JP2001518054A

JP2001518054A - Ｐｎａ−ｄｎａキメラと、このキメラ合成用のｐｎａシントン

Info

Publication number: JP2001518054A
Application number: JP50078097A
Authority: JP
Inventors: ギルディア，ブライアン，ディー．; コール，ジェイムス，エム．
Original assignee: パーセプティブバイオシステムズ，インコーポレーテッド
Priority date: 1995-06-07
Filing date: 1996-05-29
Publication date: 2001-10-09
Also published as: WO1996040709A1; DE69632324D1; DE69632324T2; EP0840741B1; EP0840741A1; US6265559B1; US6063569A

Abstract

(57)【要約】ＤＮＡ合成用試薬および機器に合った新規なＰＮＡシントンの製造方法。本発明のＰＮＡシントンは各種オリゴマー、特にＰＮＡ−ＤＮＡキメラを調製する上で好適である。このＰＮＡシントンはオルソゴナルな保護方法で保護されるように構成され、緩やかな条件下で保護基の除去が行える。一般に、酸に対して不安定な保護が施された主鎖を核酸塩基側鎖部分に連結させてＰＮＡシントンを作る。さらに、酸に対して不安定な保護が施された主鎖の合成方法と、対象となる新規組成とが開示される。

Description

【発明の詳細な説明】ＰＮＡ−ＤＮＡキメラと、このキメラ合成用のＰＮＡシントン発明の背景１．発明の分野本発明はペプチド核酸(Peptide Nucleic Acid:PNA)合成に関するものであり、特に、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの合成および保護基解除に適したＰＮＡシントン(s ynthons)に関するものである。２．背景となる特許に関する説明ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、ＤＮＡ発現の配列特異的な制御と遺伝子をターゲットとする医薬の調製における有望な候補となる合成ポリアミドである（欧州特許出願第EP92/01219号および92/01220号を参照。これらの内容は参考として本明細書の一部を成す）。ＰＮＡはペプチドに似た主鎖を有し、この主鎖にＤＮＡの核酸塩基が結合したバイオポリマーハイブリッドである。特に、ＰＮＡはアミノ酸のN-(2-アミノエチル)-グリシンの繰り返し単位に核酸塩基のアデニン、シトシン、グアニン、チミンおよびウレシルがメチレンカルボニル基を介して結合した合成ポリアミドである。これら以外の天然または非天然の核酸塩基、例えばプソイドイソシトシン、5-メチルシトシン、プソイドウラシル、イソシトシン、ヒポキサンチンおよび2,6-ジアミノプリン、その他無数の核酸塩基もＰＮＡシントンに組み込むことができる（図８参照）。現在、ＰＮＡはt-Boc/ベンジル保護方法を用いて保護されたモノマー（ＰＮＡシントン）からルーチンワークで合成されている。これは伸長中のポリマーの主鎖を構成するアミノ基をt-ブチロキシカルボニル(t-Boc)基で保護し、核酸塩基の環外アミノ基が存在する場合にはこれをベンジルオキシカルボニル（ベンジル）基で保護する方法である。t-Boc/ベンジル保護方法によって保護されたＰＮＡシントンは現在市販されているが、上記の保護基を外すには非常に厳しい酸性条件が要求されるため使い易いものではない。 t-Boc/ベンジル保護方法では側鎖の核酸塩基を保護しているベンジル基を外すために非常に強い酸を必要とし、通常はＰＮＡオリゴマーをフッ化水素酸またはトリフルオロメタン硫酸に一定時間、大低は１時間以上曝して側鎖を保護しているベンジル基を除去する。最後の保護解除のためのこの過酷な酸処理によってしばしば酸に弱い部分、特に核酸と核酸オリゴマーに結合している可能性のある炭水化物が分解していまう。さらに、フッ化水素酸やトリフルオロメタンスルホン酸等の有害な酸を使用するため、作業者の安全上の問題とオートメーション機器・ラインの腐食問題の点から、この方法を商業的に使用することはできない。また、強酸性の保護解除条件によって少なくとも部分的に核酸が分解されるため上記のような厳しい酸性条件は核酸合成には適していない。さらに、t-Boc/ベンジル保護方法はオルソゴナルでなくディファレンシャルな方法である。ディファレンシャルな方法とは各保護基はほぼ同じ種類の試薬または条件で除去されが、それぞれの基は相対的に異なる反応速度で除去されるような基の保護システムと定義される。例えば、t-Boc/ベンジル保護方法では各保護基とも酸に対して不安定であるが、効果的な除去をするにはベンジル基の方がより強い酸を必要とする。酸に対して不安定なt-Boc保護基を酸を用いて完全に除去した時には、それと同時にベンジル基が一定割合で除去される危険性がある。特に、t-Boc保護基は合成サイクルの初期において主鎖のアミノ基から外す必要がある。それによって次のモノマーが主鎖のフリーのアミノ部位に結合してポリマー鎖が伸長できるようになる。t-Bocによってアミノ基が保護された主鎖の保護を解除するにはトリフルオロ酢酸等の強酸を用いる必要がある。この保護解除と、それに続くＰＮＡオリゴマー構築では、核酸塩基側鎖の保護基すなわちベンジル基が除去されることは好ましくない。しかし、トリフルオロ酢酸は強過ぎるため、側鎖のベンジル基の一部を保護解除されてしまい、それによってポリマーが分岐し、所望生成物の全収率を低下させることになる。一方、オルソゴナルな方法では、各保護基を互いに排他的な条件で除去する。例えば、一つの保護基は酸で除去し、別の保護基は塩基で除去する。ブレイポール(Breipohl)達は、9-フルオレニルメチルオキシカルボニル(Fmoc)を主鎖の保護基として使用し、トリフェニルメチル（トリチル）基を側鎖の核酸塩基の保護基として使用するオルソゴナルな方法で保護されたＰＮＡシントンについて報告している(Breipohl達、1st AustralianPeptide ConferenCe，Great Barrier R eef，Australia ，October 16-21，1994)。しかし、この方法は標準的な核酸合成方法には適していない。クリステンセン(Christensen)達は、強酸を用いてL-Bocアミノ主鎖保護基を除去し、続いて9-フルオレニルメチルオキシカルボニル(Fmoc)すなわち塩基に対して不安定な保護基を用いて再び保護するというオルソゴナルなな方法で保護されたＰＮＡシントンを報告している(Christensen達、“Innovation and Perspecti ves in Solid Phase Synthesis and Complementary Technologies-Biological a nd Biomedical Applications，”3rd SPS Oxford Symposia 1994)。この保護方法では側鎖の核酸塩基の環外アミノ基が早く保護解除される可能性は無くなるが、このモノマーの調製に追加のステップが必要になる。さらに、側鎖保護基であるベンジルの除去には依然としてフッ化水素酸またはトリルフオロメタン硫酸等の強酸が必要である。現在、核酸（ＤＮＡおよびＲＮＡ）は自動化された機械と多数の合成担体および各種保護化学反応とを用いてルーチンワークで合成されている。以下の米国特許は広範囲の各種担体と保護化学反応とをカバーしており、参考として本明細書の一部を成す。米国特許第5,262,530号、第4,415,732号、第4,458,066号、第4,7 25,677号(RE 34,069)および第4,923,901号。自動機器および試薬は、パーセプティブバイオシステムズ社(PerSeptive Bios ystems)、パーキンエルマー社(Perkin Elmer,Applied Biosystems Division)、ファルマシア社（Pharmacia）から市販されている。スミス(Smith)達、Nucleic Acids Res.(1985)13:2399と、スプロート(Sproat)達、Nucleic AcidsRes.(1987) 15:6181は特殊な５'-アミノシントンを報告している。スプロート(Sproat)達は、Nucleic Acids Res．(1987)15:4837で特殊な５ '-チオシントンを報告している。上記参考文献に記載の試薬は標準的なＤＮＡ合成機器での使用に適している。商業的に好ましい核酸合成方法では、米国特許第4,725,677号(RE 34,069)に記載のような上記試薬および方法が用いられる。従って、好ましいシントンは主鎖の５’水酸基には酸に対して不安定な保護基を有し、核酸塩基の環外アミノ基に塩基に対して不安定なアシル型の保護基を有するβ−シアノエチルホスホラミダイト(phosphoramidites)である。酸に対して不安定な好ましい主鎖の保護基は4,4'-ジメトキシトリフェニルメチル（ＤＭＴ）である。このＤＭＴは通常、各合成サイクルで１〜４％のジクロロ酢酸またはトリクロロ酢酸を含むジクロロメタン溶液を用いてかなり迅速に（１〜３分で）除去できるという理由で選択される。しかし、ＤＭＴよりも酸に対するより不安定な保護基は、酸触媒を用いたカップリング反応（テトラゾールが一般的な酸性種）時に時期尚早に保護解除される恐れがある。ＤＭＴよりも酸に対する不安定性が低い保護基では、完全に除去するにはより長い反応時間および／またはより厳しい反応条件が必要になる。一般に、核酸塩基であるプリンは特に酸によって分解し易いため、より厳しい酸性保護解除条件は用いられない。上記の保護基および合成条件に伴う問題は個々の合成サイクルでは最小であっても、累積効果によってオリゴヌクレオチド合成全体ではかなりの不純物が生じる危険性があり、オリゴヌクレオチドが長くなるにつれてその純度が低下する傾向にある。一般には塩基に対して不安定な保護基を用いて核酸塩基の環外アミノ基を保護して、オルソゴナルな方法で保護された核酸シントンを得ている。塩基に対して不安定な保護基は通常伸長中の核酸鎖の一部として残り、それらは合成された核酸が合成担体から解離する時に同時に除去される。この『保護解除および解離ステップ』には濃縮した水酸化アンモニウム溶液が利用されることが多い。ケスター達は塩基に対して不安定なアシル型保護基を用いているが、核酸塩基の保護基を完全に除去するには通常高温（約55℃）で６〜24時間処理する必要がある。同じ条件でより短時間（約15〜60分）に除去可能な他の保護基も開発されている。これらの改良された保護基の例としてはフェノキシアセチル、t-ブチルフェノキシアセチルおよびアミンジン型の保護基がある。これらの保護基は塩基に対する不安定性が高く、通常は除去に要する時間のみが短縮される。上記説明から分かるように、各種の核酸オリゴマー構築に適したＰＮＡシントンは現在のＤＮＡ合成法に合ったもので、既存の技術と機器が使用できるものでなければならない。特に、主鎖の保護のために酸に対して適度な不安定性を有する保護基を組み込み、核酸塩基保護のために塩基に対して適度な不安定性を有する保護基を組み込んだ構成のＰＮＡシントンにする必要がある。このような条件を満たすＰＮＡシントンを合成することができれば、種々の核酸の組み合わせをルーチンワークで合成でき、結果的にはこうした複雑な分子に関する科学的研究が進むことになる。ＰＮＡシントン合成における現在の別の制約は側鎖の核酸塩基の保護基をいかに形成するかにある。一般に、核酸塩基、例えばシトシン、アデニンおよびグアニンの環外アミノ基は活性化されたカーボネートまたはクロロホルメートとの反応を介してカーバメートとして保護される。カーバメートを生成するこの方法には欠点がある。すなわち、多くのクロロホルメートは不安定であり、また、求核性がそれ程強くない核酸塩基の環外アミノ基に対してクロロホルメートの反応性は余り良くない。核酸塩基に対して使用される他のカーバメート生成方法にはアシル化剤としてイミダゾライドおよびアルキルイミダゾリウム塩を使用するものが含まれる（Watk ins達、J．Orgl Chem.，(1982)47;4471-77と、Watkins達、J．Am．Chem．Soc.， 1982，104:5702-08参照）。イミダゾライドおよびアルキル化イミダゾライドはカーバメート生成に関するいくつかの問題点を克服するように思えるが、核酸塩基に対してそれらが広く使用されているという報告は聞かない。最近、ＰＮＡシントンの側鎖核酸塩基の環外アミノ基を保護するための保護基として4-メトキシ -トリフェニルメチル(ＭＭＴ)基が提案された(Breipohl達、1st Australian Pep tide Conference，Great Barrier Reef，Australia，October 16-21，1994)。しかし、ＭＭＴ基はカーバメート保護基ではない。上記の問題に加えて、選択的に保護されたグアニンＰＮＡシントンの合成はわかりにくいものである。報告されているグアニンＰＮＡシントンはＯ−６−ベンジルエーテルとして保護されているが、環外2-アミノ基のベンジルも保護する（欧州特許出願第92/01219号および国際特許出願PCT/US92/10921号参照）。Ｃ６カルボニル基（エノール型）の相対的反応性と、より反応性の高い環外2-アミノ基のことを考えると、ＰＮＡ合成の際にＣ６カルボニル基を保護しなければならない理由は存在せず、より反応性の高い2-アミノ基を保護する方が好ましい。ヘテロサイクルの環外2-アミノ基に選択的なベンジル保護（あるいはその他のカーバメート保護）を有するグアニジンＰＮＡシントンを合成する方法は知られていない。ＤＮＡ合成では核酸塩基であるシトシン、アデニンおよびグアニンの環外アミノ基を保護するためにベンジルオキシカルボニル基が使用されている（Watkins 達、J．Org．Chem.，(1982)47:4471-77と、Watkins達、J．Am．Chem．Soc.，(19 82)104:5702-08参照）。しかし、グアニンシントンの調製は困難であった。その理由はグアニンの環外2-アミノ基がベンジル基を導入するためにルーチンで使用される試薬、例えばベンジルクロロホルメート、ベンジルオキシカルボニルイミダゾライドおよびN-アルキル化ベンジルオキシカルボニルイミダゾール等に対して反応性がないためである。その結果、フェニルクロロチオホルメートを用いた処理によってＣ６カルボニル基と環外2-アミノ基とを両方同時に保護する従来とは異なるマルチステップ法が報告された。その後、付加生成物をカーバメート保護されたグアニン化合物へ変換し、つづいてＣ６カルボニル保護基を除去する。しかし、この間接的方法は、元の付加生成物からカーバメート保護基を生成し、その後にＣ６カルボニル基を保護解除しなければならず、面倒である。適切に保護された2-アミノ-6-クロロプリンの誘導体は6-クロロ基を求核性酸素で置換することによってグアニン化合物に変換することができる（Robins達、 J．Am．Chem．Soc．(1965) 87:4934、Reese達、Nucl．Acids Res.，(1981)9:4611およびHodge達、J．Org．C hem.，(1990)56:1553参照）。実際、報告されているグアニンＰＮＡシントンの製造法で用いられている出発材料は適切に保護された2-アミノ-6-クロロプリンである（欧州特許出願第92/01219号および国際特許出願PCT/US/92/10912号参照）。ＰＮＡの発明者達は環外2-アミノ基が保護されておらず、Ｃ６カルボニル基がベンジルエーテルとして保護されているグアニンシントンを報告している（欧州特許出願第92/01219号参照）。しかし、より反応性の高い2-アミノ基が他のＰＮＡモノマーの活性化されたカルボン酸基（少なくとも末端において）と反応して合成ポリマーに分岐を生じさせる可能性があり、反対に、Ｃ６カルボニル基を保護しなかった場合に存在するエノールは、ポリマーに分岐を生じさせるほどの反応性を持たず、従って保護の必要はないので、この保護方法は驚くべきものである。結果的に、グアニンの環外2-アミノ基を保護することが不可能なため、発明者達は他のＰＮＡシントンについて彼らが採用したt-Boc/benzyl保護法と矛盾する方法を選択している。さらに最近の特許出願では、グアニンＰＮＡシントンは環外2-アミノ基のベンジル保護と、ベンジルエーテルとして保護されたＣ６カルボニル基との両方を有している（国際特許出願第PCT/US 92/10921号参照）。既にに述べたように、敢えてグアニンＰＮＡシントンのＣ６カルボニル基を保護する合理性は存在しないが、Ｃ６カルボニル基を保護することによってグアニン複素環の環外2-アミノ基を選択的にイオン化することが可能になり、それによってイオン化した2-アミノ基と一般的なベンジル保護試薬（例えばベンジルオキシカルボニルイミダゾール）との反応が促進される。それでも、環外2-アミノ基の保護が核酸塩基のＣ６カルボニル基が保護されたグアニン誘導体で起こり、生成したシントンは環外2-アミノ基とＣ６カルボニル基との双方が保護されている。従って、環外2-アミノ基を選択的にカーバメート保護し且つＣ６カルボニルは保護されないグアニンＰＮＡシントンを、高収率で合成する都合の良い方法は報告されていない。固相ペプチド合成法はＰＮＡオリゴマーの合成に適用可能であるが、しばしば、ＤＮＡ合成、従ってＰＮＡ−ＤＮＡキメラ合成にとっても望ましくない過酷な反応条件の使用が要求される。上記のt-Boc/benzyl保護スキームでは大抵の場合、最後の側鎖保護解除と、固体担体からのＰＮＡ分子の開放とが無水フッ化水素酸(HF)(Sakakibara達、Bull．Chem．Soc．Jpn.，1965，38，4921)、ボロントリス（トリフルオロ酢酸)(Pless達、Herv．Chim．Acta，1973,46,1609)およびトリフルオロメタンスルホン酸やメタンスルホン酸等のスルホン酸（Yajima達、J．Che m.，Soc.，Chem．Comm.，1974，107）を用いて行れる。この従来の強酸（例えば無水ＨＦ）による保護解除法は非常に反応性の高いカルボカチオンを発生させ、このカルボカチオンがＰＮＡ鎖中の感受性残基のアルキル化またはアシル化を引き起こす可能性がある。このような副反応はアニソール、フェノール、ジメチルスルフィドおよびメルカプトエタノール等の捕捉剤を用いて部分的に防止できるに過ぎない。従って、スルフィドに補助された酸分解によるＳＮ２の保護解除方法(Tam達、 J．Am．Chem．Soc.，1983，105，6442と、J．Am．Chem．Soc.，1986，108，5242 )すなわち有害なカルボカチオンの前駆体を除去して不活性なスルホニウム塩を生成させるいわゆる『ロー』法が、ペプチドおよびＰＮＡ合成で単独または『ハイ』法と組み合わせてしばしば用いられる。それほど頻度は高くないが、特殊な場合に保護解除および／または最終的なＰＮＡ−固体担体結合の開裂に用いられる他の方法には、例えば塩基触媒を用いたアルコール分解（Barton達、J．Am．C hem．Soc.，1973，95，4501)、アンモニア分解、ヒドラジン分解（Bodanszky達、Chem．Ind.，1964，1423）、水素分解（Jones，Tetrahedron Lett.，1977,285 3およびSchlatter達、Tetrahedron Lett.，1977，2861）および光分解（Rich an d Gurwara，J．Am．Chem．Soc.，1975，97，1575）がある。固相ペプチド合成の合成サイクルにおいてはほとんどの操作が同一である（固相ＰＮＡの場合もそうである）という認識に基づいて、多数のペプチド製造を容易にするための新規なマトリクスＰＥＰＳが最近開発されている（Berg達、J．A m．Chem．Soc.，1989，111．8024および国際特許公表第WO90/02749号）。このマトリクスはポリエチレン（ＰＥ）フィルムとペンダントした長鎖のポリスチレン（ＰＳ）グラフトとで構成される（分子量は10⁶程度）。フィルムの負荷容量はビーズ状マトリクスと同程度であるが、ＰＥＰＳは多重合成を同時に起こすのに適したフレキシビリティを有している。多数のペプチドの同時合成用に提案されている別の２つの方法を多数の異なるＰＮＡ分子の製造に適合することもできる。その第１の方法（Geysen達、Proc． Natl．Acad．Sci．USA． 1984，81，3998）では伸長中のペプチド鎖を固定し、合成を区画に分けて行うために、アクリル酸をグラフトしたポリエチレンロッドと96-マイクロタイタのウェルとを使用する。この方法は非常に効果的であるが、マイクログラムスケールでしか使用できない。第２の方法では従来から用いられているポリマービーズを入れた『ティーバッグ』を用いる(Houghten，Proc.Natl．Acad.Sci．USA，1984 ，82，5131)。多重ペプチドまたはＰＮＡ合成に関するその他の提案には密度の異なる２種類の担体を同時に使用する方法(Tregear，Chemistry and Biology of Peptides，J．Meienhofer，ed.，Ann Arbor Sci.，Publ.，Ann Arbor，1972，p p.175-178)、マニホルドを介して反応容器を連結する方法(Gordman，Anal．Bioc hem.，1984，136，397)、多重カラム固相合成法（例、Krehnak達、J．Peptide P rotein Res.，1989，33，209、Holm & Meldal，Proceedings of the 20th Europ ean Peptide Symposium，G．Jung and E．Bayer，eds.，Walter de Gruyter & C o.，Berlin，1989，pp208-210）やセルロースペーパーの使用(Eichler達、Colle ct．Crzch．Chem．Commun.，1989，54，1746)がある。固相ＰＮＡ合成では架橋スチレン／ジビニルベンゼン共重合体マトリクスと、ＰＥＰＳ担体が好ましいとされている。