JPH07503976A - Ｎｍｒ画像形成のための粒子及び製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＮＭＲ画像形成のための粒子及び製造方法発明の分野 本発明は、懸濁されたときに患者の血流中に注射すことができる酸化鉄粒子に関 する。この粒子は、凝集（ａｇｇｌｏｍｅｒａｔｉｏｎ）に対して強化サレタ安 定性をもち、そして網内皮糸（ｒｅｔｉｃｕｌｏ−ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｓｙ ｓｔｅｍ（ＲＥＳ）に対して比較的”不可視（ｉｎｖｉｓｉｂｌｅ）”であり、 それらは、マクロファージによる除去に対して増強された抵抗性を示す。

この粒子は、血液−ブール画像形成（ｉｍａｇｉｎｇ）のためのコントラスト剤 （ｃｏｎｔｒａｓｔ　ａｇｅｎｔｓ）の製造に有用である。

背景技術 診断目的のための注射可能な水性懸濁液の形懇における酸化鉄粒子の使用は、過 去において非常に興味をひきつけた。強磁性（Ｆｅｒｒ。

ｍａｇｎｅｔｉｃ）の核種又は超常磁性の（ｓｕｐｅｒｐａｒａｍａｇｎｅｔｉ ｃ）のマグネタイト（ｍａｇｎｅｔ　ｉ　ｔｅ）微結晶が、肝臓及び牌臓の核磁 気共鳴画像形成（ｎｕｃｌｅａｒ　ｍａｇｎｅｔｉｃ　ｒｅｓｏｎａｎｃｅ　ｉ ｍａｇｉｎｇ）（ＭＲＩ）のためのコントラスト剤として使用されてきた。これ らの器官におけるコントラスト剤としてのそれらの使用は、注射直後に、その粒 子がＲＥＳにより認識され、そして急速に捕獲されるという観察に基づいている 。この粒子は、次に、血流により除去され、肝臓及び牌臓内に保存され、そして その後に除去される。体からのそれらの除去に先立って標的器官、例えば、牌臓 又は骨髄内への超常磁性粒子の取り込みを増加させ、これによりそれらの使用を より実用的にすることを目的として、公知の配合物の改良に向けて多くの努力が なされてきた。

ＮＭＲ分析の開発に伴って、本技術のかなりの改良及び本分野における重要な進 歩が、その性質が体全体に対するものであり且つ特定のその部分のみに対しての ものでないＮＭＲ分析の使用を可能にするであろうコントラスト剤を提供するこ とにより達成されるであろうということが認識されている。しかしながら、この 目的のために、その磁気的な性質が少なくとも今日知られている酸化鉄粒子のも のと同様に良好であるが本分野において知られた他の粒子のいずれよりも長持ち する血流内の滞留時間をもつような媒質を作り出すことが必要であろう。この故 に、この点に関しては、解決されなければならない問題は、与えられた時間にわ たりＲＥＳにより認識されないであろう粒子を発見することである。さらに、改 良された酸化鉄粒子を、それに被覆されたとき動物又は人体内の他の特定の部位 へのその粒子の配達を助けるか又は滞留時間を変更するかのいずれかである各種 の被覆材料の使用を通して得ることができることが報告されている。

ＥＰ−Ａ−０２７２０９１（ＶＥＳＴＡＲ）は、活性成分、すなわち、マグネタ イトの塗布固体粒子（及び他の診断剤又は薬）であってその成分がその粒子のコ アを構成し、そのコアの成分と会合することができる単分子両親媒性物質（ｍｏ ｎｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ａｏ＋ｐｈｉｐｈｉｌｅ）の第一層をもち一次にその 系が、その両親媒性物質を取り囲むリン脂質の二分子層（すなわち、リポソーム 膜アナログ）を含むことができるものについて開示している。この例の中では、 界面活性剤としてのパルミチン酸により被覆されたマグネタイト粒子が、コレス テロールとジステアロイルホスファチジルコリンとの混合物から作られたリポソ ーム内に取り囲まれていた。本計画の１つの目的は、除去に対して、循環中、活 性成分を安定化することである。

ＢＰ−Ａ−０２７５２８５（ＡＤＶＡＮＣＥＤ　ＭＡＧＮＩＥＴＩＣＳ）ハ、Ｎ ＭＲ画像形成のためのコントラスト剤としての使用のための被覆及び非被覆マグ ネタイト粒子について開示している。被覆されたとき、この粒子は、生物活性分 子がそれに付着するところのポリマーにより取り囲まれる。被覆粒子の場合にお いては、生体分子を、特定の器官又は組織を標的とするために選ぶことができる 。開示されたポリマー被覆は、蛋白、例えば、アルブミン、多糖類、例えば、デ キストラン、ポリペプチド、例えば、ポリグルタメート又はポリリジンあるいは オルガノシロキサン、例えば、Ｎ−２−アミノエチル−３−アミノプロピルトリ メトキシ−シランから作られることができる。この被覆に共有結合的に付着する ことができる生体分子は、抗体、炭水化物又はホルモンであってその生物の特定 の部位へのその粒子の生体分配（ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）及び特異性 を増強することができるものである。

ＥＰ−Ａ−０３５４８５５（ＴＥＲＵＩＪＯ）は、その小胞（ｖｅｓｉｃｌｅ） の脂質層内にポリエチレン・グリコール結合リン脂質を含む医薬担体小胞として のリポソームについて開示している。このリン脂質の疎水部分は、膜構成脂質内 に沈み込み又はそれに結合しており、一方、ポリエチレン・グリコールの親水性 部分は、そこから突き出し、そしてその周囲の媒質中に延びている。このリポソ ーム小胞は、その小胞内にヘモグロビンをカプセル化することによる人工赤血球 の調製に有用であると言われている。

ＵＳ−Ａ−４，９０４，４７９（［ＬＬｔｌＭ）は、親水性セグメント及び疎水 性セグメント（例えば、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ■及びＰｏｌｏｘａｍｉｎｅ■）を 同時にもつ両親媒性ブロック・コポリマーによる被覆ポリスチレン粒子について 開示している。この被覆は、注射後オンソニン作用（ｏｐｓｏｎｉｚａｔ　１ｏ ｎ）を最小化し、そしてその粒子を肝臓又は牌臓よりもむしろ骨髄に向けること ができるように意図されている。Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ■及びＰｏｌｏｘａｍｉｎ ｅ■は、両親媒性ブロック・コポリマーであって連続的な疎水性ポリオキシプロ ピレン・セグメント及び親水性のポリオキシエチレン・セグメントを含んで成る ものであり；肝臓による取り込みに対する保護のために、その親水性セグメント がその粒子の外の被覆の表面から突き出しており、これによりオンソニンのそれ への沈着を立体的に妨害し、そしてその粒子がマクロファージによりより少なく 認識されるようにするということが信じられている。

