JPH07502509A - ペプチド核酸と遺伝物質におけるそれらの効果 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ペプチド核酸と遺伝物質におけるそれらの効果発明の背景 ＤＮＡ／ｍＲＮＡレベルにおける遺伝子転写および／または遺伝子翻訳の妨害に は多くの理由から関心がもたれている。薬物発見の古典的なアプローチでは、未 関連のタンパク質例えば酵素、レセプターまたはイオンチャンネルに対する化合 物のデザインおよび確認を要し、その構造および作用様式は通常非常に複雑であ り、はとんど理解されていないことが多い。逆に、核酸レベルにおける治療的介 入の可能性は増幅カスケードの開始時に向けられる秩序だった一般化された方法 に従う；このため遺伝子の転写はｍＲＮＡの多くのコピーを生じさせ、これは翻 訳で更に多数のタンパク質分子を与える。したがＤＮＡに結合するかまたは改変 する薬物を用いる抗癌療法は十分に確立されているが、しかしながらドキソルビ シン、メトキサントロンおよびシスプラチンのような現行の薬剤（Ｓｃｒｉｐ’ 　ＳＣ＋ｎｃｅｔ　Ｃｈｅｍｏｔｈξτ＠９Ｔ　Ｒｅマｉｃｙ、　ＩＮＩ）は特 定の遺伝子配列を認識することができず、したがって選択性を欠き、癌と正常細 胞とをほとんど区別できない。合成オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤ　Ｎ）は 作用の絶対特異性を示し、それは統計的に鎖長１７残基のオリゴヌクレオチドを 形成する上で４種のへテロ環式塩基、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシ ン（Ｃ）およびチミン（Ｔ）の何らかの直線的組合せにより規定される配列がヒ トゲノムの全配列において１度だけ生じるからである。このため、ＯＤＮはその 相補的塩基配列とＷＮ＋ｏｎ−ＣＩｉｃｋまたはＨｏｏＨｔｃ＋ｎ塩基対形成を 介して結合でき、その相補的配列は例えば腫瘍形成に関与する癌遺伝子の一部ま たは疾患表現型の主要原因として関与する遺伝物質の要素、例えばウィルスゲノ ム内の本質的標的を含んだ配列である。

コードブロッキング治療原理として機能するこのような“アンチセンス”　（Ａ ｓ）オリゴデオキシヌクレオチドのポテンシャルは、２ａｍｅｃｎｉｋおよび５ ｔｅｐｈｅｎｓｏｎ　（？ｏｃ。

ＮＮＩ＾ｃ＋ｄ、　Ｓｃ１．　ＵＳＡ、　１９７８．７５．２８０）により認識 され、彼らはウィルス（＋）ＲＮＡゲノムにおける反復配列に相補的な配列を有 するトリデカマー〇ＤＮの添加によりニワトリ胚繊維芽細胞でラウス肉腫ウィル ス複製の阻害を明らかにした。遺伝子機能の阻害を達成するための手段として、 二本鎖形成、即ちＡｓ　ＯＤＮとＲＮＡ分子との相互作用は最近かなり注目を浴 びている。阻害が起きる正確なメカニズムは標的配列の微環境に依存して０る。

このためリポソーム結合部位に対するＡｓ　ＯＤＮは翻訳開始を競合的に阻害す ると予想され、一方コード配列と相補的なものはＲＮＡに沿ったリポソーム移動 を妨げることで翻訳のハイブリッド形成阻止を起こす（Ｂｔｃｏｎｘｎｄ　Ｗｉ ｅｋ＋ｌ＋ａｍ、　Ｏｎｃｏｇｔｎｔ　Ｒｅ＋■＋ｃｈ、　１９９１．６．１３ ）ｏ一方、複合化はＲＮアーゼＨの介在で標的ＲＮＡの開裂に起こす（Ｓｂａｌ ｌｌ！ｔｏ＋ｔｈ　ｚｎｄ　Ｃｏ１１ｎ、ＥＭＢＯ１，！９８Ｌ　７．４２７） 。ＲＮＡスプライシングのような転写後プロセスの遮断も配列の賢明な選択によ り可能であり、ウィルス標的、例えば単純ヘルペスウィルス（ＨＳ　Ｖ）　（Ｓ Ｉｌｓｈ　ｅｔ　１１．、ＰＩＯＣ、Ｎ５ｌｌ＾ｃｚｄ、ｓｃｉ、ｌ］ｓＡ、１ ９ｇ６．８３．２７８７）およびヒト免疫不全ウィルス（ＨＩ　Ｖ）　（Ｇｏａ ｄｃｈｉｌｄ　！ｌ　ｚｌ、、Ｐｒｏｃ、Ｎｔｔｌ、ＡＣ＋ｄ、　Ｓｅｉ、　Ｕ ＳＡ、　１９８８．８５．５５０７）に対して特に有効とわかったが、そこでは 前駆体ＲＮＡの代替スプライシングがウィルス復製のコントロールを果たすため の戦略として通常用いられる。

ＡＳ　ＯＤＮの治療ポテンシャルはいくつかの最近のレビューの主題である（２ ａｎ、Ｎｖｅｌｅｏ＋ｉｄｅ　Ａｏｔｌｏｇ＋　ａｈ　Ａｎｔｉｙｉ＋＋ｌ　八 ｇｅｎｉ１．＾Ｃ３５Ｈｐｏ＋ｉｕｍ　５ｅｒｉｅｓ、Ｍｚ＋ｌｉｎ、Ｉ、Ｃ， Ｅｄ、。

＾ｍｅ＋ｉｃ＋ｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ＳａｃｉＮｙ、Ｗ＆＋ｈｉｎｇ１ｏｎ、 ＤＣ，１９８９，ｐ１７０；ＬｉｎＨｘｏｂ、　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ａｍｅ ｒｉｃａｎ、　１９９０．４０；Ｕｈｌｍｘｎｎ　ｇｏｄＰ＋ｙｌＩｌａｎ、Ｃ ｈｅｍｉｃａｌ　Ｒ＋ｙｉｅｗ＋、１９９０．９０（４）、５４３；Ｍａ＋ｌ＋ ｕｃｅｉ　ｔｎｄ　Ｂｉ＋ｃｈｏｌｂｅＢ＋＋、Ａｎｎｕ＋ｌ　Ｒ＋ｐｏ＋ｌ＋ 　ｉロ　Ｍｅｄｉｃｉｎｘｌ　Ｃｈｅｍｉ口ｔｒ、　１９９１．２６．０７）。

この治療ポテンシャルは白血球造血細胞上のｃ−ｍｙｂを標的にした未改変Ａｓ 　ＯＤＮの選択作用を挙げた最近の文献で更に明らかにされている（Ｃｚｌｘｂ ｔｅ１口ｅｌ　！１．ＰＩＯｃ、Ｎ１口、八ｃ＠ｄ、　Ｓｅｉ、　ｔｌｓＡ、　 １９９１．８Ｌ２３５１）　、著者らは、Ａｓ　ＯＤＮによるｃ　−ｍ　ｙ　ｂ 機能の攪乱が、おそらく最も直接的に半ビボ骨髄パージング剤として白血病療法 に対する分子アプローチの基礎を形成するであろうと主張している。もう１つの 論文（ＣＩｌｌｂ＋ｅｔＮ　ｃｌ　ｘｌ、Ｐｒｏｃ、Ｎ５ｔ１．Ａｃｘｄ、Ｓｃ ｉ、ＵＳＡ、１９９１．８８１　では、未改変ＡＳ　ＯＤＮが有効にｂａｒ−ａ ｂｌスプライスに対して向けられた実験について詳述している。同一著者らによ る特許明細書ではｃ−ａｂｌプロト癌遺伝子に対するＡＳ　ＯＤＮについて記載 している（ＷＯ９１／　０３２６０　）　。Ｓａｎ　Ｄｉｃｇｏ、Ｃ＋１ｉｌｏ ＋ｎｉｔのＧｅｎｔｔ、　Ｉｎｃ、は慢性骨髄性白血病を治療するＡＳ　ＯＤＮ の試験を始めるために食品医薬品局に研究用新薬（ＩＮＤ）適用を最近申請した ことが注目される（Ｓｃｉ、Ｃｏｉ、Ｃｔｎｅｅ＋　Ｒｅｐｏ「ｔ。

１９９＋、　＋０１゜嚢胞性繊維症（Ｓｏｚｃｈｅ＋　ｅｌ　ｔｌ、Ｐｒｏｃ、 Ｎｔｔｌ、ＡＣ＋ｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ、＋９９１．８８．７７５９１　、単純 ヘルペスウィルス（ＨＳＶ）（Ｗｏ　９０１０７４０９）およびヒトバピロー７ ウイ／ｌ、ス（Ｅ（ｐｖ）（Ｗｏ　９１１０８３１３）を扱う上で未改変オリゴ マーの適用も注目される。

コピー数が細胞当たり２つに制限される、ＤＮＡ自体への直接作用による転写の 阻害は、ＲＮＡレベルでの治療的介入による翻訳の阻害よりも更に関心がもたれ る標的である。合成リガンドによる二重らせんＤＮＡの配列特異性認識は最近の レビューの主題である（Ｄｅ＋マｔｎ、Ｎｕｅｌ＋ｉｃ　Ａｅｉｄ＋　ｔｎｄ　 Ｍｏｌ＋ｃｏｌｚ＋　ＢｉｏｌｏＨ，Ｖｏｌ　２．ｅｄ、、Ｆ、Ｅｃｋ＋ｔｅｉ ｎ　！ｎｄ　Ｄ、Ｍ、Ｌｉ１ｌＢ、Ｓｐ＋ｉｎｇｅ＋−Ｖ＋＋ｌａｇ、１９８８ ．Ｎ９；Ｎｉ＋ｌ＋ｅｎ、　Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇｉｌｅ　ＣｈｅｍｉｓＨ７，１ ９９１，２（１）、　ｌ）。ｔｌｏｏｇ＋１ｅｅｎ（＾Ｃ１ａ、　Ｃτｙｕ、、 　１９５９．１２．８２２）により初めて記載された構造モチーフを用いた、ｄ ｓ　ＤＮＡに結合して３本鎖構造、即ち“トリプレックス”を形成するＯＤＮお よびそれらのアナログのデザインは本発明にとり特に興味深０゜リガンドにより 採択される正確な結合モチーフ番よ、ＢｉＢ　ｅｌ　ａｌ、、Ｎｕｃｌｅｉｃ　 Ａｃｉ＋ｆ　Ｒ＋＋ｅｘ＋ｃｈ、１９９０．１８（１Ｇ）、２９１１１　１こ　 より仮定されるように、前記の場合とは違うと認められる。

更に、相互作用性または反応性の基がリガンドに有効１こ付属している（Ｓｈｘ ｖ　１１　！＋、、１．＾ｍｅｔ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓａｃ、、　１９９１．１１ ３゜７７６５）。このようなアプローチが治療介入に関して有用性を有すること は、いくつかの最近の文献により証明されている。

このため、三重らせん形成はＤＮＡ結合結合タン少々の機能を阻害すること（Ｍ ａｈｅ＋　ｅｔ　＋１．．５ｃｉｅｎｃｅ、１９ｇ９，２４５．７２５：Ｏ＋ｔ ｏｎ　ｅｔ　＋１．、Ｎｕｃｌ＋ｉｃ　Ａｅｉｄ＋　Ｒピ＋ｅａ＋ｃｈ、１９９ １．１９（１２）。

１Ｎ３５）およびインビトロで転写延長の阻害を行うこと（Ｙｏｕｎｇ　Ｎ　＋ ｌ、Ｐ＋ｏｃ、Ｎａ１１．Ａｃ＋ｄ、Ｓｃｉ、ＬＩＳ＾、＋９９１．８８．１０ ０２３＋が示された。ごく最近では、ＯＤＮはヒーラ細胞でＣ−ｍｙｃのプロモ ーター領域と結合し、それによりｃ−ｍｙｃＲＮＡレベルを選択的に減少させる こと力（示された。

このアプローチの治療ポテンシャルも最近の特許文献（Ｗｏ　９０／１５８８４ 、ＥＰＯ３７５４０８）　で明らかにされている。

アミド結合を含むアナログのごく最近のレポートが出された（Ｗｅｌｌｅ「ｅｔ 　＋１．．１．Ｏ＋ｇ、Ｃｈ＋ｍ、、１９９１．５６．６０００：Ｈｕ＋ｎｇ　 Ｎ　ｉｔ、、１ｂｉｄ、１９９１．５６．６０Ｇ７１　、１９９１年６月１７日 、１！ａ＋＋ａｃｈｕ＋ｅｔＮ　Ｉｎ＋ｔｉｌｕｔ＋　ｏｆ　Ｔｅｃｂｎｏｌｏ ｇ７．Ｃｘｍｂ＋ｉｄｇｅ、Ｃ＋＋＋＋ｈｕｔｃ＋＋＋のＴｗｅｌｌｈ　Ａｍ＋ ＋１ｃｘｎ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓ７ｍｐｏ＋ｉａｍにおいて、ＲＱＩＩ　Ｂ！Ｂ 　ｏｆ　ＲＩＳＯＮＮ１ｏｎｚｌ　Ｌｉｂｏ＋ｘｌｏＢ、Ｒｏｔｓｋｉｌｄ＋、 　Ｄ＋ｎ＋ｎ＋＋にはヌクレオチド側鎖を有した改変ペプチドに関する研究を発 表したが、これはペプチド核酸（ＰＮＡ）と呼ばれた。しかしながら、Ｔモノマ ーからのＰＮＡのみが得られた。ｌ１ｎｉマ＋＋＋ｉ１７　ｏｆ　Ｃｇｌｉｌｏ ＋ｎ目、　Ｂｅ＋ｋｅｌｅｙて１９９１年７月８日、このグループによる発表で はあるＰＮＡについて記載している。彼らの研究の公開はＰｅ１ｅ＋　Ｅ、Ｎｉ ＋１ｔｔｎ　ｕ　ａｌ、、ｓｃｉ＋ｎｃ＋、Ｖｏｌ、２５４．ｐｓｇｅ＋　１４ ９７−１５００　ｆ６．　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ、　１９９１）による。

発明の概要 少くとも１つのペンダントプリンまたはピリミジンヌクレオシド塩基と共に主鎖 に少くとも１つのペプチド結合を何したオリゴマーは、診断、治療または分析目 的のために遺伝物質に影響を与える上で有用である。