適当な固体担体の非限定的な例としては次のものを挙げることができ、これらはＰＮＡ合成にも適している： (1)既知量のN-t-ブトキシカルボニル−β−アラニルN'-アクリロイルヘキサメチレンジアミンを含む、N,N'−ビスアクリロイルエチレンジアミンと架橋したジメチルアクリルアミド共重合体をベースにした粒子。通常はβアラニル基を介して数種類のスペーサー分子が付き、それにアミノ酸残基部分が続く。さらに、樹脂ビーズを製造するための重合中にβアラニルを含有するモノマーをアクリロイルサルコシンモノマーで置換できる。重合後、ビーズをエチレンジアミンと反応させて、共有結合した官能基として第１級アミンを含む樹脂の粒子を製造する。ポリアクリルアミドベースの担体は、ポリスチレンベースの担体に比べて相対的に親水性が高く、通常、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセタミド、N-メチルピロリドン等の極性非プロトン性溶媒と一緒に使用される（Atberton達、J ．Am．Chem．Soc.，1975，97，6584，Bioorg．Chem．1979，8，351と、J.C.S.Pe rkin I 538（1981）参照）。 (2)シリカ含有粒子、例えば多孔性ガラスビーズおよびシリカゲル等をベースとする第２の固体担体群。その１つの例としてはウォーターズアソシエイツ社(Wat ers Associates Fremingham，MA，USA)からポラシルＥ（PORASILE）登録商標）として市販のトリクロロ-[3-(4-クロロメチル)フェニル］プロピルシランと多孔性ガラスビーズとの反応生成物を挙げることができる(Parr & Grohmann，Angew ，Chem．Internal．Ed．1972，11，314参照)。同様に1,4-ジヒドロキシメチルベンゼンとシリカのモノエステル（ウォーターズアソシエイツよりバイオパック（ BIOPAK、登録商標）で市販）が有効であると報告されている（Bayer & Jung，Te trahedron Lett.，1970，4503参照）。 (3)３番目の首効な一般的固体担体は基本的に２成分すなわち樹脂と、使用する有機合成反応条件で実質的に不活性な他の１つの材料とからなる複合材とよぶことができる。この担体として好ましいものは米国特許第5,235,028号に記載されている(この特許は参考として本明細書の一部を成す)。その一例である複合材(Scott達、J．Chrom．Sci.，1971，9，577参照)は反応性のクロロメチル基を含む疎水性の架橋スチレンポリマーで被覆されたガラス粒子を用いたものでノースゲートラボラトリーズ(Northgate Laboratories，Inc .，Hamden，CT，USA)から供給されている。例として挙げられるもう１つの複合材はフッ素化エチレンポリマーのコアを有し、その上にポリスチレンがグラフトしたものである（Kent and Merrifield，Israel J．Chem．1978，17，243および van Rietschoten，Peptides 1974，Y．Wolman．Ed.，Wiley and Sons．New York ，1975，pp．113-116参照）(4)ＰＥＰＳ以外の連続固体担体。例えば綿シート（ Lebl and Eichler，Peptide Res．1989，２，232）やヒドロキシプロピルアクリレートで被覆したポリプロピレン膜(Daniels達、Tetrahedron Lett.，1989，434 5)。現在、ＰＮＡ合成では固相法が好ましいとされているが、その他の方法およびその組み合わせ、例えば、固相法との組み合わせも適当である： (1)ＰＮＡ化合物の大量生産を考えた場合には、逐次延長法またはセグメント／フラグメント縮合法のいずれかによる従来の溶液相のペプチド合成法が特に適している（例えば、Bodanszky，Principles of Peptide Synthesis，Springer Ver lag，Berlin-New York 1984）。 (2)直鎖ポリスチレン（Shemyakin達、Tetrahedron Lett.， 1966，2323）やポリエチレングリコール(ＰＥＧ)(Mutter and Bayer，Angew．Ch em．Int．Ed．Engl.，1974，13，88)等の可溶性ポリマー担体を用いるいわゆる『液相』法は有用である。 (3)多種多様な分子量の”多分散”ペプチドまたはＰＮＡ分子の混合物が得られるランダム重合（Odian，Principles of Polymerization，McGraw-Hill，New Yo rk(1970)参考）は抗ウィルス効果のスクリーニング等の目的に特に適している。 (4)ポリマー但持アミノ酸活性エステルを用いる方法(『逆Merrifield合成』または『ポリマー試薬合成』ともよばれる)(Fri-dkin達、J．Am．Chem．Soc.，1965 ，87，4646)では、中間生成物の単離・精製という利点が得られ、従って中間のサイズを有し且つ必要に応じて保護されたＰＮＡ分子を合成する上で特に適当な方法を提供する。このＰＮＡ分子はより大きなＰＮＡ分子を得るためのフラグメント縮合で使用できる。 (5)ＰＮＡ分子はプロテアーゼまたはその誘導体のような酵素によって新規特異性（例えば蛋白工学等の人工的な手段によって得られたもの）と組み合わせることができ、さらに多数のＰＮＡ断片を非常に大きなＰＮＡ分子へ縮合するための『ＰＮＡリガーゼ』の開発も考えられる。 (6)抗体は実質的に任意の対象分子にジェルネート(gernate)できるので、レルナー(Tramantano)達のグループ(Science，1986，234，1566)およびシュルツ(Polla ck)達のグループ(Science，1986，234，1570)によって同時に見出された最近開発された触媒抗体（アブザイム）もＰＮＡ分子構築のための有力な候補と見なされるべきである。アシルトランスファー反応を触媒するアブザイムの製造においては多大な成功を収めている（Shokat達、Nature，1989，338,269およびその中の参考文献参照）。最後に、スチュワートのグループによって開発されたばかりの完全に人工的な酵素(Haln達、Science，1990 248，1544)をＰＮＡ合成に合うように開発することもできる。天然に存在するペプチド構成アミノ酸（蛋白質を生成するアミノ酸）が20種類であるのに対してＰＮＡ分子は大抵の場合４種類の異なるアミノ酸（４種類の天然の核酸塩基それぞれに対して１つずつ）のみで構成されるので、一般に適用可能な特異的カップリング反応を仲介できる酵素、リガーゼおよび触媒抗体は『通常の』ペプチド合成よりもＰＮＡ合成でより容易に達成されるはずである。結論として、特定のＰＮＡ分子合成については単一の方法が完全に好適ということはなく、従って、時には複数の方法を組み合わせることによって最良の結果が得られる。発明の要約本発明の目的は、ＤＮＡ合成試薬および機器に適し、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの合成に適した便利で高収率な新規ＰＮＡシントン合成経路を提供することにある。本発明の別の目的は、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラを提供することにある。本発明のさらに別の目的は、ＰＮＡシントンの構築で使用される酸に対して不安定な保護基によって保護されたアミノ主鎖を得るための新規合成経路を提供することにある。本発明は、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの合成に適した新規ＰＮＡを便利且つ高収率で得る方法に関するものである。以下、本発明をＰＮＡ−ＤＮＡキメラを対象にして説明するが、ＰＮＡ−ＲＮＡキメラおよび他の組み合わせも本発明のＰＮＡシントンならびに方法を用いて同様に製造可能である。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラは少なくとも１つのＰＮＡ部分と少なくとも１つのＤＮＡ部分とで構成れるオリゴマーである。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの合成に適したＰＮＡシントンはＤＮＡ合成に適合したオルソゴナルな保護すなわち主鎖の反応基には酸に対して不安定な保護を与え、側鎖の核酸塩基の反応基には塩基に対して不安定な保護を与えるのが好ましい。さらに、ＰＮＡシントンはＤＮＡを分解させるような過酷な化学的条件の使用を避けるために、ＤＮＡ合成において用いられる保護基と類似の不安定性を有する保護基を有するのが好ましい。本明細書の一部では、ＰＮＡシントン合成で使用される酸に対して不安定な保護が施されたアミノ酸主鎖の合成を取り上げて新規合成経路を説明する。本発明の上記以外の特徴および利点は、以下の説明および図面と、請求項から明らかとなり、本発明を実施することによって理解されよう。本発明方法では下記一般式で表されるＰＮＡ−ＤＮＡキメラが合成される：ＫＬＱＭＮＫおよびＮは、化学結合、例えば共有結合を表し、Ｑはリンカーまたは化学結合を表し、ＬおよびＭの一方は下記式で表されるヌクレオチド部分である：Ｇで表される原子または基は第２級窒素原子、アルキル置換基を有する第３級窒素原子、酸素原子または硫黄原子である。Ｂで表される基は保護されまたは保護されていない天然または非天然の核酸塩基である。Ｄで表される原子または基は水素原子、水酸基、メトキシ基または保護基によって保護された水酸基である。ＬおよびＭのうちの一方は下記式で表されるＰＮＡ部分である：ＧおよびＢで表される基は上記定義のものを表す。Ｒ⁷で表される原子または基は水素原子または保護されまたはされていない天然のαアミノ酸の側鎖である。ｊ、ｇおよびｈは互いに独立に０または１〜５の整数を表し、それぞれ同一でも異なっていてもよい。上記ＰＮＡ−ＤＮＡキメラは通常は下記式で表されるヌクレオチド部分：と、下記式で表されるＰＮＡ部分とで構成される：〔ここで、Ｇ、Ｂ、Ｄ、Ｒ⁷、ｊ、ｇおよびｈは上記定義のものを表し、ＰｎおよびＰａで表される原子または基は水素原子または保護基で、ＰｎまたはＰａの一方は水素原子を表し。Ｒ⁶で表される基はオリゴマー合成終了後に除去可能な保護基であり、単位Ｌ¹は残基または化学結合であり、単位Ｌ²は水酸基、残基または化学結合であり、Ｒ⁶は下記式で表される基であるのが好ましい：（ここで、Ｖ₁〜Ｖ₃は互いに同一でも異なっていてもよく、それぞれ独立に水素、メチルまたはエチル基から選択されれ、Ｗで表される基は電子吸引基で、好ましい電子吸引基にはシアノ基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、フェニル基および置換フェニル基、例えばｐ−ニトロフェニル基、ｏ−ニトロフェニル基およびｐ−アルキルスルホニルフェニル基を含むが、これらに限定的されるものではない）〕単位Ｌ¹はハロゲン、ＣＮ、ＳＣＮまたは下記式で表される第２級アミノ基であるのが好ましい： −ＮＲ⁸Ｒ⁹ （ここで、Ｒ⁸およびＲ⁹は互いに同一でも異なっていてもよく、それぞれ独立に１〜10個の炭素原子を有する第１級、第２級または第３級アルキル基から選択されるか、一緒になって５〜７個の炭素原子を有するシクロアルキル基（ヘテロ原子として１〜２つの窒素原子、酸素原子または硫黄原子を含むことができる）を形成することもできる。単位Ｌ²は、残基の場合には、活性エステル、その他の残基、例えばイミダゾール、トリアゾール、テトラゾール、3-ニトロ-1,2,4-トリアゾール、チアゾール、ピロール、ベンゾトリアゾール、ベンゾヒドロキシトリアゾールにすることがでる。これらのシクロアルキル基はフェニルで置換されたイミジダゾール、フェニルで置換されたトリアゾール、フェニルで置換されたテトラゾール、フェニルで置換された3-ニトロ-1,2,4-トリアゾール、フェニルで置換されたチアゾール、フェニルで置換されたピロール、フェニルで置換されたベンゾトリアゾール、またはフェニルフェニルで置換されたベンゾヒドロキシトリアゾールを含む。Ｂで表される核酸塩基の例を図８に示す。好ましい核酸塩基には、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシル、プソイドイソシトシン、5-メチルシトシン、ヒポキサンチン、イソシトシン、プソイドウラシルおよび2,6-ジアミノプリンが含まれる。一般に、核酸塩基は環外アミノ基を有し、この環外アミノ基は核酸オリゴマー合成中に除去可能な保護基によって保護される（これら保護された核酸塩基はＢのサブセットで、独立にＢａで表される）。一般的なＤＮＡのオルソゴナルな合成方法では、環外アミノ基は塩基に対して不安定な保護基で保護される。塩基に対して不安定な保護基は下記式で表されるエトキシカルボニル基のような塩基に対して不安定なカーバメートを含むことができる：Ｗで表される基は電子吸引基である。Ｒ²〜Ｒ⁴で表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、互いに独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル，n-ブチルまたはt- ブチルから選択される。好ましい電子吸引基には（限定的でなく）シアノ基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、フェニル基および置換基を有するフェニル基、例えばｐ −ニトロフェニル基、ｏ−ニトロフェニル基およびｐ−アルキルスルホニルフェニル基が含まれる。大抵の場合、オリゴマー鎖の一端が固体担体に固定された状態で合成されるので、オリゴマー鎖中のヌクレオチドまたはＰＮＡ部分の数は所望のシーケンスが達成されるまで１つずつ延長される。主鎖保護基を有する次のヌクレオチドまたはＰＮＡ部分が、延長中の鎖に付加された１つ前の部分にカップリングされる。本発明方法では、オルソゴナル法で主鎖の保護基は酸に対して不安定な保護基であり、核酸塩基は塩基に対して不安定な保護基で保護される。従って、本発明の場合には、参照記号Ｋは一か所のみで反応が可能になるように主鎖保護基を備えた次のヌクレオチドまたはＰＮＡ部分に上記の核酸オリゴマーを連結する共有結合を表すことができる。キメラの合成はＱが共有結合かＰＮＡとヌクレオチド部分とを連結するためのリンカーかによって変わる。リンカーを使用する場合には、先ず最初にリンカーを末端のＰＮＡまたはヌクレオチド部分に連結し、その後、典型的なカップリングサイクルを行う。リンカーはより安定な連結を与えるために使用でき、また、キメラのハイブリダイゼーション特性を最適化するためのスペーサーを提供し、キメラに特殊な性質、例えば反転極性などを与えたり、単に利便性のために使用することができる。リンカーを使用するか否かに係わらず、キメラの組み立てには保護解除ステップの合成サイクルが含まれ、その後にカップリングステップが続く。ヌクレオチド部分が含まれる場合にはさらに、必要なステップとしてリン原子の酸化がサイクルに含まれる。さらに、ヌクレオチド部分をヘテロ原子に連結する場合には、生成する窒素−リン結合は酸に対して感受性であるので、窒素ヘテロ原子を避けるのが好ましい。リンカーは通常容易にアクセス可能な官能基と第２の保護された反応基とを有するので、一般に同じ合成サイクルが使用される。しかし、ＤＮＡおよびポリペプチド類似部分の操作方法は多数知られており、上記に概略を述べた合成サイクルに固執せずに、それら公知方法でオリゴマーに特定の反応基を導入するのが好ましい。一般に、Ｑが共有結合である場合には、合成サイクルでＬ¹またはＬ²が共有結合であるＰＮＡまたはヌクレオチド部分を与え、ＰａまたはＰｎ保護基を除去してヘテロ原子Ｇ上に水素原子を発生させ、上記で除去された保護基とは別のＰｎまたはＰａ保護基を有するＰＮＡまたはヌクレオチド部分を与え、この部分を、Ｌ¹またはＬ²が共有結合であるＰＮＡまたはヌクレオチド部分の保護解除されたヘテロ原子Ｇに連結させる。一方、Ｑがリンカーである場合には、合成サイクルでＬ¹またはＬ²が共有結合であるＰＮＡまたはヌクレオチド部分が与えら、ＰａまたはＰｎ保護基を除去してヘテロ原子Ｇ上に水素原子を発生させ、ヘテロ原子Ｇとの反応によって反応性ヘテロ原子を含むリンカーを発生させ、上記で除去した保護基とは別のＰｎまたはＰａ保護基を有するＰＮＡまたはヌクレオチド部分を与え、この部分をリンカーのヘテロ原子に連結する。通常、合成終了後に所望のオリゴマーが得られた時点で、全ての保護基を除去する。すなわち、ＰｎまたはＰａのいずれか水素でない方が除去され、核酸塩基の塩基に対して不安定な保護基が除去される。オリゴマーが固体担体を用いて合成された場合には、さらに固体担体からのオリゴマーの開裂（解離）が行われる。固相合成が好ましいので、本発明はさらに、担体に結合したＰＮＡ−ＤＮＡキメラに関するものである。本発明のＰＮＡ−ＤＮＡキメラは検出可能な部分を含むことができる。検出可能な部分の例としては、以下に限定されないが、酵素、抗原、放射性標識、親和性標識、蛍光標識、紫外線標識、赤外線およびスピン標識などがある。本発明の別の観点は下記の式で表されるＰＮＡシントンにある：ここで、Ｇ、Ｒ⁷、ｊ、ｇおよびｈは上記定義のものを表し、Ｐｇで表される基は酸に対して不安定な保護基である。Ｂａで表される基は塩基に対して不安定な保護基で保護された環外アミノ基を有する天然または非天然の核酸塩基であり、Ｂａの例（非限定的）としては、アデニン、シトシン、グアニン、プソイドイソシトシン、5-メチルシトシン、イソシトシンおよび2,6-ジアミノプリンなどがある。好ましい具体例では、Ｇは第２級窒素原子である。別の好ましい具体例では、Ｐｇおよび塩基に対して不安定な保護基は独立にカーバメート保護基である。本発明のさらに別の観点から、本発明は下記式で表されるＰＮＡシントンに関するものである：ここで、ＰｇおよびＢａは上記定義のものを表す。この化合物の好ましい具体例は、Ｐｇがカーバメート保護基、特に下記式で表されるカーバメート保護基の場合に得られる：Ａ₁〜Ａ₁₀で表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、それぞれ独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t- ブチル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、アミドまたはエステル基から選択される。エステル基は活性エステルを含む。Ｒ⁴で表される原子または基は水素、メチルまたはエチル基である。最も好まし具体例はＰｇが4,4'-ジメチルベンズヒドロキシカルボニルの場合に得られる。上記化合物の好ましい具体例はＢａがアデニン、シトシン、グアニン、プソイドイソシトシン、5-メチルシトシン、イソシトシンまたは2,6-ジアミノプリンの場合である。好ましい具体例はさらに、Ｂａが下記式で表される塩基に対して不安定なカーバメート保護基によって保護されている場合である：ここで、ＷおよびＲ²〜Ｒ⁴は上記定義のものを表す。塩基に対して不安定なカーバメート保護基はさらに、9-フルオレニルメチロキシカルボニルまたは下記式で表される1-シアノエトキシカルボニル基にすることができる：ここで、Ｒ²〜Ｒ⁴は上記定義のものを表す。好ましい具体例はＲ²が水素原子でＲ³およびＲ⁴がそれぞれメチル基の場合である。別の具体例では、塩基に対して不安定なカーバメート保護基は下記式で表されるスルホエトキシカルボニル基である：ここでＲ²〜Ｒ⁴は上記定義のものを表し、n-は整数１または２であり、Ｒ⁵で表される基はメチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t-ブチルまたは置換基を有するまたは有しないフェニル基から選択される。置換基を有するまたは有しないフェニル基は下記式で表される：ここで、ａ〜ｅで表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、それぞれ独立にＦ、Cl、Br、Ｉ、水素、メチル、エチル、イソプロピル、n-プロピル、n-ブチル、t-ブチル、フェニル、メトキシ、エトキシ、−ＮＯ₂、−ＣＮ、−ＳＯ₃Ｈ、−ＳＣＨ₃または−（Ｏ）ＳＣＨ₃から選択される。好ましい具体例はＲ⁵がメチル基で、ｎが２、Ｒ²〜Ｒ⁴が水素の場合と、Ｒ⁵ が置換基を持たないフェニル基で、ｎが２、Ｒ²〜Ｒ⁴が水素の場合である。本発明の好ましい具体例は、下記式で表されるアデニンＰＮＡシントンである：本発明の好ましい具体例は、下記式で表されるシトシンＰＮＡシントンである：本発明の好ましい具体例は、下記式で表されるグアニンＰＮＡシントンである：ここで、ｎは１または２である。本発明のさらに他の好ましい具体例は下記式で表されるグアニンＰＮＡシントンである：ここで、ｎは１または２である。本発明の好ましい具体例は下記式で表されるチミンＰＮＡシントンである：５本発明の好ましい具体例は下記式で表されるイソシトシンＰＮＡシントンである：本発明のさらに別の観点から、本発明は下記一般式で表されるＰＮＡオリゴマーを対象とする：ＫＬＱＭＮここで、Ｋ、ＱおよびＮは上記定義のものを表し、ＬおよびＭはそれぞれ下記式で表されるＰＮＡ部分であり：Ｇ、Ｂ、Ｒ⁷、ｇ、ｈおよびｊは上記定義のものを表す。本発明のさらに別の観点は下記一般式で表される酸に対して不安定な保護で保護された主鎖にある：Ｐｇで表される基は酸に対して不安定な保護基であり、Ｇで表される原子は第２級窒素原子、アルキル置換基を含む第３級窒素原子、酸素原子または硫黄原子であり、単位Ｒ⁷は水素原子または天然に存在するαアミノ酸の側鎖であり、ｇおよびｈは互いに同一でも異なっていてもよく、独立に０または１〜５の整数である。酸に対して不安定な保護基を有する好ましい主鎖は、下記式で表される酸に対して不安定な保護をアミノ基に施された主鎖である。Ｒ⁷で表される基は水素または保護されたまたはされていない天然に存在する αアミノ酸の側鎖である。ｇおよびｈはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、独立に０または１〜５の整数を表す。