従来技術の方法は、利点をもつけれども、それらは、異なっているが特定の部位 （例えば、肝臓、牌臓、肺、リンパ節、骨髄等）に選択的に標的化されることが できる粒子の非常に特異的な問題のみを扱っているが、これに対し、本発明は、 ＲＥＳにより認識されず、長時間にわたり血液中に残存し、そして長持続性血液 プール剤の製造に有用であろうところの粒子の製造の問題を解決するために記載 されている。

従来技術の粒子は、高価な製造技術を必要とし、そして注射の間、ＲＥＳにより 認識されそしてその血液から容易に除去される粒子を製造している。このような 粒子及びそれから作られたコントラスト剤は、比較的長い生物学的半減期が要求 されるような用途において使用されることはできない。

血液中で長く存在し、すなわち、ＲＥＳによる取り込みに対する良好な抵抗性、 そしてその組織又は管外の（ｅｘｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ）箇所の中に比較的低 い拡散率をもつコントラスト剤が、特に有用な”血液ブール”剤として本分野に おいて認められている。長い生体半減期は、ある者が繰り返しの注射及びコント ラスト剤の過度の使用を取り去る意味のある分析結果を作り出そうと欲する場合 には、しばしば血液プール剤に要求される。”ステルス（ｓｔｅａｌｔｈ）”粒 子であって長い時間にわたりＲＥＳにより認識されず、引き続き有意な磁気的緩 和時間を提供するであろうものを製造することが必要であろう。真に”ステルス ′な酸化鉄粒子は、今まで知られたコントラスト剤により行われたような、局所 部分又は特定の器官の分析だけではなく、全体としての体のＮＭＲ分析を可能に するであろう。このステルス粒子は、それ故に、血液容量及び脳を含む様々な器 官の血液還流の測定を、非進入性の技術を使用して、可能にするであろう。例え ば、脳皮質の血液酸素化における活性化仕事（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｔａｓｋ ｓ）の間の変化を監視することが可能になるであろう。

また、長い期間にわたり血流中に残存するであろう粒子は、その細胞状態に対す る非常に貴重な情報を、そして様々な物理的な条件下の各種器官内の栄養分の分 配を提供するであろう。このような粒子により作られたコントラスト剤は、生体 内の血液微小循環及び細胞の代謝サイクルの中への直接的な洞察（ｉｎｓｉｇｈ ｔ）を可能にし、そしてそれ故、異形（ａｎｏｍａｌｉｅｓ）　、例えば、腫瘍 増殖をより良好な方向に導く生体内の過程のより良好な理解への新たな道を開拓 するであろう。しかしながら、従来技術は、長い持続時間のマグネタイト粒子を 、そしてそれからの血液プール剤であってこれらの分析技術が上記の測定の実施 及び所望のデータの作成を可能にするようなものを、提供することにおいて未だ 成功していない。

発明の要約 簡単に要約すれば、本発明は、ヒト又は動物の体の診断画像分析のための血液プ ール・コントラスト剤であって、好ましくは、ＭＲＩ分析により、長い時間にわ たり血流中に残存し、そしてそれ故、各種器官の血液容量及び血液還流の測定を 可能にするもの、に関する。

さらに特に、本発明は、コントラスト剤であってＲＥＳによる急激な取り込みに 対して特に抵抗性であり、そして注射の間に、今まで知られている血液プール・ コントラスト剤よりも長く血流中に存在して残るもの、に関する。本発明の血液 プール剤は、両親媒性化合物及び非イオン性界面活性剤の分子を含む３次元シェ ル層（ｓｈｅｌｌ　１ａｙｅｒ）により安定化されている酸化鉄粒子を含んで成 る。この両親媒性化合物は、疎水性の尾部に結合された親水性の負に帯電したリ ン含有の頭部をもち、モしてミセル形態にあるものとして特徴付けされる。この ３次元シェル層の非イオン界面活性剤は、その両親媒性化合物が上記のミセル形 態で存在することを生じさせ、そしてその両親媒性物質の親水性リン含有（好ま しくはホスホリル）頭部は、少なくとも２の負電荷を含む。この３次元シェルは 、両親媒性化合物の分子から作られており、その負のホスホリル頭部が酸化鉄コ アの方に集中し、そしてその疎水尾部がそれから外側に突き出してウルチン（ｕ ｒｃｈｉｎ）様構造を作っている。このウルチン様構造は、それに非イオン界面 活性剤をつなぎ留めることにより上記の３次元シェルを構築するための基礎とし て役立つ。この両親媒性化合物が、モノ・アルキル若しくはアルケニル・リン酸 エステル又はグリセロホスホリピドであるときは、この外側の層は、非イオン界 面活性剤であり、その疎水部分がそのエステル又はグリセロホスホリピドのアル キル又はアルケニル鎖によりからみ合わされ又は巻き合わされ、さらにその構造 を安定化している。エーテルの場合においては、これらの化合物のミセル化を引 き起こす非イオン界面活性剤の自然の能力は、展開されるであろう。

好ましいグリセロホスホリピドは、置換又は部分置換ポリアルコールのモノ−ホ スフェート・エステルであって、そのポリアルコールの他のアルコール官能基の 少なくともｌが長鎖の飽和又は不飽和脂肪族脂肪酸によりエステル化されている か又は長鎖の飽和又は不飽和アルコールによりエーテル化されているもの、その リン酸の他の２つの酸性基が遊離であるか又はアルカリ若しくはアルカリ土類金 属により塩化されているかのいずれかであるもの、である。さらに特に、このグ リセロホスホリピドは、好ましくは、シミリストイルホスファチド酸（ｄｉｍｙ ｒｉｓｔｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃ　ａｃｉｄ）、ジパルミトイルホスフ ァチド酸（ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃ　ａｃｉｄ）、又 はジステアロイルホスファチド酸（ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄ ｉｃ　ａｃｉｄ）から選ばれた脂肪酸グリセリドのモノホスフェートである。

好ましい非イオン界面活性剤は、ポリオキシエチレン及びポリオキシプロピレン ・セグメントもつ少なくともｌのブロック−コポリマー又はポリエチレングリコ ールヘキサデシルエーテルをもつ生理学的に許容される界面活性剤である。この 種類の界面活性剤は、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｏ、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ　＠、Ｐｏｌｏ ｘａｍｉｎｅ■、５ｙｎｐｅｒｏｎｉｃ■又はＢＲＩＪ＠の商標名の下で商業的 に入手可能である。

調製後、本発明の粒子を、滅菌し、そしてその後、凍結乾燥し、長時間保存可能 な滅菌粉末を作ることができる。このような場合には、本発明のコントラスト剤 を、生理学的に許容される液体担体中にその粉末を分散させることにより凍結乾 燥された微粉の配合物から再構築する。

本発明は、さらに、粒子の製造方法、並びにヒト又は動物の体のＮＭＲ画像形成 におけるコントラスト剤としてのそれらの使用に関する。

図面の簡単な説明 図１ａは、本発明の粒子に関係する酸化鉄のウルチン様構造の断面模式図であり 、非イオン界面活性剤が粒子の回りに３次元シェル構造を形成している。

図１ｂは、本発明の粒子に関係する酸化鉄のウルチン様構造の３次元図のセクシ ョンである。

図２は、本発明の酸化鉄のＡｒｅａ　Ｕｎｄｅｒ　Ｃｕｒｖｅ（ＡＵＣ）として 表わされた滞留時間又は”活性”と、従来技術の粒子について得られたものとの 比較を示す模式図である。

