나필 유사체는 실데나필과 유사한 구조를 갖는 화합물이며 시험관 내에서 세포의, 특히 연골세포의 세포내 칼슘 신호전달, 특히 ATP 유발 칼슘 신호전달을 감소시킬 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "세포내 칼슘 신호전달"은 소포체로부터 사이토졸 내 칼슘 이온의 방출을 지칭한다. 세포내 칼슘 신호전달은 ATP 유발일 수 있으며, 이는 간극 결합에 의해 연결된 적합한 세포의 세포 성장 배지에 ATP를 첨가함으로써 유발된다는 것을 의미한다. 이러한 ATP의 첨가는 세포의 소포체로부터의 세포내 칼슘 방출의 파동을 유발한다. 따라서, 실데나필 유사체는 이러한 칼슘 신호전달을 억제할 수 있다. 바람직하게는 상기 억제는 시험관 내에서, 예컨대 세포 배양에서 측정될 수 있다.
실데나필 유사체는 PDE5 억제제일 수 있거나 PDE5 억제제가 아닐 수 있으며, 따라서 PDE5 신호전달을 억제하는 능력을 가질 수 있거나 가지지 않을 수 있다. 실데나필 유사체는 시험관 내에서 칼슘 신호전달, 특히 시험관 내에서 배양된 세포, 예를 들어 연골세포에서 ATP 유발 칼슘 신호전달을 감소시키는 능력에 의해 확인될 수 있다. 칼슘 신호전달은 임의의 적절한 방법을 사용하여 평가될 수 있다. 방법은 세포가 칼슘 민감성 프로브와 배양되는 세포내 칼슘 신호전달용 고처리량 스크리닝 시스템, 예를 들어 Flexstation 3 Microplate Reader; 세포가 칼슘 민감성 프로브와 배양되는, 예를 들어 Simple PCI 소프트웨어 및 도립 에피형광 현미경을 구비한 칼슘 영상화 시스템; 채택된 소프트웨어, 도립 에피형광 현미경, 및 칼슘 민감성 프로브를 구비한 SPEX Fluoromax 영상화 시스템; 채택된 소프트웨어, 도립 에피형광 현미경, 및 칼슘 민감성 프로브를 구비한 PTI 영상화 시스템을 포함한다. 유용한 칼슘 민감성 프로브의 예는 Fluo-3/AM 또는 Fura-2/AM(Molecular Probes, 미국 오리건주 유진)을 포함한다.
실데나필 유사체에 의한 칼슘 신호전달 감소는 50% 이상, 70% 이상, 또는 그 이상, 예컨대 80% 이상일 수 있다.
ATP 유발 칼슘 신호전달을 억제하는 화합물의 능력을 시험하기 위한 적절한 프로토콜은 하기와 같다: 성상세포 또는 연골세포를 DMEM에서 포화(confluence)되도록 성장시켜 이들이 단층에서 결합된 간극 결합이 된다. 이어서 세포를 Ca2+ 민감성 형광단 Fura-2/AM(Molecular Probes, 미국 오리건주 유진)과 함께 실온에서 30분 동안 배양한다(증류수에 용해된, 137 mM NaCl, 5.4 mM KCl, 0.4 mM MgSO4, 0.4 mM MgCl2, 1.26 mM CaCl2, 0.64 mM KH2PO4, 3.0 mM NaHCO3, 5.5 mM 글루코스, 및 20 mM HEPES로 이루어진 Hank's HEPES 완충 식염수(HHBSS) 990 ㎕ 중 8 ㎕, pH 7.4). 실험 중에 사용된 모든 물질을 동일한 용액에서 희석한다. 형광단을 40 ㎕의 디메틸 술폭시드(DMSO) 및 10 ㎕의 플루론산(Molecular Probes, 네덜란드 레이던)에 용해시킨다. 배양 후, 세포를 HHBSS로 3회 린싱한다. 실험 시작 1분 후 ATP(10-4M)를 자극제로 사용한다. Ca2+ 영상화 시스템 및 심플 소프트웨어 PCI(Compix Inc., Imaging Systems, Hamamatsu Photonics Management Corporation, 미국 펜실베니아주 크랜베리 타운쉽) 및 도립 에피형광 현미경(Nikon ECLIPSE TE2000-E)을 사용하여 실온에서 실험을 수행한다. ATP는 600 ㎕/min의 유량으로 연동 펌프(Instech Laboratories, 미국 펜실베니아주 플리머스 미팅)에 의해 제공된다. ORCA-12AG 카메라(C4742-80-12AG), 고해상도 디지털 냉각 CCD(Hamamatsu Photonics Corporation, 일본 하마마츠)로 이미지를 캡쳐한다. 이어서 Ca2+ 방출량을 반영하는 총 곡선하 면적(AUC)을 계산하고 분석하여 Ca2+ 반응의 측정값을 제공한다. Origin 프로그램(Microcal Soft-ware Inc., 미국 매사추세츠주 노샘프턴)을 사용하여 AUC 및 진폭(피크)을 계산한다. 후보 물질을 적절한 농도로 첨가하고 ATP 유도 세포내 칼슘 신호전달을 감소시키는 능력에 대하여 시험한다.