図面の簡単な説明 図１は本発明の具体的なペプチド核酸（ＰＮＡ）を作るために用いられるプロセ スの概略図について示す。

図２は遺伝物質への本発明によるＰＮＡの結合の程度を調べるために用いられる 試験の概略である。

図３は遺伝物質へのＰＮＡ結合濃度を増加させるバリエーシヨンについて示した グラフである。

発明の詳細な説明 少くとも１つのペプチド結合を有する主鎖に結合された少くとも１つのプリンま たはピリミジンヌクレオシド塩基を有するヌクレオシド塩基オリゴマーが本発明 を構成する。好ましくは、主鎖は各ペンダント塩基について１つのペプチド結合 を有し、それによりオリゴマーは各々がＡＳＴ、ＧまたはＣヌクレオシド塩基を 有する七ツマ−から形成することができる。Ａ、Ｔ、ＧまたはＣアミノ酸モノマ ーを選択することにより、オリゴマーの各アミノ酸は連続ペプチド結合形成によ り構築することができる。

本発明のＰＮＡにおけるヌクレオシド塩基の具体数はＰＮＡの用途、即ち遺伝物 質の標的部分に依存する。６ヌクレオシド塩基以下では、遺伝物質内で可能な異 なる標的が通常多すぎ、例えば多くの異なる染色体が部分配列としてＧＡＴＴ部 分を有する。１６塩基以上では、付与される追加特異性は不要であり、即ち具体 的な１５塩基の並び方では１つの配列しかなく、それ以上の目的は追加塩基によ って与えられない。

主鎖および塩基に加えて、本発明のペプチドオリゴマーは末端を安定化し、介在 物として作用し、細胞内取込みを促進しまたは溶解度を増加させるために、通常 末端ニヘンダント基を有していてもよい。

本発明による特定のペプチドオリゴマーは下記式（１）％式％ 〔上記式中 ＱはＮ末端封鎖基であり。

ＪはＣ末端封鎖基であるか、またはＱおよびＪは一緒になって単結合であり。

ｎは少（とも１でありｔ Ｒ１は独立して水素、ベンジル、−ＣＨ−ｐ−Ｃ６Ｈ４０Ｈ，−ＣＨ２−’ｒン ドールー　３−　イル、−ＣＨ２ＣＨＣＨＣＨＮＨ−ＣＨＣＨ２ＣＨ２Ｃ２Ｃ２ ２２２ゝ　２ （ＮＨ）ＮＨ−ＣＨ２−イミダゾール−４−イル、２ゝ −ＣＨＣ０ＯＨ，−ＣＨＣｏｏ　（Ｃ，４アルキル）、〜ＣＨＣＨＣｏＯＨ，− ＣＨＣＨ３ＣＯＯ（Ｃ，−４アルキル）、−ＣＨＣ０ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ２２ ゝ ０ＮＨ２、−ＣＨ２ＳＨ，−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、Ｃ、−，２７ルーｔ−ル、 Ｃ２−８アルキニル、Ｃ２−８アルケニル、Ｃシクロアルキル、アリール、ヘテ ロアリール、あるいはハロゲン、ニトロ、Ｃｌ−４アルキル、ｃｌ−４アルコキ ン、トリフルオロメチルまたはジ（ＣＩ−４アルキル）置換アミノで独立して− 、二または三置換されたアリールまたはヘテロアリールであり； Ｒハ独立して水素、ペン’）　ル、−ＣＨ２−ｐ　−Ｃｓ　ＨＯＨ−−ＣＨ２− インドール−３−イル、−Ｃ）１２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ ＣＯＯＨＣ（Ｎ　Ｈ）　Ｎ　Ｈ２、−ＣＨ２−イミダゾール−４−イル、−ＣＨ ３ＣＯＯ）（、−Ｃ）（２Ｃｏｏ　（Ｃ，、，４フルキル）、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ ＯＯＨ，−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ２ｏ　（Ｃ，−４アルキル）、−ＣＨＣ０ＮＨ−ＣＨ ２ＣＨ２Ｃ２２ゝ ＯＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３，２ゝ Ｃ１１２アルキル、Ｃ２＝８アルキニル、Ｃ２−８アルケニル、Ｃ５−８シクロ アルキル、アリール、ヘテロアリール、あるいはハロゲン、ニトロ、Ｃアルキル 、Ｃｌ−１アルコキシ、トリフルオロメチルまたはジ（Ｃ＋−４アルキル）置換 アミノで独立して−、二または三置換されたアリールまたはへテロアリールであ り、； Ｂは独立して一価ブリンまたはピリミジンヌクレオシド塩基、即ち９位に水素が ないグアニンのような塩基である〕 またはその酸もしくは塩基付加塩である。

Ｑは分子のその部分を安定化させるＮ末端封鎖基、即ち立体障害アルカノイル基 であることが好ましく、それによりアミドは基ＱＮＨ−で形成されている。Ｎ末 端封鎖基Ｑのもう１つの機能は、遺伝物質内で結合する上で、例えば０１ｉｇｏ ｄｅｏｔ７ｎｕｃｌｅａｌｉｄ＋＋−Ａｎｌ目ｃｎ＋ｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏ＋ｔ 　。

ｌ　Ｇｃｎ＋　Ｅｘｐ＋ｅｓ＋ｉｏｎ、ｃｄ、ｂ７　Ｌ＋ｃｋ　Ｓ、Ｃｏｈｅｎ 、ＭｓｃＭｉｌｌａｎ　ＰｉｅＩＳ、　Ｌｏｎｄｏｎ　（１９８９）　（ＩＳＢ Ｎ　０−３３３−４９２１１−Ｏｌ　で記載されるように、ＤＮＡ二重らせん内 に現実に割り込む上で介在物としてである。細胞内取込みを増加させるために用 いられた場合、Ｑは親油性、例えばステロイド部分を増加させるように、あるい は細胞表面に認識部分、例えばステロイド部分または糖部分をもたせる等で活発 な取込みを誘導するように機能する。溶解度を増加させるために、Ｑはカルボン 酸またはアミンのようなイオン化しうる部分を含んでいてもよく、例えばＱＮＨ 部分はＮ　Ｈ２（ＣＨ）　ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＮＨ−７’ある。

ＪはＱに関して前記された基のうちいずれのタイプであってもよい。具体例とし ては一〇〇−Ｊ基として、立体障害安定化基として−ｃｏｏ−ｔ−ブチルおよび 可溶化部分として機能するイオン化しつる部分として−ＣＯＮＨＣＨ（ＣｏＮＨ ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２がある。

ｎは少くとも１であり、ｎ＝１〜４の化合物はｎが少くとも約５、例えば約５〜 ２ｏである化合物の中間体として有用であり、ｎが６〜１６である配列が本発明 の具体的な面である。

Ｒは好ましくは水素、ベンジル、−ＣＨ２−ｐ−ｃｓＨ４０Ｈ−−ＣＨ２−イン ドール−３−イル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ｃＨ２ＮＨ２、−ＣＨ，２ＣＨ２ＣＨ ２ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、−ＣＨ２−イミダゾール−４−イル、−ＣＨ２ＣＯＯ Ｈ１−ＣＨ３ＣＯＯ（Ｃ１−４フルキル）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣｏｏＨ１−ＣＨ２ ＣＨ２Ｃｏ。

（Ｃアルキル）　、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ ＣＨ２−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、Ｃｌ−１２アルキル、Ｃ２−８アルキニル、Ｃ ２−８アルケニル、例えば−ＣＨ２ＣＯＮＨｃＨ３、例、ｔバー（ＣＨ２）４Ｃ ＣＨＳＣ５−８シクロアルキル、例えばシクロヘキシル、アリール、ヘテロアリ ール、あるいはハロゲン、ニトロ、Ｃ１−４アルキル、Ｃｌ−４アルコキシ、ト リフルオロメチルまたはジ（Ｃ，、アルキル）置換アミノで独立して−、二また は三置換されたアリールまたはへテロアリールである。Ｒ１のこのような定義の いずれが、例えばアルコキシにおけるｃｌ−４アルキルの具体例として、これら はメチル、エチル、イソプロピル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、！ＩＣ−ブチル 、イソブチルおよび１ｅ「（−ブチルである。アリールの具体例としてはフェニ ルおよびナフチルが含まれ、ヘテロアリールに関しては１．２または３つのＮ、 ＯまたはＳヘテロ原子を有する５および６員環が含まれるが、但し２つのＯまた はＳ原子は互いに結合せず、具体的には炭素または窒素原子を介して結合するピ リジニル、オキサシリル、チェニル、チアジアゾリルおよびトリアゾリル、例え ば−Ｎ　（ＣＨ＝ＣＨ）２である。ハロゲンにはクロロ、ブロモ、ヨードおよび フルオロがある。

Ｒは好ましくは水素、ベンジル、−ＣＨ２−ｐ−ｃ６Ｈ４０Ｈ１−ＣＨ２−イン ドール−３−イル、−ＣＨＣＨＣＨＣＨＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ２２２２２ 　ゝ ＨＣ（ＮＨ）ＮＨ−ＣＨ２−イミダゾール−４−イ２ゝ ル、−ＣＨ２ＣＯＯＨ，−ＣＨ３ＣＯＯ（Ｃ，４アルキル＞　、−ＣＨＣＨＣ０ ＯＨ，−ＣＨ２ＣＨ２Ｃｏ。

（Ｃアルキル）、−ＣＨＣ０ＮＨ−ＣＨ２Ｃ１４２２ゝ ２　ｃｔ−ｔ　５ｔ−ｔ　−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨＨＣＯＮＨ２、−２， ３、Ｃｌ−１２アルキル、Ｃアルケニル、Ｃ２−８アルケニル、例えば−ＣＨ２ ＣＨ冨ＣＨＣＨ３、例えば−（ＣＨ２）４ＣＣＨ１Ｃ５−８シクロアルキル、例 えばシクロペンチル、アリール、ヘテロアリール、あるいはハロゲン、ニトロ、 Ｃアルキル、Ｃ１−４アルコキシ、トリフルオロメチルまたは′）（ＣＩ−４ア ルキル）置換アミノで独立して−、二または三置換されたアリールまたはへテロ アリールである。Ｒ３のこのような定義のいずれか、例えばアルコキシにおける Ｃｌ−４アルキルの具体例として、これらはメチル、エチル、イソプロピル、ｎ −プロピル、ｎ−ブチル、１ｅｃ−ブチル、イソブチルおよびｌ＋＋１−ブチル である。アリールの具体例としてはフェニルおよびナフチルが含まれ、ヘテロア リールに関しては１．２または３つのＮ、ＯまたはＳヘテロ原子を有する５およ び６員環が含まれるが、但し２つのＯまたはＳ原子は互いに結合せず、具体的に は炭素または窒素原子を介して結合するピリジニル、オキサシリル、チェニル、 チアジアゾリルおよびトリアゾリル、例えば−Ｎ　（ＣＨ＝ＣＨ）２である。ハ ロゲンにはクロロ、ブロモ、ヨードおよびフルオロがある。

Ｂはプリンまたはピリミジンヌクレオシド塩基であり、好ましくはアデニン、チ ミン、グアニン、シトシンまたはそれらの相当物であって、その相補物と、即ち アデニンはチミンと、グアニンはシトシンと結合する。このような相当物の例は ５−メチルシトシン、５−プロビニルウランル、７−プロビニルーフ−デアザア デニンおよび７−メチル−７−ジアザアデニンである。好ましくは、本発明のペ プチドオリゴマーは少くとも３種の異なるＡ。

Ｔ、ＧおよびＣ塩基またはそれらの相当物、例えばこのような塩基４種すべてを 有する。

重合して弐（１）のオリゴマーを形成する下記式（Ｘ）のモノマー 〔上記式中 Ｒ１は式（１）で定義されたとおりであり：Ｒ２はアミノ保護基であり； Ｒ３は式（１）で定義されたとおりであり；Ｒ４はカルボン酸保護基であり； Ｂは式（１）で定義されたとおりである〕またはその酸もしくは塩基付加塩も本 発明の一部である。

Ｒ２は好ましくはｔ−ブチルオキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシ力ル ボニル、カルボベンゾキシ（即ち、ペンジルオキシカルボニル）トリチルまたは ジメトキシトリチルである。

Ｒ４は好ましくはアルキル、例えばメチル、エチル、１ｅ「１−ブチルまたは（ ２−トリメチルシリル）エチル、アリール、例えばフェニルまたはベンジルであ る。

新規中間体およびプロセス、例えば式（１）のＡｓオリゴマ〜を作る中間体とし て用いられるジ、トリおよびテトラペプチドオリゴマーも本発明の一部である。

式（１１のオリゴマーおよび式（Ｘｌ　のモノマーには、いくつかの不斉中心が 存在する。本発明は提示されたすべての式の範囲内にすべての異性体およびその 混合物を包含する。例えば、Ｒ１およびＲ３基が結合した炭素は各々独立してＲ でもまたはＳであってもよく、異性体ＲＲ。

Ｒ３，ＳＳおよびＳＲを形成する。

方法 式（１）の化合物は下記スキーム１で示された経路により製造される。

スキーム１ ステップ１において、Ｒ１が前記式（１）で定義されたとおりで、かつＲ２が式 ｆＸ）で定義されている式（１１）のα−アミノ酸またはその誘導体が文献（１ ＋ａａ＋＋　Ｉｎ＋ｃ＋１ｋ。

Ｃｈｕｍ、　Ｒｅｗ、　１９８９．８９．１４９参照）で知られる方法により還 元されて、式（ＩＩＩ）の化合物を得る。例えば、式（＋１の化合物のエチルエ ステルが一７８℃で水素化ジイソブチルアルミニウムで処理され、式ＣＩｌ＋＋ の化合物を得る。

式（１１）におけるＲ　および式（１ｖ）におけるＲ３はステツブ１．２．６お よび７のような後のステップ時にこれらの基の反応を避けるために保護された形 で用いてもよい。このためＲがリジン側鎖を形成するＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ ＮＨ２であるとき、式（ＩＩ）の出発物質はＢｏＣＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ ２ＣＨ２ＮＨＣ００ＣＨ２Ｃ６Ｈ５）ＣＯＯＨでもよく、その場合にベンジルオ キシカルボニル基はフッ化水素との処理または貴金属触媒下Ｈ２で水素付加によ り式（１）の最終化合物の製造後に除去してもよい。