発明の詳細な説明 本発明の粒子は、酸化鉄のコア並びに両親媒性化合物及び非イオン界面活性剤の 分子から成る外側の層がら本質的に成る。酸化鉄の表面に付着する比較的強い電 荷の親水性部分をもつ両親媒性化合物は、モノ・アルキル若しくはシクロアルキ ル若しくはアルケニル・リン酸エステル又は負に帯電したリン脂質であることが できる。本明細書中で使用する用語”シクロ（ｃｙｃｌｏ）”は、その分子の環 状部分が５−７員環であることができ、飽和であることができ又はそうでないこ とができ（芳香族）、又は複素原子を含むことができる（複素環）ことを意味し ている。いずれの場合においても、３次元シェルの形状をもつ外側の層は、その 疎水性部分がそのエステルのアルキル若しくはアルケニル鎖によりからみ合わさ れ又は巻き合わされ、その３次元構造をさらに安定化する非イオン界面活性剤を 含んで成る。この非イオン界面活性剤は、リン酸モジエステル又はリン脂質をミ セル化することもできる。なぜなら、ミセル形態にあるときのみ、これらの化合 物は、その酸化鉄コアに十分なアフィニティーを示すであろうし、結果として、 マグネタイト粒子の安定化剤として使用されることができるからである。ホスホ リル頭部とＦｅ、　０　、どの間のアフィニティーは、非イオン界面活性剤の存 在中及び音波処理の間に、そのミセルのリン脂質又はモノエステルがその界面活 性剤の疎水性セグメントとその両親媒性化合物の疎水性部分との相互作用を通し て作られる外側の３次元シェルの構築のための鋳型としてその後に役立つウルチ ン様前駆体を、作り出す。この３次元構造は、次に、安定した“ＲＥＳ非認識性 ”粒子を提供するであろう。これ故に、本発明の血液プール剤においては、両親 媒性化合物、好ましくは外側の層を作り出すグリセロホスホリピドがリポソーム 小胞を形成せず又はその酸化鉄コアの周りにリポソーム様フィルムを形成しない ということが重要である。なぜならば、この３次元シェルは、リン脂質分子であ ってその負のホスホリル頭部が酸化鉄コアに向かって集中し、そしてその疎水性 の尾部がそれから外側に突き出し、ウルチン様前駆体構造を形成しているものか ら、形成されるからでる。このウルチン様構造は、その出発両親媒性化合物がモ ノ・アルキル若しくはモノ・アルケニル・リン酸エステル又はミセルのグリセロ ホスホリピドのいずれかである場合には、常に、その３次元シェル又は層を構築 するための基礎として役立つ。いずれの場合においても、得られた粒子は、除去 に対して増加された安定性をもち、そして素晴らしいコントラスト剤の性質を示 すであろう。リポソーム様フィルム内に参加する両親媒性分子が、逆の順序にお いて、尾から尾に、結合され、その親水性頭部が外側に突き出しているというこ とに留意すべきである。

それにより完全な３次元シェルが構築されることができるところの酸化鉄粒子の 周りのウルチン様基礎を得るために、グリセロホスホリピドを使用するとき、（ ａ）グリセロホスホリピド及び非イオン界面活性剤の同時存在中でその酸化鉄粒 子にエネルギーを与え、又は（ｂ）グリセロホスホリピドによりその酸化鉄粒子 の懸濁液を調製し、非イオン界面活性剤を添加し、そして次に、場合によりその エネルギーを与える段階を繰り返すことのいずれかが、重要である。

エネルギー供与を、その酸化鉄粒子を均一に分散させ、又はリポソーム又は先に 形成されるかもしれないラミネートのミセル化及び／又は破壊を加速する分散体 を均一化することにより、行う。エネルギー供与を、攪拌を含む（ａｇｉ　ｔａ ｔ　１ｏｎ）を含む様々な方法を使用して行うことができるが；有利には、温和 な加熱（３０−５０℃）下の音波処理、マイクロ流動化（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄ ｉｚａｔｉｏｎ）が、好ましい。

粒子を安定化する３次元シェルの構築が、酸化鉄とグリセロホスホリピドとの間 でミセル形態において形成されたウルチン様基礎構造を介して行われるというこ とが、仮定されている。このリン脂質は、界面活性剤の存在中の音波処理又はマ イクロ流動化により最初にミセル化され、そして次に、それらの電気的に中性な 疎水性末端がその界面活性剤により引きつけられながら、そのミセル内の両親媒 性物質の負の電荷が、その酸化鉄コアと相互作用する。

実験の証拠は、３次元シェルの形成の過程の間に、この界面活性剤がいくつかの 作用を提供することを示している。それは、両親媒性物質のミセル化を引き起こ し、それは、そのコアの周りのミセルの配向及び構造を支持しくウルチン様前駆 体の形成を容易にし）、そして最終的に、それを、両親媒性物質の疎水性セグメ ントにつなぎ留め、その粒子の周りの３次元シェルを提供する。

あきらかに、中間体ウルチン様構造、例えば、図１　（ａ　＆　ｂ）中に例示す るようなものの形成は、非常に重要である。なぜなら、非イン界面活性剤単独で は、ＲＥＳによる急激な取り込みに対するマグネタイト粒子の十分な保護を提供 することがきないということが分かっているからである。非イオン界面活性剤と 一緒になっての又は単独でのリン脂質の使用が本発明に従って調製されない場合 には長寿命の血液プール・コントラスト媒質として事実上有用である粒子を作り 出さないであろうとついことが、判明している。したがって、血流からの未成熟 除去に対する酸化剤粒子の安定化の成功は、リン脂質の使用を通して達成される ことができる。但し、従来技術の配合物内の粒子の周りに正常に存在するリン脂 質のリポソーム構造が破壊される場合においてのみのことである。このことは、 リン脂質に加えて、ポリオキシエチレン（ＰＯＥ）／ポリオキシプロピレン（Ｐ ＯＰ）界面活性剤を含むマグネタイト懸濁液によってさえ、上記のようであるこ とが見つかっている。それ故、それが、ブロック−コポリマー界面活性剤がその マグネタイト・コアの周りのシェルの外側の位置において適当に安定化される場 合にのみ、必要なものとして働くであろう。懸濁液中にそれが単に存在すること では、十分でない。

このことは、同一の懸濁液がリン脂質により安定化されたマグネタイトを含む場 合にさえ、すなわち、マグネタイト粒子がリン脂質（これは、次に、Ｐｅｗ　Ｏ ａ表面上の薄層フィルムとして拡がる）により第一〜被覆され、そしてその界面 活性剤がエネルギー供与を行わないでその後に添加される場合にさえ、を記のよ うである。上記の結論は、３次元の１、例えば、ミセルのリン脂質により形成さ れたウルチン様構造だけが、表面を十分に捕獲し、且つつなぎ留め、安定したＲ ＥＳステルス酸化鉄粒子を提供することができるという観察により支持される。