대안으로서 하기 장비를 사용할 수 있다: 세포내 Ca2+ 신호전달을 위한 고처리량 스크리닝 시스템인 Flexstation 3 Microplate Reader(Molecular Devices, 미국 산 호세)를 사용하여, 세포를 Ca2+ 민감성 프로브 FLIPR Calcium 6(Molecular Devices)과 배양하고 실험을 ATP(10-4M)(Sigma Aldrich, 미국 세인트 루이스)로 시작하기 직전에 자극한다. 세포내 Ca2+ 방출은 Ca2+의 방출량을 반영하는 총 곡선하 면적(AUC)으로 측정된다. 진폭(피크)는 최대 증가로 표현된다(Hansson E, Bjoerklund U, Skioeldebrand E, Roennbaeck L. J Neuroinflammation (2018); 15:321. https://doi.org/10.1186/s12974-018-1361-8).
실데나필 유사체는 실데나필과 구조적으로 유사하다. 구조적으로 유사한 화합물은 실데나필의 분자 구조에 관하여 4개, 3개, 2개 또는 바람직하게는 1개의 치환을 갖는 화합물이다. 가능한 치환은 실데나필의 구조에 관하여 기를 다른 기로 대체하는 것 또는 기를 첨가하는 것을 포함한다. "기"는 예를 들어 메틸기 또는 다른 알칸, 할로겐 원자, 아미드 또는 아민, 또는 의약 화학 분야에서 사용되는 임의의 다른 종류의 유용한 기를 지칭할 수 있다. 실데나필과 구조적으로 유사한 여러 가능한 화합물이 존재하지만, 본원에 기술된 방법을 사용하여 시험관 내에서 세포내 칼슘 신호전달을 감소시킬 수 있는지를 확인하는 것은 간단하다. 여러 PDE5 억제제, 예컨대 바르데나필은 실데나필과 구조적으로 유사하다. 실데나필과 바르데나필의 분자 구조를 이하에 나타내며, 이는 바르데나필에서 질소 원자가 탄소 원자로 치환되었다는 점에서만 이들이 상이하다는 것을 나타낸다.
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적합한 실데나필 유사체는 아바나필, 로데나필, 미로데나필, 타달라필, 바르데나필 및 유데나필, 홍데나필, 아일데나필, 호모실데나필, 니트로소프로데나필, 술포아일데나필 및 자프리나스트를 포함할 수 있다.
투여 경로
PDE5 억제제 또는 실데나필 유사체는 경구, 국소, 정맥내, 피내, 또는 관절내, 근육내, 비강, 또는 뇌척수액내를 포함하는 임의의 적절한 방식으로 투여될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, PDE5 억제제 또는 실데나필 유사체는 감염된 관절에 국소 전달된다. 더 바람직한 실시양태에서, 제제는 특히 1회 이상의 관절내 주사로 감염된 관절에 관절 내로 전달된다. 즉 관절에 주사된다.
PDE5 억제제 또는 실데나필 유사체는 국소 투여에 의해, 예를 들어 경피 투여에 의해 투여될 수 있다. 경피 제제는 단순함에 관해서 및 환자의 편안함의 관점에서 특히 유리하다. 경피 제제는 예를 들어 경피 패치의 형태를 취할 수 있다.
한 실시양태에서, PDE5 억제제 또는 실데나필 유사체가 전달되어 PDE5 억제제의 적어도 일부의 전신 분포가 달성된다. 이는 약물이 신체를 통해 퍼지는 국소 투여 또는 전신 투여, 예를 들어 경구 투여 또는 정맥 투여로 달성될 수 있다.
상기 투여 방법 외에도, 비경구 투여, 비강 투여 및 직장 투여 뿐만 아니라 흡입 투여도 유용할 수 있다.
본 발명에 따른 PDE5 억제제 또는 실데나필 유사체의 투여 시기는 사용되는 제제 및/또는 투여 경로에 따라 달라질 수 있다.
PDE5 억제제 또는 실데나필 유사체가 국소 주사로 투여되는 경우, 1회 이상의 주사가 수행될 수 있다. 주사의 적절한 수는 1회, 2회, 3회, 또는 그 이상일 수 있다. 복수의 주사는 2 내지 60일, 더 바람직하게는 5 내지 30일, 더 바람직하게는 8 내지 25일, 가장 바람직하게는 10 내지 18일의 간격으로 수행될 수 있다. 관절의 회복은, 예를 들어 혈청 또는 활액 중 COMP 단편의 존재를 모니터링함으로써, WO2017216289에 기술된 COMP 단편의 측정을 사용하여 모니터링될 수 있다. 방사선 촬영과 같은 당업계에 공지된 다른 방법을 사용할 수 있다.