ステップ２において、式（ｌ　ｌ　１＋の化合物を還元アミノ化で式ｆｌＶｊの 化合物と反応させ、式（Ｖｌ　の化合物を得る。

式（１■）の化合物において、Ｒ３は前記式（１）で定義されたとおりであり、 Ｒ４はアルキル（例えば、メチル）のような式（Ｘ）で定義されたようなカルボ ン酸保護基である。カルボン酸保護基はステップ２の還元アミノ化条件とステッ プ６のアミド結合形成条件から式（１ｖ）の０００−基を維持する。ステップ２ の反応は、２Ｔｄｏｖｓｋ７　ｅｌ　１１、１．　Ｏ「ｇ、　Ｃｈｅｍ、　１９ ８ｇ、　５３．５６０７　テ記載されタヨうに、約２５℃において脱水剤、例え ばモレキュラーシーブと水素化シアノホウ素ナトリウムのような還元剤の存在下 、メタノールのような溶媒中で行われる。

式（Ｖｌ　の化合物に至るこのルートは、それがＲ１およびＲの独立した選択と Ｒ１およびＲ３が結合している炭素原子で立体配置の独立したコントロールが行 えるという点で、他の可能なルートよりも有利である。式（Ｙｌの化合物に至る このルートの出発物質はα−アミノ酸であるため、天然および非天然α−アミノ 酸のキラルブールを本発明のオリゴマーを作るために使用することができる。

ステップ３において、Ｂが式（Ｘ）のように定義される化合物Ｂ−Ｈまたはその 適切な保護誘導体、例えばＮ−６−ベンジルオキジカルボニルアデニン（Ａｚ） を、Ｘが脱離基、例えば臭素であり、Ｒ５が水素または常用カルボン酸保護基、 例えば１ｅＮ−ブチルである式（ｖｌ）の化合物と、ジメチルホルムアミドのよ うな適切な溶媒中において炭酸カリウムのような塩基性条件下で反応させ、式（ Ｖｌｌｌ　の化合物を得る。Ｂ−Ｈへの式（ｖｌ）の化合物の結合はＴおよびＣ の場合１位、ＡおよびＧの場合９位、Ｂが核酸塩基アナログである場合は対応位 置である。

ステップ４は、ある場合において、Ｘが臭素のような脱離基である弐（Ｙｌｌｌ ｌの化合物のような式（ｖｌ）の化合物のマスクされた相当物を用いると有利で あることを示している。ステップ４において、Ｂ−Ｈを例えば２７℃においてジ メチルホルムアミド中炭酸カリウムのような塩基性条件下で３−ブロモプロペン （式（Ｙｌｌｌｌ、Ｘ＝Ｂｒ）と反応させ、式（ＩＫ］の化合物を得る。ステッ プ５は、二重結合の酸化開裂により、例えばＣｘ＋ｌ＋ｓｎ　ｅｔ　＊１．．１ ．Ｏ＋ｇＣｈｅ＋＋、　１９８１．４６．３９３６で記載されるように約２５℃ において四酸化ルテニウムの存在下で過ヨウ素酸ナトリウムとの処理による（Ｉ Ｉ）から式（Ｖｌ＋＋の化合物への変換について示している。

ステップ６において、Ｒ５がＨである式（Ｖ　ｌ　１１　の化合物を、アミド結 合形成に関して当業界で知られる条件下で式（Ｖ）の化合物と反応させ、式（Ｘ ）の化合物を得る（１１ｉｋｌｏ＋　Ｂｏｄａｎｔ！ｋｙ；　Ｐｅｐｔｉｄｅ　 Ｃｈｕ＋ｉ目’Ｌ＾Ｐ＋５ｃｌｉｃｘｌＴｅｘｔｂｏｏｋ、　Ｓｐ＋ｉｎｇｅ＋ −Ｖｅ＋ｌＢ、　１９８８参照）。これは式（Ｖｌｌ）の化合物のカルボキシル 部分から活性化エステル、酸クロリドまたは混合無水物のような活性化形への変 換と、この活性化形と式（Ｖｌ　の化合物との反応を伴い、式（Ｘ）の化合物を 与える。例えば、Ｒ５が水素である式（Ｖｌｌ）の化合物を、ジイソプロピルエ チルアミンの存在下ジメチルホルムアミド中においてベンゾトリアゾール−１− イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート （ＢＯＰ）　、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）で活性化され、 Ｒ２がＢＯｃおよびＲ４がメチルである式（Ｖ）の化合物と反応させ、Ｒ２がＢ ｏａおよびＲ４がメチルである式（Ｘｌ　の化合物を得る。

ステップ７において、アミド結合形成に関して当業界で知られる条件下でＲ２が 水素である式（ＸＩの化合物をＲ４が水素である式（Ｘ）の化合物と反応させる ことにより、式（Ｘｌ　の化合物を式（１）の化合物に変換できる（Ｃ１゜Ｍｉ ｋｌｏ＋　Ｂｏｄｚｎ＋＋ｋｙ：　Ｐｅｐｌｉｄ＋　ＣｈｅｌＩ口ｔＢ、Ａ　Ｐ ＋ｔｃｌｉｃ！ｌ　Ｔｅｘ１ｂｏｏｋ、　Ｓｐ＋ｉｎＨ＋４ｅ＋１ｇｇ、　１１ ８８１゜これはＲ４が水素である弐（Ｘ）の化合物のカルボキシル部分から活性 化エステル、酸クロリドまたは混合無水物のような活性化形への変換と、この活 性化形とＲ２が水素である式（Ｘ）の化合物との反応を伴う。このカップリング 反応は、式（１）の化合物のオリゴマーおよびポリマーを得るために、異なるＢ 基を有する弐ｍ　のモノマーで繰り返すことができる。ステップ７の反応は標準 液相反応条件を用いて行うことができ、例えばＲ４が水素およびＲ２がＢｏａで ある式（Ｘ）の化合物を、カップリング試薬Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル ーＮ、Ｎ、Ｎ−、Ｎ−−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフエート（ ＨＢ　Ｔ　Ｕ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）およびジイソ プロピルエチルアミンの存在下ジメチルホルムアミド中において、Ｒ２が水素お よびＲ４がメチルである式ｔｘ＋　の化合物と反応させ、式（１）の化合物を得 る。カンプリングは反応成分の１つをポリスチレン樹脂のような固体支持体に固 定した後、カップリングおよび脱保護ステップの反復サイクルを行うことによっ ても実施でき、それによりｎが１より大きい式［１ｊ　の化合物を速やかに製造 することができる。この方法は固相合成として周知である（Ｍｅ＋＋ｉ　ｆｉｅ ｌｄ、　１．１ｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　１９６３．８５．２１４９および ５ｃｉｅｎｃｅ、　１９８６．２３２．３４１参照）。例えば、Ｒ４が水素およ びＲ２がＢｏｃである式（Ｘ）の化合物は、力・ツブリング試薬ＨＢＴＵ、ＨＯ Ｂ　ｔおよびジイソプロピルエチルアミンの存在下ジメチルホルムアミド中にお いて、（ε−アミノ基が保護された）リジンが固定されたＭ　Ｂ　ＨＡ樹脂にカ ルボキシル基を介してカップリングされる。カップリングが終了すると、ＢＯｃ 基は強酸で除去されて遊離アミノ基を現し、それに第二の残基が力・ツブリング される。このカップリング−脱保護サイクルを更に５回繰り返し、その鎖をフッ 化水素で固体支持体から開裂させると、ｎが５、ＪがリジンおよびＱが水素であ る式（１）の化合物を得る。多くのケースにおいて、塩基上における官能基の一 部は式（１）の化合物の合成中に望ましくない副反応を避けるために保護される 。

核酸塩基上の保護基は、それらが標的遺伝物質と結合できるように、除去されね ばならない。保護基はフ・フ化物イオン、フッ化水素酸との処理または貴金属触 媒存在下Ｈ２での水素付加のような方法により除去できる。この脱保護は固体支 持体に結合された鎖でまたはそれが除去された後に実施できる。

スキーム２はＲ１およびＲ３が水素、Ｒ２がＢｏｃかつＲ４がメチルである式（ １）の化合物（式（Ｌｌｌ）を製造するための方法について示す。このスキーム のステップ８において、アリルアミン（式（ＸＩ））を、Ｓ、＾、　Ｔｈａｉｐ ＋ｏｎｃｌ　＋１．　、１．　Ｍｅｄ、　Ｃｂｅｍ、　１９８６．２９．１０４ で記載されるように、Ｒ１＝ＨおよびＲ２＝Ｂｏｃである式（ｌ　ｌ　ｌ）のア ルデヒド（式（Ｉｌｌａｌ）　、Ｎ−１ｅｆ＋−プチルオキシカルボニルグリン ナールに変換する。ステップ９において、Ｎ−１ｅ＋＋−ブチルオキシカルボニ ルグリシナールを、メタノール中酢酸ナトリウム、４人モレキュラーンーブおよ び水素化シアノホウ素ナトリウムの存在下で、グリシンメチルエステル塩酸塩と 反応させ、式（Ｖりの化合物を得る。

スキーム３ スキーム３はスキーム１のステップ３および６の更に詳細な記載であり、Ｒ１、 Ｒ３およびＲ４が水素、Ｒ２がＢｏａかつＢがチミンである式（Ｘ）の化合物（ 式（ＸＩ））を製造するための方法について示す。このスキームのステップ１０ において、チミ：／（Ｔ−Ｈ，式（Ｘｌｌ）ｌを、Ａ。

Ｓ、Ｉｏｎ＋＋　ｃｌ　ｉｌ、、Ｔｅｌ＋ｔｂｅｄ＋ｏｎ、ｌ９７３．２９．２ ２９３で記載されるように水性水酸化カリウム中でクロロ酢酸と反応させ、Ｂ＝ ＴおよびＲ５＝Ｈである式（ｖｌｌ）の化合物（ｖ山）を得る。ステップ１１に おいて、式（Ｖｌｌｌｌの化合物を、ジメチルホルムアミド中ＢＯＰで活性化さ れ、式（ｖ３）の化合物と反応させ、得られたメチルエステルを水性水酸化リチ ウムとの処理で加水分解して、式（Ｘりの化合物を得る。式（Ｘａ）の化合物は Ｔｅｇモノマーと称される。

スキーム４ スキーム４はＲ、ＲおよびＲが水素、Ｒ２がＢＯＣかつ核酸塩基Ｂが４−Ｎ−ベ ンジルオキシカルボニルシトシンである式（Ｘ）のモノマー（式（ＩＣ＋）の合 成について示す。ステップ１２において、シトシン、弐（Ｘｌ１１）の環外アミ ノ基を、ベンジルオキシカルボニル基（Ｚ）で保護して、式（ＸＩＹ）の化合物 を得る。ステップ１３において、式（ＸＩＹＩ　の化合物を、ブロモ酢酸１＋＋ １−ブチルと反応させ、次いで強酸（塩化メチレン中トリフルオロ酢酸）により ｔ−ブチル基を除去し、Ｒ５＝ＨおよびＢ＝保保護シトシンある式（Ｖｌｌｌ　 の化合物、式（Ｖｌｌｂ）を得る。ステップ１４において、Ｒ５＝ＨおよびＢ＝ ＝護シトシンである式（ｖｌｌ１の化合物、式（Ｖｌｌｂ）を、ジメチルホルム アミド中ＢＯＰで活性化し、式（Ｖ＋）の化合物と反応させ、Ｒ”＝Ｒ３＝Ｈで ある式（Ｘ）の化合物、（Ｘｂ）を得る。ステップ１５において、式（Ｘｂ）の 化合物のメチルエステルを水性水酸化リチウムとの処理で加水分解されて式（Ｘ ｌ）の化合物を得るが、これはＺ保護Ｃｅｇモノマーと称される。

スキーム５ ＲがメチルかっＢが６−０−ベンジル−２−Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル） グアニンである式（Ｘｌ　のモノ？−（式（Ｘｄｌ）の合成について示す。ステ ップ１６において、市販２−アミノ−６−クロロプリン（式［Ｖ））を、Ｍ、Ｍ ＋＋Ｃｏ＋＋　ｃｌ　＋１．、丁ｅｌｘｂｔｄｔｏｎ　Ｌｅｆｔ、　１９８５． ２６．１８１５で記載されたように式（ＸＶＩＩ　の化合物に変換する。ステッ プ１７において、式（ＸＶＩＩ　の化合物を、９位で臭化アリルによりアルキル 化し、Ｂが保護グアニンである弐（ＩＸ）の化合物、式（ＩＸｓ）を得る。ステ ップ１８において、式（ｌＸ＋）の化合物のアルケン部分を、Ｃ＊＋ｌ＋ｅｎ　 ｅｔｉｌ、、１．ＱＢ、　Ｃｂｅ＋、　１９ｇ！、　４６．３９３６で記載され たように約２５℃において四酸化ルテニウムの存在下で過ヨウ素酸ナトリウムと の処理により酸化開裂しカルボン酸とし、次いでこれをアゾメタンでメチル化し 式（Ｖｌｌｃ）の具体的化合物を得る。ステップ１９において、式（Ｖｌ＋＋の 化合物、即ち式（Ｖｌｌｃ’、を、最初にカルボン酸に加水分解し、ジメチルホ ルムアミド中ＢＯＰで活性化し、式（ｖｌ）の化合物と反応させ、式（Ｘｄｌの 化合物を得る。式（Ｘｄｌの化合物はＢｎ−Ｚ保護Ｇｅｇモノマーメチルエステ ルと称される。

スキーム６ スキーム６はＲ、ＲおよびＲが水素、Ｒ２がＢＯＣかつＢが６−Ｎ−ベンジルオ キシカルボニルアデニンであるモノマー（Ｘ）（式（Ｘ１１）の合成について示 す。ステップ２０において、アデ−：／（Ａ−Ｈ，式（ＸＶＩｌｌ）　ノ環外ア ミノ基を、ペンジルオキシ力ルボニル基（Ｚ）で保護し、式（ＸＶＩｌｌ）の化 合物を得る。ステップ２１において、式（ＸＹＩＩ＋＋の化合物を、ブロモ酢酸 （ｅ「（−ブチルと反応させ、次いで強酸（トリフルオロ酢酸）によりｔ−ブチ ル基を除去し、式（Ｖｌｌｄｌを得る。ステップ２２において、式（Ｖｌｌｄ） の化合物をジメチルホルムアミド中ＢＯＰで活性化し、式（Ｖりの化合物と反応 させ、式（Ｘｅ）の化合物を得る。ステップ２３において、式（Ｘｅ）の化合物 のメチルエステルを、水性水酸化ナトリウムで加水分解して式（ｘｌ）の化合物 を得るが、これはＺ保護Ａｅｇモノマーと称される。