推定Ｃあるが、界面活性剤のつなぎ留めは、その疎水性のポリオギシエチ１．・ ン（ＰＯＰ）セグＩントであってグリセロホスホリピド又はリン酸モノエステル の疎水性部分と相互作用するものを介して起こる。図１（ａ　＆　ｂ）中に示唆 されるよう（：、この疎水性部分は、ポリ第４゛シエヂ１．・ソ（ＰＯＰ）セグ メントによるファン・デル・ワールスカによりつなぎ留められ、−力、その親水 性のポリオキシエチレン（ＰＯＥ）セグメントは、その溶液中に外側に突き出し 、それにより、そのマグネタイト粒子のオン゛ノニン作用及び凝集をたぶん抑制 する。

リン酸のアルキル又はアルケニル・エステルの場合においては、ウルチ゛ノ様構 造の形成は、先に記載したものと基本的に同一であり、そして非イオン界面活性 剤は、そのリン酸エステルのアルキル又はアルケニル鎖によりからみ合わされ又 は巻き込まれたその疎水性部分をもっており、そしてその親水性部分は、その溶 液中に突き出している。

酸化鉄コアとホスホリル頭部との間の相互作用の確かな性質は、正確には知られ ていない。しかしながら、本発明の″ステルス”酸化鉄粒子の血液中での良好な 滞留性のためには、そのホスホリル部分内の両方の酸素原子の負の電荷がそのコ アとの相互作用のために利用できるということが重要であるということが分かっ ている。したがって、たった１つの負の酸素原子が利用できるときには、作られ た粒子は、同一の安定性をもっておらず、そして循環からより容易に除去される 。これまでのところ、この相互作用の重要性及び安定性は、本分野において認識 されておらず、そしてそれ故、このことは、なぜ、長時間持続性のマグネタイト 血液プール粒子を製造する先の試みが失敗したのかを説明することができる。

例えば、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）又はシミリストイル ホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）の場合のように、負の電荷が中和されるとこ ろのリン脂質が使用されるとき、形成された対応する粒子構造が貧弱に保護され 、そして、このような粒子が血流からの未成熟除去から保護されていないために 、これらの化合物により作られたコントラスト剤が長時間持続性血液プール剤と してではなく肝臓及び牌臓を画像形成するために有用であることができるという ことが分かっている。同じことが、そのホスホリル頭部がそのマグネタイト・コ アと相互作用するために利用できるたった１つの負の電荷しかもっていないリン 脂質に適用される。例えば、シバルミ１−イルホスファチジルグリセロール（Ｄ ＰＰＧ）、シミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）又はジセチ ルホスフェート（ＤＣＰ）は、血液からの急激な除去に対して不適切に保護され た粒子構造を作り出す両親媒性物質である。このような方法で作られたコントラ スト剤は、それ故に、血液プール剤としては有用ではない。なぜなら、それらは 、血流内で比較的短い滞留時間をもつであろうからである。

他方において、そのホスホリル部分内の両方の酸素原子上の負の電荷がそのコア との相互作用のために利用できるようなリン脂質が使用されるときには、得られ た構造は、非常に安定であり、そしてこれらの化合物により作られた酸化鉄粒子 は、血流がらの除去に対して良好に保護されている。このような化合物の例は、 ジパルミトイルホスファチド酸（ｄｉｐａｌｎ＋１ｔｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉ ｄｉｃ　ａｃｉｄＸＤＰＰＡ）及びシミリストイルホスファチド酸（ｄｉｍｙｒ ｙｓｔｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃ　ａｃｉｄＸＤＭＰＡ）である。

粒子の良好なステルス性能を確保するためには、その粒子の直に隣接する化合物 は、そのホスホリル頭部内の両酸素原子上の負電荷の利用可能性に加えて、その リン原子に付着結合した比較的長いアルキル若しくはアルケニル鎖又は疎水性シ クロアルキルを、直接的に、又はアルキレン又は酸素架橋の仲介を介してのいず れかにおいて、もたなければならない。それ故、安定なステルス粒子得て、そし てそれから本発明のコントラスト剤を得るために、マグネタイト・コアに直に隣 接する化合物は、モノ・アルキル若しくはアルケニル又はシクロアルキル含有の 、リン酸のエステル、モノアルキル・ホスホネート又はグリセロホスホリピドで あって、そのアルキル又はアルケニル鎖が比較的強い疎水性の性質をもつもので なければならない。実験は、十分な長さをもつアルキル又はアルケニル鎖だけが 他の両親媒性化合物と適当に相互作用し、そして十分な量の非イオン界面活性剤 又はブロック・コポリマーのためのアンカー（ａｎｃｈ。

ｒ）を提供し、その鉄コアの周りに安定な３次元構造を作り出すということを示 した。少なくとも８の炭素原子、好ましくは少なくともｌＯの、そしてさらに好 ましくは、少なくとも１２炭素原子をもつアルキル又はアルケニル鎖が、特に好 ましい。短い疎水性のアルキル若しくはアルケニル鎖又はマクロサイクル・リガ ンドは、安定な粒子を提供せず、このことは、所望の結果を得るためには、仲介 層と界面活性剤との間の強い相互作用をもたなければならないか、又は十分な量 のアンカー界面活性剤が利用できなければならないかのいずれかであることを示 している。上記特徴の認識の欠如は、なぜ、ＲεＳ不可視化又はステルス酸化鉄 粒子が今まで事実上有用な長時間持続性の血液プール剤として利用することがで きなかったかということに関しての他の可能性のある説明であることができる。

本発明において好適なモノホスフェート・エステルの中で、ある者は、Ｃ１−〇 ３．アルキル及びアルケニル・ホスフェート、コレステリル−ホスフェート、シ クロヘキシル−デシル−ホスフェート、セチルポスフェート、クミル・ホスフェ ート、等を、引用した。

このように、本発明に従って、粒子に直に隣接した第一層が比較的強い負の官能 基及び比較的長く且つ有効な疎水性の有機鎖をもつ両親媒性物質を含んで成り、 そしてそれとからみ合わされ又は巻き込まれたさらなる層が連続して親水性及び 疎水性セグメント、例えば、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ■、５ｙｎｐｅｒｏｎｉｃ＠又 はＰｌｕｒｏｎｉｃ■タイプの界面活性剤をもつブロック・コポリマーから作ら れいる場合には、循環からの除去に対する粒子の非常に有効な保護を、得ること ができる。モノ・アルキル若しくはアルケニル・リン酸エステル又はホスボネー トとして定められた上記第一層の物質の効果は、特に、いくつかの従来技術（Ｗ ｏ　９１１０９６２９．１７ページ、第一パラグラフを参照のこと）の視点にお いては、全体として予想されておらず、そして唖然とさせるものであった。それ は、リポソームの膜内の負に帯電したリン脂質の存在が網内皮糸によるそのリポ ソームの取り込みを増加させるであろうといおうことを示している。