일반적으로, 약리적 유효량의 PDE5 억제제 또는 실데나필 유사체가 이를 필요로 하는 환자에게 제공된다. 상기 화합물에 대한 적절한 용량 범위는 통상적인 실험에서 확립될 수 있다. 용량은 발기 부전 치료에 사용되는 실데나필 용량(보통 약 100 mg)보다 낮을 수 있다. 말에게 투여되는 실데나필의 투여당 용량은 0.001 mg 내지 1,000 mg, 특히 0.01 mg 내지 10 mg, 특히 0.01 mg 내지 1 mg, 특히 0.01 mg 내지 0.1 mg, 가장 바람직하게는 0.01 mg 내지 0.05 mg 또는 0.01 mg 내지 0.03 mg일 수 있다. 따라서, 용량은 0.001 mg 이상, 또는 0.01 mg 이상, 또는 0.1 mg 이상, 또는 1 mg 이상, 또는 10 mg 이상일 수 있다. 특히 국소 투여의 경우, 예를 들어 관절내 주사를 사용하는 경우, 인간에게 투여되는 용량은 대략 동일하다. 대안으로, 말에게 투여되는 용량의 대략 1/5인 낮은 용량이 인간에게 투여된다.
용량은 1회 투여될 수 있지만, 적절한 횟수, 예컨대 1회, 2회, 3회, 또는 그 이상 투여될 수 있다. 용량은 1회 이상, 바람직하게는 2회 이상 투여될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 용량은 1회 투여되고, 더 바람직한 실시양태에서는 2회 투여된다.
PDE5 억제제 또는 실데나필 유사체는 골관절염을 치료하기 위한 1종 이상의 다른 작용제와 조합될 수 있다. 바람직하게는 PDE5 억제제 또는 실데나필 유사체는 국소마취제 또는 글루코스 또는 둘 모두와 조합된다. 국소마취제는 전압 개폐 나트륨 채널의 세포내 부분에 결합하고 신경 세포로의 나트륨 유입을 차단하는 화합물일 수 있다. 그 예는 부피바카인, 메피바카인, 리도카인, 프릴로카인, 로피바카인, 클로로프로카인 및 아티카인을 포함한다. 국소마취제는 아미노 아미드 유형 또는 아미노 에스테르 유형의 국소마취제일 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 국소마취제와 글루코스 모두 제제에 포함된다.
국소마취제의 용량은 저용량일 수 있다. 용량이 너무 낮아서 국소마취제와 관련된 전압 개폐 채널의 정상적인 억제가 달성되지 않을 수 있다. 메피바카인을 사용하는 경우, 한 번에 투여되는 용량은 1 mg 내지 1,000 mg, 특히 5 mg 내지 200 mg, 보다 바람직하게는 8 mg 내지 100 mg, 가장 바람직하게는 10 mg 내지 30 mg일 수 있다. 한 번에 투여되는 글루코스의 용량은 10 mg 내지 10,000 mg, 특히 100 mg 내지 1,000 mg일 수 있으며, 150 mg 내지 400 mg이 더 바람직한 범위이다.
한 실시양태에서, 저용량의 국소마취제, 예를 들어 메피바카인은 PDE5 억제제 또는 실데나필 유사체 없이 글루코스(또는 메트포르민)와 함께 투여된다. 투여는 바람직하게는 주사, 보다 바람직하게는 본원에 기술된 관절내 주사에 의한 것이다. 국소마취제의 용량은 1 mg 내지 1,000 mg, 특히 5 mg 내지 200 mg, 보다 바람직하게는 8 mg 내지 100 mg, 가장 바람직하게는 10 mg 내지 30 mg일 수 있다. 따라서 약학 조성물은 국소마취제 및 글루코스만을 포함할 수 있다. 주사는 각각의 주사 사이에 5 내지 30일, 보다 바람직하게는 10 내지 18일로 1회, 2회, 3회 또는 그 이상 수행될 수 있다. 이러한 치료는 초기 단계 골관절염을 갖는 환자, 특히 말에게 바람직할 수 있다.
한 실시양태에서, PDE5 억제제 또는 실데나필 유사체, 바람직하게는 실데나필은 바람직하게는 10 내지 200 mg 용량의 국소마취제, 바람직하게는 메피바카인과 함께, 바람직하게는 100 mg 내지 1,000 mg의 글루코스와 함께, 바람직하게는 0.01 mg 내지 0.1 mg인 용량으로 관절내 주사에 의해 투여된다. 용량은 1회 투여될 수 있지만 여러 횟수, 예를 들어 2, 3, 4 또는 5회 또는 그 이상 투여될 수 있으며, 2 또는 3회가 바람직하고, 2회가 가장 바람직하다. 바람직한 실시양태에서, 주사는 1, 2 또는 3회 수행된다. 용량은 1회 이상, 보다 바람직하게는 2회 이상 투여될 수 있다.
복수의 용량이 투여되는 경우, 적절한 투여 간격은 2 내지 60일, 보다 바람직하게는 5 내지 30일, 보다 바람직하게는 8 내지 25일, 가장 바람직하게는 10 내지 18일이다.
치료 후 및 치료 중 OA로부터의 회복은 COMP 단편의 존재를 측정하여, 또는 상기 다른 수단으로 모니터링될 수 있다.