スキーム７ （Ｉａ） スキーム７はスキーム１のステップ７の更に詳細な記載であり、ｎが１で、左か ら右にＱが水素、Ｒ１が水素、Ｂがグアニン、Ｒ３が水素、Ｒ１が水素、Ｂがチ ミン、Ｒ３が水素かつＪがメトキシである式（１）の化合物（式ｆｌ　＋）　） を製造するための方法について示す。ステップ２４において、式（Ｘｇｌの化合 物をジオキサン中塩化水素で処理し、塩酸塩として式（Ｗｂ）の化合物を得る。

ステップ２５において、式（ｘｌ）の化合物、Ｂｎ−Ｚ保護Ｇｅｇモノマーのカ ルボキシル基を、ＨＢＴＵで活性化され、式（ｌｈｌの化合物と反応させる。保 護基を最初にトリフルオロ酢酸、しかる後フッ化水素で処理して除去し、式（ｉ りの化合物を得る。式（１１）の化合物はＧｅｇ−Ｔｅｇメチルエステルと称さ れる。

式（１）の化合物はＭｅ＋＋ｉｌｉ＋ｌｄ　＋ｔ　ｚｌ、１．Ａｍ、Ｃｈｅｍ、 Ｓｏｃ。

１９６３、８５．２目９　および５ｃｉｔｎｃｔ、　１９８６．２３２．３４１ で記載されたように固相法で製造してもよい。

図１はｎが５、Ｑが水素、すべてのＲ１およびＲ３が水素、すべてのＢがチミン 、Ｊがリジン（Ｃ末端アミド）である式（りの化合物の合成について示している 。図１のステップａにおいて、１０ｇモノマーをＭＢＨＡ樹脂に結合されたリジ ンの遊離α−アミノ基にカップリングする。カップリング終了後、樹脂は洗浄さ れる。ステップｂにおいて、Ｓｏｃ基を塩化メチレン中トリフルオロ酢酸による 樹脂の処理で除去する。脱Ｂｏｃ反応終了後、樹脂は洗浄され、第二カップリン グが実施できる。合計６回のカップリングおよび脱保護サイクル後、樹脂を真空 下で乾燥し、ステップＣにおいて樹脂をフッ化水素で処理して生成物を樹脂から 開裂させ、式（１ｂ）の化合物を得る。

図２は、酵素ＲＮアーゼＨを用いて、遺伝物質への式（ｌ＋　の本発明の試験化 合物ヌクレオシド塩基オリゴマーの有効な結合性について示すアッセイを表して いる。このアッセイにおいて、３ＨＩｌｌＩ識ポリｒＡ（ＲＮＡＩＩ）をその相 補的ＤＮＡ鎖、ｄＴ（鎖長２５〜３ｏ塩基）と結合させる。約３０分間後、特に ｎ＝少くとも５である式（１）の化合物が様々な濃度で加えられ、混合物を約３ ０分間インキュベートし、その時特にｎ；少（とも５である式（１）の化合物は ポリｄＴ鎖に置き換わることでポリｒＡ鎖と結合する。次いで酵素ＲＮアーゼＨ （ヒーラ細胞由来）が混合物に加えられる。ＲＮＮアーゼがＲＮＡ−（Ｉｔ）二 本鎖のＲＮＡ鎖ではなくＲＮＡ−ＤＮＡ二本鎖のＲＮＡ鎖を開裂する。したがっ てｄＴ鎖と結合しているポリｒＡ鎖の部分のみが小さな断片に開裂され、ヌクレ オシド塩基オリゴマー（式（Ｉｌ＋）と結合しているポリｒＡの部分はそのまま である。約３０分間後に、ｔ−ＲＮＡおよび酸が加えられてポリｒＡの大きな片 を沈降させ、上澄中に残留する放射能がカウントされる。上澄中における放射能 の減少は、ｄＴにまさる本発明による核酸塩基オリゴマーの結合性の尺度となる 。

図３は式（Ｉ　ａ）のヌクレオシド塩基オリゴマーに関する図２のアッセイの結 果について示す。このグラフにおいて、Ｙ軸は上澄中の放射能であり、Ｘ軸は式 （１１）の化合物の濃度である。グラフかられかるように、式（１１）の化合物 の濃度が増加すると、上澄中の放射能はかなり減少する。２μＭの濃度のとき、 式（Ｉ　ａ）の化合物は、ポリｒＡ鎖からｄＴ鎖をほぼ全部置き換えた。式（１ ａ）の化合物の添加は、ＲＮＡ鎖が式（１りの化合物の塩基配列と相補的でない ＲＮＡ−ＤＮＡ二本鎖のＲＮＡ鎖のＲＮＮアーゼ間裂に効果を有しなかった。し たがって、ＲＮＡへの式（ｌ　＋）の化合物の結合性は配列依存性である。

もう１つのアッセイが用いられ、それにより試験化合物の結合部位近くまたは内 部で二本鎖（ｄｓ）ＤＮＡを開裂する制限酵素の阻害間を測定することにより、 ｄｓＤＮＡへの式（１）の本発明による試験化合物ヌクレオシド塩基オリゴマー の結合性を測定する。このアッセイにおいて、式（１）の試験化合物を試験化合 物との相補的配列を含む標的ｄ　’ｓ　Ｄ　Ｎ　Ａと結合させる。試験化合物が ｄｓ　ＤＮＡと結合する時間を経た後、制限酵素が加えられ、開裂の量が測定さ れる。試験化合物結合部位から除去される第二制限酵素部位もｄ　ｓ　ＤＮＡ配 列内にあり、この部位は内部コントロールとして用いられる。試験化合物結合部 位近くにおけるｄｓＤＮＡ開裂の減少が試験化合物結合性増加の尺度となる。

医薬組成物 治療で使用上要求される本発明の化合物の量は、選択される具体的化合物だけで はなく、投与経路、治療される症状の性質と患者の程度および状態によっても変 わり、究極的には担当医または獣医の裁量に委ねられることも更に明らかであろ う。しかしながら、一般に、適切な用量は約１〜７５　ｍｇ／体重ｋｇ／日、例 えば約０．０１〜約５０ｍｇ／受容体の体重ｋｇ／日の範囲、好ましくはｏ、０ ２５〜４０　ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。

望ましい用量は１回用量または適切な間隔で投与される分割用量、例えば１日当 たり２．３．４回またはそれ以上の分割用量で与えることができる。

化合物は単位剤形で投与されることが便利である。例えば単位剤形当たり０．１ 〜１０００．便利には０．　２〜５００、最も便利には０．４〜２５０ｍｇの活 性成分を含有する。

本発明の処方は、医薬用として、活性化合物、即ち式（１）の化合物を、その許 容されるキャリアと場合により池の治療上活性な成分と共に含んでなる。キャリ アは処方の池の成分と適合してその受容体にとり有害でないという意味で薬学上 許容されねばならない。したがって、本発明は式（１）の化合物をその薬学上許 容されるキャリアと共に含んでなる医薬処方物を更に提供する。処方には経口、 経直腸または非経口（皮下、筋肉内および静脈内を含む）投与に適したものがあ る。経口または非経口投与に適したものが好ましい。処方は便宜上単位剤形で供 与され、調剤業界で周知のいずれの方法により製造してもよい。すべての方法で は１種以上の補助成分からなるキャリアと活性化合物を混和するステップを含む 。−般に、処方は活性化合物を液体キャリアまたは微細固体キャリアと均一かつ 完全に混和し、しかる後必要であれば製品を望ましい単位剤形に成形することに より製造される。

経口投与に適した本発明の処方は、各々が既定量の活性化合物を含有したカプセ ル、カシェ剤、錠剤またはロゼンジのような独立単位として；粉末または顆粒と して；水性液体または非水性液体中の懸濁液または溶液、例えばシロップ、エリ キシル、エマルジョンまたはドロート（１＋ｘａｇｂ））　として供与される。

錠剤は、場合により１種以上の補助成分と共に圧縮または成形して作られる。圧 縮錠剤は、易流動形、例えば粉末または顆粒で活性成分を場合により補助成分、 例えば結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、界面活性剤または分散剤と混和して適切 な機械で圧縮することにより製造される。成形錠剤は粉末活性化合物といずれか 適切なキヤシロップまたは懸濁液は活性化合物を糖、例えばスクロースの濁水溶 液に加えることにより作られるが、それには補助成分も加えてよい。このような 補助成分には香味剤、糖の結晶化を遅延させる剤又は他成分の溶解度を増加させ る剤、例えばグリセロール又はソルビトールのような多価アルコールがある。

直腸または膣投与用の処方は、慣用的なキャリア、例えばカカオ脂又はＷＨｅｐ ＋ｏｌ　１５５　（半割ベースとしてＧｅｔ■ｓｎ７．Ｄｙｎｘｍｉｌｓ　Ｎｏ ｂｅｌ　Ｃｈｅｍｉｃｚｌの商標名）で坐剤として供与される。

非経口投与に適した処方は、好ましくは受容体の血液と等張である活性化合物の 滅菌水性製剤からなることが便利である。このような処方は、受容体の血液と等 張である式（１）の化合物の薬学上および薬理学上許容される酸付加塩の溶液ま たは懸濁液からなることが適切である。

このため、このような処方は、便宜上、蒸留水、蒸留水または塩水中５％デキス トロースとこれらの溶媒中で適切な溶解度を有する式（＋１　の化合物の薬学上 および薬理学上許容される酸付加塩、例えば塩酸塩を含有する。有用な処方には 、適切な溶媒との希釈で前記非経口投与に適した溶液を与える、式（］）の化合 物を含有した濃溶液または固体物も含む。

前記成分に加えて、本発明の処方は医薬処方業界で利用される１種以上の任意補 助成分、例えば希釈剤、緩衝剤、香味剤、結合剤、界面活性剤、増粘剤、滑沢剤 、懸濁剤、保存剤（酸化防止剤を含む）等を更に含有してもよい。

実施例 メタノール（無水）４００１Ｉｌ中Ｎ−１ｅ＋ｔ−ブチルオキシカルボニルグル シナール（１５ｇ１９７ｍｍｏｌ、Ｔｈｅｍｐｉｎ口らに従い製造されたばかり のもの）の溶液に窒素雰囲気下でグリシンメチルエステル塩酸塩（１５，４ｇ、 １２２＋１ａｕｌ）、酢酸ナトリウム（１６，９ｇ１２０５．６ａ＋ｍｏｆ）お よび粉末４人モレキュラーシーブ８０ｇを加える。

約５分間攪拌後に、水素化シアノホウ素ナトリウム（１２，９ｇ、２０５．６ｍ ｍｏｌ）を約４回に分けて加え、反応混合液を約６時間攪拌する。混合液を濾過 し、濾液を濃縮する。残渣をクロロホルム（２５０１）と半飽和水性炭酸水素ナ トリウム（２５０＋ａｌ）に分配する。水相をクロロホルムで抽出し、合わせた 有機相を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮する。残渣を高真空クー ゲルロール蒸留により精製し、油状物として標題化合物を得る；９．３７ｇ、収 率４１％。’ｔｌ　ＮＭＲ（３Ｑ（１１１Ｈｔ、　ＣＤＣ１３）ｉ、　９Ｈｂ＋ 　ｓ、　ＩＨ）、　３．７１（１，３旧、　３．３８　（１，２旧、　３．１８ 　（ｑ、　１：６．５．２８）、　２．７２　（＋、　Ｉ・６．５．２Ｈ）、　 １．４２　（＋、　９ｔｌｌ　；質量スペクトルｍ／ｅ計算値（Ｍ↓旧＝２３３ ．観測値＝２３３汽遣 メタノール（無水）１６０ｍｌ中Ｎ−１ｅローブトキシカルボニルグルシナール （６，３３ｇ、３９．７ｍｍｏｌ、Ｔｈｅｍｐｉｎらに従い製造されたばかり） の溶液に窒素雰囲気下で（Ｌ）　−アラニンメチルエステル塩酸塩（５，５５ｇ 。

３９、　７ｍｍｏｌ）　、酢酸ナトリウム（６，５１ｇ、７９゜４ａｍｏｌ）お よび活性化したばかりの粉末４Ａモレキユラーシーブ４０ｇを加える。約２分間 攪拌後に、水素化シアノホウ素ナトリウム（５，０Ｏｇ、　７９．　５＋ｕａｏ ｌ）を一度に加える。反応混合液を室温で１．５時間攪拌し、濾過し、固体物に 濃縮する。固体物を酢酸エチル（５００１Ｉｌ）と半飽和水性炭酸水素ナトリウ ム（２００ｍｌ）に分配する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、油状 物に濃縮する。油状物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化 合物を得る（３．　６０　ｇ。

収ｌＸ３７％）。ｌＩＩ口ｌｌｔ３０ＱＭＬ、　Ｃ［ｌＣ１）　：Ｓ、　Ｎ（ｂ 口、Ｉｌ１）、　３．７３　（＋、　３ｔｌ）、　３．３５　（Ｑ、　Ｉ＝７１ １ｓ、　ＩＩＩ）、　３．３０−３．　ＩＩ（ｍ、　２Ｈ］、　２．８O −２．７２　ｆｉ、　ＩＨ）、　２．６３−２．５５　（ｍ、　１）Ｉ）、　！ 、　４５　（＋、　９）Ｉ）、　１．３０　（ｄ、　Ｉ＝７g ｓ、　３１（１：質量スペクトルｍ／＋計算値（Ｍ＋Ｈ１＝２４７．観測値＝２ ４７例３ Ｎ　−（２−ｔｅ＋＋−ブチルオキシカルボニルアミノエチル）ＤＭＦ　（無水 ）　９０１中式（Ｖ）　（７）化合物（Ｒ１＝Ｒ３＝Ｈ，Ｒ２＝Ｂｏｃ、Ｒ４＝ メチル、３．０Ｈｇ、１２゜９１　ｍ１ｌｏｌ）の溶液に１−カルボキシメチル チミン（式（Ｖｌｌｌ　、Ｒ５＝Ｈ，Ｂ＝Ｔ、２．９７ｇ、１６．１４ｉａｏｌ 、＾、Ｓ、Ｉｏｎｅ＋　ｅｔ　ｘｌ、ＴＮ＋ａｈ＋ｄ＋ｏｎ、１９７３．２９． ２２９３参照）、ＢＯＰ　（７，１３ｇ、１６．１４＠ｍａｌ）、ＨＯＢｔ　（ ２゜１８　ｇ、　１６．　１４■ｏｌ）およびトリエチルアミン（３゜００ｏｌ 、２５．　８３■ｏｌ）を加える。約４時間攪拌後に、反応混合液を半飽和塩水 ２００＋ｎｌで希釈し、酢酸エチルで抽出する。合わせた有機相をＩＮ水性塩酸 、飽和水性炭酸水素ナトリウム、塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃 縮する。得られた残渣をシリカゲル（９：１酢酸エチル・ヘキサン）クロマトグ ラフィーに付し、白色固体物として標題化合物を得る：３．６５ｇ、収率７１％ 。　’ＨＮＭＲ（３００ＭＨ＋、ＣＤＣｌ　）＋７．Ｑ２（１，０，２！＋Ｈ］ 、６．９５（Ｓ、　０．７５Ｈ）、　５．５１　ｆｂ＋　ｒ、　ＩＨ）、　４． ５（＋、　１．５Ｈ）、　４．４２（＋、　０．５Ｈ１，４２０ｔ＋、　０．５ ［、４，０５（＋、　１．５Ｈ）、　３．８１（＋、　０．７５Ｈ）、　３．７ ５（ｓ、　２．２５Ｎ）、　３．５２　ｆｔ、　］＝５．７．２Ｈ）、　３．３ ９　（ｍ、　２旧、　１．９１　（Ｉ、　３Ｈ）、　１．４４　（ｔ、　９旧； 質量スペクトルｌＩ／ｅ計算値ｔｉｔ÷旧＝３９９．観測値・３９９ＴＨＦ７０ ｍｌおよび水２０１中式ｔＸ’ｌ　の化合物（Ｒ１＝Ｒ３＝Ｈ，Ｒ２＝Ｂｏｃ、 Ｒ４＝メチル、Ｂ＝チミン、３、Ｌｏｇ、７．７１ｉａｏｌ）の溶液を氷上で冷 却する。