Ｐｇで表される基は下記式で表される酸に対して不安定な保護基であるのが好ましい：Ａ₁〜Ａ₁₀は互いに同一でも異なっていてもよく、独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t-ブチル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、アミド、エステルまたは活性エステル基であり、Ｒ⁴で表される原子または基は水素、メチルまたはエチル基である。好ましい具体例では、Ｒ⁴が水素原子で、Ａ₃およびＡ₈がそれぞれメチル基で、Ａ₁、Ａ₂、Ａ₄〜Ａ₇、Ａ₉、Ａ₁₀がそれぞれ水素原子で、ｇが１、ｈが０、Ｒ⁷ が水素である。一般に、酸に対して不安定な保護基でアミノ基が保護された主鎖を合成するには、アルコール、例えばベンズヒドロール誘導体をカルボニル当量用いてジアミンと結合させ、それによっていずれか１つのアミノ基にカーバメート保護基を形成させる。カーバメート保護基を形成させた後に、未反応のジアミンの第１級アミノ基をアセタミド誘導体に変換し、次いで、この誘導体をアルキルカルボキシ基へ変換する。ヘテロ原子Ｇとして硫黄原子または酸素原子を含む酸に対して不安定な保護を施された主鎖の別の具体例も上記合成方法を用いて調製できる。本発明のさらに別の観点から、本発明はＰＮＡ−ＤＮＡキメラの最終用途を対象とする。ＰＮＡは規定の条件下でＤＮＡに対して強い結合親和性を示す。この条件は多種多様な目的のために活用できる。同様にＰＮＡ−ＤＮＡキメラはＤＮＡに対して強い結合親和性を示す可能性がある。これによってこの独特な合成ポリマーの用途が増える。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの利用例としては（限定的にではなく）、治療薬、アンチセンス剤、ポリメラーゼ反応におけるプライマーおよび遺伝子材料または遺伝子配列の検出用プローブなどがある。上記の概説および以下の詳細な説明は例示であって、請求の範囲に記載の本発明を詳細に説明するためのものであるということは理解できよう。以下、本発明は添付図面からより明確に理解できよう。添付図面は本明細書の一部を成すものである。図面の簡単な説明図１は、酸に対して不安定な保護が施された本発明の好ましいアミノ酸N-(2- アミノエチル)-グリシン主鎖の合成法を示すスキーム。図２はカーバメート保護された本発明の好ましいシトシン側鎖部分の合成法を示すスキーム。図３はカーバメート保護された本発明の好ましいアデニン側鎖部分の合成法を示すスキーム。図４はカーバメート保護された本発明の好ましいグアニン側鎖部分の合成法を示すスキーム。図５はカーバメート保護基を作製するための本発明の好ましい試薬の合成法を示すスキーム。図６は酸に対して不安定な保護を施された好ましいアミノ酸N-(2-アミノエチル)-グリシン主鎖を好ましいヌクレオチド側鎖部分とカップリングさせ、本発明による好ましいＰＮＡシントンを合成する過程を示すスキーム。核酸塩基であるアデニン、シトシン、グアニンおよびチミンが示される。図７は好ましいグアニンＰＮＡシントンを酸化して、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラ合成に好適なオルソゴナルに保護された本発明による好ましいグアニンＰＮＡシントンを作製する過程を示すスキーム。図８は本発明で有用な天然および非天然の核酸塩基の構造を示すチャート。図９はＰＮＡオリゴマー配列H₂N-CTTCTCC-CONH₂のＨＰＬＣトレース。図10はＰＮＡオリゴマー配列H₂N-CGCTATACCC-CONH₂のＨＰＬＣトレース。図11は未精製のＰＮＡ−ＤＮＡキメラ配列DMBhoc-HN-CACAC-CONH-リンカー-5' -ＣＣＡＧＴ-3'-OHのＨＰＬＣトレース。配列の中の下線を引いた部分はＰＮＡ配列を表し、配列の全角文字の部分はＤＮＡ配列を表す。DMBhocは4,4'-ジメチルベンズヒドロキシカルボニルである。図12は精製後のＰＮＡ−ＤＮＡキメラ配列DMBhoc-HN-CACAC-CONH-リンカー-5' -ＣＣＡＧＴ-3'-OHのＨＰＬＣトレース。配列の中で下線を引いた部分はＰＮＡ配列を表し、配列の全角アルファベットの部分はＤＮＡシーケンスを表す。DMBh ocは4,4'-ジメチルベンズヒドロキシカルボニルである。図13はＰＮＡ−ＤＮＡキメラ配列（グラジエントのみ）DMBhoc-HN-CACAC-CONH -リンカー-5'-ＣＣＡＧＴ-3'-OHのＨＰＬＣトレース。配列の中の下線を引いた部分はＰＮＡ配列を表し、配列の全角アルファベットの部分はＤＮＡシーケンスを表す。DMBhocは4,4'-ジメチルベンズヒドロキシカルボニルである。発明の詳細な説明本出願人は、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの合成に好適な新規ＰＮＡシントンを調製するための便利で高収率な方法を開発した。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラは少なくとも１つのＰＮＡ部分と少なくとも１つのＤＮＡ部分とで構成されるオリゴマーである。一般に、ＰＮＡシントンはＤＮＡ合成に適合したオルソゴナルな保護が施されている。すなわち、ＤＮＡを顕著に分解しないような緩やかな条件下で除去可能な保護基で保護されており、核酸塩基の保護基は塩基に対して不安定であり、主鎖の保護基は酸に対して不安定である。先ず第１に、酸に対して不安定な保護基で保護されたＰＮＡシントンの主鎖を合成する。酸に対して不安定な保護基は、最も一般的なＤＮＡ主鎖保護基であるジメトキシトリチル（ＤＭＴ）と類似の不安定性を有するのが好ましい。本出願人達は酸に対して不安定な主鎖を得るための経路を開発した。第２に、環外アミノ基に塩基に対して不安定な保護を有する核酸塩基側鎖部分を合成する。ＰＮＡシントンには天然または非天然いずれかの核酸塩基を組み込むことができる。第３に、酸に対して不安定な保護を有する主鎖を、環外アミノ基（そのようなアミノ基が存在するならば）に塩基に対して不安定な保護を施した核酸塩基側鎖部分にカップリングさせる。このカップリング反応の結果、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラと、ＰＮＡ−ＲＮＡキメラ、その他各種の組み合わせを合成するのに適したＰＮＡシントンが得られる。本発明のＰＮＡシントンはさらに、現在使用されているものとは異なり、非常に緩やかな条件下でのＰＮＡオリゴマーの合成にも使用できる。最後に、本発明のＰＮＡシントンをＰＮＡ−ＤＮＡキメラの合成で使用して、市販のＤＮＡヌクレオチドに対するその有効性を示す。説明はＰＮＡ−ＤＮＡキメラに対象を絞って行うが、本発明によるＰＮＡシントンおよび方法はＰＮＡ− ＲＮＡＡキメラ、その他の種々の組み合わせについても同様に適用可能である。酸に対して不安定な保護を施された主鎖の合成１つの具体例では、本発明はＰＮＡシントンの酸に対して不安定な保護を施された主鎖の製造方法にある。好ましい主鎖は、酸に対して不安定な保護を施されたアミノ保護主鎖である（図１参照）。酸に対して不安定な保護基は、ＤＮＡ部分を実質的に分解することがない緩やかな条件で除去できる。従って、酸に対して不安定な主鎖を核酸塩基側鎖部分に連結させた場合、生成するＰＮＡシントンはＰＮＡ−ＤＮＡキメラ合成に好適である。酸に対して不安定な保護を施された主鎖は下記一般式で表される：Ｐｇで表される基は酸に対して不安定な保護基である。Ｇで表される原子は第２級窒素原子、アルキル置換基を有する第３級窒素原子、酸素原子または硫黄原子である。Ｒ⁷単位は水素原子または保護されたあるいはされていない天然に存在するα アミノ酸の側鎖である。ｇおよびｈは互いに同一でも異なっていてもよく、独立に０または１〜５の整数である。酸に対して不安定な保護が施された好ましい主鎖は、下記式で表される酸に対して不安定な保護基によってアミノ基を保護された主鎖である：Ｐｇ、Ｒ⁷、ｇ、ｈで表される単位は上記定義のものを表す。酸に対して不安定な保護基によってアミノ基が保護された好ましい主鎖の合成方法は以下に記載する。しかし、それ以外にＧとして酸素原子または硫黄原子を含み（限定的にではなく）酸に対して不安定な保護を施された主鎖の具体例も本発明に開示の一般的合成方法によって同様に得ることができる。ステップ１酸に対して不安定な保護を施された主鎖の合成の第１段階は保護基に組み込む適当なアルコールを選択することにある。アルコールは市販のものか、合成によって調製することができる。保護基の不安定性は、酸性溶液中での無水アルコールの安定性およびカチオンの生成し易さによって変る。この情報は多数のアルコールに関して周知であり、当業者には容易に入手可能である（参照：Sieber et al.，Helv．Chemica Acta（1968）51:614-22)。必要な酸に対する不安定性を提供するアルコールの例としては特に下記式で表されるベンズヒドロール誘導体を挙げることができる：Ａ₁〜Ａ₁₀はそれぞれ互いに同一でも異なっていてもよく、独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t-ブチル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、アミド、エステルまたは活性エステル基である。Ｒ⁴で表される原子または基は水素、メチルまたはエチル基である。Ｒ⁴で表される原子または基は水素、メチルまたはエチル基である。アルキル基は（限定的にではなく）メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチルおよびt-ブチル基を含む。アルコキシ基は（限定的にではなく）メトキシおよびエトキシ基を含む。好ましい具体例はＲ⁴が水素原子で、Ａ₃およびＡ₈がそれぞれメチル基で、さらにＡ₁、Ａ₂、Ａ₄〜Ａ₇、Ａ₉およびＡ₁₀が水素原子の場合である。図１を参照すると、好ましいアルコールはグリニヤール反応で合成される。先ず最初に、無水で非求核性のエーテルベースの溶媒中で、4-ブロモトルエンのマグネシウム塩すなわちグリニヤール試薬を調製する。好適な溶媒の例としては（限定的にではなく）ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジオキサンおよびテトラヒドロフランがある。好ましい溶媒はテトラヒドロフランである。グリニヤール試薬合成後、室温のマグネシウム塩溶液に、還流を発生させるのに十分な速度でパラートルアルデヒドを添加する。十分な時間をかけてグリニヤール試薬をアルデヒド誘導体に添加し、その後プロトン源を用いて反応を停止する。反応液を処理後、4,4'-ジメチルベンズヒドロールが単離する（化合物１）。ステップ２好ましい具体例では、適切に選択したアルコールを、下記式で表される酸に対して不安定な保護基によってアミノ基保護された対応するジアミンへに変える：Ｐｇで表される基は酸に対して不安定な保護基である。ｇは０または１〜５の整数である。下記合成方法に従えば、Ｐｇは必ずカーバメート保護基である。一般に、アルコールをカルボニル相当物と反応させ、その後下記式で表されるジアミンと反応させる：ｇは０または１〜５の整数である。カルボニル相当物の例としては（限定的にではなく）、ホスゲン誘導体、カルボニルジイミダゾールおよびジ−N-スクシンイミジルカーボネートがある。図１を参照すると、好ましいカルボニル相当物はカルボニルジイマジゾル（ＣＤＩ）である。好ましいジアミンは、ｇが１の場合すなわちエチレンジアミンである。無水の非求核性溶媒を用いて調製したＣＤＩ溶液に０℃ で4,4'-ジメチルベンズヒドロールを添加する。無水の非求核性溶媒の例は、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、ベンゼンおよびトルエンである。好ましい溶媒はジクロロメタンである。十分な時間反応させた後（薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）でモニタリングする）、反応混合物を水で洗浄し、乾燥し、ジクロロメタンを留去して固体を得る。固体を上記の無水非求核性溶媒に溶解する。溶媒としてはジクロロメタンが好ましい。ジクロロメタンを用いて調製した固体溶液を、アミノ主鎖部分であるエチレンジアミンに０℃で攪拌しながら添加する。反応終了後、反応混合物を水で洗浄し、乾燥させて、N-(4,4'-ジメチルベンズヒドロキシカルボニル)-エチレンジアミンを単離する（化合物II）。酸に対して不安定な保護基によってアミノ基保護されたジアミンは下記式で表される：ステップ３好ましい具体例では、酸に対して不安定な保護基によってアミノ基保護されたジアミンの合成に続いて、ジアミンの残る第１級アミノ基をアセタミド誘導体へ変換し、下記式で表される完全に保護されたジアミンを合成する：単位Ｐｇおよびｇは上記定義のものを表す。Ｘで表される原子は電気的に陰性な原子または基である。電気的に陰性な原子の例としては（限定的にではなく）フッ素、塩素、臭素およびヨウ素等のハロゲン原子がある。一般には、酸に対して不安定な保護基でアミノ基保護されたジアミンをトリハロ酢酸アルキルと反応させて、完全に保護されたジアミン化合物を合成する。トリハロ酢酸アルキルの分解によって生じる任意の酸を中和するために非求核性塩基を添加するのが好ましい。非求核性塩基の例として（限定的にではなく）、トリエチルアミン、ジイソプロピルアミン、N-メチルモルホリンおよびN-エチルモルホリンがある。好ましい非求核性溶媒はトリエチルアミンである。トリハロ酢酸アルキル誘導体の例として（限定的にではなく）、メチルおよびエチルエステルがあるが、その中でトリフルオロ酢酸エチルが好ましい。従って、Ｘで表される好ましい原子はフッ素である。従って、約０℃のジクロロメタン中、トリエチルアミンの存在下で、化合物II をトリフルオロ酢酸エチルと反応させることによって完全に保護された所望のジアミンが調製される。この反応で単離される生成物は、下記式で表されるN-[N'- 4,4'-ジメチルベンズヒドロールオキシカルボニル-(2'-アミノエチル)]グリシンである：ステップ４酸に対して不安定な保護基でアミノ基が保護された主鎖を調製する最後の段階は、アセタミド官能性をアルキルカルボキシ基へ変換する段階である。アセタミド官能性は電子吸引性を有するトリハロ置換基を含むので、アセタミド官能性に含まれる第２級窒素のプロトンは塩基によって除去されて、求核性の窒素アニオンを与えるものと思われる。この変換に適した塩基の例としては（限定的にではなく）、水素化リチウム、水素化ナトリウムおよび水素化カリウムがある。好ましい塩基は水素化ナトリウムである。第２級窒素のプロトン除去に続いて、アルキルハロアルキレートを添加し、反応終了まで反応混合物を攪拌し続ける。アルキルハロアルキレートの例にはクロロ酢酸メチル、クロロ酢酸エチル、ブロモ酢酸メチル、ブロモ酢酸エチル、ヨード酢酸メチル、ヨード酢酸エチル、3-クロロプロピオン酸メチル、3-クロロプロピオン酸エチル、3-ブロモプロピオン酸メチル、3-ブロモプロピオン酸エチル、 3-ヨードプロピオン酸メチルおよび3-ヨードプロピオン酸エチルがある。好ましい化合物はブロモ酢酸エチルである。さらに、アルキルハロアルキレートは、ハロ含有炭素原子の位置が保護されまたはされていない天然のα−アミノ酸側鎖によって置換されていてもよい。未精製の中間生成物を単離し、水酸化物イオン源で処理する。水酸化物イオン源の例としては（限定的にではなく）、水酸化リチウム、水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムがある。好ましい水酸化物イオン源は水酸化リチウムである。処理に続いて、酸に対して不安定な保護基によってアミノ基保護された主鎖が単離され、この主鎖は下記式で表される：単位Ｐｇおよびｇは上記定義のものを表す。ｈは０または１〜５の整数、Ｒ⁷ は水素または保護されまたはされていない天然のα−アミノ酸の側鎖である。図１を参照すると、酸に対して不安定な保護基によってアミノ基保護された主鎖は下記式で表される：核酸塩基側鎖部分の合成別の具体例では、本発明は、酸に対して不安定な保護基によってアミノ基を保護された主鎖にカップリングさせるための核酸塩基側鎖部分を合成する（図２〜５参照）。本発明のＰＮＡシントンはオルソゴナルに保護されているので、核酸塩基側鎖部分の環外アミノ基は必然的に酸に対して不安定な保護基で保護されてはいない。使用可能な保護基の例としては（限定的にではなく）、塩基性条件、光分解条件または水素化分解条件で開裂されるものがある。好ましい核酸塩基保護基は塩基に対して不安定なものである。一般に、新規核酸塩基側鎖部分は下記式で表される：ｊは０または１〜５の整数である。Ｂａ部分は、塩基に対して不安定な保護基によって保護された環外アミノ基を有する天然または非天然の核酸塩基である（上記定義のとおり、ＢａはＢのサブセットである）。環外アミノ基を有する天然の核酸塩基の例としてはアデニン、シトシンおよびグアニンがある。環外アミノ基を有する非天然核酸塩基の例には（限定的にではなく）、プソイドイソシトシン、5-メチルシトシン、イソシトシンおよび2,6-ジアミノプリンがある。塩基に対して不安定なアミノ基用保護基の例は（限定的にではなく）、9-フルオレニルメチロキシカルボニル(Fmoc)および下記式で表されるエトキシカルボニル基などである：Ｗで表される基は電子吸引基である。Ｒ²〜Ｒ⁴それぞれで表される原子または基は同一または異なっていてもよく、独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチルまたはt-ブチル基である。本発明の新規な核酸塩基側鎖部分は、関連特許出願の『緩やかな条件下でペプチド核酸の合成および保護解除を行うための改良されたシントン』（代理人整理番号SYP-091；米国特許出願第号；1995年６月７日出願）に記載のように、新規なイソシアネート法によって合成できる、この特許の内容は参考として本明細書の一部を成す。あるいは、核酸塩基側鎖部分を核酸塩基の環外アミノ基をイミダゾライドまたはアルキルイミダゾリウム塩によって保護する操作を含む従来法で合成することもできる。ステップ１上記いずれの合成スキームでも、核酸塩基はまず初めに、アルキルホルメート置換基、アルキルアセテート置換基、または例えばアルキルプロピオネート、アルキルブタノエート、アルキルペンタノエートまたはアルキルヘキサノエートなどのアルキルエステル置換基を有する部分的に保護された核酸塩基化合物へ変換される。従って、部分的に保護された核酸塩基は下記式で表される：ｊは０または１〜５の整数である。部分Ｂは環外アミノ基を有する核酸塩基を表し、Ｒ¹⁰で表される基はメチル、エチル、2,2,2-トリクロロエチル、2-(トリメチルシリル)-エチル、2-(フェニルチオ)-エチル、プロピル、イソプロピル、n -ブチル、t-ブチル、アリル、t-イソプロピル、アリル、シアナミル、4-ニトロシアナミル基もしくは置換基を有するまたは有しないベンジル基である。一般に、炭酸カリウムまたはt-ブトキシドカリウムなどの塩基およびアルキルハロアルキレートで連続的に核酸塩基を処理することによって部分的に保護された核酸塩基化合物が得られる。アルキルまたはベンジルブロモアセテートは部分的に保護された好ましい核酸塩基化合物を与える。図２を参照すると、部分的に保護された好ましいシトシン化合物は下記式で表される：図３を参照すると、部分的に保護された好ましいアデニン化合物は下記式で表される：図４を参照すると、部分的に保護された好ましいグアニン前駆体化合物は下記式で表される：ステップ２塩基に対して不安定な保護基を用いて核酸塩基の環外アミノ基を保護することによって部分的に保護された核酸塩基化合物を完全に保護された核酸塩基化合物へ変換する。塩基に対して不安定な保護基で保護され、完全に保護された化合物は下記の式で表される：ｊは上記に定義のとおりである。ＢａおよびＲ¹⁰で表される基は上記に定義のとおりである。塩基に対して不安定な保護基は上記で参照したイソシアネート法（例えば部分的に保護されたグアニン化合物を用いる場合等）または従来法（例えば部分的に保護されたアデニンおよびシトシン化合物を用いる場合等）によって製造することができる。塩基に対して不安定なアミノ基用保護基の例は（限定的ではなく）、9-フルオレニルメチロキシカルボニル(Fmoc)および下記式で表されるエトキシカルボニル基などである：Ｗで表される基は電子吸引基である。Ｒ²〜Ｒ⁴で表される原子あるいは基はそれぞれ同一でも異なっていてもよく、互いに独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチルまたはt-ブチル基である。電子吸引基の例としてはシアノ基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、フェニル基および置換基を有するフェニル基、例えばp-ニトロフェニル基、o-ニトロフェニル基およびp-アルキルスルホニルフェニル基などがある。電子吸引基としてＣＮを備えた塩基に対して不安定な保護基は下記式で表される：Ｒ²〜Ｒ⁴で表される基は互いに同一であっても異なっていてもよく、互いに独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチルまたはt-ブチル基である。 1-シアノエトキシカルボニル基の好ましい調製方法は、対応する1-シアノエタノール誘導体をカルボニルジイミダゾールと反応させてイミダゾライド塩を合成するというものである。好ましい1-シアノエタノール誘導体は2-ヒドロキシ-2- メチル-ブチロニトリルである。従って、図５ａを参照すると、2-ヒドロキシ-2- ブチロニトリルとカルボニルジイミダゾールとの反応によって化合物ＸＩＶすなわち2,2-ジメチル-1-シアノエトキシカルボニル-イミダゾールが得られる。この好ましい試薬のアシル化効率を向上させるためには、2,2-ジメチル-1-シアノエトキシカルボニル-イミダゾールをトリフルオロメタンスルホン酸メチルと反応させて、化合物ＸＶ（図５ｂ参照）を合成する。