관절내 주사는 당업계에 공지된 바와 같이 수행된다. 주사는 임의의 적절한 기술, 예를 들어 일회용 시린지 및 니들, 자기 주사기, 주사 펜 또는 주입 펌프로 수행될 수 있다. 말의 관절내 주사에 유용한 니들의 예는 0.90×40 mm 또는 70 mm(20G×1½''), 0.80×40 mm(21G×1½'') 및 매우 큰 관절에 주사하기 위한 척추 니들 1,20 mm×152/200 mm(18G×6.00'')이다.
적절한 부피의 주사 용액이 주사되며, 부피는 통상적으로 인간의 경우보다 말의 경우에 더 크다.
약학 조성물
PDE5 억제제 또는 실데나필 유사체는 적절한 약학 조성물에 포함될 수 있다. 일반적으로, 조성물은 투여 방식에 적합화되어야 하며 PDE5 억제제 또는 실데나필 유사체를 포함하는 다양한 조성물이 당업계에 공지되어 있다. 환자에게 투여하는 데 적절한 형태를 제공하기 위해, 조성물은 적절한 양의 담체 또는 비이클과 함께 치료적 유효량의 PDE5 억제제를 적절하게 포함한다. 조성물은 고체, 반고체, 젤라틴 또는 하이드로겔과 유사한 액체일 수 있으며, 정제, 액체, 주사 용액, 현탁액, 분말, 캡슐, 서방형, 피부 패치, 겔, 크림, 연고, 스프레이, 또는 에어로졸 형태로 존재할 수 있다.
조성물은 예를 들어 당업계에 공지된 담체, 희석제, 안정화제, 충전제, 붕해제, 보존제, 겔화제 또는 증점제, 방출 조절제를 포함하는 1종 이상의 약리학적으로 허용가능한 부형제를 포함할 수 있다. 조성물에 사용될 수 있는 화합물의 예는 전분, 셀룰로스 및 셀룰로스 유도체, 젤라틴, 실리카 겔, 마그네슘 카보네이트, 마그네슘 스테아레이트, 나트륨 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 염화나트륨, 글리세롤, 글리콜, 물, 및 에탄올을 포함한다.
실데나필의 경구 제제, 예를 들어 Viagra® 제제는 당업계에 공지되어 있다. 경구 투여용 추가 조제물을 제조하는 것에 대하여, 문헌 [Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets. Vol. 1-3, H A Lieberman et al., Eds. Marcel Dekker, New York and Basel, 1989-1990]을 참조한다. 특히 구체적으로는 7장(Special Tablets, by J W Conine and M J Pikal), 8장(Chewable Tablets, by R W Mendes, OA Anaebonam and J B Daruwala), 및 9장(Medicated Lozenges; by D Peters)을 참조한다. PDE5 억제제는 약학적으로 허용가능한 염으로 제공될 수 있다. 실데나필은 예를 들어 실데나필 시트레이트로 제공될 수 있다.
실데나필을 포함하는 주사 용액 또한 당업계에 공지되어 있다. 실데나필을 포함하는 주사 용액의 한 가지 예는 Revatio®이다. 주사 용액은 바람직하게는 수용액이다. 주사 용액은 하기 약리학적으로 허용가능한 작용제 중 1종 이상을 포함할 수 있다: PH 조절제, 식염수, 삼투압 조절제, 안정화제, 보존제, 킬레이트제, 가용화제, 항박테리아제 및 유화제. 주사 용액은 예를 들어 PDE5 억제제, 예를 들어 실데나필, 및 약리학적 등급의 물, 및 임의로 보존제만을 포함할 수 있다. 주사 용액은 국소마취제 및 글루코스 중 하나 또는 모두를 포함할 수도 있다.
주사 용액은 바람직하게는 멸균되었고 등장성이다. 주사용 용액은 바이알, 예컨대 주사 바이알, 사셰 또는 카트리지와 같은 용기에 제공될 수 있다. 주사용 용액은 자동 주사 장치 또는 주사 펜과 같은 일회용 주사 장치에 제공될 수 있다. 주사용 용액은 예를 들어 약리학적으로 허용가능한 물을 첨가하여 예비혼합될 수 있거나 재구성되는 형태로 존재할 수 있다.
제제가 예를 들어 주사에 의한 국소 전달용 제제인 경우, 바람직하게는 글루코스 및 국소마취제 중 1종을 포함할 수도 있다.
상기 하나의 실시양태에서, 제제는 글루코스 및 국소마취제만을 포함한다. 제제가 활성제로서 국소마취제 및 글루코스만을 포함하는 경우, 제제는 바람직하게는 주사 용액이다.