これにＩＮ水性水酸化リチウム（１５ｍｌ、１５　ｍａ＋ｏｌ）を加え、反応混 合液を約３０分間攪拌する。混合液のｐＨを固体硫酸水素ナトリウムで約２に調 整する。溶液を水１５ｍ１で希釈し、塩化ナトリウムで飽和させ、酢酸エチルで 抽出する。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮する。残渣を１： １アセトニトリル：水５０ｍ１に溶解し、凍結乾燥させ、白色粉末として標題化 合物を得る＋２．４１ｇ、収率８１％。’ｔｌ　ＮＩＩＲ（３Ｇ（ｌｌｌＨｔ、 　ｄ４−メタノール）　：　７．３０　（＋、　０．６６旧、　７．２６　（ｓ 、　０．３３１１）　、　４．７４　（ｔ、　１．３３Ｈ）、　Ｌ　５６　（＋ 、　０．６６旧、　４．２７　（＋、　０．６６Ｈ１，４，ＩＱ　（１，ｔ、　 ３３旧、３．５１（ｍ、２８）、　３．２０　（ｍ、　２Ｈ）、　１．８７　ｉ 、　３旧、１．４４（＋、９旧；質量スペクトルｍ／ｌ計算値（Ｍ＋Ｈ）　＝３ ８５．観測値（＋４十旧・３８５帆Ａ （ＸＩＶ＋　１２　＝　４−　Ｎ−ベンゾイルオキシカルボニル）ピリジン（無 水）９０１中シトシン（５ｇ、　４５ａ＋ｍｏｌ）の懸濁液に窒素雰囲気下水浴 中でベンジルクロロホルメート（８ｍｌ、　５６　ｍｍｏｌ）を滴下する。混合 液を室温に戻し、約１６時間攪拌する。次いで混合液にジメチルアミノピリジン （２，７５ｇ、　２２．　５ｆｆｉｍｏｌ）および更にベンジルクロロホルメー ト（８０１，５６ｆｆｉｍｏｌ）を加える。

合計約４０時間攪拌後、反応混合液を氷水２００ｍ１に注ぎ、５分間攪拌する。

得られた白色固体物を濾過し、水、ジクロロメタンで洗浄し、真空下で乾燥し、 白色固体物としてＩｌｉ題化金化合物る＋７．６６ｇ、収率６９％。

’Ｈ！１１１ｉＲｉ３０ＯＨ＋、　ｄ６−ＤＩＡＳＯ）　：１１．　ｌ　（ｂ＋ 　ｈ、　１８）、　７．　Ｎ（ｄ、　ＩＩｌ、　７〕７（工、　５Ｂ）、　６． ９２　ｆｄ、　ｌ１ｌ）　、　５．１８　［、２１１）（ｂ）ｘ−［（＋ξｒｔ −ブトキンカルボニル）メチル〕　−４−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルシトシ ン（式＋Ｖｌｌ）ＤＭＦ　＜無水）２Ｓｚｌ中４−Ｎ−ベンジルオキシカルボニ ルシトシン（３，３９ｇ、１３．８４ｉａｏｌ）の懸濁液に窒素雰囲気下で炭酸 セシウム（４，９６ｇ、５゜２２　ｍｍｏｌ）を加える。混合液を約１３分間攪 拌し、ブロモ酢酸Ｎｉ１−ブチル（２，４６ｍ１．１５．　２２＋ａｍｏｌ）を 滴下し、混合液を約４時間攪拌する。得られた固体物を濾過し、酢酸エチルで洗 浄する。濾液を部分的に濃縮し、酢酸エチルと希塩水に分配する。有機相を希塩 水、水、飽和水性塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、黄色泡状物 を得、これを結晶化（ジクロロメタン／ヘキサン）により精製し、白色結晶とし て標題化合物を得る；　２．　７５　ｇ、収率５５％。

’ＨＮＭＲ（３ＱＯＭＨ＋、ＣＤＣｌ５）　ニア、　５２　（＋、　Ｉｆｆ）、 　７．５０（ｄ、　ｌ）＋＋、　７．３６［＋、　５Ｈ］、　７．２２　（ｄ、 　ＩＨ）、　５．２０　（ｈ、　２Ｈ］、　４．５０（＋、　２Ｈ）、　１．４ （＋、　９旧（ｃ）１〜　（ヒドロキシカルボニルメチル）−４−Ｎ−ベンジル オキシカルボニルシトシン（式（Ｖｌｌｌ　ＩＲ５＝　Ｈ１Ｂ＝４−Ｎ−ヘンシ ルオキシカルボニルシトシン）ジクロロメタン（無水）４５ｍｌ中式（Ｖｌｌｌ 　の化合物（６ｇ、１６．　７１　ｍｍｏｌ、Ｒ５＝ｔ−ブチル、Ｂ＝４−Ｎ− ベンジルオキシカルボニルシトシン）の溶液に窒素雰囲気下でアニソール（２０ ｍｌ、１８４１ｎｍｏｌ）　、トリフルオロ酢酸（５０ｍｌ、６４９　ｍｍａｌ ）を加える。反応混合液を約４時間攪拌し、濃縮乾固させる。残渣にトルエンを 加え、溶液を濃縮乾固させる。このプロセスを更に２回繰返す。残渣を真空下で 乾燥し、ジクロロメタンで摩砕する。得られた固体物を濾過し、ジクロロメタン で洗浄し、白色固体物として標題化合物を得る；６．３８ｇ、収率８１％、トリ フルオロ酢酸との１１錯体として。

’ＨＮ１１ＩＲ（３００１１１Ｈｔ、　ｄ６−ＤＭＳＯ）　：８．０２１ｄ、　 Ｉ・７．３．　ｌ旧、　７．３１１　（１１，５１（）、　７．０１　（ｄ、　 Ｉ・７．３．　ＩＨｌ、　５．１８（＋、　２Ｈ）、　４．５１（＋、　２Ｈ） 　；質量スペクトルｍ／ｈ計算値（ト旧＝３０４．観測値（Ｍ＋Ｈ１＝３０４ン ンルオキシカルポニルシトシン） ＤＭＦ　（無水）８１中式ｔＶ）　＋７）化合物（０，５９ｇ。

２．５４ｍｍｏｌ、Ｒ−Ｒ−Ｈ，Ｒ２＝Ｂｏｃ、Ｒ４＝メチル）の溶液に窒素雰 囲気下でＢＯＰ　（０，９４ｇ。

２、１ｌＩＩＩｏｌ）　、ＨＯＢ　ｔ　（０，２９ｇ、　２．１ｌｍｏｌ）とＤ ＭＦ　（無水）８１中式（Ｖｌ＋＋　）化合物（０，９３ｇ。

２．２３Ｉｏｌ、Ｒ５＝Ｈ，Ｂ＝４−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルシトシン） およびトリエチルアミン（１，４１ｍ１．１０．　１５ｃＩｌｌｏｌ）の溶液を 加える。約３時間攪拌後、反応混合液を濃縮し、残渣を酢酸エチル１００＠ｌと ０．５Ｎ水性塩酸５０ｍ１に分配する。有機相を半飽和水性炭酸水素ナトリウム および飽和水性塩水で洗浄する。

酢酸エチル溶液から結晶化し、白色結晶として標題化合物を得る；０．６２ｇ、 収率５９％。’ＨＮＭＲ（３００ＭＨ！。

ＣＤＣ１３）　ニア、　６５（ｂ＋　ｂ　ＩＨｌ、７．６２　（ｄ、　０．３Ｈ １，７，５８（ｄ、　０．７）１）、　７゜３５（＋、　５［１）、　７．２２ （ｄ、　１ｔ１１．５．５５　ｆｔ、　ＩＨ）、　５．１９　（１，２ｔｌ］、 　４．７Ｑｉ、　１４ｔｌ）、　４．５５　［＋、　Ｑ、　６ｔｌ）、　４．３ ０　（＋、　０．６ｔ１１．４．　Ｏ５（＋、　１．４Ｈ）、　３．７８　（＋ 、　０．８Ｈ１、３，ＴＯ（＋、　２．２ｔ１１．３．５５　ｆｔ、　１．４１ １）　、　３．５０　（１，０，６８）、　３．３２Ｉｑ、１．４ｔｌ）、３． ２２（Ｑ、０６Ｈ）、　１．４０（＋、９Ｈ）　；質量スペクトル謹／ｅ計算値 （ト旧＝５１８．観測値（Ｍ÷旧・５１８水浴中でＴＨＦ−水（１／１）７０ｍ ｌ中式（１）の化合物（２，３６ｇ、４．５６ｍｍｏｌ、　Ｒ’＝Ｒ”＝Ｈ，Ｒ ２＝Ｂｏｃ、Ｒ４＝メチノペＢ＝４−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルシトシン） の懸濁液にＩＮ水性水酸化ナトリウム（１４１，１４ｍｍｏｌ）を加える。約１ ０分間攪拌後、反応混合液を酢酸エチル８０１と希塩水９０１に分配する。水相 を酢酸エチルで洗浄し、飽和水性硫酸水素ナトリウムで酸性化し、塩化ナトリウ ムで飽和し、酢酸エチルで抽出する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、部分 的に濃縮する。結晶化が起き、不均一溶液をクロロホルム、酢酸エチルで希釈し 、濾過し、白色結晶として標題化合物を得る；２．０２ｇ、収率８８％。　’Ｈ ＩＩＩＩＲ（３００ＭＨ＋、　ｄ６−ＤＭＳＯ）　：　ＩＱ、　７８（ｂ＋　１ ．　ＩＨ）、　７．８９　（ｄ、０．６５１１＋、　７．８６（ｄ。

０．３５旧、　１．３６　（ｍ、　５８１　、７．　Ｈ（ｄ、　Ｇ、も５１１１ ．６．９９　（ｄ、　Ｉｔ、　３５１１）、　６．９３（＋、　（＋、　０．７ ｆ１１．６．７４　（１，０，３５Ｈ１，５，１８（ｓ、　２ｆ１１．４．８０ 　（＋、　１．３旧。

４、６０（＋、　０．７１１）、　４．２Ｎ＋、　０．７Ｈ）、　３．９７（＋ 、　１．３ｆｌ）、　３．３８（ｂ＋　１．１１）ｌ）、　３．２１１（ｂ＋　 ＋、　Ｑ、　Ｈｌ）、　３．１８（ｂ＋　ｑ、　１．３ｔ１１．３．　Ｇｏ（ｂ ＋　ｑ、　０．７旧、　１．３５　（＋、　９Ｈ）　：質量スペクトルＩＨｌｅ 計算値（Ｍ＋１１１　＝５０４．観測値（ｉ！＋Ｈ）・５０４ 例５ −　−　？　−）　エ　−　１ −ベンジル−２−Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）グ乾燥ＤＭＦＩＱｍｌ中６ −〇−ベンジルグアニン（０゜９３０　ｇ、　３．　８５ｍｏｏｌ）　（Ｍｓｅ Ｃｏ＋＋）の溶液に室温で炭酸カリウム（２，６６ｇ、　１９．　３ｍｍｏｌ） および１８−クラウン−６（１，０２ｇ、３．８５ｍｍｏｌ）を加える。

０．２５時間後、臭化アリル（０，３６７ｍ１．４．２４■０１）を一度に加え る。得られた溶液を１時間激しく攪拌する。混合液を酢酸エチル１２５ω１と水 ５０ｍ１に分配する。有機相を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し 、濃縮する。残渣をシリカゲル（ヘキサン／酢酸エチル、勾配溶出）ラジアルク ロマトグラフィーにより精製し、油状物として標題化合物を得る（０．５８２ｇ 。

５４％）。　Ｈ）ＩｉｌＲ（３００ｉ１Ｈ＋、ＣＤＣｌ３１ニア、６０［ｉ、ｌ 旧、　７．５２−７、４８　ｆｍ、　２Ｈ）、　７．３８−７．７（ｏ、　３ｔ ｌ）、　６．０５−５．９２　（＋ａ、　ｆｉｌｌ、　５．５６　（１，２Ｈ１ ，５，２６（ｄｉ　Ｉ：３．４．０．３Ｈ＋、　ＩＨ）、　５．１３（ｄｉ　Ｉ ：５．７．０．３Ｈｔ、　Ｉｆｆ）、５．０５（ｈ＋　！、　２１（ｊ、　Ｌ　 ６５（ｄｄｄ、　Ｉｎ、　９．　Ｑ、　３．　［１，３Ｌ＋、　２１１）　；質 量スペクトルｚ／ｅ計算値ＦＭ＋ｌＩｌ　＝２８２．観測値＝２８２（ｂ）９− Ｎ−アリル−６−０−ベンジル−２−Ｎ−ＴＨＦ５ｍｌ中９−Ｎ−アリル−６− ０−ベンジルグアニン（０，１７０ｇ、０．６０４１１１１１０１）の溶液に室 温で１８−クラウン−６（０，３１９ｇ、　１．　２１＋ａｍｏｌ）およびＮ− （ベンジルオキシカルボニル）イミダゾール（０，６１１ｇ’−３，０２Ｉｏ１ ．Ｗｉｔｋｉｎｓ）を加える０５分間後、水素化カリウム（油中３５％、０．１ ７３ｇ。