試薬は、部分的に保護された核酸塩基化合物を用いた反応の直前に現場で調製するのが好ましい。従って、図２を参照すると、完全に保護された好ましいシトシン化合物は下記式で表される：図３を参照すると、完全に保護された好ましいアデニン化合物は下記式で表される：電子吸引基としてスルホキシドまたはスルホンを含む完全に保護された核酸塩基化合物は、一般にイソシアネート法によって合成され、下記式で表される：ｎは１または２である。Ｒ²〜Ｒ⁴で表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、互いに独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチルまたはt-ブチル基である。Ｒ⁵によって表される基は、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n- ブチル、t-ブチルまたは置換基を有するか有しない下記式で表されるフェニル基である：ａ〜ｅで表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、互いに独立にＦ、Cl、Br、Ｉ、水素、メチル、エチル、イソプロピル、n-プロピル、n- ブチル、t-ブチル、フェニル、メトキシ、エトキシ、ＮＯ₂、−ＣＮ、−ＳＯ₃Ｈ、−ＳＣＨ₃または−（Ｏ）ＳＣＨ₃である。特筆すべきこととして、グアニンの場合、まず最初に2-アミノ-6-クロロプリンの環外アミノ基をチオエーテル基すなわち酸化されていない硫黄（図４化合物ＸII参照）として保護する。塩基に対して不安定な保護基ではないが、チオエーテル基は硫黄含有保護基が時期尚早に塩基を除去するのを防ぐ。すなわちカーバメートによって保護されたグアニン側鎖部分（化合物ＸIII）の調製は強塩基を用いた処理を必要とするからである。酸に対して不安定な保護基を用いてアミノ基保護された主鎖にカップリングされた後に初めて硫黄原子が酸化され、塩基に対して不安定な保護基となる。図４を参照すると、完全に保護された好ましいグアニン前駆体化合物は下記式で表される：ステップ３一般に、完全に保護された核酸塩基化合物の酢酸エステル基が酸によって加水分解されて、核酸塩基側鎖部分が合成される。完全に保護されたグアニン化合物の場合、『緩やかな条件下でペプチド核酸の合成および保護解除を行うための改良されたシントン』（代理人整理番号SYP-091；米国特許出願第号；199 5年６月７日提出）に記載のように、Ｃ６カルボニル基の生成と同時に加水分解が起こる（本明細書の図４参照）。図２を参照すると、好ましいシトシン側鎖部分は下記式で表される：図３を参照すると、好ましいアデニン側鎖部分は下記式で表される：図４を参照すると、好ましいグアニン側鎖部分は下記式で表される：その他の核酸塩基側鎖部分には、チミン側鎖部分およびウラシル側鎖部分がある。従って、これら環外アミノ基を持たない核酸塩基はいずれも追加の保護ステップを必要としない。しかしながら、チミン側鎖部分とウラシル側鎖部分は酸に対して不安定な保護基によってアミノ基保護された主鎖とカップリングされて新規なＰＮＡシントンを構成することができる。ＰＮＡシントン合成（カップリングステップ）別の具体例では、本発明はＰＮＡ−ＤＮＡキメラ合成に適したＰＮＡシントンの調製法にある（図６参照）。環外アミノ基を保護するチオエーテル基を含むグアニンＰＮＡシントンの調製では、チオエーテル基を酸化してスルホキシドまたはスルホン誘導体にする（図７参照）。得られたスルホキシドまたはスルホン誘導体がチオエーテル保護基を塩基に対して不安定な保護基へ変え、オルソゴナルに保護されたグアニンＰＮＡシントンが生成する。酸に対して不安定な保護基で保護された主鎖を核酸塩基側鎖部分にカップリングさせることによって下記式で表されるＰＮＡシントンを合成する：単位Ｐｇ、Ｂａ、Ｒ⁷、ｇ、ｈおよびｊは上記定義のものを表す。Ｇで表される基は第２級窒素原子、アルキル置換基を含む第３級窒素原子、酸素原子または硫黄原子である。ＰＮＡシントンはオルソゴナルに保護されている、すなわち通常１つの酸に対して不安定な保護基と１つの塩基に対して不安定な保護基とによって保護されているので、２つの部分をカップリングする方法では２種類の保護基が両方除去されるような条件が最小限に抑えられて有利である。上記のカップリング方法では保護された主鎖のカルボキシルエステルを利用し、水酸化物イオン源によってエステルを加水分解していた。この塩基性の加水分解条件は本発明によるＰＮＡシントンには適当でない。なぜなら核酸塩基の塩基に対して不安定な保護基が少なくとも部分的に除去されるためである。従って、酸に対して不安定な保護基によって保護された主鎖に核酸塩基側鎖部分をカップリングさせる好ましい方法では、保護された主鎖のカルボン酸基を『過渡的』保護する。カップリング方法では一般に、予め調製した核酸塩基側鎖部分の混合無水物溶液に、シリルカルボン酸で酸に対して不安定な保護を施した主鎖を添加する。主鎖と側鎖部分とのカップリングに続いて、シリル保護基を除去し、ＰＮＡシントンを合成する。特に、核酸塩基側鎖部分の混合無水物を、核酸塩基側鎖部分を非求核性塩基を用いて常温以下の温度で処理し、続いてアルキル酸塩化物と反応させて調製する。反応シーケンスのこのステップにおいて有用な非求核性塩基は（限定的にではなく）トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、N-メチルモルホリンおよびN-エチルモルホリンである。好ましい非求核性塩基はN-メチルモルホリンである。通常、反応物を常温以下、好ましくは約０℃で混合無水物が生成するのに十分な時間攪拌する。混合無水物の生成はtlcでモニタリングできる。混合無水物の生成後、冷却した混合無水物溶液に、酸に対して不安定な保護を施された主鎖を、非求核性塩基および立体障害を有する塩化シリルの存在下に添加する。一般に、酸に対して不安定な保護基によってアミノ基保護された主鎖の溶液も常温よりも低い温度、好ましくは約０℃にする。非求核性塩基の例としては上記に記載のものがある。立体障害を有する塩化シリルとして好ましいものはトリイソプロピルシリルクロライドであるが、他の塩化シリルを使用可能である。カップリングが起こるのに必要な時間だけ反応物を攪拌した後、反応を停止し、乾燥させ、続いて非求核性塩基の存在下でシリル除去基を用いて処理する。この場合も、非求核性塩基の例としては上記に記載のものがある。シリル除去基の例は（限定的にではなく）、フッ化水素、テトラ-n-ブチルアンモニウムフルオライドおよびトリエチルアミントリヒドロフルオライドなどである。好ましいシリル除去基はトリエチルアミントリヒドロフルオライドである。すなわち、これによって溶液のpHを調節することができ、他の保護基が時期尚早に除去されるのを最小限に抑えることができる。シリル保護基の除去および反応物の処理を行った後、所望のＰＮＡシントンを単離する。従って、１つの具体例では、好ましいＰＮＡシントンは下記式で表される：基ＰｇおよびＢａは上記定義のものを表す。別の具体例では、好ましいＰＮＡシントンは下記式で表される：Ｂで表される基は上記定義のものを表す。Ｐｇで表される基は下記式で表される酸に対して不安定な保護基である：Ａ₁〜Ａ₁₀は互いに同一でも異なっていてもよく、独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t-ブチル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、アミドまたはエステル基である。Ｒ⁴で表される原子または基は、水素、メチルあるいはエチル基である。別の具体例では、好ましいシトシンＰＮＡシントンは下記式で表される：別の具体例では、好ましいアデニンＰＮＡシントンは下記式で表される：別の具体例では、好ましいグアニンＰＮＡシントンは下記式で表される：Ｒ⁵で表される基は、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t-ブチルもしくは下記式で表される置換基を有するまたは有しないフェニル基である：ここで、ａ〜ｅで表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、それぞれ独立にＦ、Cl、Br、Ｉ、水素、メチル、エチル、イソプロピル、n-プロピル、n-ブチル、t-ブチル、フェニル、メトキシ、エトキシ、ＮＯ₂、−ＣＮ、−ＳＯ₃Ｈ、−ＳＣＨ₃または−（Ｏ）ＳＣＨ₃である。オリゴマーへ組み込む前または組み込んだ後にグアニンＰＮＡシントンを酸化して、塩基に対して不安定な保護基を生成することが可能であることに注意されたい。別の具体例では、好ましいチミンＰＮＡシントンは下記式で表される：別の具体例では、好ましいプソイドイソシトシンＰＮＡシントンは下記式で表される：チオエーテルを含む保護基を備えた好ましいグアニンＰＮＡシントンの合成を完成するには、チオエーテル基の酸化が残されている。硫黄原子をスルホキシドまたは完全に酸化されたスルホンへと酸化する方法は当業者に公知である(Tesse r達、Int．J．Peptide Protein Res.(1975)7:295-305)。例えば、好ましい方法では、グアニンシントン（化合物ＸＶIII）を水性溶媒中で非求核性塩基、タングステン酸ナトリウムおよび過酸化水素を用いて順次処理する（図７参照）。通常、反応の完了はtlcまたは高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いてモニタリングする。反応終了後、生成物を単離して下記式で表される好ましいグアニンＰＮＡシントンを得る：１つの具体例では、好ましいグアニンＰＮＡシントンは下記式で表される：ｎは１または２である。別の具体例では、好ましいグアニンＰＮＡシントンは下記式で表される：ｎは１または２である。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラまたはＰＮＡオリゴマー合成別の具体例では、本発明はＰＮＡ−ＤＮＡキメラまたはＰＮＡオリゴマーの合成方法である。通常、これら核酸ポリマーを効率的に合成するには緩やかな反応条件が要求され、オルソゴナルな保護基を用いる方法が採用される。従って、本発明のＰＮＡシントンは緩やかな条件下で保護基が除去され、さらに、二種類の保護基が必要な場合にはオルソゴナルであるので特に有利である。さらに、保護方法が市販のＤＮＡ合成技術と矛盾しない。通常、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラ（またはＰＮＡ−ＲＮＡキメラおよびそれら各種の組み合わせ）は下記式で表される：ＫＬＱＭＮＫおよびＮは化学結合を表し、Ｑは化学結合またはリンカーを表し、ＬおよびＭの一方は下記式で表されるヌクレオチド部分である：Ｇで表される原子は第２級窒素原子、アルキル置換基を有する第３級窒素原子、酸素原子または硫黄原子である。単位Ｂは保護されたまたは保護されていない天然または非天然の核酸塩基である。Ｄで表される原子または基は水素原子、水酸基、メトキシル基または保護基によって保護された水酸基である。ＬおよびＭの一方は下記式で表されるＰＮＡ部分である：単位ＧおよびＢは上記定義のものを表す。単位Ｒ⁷は水素原子もしくは保護されまたはされていない天然に存在するα−アミノ酸である。ｊ、ｇおよびｈは互いに同一でも異なっていてもよく、互いに独立に０または１〜５の整数を表す。ＫおよびＮで定義される化学結合は、共有結合またはイオン結合である。化学結合はＰＮＡ部分またはヌクレオチド部分をもう１つのＰＮＡ部分またはヌクレオチド部分に単一の化学種またはポリマー鎖の一部として連結させることができる。この化学結合でリンカー、固体担体に結合されたリンカー、その他の化学単位を連結させることもできる。化学単位の例としては（限定的にではなく）、保護基、水素原子、アルキル基およびアリール基などがある。固体担体の例としては（限定的にではなく）、多孔質ガラス（コントロールドポアガラス）、メンブレン、ポリスチレンビーズ、シリカゲル、シリカ、ペーパーフィルタおよびフリットガラスなどがある。当業者には、本発明にとって適当且つ有効な他の化学単位、担体および結合を確認し、その可能性を拡げることが可能である。Ｑが化学結合を表す場合には、共有結合を想定している。ＫおよびＮの場合と同様に、この化学結合はＰＮＡ部分またはヌクレオチドを別のＰＮＡ部分またはヌクレオチド部分に単一の化学種またはポリマー鎖の一部として連結することができる。単位ＱもＰＮＡ部分とヌクレオチド部分とを連結するリンカーを表すことができる。リンカーはＤＮＡおよびペプチド合成の分野で周知である。その詳細な説明は米国特許第5,410,068号（この内容は参考として本明細書に含まれる）と、Gati ，M.J.，Oligonucleotide Synthesis，A Practical Approach．IRL Press Inc. ，Oxford，Englandを参照されたい。ここで用いるリンカーは、ある部分を生体高分子に連結するために使用される組成物である。ある部分とは担体、生体分子、例えばアミノ酸またはヌクレオチドまたは標識物質、例えば蛍光染料などにすることができる。ここで用いるリンカーＱは、ＰＮＡまたはヌクレオチド部分のヘテロ原子Ｇを変性させるために使用される。リンカーの１つは通常合成オリゴヌクレオチドの末端を標識するために用いられるホスホラミダイトリンカーである。このリンカーは、反応性ホスホラミダイト基とスペーサーと少なくとも１つの保護されたヘテロ原子とを含む。このような予め作られたＤＮＡリンカーの例としては下記文献に記載のリンカーを挙げることができる：Nelson達、Nucleic Acid Research，（1989）17,7170;M isiura達、Nucleic Acids Research（1990）18,4345;Connelly，B.，Nucleic Ac ids Research(1978)15，3131;Coull達、Tetrahedron Letters(1986)27，3991。スペーサーは通常１〜12個の炭素原子を有するアルキルスペーサーである。ヘテロ原子の保護基は、ＤＮＡ合成と矛盾しないように選択する。リンカーまたはこの種のものはＤＮＡ合成試薬メーカーから一般的に市販されている。オリゴヌクレオチドの5'-末端も同様に公知の方法で変性できる。この方法はＰＮＡの末端を変性させるのにも同様に好ましい(Wachter達、Nucleic Acids Re s.(1986)14;7985参照)。一般に、続いて末端のヘテロ原子をカルボニルジイミダゾールと反応させ、次いで任意のアミン含有化合物と反応させる。キメラ合成用のアミン含有化合物は、アルキルジアミン、アミノアルカンチオールおよび１〜 12個の炭素原子を含むアミノアルキルアルコールを含むのが好ましい。適当な試薬はアルドリッチ化学から市阪されている。上記試薬および方法を用いて、ヌクレオチド末瑞または他のヘテロ原子を変性させ、それによってオリジナルのヘテロ原子、アルキルスペーサおよび任意の末端ヘテロ原子に機能的連結部を導入することができ、この末端ヘテロ原子を用いて次のＰＮＡオリゴマーのシントンもしくはＰＮＡ−ＤＮＡキメラのＰＮＡ部分またはヌクレオチド部分をカップリングさせることができる。最後に、可逆標識用生体ポリマーについて新規なリンカーが報告されている（米国特許第5,410,068号参照：（この特許の内容は参考として本明細書に含まれる））。本来はＤＮＡ用のものであるが、上記特許の開示はＰＮＡおよびＤＮＡモノマーサブユニットの連結でも利用できる。このリンカーは活性エステルおよび立体選択的アルキルハライド反応中心を有する。当業者には、そのような用途の広い試薬を用いてモノマーサブユニットを連結することができるということは理解できよう。１つの具体例では、末端サブユニットの水酸基末端またはチオール末端を立体選択性を有するアルキルハライド反応中心と選択的に反応させる。次いで活性エステルを選択的に上記のようなアミン含有化合物と反応させ、新しい末端ヘテロ原子を作り、この末端ヘテロ原子を用いて次のＰＮＡオリゴマーのシントンもしくはＰＮＡ−ＤＮＡキメラのＰＮＡ部分またはＤＮＡヌクレオチド部分をカップリングさせることができる。あるいは、末端のアミノ基を選択的に活性エステルと反応させる。次いで立体選択性を有するアルキルハライド反応中心を、好ましくはアルキルジアミン、アルキルジオール、またはアルキルジチオールと反応させて、次のＰＮＡオリゴマーのシントンもしくはＰＮＡ−ＤＮＡキメラのＰＮＡ部分またはヌクレオチド部分をカップリングさせるのに適した末端ヘテロ原子を導入することができる。上記リンカーの使用は、上記試薬（例えばアルキルジアミン、アルキルジオールまたはアルキルジチオール）に加えて、化合物をＰｎまたはＰａが水素原子であるＰＮＡ部分またはヌクレオチド部分にすることができるので、有利である。この具体例では、２つのサブユニットの極性を反転させることができる。ＰＮＡが平行および非平行いずれのパターンでもＤＮＡに結合することが知られているので、これは有用である（Egholm達、 Nature(1993)365，566-568参照）。ペプチド合成では他のリンカーも使用されている。通常これらのリンカーは生体分子、担体および標識試薬上の適当なヘテロ原子官能基を操作する際に用いられるが、他の分野でも使える。ペプチド合成に関するこれらのリンカーについての詳細は米国特許第5,117,009号、第5,306,562号、第5,196,566号および第5,187 ,625号（これら特許の内容は参考として本明細書に含まれる）に見られる。オリゴヌクレオチド合成、ペプチド合成およびＰＮＡ合成における当業者にはこれらのリンカーはＰＮＡのサブユニット同士あるいはＰＮＡサブユニットをＤＮＡに連結するか、反対にＤＮＡサブユニットをＰＮＡに連結するのに適したものとして認められている。保護されたまたはされていない天然または非天然の典型的な核酸塩基は上記または図８に記載のものである。通常、核酸塩基はＰＮＡ−ＤＮＡキメラ合成中保護されて、その後、所望の配列が達成された時点で除去される環外アミノ基を有する。一方、天然の核酸塩基であるチミンおよびウラシルは環外アミノ酸基を持たず、従って、通常保護されない。必要に応じた核酸塩基の環外アミノ基の保護により、オリゴマー合成中反応部位が除去され、生長中のポリマー鎖の好ましくない分岐が防止される。従って、効果的なすべての合成スキームにあるように、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラは制御された状態で合成され、各合成ステップからそれぞれ単一の生成物が得られる。通常、核酸塩基保護基はカーバメート保護基である。ＰＮＡシントンおよびヌクレオチドの主鎖は酸に対して不安定であるために、オルソゴナルな方法では、核酸塩基保護基が必ず異なる手段によって除去されるようになっている。核酸塩基側鎖部分の合成でて既に述べたように、核酸塩基用の好ましいカーバメート保護基は塩基に対して不安定である。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラは大抵の場合検出可能な部分を備えている。検出可能な部分は、キメラ本来の部分であってもよく、あるいは各種の方法によって（大抵は上記に記載のリンカーを使用いて）キメラに連結されてもよい。検出可能な部分の例としては（限定的にではなく）、酵素、抗原、放射性標識、親和性標識、蛍光標識、紫外線標識、赤外線標識およびスピン標識などがある。検出可能な部分はキメラ合成のモニタリングあるいはＤＮＡまたはＲＮＡなど別の単位へのキメラの結合をモニタリングするのに役立つ。標識された生体分子の使用は周知であり、リンカーに関する上記参考文献に記載されている。標識されたＤＮＡオリゴマーはＤＮＡシーケンシング（配列決定）並びにＤＮＡの配列特異的な相互作用すなわちハイブリダイゼーションがおこる他の核酸検出分析において特に有用である（標識ＤＮＡおよびＤＮＡシーケンシング用途におけるその利用について記載してある米国特許第5,149,625号を参照されたい。この特許の内容は参考として本明細書に含まれる）。一般に、適当な方法で生体高分子に連結した場合、標識は分析感度を向上させる。アンチセンスＤＮＡおよびＲＮＡはこれらの配列特異的な相互作用によって遺伝子の発現を調節することができることが知られている。ＰＮＡは一定の条件下でより強力な核酸との配列特異的相互作用を示すので、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラはＤＮＡシーケンシング、検出試験および治療薬における選択肢としてさらなる研究の興味深い候補となっている。他の方法の中で、ＤＮＡ配列合成法を利用してＰＮＡ−ＤＮＡキメラを合成することもできる。ＤＮＡ合成法および装置は業界では周知のもので、広く入手可能である。従って、本発明のＰＮＡシントンを設計することによって、市販のＤＮＡ前駆体および装置を用いることによってＰＮＡ−ＤＮＡキメラを直接合成することが可能になろう。通常、ＤＮＡ合成で一般的に使用され且つＰＮＡ−ＤＮＡキメラ合成に適用可能なヌクレオチドは下記式で表される：単位ＧおよびＢは上記定義のものを表す。単位Ｄは水素原子、水酸基、メトキシル基または保護基によって保護された水酸基である。単位Ｐｎは水素原子または保護基である。基Ｒ⁶は除去可能な保護基である。通常はカップリング段階終了後にその都度燐結合を酸化して、連結を安定化させる。単位Ｌ¹は残基または化学結合である。上記構造を有するヌクレオチド部分の例には特にホスホラミダイトがある。上記構造を有するヌクレオチド以外に、ＤＮＡ合成装置に適合した他のヌクレオチド類似物を用いてＰＮＡ−ＤＮＡキメラを製造することもできる。ＤＮＡシントンの例は米国特許第4,458,066号および4,725,677号（RE34,069）と、下記文献を参照されたい：Smith達、Nucleic Acids Res．(1985)13:2399;Sproat達、Nu cleic Acids Res.(1987)15;6181;Sproat達、 O cleic Acids Res.