특히 저용량의 실데나필이 투여되는 경우, 주사 용액 중 실데나필 또는 실데나필 유사체의 바람직한 농도는 0.001 mg/ml 내지 0.1 mg/ml, 보다 바람직하게는 0.001 내지 0.01 mg/ml이다. 국소마취제, 예를 들어 메피바카인의 바람직한 농도는 0.1 mg/ml 내지 50 mg/ml, 보다 바람직하게는 1 mg/ml 내지 5 mg/ml이다. 글루코스의 바람직한 농도는 1 mg/ml 내지 200 mg/ml, 보다 바람직하게는 10 mg/ml 내지 100 mg/ml이다. 고용량을 투여하는 경우, 이러한 물질의 농도는 더 높을 수 있다. 제제 중 실데나필 대 메피바카인 대 글루코스의 농도비는 바람직하게는 0.001 : 1 : 10이다.
실데나필을 포함하는 제제는 WO 02/060449 및 WO 02/062343에 기술되어 있다. 실데나필의 합성은 EP463756 및 US5250534에 기술되어 있다. 아바나필의 합성은 미국 특허 제7,501,409호에 기술되어 있다.
실시예 1 - 단리된 연골세포에서의 염증 감소
시험관내 실험은 저농도의 국소마취제 부피바카인으로 말 연골세포를 치료하는 것은 세포내 칼슘 신호전달을 감소시키고 연골 생성에 중요한 성장 인자를 상향조절함을 시사하였다. 저농도의 실데나필의 첨가는 효과를 증가시켰다.
시간에 따른 세포내 Ca2+의 변화를 검출하기 위한 형광 기반 어세이에서, OA 말 유래의 말 연골세포를 ATP(10-4 M)로 자극하였다. 전체 배양 기간 동안 세포를 5.5 mM 글루코스에서 배양하였다. 세포를 메트포르민(1 mM), 및 부피바카인(10-12 M)과 함께 24시간 동안 배양한 후, Ca2+ 반응을 측정하였다. 대조군은 미처리 연골세포이다. Ca2+ 피크 하 면적(AUC)을 각각의 Ca2+ 과도(transient)에 대하여 계산하였으며(도 1의 A) 또한 진폭(피크)을 최대 증가로 표현하였다(도 1의 B). 각각 4중 웰을 사용한 4회의 실험에서 세포를 얻었다. 일원 ANOVA에 이어 던넷 다중 비교 테스트(Dunnett's multiple comparisons test)를 사용하여 유의성 수준을 분석하였다. ** P < 0.01, ** P < 0.001. 인간 연골세포에 대하여 유사한 데이터를 얻었다.
물질 및 방법
세포 모델 시스템 - 연골세포 단리 및 배양
안락사 24시간 이내에, 여섯 마리의 말(1 내지 8년령)의 중앙 수근 관절로부터 관절 연골 샘플을 얻었다. 세 마리의 말은 육안으로 볼 수 있는 정상적인 관절 표면을 가졌고, 세 마리의 말은 중앙 수근골의 요골면에 가벼운 구조적 OA를 가졌다. 말들은 본 연구와 관련이 없는 이유로 인해 안락사되었으며, 동물 실험 윤리 위원회(스웨덴 스톡홀름)는 본 연구 프로토콜을 승인하였다(Dnr: N378/12).
무균 준비 후, 세 번째 수근골의 요골면의 등쪽 연골을 메스로 절개하였고, 전체 두께의 연골 샘플을 겸자로 수집하였다. 조직을 젠타마이신 술페이트(50 mg/l) 및 암포테리신 B(250 ㎍/ml)와 함께 멸균 식염수(0.9% NaCl) 용액에 넣었다. 연골 샘플을 냉각 상태로(약 5℃) 실험실로 운반하였다. 연골세포의 단리 및 확장을 상기와 같이 수행하였다(Ley C, Svala E, Nilton A, Lindahl A, Eloranta M, Ekman S, Skioeldebrand E.Connect Tissue Res. (2011); 52 (4): 290-300). 세포를 계대배양 1에서 확장시켰으며, 웨스턴 블랏 분석을 위한 Ca2+용 96 웰 배양 플레이트 또는 6 웰 배양 플레이트에서, 포화될 때까지 5일 동안, 14 ㎕/ml의 아스코르브산(Sigma-Aldrich, 미국 미주리주 세인트 루이스), 10-7 M의 덱사메타손(Sigma-Aldrich), 1 mg/ml의 인간 혈청 알부민(Equitech Bio, 미국 텍사스주 케르빌), 1× 인슐린-트랜스페린-셀레늄(Gibco, Life Technologies, 미국 캘리포니아주 칼즈배드), 5 ㎕/ml의 리놀레산(Sigma-Aldrich), 1× 페니실린-스트렙토마이신(PEST)(Sigma-Aldrich), 및 10 ng/ml의 인간 전환 성장 인자(TGF) β-1(R&D Systems, 영국 애빙던)이 보충된 DMEM-고 글루코스(DMEM-HG)(Thermo Fisher Scientific; 미국 매사추세츠주 월섬)인 연골형성 배지에 세포를 20,000 세포/cm2로 시딩하여 표현형을 유지하였다.