本発明の粒子のためには、モノ・アルキル・リン酸エステル又はグリセロホスホ リピド及びブロック・コポリマーの、互いに比較した量か、実質的でなければな らず、すなわち、前者対後者の重量比が、１：ＩｏｏからｌＯ：Ｉまて、好まし くはＩ：３０から５：ｌ　まで、そしてさらに好ましくは１：１０からｌ：ｌま での範囲になければならないことも見つけられた。また、モ７ノ・アルキル・リ ン酸エステル対酸化鉄コアの重量比がｌ：５と１００：１との間、好ましくは２ ０：ｌとｌ＝１　との間にあるべきである。また、幾つかの実験データは、非常 に多くの界面活性剤がリン脂質又はモノエステルを分散させることができ、それ だけ、マグネタイト粒子のためのそれらのアフィニティーが減少され、そしてウ ルチン様構造の形成が邪魔されるので、界面活性剤対ミセルのリン脂質又はリン 酸のモノエステルの比が特定の限界内に維持されるできであることを示唆してい る。同じ理由により、非常に少量の界面活性剤により調製された粒子は、凝集す るであろうし、そしてオンソニン作用から十分に保護されないであろう。

安定なＲＥＳ不可視化粒子を、イオンの及び中性のリン脂質、リン脂質のモノ・ アルキル若しくはアルケニル・エステル及び／又は他の非リン脂質化合物から選 ばれた２以上の化合物の混合物から、その中で酸化鉄粒子が負に帯電した両親媒 性化合物又は負に帯電したリン脂質とその他の非リン脂質との混合物及び界面活 性剤により生理学的に許容される水相中で懸濁され又は混合されるような方法に より、作ることができる。形成された混合物を、音波処理し又はマイクロ流動化 し、両親媒性化合物をミセル化し、ウルチン様構造を作り出し、そしてそれから 、酸化鉄粒子の周りの３次元シェルを作り出すことが、確立された。得られた粒 子は、循環からの未成熟除去から良好に保護されるであろうし、そして素晴らし い血液プール画像形成剤として非常に有用であることが見っがっている。本発明 の安定なマグネタイト粒子に有用であることができる非リン脂質化合物の例は、 コレステロール、エルゴステロール、フィトステロール（ｐｈｙｔｏｓｔｅｒｏ ｌ）　、シトステロール（ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌ）、ラノステロール（Ｉａｎｏ ｓｔｅｒｏｌ）、トコフェロール（ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ）、等のような化合物 である。

音波処理又はマイクロ流動化の後、混合物を、さらに滅菌及び／又は凍結乾燥し 、長い保存寿命をもつ乾燥粉末を作ることができる。

変法においては、界面活性剤を、音波処理又はマイクロ流動化の後に酸化鉄と両 親媒性化合物との混合物に添加することができる。

このような場合においては、しかしながら、この音波処理、マイクロ流動化又は 加熱の段階は、場合により、すべての成分と一緒に繰り返される。

また、本発明の懸濁液を、酸化鉄粒子を含んで成る粒状の又は粉体の配合物から 調製することができる。粉体形態の配合物は、普通には、酸化鉄粒子、リン脂質 及び非イオン界面活性剤を含んで成る新たに調製された溶液を凍結乾燥し又は乾 燥させることにより、調製される。凍結乾燥又は乾燥に先立って、これらの溶液 を滅菌する。

滅菌を、公知技術のいずれか、すなわち、加熱、濾過、γ−線、等を使用して行 うことができる。あるいは、長時間にわたり保存された凍結乾燥粉体を使用して 得られた溶液を滅菌することも可能である。

本発明に従って調製された粒子は、ヒト又は動物の体の器官のインビボにおける ＮＭＲ画像形成のための血液プール・コントラスト剤として有用であることが見 つかっている。この画像形成を、普通には静脈内注射を介して、生理学的に許容 される水性担体中の本発明に記載マグネタイト粒子の水性懸濁液を、患者に投与 し、そしてＮＭＲ分析装置により作られた磁場の中で、調査下の器官の付近のＨ ６０のプロトン・スピンの磁気的な緩和の変化（Ｔ、　＆　Ｔ　、成分）を分析 することにより、行う。

以下の例は、さらに本発明を説明している：例１ ４０ｍ１の水中に、８１１ｎ＋ｇ（０，３ｍｍｏｌ）のＰｅＣ１，・６Ｈ＊　Ｏ 及び２５．８ｍｇ（０゜＋３ｍｍｏｌ）のＦｅＣ１！　−４Ｈ！　０　（全Ｆｅ ＝０．４３ｍｍｏｌ又は２４．　Ｏｌｍｇ）を溶解した。これに、ＦｅＣ１５の 形態の０．１ｍＣ１の”Ｆｅ（）レーサー量）を添加した。この混合物を、攪拌 し、そしてアンモニアの水性７．５％溶液を、そのｐＨが８．６の安定値に達す るまで一滴ずつ添加した。黒い粒子の懸濁液を形成し、これを５分間７５°Ｃに おいて加熱し、そしてその粒子を、沈殿に供しそして室温において保管した。こ の沈殿物を、Ｉｏｏｍｔの水の部分によるデカンテーションにより３回洗浄した 。

洗浄後、この粒子を再び攪拌下４５ｍ１の水中に懸濁させた。この懸濁液中の鉄 の濃度は、０．５３３ｍｇ／ｍｌであった。

この懸濁液のｌ０ｍ１（５，３３ｍｇのＦｅ）に、（成分（ａ）として）　１０ ０ｍｇのジパルミトイルホスファチド酸のモノナトリウム塩（ＤＰＰＡ　Ｎａ） を添加し、そして音波処理を、２０分間行った（ＢＲＡＮＳＯＮ　２５０５ｏｎ ｉｆｉｅｒ、　１／８”マイクロプローブ、アウトプット２０（１５−２０Ｗ） ）。音波処理の間約６８°Ｃまで上昇した温度を、室温まで低下させ、そして（ 成分（ｂ）として）１００ｍｇの５ｙｎｐｅｒｏｎｉｃ＠ＩＰ−１０８（［Ｃｒ から）又はＰｏｌｏｘａｍｅｒ■−３３８を添加した。次に音波処理を同一条件 下で１５分間再開し、完全な分散及びそのリポソーム小胞の破壊を確保し、そし てその酸化鉄粒子の周りのミセルのリン脂質層を提供した。

本発明に従って得られた粒子の懸濁液は（サンプルＡ）は、ｍ１当たり、０．５ ｍｇの鉄、１０ＨのＤＰＰＡ及び１０ｍｇの５ｙｎｐｅｒｏｎｉｃ■界面活性剤 （（ａ）対（ｂ）＝１：１の重量比）を含んでいた。Ｃ０ＵＬＴＥＲＮａｎｏｓ ｉｚｅｒ計数装置による測定は、その平均粒子サイズが１２０１ｍであり、多分 散係数（ｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｔｙ　１ｎｄｅｘ）が３であったことを示し た。