(1987)15;4837。Ｄの選択は、ヌクレオチド部分がＤＮＡであるか、ＲＮＡ部分であるかを決定付ける。Ｄが水素原子であればヌクレオチドはＤＮＡ部分である。Ｄが水酸基または保護された水酸基誘導体であればヌクレオチドはＲＮＡ部分である。メトキシル基はオリゴマー合成で一般的に用いられる置換基である。シリル保護基（限定的にではなく）を含むその他多数の保護基がオリゴマー合成中に水酸基を保護するために用いられる。Ｐｎが水素原子であるか、保護基であるかは各合成ステップにおけるヌクレオチド部分の役割によって決まる。オリゴマー鎖には一度に１つの部分（またはモノマー）が連結されるので生長中の鎖に加えられる新しい単位はそれぞれＧで表される原子を有することになるが、Ｇは保護されており、反応部位として使用できない。従って、ヌクレオチド部分が次にオリゴマーに加えられるべきモノマーである場合には、Ｐｎは保護基である（ヌクレオチドモノマーが別のモノマーまたは固体担体樹脂に連結されるべき第１の部分である場合にも、Ｐｎは保護基である）。反対に、ヌクレオチド部分が既にオリゴマー鎖の一部である場合すなわちカップリング反応において求核種として機能する部分である場合には、Ｐｎは水素原子である。好ましいＲ⁶置換基は、米国特許第4,458,066号および第4,725,677号に記載されており、これらの特許の内容は参考として本明細書の一部を成す。基Ｒ⁶は一般に下記式で表される基であるが、他のものでもよい：Ｗで表される基は電子吸引基である。Ｖ₁〜Ｖ₃で表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、互いに独立に水素、メチルおよびエチル基である。好ましい電子吸引基には（限定的にではなく）、シアノ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、フェニル基および置換基を有するフェニル基、例えば p-ニトロフェニル、o-ニトロフェニルおよびp-アルキルスルホニルフェニル基が含まれる。Ｌ¹で表される基は、例えばヌクレオチド部分が既にポリマー鎖に組み込まれているか、リンカーを介して固体担体に結合されている場合には、化学結合にすることができる。Ｌ¹によって表される基はさらに、残基であってもよい。１つ前のＰＮＡまたはヌクレオチド部分と保護基としてＰｎを有するヌクレオチド部分との反応によって残基が外れ、それによって２つの部分がカップリングされる。好ましい残基には米国特許第5,233,044号および第5,410,068号に記載の活性エステルが含まれ、これら特許の内容は参考として本明細書に含まれる。その他の残基の例としては（限定的にではなく）、ハロゲンおよび第２級アミノ基がある。第２級アミノ基は下記式で表すことができる： −ＮＲ⁸Ｒ⁹ Ｒ⁸およびＲ⁹で表される基は互いに同一でも異なっていてもよく、独立に１〜 10個の炭素原子を有する第１級、第２級または第３級アルキル基であるか、一緒になって炭素数５〜７のシクロアルキル基（ヘテロ原子として１つまたは２つの窒素、酸素または硫黄原子を含むことができる）を形成することができる。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの構築に使用されるＰＮＡ部分は下記式で表される：単位Ｇ、Ｂ、Ｒ⁷、ｊ、ｇおよびｈは上記定義のものを表す。単位Ｐａは水素原子または保護基である。単位Ｌ²は水酸基、残基または化学結合である。通常、ヌクレオチド部分と同様にＰＮＡがカップリング反応において求核性の化学種として作用する場合には、単位Ｐａは水素原子である。一方、ＰＮＡ部分が求核性化学種に連結されるモノマーの場合にはＰａは保護基であり、Ｇは反応部位として適当でなくなる。同様に、Ｌ²の性質（アイデンティティ）も合成シーケンスにおけるＰＮＡの役割で決まる。ＰＮＡ部分がオリゴマーあるいは固体担体に連結されたリンカーに連結されていれば、Ｌ²は化学結合となるが、ＰＮＡ部分がリンカーあるいはＰＮＡまたはヌクレオチド部分に連結されるべきモノマーの場合には、Ｌ²は水酸基または残基になろう。ヌクレオチド部分に関して既に記載したように、求核性の攻撃によって残基または活性水酸基が置換され、ＰＮＡ部分の求核性化学種へのカップリングが促進される。通常、カップリング段階では活性シントンが発生し、水酸基の残基への変換が起こる。活性化は通常その場で行われる。適当な活性化化学作用はペプチド化学関連の文献で公知である。1993年９月28日出願の米国特許出願第0/952,025号に記載の試薬が特に有効である。単位Ｌ²も米国特許第5,410,068号および第5,233,044号に記載のような活性エステルであるのが好ましい。好ましいＬ²としてはさらに1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡＴ）がある。Ｌ²基のその他の適当な例も当業者に公知であり、特にイミダゾール、トリアゾール、テトラゾール、3-ニトロ-1,2,4-トリアゾール、チアゾール、ピロール、ベンゾトリアゾールおよびベンゾヒドロキシトリアゾールがある。これらのシクロアルキル基にはフェニル部で置換されたイミダゾール、フェニル部で置換されたトリアゾール、フェニル部で置換されたテトラゾール、フェニル部で置換された3-ニトロ-1,2,4-トリアゾール、フェニル部で置換されたチアゾール、フェニル部で置換されたピロール、フェニル部で置換されたベンゾトリアゾールおよびフェニル部で置換されたベンゾヒドロキシトリアゾールがさらに含まれる。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラは種々の方法で合成できるが、おそらく最も効率的な方法は上記のようなＤＮＡ合成で現在使用可能な方法および装置を用いる方法になろう。特に、核酸（ＤＮＡおよびＲＮＡ）は現在、自動化機械で多数の合成担体および各種保護化学作用を利用してルーチンワークで合成されている。下記の米国特許は広範囲に渡る各種担体および保護化学作用をカバーしており、参考として本明細書の一部を成す：米国特許第5,262,530号、第4,415,732号，第4,458,06 6号、第4,725,677号(RE34,069)および第4,923,901号。自動化装置および試薬は、パーセプティブバイオシステムズ社、パーキンエルマー社（応用生物系部門）およびファルマシア社から市販されている。特別な5'-アミノシントンがスミス(Smith)達(Nucleic Acids Res.(1985)13:2399)と、スプロート(Sproat)達(N ucleic Acids Res．(1987)15:6181に報告されている。特別な5'-チオシントンはスプロート(Sproat)達(Nucleic Acids Res.（1987）15:4837)に報告されている。上記参考文献に記載の試薬は、標準的なＤＮＡ合成機器での使用に好適である。核酸を合成するための好ましい商業的方法は、上記試薬およびケスター達の米国特許第4,725,677号（RE34,069）に全般的に記載の方法を用いたものである。従って、好ましいシントンは、主鎖の5'水酸基に酸に対して不安定な保護が施され且つ核酸塩基の環外アミノ基に塩基に対して不安定なアシル型保護が施された β−シアノエチルホスホラミダイトである。酸に対して不安定な主鎖の保護基として好ましいものは、4,4'-ジメトキシトリフェニルメチル（ＤＭＴ）である。ＤＭＴは一般に各々の合成サイクルにおいて、ジクロロメタンを用いて調製した１〜４％のジクロロ酢酸またはトリクロロ酢酸溶液を用いてかなり迅速（１〜３分）に除去可能であるという理由で選択される。ＤＭＴと比べて酸に対する不安定性の高い保護基は、酸触媒によるカップリング反応（典型的な酸性化学種はテトラゾール）中に時期尚早に保護解除されやすい。ＤＭＴと比べて酸に対する不安定性の低い保護基は、完全に除去するために長い反応時間および／または過酷な条件に必要となる。一般に、プリン核酸塩基は酸による分解を特に受け易いので、これ以上に過酷な酸性保護解除条件は避けられる。保護基および合成条件に関する上記欠点は各々の合成サイクルで最低限に抑えられるが、累積効果によってオリゴヌクレオチド合成に深刻な不純物が発生する可能性がある。従って、オリゴヌクレオチドの長さが長くなるにつれて、その純度は低下することになる。通常、塩基に対して不安定な保護基は核酸塩基の環外アミノ基を保護するために用いられ、オルソゴナルに保護された核酸シントンが得られるようになっている。塩基に対して不安定な保護基は通常伸長中の核酸鎖の一部として残り、合成した核酸の固体担体からの開裂時に同時に除去される。『保護解除および開裂ステップ』では濃縮水酸化アンモニウム溶液がしばしば利用される。ケスター達は、塩基に対して不安定なアシル型保護基を使用しており、この核酸塩基保護基は、その完全な除去のために、通常高温（約55℃）で6〜24時間処理される。同じ条件でより短時間（約15〜60分）に除去されるその他の保護基が開発されている。これらの改良された保護基の例としてはフェノキシアセチル、t-ブチルフェノキシアセチルおよびアミンジン型保護基がある。これらの保護基は塩基に対する不安定性が増加しているが、通常は除去に要する時間だけが短縮される。さらに、ＰＮＡシントンは互いに連結されてＰＮＡオリゴマー（ＰＮＡ）を構成することができる。ＤＮＡシントンの化学作用は市販の合成装置に合っているので、シントンを種々の長さおよび配列を有するポリマー鎖へ変換するのは容易である。一般に、核酸塩基の保護基を除去する前のＰＮＡオリゴマーは下記式で表される：ＫＬＱＭＮ記号ＫおよびＮは化学結合を表す。記号Ｑは上記定義の化学結合またはリンカーを表す。ＬおよびＭは下記の式で表されるＰＮＡ部分であり、互いに同一でも異なっていてもよい：単位Ｇ、Ｂａ、Ｒ⁷、ｇ、ｈおよびｊは上記定義のものを表す。このオリゴマーは標準的なペプチドカップリング操作によって合成される。所望のＰＮＡ配列が達成された時点で、全ての保護基を外し、必要に応じて固体担体からの開裂を行って、ＰＮＡ分子が作られる。担体を適切に選択することは過酷な条件での処理を避けるために重要であり、好ましくは塩基性溶液中で開裂および保護解除が行えるように選択するのが好ましい。適当なメンブレン担体を製造する方法は米国特許第4,923,901号に記載されている。さらに、担体がヒドロキシル基を備え、この基に最初のＰＮＡがエステルとして結合するのが好ましい。これまで化学文献に報告されているペプチド合成に関する各種の方法が一般にＰＮＡオリゴマー合成に適用可能である。これらの方法には（限定的にでなく）、固相ペプチド合成および溶液合成が含まれる。例えば固相合成では、第１アミノ酸のカップリングに続く次のステップで所望のＰＮＡ鎖の計画的合成を行う。この合成には保護解除／カップリングサイクルの繰り返しが含まれる。最後に連結されたアミノ酸の一時的な主鎖保護基、例えばFmocは、適当な処理、例えばピペリジンを用いた塩基処理などによって定量的に除去され、N-末端アミノ基がフリーになる。続いて、次の所望のN-保護アミノ酸を、最後に連結されたアミノ酸のN-末端に連結する。このアミノ酸Ｃ末端と最後に連結されたアミノ酸のN-末端との連結は、いくつかの方法で行うことができる。例えば、縮合試薬、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド(ＤＣＣ)(Sheehan & Hess達、J．Am．Chem．Soc.，1955,77, 1067)およびジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）(Sraantakis達、Biochem ．Biophys．Res．Commun.，1976，73，336)またはそれらの誘導体を用いて、新たに連結されるアミノ酸のカルボキシル基を直接最後に連結されたアミノ酸のN- 末端と反応させるか、新たに連結されるアミノ酸を下記数種類の方法のいずれか任意の方法で活性化したカルボキシル基を含む形体で作ることによって結合させることができる：数種類の方法とは、活性エステル誘導体、例えば2,4,5-トリクロロフェニルエステル(Pless達、Helv Chim．Acta，1963，46，1609)、フタルイミドエステル(Nafkens達、Am．Chem．Soc.，1961，83，1263)、ペンタクロロフェニルエステル（Kuproyszewski，Rocz.Chem.，1961,35,595）、ペンタフルオロフェニルエステル(Kovacs達、Am．Chem．Soc.，1963,85 183)、o-ニトロフェニルエステル(Bodanzsky，Nature，1955，175,685)、イミダゾールエステル(Li達、J．Am Chem．Soc.，1970，92,7608)および3-ヒドロキシ-4-オキソ-3,4-ジヒドロキナゾリン(Dhbt-OH)エステル(Konig達、Chem．Ber.，1973，103，2024と2034 )を初めに生成する方法と、対称無水物(Wieland達、Angew．Chem． Int.Ed.Engl.，1971，10，336)のような無水物を最初に生成する方法である。第２級アミノ基を含むＰＮＡ分子を組み立てる場合には、ベンゾトリアゾリルN-オキシトリスジメチルアミノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）『カストロの試薬』（例えば、Rivaille達、Tetrahedron 1980，36，3413参照）が推奨される。カルボン酸基を活性化するための好ましい試薬には、1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡＴ）およびそのホスホニウム塩およびウロニウム塩が含まれる（Carpino.，L.J.Am.Chem.Soc.，(1993)115，4397参照）。最後に、最近報告されたアミノ酸フッ化物に類似の活性化されたＰＮＡモノマー(Carpino，J．Am．Chem．Soc.，1990,112,9651)はＰＮＡ合成を含めて多いに有望である。保護基を含む所望のＲＮＡ鎖の合成後に続くステップは、通常、ＰＮＡ部分のアミノ酸の保護解除と、合成したＰＮＡの固体担体からの開裂である。これらのプロセスはほぼ同時に行われてフリーなＰＮＡが所望の形状で得られる。あるいは、２つの別々に合成したＰＮＡ鎖の縮合を行う場合には、合成開始時に、所望のＰＮＡ鎖をそれぞれの固体担体から開裂させるための適切なスペーサー基を選択し（いずれのペプチド鎖も側鎖保護基を組み込まれた状態のままである）、最後に、例えば側鎖が保護された２つのペプチド鎖をカップリングさせて長鎖のＰＮＡ鎖を合成した後に側鎖の保護基を除去する。合成、単離されたＰＮＡ−ＤＮＡキメラは種々の配列の組み合わせで多くの用途で用いることができる。その用途の１つとして治療薬またはアンチセンス剤がある。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラは当業界で公知の各種方法または形態で生物に投与でき、それによって生物の健康の維持を助けるか、不健康な状態からの回復を促進する。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラはポリメラーゼ反応のプライマーとしても利用できる。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラを核酸プライマーと接触させると、キメラが核酸プライマーを認識して結合し、それによってポリメラーゼ反応が開始される。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラはさらに遺伝子配列決定用プローブとしても利用できる。以上、本発明を全般的に説明したが、以下では具体的な実施例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明が以下の実施例に限定されるものではない。実施例実施例１ 4,4- ジメチルベンズヒドロール(I)の合成 4.73モルのマグネシウムチップに、反応開始後の激しい還流を維持するのに必要な速度で、4.4モルの4-ブロモトルエン溶液（乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を用いて合計３ｌに稀釈したもの）を滴下した。添加終了後、室温近くに冷えるまで攪拌を継続した（約１時間）。調製したグリニヤール試薬に、4.3モルのp-トルアルデヒドを、反応物を還流させるのに必要な速度で滴下した。添加終了後、反応物が室温近くに冷えるまで攪拌を継続した（約30分）。反応物を約半分の量に濃縮し、2.5ｌのジクロロメタンと4.8モルの硫酸水素カリウムを含む溶液（水を用いて4.5ｌに稀釈したもの）とを含む不均質溶液に（激しく攪拌しながら）注いだ。添加後、全ての塩が溶解するまで３ＮのHClを含む溶液を添加した（上部にジクロロメタン層がくる）。層を分離し、有機層を稀釈した燐酸ナトリウムバッファー（pH５）を用いて１回洗浄した。生成物を乾燥し、濾過後、蒸発乾燥した。収量：970ｇで緑色オイルを得た。生成物を1.6ｌのヘキサン／酢酸エチル(9:1)を用いて再結晶化した。収量：660.1ｇの白色結晶（72％）。母液を 500mlの酢酸エチル／ヘキサン(9:1)中で再結晶化させることによって第２の生成物を得た（収量：108.0ｇの白色固体、11.8％）。合計収量768.1ｇ、3.62モル（ 84％）。実施例２ N-(4,4'- ジメチルベンズヒドロールオキシカルボニル)-エチレンジアミン（ II ）の合成 130mmolのカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）を100mlのジクロロメタン（ＤＣＭ）に懸濁した溶液を０℃で攪拌しながら、125mlの4,4'-ジメチルベンズヒドロールを60mlのジクロロメタンに溶解した溶液を滴下した。添加後、反応物を30 分間攪拌した。30分後の薄層クロマトグラフィー(tlc)分析で反応終了が示された。生成物を分液漏斗に移し、70mlの水を用いて２回洗浄した。次いで、ジクロロメタン層を硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、濾過後、蒸発乾燥した。収量：40 ｇの白色固体。単離した生成物40ｇを150mlのジクロロメタンに溶解し、１モルのエチレンジアミン（０℃で攪拌）に滴下した。添加終了後、反応物を30分間攪拌した。続いて溶液を分液漏斗に移し、100mlの水を用いて４回抽出した（最後の洗浄液にはエマルション生成を最小限に抑えるために少量の塩水を添加した）。その後、ジクロロメタン層を硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、濾過後、蒸発乾燥した。収量：37.8ｇの透明黄色オイル(101％)。実施例３ N-(4,4'- ジメチルベンズヒドロールオキシカルボニル)-N'−トリフルオロアセチル−エチレンジアミン（III）の合成実施例２で単離されたN-(4,4'-ジメチルベンズヒドロールオキシカルボニル)- エチレンジアミン37.8ｇに、200mlのジクロロメタンと50mmolのトリエチルアミンを添加した。溶液を氷浴中で冷却した後、150mmolのトリフルオロ酢酸エチルを滴下した。その後、１時間かけて白色固体生成物を析出させ、減圧濾過を行って回収した。濾液を一夜攪拌し、その後、分液漏斗に移した。分液漏斗に移した後、溶液を燐酸ナトリウムバッファー（pH６）を用いて２回洗浄し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、濾過後に蒸発乾燥させた。残渣を250mlのヘキサン／酢酸エチル(3:2)から再結晶させた。収量：16.6ｇの白色固体（34％）。最初の減圧濾過で回収された生成物の重量は21.05ｇ（42％）であり、合計収量は37.65ｇ（ 76％）であった。実施例４ N-[N'-4,4- ジメチルベンズヒドロールオキシカルボニル-(2'-アミノエチル) グリシン(IV)の合成 40mmolのN-(4,4'-ジメチルベンズヒドロールオキシカルボニル)-N'−トリフルオロアセチル−エチレンジアミンを160mlの乾燥テトラヒドロフランに添加した溶液に、44mmolの水素化ナトリウムを０℃で攪拌しながら、添加した。ガスの発生が無くなって濃い青色が消えるまで反応物を氷浴中で攪拌した。反応物に48mmolのブロモ酢酸エチルを添加した。次いで、反応物を室温に温めながら一夜攪拌した。翌朝溶媒を留去し、100mlの酢酸エチルと100mlの燐酸ナトリウムバッファー（pH６）とを用いて残留物を再分配した。その後、有機層を水を用いて１回洗浄し、硫酸ナトリウムを用いて脱水、濾過後、蒸発乾燥した。収量：19.72ｇの橙色オイル（90％）残留物を240mlのエタノール／アセトニトリル(1:1)溶液に溶解した後、60mlの水を添加した。氷浴中で溶液を冷却し、その後2.5Ｎの水酸化リチウム水溶液160 mlを添加した。反応物を１時間攪拌し、その後、３ＮのHClを一滴ずつ、試験紙でpH８〜９が確認されるまで非常にゆっくりと滴下した。その後、この溶液に１Ｍの燐酸二水素ナトリウム15mlを添加してpHを７に調節した。白色沈澱物が生じる。続いて溶液をロータリーエバポレータを用いて濃縮し、約150mlの溶媒を留去した。次いで、３×100mlの酢酸エチルを用いて残留物を抽出した。酢酸エチル層を全て合わせ、１Ｍの燐酸バッファー（pH７）を用いて１回逆抽出した。酢酸エチル層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過後、蒸発乾燥した。収量：14.3ｇの黄色フォーム。 400mlのアセトニトリルを用いて再結晶化した。収量：8.35ｇ（59％）。100ml のＡＣＮを用いて再度再結晶化した。収量7.63ｇ（54％）。実施例５ 2-(1' チミニル)酢酸の合成 300ｇのチミンに、750mlのヘキサメチルジシラザンと、15ｇの硫酸アンモニウムとを添加した。反応混合物を攪拌しながらガスの発生が無くなるまで加熱還流した。