회복을 위해 배양 4일째에 세포를 메트포르민 및 부피바카인과 함께 24시간 동안 배양하였다. 5일째에 Ca2+ 측정을 수행하였고, 웨스턴 블랏 분석을 위해 배지를 수집하였고, 세포를 수집하여 분석 전에 -80℃에서 즉시 냉동시켰다.
항염증 회복을 위해 세포를 다양한 약리학적 물질의 조합과 함께 24시간 동안 배양하였다.
약물 회복
세포가 의약 물질, 1 mM의 메트포르민(Sigma Aldrich, 미국 미주리주 세인트 루이스)과 함께 24시간 동안 배양되도록 회복이 진행되었다. 의약 물질은 부피바카인(Marcain)(Astra Zeneca, 스웨덴 쇠데르텔리에)(10-12 M)(Block L, Joerneberg P, Bjoerklund U, Westerlund A, Biber B, Hansson E. Eur. J. Neurosci. (2013); 38: 3669-3678), 실데나필 시트르산염(Sigma Aldrich)(1 μM)(Nunes AKS, Raposo C, Bjoerklund U, Cruz-Hoefling MA, Peixoto CA, Hansson E, Neurosci. Lett. (2016); 630: 59-65) 및 1α,25-디히드록시비타민 D3(칼시트리올)(Sigma-Aldrich)(100 nM)(Li F, Zhang A, Shi Y, Ma Y, Du Y. Int. J. Mol. Med. (2015); 36: 967-974)이다. 각 실험이 시작되기 전 세포 배양액을 상기 물질과 함께 24시간 동안 배양하였다.
칼슘 영상화
세포내 및 세포외 Ca2+ 신호전달용 고처리량 스크리닝 시스템인 Flexstation 3 Microplate Reader(Molecular Devices, 미국 산 호세)로, 세포를 Ca2+ 민감성 프로브 FLIPR Calcium 6(Molecular Devices)과 함께 배양하였고 다양한 신경 전달 물질(5-HT(10-5 M) 또는 ATP(10-4 M), 모두 Sigma Aldrich(미국 세인트 루이스)에서 공급)에 노출시켰다.
RNA 분석용 단층 연골세포 수집
용해 완충액(Qiagen) 중 1 M의 DL-디티오트레이톨 용액(Sigma Aldrich)을 첨가하기 전에, RNA 단리를 목적으로 하는 세포(인간 연골세포)를 멸균 PBS로 2회 세척하였다. 세포를 육안 검사하여 용해를 확인한 후, RNA 단리를 위해 RNA아제가 없고 엔드톡신이 없는 샘플 튜브로 옮기고, 액체 질소에서 스냅 냉동하고, -80℃에서 보관하였다. 총 RNA를 추출하였고, 시판되는 키트(RNeasy mini kit, Qiagen)로 제조업체의 프로토콜에 따라 정제하였다. 간단히 말하면, 용해 완충액 중의 세포를 해동하였고 1분 동안 볼텍싱한 후 70% 에탄올(1:1)을 첨가하였다. 샘플을 스핀 컬럼에 첨가하기 전에 혼합하였고, 원심분리하였다. 이어서 컬럼을 세척하고 게놈 DNA를 DN아제(Qiagen)로 제거하였다. 강화 세척 완충액 및 이어서 막 결합 RNA 세척용 마일드한 완충액으로 세척 단계를 반복하였다. 총 RNA를 50 ㎕의 RN아제가 없는 물로 용출하였다. RNA 농도를 마이크로볼륨 분광 광도계(ND-1000 분광 광도계, NanoDrop Technologies, 미국 델라웨어주 윌밍턴)로 측정하였고, RNA 품질을 Agilent 2100 Bioanalyzer 시스템(Agilent Technologies Inc, 미국 캘리포니아주 팔로 알토)을 사용하여 평가하였다.
정량적 실시간 폴리머라제 연쇄 반응 분석
High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit(Applied Biosystems, 미국 캘리포니아주 포스터 시티)를 사용하여 총 RNA로 cDNA를 제조하였다. Applied Biosystems에서 시판되는 TaqMan Gene Expression Assays를 사용하였다(섬유아세포 성장 인자 18(FGF-18) 및 성장 분화 인자 5(GDF-5)). 샘플을 중복 분석하였다. 상대적 비교 CT법을 사용하여 실시간 폴리머라제 연쇄 반응(PCR) 데이터를 분석하였다.
Ca2+의 방출량을 반영하는(Berridge MJ. Biochem. Soc. Symp. (2007); 74: 1-7) 총 곡선하 면적(AUC)을 분석하여 Ca2+ 반응을 측정하였다. 진폭(피크)을 최대 증가로 표현하였다.
결론적으로, 도 1의 A 및 B에 도시한 데이터는 메트포르민과 함께 저농도의 부피바카인은 염증성 골관절염 연골세포에서 세포내 Ca2+ 방출을 생리적 수준으로 감소시킴을 나타낸다. 실데나필은 효과를 증가시켰다. D3 자체로는 효과가 없었다(도 1의 E).
도 1의 C 및 D는 부피바카인 및 실데나필의 치료가 인간 연골세포의 생성에 중요한 성장 인자 GDF5 및 FGF18을 어떻게 상향조절하는지를 나타낸다.