他のサンプルを、類似の条件下で行った。但し、ＤＰＰＡの一部をＤＰＰＣによ り置き換え：これが、以下のサンプル（モル比ＤＰＰＣ／ＤＰＰＡ）　：　ＩＣ （９：ｌ）　＋ＩＤ（７，５／２．５）　：ＩＥ（５：５）　：１Ｆ（２，５ニ ア、　５）を与えた。最終的（＝、対照サンプル（ＩＢ）を、ＤＰＰＣだけを含 むように作った。

さらなる対照サンプルを、従来技術の文献ＥＰ−Ａ−０２７２０９１の教示を使 用して作った。この文献の例１中の手順を繰り返すこと（こより、サンプルｌ■ １を作った。マグネタイト粒子を、単分子量のツクルミチン酸により第一被覆し 、そして次に、ジステアロイルホスファチジルコリンとコレステロールとの２！ 混合物（ＤＳＰＣ／ＣＨＯＬ）力１ら作つた脂質フィルム内に包んだ。サンプル ＋Ｖ、は、５ｙｎｐｅｒｏｎｉｃＯＦ−１０８の層によりさらにｔＶ、を保護し た結果であった。

様々な懸濁サンプルを、実験Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの尾部の血管 中に１ｍｌアリコツトを注射することによりテストし、そしてその後、所定の時 間の間隔において血液サンプルを除去し：次に、この血液サンプルを、残存鉄に ついてγ−計数により分析し、そしてその結果を、時間の関数として注射した元 の鉄の％（［Ｄ）として記録した。

血液中に与えられた調製物の持続性の特徴付けを、注射後Ｏと１２０分目との間 の、％］Ｄ対時間についてのＡｒｅａ　Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　Ｃｕｒｖｅ（ＡＵ Ｃ）を測定することにより、行った。これらの結果を表１中に表す。

結果は、ＤＰＰＡを欠いたサンプル（１Ｂ　、　ＩＶ＋　、ＩＦ２　）のすべて の急激なりリアランスを示している。反対に、ＤＰＰＡを含むサンプルは、より ゆっくりとクリアランスが行われ、その効果は、負に帯電したリン脂質の量に対 し変動した。この効果は、ＤＰＰＡ対全リン脂質のモル比又は重量比が１〜４以 上のときの実際の使用について特に有意なものとなる。表中の結果から、循環か らの除去に対して粒子を最良に保護するためには、そのコアに比べたＤＰＰＡの 重量量が５：１以上であることも見ることができる。

表】Ａ 先の実験において、そのモノナトリウム塩の形態におけるＤＰＰＡが遊離酸によ り又は他の可溶性塩（他の金属からの）により置き換えられる場合には、類似の 結果が得られる。その上、ＤＰＰＡが他のホスファチド酸、例えば、ジステアロ イル−、シミリストイル−、ジラウロイル−アナログ並びにより高いホモログ（ Ｃ２゜−１，酸）により置き換えられた場合には、その結果は有意には異ならな い。成分（ｂ）の非存在中では、成分（ａ）単独によるマグネタイト粒子のある 程度の保護がやはり得られるということにも留意すべきである。しかしながら、 このことは、診断目的のための使用されるべき粒子を保護することについては意 味がない。サンプルｌＤｚ　、ＩＥｔ　、　ＩＦｔについての先の表ＩＡの結果 により示されるように、５ｙｎｐｅｒｏｎｉｃ＠ｌが省かれたことを除き、対応 サンプルｌＤ、　ｌＥ及びＩＦとそれぞれ同一である。表ＩＡ中に与えられた結 果は、分により表されたそれぞれの時間の後の、元の鉄投与量の残存のパーセン トとして表されている。

表２中には、ＤＰＰＡ（成分Ａ）がホスフェ−ト基上にたった１つのイオン官能 基しかもっていないアナログ化合物、すなわち、ジパルミトイルホスファチジル グリセロール（ＤＰＰＧ）　（サンプルＩＧ）により置き換えられたとき、得ら れた層が事実上、保護を全く提供しないということを示す結果（表１中に報告し たものと同じように行った実験からのもの）が在る。これは、５ｙｎｐｅｒｏｎ ｉｃ■（サンプル１８）の添加によってさえもそのようである。対照（サンプル ＩＪ）として、デキストラン被覆マグネタイトのサンプル（Ａｄｖａｎｃｅｄ　 Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ、ＩｎｃのＥＰ−Ａ−０２７４２８５に従って調製されたＡ ｌ１［−２５）により得られた結果をも、表２中に提供する。

例２ 例１中に記載され且つ図２及び表３中に表された条件下で行われた実験の説明は 、例１中に報告した結果の討議において報告された現象の初期の観察のさらなる 支持を提供する。グループｂ）、Ｃ）、ｄ）及びｒ）のための代表サンプルを、 それぞれＥＰ−Ａ−０２７２０９１及びＢＰ−Ａ−０２７４２８５の教示の従っ て調製し、一方、他のすべてのサンプルを、例１中に記載した発明の方法に従っ て調製した。結果は、非イオン界面活性剤だけにより調製されたマグネタイト粒 子（グループａ）が短い時間にわたり循環中に在るであろうということを明らか に証明している。非イオン界面活性剤の有無にかかわらずＤＳＰＣ／コレステロ ール・リポソーム小胞の使用は、血液プール剤の特徴を改善しない（グループｂ ）。様々なリン脂質が、安定した酸価鉄粒子の製造に有用な材料であるべきこと が要求される。しかしながら、実際には、例えば、ジパルミトイルホスファチジ ルコリン（ＤＰＰＣ）又はシミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）　 （グループＣ）の場合のように、その負の電荷が中和されているリン脂質が使用 される場合には、形成されたその対応する構造が貧弱に保護され、そして作られ たコントラスト剤が肝臓及び牌臓又は骨髄の画像形成には有用であることができ るが長時間持続性の血液プール剤としては有用でない。はぼ同じことが、そのホ スホリル頭部がマグネタイト・コアとの相互作用に利用できるたった１つの負電 荷をもつようなリン脂質について見つかっている。例えば、ジパルミトイルホス ファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、シミリストイルホスファチジルグリセロ ール（ＤＭＰＧ）又はジセチルホスフェート（ＤＣＰ）が、血液からの速い除去 から不適切に保護された構造を作り出すリン脂質である（グループｄ）。ホスホ リル部分内の両方の酸素原子上のその負電荷がコアとの相互作用に利用できるよ うなリン脂質が非イオン界面活性剤の非存在中で使用されたときでさえ、得られ た構造が本発明の長寿命血液プール剤として有用でないということが、さらに確 立された。このことは、ミセル形態でない場合には、ジパルミトイルホスファチ ド酸（ＤＰＰＡ）又はジニリス）・イルホスファチド酸（ＤＭＰＡ）が使用され る場合でさえ、作られた酸価鉄粒子が血流からの除去に対して良好に保護されな いであろうということを示している。