１　、　５１　ｍ１Ｉｏｌ）を滴下する。得られた溶液を室温で１時間維持する 。次いて混合液を酢酸エチル１００１と水５０ｍ１に分配する。有機相を塩水で 洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、しかる後濃縮する。残渣をシリカゲ ル（ヘキサン／酢酸エチル、勾配溶出）ラジアルクロマトグラフィーにより精製 し、油状物として標題化合物を得る（０．２３６ｇ、９３％）。’Ｉｆ　ＮＭＲ （３［１０Ｍ１ｌ＋、　ＣＤＣ１３）　ニア、　８２　ｆｂ口、　ＩＨＩ、　７ ．７６　（１，ｌ旧、　７．５３−７．４２　（ｍ、　２１＋１．７．４２−７ ．２８　（ｍ、　８Ｈ）、　６．０４−５．９１　（ｍ、　Ｉｆｆ）、　５．５ ９　（＋、　２Ｈ）、　５．２８　（ｄｄ、　Ｉ＝３、５．０．４Ｈｒ、　Ｉｆ ｆ）、　５．２５　ｉ、　２旧、　５．２０　（ｄｄ、　Ｉ＝５．６．　Ｑ、　 ３Ｌ、　ｌ１ｌ）、　４７３（ｄｄｄ、　］１．９．０．４．０．４Ｈ！、　２ ）１）ルー２−Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）グアニン）四塩化炭素２１、 アセトニトリル２１および水３１中式（ＩＸＩ）化合物（０，２３０ｇ５０．５ ５４ｍｍａｌ、Ｂ＝６−０−ベンジル−２−Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル） グアニン）の溶液に過ヨウ素酸ナトリウム（０，４７４ｇ１２．　２１ｍｍｏｌ ）　、塩化ルテニウム（Ｉ　Ｉ　＋）水和物（０，０１０ｇ、　０．　０４８ｗ ｍｏｌ）を加える。室温で５時間後、追加量の塩化ルテニウム（ＩＩ＋＋水和物 （０，０１０ｇ、　０．　０４８ｍｍｏｌ）を加える。得うレｆ＝　ｔｒｉ　ｔ ｆｉ　ヲ室温で１５時間激しく攪拌する。混合液を塩化メチレン１００１１と水 ２５１に分配する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。残渣 をシリカゲル（メタノール／塩化メチレン／酢酸、勾配溶出）ラジアルクロマト グラフィーにより部分精製し、遊離酸を得る。遊離酸をトルエンと共沸乾燥し、 残渣をメタノールに溶解する。エチルエーテル中ジアゾメタンの溶液を黄色が持 続するまで滴下する。揮発性物質を減圧下で除去し、得られた油状物をシリカゲ ル（ヘキサン／酢酸エチル、勾配溶出）ラジアルクロマトグラフィーにより精製 し、油状物として標題化合物を得る（０．　０６１　ｇ、　２５％）。

’ＨＮ１１Ｒ（３００ＭＨ＋、Ｃ［１Ｃ１３）　ニア、　８５（＋、　ＩＨ）、 　７．５４−７．５１　（ｍ、　２旧、　１．４５−７．３０（ｍ、　８Ｈ）、 　５．６１　（ｘ、　２Ｈ１，５，２７（＋、　２Ｈ）、　４ｙ９７ｉ、　２ｆ ｌ）。

３、７９　（ｓ、　３Ｈ） （ｄ）Ｂｎ−Ｚ−Ｇｅｇモノマーメチルエステル（弐（Ｘ）６−０−ベンジル− ２−Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）グアニン） ＴＨＦ２ｍｌおよび水１１中式（Ｖｌｌｌ　）化合物（０，０５５ｇ、０．１２ ｍｍｏｌ、Ｒ５＝メチル、Ｂ＝６−０−ベンジル−２−Ｎ−（ベンジルオキシカ ルボニル）グアニン）の溶液に室温で水酸化リチウム−水和物（０，０１５ｇ、 　０．　３７ｍｍｏｌ）を加える。０．５時間後、反応液を５％水性塩酸２１で 酸性化し、酢酸エチルで抽出する。

有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、白色粉末に濃縮する（０．　０５０ 　ｇ、９４％）。乾燥ＤＭＦ：２ｅｌ中得られた遊離酸および式（Ｖｌ　の化合 物（０，０５０ｇ。

０．２１ｍｍａｌ、Ｒ１＝Ｒ３＝Ｈ，Ｒ２＝Ｂｏｃ、Ｒ４＝メチル）の溶液にＢ ＯＰ　（０，０７６ｇ、０．１７ｍａ＋ｏｌ）およびＨＯＢｔ　（０゜０２３　 ｇ、　０．　１７ｍｍｏｌ）を加える。５分間後、トリエチルアミン（０，０４ ８ｍ１．０゜３５ｍのｏｆ）を一度に加える。得られた溶液を室温で２時間攪拌 する。混合液を酢酸エチル１００１と塩水５０１に分配する。有機相を塩水で洗 浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、油状物に濃縮する。油状物をシリカゲ ル（メタノール／塩化メチレン、勾配溶出）ラジアルクロマトグラフィーにより 精製し、油状物として標題化合物を得る（０．　８５　ｇ、定量的収率）。　Ｈ ＮＭＲ（２５０１１Ｈｔ。

ＣＤＣｌ５）　ニア、　９６（＋、　０．７５Ｈ）、　７．８９　（＋、　０． ２５ｆｌ）、　７．６９（＋、　ＩＨ）、　７．４９−７４６　（ｍ、　２Ｈ） 、　７．３８−７．２１　ｆｍ、　８ｆｌ）、　６．２７　（ｄｄ、　Ｉ＝５． １．５．　ｌＨ＋、　ＩＨｌ、　５．５５（＋、　２）ｌ）、　５．２２　（ｓ 、　２８）、　５．０１Ｎ＋、　１．５Ｈ）、　（、８６（ｓ、　Ｏ，ＳＲ）、 　４．３７　（ｓ、　０．５ｆｌ）、　１．０９　（＋、　１．５Ｈ）　、　３ ．７８　（ｓ、　Ｑ、　７５Ｈ）、　３．７０　（＋、　Q゜ ２５Ｈ）、　３．６３（ｌＩｌ、　１．５ｔｌ）、　３．５１　（ｍ、　０．５ Ｈ１，３，３９（ｍ、　１．５Ｈ１，３，２３（ｍ、　０．５Ｈ）、　１．２０ 　（＋、　９Ｈ）　：質量スペクトルｍ／ｅ計算値（Ｍ＋Ｈ）＝６４８、観測値 ・６４８ ＤＭＦ　（無水）６０ｍｌ中アデニン（３ｇ１２２．２ｍｍｏｆ）の￥濁液に窒 素雰囲気下で炭酸セシウム（７，９６ｇ、　２４．　４２ｍｍｏｌ）を加え、ブ ロモ酢酸Ｎｉ１−ブチル（４，３ｔ＋ｌ、２６．６４０ロｏｌ）を滴下する。反 応混合液を室温で約１４時間攪拌し、半分の容量まで濃縮し、クロロホルム１２ ５ｍ１と希塩水１００１Ｉｌに分配する。水相をクロロホルムで抽出し、合わせ た有機相を飽和塩水３０の１で洗浄する。部分濃縮で結晶化が起きる。白色結晶 を酢酸エチルで洗浄し、乾燥して、標題化合物を得る；３０５ｇ、収率５５％。

　’ｔｌ　ＮＭＲｆ３００ＭＨ＋、　ｄ６−ＤＭＳＯＩ　：８゜１２　（＋、　 ＩＨ）、　ｌ　０９　ｉ、　ＩＨ）、　７．２（（ｂ＋　＋、　２旧、　４．２ ３（＋、　２Ｈ１，１，４１（＋、　９ｔｌｌ （ｂ）６−Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−９−１，２−ジクロロエタン（ 無水）１．５ｍｌ中Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）イミダゾール（０，１６ ｇｌｏ　、８　ｍｍｏｌ、　１．　Ａｍ、　Ｃｈｅｗ、　ＳａＣ，、１９ｇ２． １０４．５７０２−５７０８参照）の溶液に窒素雰囲気下水浴中でテトラフルオ ロホウ酸トリエチルオキソニウム（０，８２ｍ１、塩化メチレン中１゜０Ｍ、０ ．８２ａｖｏｌ）を加える。添加後、水浴を取除き、混合液を室温で約２時間攪 拌する。次いで反応混合液に式ｆａｌｌ＋の化合物（０，０５０ｇ、０．２０１ １＋１０１、Ｒ５＝ＬＩＴ（−ブチル、Ｂ＝アデニン）を固体物として加える。

反応混合液を８２℃で約５時間加熱し、室温で約２日間放置する。混合液を濃縮 し、シリカゲル（１回目；酢酸エチルーヘキサン勾配、２回目：酢酸エチルーク ロロホルム勾配）で２回クロマトグラフィーに付し、白色固体物として標題化合 物を得る：０．０４０ｇ、収率５３％。

’ＨＮＭＲ（３ＱＯＭＨ＋、　ＣＤＣｌ５）：８．７３（ｉ、ｌＨ）、８．１６ （ｂ＋　＋、ｌＨ）、７９６　（＋、　ＩＨ）、　７．３７（ｍ、　５Ｈ）、　 ５．　Ｈｆ＋、　２Ｈ）、　４．８４　（＋、　２Ｈ）、　１．４７　（＋。

９Ｈ）１質量スペクトルｍａ＋計算値（Ｍ＋Ｈ）＝３８４．観測値（Ｍ＋Ｈ１＝ Ｒ５＝Ｈ，Ｂ＝６−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアジクロロメタン（無水）５ １中式（Ｖｌｌｌ　の化合物（０゜１１５ｇ、０．　３０ｗｍａｌ、Ｒ５＝Ｈ目 −ブチル、Ｂ＝６−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアデニン）の溶液に窒素雰囲 気下でアニソール（２，５ｍｌ、２３ｍ＋ａ＋＋１）　、Ｌかる後トリフルオロ 酢酸（７１１％　９１．　０１１０１）を加える。

反応混合液を約４時間攪拌し、濃縮乾固させる。残渣をクロロホルム、メタノー ルおよびエチルエーテル混合液から５回共沸し、高真空下で一夜乾燥し、トリフ ルオロ酢酸との１．１錯体として標題化合物を得る；０．１３４ｇ、収率９０％ 。　’ＨＮＭＲ（３００ＭＨ＋、　ｄ４−３Ｈ１：８．６７　（１，ｌ旧、　８ ．５２　ｉ、　ＩＨ）、　７．４５（ｄＬ　２１＋）、　７．３８（ｍ、　３ｆ ｌ）、　５．３５（＋、　２１１）、　５．１８（＋、　２ｔｌ）　；質量スペ クトルｍ／ｅ計算値（Ｍ＋旧＝３２８．観測値（ＭＤＭＦ　（無水）　１．　５ ｍｌ中ＢＯＰ　（０，１２４ｇ、０゜２８１ｎｌＩｌｏｌ）　、ＨＯＢ　ｔ　（ ０，０３８ｇ、　０．　２８ｍｍｏｌ）および式（Ｖｌｌｌ　の化合物（０，１ ３０ｇ、０．２８ｍｔｏｌ、Ｒ５＝ＨＳＢ＝６−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル アデニン）の溶液に窒素雰囲気下でトリエチルアミン（０゜１８８ｍ１．１．　 ３５ｍｍｏｌ）を加える。混合物を約１．５分間攪拌後に、それをＤＭＦ　（無 水）ｌｉｔ中式（ｖ）の化合物（０，０７ｇ、０．２７ａｍｏｌ、Ｒ１＝Ｒ３＝ Ｈ，Ｒ２＝Ｂｏｃ、Ｒ４＝メチル）の溶液中にシリンジで移し、混合液を約２時 間攪拌する。反応混合液にＢＯＰ　（０゜１２４　ｇ、　０．　２８ｍ＋ａｏｌ ）を加え、混合液を約３時間攪拌する。混合液を濃縮乾固し、酢酸エチル２５１ と飽和水性塩水３１含有０．５Ｎ塩酸１０１に分配する。有機相を水性０．５Ｎ 塩酸−塩水、希水性炭酸水素ナトリウムー塩水および飽和水性塩水で洗浄する。

有機相を濃縮し、シリカゲル（１回目、酢酸エチル−ヘキサン、２回目；メタノ ールー酢酸エチル）でクロマトグラフィーに付し、白色泡状物として標題化合物 を得る：０．０７８ｇ、収率５３％。’ＨＮＭＲ（３００ＭＨ＋、　ＣＤＣｌ　 ）：８．７２（ｓ、３旧、　８．１４（ｂＩｌ、　ＩＨ）、　８．０２ｉ、　Ｉ ＨＩ、　？、　４２（ｄｄ、　２８１．７．３６（＋１．３旧、５６０（ｂ＋　 ＋、　ＩＩＩ）、　５．２８（Ｉ、　２ｔｌ）、　５．１４　（＋、　１．６８ ）、　４．９７　（＋、　０．４ｔｌ）。

４、２９　（＋、　０．４Ｈ］　、　４．０５　（＋、　１．６Ｈ）、　３．８ ２　（＋、　０．７５Ｈ］、　３．７３　（＋、　２．２５Ｈ）、　３．６４　 （ｔ、　１．６Ｈ）、　３．５４　（１，０，４Ｈ１，３，３８（Ｑ、　１．６ ｔｌ）、　３．２６　（Ｑ。

Ｑ、４Ｈ）川４　（＋、　９１１１　；質量スペクトルｍ／ｅ計算値（Ｍ＋Ｈ１ ５４１゜観測値（Ｍ＋Ｈ）　＝５４１ 水浴中でｌ　：　ＩＴＨＦ−水Ｃ１中式［Ｘ）　１７）化合物（０゜０７０ｇ、 ０．１２９ｍｍｏｌ、Ｒ−Ｒ＝ＨＳＲ２＝８ｏｃＳＲ４＝メチル、Ｂ＝６−Ｎ− ベンジルオキシカルボニルアデニン）の溶液中にＩＮ水性水酸化ナトリウム（０ ，３８８ｍ１．０．　３８８ｍ１ｏｌ）を加える。約１時間攪拌後、反応混合液 を酢酸エチル５１と水１０ｍ１に分配する。水相を酢酸エチルで洗浄し、飽和水 性硫酸水素ナトリウム３ｍｌで酸性化し、塩化ナトリウムで飽和し、酢酸エチル で抽出する。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、白色固体物と して標題化合物を得る。