続いて反応物を80℃に冷却し、160mlのブロモ酢酸エチルを添加した。分析によって出発物質の95％が消費されたことが示されるまで、反応物を緩やかに加熱し続けた。その後、反応物を氷浴中で20℃に冷却し、氷浴中で攪拌しながら 150mlのメタノールを滴下した。メタノールの添加終了後、2.5ｌの３Ｎ水酸化ナトリウム溶液を注意深く添加した。その後、氷浴を取り除き、反応物上にガスを通過させて過剰のシランを素早く蒸発させた。次に80ｇの水酸化ナトリウムを添加し、反応物を一夜攪拌した。翌朝、反応物に６Ｎ塩酸１ｌを添加して生成物を析出させた。その後、減圧濾過して生成物を回収し、低濃度の塩酸を用いて洗浄した。続いて、回収された生成物を1.5ｌのアセトニトリルに懸濁し、溶液を攪拌下に加熱還流した。一夜冷却後、再び減圧濾過して固体を回収し、アセトニトリル、ジクロロメタン、アセトニトリルで洗浄した。収量：327ｇ（75％）。実施例６ 2,2- ジメチル-1-シアノエトキシカルボニル- イミダゾール(XIV)の合成 250mmolのカルボニルジイミダゾールを100mlのジクロロメタンに懸濁したものに、260mmolの2-ヒドロキシ-2-メチル-ブチロニトリルを添加した。反応物を約2 0時間攪拌し、分液漏斗に移した。さらに、250mlのジクロロメタンを添加し、続いて100mlの水を用いて３回溶液を洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムを用いて洗浄し、濾過後、約50mlまで濃縮した。その直後に、激しく攪拌しながら200ml のエーテルを添加し、その後溶液を氷浴中で30分間冷却した。減圧濾過により白色固体生成物を分離した。収量：29.6ｇ（61％）実施例７ 2-(1'- シトシル)酢酸t-ブチル（Ｖ）の合成 200mmolのシトシンに、250mlのＤＭＦと215mmolのポタシウム-t-ブトキシドとを添加した。その後、激しく攪拌しながら反応物を60℃に加熱し、その後、直ちに０℃に冷却した。氷温の溶液に215mmolのブロモ酢酸t-ブチルを滴下した。反応物を１時間攪拌した後、濃縮した。30mmolの３Ｎ塩化水素酸を含む500mlの水に残留物を添加した。溶液を20分間攪拌し、その後、減圧濾過して白色固体生成物を回収した。収量：32.08ｇ（71％）。実施例８ t- ブチル2-[N'⁴-2,2-ジメチル-1-シアノエトキシカルボニル(1-シトシル)]アセテート(VI)の合成 52mmolの2,2-ジメチル-1-シアノエトキシカルボニル-イミダゾールを150mlのジクロロメタン（０℃）に添加したものに、50mmolのトリフルオロメタンスルホン酸メチルを添加した（滴下）。反応物を約30時間撹拌し、35mmolの2-(1'-シトシル)酢酸t-ブチルを添加した。tlc分析で反応完了が確認されるまで反応物を攪拌した（24時間）。生成物を分液漏斗に移し、５％の硫酸水素カリウム溶液50ml で１回、５％の重炭酸ナトリウム溶液で１回抽出した。その後、有機層を硫酸ナトリウムを用いて脱水、濾過後、蒸発乾燥した。酢酸エチルを用いて残留物を再結晶させた。収量：7.35ｇ（60％）実施例９２−[N'⁴-2,2-ジメチル-1-シアノエトキシカルボニル (1'- シトシル)]酢酸(VII)の合成 25mmolの２−[N'⁴-2,2-ジメチル-1-シアノエトキシカルボニル(1'-シトシル)] 酢酸t-ブチルに、25mlのジクロロメタンと50mlのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）とを添加した。エステルが完全に加水分解されるまで反応物を攪拌した（４時間）。その後溶液を濃縮し、10mlのジクロロメタンに再溶解した。この溶液を氷冷エチルエーテル350mlに激しく攪拌しながら滴下して、生成物を析出させた。その後生成物を減圧濾過によって回収した。収量：7.60ｇの白色固体（103 ％）（ＴＦＡ塩としては存在しないと思われる）実施例10 2-(9'- アデニル)酢酸t-ブチル(VII)の合成 200mmolのアデニンに、400mlの乾燥ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を添加した。懸濁液を攪拌しながら230mmolの水素化ナトリウムを添加した。溶液を室温で一夜攪拌し、氷浴中で30分間攪拌した。その後、220mmolのブロモ酢酸t-ブチルを滴下した。その後、溶液を30分間攪拌し、減圧下に約50mlまで濃縮した後、 10％炭酸ナトリウムを20ml含有する1.5ｌの水に残留物を注入した。30分間攪拌後、析出した白色固体生成物を減圧濾過で回収した。その後、湿った生成物を30 0mlのアセトニトリル／水(9:1)から再結晶した。生成した結晶を減圧濾過によって回収した。収量：25.94ｇ（52％）。実施例11 2-[N'⁶-2,2- ジメチル-1-シアノエトキシカルボニル(9'-アデニル)]酢酸t-ブチル(IX)の合成 2,2-ジメチル-1-シアノエトキシカルボニルイミダゾールに 100mlのジクロロメタンを添加した。この溶液を氷浴中で30分間攪拌した後、50m molのトリフルオロメタンスルホン酸メチルを滴下した。反応物を氷浴中で30分間攪拌し、その後、35mmolの2-(9'-アデニル)酢酸t-ブチルを添加し、tlc分析で反応の完了が示されるまで反応物を攪拌した（４日間）。その後、溶液を分液漏斗に移し、５％の硫酸水素カリウム溶液70mlで１回、５％の重炭酸ナトリウム溶液を用いて１回、さらに塩化ナトリウムの稀釈溶液を用いて１回抽出した。その後、有機層を硫酸ナトリウムを用いて脱水、濾過後、蒸発乾燥させた。酢酸エチル130mlを用いて残留物を晶析した。収量：10.17g（77％）実施例12 2-[N'⁶-2,2- ジメチル-1-シアノエトキシカルボニル (9'- アデニル)]酢酸(X)の合成 28mmolの2-[N'⁶-2,2-ジメチル-1-シアノエトキシカルボニル(9'-アデニル)]酢酸t-ブチルに、25mlのジクロロメタン50mlのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）とを添加した。tlcでエステルが完全に加水分解されたことが確認されるまで反応物を攪拌した（４時間）。その後、この溶液をオイル状になるまで濃縮し、残留物を 10mlのジクロロメタンに再溶解した。この溶液を、氷冷エチルエーテルに激しく攪拌しながら滴下して、生成物を析出させた。その後、白色固体生成物を減圧濾過によって回収した。収量：11.55ｇの少し灰色がかった白色固体（95％）（生成物はＴＦＡ塩として存在するものと思われる）実施例13 2-[6'- クロロ(9'-プリニル)]酢酸ベンジル(XI)の合成ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ，３Ｌ）を6-クロロ-2-アミノプリン(300g，1. 77mol;Pharma-WaldorfGmbH，Gnermany，P/N 41720)および炭酸カリウム（366g;2 .65mol，Aldrich Chemical，Milwaukee，WI（以下アルドリッチ社）P/N34,782-5 ）に添加し、溶液を温めて2-アミノ-6-クロロプリンを溶解させた（84℃）。続いて氷浴中で混合物を冷却し、2-ブロモ酢酸ベンジル（299ml，1.89mol;アルドリッチ社P/N 24,563-1）を1.5時間かけて滴下した。混合物を０℃でさらに３時間攪拌した後、室温で一夜攪拌した。翌日反応混合物を濾過し、濾液を７ｌの水と150mlの濃塩酸（HCl）とを含む溶液中に注ぐ。続いて、混合物を２時間攪拌し、濾過して生成物を単離した。生成物を水で十分に洗浄し、続いて、沸騰中のアセトニトリル（３ｌ）に固体を少しずつ添加して再結晶化させた。深い赤色の溶液を一夜放置し、翌日濾過した。生成物をメタノールを用いて十分に洗浄し、続いてジエチルエーテルを用いて洗浄した。収量：386ｇ（69％）実施例14 2-[N'²-2-( メチルチオ)エトキシカルボニル -6'- クロロ(9'-プリニル)]酢酸ベンジル(XII)の合成 50mmolの2-[6'-クロロ(9'-プリニル)]酢酸ベンジルに、新たに蒸留した200ml のテトラヒドロフランを添加した。反応物を氷浴中で20分間冷却した後、20mmol のトリホスゲンを添加した。反応物を０℃で30分間撹拌し、130mmolのジイソプロピルエチルアミンを滴下した。０℃で20分間攪拌後、70mmolの2-(メチルチオ) -エタノールを添加した。反応物を室温で一夜攪拌した。翌朝、反応物を約半量に濃縮し、500mlの水と、30mmolの塩酸とを含む溶液に攪拌しながら添加した。混合物を30分間攪拌した後に減圧慮過を行って生成物を回収した。生成物をエタノール中で再結晶化させた。収率74％。実施例15 2-[N'²-2-( メチルチオ）エトキシカルボニル (9'- グアニル)]酢酸(XIII)の合成 75mmolの95％水素化ナトリウムに新たに蒸留した約100mlのテトラヒドロフランを添加した。溶液を氷浴中で20分間冷却した後、75mmolの3-ヒドロキシプロピオニトリルを添加した。反応物を０℃で２時間攪拌し、15mmolの2-[N'²-2-(メチルチオ)-エトキシカルボニル-6'-クロロ(9'-プリニル)]酢酸ベンジルを添加した。反応物を室温で一夜攪拌した。翌朝、溶媒を完全に留去し、200mlの水と、54ｇの塩化ナトリウムと、８ｇのＫ₂ Ｓ₂Ｏ₇とを含む溶液を添加した。溶液を15分間激しく攪拌した後、固体生成物を濾過した。生成物をアセトニトリル中で沸騰させて精製した。収率83％。実施例16 N-[N"-4,4'- ジメチルベンズヒドロールオキシカルボニル -(2"- アミノエチル)]-N-[2-(1'-チミニル)アセチル] グリシン(XIX)の合成３mmolのN-[N'-4,4'-ジメチルベンズヒドロールオキシカルボニル-(2'-アミノエチル)]グリシンに、15mlのアセトニトリル（ＡＣＮ）および12mmmolのN-メチルモルホリン（ＮＭＭ）を添加した。溶液を氷浴中で冷却し、６mmolのトリイソプロピルシリルクロライドを添加した。溶液を０℃で２時間攪拌し、下記で説明する反応の生成物に添加した。 3.3mmolの2-(1'-チミニル)酢酸に、15mlのアセトニトリルと12mmolのN-メチルモルホリンとを添加した。溶液を０℃に冷却しながら攪拌した後、3.7mmolのトリメチルアセチルクロライドを溶液に添加した。15分間攪拌後、反応物のアリコートを取り出し、ジエチルアミンと反応させて、完全な無水物が生じたか否かを判定した。tlc分析によって無水物の生成が完了したことが示された後、この反応生成物に上記反応物を滴下して、混合物を30分間攪拌した。その後、生成物を蒸発乾燥し、30ml のエチルエーテルと30mlのＮメチルモルホリン水溶液（３％）とを用いて残留物を分けた。二層を分け、有機層を３％のN-メチルモルホリン水溶液30mlを用いて１回洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、フィルターを介して第２のフラスコに移した。さらにエチルエーテルを加えて溶液を全体で75mlに調節した。この溶液に12mmolのN-メチルモルホリンと３mmolのトリエチルアミントリハイドロフルオライド(Et₃N 3HF)を添加した。５分後、この溶液に30mlの水を添加した（試験紙によるpH値は７〜８）。この溶液に追加のエチルエーテルを添加し、３％のN-チルモルホリン水溶液30mlを添加した。分液し、水層を蒸発乾燥した。続いて残留物を30mlのジクロロメタンと40mlのpH3.5バッファー（pH3.5バッファーは 0.2Ｍのクエン酸と0.2ＭのNa₂HPO₄ と0.2ＭのNaH₂PO₄からなる）とを用いて分配した。分液し、硫酸ナトリウムを用いて有機層を脱水後、濾過し、濾液に６mmolのN-メチルモルホリンを添加した。その後、濾液を蒸発乾燥し、残留物を最小限量のジクロロメタンに溶解した。その後、この溶液を氷冷エチルエーテルに激しく攪拌しながら添加することによって生成物を析出させた。生成物を減圧濾過によって回収した。収量：0.872ｇ（4 8％）。調製されたＰＮＡシントンはアミド結合を中心とする回転障害のためにロトマー(rotomer)を生成した。信号は各ロトマー形毎に表れ、主要信号（大きい方の信号）はmjで表し、小さい信号はmiで表した。表したプロトンの数は信号を合わせた合計数を表す。このモノマーではロトマーの数はほぼ同じであり、従って、表示は単に読者の利便性を考えて挿入されている。実施例17 N-[N"-4,4'- ジメチルベンズヒドロールオキシカルボニル-(2"-アミノエチル)]-N -[2-(N'⁴-2,2-ジメチル-1-シアノエトキシカルボニル(1'-シトシル)]アセチル] グリシン(XVI)の合成３mmolのN-[N'-4,4'-ジメチルベンズヒドロールオキシカルボニル-(2'-アミノエチル)]グリシンに、15mlのアセトニトリルおよび９mmmolのN-メチルモルホリンを添加した。この溶液を氷浴中で冷却し、６mmolのトリイソプロピルシリルクロライドを添加した。この溶液を０℃で２時間攪拌し、下記で説明する反応の生成物に添加した。 3.3mmolの2-[N'⁴-2,2-ジメチル-1-シアノエトキシカルボニル(1'-シトシル)] 酢酸に、15mlのアセトニトリルと９mmolのN-メチルモルホリンとを添加した。この溶液を０℃に冷却しながら攪拌した後、3.7mmolのトリメチルアセチルクロライドを添加した。15分間攪拌後、反応物のアリコートを取り出し、ジエチルアミンと反応させて、完全な無水物が生じたか否かを判定した。tlc分析によって無水物の生成が完了したことが示された後、この反応生成物に上記反応物を滴下して、混合物を30分間攪拌した。その後、生成物を蒸発乾燥し、残留物を30mlのエーテルと30mlのＮメチルモルホリン水溶液（３％）とを用いて分けた。二層を分離し、有機層を３％のN-メチルモルホリン水溶液30mlを用いて１回洗浄し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、フィルターを介して第２のフラスコに移した。この溶液に９mmolのN-メチルモルホリンと2.2mmolのトリエチルアミントリヒドロフルオライドを添加した。pHが非常に高いので、過剰のトリエチルアミントリヒドロフルオライドを添加してpH を７〜８（試験紙による）に調節した。この溶液に追加のエチルエーテルを添加し、３％のN-チルモルホリン水溶液30mlを添加した。２層を分離し、生成物が水層に存在することを確認した。有機層を３％のN-メチルモルホリン水溶液30mlを用いて洗浄した。水層を合わせ白色ゲル伏になるまで蒸発乾燥した。このゲルを水を用いて１回、テトラヒドロフランを用いて１回共蒸発乾燥した。続いて、残留物を25mlのジクロロメタンと30mlのpH3.5バッファー（pH3.5バッファーは0.2 Ｍのクエン酸と0.2ＭのNa₂HPO₄と0.2ＭのNaH₂PO₄からなる）とを用いて分配した。生成物はジクロロメタン層に存在することを確認した。２層を分離し、有機層を塩化ナトリウム稀釈溶液を用いて１回洗浄した後、硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、濾過し、蒸発乾燥した。収量：1.61ｇの黄色フォーム（73％）。このフォームを最小限量のジクロロメタンに溶解し、この溶液を氷冷のエチルエーテル中に攪拌しながら滴下して析出させた。収量：1.06ｇ（48％）。実施例18 N-[N"-4,4'- ジメチルベンズヒドロールオキシカルボニル-(2"-アミノエチル)]-N -[2-[N'⁶-2,2-ジメチル-1-シアノエトキシカルボニル(9'-アデニル)]アセチル] グリシン(XVII)の合成６mmolのN-[N'-4,4'-ジメチルベンズヒドロールオキシカルボニル-(2'-アミノエチル)]グリシンに、35mlのアセトニトリルおよび24mmmolのN-メチルモルホリンを添加した。この溶液を氷浴中で冷却し、６mmolのトリイソプロピルシリルクロライドを添加した。エステルの生成をtlcで分析し、反応が不完全であることが示されたので、トリイソプロピルシリルクロライドをさらに３mmol添加した。この溶液を０℃で合計1.5時間攪拌し、下記反応の生成物に添加した。７mmolの2-[N'⁶-2,2-ジメチル-1-シアノエトキシカルボニル(9'-アデニル)]酢酸に、30mlのアセトニトリルと28mmolのN-メチルモルホリンとを添加した。この溶液を０℃に冷却しながら攪拌した後、7.7mmolのトリメチルアセチルクロライドを添加した。20分間攪拌後、反応物のアリコートを取り出し、ジエチルアミンと反応させて無水物が完全に生じたか否かを判定した。無水物が完全には生成していないことが判明したので、さらに0.7mmolのトリメチルアセチルクロライドを添加して反応物をさらに10分間攪拌した。tlc分析によって無水物の生成が完了たことが示された後に、この反応の無水生成物に上記反応物を滴下して、混合物を30分間攪拌した。その後、生成物を蒸発乾燥し、60mlのエチルエーテルと60mlのＮ-メチルモルホリン水溶液（３％）とを用いて残留物を分配した。二層を分離し、有機層を３％のN-メチルモルホリン水溶液30mlを用いて１回洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、フィルターを介して第２のフラスコに移した。この溶液に 24mmolのN-メチルモルホリンと６mmolのトリエチルアミントリヒドロフルオライドを添加した。この溶液に60mlの水を添加し、全てのものが完全に溶解するまで攪拌した（試験紙によるpHは約８）。２層を分離し、水層を蒸発乾燥した。続いて、残留物を60mlのジクロロメタンと80mlのpH3.5バファーとで分配した。２層を分離し、硫酸ナトリウムを用いて有機層を乾燥後、濾過し、濾液に12mmolのN- メチルモルホリンを添加した。その後、濾液を蒸発乾燥し、残留物を最小限量のジクロロメタンに溶解した。続いてこの溶液を低温のエチルエーテル中に激しく攪拌しながら滴下して生成物を析出させた。減圧濾過を行って生成物を回収した。収量：2.58ｇ（57％）。実施例19 N-[N"-4,4'- ジメチルベンズヒドロールオキシカルボニル-(2"-アミノエチル)] -N-[2-[N'²-2-(メチルチオ)エトキシカルボニル(9'-グアニル)]アセチル]グリシン(XVIII)の合成５mmolのN-[N'-4,4'-ジメチルベンズヒドロールオキシカルボニル-(2'-アミノエチル)]グリシンに、25mlのアセトニトリルおよび20mmmolのN-メチルモルホリンを添加した。この溶液を氷浴中で冷却し、10mmolのトリイソプロピルシリルクロライドを添加し、０℃で1.5時間攪拌した。この溶液を下記反応の生成物に添加した。６mmolの2-[N'²-2-（メチルチオ）エトキシカルボニル(9'-グアニル)]酢酸（1 0mlの乾燥ＤＭＦから２回コエバポレーションしたもの）に、25mlのアセトニトリルを添加した。この溶液を０℃に冷却しながら20分攪拌し、その後、７mmolのトリメチルアセチルクロライドを添加した。次に、20mmolのN-メチルモルホリンを滴下し、20分攪拌した（常法に従って、反応物のアリコートを取り、ジエチルアミンと反応させて、無水物の生成が完全に起こったか否かを判定した）。 tlc分析によって無水物の生成が示された後、この反応の無水生成物に上把反応物を滴下して、混合物を一時間攪拌した。その後、生成物を蒸発乾燥し（乾固させない）、残留物を50mlのエチルエーテルと50mlのＮメチルモルホリン水溶液（３％）とを用いて分配した。２層を分離し、有機層の量を20ml増量し（エーテルの添加）、３％のN-メチルモルホリン水溶液30mlを用いて１回洗争した。有機層を硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、フィルターを介して第２のフラスコに移した。この溶液に20mm olのN-メチルモルホリンと５mmolのトリエチルアミントリヒドロフルオライドを添加した。この溶液に50mlのN-メチルモルホリン水溶液（３％）を添加した（試験紙でのpHは約８）。２層を分離し、水層を５〜10mlまで濃縮した。これを分液漏斗に移し、50mlの酢酸エチルと75mlのpH3.5バッファー（pH3.5バッファーは0. 2Ｍのクエン酸と0.2ＭのNa₂HPO₄と0.2ＭのNaH₂PO₄とからなる）を添加した。分液し、有機層を硫酸ナトリウムを用いて乾燥、濾過し、濾液に10mmolのN-メチルモルホリンを添加した。その後、濾液を蒸発乾燥し、残留物を最小限量のジクロロメタンに溶解した。続いて、この溶液を氷温のエチルエーテル中に滴下して生成物を析出させた。減圧濾過を行って生成物を回収した。収量：1.65ｇ（43％）。実施例20 N-[N"-4,4'- ジメチルベンズヒドロールオキシカルボニル-(2"-アミノエチル)] -N-[2-[N'²-2-メチルスルホニル)エトキシカルボニル(9'-グアニル)]アセチル] グリシンの合成１mmolのN-[N"-4,4'-ジメチルベンズヒドロールオキシカルボニル-(2"-アミノエチル)]-N-[2-[N'²-2-（メチルチオ）エトキシカルボニル(9'-グアニル)]アセチル]グリシンに、６ mlの水および１mmmolのN-メチルモルホリン（ＮＭＭ）を添加した。固体が溶解するまで溶液を攪拌した。溶解後、１mmolのタングステン酸ナトリウムを攪拌しながら溶液に添加した。続いて、2.5mmolの過酸化水素（３％の過酸化水素水溶液）を添加した。反応物を攪拌し、ＨＰＬＣ分析でモニタリングした。１時間攪拌後、反応物を50℃に加熱して酸化速度を上げた。酸化がそれほど進まなかったので、反応物を冷却し、３％の過酸化水素水溶液をさらに２ml添加した。その後、ＨＰＬＣ分析によって残りの未酸化材料が約５％になったことが示されるまで、３％の過酸化水素溶液を５分おきに250μｌずつ添加した。反応物をさらに30 分間攪拌し、分液漏斗に移した。