실시예 2
주사 용액을 하기와 같이 제조하였다:
1 ml의 메피바카인, 20 mg/ml = 20 mg
4 ml의 글루코스 50 mg/ml = 200 mg
5 ml의 멸균 H2O
메피바카인의 최종 농도는 2 mg/ml이었다. 글루코스의 최종 농도는 20 mg/ml이었다.
이하 실시예 4 내지 6에서, 말 1 내지 3에 관절내 주사로 투여되는 용량으로 10 ml를 사용하였다(도 2 내지 4에서 GM으로 나타냄).
실시예 3
주사 용액을 하기와 같이 제조하였다:
Revatio®(0.8 mg/ml의 실데나필)를 멸균수에서 200배 희석하여 0.004 mg/ml를 얻었다. 5 ml의 이 용액(0.02 mg의 실데나필)을
1 ml의 메피바카인, 20 mg/ml = 20 mg의 글루코스
4 ml의 글루코스 50 mg/ml = 200 mg의 글루코스
와 혼합하여 10 ml를 얻었다.
최종 농도는 실데나필: 0.002 mg/ml, 메피바카인: 2 mg/ml, 글루코스: 20 mg/ml이었다.
실시예 4 내지 6에서 관절내 주사로 말 2 내지 4에 투여되는 용량으로 10 ml(실데나필: 0.02 mg, 메피바카인: 20 mg 및 글루코스 200 mg)를 사용하였다(도 2 내지 5에서 GMS로 나타냄).
실시예 4 - 1번 말
1번 말은 2006년에 태어난 스웨덴 웜블러드(Swedish warmblood) 암말이다. 이 말은 승마 학교의 말이며 2018년 1월 4일에 양쪽 구절(fetlock joint)에 양측성 파행으로 진단받았다. 이 말을 관절내로 히알루론산(HA)으로, 경구로 코르티코스테로이드로 치료하였다. 두 번째 방문 후 파행이 증가하였으며 말을 실시예 1의 글루코스/메피바카인(GM)의 10 ml 관절내 주사로 치료하였다. 재검사시, 말은 파행을 나타내지 않았지만, 그럼에도 불구하고 동일한 유형의 주사로 다시 한 번 치료하였다. GM으로 처음 치료한 이래로 말은 파행을 나타내지 않았으며 모든 재검사에서 완전히 파행을 나타내지 않았다. 말은 승마 학교로 복귀하였으며 완전한 상태였다.
수의사가 굽힘 테스트를 통한 파행 검사 및 치료를 수행하였으며, 결과를 도 2의 A에 도시한다.
도 2의 B 및 C에 표시된 시점에서 활액 및 혈청 샘플을 말에서 취하였다. WO2017216289에서와 같이 활액 및 혈청 중 COMP 에피토프 농도 분석을 수행하였으며, 각각 도 2의 B 및 C에 도시한다. COMP 에피토프의 존재는 관절의 진행 중인 염증 및 조직 손상을 나타낸다.
도 2의 A에서 알 수 있듯이, 글루코스와 함께 저농도의 국소마취제로 치료하는 것은 임상적 회복을 유발하였으며, 이는 도 2의 B 및 도 2의 C에서 알 수 있듯이 COMP 수준이 정상적인 생리적 수준으로 감소하는 것과 관련이 있다.
실시예 5 - 2번 말.
2번 말은 2012년에 태어난 스탠다드브레드 트로터(standardbred trotter), 종마이다. 이 말은 2016년 8월부터 수근 관절의 골관절염과 관련된 중증 파행을 가졌다. 이 말을 2016년 8월부터 수근 관절에 (실시예 1에 따른) 10 ml의 글루코스/메피바카인으로 수 회 관절내 주사 치료하였으며, 이 치료는 실패한 것으로 간주되었다.
이 말은 2018년 6월 12일 및 25일에 동일한 관절에 (실시예 3의) 글루코스/메피바카인/실데나필로 2회의 10 ml 관절내 주사를 받았으며, 2018년 10월에 임상 검사에 기록된 파행 없이 완전히 회복되었다. 이 종마는 2018년 8월 및 9월에 트로팅 레이스(trotting race)에서 경쟁하였고, 레이스에서 2위, 5위, 및 2위에 올랐으며, 이는 완전한 회복을 나타낸다.
수의사가 굽힘 테스트를 통한 파행 검사 및 치료를 수행하였으며, 결과를 도 3의 A에 도시한다.
실시예 4에서와 같이 활액 및 혈청 중 COMP 에피토프 농도 분석을 수행하였으며, 각각 도 3의 A 및 B에 도시한다.
도 3의 A에서 알 수 있듯이, 치료에 실데나필을 추가하는 것은 임상적 회복을 유발하였으며, 이는 도 3의 B 및 도 3의 C에서 알 수 있듯이 COMP 수준이 정상적인 생리적 수준으로 감소하는 것과 관련이 있다.