０．０６５ｇ、（１９５％。’ＨＮＭＲＨＯＯＭｔｌ＋、　ｄ４−１９　／−ル ）：８．５８（ｉ、　０．６Ｈ）、　８．５７（＋、　０．４８１．８．２７（ ＋、　０．６１（１，８，２６（＋、　０．４８）、　７．４６　（ｄ、　２Ｈ ）、　７．３６　（ｍ、　３Ｈ）、　５．３９ｉ、　１．４Ｈ１，５，３０（＋ 。

２ｔｌ）、　５．２１　（＋、　０．６Ｈ）、　４．１０　（＋、　０．６Ｈ） 、　４．１２　（ｓ、　１．４旧、３．６４（１゜１、　ｔＨ）、　３．１７ｆ ｔ、　０．６旧、　３．３８　ｆｔ、　１．４Ｈ）、　３．２０　（＋、　０． ６Ｈ）、　１．４１　（＄、９旧、質量スペクトルｍ／＋計算ｆ［（１１＋Ｈ１ ＝５２７．観測値（Ｍ＋Ｈ）＝５２フ ル）−Ｎ−（１−チミニルアセチル）−２−（アミノ）プロピオン酸（式（ｘ） Ｒ１＝Ｈ，Ｒ２＝Ｂｏｃ、Ｒ３＝ルアミノエチル）−Ｎ−（１−チミニルアセチ ル）−２−（７ミ／）　プロピオンｅ　（式（Ｘ）Ｒ１＝Ｈ，Ｒ２＝Ｂｏｃ、Ｒ ３＝　（Ｓ）　−メチル、Ｒ４＝メチル、Ｂ＝チミと１ １．７ｇ、６．９ｍｍｏｌ）の溶液に１−カルポメトキシチミ：／　（式（Ｖｌ ｌ）：Ｒ５＝Ｈ，Ｂ＝チミ：／、１．４ｇ、７゜６　ｍｗｏｌ）および１．３− ジシクロへキシルカルボジイミド（１，５ｇ、　７．　６ｍｒａｏｌ）を加える 。室温で約２０時間攪拌後、反応混合液をセライトで濾過する。濾液を濃縮し、 酢酸エチル（３００１）と塩水および飽和水性炭酸水素ナトリウムの１：１混合 液（１５０ｍｌ）に分配する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、シリ カゲル約１０ｇ上で濃縮する。シリカゲルをシリカで充填されたフラッシュカラ ムの上におき、カラムをメタノール／塩化メチレン（勾配溶出）で溶出させ、標 題化合物を得る（２．６ｇ、９１％）。　’ＨＮＭＲ（３００ＭＨ！、　ＣＤＣ １３）：９３（ｂ＋　＋、０．２５旧、　８．９７　（ｂ＋　３０．７５Ｈ）、 　６．９９（＋、　０．２５旧、６９３（Ｉ、　０．７５Ｈ１，５，５７（ｂ＋ 　１．　Ｉ＝５ｔ１３１Ｈ１，４，５４（ｍ、　２１１１．４．３４（ｑ、　Ｉ ＝７Ｈ＋、　Ｉｆｆ］、　３．７８（１，０，２５Ｈ）、　３．７３　（＋、　 ０．７５１１）、　３．６７−３．２２　（１１、４Ｈ１、１，９Ｑ　（１，３ ｔｌ）、　１．６０　（ｄ、　Ｉ＝７Ｈ＋、　３Ｈ）、　１．４３　Ｉｌ、　９ ８１　：質量スペクトルｍ　／′ｅ計算値（Ｍ＋ｔｌ）　＝４１３．観測値＝４ １３（ｂ）（Ｓ）−Ｎ　−（２−＋ｅｕ−ブトキシカルボニルアミノエチル）− Ｎ−（１−チミニルアセチル）−２−（アメタノール３０１および水１５１１中 式（Ｘ）の化合物（Ｒ＝Ｈ，Ｒ−Ｂｏｃ、Ｒ３＝　（Ｓ）　−メチル、Ｒ４＝メ チル、Ｂ＝チミン、２゜５０　ｇ、　６．　０６ａｗｏｌ）の溶液を水酸化ナト リウム（０，２９ｇ、　７．　３ｗｍｏｌ）で処理する。反応混合液を室温で放 置する。約６０時間後に水酸化ナトリウム（０，１２ｇ、　３．　０ｍｍｏｌ） を追加する。約２４時間後、メタノールを減圧下で除去する。

残留水性混合液を酢酸エチル（３００ｍｌ）および塩水（１０Ｑ＠ｌ）で希釈す る。水相のｐｔ（を固体硫酸水素ナトリウムで約２に調整し、各層を分離する。

水層を酢酸エチル（１５０ｍｌ）で逆抽出するつ合わせた有機相を硫酸ナトリウ ムで乾燥し、濾過し、泡状物に濃縮する。泡状物を塩化メチレンに溶解し、激し く攪拌したヘキサン（３００ｍｌ）に滴下する。得られた沈殿物を濾過し、乾燥 し、白色粉末として標題化合物を得る（２．　１２　ｇ。

収率８８％）。　ＨＮＭＲ（３００１１１１＋、　ｄ６−ＤＭＳＯ）　：　Ｉｆ 、　２９ｉ、　１１１１゜７、３Ｎ＋、　ＩＨ）、　６．９Ｈｂ＋　ｓ、　０． ６７ｔｌ）、　６．８６（ｂ＋　ｓ、　０．３３Ｈ）、　４．６８−４、５６　 （ｍ、　２Ｈ］　、　４．３１　（Ｑ、　Ｉ＝７Ｈ＋、　ＩＬ、　３Ｈ）、　３ ．２−２．９３（ｍ、　４Ｈ］、　１．７］（＋、　ＩＨ）、　１．３９　（ｓ 、　９ｆｌ）、　１．３４（ｄ、　Ｉ＝７Ｈｘ、　３Ｈ）　：質量スペクトルｍ ｌｅ計算値（Ｍ＋Ｈ）　＝３９９．観測値・３９９２−Ｎ−（ベンジルオキシカ ルボニル）グアニン、Ｊ＝メトキシ、Ｑ＝Ｂｏｃ） 式（Ｘ）の化合物（０，０９３ｇ５０．２３７ｍｍｏｌ、Ｒ＝Ｒ＝Ｈ，Ｒ２＝Ｂ ｏｃ、Ｂ＝Ｔ）をジオキサン（Ｐｉ＋＋ｃｅ）中４Ｎ塩酸６１に溶解する。０． ２５時間後、反応液を濃縮して、標題化合物の白色粉末を得る（０．　０８１ｇ １定量的収率）。　ＨＮＩＩＲ（３００ｉ１Ｈｓ、　ＣＤＣｌ３　）ニアｊ３（ ＋、　Ｑ、　３３Ｈ）　、　７．２６　（ｔ、　（１，１ｌｉ１．４．７１＜ｓ 、　Ｇ、　３３Ｈ）、　４．５４（ｓ、　［１，６７Ｈ）、　４．３４（＋、　 ０．６０１）、　４．１２　ｉ、　０．３３［１）、　３．　［１２−３，４９ （ｗ、　２１１１．３．７６（＋、　３Ｈ）、　３．２９−３．０３（ｍ、　２ Ｈ）、　１．８Ｇ（１，０１）　：ｉｊ量スヘクｈ　ル：ｍ／ｅ計算値（Ｍ＋旧 ＝２９９．観測値＝２９９（ｂ）Ｇｅｇ−Ｔｅｇダイマー（式（ｌｌ：ｎ＝１、 左がら右にＱ＝Ｂｏｃ、Ｒ１＝Ｈ，Ｂ＝６−０−ベンジル−２ＴＨＦ５ｍｌおよ び水２ｍｌ中式（ＩＸ）（７）化合物（０，０８１ｇ、０．１２ｍｍｏｌ、Ｒ１ ＝Ｒ３＝Ｈ，Ｒ２＝Ｂｏｃ、Ｒ４＝メチル、Ｂ＝６−０−ベンジル−２−Ｎ−Ｃ ベンジルオキシカルボニル）グアニン）の室温溶液に水酸化リチウム−水和物（ ０，ＯＯ８ｇ、　０．　２■ｏｌ）を加える。１時間後、反応を固体硫酸水素ナ トリウムで停止させ、酢酸エチル７５の１と塩水２５１に分配する。水相を酢酸 エチル５０１で逆抽出する。合わせたａ機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し 、後黄色粉末に濃縮する（０．　０８３　ｇ、Ｏ，ｌ　３＋ｎｍｏｌ）　＋１乾 燥ＤＭＦ１ｍｌ中得られた遊離酸（０，０８３ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）および式 ％式％ ３＝Ｒ２＝Ｈ，Ｒ４＝メチル、Ｂ＝Ｔ）の溶液にＨＯＢｔ／ＨＢＴ　（０゜４５ Ｍ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液を加える。１分間後、ＤＩＥＡ　（０，０６３ｍ １．０．　３６ａｖｏｌ）を一度に加える。室温で１時間後に、混合液を酢酸エ チル１００１Ｉｌと塩水５０ｍ１に分配する。水層を更に酢酸エチル５０ｍ１で 逆抽出する。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。シ リカゲル（メタノール、′塩化メチレン、勾配溶出）ラジアルクロマトグラフィ ーにより標題化合物を得る（０．　０６５　ｇ、　６０％）。質量スペクトルＩ Ｉ／ｃ計算値（Ｍ＋１・９１４．観測値・９１４トリフルオロ酢酸（０、５ｍｌ ）および塩化メチレン（１，０ｚｌ）の溶液に窒素雰囲気下で十分に保護された グアニン−チミンダイマー（０，０４４ｇ、　０．　０４８ｍｍｏｌ）を加える 。室温で０．５時間後、揮発性物質を真空下で除去する。高真空下で約１６時間 後、得られた粉末をアニソール（０，０２０ｍ１）に溶解し、フン化水素（約５ ｍ１）を加える。水浴で１時間後、揮発性物質を減圧下で除去し、残渣をトリフ ルオロ酢酸（約５１）に溶解し、しかる後濃縮する。残渣を水（５１）およびア セトニトリル（５ｍｌ）に溶解し、凍結乾燥し、白色粉末としてグアニン−チミ ンダイマーメチルエステルを得る（０．　０２８　ｇ、定量的）。質量スペクト ルｍｌｒ計算値（Ｍ＋Ｈ）　＝５９０．観測値＝５９０＝Ｅｏｃ、Ｒ’＝Ｈ，Ｂ ＝４−Ｎ−ベンジルオキシカル無水ＤＭＦ０．５ｍｌ中Ｃｅｇモノ’？−（０， ０３０ｇ。

０．０６０＋ｕ＋ａｌ）の溶液にＨＢＴＵおよびＨＯＢｔ（ＤＭＦ中０．４５Ｍ 溶液０．１３３ｉ１、各々０．６０ｍｍｏｌ）、しかる後ＤＩＥＡ　（０，０１ ７ｍ１．０．１０＋ａｍｏｌ）を加える。１５分間攪拌後、混合液を無水ＤＭＦ １ｍｌ中式％式％ １００　ｍｍｏｌ）の溶液にシリンジで移し、２５分間プレミックスする。反応 はＨＰＬＣにより追跡し、６０分間後に終了と判断した。混合液を濃縮し、残渣 をクロロホルム１５ｏ１に溶解し、０，３Ｎ塩酸、希炭酸水素ナトリウムおよび 飽和塩水で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。シ リカゲル（プレート３枚、２０　Ｘ　２０　ｃｍ、　２０００　ミクｏ　ン厚、 溶出液として１１％メタノール−クロロホルム）プレパラティブ薄層クロマトグ ラフィーにより標題化合物を得る（０．０１９ｇ、４９％）。　）ｌ　ＮＭＲ（ ３ｆｌＯＭＨｘ、　ＣＤＣｌ３　）回転異性体が観察される：主要回転異性体ニ ア、６（ｂ＋シグナル、ＩＨＩ、７５５（ｂ＋シグナル、　Ｈ）、　７．３５　 （ｍ、　５旧、７．２（ｂ＋　シグナル、ｌ１ｌ）、７、１５（＋、　ＩＨ）、 　５．７０（ｂ＋　シグナル、　ＩＨｌ、　５．１５（＋、　２８）、　４．７ （１，２Ｍ＋、　４．６（＋、　２Ｈ１，４，０５（Ｉ、　４Ｈ）、　３．７５ （ｓ、　３ｔｌ）、　３．７−３．　Ｉｓ（ｍ、　８Ｈ）、　１．７５（＋、　 ３ｔｌ）、　１．３５［＋、　９Ｈ］例１０ Ａｅｇ−Ｔｅｇダイマー（式（１）：ｎ＝１、左から右にＱボニルアデニン、Ｒ ３＝Ｈ，Ｒ１＝ＨＳＢ＝チミン、Ｒ無水ＤＭＦ１ｍｌ中Ａｅ　ｇモ／ｖ　−（０ ，０１２ｇ、　０゜０２３　ｍｍｏｌ）の溶液にＨＢＴＵおよびＨＯＢｔ　（Ｄ ＭＦ中０．４５Ｍ溶液０．０５０ｍ１、各’ｒ　０．０２３ｍ１ｏｌ）、しかる 後Ｄ　Ｉ　ＥＡ　（０，０１５Ｉ！ｌＳ０．０８６Ｉａｌ）を加える。３分間攪 拌後、混合液をＤＭＦｏ、８ｍｌ中式（Ｖ）の化合物（Ｒ１＝Ｒ３＝Ｒ２＝Ｈ， Ｒ４＝メチル、Ｂ＝Ｔ、０．００９ｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（ ０，０１５ｍ１．０．０８６■ｏｌ）の溶液にシリンジで移し、１０分間プレミ ックスする。反応はＨＰＬＣにより追跡し、３０分間後に終了と判断した。混合 液を濃縮し、残渣をクロロホルムに溶解し、席次酸水素ナトリウムおよび飽和塩 水で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮する。シリカゲ ル（プレート２枚、２０　Ｘ　２０　ｃｍ、２０００ミクロン厚、溶出液として １５％メタノール−クロロホルム）プレパラティブＴＬＣクロマトグラフィーに より標題化合物を得る（０．００８ｇ、４４％）。　ＨＮＭＲ（３００ＭＩｌｔ 、　ＭｅＯｔｌ−ｄ４）　：　４種の回転異性体が観察される　主要回転異性体 ：　８．５６　（＋、　ｌ１ｌ）、　８、１９（＋、　１ｉｔ）、　７．５−７ ．３　ｆｍ、　５ＨＬ　７．０８（ｄ、　Ｉ＝１．２１＋＋、　ＩＨＬ　５．４ ２（＋。