反応物に15mlのジクロロメタンと15mlのpH3.5 バッファー（pH3.5バッファーは、0.2Ｍのクエン酸と0.2ＭのNa₂HPO₄と0.2ＭのN aH₂PO₄とからなる）を添加した。乳化が見られたので、溶液に10mlの塩水を加え、静置して分離させた。有機層を回収し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過後、濾液に100μｌのN-メチルモルホリンを添加した。N-メチルモルホリンの追加によって溶液が不均質になったので、溶液全体を再び分液漏斗に移し、10mlの水、10 mlの塩水および10mlのジクロロメタンを添加した。分液し、有機層を回収し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、濾過後に濾液に200mlのN-メチルモルホリンを添加した。溶液を蒸発乾燥し、残留物を最小限量のジクロロメタンに溶解した。続いて、この溶液を氷冷のエチルエーテル中に攪拌しながら滴下して生成物を析出させた。減圧濾過を行って生成物を回収した。収量：0.561ｇの黄色固体（75％）。実施例21 ＰＮＡ配列：H₂N-CTTCTCC-CONH₂の合成合成樹脂：パーセプティブバイオシステムズ社製のアミノ基量が0.145mmol／ｇのBoc-BHA-PEG-PS(P/N GEN 063050)：50mg スケール：7.25マイクロモル（μＭ）スケール合成他の当量：５当量シントン 36μＭ４当量HATU^** 11mg／カップリング 10当量N-メチルモルホリン８μｌ／カップリング HATU＝Ｏ-7-アザベンゾトリアゾール-1-y1)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートモノマーは各カップリングステップの直前に調製した。１ml容の遠心チューブに入れた乾燥粉末に、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）／ジクロロメタン（ＤＣＭ）(1:1)を用いて調整した0.4ＭのN-メチルモルホリンを含む溶液180μｌを添加して溶解させた。次いで、この溶液に、ＤＭＦに溶解した0.16ＭのHATU180μ ｌを添加した。溶液を混合し、直後のカップリング反応に使用した（最終モノマー濃度は約0.1Ｍ）合成サイクル開裂 7.2mgの樹脂を取る。ミリポア社製のウルトラフリー装置（Ultrafree:Millipo re P/N SE3P230J3）に入れた樹脂に100mlのトテラヒドロフランと300μｌの濃縮水酸化アンモニウム溶液とを添加した。チューブを密閉し、溶液を55℃で一夜加熱した。ピペットを用いて注意深くビーズをウルトラフリー装置（Millipore P/ N SE3P230J3）へと移し、遠心分離して溶液を除去した。乾燥ＴＨＦを加えた後に遠心分離して、樹脂ビーズを４回洗浄した。最後に減圧下で樹脂を乾燥させた後、再び樹脂をウルトラフリー装置(Millipore P/N SE3P230J3)へと移し、 1.5時間ハイクリバレッジアシド^*(＝ＴＦＡ／トリフルオロメタンスルホン酸(TF MSA)/m-クレゾール(7:2:1))に漬けた。その後、遠心分離を行って酸開裂溶液を除去し、さらにハイクリバレッジアシド溶液を用いて２回樹脂を洗浄した。回収した酸溶液に１mlのエーテルを添加し、ＰＮＡオリゴマーが沈澱するまで遠心管を遠心分離機にかけた。デカンテーションによってエーテルを除去し、ＰＮＡペレットをエーテルに懸濁してから再び遠心分離してペレットを沈澱させることで２回洗浄した。残留エーテルをペレットから完全に揮発させ、ペレットを0.1％ＴＨＦ水溶液１mlに溶解した。粗生成物の逆相ＨＰＬＣ分析結果は図９に示した。さらに、生成物をプロトタイプ質量分析計でマトリックス支持レザー脱着イオン化−飛行時間型（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）質量分析法により分析した。分子量の計算値は（M+H）1822amu、検出された質量は1823amu（質量分析装置の誤差範囲）であった。実施例22 H₂N-CGCTATACCC-CONH₂ の合成合成樹脂：パーセプティブバイオシステムズ社製のアミノ基量が0.145mmol／ｇのBoc-BHA-PEG-PS(P/N GEN 063050)：80mg スケール：11.6マイクロモル（μＭ）スケール合成他の当量：５当量シントン 58μＭ４当量HATU 18mg／カップリング 10当量N-メチルモルホリン８μｌ／カップリングモノマーは各カップリングステップの直前に調製した。１ml容の遠心チューブに入れた乾燥粉末に、ＤＭＦ／ＤＣＭ(2:1)を用いて調整した0.8ＭのN-メチルモルホリンを含む溶液145μｌを添加して溶解させた。次いでこの溶液にＤＭＦに溶解した0.32ＭのHATU145μｌを添加した。溶液を混合し、直後のカップリング反応で使用した（最終モノマー濃度は約0.2Ｍ）。合成サイクル（注）：カップリング＃８（シトシンシントン）でカイザー試験はわずかにプラスであった。カップリング＃９（グアニンシントン）ではカイザーは顕著にプラスであった。ステップ９ではカップルを二重にしなけらばならなかった。カップリング＃10（シトシンシントン）のカップリング反応は15分間行わせた。カイザーは依然としてプラスであった。カップリング＃10ではダブルカップリングを行った。最終洗浄後、樹脂を減圧乾燥した。合計重量：0.1087ｇ（重量増加28.7mg）開裂 7.2〜7.5mgの樹脂を取る。ミリポア社製のウルトラフリー装置（Ultrafree:Mi llipore P/N SE3P230J3）に入れた樹脂に100mlのトテラヒドロフランと300μｌの濃縮水酸化アンモニウム溶液とを添加した。チューブを密閉し、溶液を56℃で２時間加熱した。ピペットを用いて注意深くビーズをウルトラフリー装置(Milli pore P/N SE3P230J3)へと移し、遠心分離を行って溶液を除去した。乾燥ＴＨＦを加えた後に遠心分離をして、樹脂ビーズを４回洗浄した。最後に減圧下で樹脂を乾燥させた。再び樹脂をウルトラフリー装置(Millipore P/N SE3P230J3)へと移し、１時間ハイクリバレッジアシド（＝ＴＦＡ／トリフルオロメタンスルホン酸(TFMSA)／m -クレゾール(7:2:1)）に漬けた。その後、遠心分離を行って酸開裂溶液を除去し、さらに１時間、樹脂をハイクリバレッジアシド溶液で処理した。遠心分離によって酸開裂溶液を除去し、両方の酸開裂溶液をウルトラフリー装置の遠心管底部に集めた。続いて回収した酸溶液に１mlのエーテルを加え、遠心管を遠心分離機にかけてＰＮＡオリゴマーを沈澱させた。エーテルをデカンテーションし、ペレットをエーテルに懸濁させて再び遠心分離によりペレットを形成させる方法で、ペレットをさらに２回洗浄した。残留エーテルをペレットから完全に揮発させ、ペレットを0.1％ＴＨＦ水溶液１mlに溶解した。精製前のオリゴマーの逆相分析結果を図10に示す。さらに、生成物をプロトタイプの質量分析計でマトリックス支持レザー脱着イオン化−時間飛行型（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）質量分析法により分析した。分子量の計算値は2648.5amu、検出された質量は(M+H)2650 amu（質量分析装置の誤差範囲）であった。実施例23 ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの合成合成したキメラ配列： DMBhoc-HN-CACA-CONH-リンカー-5'-ＣＣＡＧＴ-3'-OH ここでアンダーラインを引いた配列はＰＮＡの配列を表し、太字で記載した配列はＤＮＡの配列を表す。方法： 0.2μＭスケールの合成に関する標準プロトコルで運転される市販のＤＮＡ合成装置（パーセプティブバイオシステムズ社製：登録商標EXPEDITE）を用いて、 5'アミノ基が変性された配列：MMT-アミノヘキシル-CCAGTを有する担体に結合されたＤＮＡオリゴマーを合成した。合成用担体は0.2μＭメンシン合成装置(登録商標MENSYN：P/N GEN050034)を使用し、シントンはアシル（ベンゾイル、イソブチリル）環外アミノ保護基を有する標準のホスホラミダイトを用いた。最終的なカップリングは、メーカーに記載の市販のMMT-アミノヘキシル-ホスホラミダイト(パーセプティブバイオシステムズ社製P/N GEN080020)を用いて行った。モノメトキシトリチル(MMT)基は、ＤＮＡ合成装置で２つの標準的な保護解除サイクルを行って除去した。その後、MEMSYN器具をプロトタイプのＰＮＡ合成装置へと移した。残りのＰＮＡカップリングサイクルは、カラムへ試薬を最適に輸送するサイクルを行うプロトタイプの合成装置で行った。一般的なカップリングサイクルを以下に示す。合成後に最後のDMBhoc基は除去しなかった。水酸化アンモニウムによって側鎖保護基が解除されるまで末端アミノ酸は保護された状態に維持されることが必須である。時期尚早に除去されると、参考として本明細書に記載の米国特許出願第 09/109,548(199年月日提出：発明の名称『』)に記載のように、オリゴマーのＰＮＡ部分が部分的に分解する結果になる。開裂した。一方のメンブレンを４等分した。そのうちの１つにＴＦＡを２〜３滴添加した。濃い黄色によってDMBhocカチオンの存在が示された。このメンブレン片を続いてＤＣＭで洗浄し、ニンヒドリンで処理した。紫色によって期待された末端アミノ基の存在が示された。残りの合成メンブレンを密閉可能な遠心管に入れた。遠心管に１mlの濃水酸化アンモニウムを添加した。遠心管をしっかりと密閉し、55℃で６時間加熱した。水酸アンモニウム溶液を除去し、高速減圧蒸発器を用いて蒸発乾固させた。残留物を50mM酢酸アンモニウムバッファー(pH7)200μｌに再溶解した。未精製オリゴマーの逆相ＨＰＬＣ分析結果を図11に示す。観察される主要な生成物をＨＰＬＣ検出器から溶出したピークを回収して精製した。単離された生成物を再びＨＰＬＣ分析して単離された画分の純度を確認した。生成物のクロマトグラムを図12に示す。再分析したクロマトグラムに見られる不純物ピークは、サンプルを注入せずに濃度勾配を設けたバッファーのみ（勾配のみ）を流すことによってバッファー由来の不純物であることが確認された（図13参照）。さらに、単離した生成物をプロトタイプの質量分析計を用いてマトリックス支持レザー脱着イオン化−飛行時間型（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）質量分析法により生成物を分析した。分子量の計算値は3184.7amu 、検出された質量は(M-H)3183.7amu（質量分析装置の誤差範囲）であった。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】平成９年６月９日（１９９７．６．９）【補正内容】請求の範囲１．下記で構成されるほぼ純粋な合成化合物：ＫＬＱＭＮここで、ＫおよびＮは化学結合であり、Ｑはリンカーまたは化学結合であり、ＬおよびＭの一方は下記式で表されるヌクレオチド部分であり：（ここで：Ｇは第２級窒素原子、アルキル置換基を有する第３級窒素原子、酸素原子または硫黄原子であり、Ｂは核酸塩基保護基を天然または非天然の核酸塩基に結合する結合を含む天然または非天然の核酸塩基であり、Ｄは水素原子、水酸基、メトキシ基または保護基によって保護された水酸基である）、ＬおよびＭの他方は下記式で表されるＰＮＡ部分である：（ここで：Ｇは第２級窒素原子、アルキル置換基を有する第３級窒素原子、酸素原子または硫黄原子であり、Ｂは核酸塩基保護基を天然または非天然の核酸塩基に結合する結合を含む天然または非天然の核酸塩基であり、Ｒ⁷は水素原子および保護されまたはされていない天然αアミノ酸の側鎖からなる群から選択され、ｊ、ｇおよびｈはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、互いに独立に０または１〜５の整数を表す、核酸塩基保護基を天然または非天然の核酸塩基に結合する上記結合は実質的に同じ条件で外れる。２．天然または非天然の核酸塩基がアデニン、シトシン、グアニン、プソイドイソシトシン、5-メチルシトシン、イソシトシン、6-チオグアニンおよび2,6-ジアミノプリンで構成される群の中から選択される請求項１に記載の化合物。３．ＫまたはＮの少なくとも一方が共有結合である請求項１に記載の化合物。４．核酸塩基保護基が塩基に対して不安定な保護基である請求項１に記載の化合物。５．塩基に対して不安定な保護基がカーバメート保護基である請求項４に記載の化合物。６．少なくとも一つのカーバメート保護基が下記式で表されるエトキシカルボニル基である請求項５に記載の化合物：（ここで：Ｗは電子吸引基であり、Ｒ²〜Ｒ⁴で表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、互いに独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル，n-ブチルまたはt- ブチルで構成される群の中から選択される）。７．Ｋが主鎖保護基を有する少なくとも１つの別のヌクレオチド部分または主鎖保護基を有するＰＮＡ部分にＬを連結する共有結合であり、主鎖保護基が核酸塩基保護基に対してオルソゴナルである請求項３に記載の化合物。８．主鎖保護基が酸に対して不安定な保護基である請求項７に記載の化合物。９．検出可能な部分を含む請求項１に記載の化合物。 10．検出可能な部分が酵素、抗原、放射性標識、親和性標識、蛍光標識、紫外線標識、赤外線標識で構成される群の中から選択される請求項９に記載の化合物。 11．下記式で表されるＰＮＡシントン：（ここで：Ｐｇは酸に対して不安定な保護基であり、Ｇは第２級窒素原子、アルキル置換基を有する第３級窒素原子、酸素原子または硫黄原子であり、Ｂａは塩基に対して不安定な保護基によって保護された環外アミノ基を有する天然または非天然の核酸塩基であり、Ｒ⁷は水素原子および保護されまたはされていない天然αアミノ酸の側鎖からなる群から選択され、ｊ、ｇおよびｈは互いに同一でも異なっていてもよく、互いに独立に０または１〜５の整数を表す） 12．Ｇが第２級窒素原子である請求項11に記載の化合物。 13．Ｐｇがカーバメート保護基である請求項12に記載の化合物。 14．Ｂａがアデニン、シトシン、グアニン、プソイドイソシトシン、5-メチルシトシン、イソシトシンおよび2,6-ジアミノプリンで構成される群の中から選択される請求項11に記載の化合物。 15．塩基に対して不安定なアミノ基保護基がカーバメート保護基である請求項11 に記載の化合物。 16．下記式で表されるＰＮＡシントン：（ここで、Ｐｇは酸に対して不安定な保護基であり、Ｂａは塩基に対して不安定な保護基によって保護された環外アミノ基を有する天然または非天然の核酸塩基である） 17．Ｐｇがカーバメート保護基である請求項16に記載の化合物。 18．カーバメート保護基が4,4'-ジメチルベンズヒドロキシカルボニル基である請求項17に記載の化合物。 19．Ｂａがアデニン、シトシン、グアニン、プソイドイソシトシン、5-メチルシトシン、イソシトシン、および2,6-ジアミノプリンで構成される群の中から選択される請求項16に記載の化合物。 20．塩基に対して不安定なアミノ保護基がカーバメート保護基である請求項16に記載の化合物。 21．カーバメート保護基が下記式で表されるエトキシカルボニル基である請求項 20に記載の化合物：（ここで：Ｗは電子吸引基であり、Ｒ²〜Ｒ⁴で表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル，n-ブチルまたはt-ブチルで構成される群の中から選択される） 22．カーバメート保護基が9-フルオレニルメチルオキシカルボニル基である請求項20に記載の化合物。 23．カーバメート保護基が下記式で表される1-シアノエトキシカルボニル基である請求項20に記載の化合物：（ここで、Ｒ²〜Ｒ⁴で表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソブロピル，n-ブチルまたは t-ブチルで構成される群の中から選択される） 24．カーバメート保護基が下記式で表されるスルホエトキシカルボニル基である請求項20に記載の化合物：（ここで：ｎは１または２であり、Ｒ²〜Ｒ⁴で表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル，n-ブチルまたはt-ブチルで構成される群の中から選択され、Ｒ⁵はメチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t-ブチルおよび置換基を有するまたは有しないフェニル基で構成される群の中から選択される） 25．フェニル基が下記式で表される請求項24に記載の化合物：（ここで、ａ〜ｅで表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、独立にＦ、Cl、Br、Ｉ、水素、メチル、エチル、イソプロピル、n-プロピル、n-ブチル、t-ブチル、フェニル、メトキシ、エトキシ、−ＮＯ₂、−ＣＮ、−ＳＯ₃Ｈ、− ＳＣＨ₃または−（Ｏ）ＳＣＨ₃で構成される群の中から選択される） 26．下記式で表されるＰＮＡシントン：ここで、Ｐｇ下記式で表される酸に対して不安定なアミノ保護基であり：（ここで、Ａ₁〜Ａ₁₀はそれぞれ同一でも異なっていてもよく、互いに独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t-ブチル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、アミドまたはエステル基で構成される群の中から選択され、Ｒ⁴は水素、メチルまたはエチル基で構成される群の中から選択される）Ｂａは下記式で表される塩基に対して不安定なアミノ保護基によって保護された環外アミノ基を有する天然または非天然の核酸塩基である：（ここで、Ｗは電子吸引基であり、Ｒ²〜Ｒ⁴で表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、互いに独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル，n-ブチルまたはt- ブチルで構成される群の中から選択される） 27．塩基に対して不安定な保護基が2,2-ジメチル-1-シアノエトキシカルボニル基である請求項26に記載の化合物。 28．塩基に対して不安定な保護基が2-（メチルスルホニル）エトキシカルボニル基または2-（フェニルスルホニル）エトキシカルボニル基である請求項26に記載の化合物。 29．下記式で表される請求項16に記載のＰＮＡシントン： 30．下記式で表される請求項16に記載のＰＮＡシントン：31．下記式で表される請求項16に記載のＰＮＡシントン：（ここで、ｎは１または２である） 32．下記式で表される請求項16に記載のＰＮＡシントン：（ここで、ｎは１または２である） 33．下記式で表されるＰＮＡシントン：34．下記式で表される請求項16に記載のＰＮＡシントン： 35．下記で横成されるほぼ純粋な組成の合成化合物：ＫＬＱＭＮここで、ＫおよびＮは化学結合であり、Ｑはリンカーまたは化学結合であり、ＬおよびＭは互いに同一でも異なっていてもよく、それぞれ独立に下記式て表されるＰＮＡ部分である：（ここで：Ｇは第２級窒素原子、アルキル置換基を有する第３級窒素原子、酸素原子または硫黄原子であり、Ｂａは塩基に対して不安定なアミノ保護基によって保護された環外アミノ基を有する天然または非天然の核酸塩基であり、Ｒ⁷は水素原子および保護されまたはされていない天然αアミノ酸の側鎖とで構成される群の中から選択され、ｊ、ｇおよびｈはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、互いに独立に０または１〜５の整数である） 36．下記(a)〜(c)のステップを含む分子合成方法：（a）化合物ＹとＺとの組み合わせを用意し、（ここで、ＹおよびＺの一方は下記式で表される３価のリンを含むヌクレオチド部分であり：（ここで、Ｐｎは水素原子または主鎖保護基であり、Ｇは第２級窒素原子、アルキル置換基を有する第３級窒素原子、酸素原子または硫黄原子であり、Ｂは核酸塩基保護基を含む天然または非天然の核酸塩基であり、Ｄは水素原子、水酸基、メトキシ基または保護基によって保護された水酸基であり、Ｒ⁶は除去可能な保護基であり、Ｌ¹は残基または化学結合である）ＹおよびＺの他方は下記式で表されるＰＮＡ部分であり：（ここで：Ｐａは水素原子または主鎖保護基であり、Ｇは第２級窒素原子、アルキル置換基を有する第３級窒素原子、酸素原子または硫黄原子であり、Ｂは核酸塩基保護基を含む天然または非天然の核酸塩基であり、Ｒ⁷は水素原子と、保護されまたはされていない天然αアミノ酸の側鎖とで構成される群の中から選択され、Ｌ²は水酸基、残基または化学結合であり、ｊ、ｇおよびｈはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、互いに独立に０または１〜５の整数である）ＰｎおよびＰａの一方は水素原子であり、ＰｎおよびＰａの他方は核酸塩基保護基に対してオルソゴナルな主鎖保護基である）（b）ＹをＺにカップリングさせ、（c）３価のリンを酸化する。 37．Ｒ⁶が下記式で表される基である請求項36に記載の方法：ここで、Ｖ₁〜Ｖ₃で表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、それぞれ独立に水素、メチルまたはエチル基から選択され、Ｗは電子吸引基である。 38．Ｌ¹が、Ｆ、Cl、Br、Ｉおよび下記式で表される第２級アミノ基で構成される群の中から選択される請求項36に記載の方法： −ＮＲ⁸Ｒ⁹ （ここで、Ｒ⁸およびＲ⁹で表される基は互いに同一でも異なっていてもよく、それぞれ独立に１〜10個の炭素原子を有する第１級、第２級または第３級アルキル基から選択されるか、一緒になって５〜７個の炭素原子を有するシクロアルキル基（ヘテロ原子として１個または２個の窒素原子、酸素原子あるいは硫黄原子を含有することができる）から選択される） 39．