실시예 6 - 3번 말
3번 말은 2012년에 태어난 스탠다드브레드 트로터, 암말이다. 이 말은 3년령 때 처음으로 양쪽 수근 관절에 파행이 생겼다. 그 때부터 이 말의 양쪽 수근 관절에 글루코스/메피바카인 관절내 치료를 17회 하였으며, 이 치료는 실패한 것으로 간주되었다.
2018년 5월에 이 말은 양쪽 수근 관절에 실시예 5의 글루코스/메피바카인/실데나필 관절내 주사를 받았다. 이 말은 2018년 5월 및 9월의 파행 검사에서 파행을 나타내지 않았으며 이 때부터 정기적으로 경기에 참가하고 있다.
실시예 4에서와 같이 활액 및 혈청 중 COMP 에피토프 농도 분석을 수행하였다. 임상 파행 검사의 데이터 및 COMP 수준을 도 4의 A 내지 C에 도시한다. 도 4의 A에서 알 수 있듯이, 치료에 실데나필을 첨가하는 것은 임상적 회복을 유발하였으며, 이는 도 4의 B 및 도 4의 C에서 알 수 있듯이 COMP 수준의 감소와 관련이 있다.
실시예 7 - 4번 말
4번 말은 조랑말, 거세마이며, 자기 공명 영상법(MRI)로 진단된 골관절염과 관련된 오른쪽 발굽 관절의 중증 파행을 갖고 있다. 이 말을 2018년 4월부터 코르티코스테로이드의 관절내 주사로 3회 치료하였으며, 파행 등급의 감소가 없었다. 2018년 6월 및 7월에, 이 말을 글루코스/메피바카인/실데나필(GMS)로 치료하였으며 그 후 파행을 나타내지 않았다(도 5의 A). GMS로의 첫 번째 치료 후, 활액 및 혈청 중 COMP 네오 에피토프의 농도가 뚜렷하게 감소하였다(도 5의 B 및 C). 실시예 4에서와 같이 활액 및 혈청 중 COMP 에피토프 농도 분석을 수행하였다.
본 발명을 특정 예시적 실시양태를 참조하여 기술하였지만, 일반적으로 본 발명의 상세한 설명은 본 발명의 개념을 설명하기 위한 것일 뿐이며 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 간주되어서는 안 된다. 본 발명은 일반적으로 청구범위에 의해 정의된다.

Claims (13)

  1. 말의 골관절염의 치료에 사용하기 위한, ATP 유발 세포내 칼슘 신호전달을 감소시킬 수 있는 실데나필, 또는 실데나필 유사체로서, 용량은 0.01 mg 내지 0.1 mg이며 용량이 1회 이상 투여되는 것인 실데나필, 또는 실데나필 유사체.
  2. 제1항에 있어서, 감염된 관절 내에 주사되는, ATP 유발 세포내 칼슘 신호전달을 감소시킬 수 있는 실데나필, 또는 실데나필 유사체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 용량이 1회, 2회 또는 3회 투여되는, ATP 유발 세포내 칼슘 신호전달을 감소시킬 수 있는 실데나필, 또는 실데나필 유사체.
  4. 제3항에 있어서, 용량이 2회 투여되는, ATP 유발 세포내 칼슘 신호전달을 감소시킬 수 있는 실데나필, 또는 실데나필 유사체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 국소마취제 및 글루코스로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 화합물과 함께 투여되는, ATP 유발 세포내 칼슘 신호전달을 감소시킬 수 있는 실데나필, 또는 실데나필 유사체.
  6. 제5항에 있어서, 국소마취제 및 글루코스와 함께 투여되는, ATP 유발 세포내 칼슘 신호전달을 감소시킬 수 있는 실데나필, 또는 실데나필 유사체.
  7. 제6항에 있어서, 국소마취제는 메피바카인이고 글루코스의 용량은 100 mg 내지 1,000 mg이며 메피바카인의 용량은 10 mg 내지 200 mg인, ATP 유발 세포내 칼슘 신호전달을 감소시킬 수 있는 실데나필, 또는 실데나필 유사체.
  8. 제7항에 있어서, 글루코스의 용량은 150 mg 내지 400 mg이고 메피바카인의 용량은 10 mg 내지 30 mg인, ATP 유발 세포내 칼슘 신호전달을 감소시킬 수 있는 실데나필, 또는 실데나필 유사체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, ATP 유발 세포내 신호전달을 감소시킬 수 있는 실데나필 또는 실데나필 유사체는 실데나필인, ATP 유발 세포내 칼슘 신호전달을 감소시킬 수 있는 실데나필, 또는 실데나필 유사체.
  10. ATP 유발 세포내 칼슘 신호전달을 감소시킬 수 있는 실데나필 또는 실데나필 유사체, 및 글루코스 및 국소마취제 중 1종을 포함하는 의약.
  11. 제10항에 있어서, 글루코스와 국소마취제 둘 다를 포함하는 의약.
  12. 제10항 또는 제11항에 있어서, 주사 용액인 의약.
  13. 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 말의 골관절염의 치료에 사용하기 위한 의약.
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