２Ｈ）、　５．　ＬＯ（ｓ、　２Ｍ）、　４．５５　（＋、　２Ｈ］、　４．１ ２　（ｓ、　４Ｈ）、　３．７２（ｓ、　３１１１．３゜７−３．２　ｆｍ、　 ８８１．１．６　（Ｉ、　３Ｈ）、　１．４（ｓ、９１１１ＤＭＦで前洗浄され たＭ　Ｂ　ＨＡ樹脂（９１，ＯＯｇ。

０、　２５ｍｅｑ／ｇ、Ｐｅｐｊｉｄ＋＋　１ｎｌｃ＋ｎ５ｌｉｏｏａｌ）にＨ ＢＴＵ／ＨＯＢｔ　ＤＭＦ溶液２．２２ｍ１（ＨＢＴＵおよびＨＯＢｔ双方中９ ０．４５Ｍ、カップリング溶液と称される）およびＤ　Ｉ　ＥＡ　（０，３ｍ１ ）中ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎｅ−２−クロロベンジルオキシカルボニル −し−リジン（０，４１６ｇ、１．００ｍｍｏｌ）を加える。混合液を室温で約 ６時間穏やかに振盪する。反応溶液を濾去し、樹脂をＤ　Ｍ　Ｆで洗浄する。樹 脂に無水酢酸、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ溶液（０，４１０，７／１．５比、キャッピン グ溶液と称される）２ｍ１を加える。これを０．５時間穏やかに振盪する。樹脂 をＤＭＦおよび塩化メチレンで洗浄し、しかる後１／１トリフルオロ酢酸／塩化 メチレン溶液（ｔｅｈ脱Ｂｏｃ溶液と称される）２１で処理する。反応溶液を濾 去し、樹脂を塩化メチレン中ＤＩＥＡの１５％溶液、塩化メチレンで洗浄し、真 空下で乾燥し、乾燥ＣＩＺ−１ｙｓ−ＭＢＨＡ樹脂１．１０１ｇを得る。

１０ｇモノマー（０，１９３ｍｇ、　０．　５０ｍｍｏｌ）にカップリング溶液 １．１１、ＤＭＦｌｍｌおよびＤＩＥＡｏ。

１５ｍ）を加え、この混合液を約３分間放置する。次いでこの溶液を上記樹脂（ ０，５０ｇ、ＤＭＦで前洗浄）に加える。混合液を濾去し、樹脂をＤ　Ｍ　Ｆで 洗浄し、キャッピング溶液：ｌ’＋ｌで約３０分間処理する。反応溶液を濾去し 、樹脂をＤＭＦおよび塩化メチレンで洗浄する。次いで樹脂を税Ｂｏｃ溶液２巾 １で約３０分間処理し、塩化メチレン中１５％ＤＩＥＡ、塩化メチレンおよびＤ 　Ｍ　Ｆで洗浄する。このカップリング−キャッピング−脱Ｂ。

Ｃサイクルを合計６回繰返す。最終脱Ｂｏｃステップ後、樹脂を塩化メチレンで 洗浄し、真空下で乾燥し、樹脂６７４１１ｇを得る。この樹脂の一部（５０ｍｇ ）をアニソール（約０．　５ｍ１）存在下で約５０分間フッ化水素酸（約５ｍ１ ）で処理する。フッ化水素酸を真空下で除去し、残渣ヲトルフルオロ酢酸に溶解 し、濾過する。トルフルオロ酢酸溶液を濃縮し、残渣を逆相ＨＰＬＣ（アセトニ トリル／水勾配）により精製し、白色固体物として標題化合物を得る（　１２　 ｍｇ、収率５５％）。質量スペクトルｍ／ｅ（電子スプレー）計算値（Ｍ＋Ｈ） ＝１７４３．観測値＝１７４３Ｂ＝チミン、Ｊ＝ＮＨ２の式（１））の化合物に よるポリｒ製した＝３ＨポリｒＡ（５μＣｉ、９４０　ｐｍａｌヌクレオチド） および１００ｐｍｏｌＴ２ｓ−３０（２５００〜３０００ｐｍａｔヌクレオチド ）５０１を７０’Ｃで５分間反応液４８０μ＋中緩衝液Ａ　（ｐＨ７，５の４０ ｍＭトリスＨＣＩ、５０ｍＭＮａＣ１，８１１１１ＮａＣ１，８ａＭＭｇＣ１２ ｍＭス２′１ ベルミジン）中でインキュベートし、約１時間かけて室温までゆっくりと冷却し てから、１５℃で１５分間おく。

上記溶液に式（１）の化合物（ｎ＝５、Ｑ＝Ｈ，すべてのＲ１＝Ｒ３＝Ｈ１すべ てのＢ＝チミン、Ｊ＝ＮＨ２，１０００ｐｍｏｌＯＤＮ、６０００ｐｍｏｌヌク レオチド）１０μｌを加え、様々な時間（０，５，１０，１５，２０゜３０．４ ０．５０．６０分間目）に４０μｌを取出し、Ｈｅ１ａ細胞核抽出物（Ｂｒ＋ｈ ｅ＋ｄ＋　Ｒｃｓｅｘ＋ｃｈ　Ｌ！ｂｏ＋ｘｔｏ＋ｉｅ−）１μｌをヒトＲＮア ーゼＨ源として加える。反応液を１５℃で５分間インキュベートし、１μｇ／ｍ １ｔＲＮＡ５０μｌおよび２Ｍ　ＨＣｌ１０．２Ｍピロリン酸ナトリウム１００ μｍの添加により終結させる。溶液を氷上に約１０分間おき、１２，０００ｘｇ 、４℃で１０分間遠心する。上澄を除去し、３Ｈの量をンンチレーションカ上澄 中における３Ｈの最大量を調べるために上記のよった（放出された最大３Ｈを調 べるためのもう１つの方法は、Ｔ　およびＰＮＡ双方の不存在下で反応を行う（ Ｉｂｌ 試験化合物によるＲＮＡ結合ポテンシャルの分析上澄カウント ボ’Ｊ　丁Ａ−ｄＴ　［２５−３０１複合体形成の試験化合物阻害口　同時　口 　ｒＡ−ｄＴ二本鎖形成後フロントページの続き （８１）指定回　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＰＴ、ＳＥ） 、０Ａ（ＢＰ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、　ＣＩ、　ＣＭ、　ＧＡ、　ＧＮ、　ＭＬ、 　ＭＲ，ＳＮ、　ＴＤ。

ＴＧ）、　ＡＴ、　ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ、　ＣＨ。

Ｃ３，ＤＥ、ＤＫ、ＥＳ、ＦＩ、ＧＢ、ＨＵ、ＪＰ、ＫＰ、ＫＲ，ＬＫ、ＬＵ、 ＭＧ、ＭＮ、ＭＷ、ＮＬ、Ｎ。

、ＮＺ、ＰＬ、ＰＴ、Ｒ○、　ＲＵ、　ＳＤ、　ＳＥ、　ＵＡ。

（７２）発明者　リッカ、ダニエル　ジェー。

アメリカ合衆国ノースカロライナ州、ルーズモント、キッガー、ロード、５８５ ５

Claims (24)

【特許請求の範囲】
1. １． 少くとも一つのペプチド精合を有する主鎖に結合された、少くとも一つの プリンヌクレオシド塩基を含んでなる、ヌクレオシド塩基オリゴマー。
2. ２．少くとも一つのプリンヌクレオシド塩基がアデニンまたはその同等物である 、請求項１に記載のヌクレオシド塩基オリゴマー。
3. ３．少くとも一つのプリンヌクレオシド塩基がグアニンまたはその同等物である 、請求項１に記載のヌクレオシド塩基オリゴマー。
4. ４．オリゴマーが少くとも一つのピリミジンヌクレオシド塩基を更に含んでなる 、請求項１に記載のヌクレオシド塩基オリゴマー。
5. ５．少くとも一つのピリミジン塩基がチミンまたはその同等物である、請求項４ に記載のヌクレオシド塩基オリゴマー。
6. ６．少くとも一つのピリミジンヌクレオシド塩基がシトシンまたはその同等物で ある、請求項４に記載のヌクレオシド塩基オリゴマー。
7. ７．オリゴマーが少くとも５つのヌクレオシド塩基またはその同等物を含んでな る、請求項１に記載のヌクレオシド塩基オリゴマー。
8. ８．オリゴマーがアデニン、グアニン、チミン、シトシンまたはそれらの同等物 からなる群より選択される少くとも３種の異なるヌクレオシド塩基を含んでなる 、請求項７に記載のヌクレオシド塩基オリゴマー。
9. ９．請求項１のヌクレオシド塩基オリゴマーを遺伝物質に投与することを含んで なる、遺伝物質に影響を与える方法。
10. １０．方法が病気の治療方法である、請求項９に記載の方法。
11. １１．方法が病気または症状の診断方法である、請求項９に記載の方法。
12. １２．方法が該物質の認識方法である、請求項９に記載の方法。
13. １３．下記式（Ｉ）のヌクレオシド塩基オリゴマー：▲数式、化学式、表等があ ります▼（Ｉ）〔上記式中 ＱはＮ末端封鎖基であり； ＪはＣ末端封鎖基であるか なって単結合であり； ｎは少くとも１であり； 、またはＱおよびＪは一緒に Ｒ１は独立して水素、ベンジル、−ＣＨ２−ｐ−Ｃ６Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２−イン ドール−３−イル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、−ＣＨ２−イミダゾール−４−イル、ＣＨ２ＣＯＯ、− ＣＨ２ＣＯＯ（Ｃ１−４アルキル）、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ ＯＯ（Ｃ１−４アルキル）、ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、− ＣＨ２ＳＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ２−８アルケニ ル、Ｃ２−８アルキニル、Ｃ５−８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール 、あるいはハロゲン、ニトロ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、トリフ ルオロメチルまたはジ（Ｃ１−４アルキル）置換アミノで独立してー、二または 三置換されたアリールまたはヘテロアリールであり； Ｒ３は独立して水素、ベンジル、−ＣＨ２−Ｐ−Ｃ６Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２−イン ドール−３−イル、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ ＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、−ＣＨ２イミダゾール−４−イル、ＣＨ２ＣＯＯＨ、−Ｃ Ｈ２ＣＯＯ（Ｃ１−４アルキル）、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ Ｏ（Ｃ１−４アルキル）、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、− ＣＨ２ＳＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ２−８アルケニ ル、Ｃ２−８アルキニル、Ｃ５−８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール 、あるいはハロゲン、ニトロ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、トリフ ルオロメチルまたはジ（Ｃ１−４アルキル）置換アミノで独立してー、二または 三置換されたアリールまたはヘテロアリールであり； Ｂは独立してプリンまたはピリミジンヌクレオシド塩基であるが、但し少くとも 一つのＢはプリンヌクレオシド塩基である〕 またはその酸もしくは塩基付加塩。
14. １４．少くとも一つのＢがアデニンである、請求項１３に記載のヌクレオシド塩 基オリゴマー。
15. １５．少くとも一つのＢがグアニンである、請求項１３に記載のヌクレオシド塩 基オリゴマー。
16. １６．少くとも一つのＢがチミンである、請求項１３に記載のヌクレオシド塩基 オリゴマー。
17. １７．少くとも一つのＢがシトシンである、請求項１３に記載のヌクレオシド塩 基オリゴマー。
18. １８．ｎが少くとも約５である、請求項１３に記載のヌクレオシド塩基オリゴマ ー。
19. １９．下記式（Ｘ）のヌクレオシドモノマー：▲数式、化学式、表等があります ▼（Ｘ）〔上記式中 Ｒ１は水素、ベンジル、−ＣＨ２−Ｐ−Ｃ６Ｈ４ＯＨ、ＣＨ２−インドール−３ −イル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｎ Ｈ）ＮＨ２、−ＣＨ２−イミダゾール−４−イル、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ ＣＯＯ（Ｃ１−４アルキル）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ （Ｃ１−４アルキル）、−ＣＨＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ ２ＳＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ２−８アルケニル、 Ｃ２−８アルキニル、Ｃ５−８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、あ るいはハロゲン、ニトロ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、トリフルオ ロメチルまたはジ（Ｃ１−４アルキル）置換アミノで独立してー、二または三置 換されたアリールまたはヘテロアリールであり； Ｒ２はアミノ保護基であり； Ｒ３は水素、ベンジル、−ＣＨ２−Ｐ−Ｃ６Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２−インドール− ３−イル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（ ＮＨ）ＮＨ２、−ＣＨ２−イミダゾール−４−イル、−ＣＨ２ＣＣＯＨ、−ＣＨ ２ＣＯＯ（Ｃ１−４アルキル）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ Ｏ（Ｃ１−４アルキル）、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−Ｃ Ｈ２ＳＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ２−８アルケニル 、Ｃ２−８アルキニル、Ｃ５−８シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、 あるいはハロゲン、ニトロ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、トリフル オロメチルで独立してー、二または三置換されたアリールまたはヘテロアリール であり；Ｒ４は水素またはカルボン酸保護基であり；Ｂはプリンまたはピリミジ ンヌクレオシド塩基であるが、但しＲ１およびＲ３が水素である場合、Ｂはプリ ンヌクレオシド塩基である〕 またはその酸もしくは塩基付加塩。
20. ２０．Ｂがプリンヌクレオシド塩基である、請求項１９に記載のモノマー。
21. ２１．請求項１３〜１８のいずれか一項記載の化合物を遺伝物質に投与すること を含んでなる、遺伝物質に影響を与える方法。
22. ２２．請求項１〜８または請求項１３〜１８のいずれか一項記載の化合物を、そ のための薬学上許容されるキャリアと共に含んでなる医薬処方物。
23. ２３．薬剤用としての請求項１〜８または請求項１３〜１８のいずれか一項記載 の化合物。
24. ２４．遺伝物質に影響を与えることにより改善される症状の治療のための薬剤の 製造に用いられる請求項１〜８または請求項１３〜１８のいずれか一項記載の化 合物。