核酸塩基保護基が塩基に対して不安定な保護基である請求項36に記載の方法。 40．下記の(d)および(e)のステップをさらに含む請求項36に記載の方法：（d）ＰｎおよびＰａのいずれか水素原子でない方を外し、（e）核酸塩基保護基を外す。 41．上記分子が固体担体に連結されている請求項36に記載の方法。 42．下記(d)および(e)のステップをさらに含む請求項41に記載の方法：（d）ＰｎおよびＰａのうちの水素原子でない方を除去してカップリング部位を作り、（e）主鎖保護基を有する少なくとも１つの別のヌクレオチド部分または主鎖保護基を有するＰＮＡ部分を上記カップリング部位にカップリングさせる。 43．下記の(f)および(g)のステップをさらに含む請求項42に記載の方法：（f）主鎖の保護基を除去してもう１つのカップリング部位を作り、（g）主鎖保護基を有する少なくとも１つの別のヌクレオチド部分または主鎖保護基を有するＰＮＡ部分を上記のもう１つのカップリング部位にカップリングさせる。 44．ステップ(f)および(g)を複数回行う請求項43に記載の方法。 45．ヌクレオチドまたはＰＮＡ部分が核酸塩基であり、この核酸塩基が保護基されまたはされていない天然または非天然核酸塩基である請求項42、43または44に記載の方法。 46．下記の(h)および(i)のステップをさらに含む請求項44に記載の方法：（h）核酸塩基保護基を除去し、（i）上記分子を固体担体から開裂させる。 47．下記のステップ(j)をさらに含む請求項46に記載の方法：（j）主鎖保護蔭を除去する。 48．ＰＮＡ部分が下記式で表される請求項36に記載の方法：（ここで、Ｐａは水素または主鎖保護基であり、Ｂは核酸塩基保護基塩を含む天然または非天然核酸塩基である） 49．天然または非天然核酸塩基がアデニン、シトシン、グアニン、プソイドイソシトシン、5-メチルシトシン、イソシトシン、6-チオグアニンおよび2,6-ジアミノプリンで構成される群の中から選択される請求項48に記載の方法。 50．酸に対して不安定な基によってアミノ基が保護された主鎖を合成するための下記ステップ(a)〜(d)を含む方法：（a）アルコールを用意し、（b）ジアミンの一つのアミノ基と一緒にカーバメート保護基を形成させる相当するカルボニルを用いてアルコールをジアミンにカップリングさせ、（c）ジアミンの別のアミノ基がアセタミド誘導体を形成させ、（d）アセタミド誘導体をアルキルカルボニル基へ変換する。 51．アルコールが下記式で表されるベンズヒドロール誘導体である請求項50に記載の方法：（ここで、Ａ₁〜Ａ₁₀はそれぞれ同一でも異なっていてもよく、互いに独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t-ブチル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、アミドまたはエステル基で構成される群の中から選択され、Ｒ⁴は水素、メチルまたはエチル基で構成される群の中から選択される） 52．ジアミンがエチレンジアミンまたはメチレンジアミンである請求項50に記載の方法。 53．下記式で表される酸に対して不安定な保護基でアミノ基保護された主鎖：ここで、Ｐｇは下記式で表される酸に対して不安定な保護基であり：（ここで：Ａ₁〜Ａ₁₀はそれぞれ同一でも異なっていてもよく、互いに独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t-ブチル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、アミノおよびアルキルアミノ基で構成される群の中から選択され、Ｒ⁴は水素、メチルまたはエチル基で構成される群の中から選択される）Ｒ⁷は水素および保護されまたはされていない天然αアミノ酸の側鎖とで構成される群の中から選択され、ｇおよびｈはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、互いに独立に０または１〜５の整数である。 54．酸に対して不安定な保護基でアミノ基保護された主鎖が下記式で表される請求項53に記載の化合物：ここで、Ｐｇは下記式で表される酸に対して不安定な保護基である：（ここで、Ａ₁〜Ａ₁₀はそれぞれ同一でも異なっていてもよく、互いに独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t-ブチル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、アミノおよびアルキルアミノ基で構成される群の中から選択され、Ｒ⁴は、水素、メチルまたはエチル基で構成される群の中から選択される） 55．削除 56．請求項１の化合物を生物に投与する段階を含む、請求項１の化合物の治療薬またはアンチセンス剤での使用。 57．請求項１の化合物を核酸ポリマーと接触させる段階を含む請求項１の化合物のポリメラーゼ反応用プライマーとしての使用。 58．請求項１の化合物を核酸ポリマーと接触させる段階を含む請求項１の化合物の遺伝子材料検出用プローブでの使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０７Ｄ 239/54 Ｃ０７Ｄ 473/18 473/18 473/34 ３６１ 473/34 ３６１Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＣ１２Ｑ 1/68 Ｃ０７Ｄ 239/54 Ｚ // Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ

Claims

【特許請求の範囲】１．下記で構成されるほぼ純粋な合成化合物：ＫＬＱＭＮここで、ＫおよびＮは化学結合であり、Ｑはリンカーまたは化学結合であり、ＬおよびＭの一方は下記式で表されるヌクレオチド部分であり：（ここで：Ｇは第２級窒素原子、アルキル置換基を有する第３級窒素原子、酸素原子または硫黄原子であり、Ｂは保護されまたはされていない天然または非天然の核酸塩基であり、Ｄは水素原子、水酸基、メトキシ基または保護基によって保護された水酸基である）ＬおよびＭの他方は下記式で表されるＰＮＡ部分である：（ここで：Ｇは第２級窒素原子、アルキル置換基を有する第３級窒素原子、酸素原子または硫黄原子であり、Ｂは保護されまたはされていない天然または非天然の核酸塩基であり、Ｒ⁷は水素原子および保護されまたはされていない天然αアミノ酸の側鎖からなる群から選択され、ｊ、ｇおよびｈはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、互いに独立に０または１〜５の整数を表す）２．Ｂがアデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシル、プソイドイソシトシン、5-メチルシトシン、ヒポキサンチン、イソシトシン、プソイドウラシルおよび2,6-ジアミノプリンで構成される群の中から選択される請求項１に記載の化合物。３．ＫまたはＮの少なくとも一方が共有結合である請求項１に記載の化合物。４．Ｂが塩基に対して不安定な保護基によって保護された環外アミノ基を含む保護された天然または非天然の核酸塩基である請求項１に記載の化合物。５．塩基に対して不安定な保護基がカーバメート保護基である請求項４に記載の化合物。６．カーバメート保護基が下記式で表されるエトキシカルボニル基である請求項５に記載の化合物：（ここで：Ｗは電子吸引基であり、Ｒ²〜Ｒ⁴で表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、互いに独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル，n-ブチルまたはt- ブチルで構成される群の中から選択される）。７．Ｋが主鎖保護基を有する少なくとも１つの別のヌクレオチド部分か主鎖保護基を有するＰＮＡ部分にＬを連結する共有結合である請求項３に記載の化合物。８．主鎖保護基が酸に対して不安定な保護基である請求項７に記載の化合物。９．検出可能な部分を含む請求項１に記載の化合物。 10．検出可能な部分が酵素、抗原、放射性標識、親和性標識、蛍光標識、紫外線標識、赤外線標識で構成される群の中から選択される請求項９に記載の化合物。 11．下記式で表されるＰＮＡシントン：（ここで：Ｐｇは酸に対して不安定な保護基であり、Ｇは第２級窒素原子、アルキル置換基を有する第３級窒素原子、酸素原子または硫黄原子であり、Ｂａは塩基に対して不安定な保護基によって保護された環外アミノ基を有する天然または非天然の核酸塩基であり、Ｒ⁷は水素原子および保護されまたはされていない天然αアミノ酸の側鎖からなる群から選択され、ｊ、ｇおよびｈは互いに同一でも異なっていてもよく、互いに独立に０または１〜５の整数を表す） 12．Ｇが第２級窒素原子である請求項11に記載の化合物。 13．Ｐｇがカーバメート保護基である請求項12に記載の化合物。 14．Ｂａがアデニン、シトシン、グアニン、プソイドイソシトシン、5-メチルシトシン、イソシトシンおよび2,6-ジアミノプリンで構成される群の中から選択される請求項11に記載の化合物。 15．塩基に対して不安定なアミノ基保護基がカーバメート保護基である請求項11 に記載の化合物。 16．下記式で表されるＰＮＡシントン：（ここで、Ｐｇは酸に対して不安定なアミノ保護基であり、Ｂａは塩基に対して不安定なアミノ保護基によって保護された環外アミノ基を有する天然または非天然の核酸塩基である） 17．Ｐｇがカーバメート保護基である請求項16に記載の化合物。 18．カーバメート保護基が4,4'-ジメチルベンズヒドロールオキシカルボニル基である請求項17に記載の化合物。 19．Ｂａがアデニン、シトシン、グアニン、プソイドイソシトシン、5-メチルシトシン、イソシトシン、および2,6-ジアミノプリンで構成される群の中から選択される請求項16に記載の化合物。 20．塩基に対して不安定なアミノ保護基がカーバメート保護基である請求項16に記載の化合物。 21．カーバメート保護基が下記式で表されるエトキシカルボニル基である請求項 20に記載の化合物：（ここで：Ｗは電子吸引基であり、Ｒ²〜Ｒ⁴で表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル，n-ブチルまたはt-ブチルで構成される群の中から選択される。） 22．カーバメート保護基が9-フルオレニルメチルオキシカルボニル基である請求項20に記載の化合物。 23．カーバメート保護基が下記式で表される1-シアノエトキシカルボニル基である請求項20に記載の化合物：（ここで、Ｒ²〜Ｒ⁴で表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル，n-ブチルまたは t-ブチルで構成される群の中から選択される） 24．カーバメート保護基が下記式で表されるスルホエトキシカルボニル基である請求項20に記載の化合物：（ここで：ｎは１または２であり、Ｒ²〜Ｒ⁴で表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル，n-ブチルまたはt-ブチルで構成される群の中から選択され、Ｒ⁵はメチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t-ブチルおよび置換基を有するまたは有しないフェニル基で構成される群の中から選択される） 25．フェニル基が下記式で表される請求項24に記載の化合物：（ここで、ａ〜ｅで表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、独立にＦ、Cl、Br、Ｉ、水素、メチル、エチル、イソプロピル、n-プロピル、n-ブチル、t-ブチル、フェニル、メトキシ、エトキシ、−ＮＯ₂、−ＣＮ、−ＳＯ₃Ｈ、− ＳＣＨ₃ または−（Ｏ）ＳＣＨ₃で構成される群の中から選択される） 26．下記式で表されるＰＮＡシントン：ここで、Ｐｇ下記式で表される酸に対して不安定なアミノ保護基であり：（ここで、Ａ₁〜Ａ₁₀はそれぞれ同一でも異なっていてもよく、互いに独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t-ブチル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、アミドまたはエステル基で構成される群の中から選択され、Ｒ⁴は水素、メチルまたはエチル基で構成される群の中から選択される）Ｂａは下記式で表される塩基に対して不安定なアミノ保護基によって保護された環外アミノ基を有する天然または非天然の核酸塩基である：（ここで、Ｗは電子吸引基であり、Ｒ²〜Ｒ⁴で表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、互いに独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル，n-ブチルまたはt- ブチルで構成される群の中から選択される） 27．塩基に対して不安定な保護基が2,2-ジメチル-1-シアノエトキシカルボニル基である請求項26に記載の化合物。 28．塩基に対して不安定な保護基が2-（メチルスルホニル）エトキシカルボニル基または2-（フェニルスルホニル）エトキシカルボニル基である請求項26に記載の化合物。 29．下記式で表される請求項16に記載のＰＮＡシントン： 30．下記式で表される請求項16に記載のＰＮＡシントン：31．下記式で表される請求項16に記載のＰＮＡシントン：（ここで、ｎは１または２である） 32．下記式で表される請求項16に記載のＰＮＡシントン：（ここで、ｎは１または２である） 33．下記式で表されるＰＮＡシントン：34．下記式で表される請求項16に記載のＰＮＡシントン： 35．下記で構成されるほぼ純粋な組成の合成化合物：ＫＬＱＭＮここで、ＫおよびＮは化学結合であり、Ｑはリンカーまたは化学結合であり、ＬおよびＭは互いに同一でも異なっていてもよく、それぞれ独立に下記式で表されるＰＮＡ部分である：（ここで：Ｇは第２級窒素原子、アルキル置換基を有する第３級窒素原子、酸素原子または硫黄原子であり、Ｂａは塩基に対して不安定なアミノ保護基によって保護された環外アミノ基を有する天然または非天然の核酸塩基であり、Ｒ⁷は水素原子および保護されまたはされていない天然αアミノ酸の側鎖とで構成される群の中から選択され、ｊ、ｇおよびｈはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、互いに独立に０または１〜５の整数である） 36．下記(a)〜(c)のステップを含む分子合成方法： (a)化合物ＹとＺとの組み合わせを用意し、（ここで、ＹおよびＺの一方は下記式で表される３価のリンを含むヌクレオチド部分であり：（ここで、Ｐｎは水素原子または保護基であり、Ｇは第２級窒素原子、アルキル置換基を有する第３級窒素原子、酸素原子または硫黄原子であり、Ｂは保護されまたはされていない天然または非天然の核酸塩基であり、Ｄは水素原子、水酸基、メトキシ基または保護基によって保護された水酸基であり、Ｒ⁶は除去可能な保護基であり、Ｌ¹は残基または化学結合である）ＹおよびＺの他方は下記式で表されるＰＮＡ部分であり：（ここで：Ｐａは水素原子または保護基であり、Ｇは第２級窒素原子、アルキル置換基を有する第３級窒素原子、酸素原子または硫黄原子であり、Ｂは保護されまたはされていない天然あるいは非天然の核酸塩基であり、Ｒ⁷は水素原子と、保護されまたはされていない天然αアミノ酸の側鎖とで構成される群の中から選択され、Ｌ²は水酸基、残基または化学結合であり、ｊ、ｇおよびｈはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、互いに独立に０または１〜５の整数である）ＰｎおよびＰａの一方は水素原子である） (b)ＹをＺにカップリングさせ、 (c)３価のリンを酸化する。 37．Ｒ⁶が下記式で表される基である請求項36に記載の方法：ここで、Ｖ₁〜Ｖ₃で表される原子または基は互いに同一でも異なっていてもよく、それぞれ独立に水素、メチルまたはエチル基から選択され、Ｗは電子吸引基である。 38．Ｌ¹が、Ｆ、Cl、Br、Ｉおよび下記式で表される第２級アミノ基で構成される群の中から選択される請求項36に記載の方法： −ＮＲ⁸Ｒ⁹ （ここで、Ｒ⁸およびＲ⁹で表される基は互いに同一でも異なっていてもよく、それぞれ独立に1〜10個の炭素原子を有する第１級、第２級または第３級アルキル基から選択されるか、一緒になって５〜７個の炭素原子を有するシクロアルキル基（ヘテロ原子として１個または２個の窒素原子、酸素原子あるいは硫黄原子を含有することができる）から選択される） 39．少なくとも１つのＢが塩基に対して不安定な保護基を有する保護された天然または非天然の核酸塩基すなわちＢａである請求項36に記載の方法。 40．下記の(c)および(d)のステップをさらに含む請求項39に記載の方法： (c)ＰｎおよびＰａのいずれか水素原子でない方を外し、 (d)塩基に対して不安定な保護基を外す。 41．上記分子が固体担体に連結さている請求項36に記載の方法。 42．下記(c)および(d)のステップをさらに含む請求項41に記載の方法： (c)ＰｎおよびＰａのうちの水素原子でない方を除去してカップリング部位を作り、 (d)主鎖保護基を有する少なくとも１つの別のヌクレオチドまたはＰＮＡ部分を上記カップリング部位にカップリングさせる。 43．下記の(e)および(f)のステップをさらに含む請求項42に記載の方法： (e)主鎖の保護基を除去してもう１つのカップリング部位を作り、 (f)少なくとも１つの別のヌクレオチドまたは主鎖保護基を有するＰＮＡ部分を上記のもう１つのカップリング部位にカップリングさせる。 44．ステップ(e)および(f)を複数回行う請求項43に記載の方法。 45．少なくとも１つのＢが塩基に対して不安定な保護基を有する保護護された天然または非天然の核酸塩基である請求項42、43または44に記載の方法。 46．下記の(g)および(h)のステップをさらに含む請求項45に記載の方法： (g)塩基に対して不安定な保護基を除去し、 (h)上記分子を固体担体から開裂させる。 47．下記のステップ(i)をさらに含む請求項46に記載の方法： (i)主鎖保護基を除去する。 48．ＰＮＡ部分が主鎖保護基を有し、該部分が下記式で表される請求項39に記載の方法：（ここで、Ｐｇは酸に対して不安定な保護基であり、Ｂａは塩基に対して不安定な保護基によって保護された環外アミノ基有する天然または非天然核酸塩基である） 49．Ｂａがアデニン、シトシン、グアニン、プソイドイソシトシン、5-メチルシトシン、イソシトシン、および2,6-ジアミノプリンで構成される群の中から選択される請求項39に記載の方法。 50．酸に対して不安定な基によってアミノ基が保護された主鎖を合成するための下記ステップ(a)〜(d)を含む方法： (a)アルコールを用意し、 (b)アミノ基上にカーバメート保護基を形成させるジアミンに相当するカルボニルを用いてアルコールをカップリングさせ、 (c)ジアミンのアミノ基がカーバメートとして保護されていないアセタミド誘導体を形成させ、 (d)アセタミド誘導体をアルキルカルボニル基へ変換する。 51．アルコールが下記式で表されるベンズヒドロール誘導体である請求項50に記載の方法：（ここで、Ａ₁〜Ａ₁₀はそれぞれ同一でも異なっていてもよく、互いに独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t-ブチル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、アミドまたはエステル基で構成される群の中から選択され、Ｒ⁴は水素、メチルまたはエチル基で構成される群の中から選択される） 52．ジアミンがエチレンジアミンまたはメチレンジアミンである請求項50に記載の方法。 53．酸に対して不安定な保護基でアミノ基が保護された下記式で表される主鎖：ここで、Ｐｇは下記式で表される酸に対して不安定な保護基であり：（ここで：Ａ₁〜Ａ₁₀はそれぞれ同一でも異なっていてもよく、互いに独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n- ブチル、t-ブチル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、アミノおよびアルキルアミノ基で構成される群の中から選択され、Ｒ⁴は水素、メチルまたはエチル基で構成される群の中から選択される）Ｒ⁷は水素および保護されまたはされていない天然αアミノ酸の側鎖とで構成される群の中から選択され、ｇおよびｈはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、互いに独立に０または１〜５の整数である。 54．酸に対して不安定な保護基でアミノ基が保護された主鎖が下記式で表される請求項53に記載の化合物：ここで、Ｐｇは下記式で表される酸に対して不安定な保護基である：（ここで、Ａ₁〜Ａ₁₀はそれぞれ同一でも異なっていてもよく、互いに独立に水素、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t-ブチル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、アミノおよびアルキルアミノ基で構成される群の中から選択され、Ｒ⁴は、水素、メチルまたはエチル基で構成される群の中から選択される） 55．電子供与基がアルキル基、水酸基およびアルコキシ基で構成される群の中から選択される請求項51に記載の方法。 56．請求項１の化合物を生物に投与する段階を含む、請求項１の化合物の治療薬またはアンチセンス剤での使用。 57．請求項１の化合物を核酸ポリマーと接触させる段階を含む請求項１の化合物のポリメラーゼ反応用プライマーとしての使用。 58．請求項１の化合物を核酸ポリマーと接触させる段階を含む請求項１の化合物の遺伝子材料検出用プローブでの使用。