しかしながら、マグネタイトの保護が従来技術のリン脂質配合物を使用するより もデキストランを使用して良好に達成されることが見つかったのは驚くべきこと である（グル・−プｆ）。これは、これらの典型的なリポソーム配合物が非イオ ン界面活性剤を含んでいたときでさえそうであった。デキストラン被覆マグネタ イト粒子は、肝臓及び牌臓を画像形成するために特別に設計され、そして血流か らの比較的速い除去のために設計されたコントラスト剤として正常には使用され る。

ホスホリル部分内の両方の酸素原子上のその負電荷がコアとの相互作用に利用で きるようなリン脂質が使用されるとき、得られたマグネタイト粒子は、そのリン 脂質がミセル形態で存在するという条件Ｆて血液Ｗ４環中において非常に安定し ている。したがって１４例えば、ミセル形態におけるジパルミトイルホスファチ ド酸（ＤＰＰＡ）により調製さｔｌだ酸価鉄粒子及び本発明の方法を使用した５ ｙｎｐｅｒｏｎｉｃ■Ｆ１０８は、血流からの除去に対して良好に保護された粒 子を作り出すてあろう。同じことか、ＤＰＰＡがＤＭＰＡ、　ＤＳＰＡ又はセチ ル・ホスフェートあるいはレシチ゛、ノとホスファチド酸との混合物により置き 換えられたどきに、適用される（グループｇ）Ｑ結果の分析において、血流中の ｔＡ料の安定性を、開始期において十分な長さの疎水性鎖をもつリン脂質のホス ホリル頭部がマグネタイト・コアと相互作用し、ウルチノＩｌ！構造であってそ の後非イオン界面活性剤のためのアンカ一層を提供し、そしてそれ故にコアの周 りの３次元層を提供するものを形成するようなモデルを使用し７て、合理的に解 釈することができる。また、それぞれの実験は、異なる源からの非イオン界面活 性剤の使用がその最終結果に対して二義的な影響しかもたないことを示した。

凡例 界面活性剤 Ｐｌ＋ｒｏｎｉｃ　＝　Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ　３３８　＝　５ｙｎｐｅｒｏｎｉ ｅ　Ｆ　１０８　＝ブロック−コポリマーであってそのコポリマー配列が：（オ キシエチレン）、−（オキシプロピレン）、−（オキシエチレン）、であるもの 。

ホスファチド酸（Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃ　ａｃｉｄｓ）ＤＬＰＡ　＝　１． ２−ジラウロイル−グリセロ−３−ホスファチド酸（飽和脂肪酸Ｃ、、） ＤＭＰＡ　＝　１．２−シミリストイル−グリセロ−３−ホスファチド酸（飽和 脂肪酸Ｃ１，） ＤＰＰＡ　＝　１．２−ジパルミトイル−グリセロ−３−ホスファチド酸（飽和 脂肪酸Ｃ１，） ＤＳＰＡ　・１．２−ジステアロイル−グリセロ−３−ホスファチド酸（飽和脂 肪酸Ｃｌ８） ＳＰＡ−３＝　１．２−シアルコイル−グリセロ−３−ホスファト酸（大豆、水 添：　Ｃ＋ｓとＣＩ８との混合脂肪酸から得られたもの）ホスホコリン（Ｐｈｏ ｓｏｈｏｃｈｏｌｉｎｅｓ（レシチン（ｌｅｃｉｔｈｉｎｅｓ））　）ＤＭＰＣ ＝　１．２−シミリストイル−グリセロ−３−ホスホコリンＤＰＰＣ＝　１．２ −ジパルミトイル−グリセロ−３−ホスホコリンＤＳＰＣ＝　１．２−ジステア トイルーグリセロ−３−ホスホコリンＤＡＰＣ＝　１．２−ジアラキドイルーグ リセロー３−ホスホコリンＰ　９０Ｈ＝　１．２−シアルコイル−グリセロ−３ −ホスホコリン−水添大豆レシチン（Ｃ１，とｃｐｓとの混合脂肪酸＝ＤＰＰＣ と同じもの）ホスホグリセロール（Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒｏｌｓ）ＤＭＰ Ｇ　＝　１．２−シミリストイル−グリセロ−３−ホスホグリセロールＤＰＰＧ 　・１．２−ジパルミトイル−グリセロ−３−ホスホグリセロールその他 ＣＨＯＬ　＝　コレステロール ＣＥＴＹＬ　ＰＨ０ＳＰＨＡＴＥ・セチル・アルコール（Ｃ＋−）のリン酸モノ ・エステル ＴＷＥＥＮ　＝ポリソルベート−ポリオキシエチレン・ソルビタン脂肪酸エステ ル ＢＲＩＪ　＝ポリエチレングリコール・ヘキサデシルエーテルＭＡＧ（Ｖ）　＝ 　ＥＰ−Ａ−０２７２０９１に従って調製したリポソームをもつマグネタイト ＡＭ［２５＝　ＥＰ−Ａ−０２７５２８５に従って調製したデキストラン被覆マ グネタイト ＤＰＰＣ／ＤＰＰＡ　、　＝　ＤＰＰＣ対ＤＰＰＡの重量比７．５／２．５ＤＰ ＰＣ／ＤＰＰＡ　２＝　ＤＰＰＣ対ＤＰＰＡの重量比５．０１５．０ＤＰＰＣ／ ＤＰＰＡ　４＝　ＤＰＰＣ対ＤＰＰＡの重量比２．５／７．５界面活性剤Ｆ１０ ８ Ｈ−（０−ＣＨ２−ＣＨ２１ｎ−（０−ＣＨ−ＣＨ２］！！ＩＩ　−［０−ＣＨ ２−ＣＨ２）、　−ＯＨ夏 ＣＨ３ Ｍｗ＝　１４．０００ ホスファチド酸 ＤＬＰＡ　：　ｎ　＝　１０　ＤＭＰＡ：　ｎ　＝　１２　ＤＰＰＡ：　ｎ　＝ 　１４　ＤＳＰＡ：　ｎ　＝　１６ン界面活性剤の比が０．０１と１０との、好 ましくは０．１と１との間に維持されるへきという発見により、さらに裏付けら れる。

表４中に表されるように、実験は、酸化鉄の一定濃度のために、（ＤＰＰＡのも のと比較して）過剰量の非イオン界面活性剤により調製されたマグネタイト粒子 が血液からの速い除去から適切に保護されないということを示した。他方におい て、実験は、同一の条件下であるがより少ない量の界面活性剤により調製された 粒子が未成熟除去からの等しく貧弱な保護を示したことをも示した。これらの結 果の裏にある理論的解釈は、非常に多くの界面活性剤がリン脂質又はモノエステ ルを分散させることができ、それだけ、マグネタイト粒子へのアフィニティー、 そしてそれによる、ウルチン様構造の形成のための適当な条件が破壊されるとい うことを、示している。同じ理由により、非常に少量の界面活性剤の集団により 調製された粒子は、血液からの除去から保護されない。

フロントページの続き （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＰＴ、ＳＥ） 、　ＡＵ、　ＣＡ、ＦＩ、　ＨＵ、ＪＰ、　ＫＲ，Ｎｏ、　ＮＺ （７２）発明者　シュナイダー、ミヒャエルスイス国、ツェーハー−１２５６ト ロワネ。

ルート　ダネシー、ドメーヌ　デュ　ムリン、３４

Claims (23)

【特許請求の範囲】
1. １．ヒト又は動物患者のＮＭＲ画像形成における使用のための粒子であって、酸 化鉄のコア及び疎水性の尾部に結合された負電荷リン含有頭部をもつ少なくとも １の両親媒性化合物の層及び１以上の界面活性剤を含んで成り、その両親媒性化 合物がミセル形態で存在し、そしてその層が、その両親媒性化合物がそのミセル 形態で存在することを生じさせる少なくとも１の界面活性剤を含んで成る３次元 シェルの形状をもつような、粒子。
2. ２．その両親媒性化合物のリン含有頭部が酸化鉄のに向かって集中し、一方、そ の疎水性尾部がそれから突き出し、ウルチン様構造を形成するように、両親媒性 化合物の分子が、酸化鉄コアに関して有機的に構成されている、請求項１に記載 の粒子。
3. ３．頭部が、両方の酸素原子がコアとの相互作用に利用されることができるホス ホリルの頭である、請求項１又は２に記載の粒子。
4. ４．両親媒性化合物がリン酸のアルキル、アルケニル又はシクロアルキルのモノ ・エステル又はリン脂質である、請求項３に記載の粒子。
5. ５．アルキル基又はアルケニル基が、少なくとも８炭素原子、好ましくは少なく とも１０炭素原子、そしてより好ましくは少なくとも１２炭素原子を含んで成る 、請求項３に記載の粒子。
6. ６．ミセル形態のリン脂質が、置換又は部分的に置換されたポリアルコールのモ ノ−ホスフェート・エステルから成り、このポリアルコールの少なくとも１の他 のアルコール官能基が長鎖の飽和又は不飽和脂肪族脂肪酸によりエステル化され ているか、又は長鎖の飽和又は不飽和アルコールによりエーテル化されており、 そのリン酸の他の２の酸性官能基が遊離であるか又はアルカリ金属若しくはアル カリ土類金属により塩化されているかのいずれかで存在しているような、請求項 ４に記載の粒子。
7. ７．両親媒性化合物が、ジミリストイルホスファチド酸、ジバルミトイルホスフ ァチド酸、又はジステアロイルホスファチド酸から選ばれた脂肪酸グリセリドの モノホスフェートである、請求項１、２又は３に記載の粒子。
8. ８．界面活性剤が両親媒性化合物によりからみ合わされた生理学的に許容される 非イオン界面活性剤である、請求項１、２又は３に記載の粒子。
9. ９．非イオン界面活性剤が、ポリオキシエチレン及びポリオキシプロピレン・セ グメントをもつ少なくとも１のプロッタ−コポリマー又はポリエチレングリコー ルアルキルエーテルを含んで成る、請求項８に記載の粒子。
10. １０．界面活性剤が、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（Ｒ）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ（Ｒ）、Ｐ ｏｌｏｘａｍｉｎｅ（Ｒ）、Ｓｙｎｐｅｒｏｎｉｃ（Ｒ）又はＢＲＩＪ（Ｒ）で ある、請求項９に記載の粒子。
11. １１．両親媒性化合物が、イオン性及び天然のリン脂質、リン酸のモノ・アルキ ル又はアルケニル・エステル及び／又はコレステロール、エルゴステロール、フ ィトステロール、シトステロール、ラノステロール、及びトコフェロールから選 ばれた２以上の化合物の混合物である、請求項１、２又は３に記載の粒子。
12. １２．リン脂質対界面活性剤の重量比が１：１０から１０：１までにある、請求 項１、２又は３に記載の粒子。
13. １３．外側の層内の両親媒性化合物及び界面活性剤とコアのものとの重量比が１ ：１未満である、請求項１、２又は３に記載の粒子。
14. １４．ヒト又は動物の体の器官のＮＭＲ画像形成のための、請求項１〜１３のい ずれか１項に記載の酸化鉄粒子の使用。
15. １５．生理学的に許容される液体担体中に分散される間に、ＮＭＲ画像形成コン トラスト剤として有用な懸濁液を形成するであろう、請求項１〜１３のいずれか １項に記載の酸化鉄粒子を含んで成る粒状配合物。
16. １６．ヒト又は動物の体のＮＭＲ画像形成におけるコントラスト剤として有用な 、生理学的に許容される液体担体中に懸濁された請求項１〜１３のいずれか１項 に記載の酸化鉄粒子を含んで成る注射可能な水性懸濁液。
17. １７．請求項１の記載の粒子の製造方法であって、以下の段階：ａ）選択し、そ して両親媒性化合物及び界面活性剤と共に酸化鉄粒子を水相中に懸濁させ、混合 物を形成し、及び、ｂ）音波処理、マイクロ流動化又は加熱により上記混合物に エネルギーを与え、酸化鉄粒子の周りに３次元シェル様の層を作り出す、を特徴 とする方法。
18. １８．音波処理、マイクロ流動化又は加熱の後に、混合物を、滅菌及び／又は凍 結乾燥する、請求項１７に記載の方法。
19. １９．エネルギー供与及び場合により音波処理、マイクロ流動化又は加熱を繰り 返した後に、酸化鉄と尚親媒性化合物との混合物に界面活性剤を添加する、請求 項１７又は１８に記載の方法。
20. ２０．界面活性剤が、ポリオキシエチレン及びポリオキシプロピレン・セグメン トをもつ少なくとも１のプロッタ−コポリマー又はポリエチレングリコールアル キルエーテルから成る生理学的に許容される非イオン界面活性剤である、請求項 １７又は１８に記載の方法。
21. ２１．両親媒性化合物が、界面活性剤によりミセル形態に変換されるリン脂質で ある、請求項１７又は１８に記載の方法。
22. ２２．ミセル形態のリン脂質が、置換又は部分的に置換されたポリアルコールの 有機モノ−ホスフェート・エステルから成り、このポリアルコールの少なくとも １の他のアルコール官能基が長鎖の飽和又は不飽和脂肪族脂肪酸によりエステル 化されているか、又は長鎖の飽和又は不飽和アルコールによりエーテル化されて おり、そのリン酸の他の２の酸性官能基が遊離であるか又はアルカリ金属若しく はアルカリ土類金属により塩化されているかのいずれかで存在しているような、 請求項２１に記載の方法。
23. ２３．リン脂質が、ジミリストイルホスファチド酸、ジパルミトイルホスファチ ド酸、又はジステアロイルホスファチド酸から選ばれた脂肪酸グリセリドのモノ ホスフェートである、請求項２２に記載の方法。