JPH08208686A - アミド主鎖を有するオリゴリボヌクレオチド - Google Patents
アミド主鎖を有するオリゴリボヌクレオチドInfo
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- JPH08208686A JPH08208686A JP7308739A JP30873995A JPH08208686A JP H08208686 A JPH08208686 A JP H08208686A JP 7308739 A JP7308739 A JP 7308739A JP 30873995 A JP30873995 A JP 30873995A JP H08208686 A JPH08208686 A JP H08208686A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 酵素的開裂に対して結合が安定であり、かつ
中性であり、ＲＮＡとの結合親和性及び特異性を有し、
水溶性主鎖結合を有するアンチセンス分子を提供するこ
と。 【解決手段】 式（Ｉ）： 【化２２】 （式中、Ｒ1 は、Ｈ、Ｃ1 〜Ｃ4 アルキル、Ｃ1 〜Ｃ18
アシル又はヒドロキシ低級アルキルであり、Ｒ2 は、
Ｈ、アラルキル又はＣ1 〜Ｃ4 アルキルであり、Ｂは、
アデニン、シトシン、グアニン、チミン及びウラシルか
らなる群より選択されるヌクレオシド塩基残基であり、
Ｘは、Ｈ、ＯＲ1 、ＮＨＲ2 又はＮＨ−アシルであり、
Ｙは、ＯＲ2 又はＮＨＲ2 であり、そしてｎは、５〜２
５の数である）の構造で示されるオリゴマー及びその
塩。
中性であり、ＲＮＡとの結合親和性及び特異性を有し、
水溶性主鎖結合を有するアンチセンス分子を提供するこ
と。 【解決手段】 式（Ｉ）： 【化２２】 （式中、Ｒ1 は、Ｈ、Ｃ1 〜Ｃ4 アルキル、Ｃ1 〜Ｃ18
アシル又はヒドロキシ低級アルキルであり、Ｒ2 は、
Ｈ、アラルキル又はＣ1 〜Ｃ4 アルキルであり、Ｂは、
アデニン、シトシン、グアニン、チミン及びウラシルか
らなる群より選択されるヌクレオシド塩基残基であり、
Ｘは、Ｈ、ＯＲ1 、ＮＨＲ2 又はＮＨ−アシルであり、
Ｙは、ＯＲ2 又はＮＨＲ2 であり、そしてｎは、５〜２
５の数である）の構造で示されるオリゴマー及びその
塩。
Description
【０００１】合成オリゴヌクレオチドと、ＲＮＡ又は一
本鎖ＤＮＡとの間の特異性の高い相互作用は、分子生物
学における多くの応用につながった。オリゴヌクレオチ
ドは、クローニングのためのハイブリダイゼーションプ
ローブ、診断検定及びポリメラーゼ鎖反応技術（ＰＣ
Ｒ）に不可欠なプライマー試薬として使用される。結合
の特異性は、ワトソン−クリック塩基対規則によって支
配される。この特徴は、オリゴヌクレオチド試薬の設計
を、容易にし、標的ＲＮＡ又はＤＮＡ配列の知識のみを
必要とするものにしている。この魅力的な原理をさらに
拡大したものとして、オリゴヌクレオチドとその相補的
ｍＲＮＡ配列との結合が、特定のタンパク質生成物の翻
訳過程を阻害するための新たな手段として研究されてき
た。１９７８年には、Zamecnik及びStephensonが、ラウ
ス肉腫ウイルスに感染したニワトリ繊維芽細胞における
その発現の阻害でのこの方法の有用性を実証した（Zame
cnik, P.C.; Stephenson, M.L. Proc. Natl Acad. Sci.
U.S.A. 1978 75, 280）。この開拓的な仕事が、この分
野の研究の開花につながり、この概念を展開して治療に
応用することに多大な関心を呼び起こした。使用された
オリゴヌクレオチド剤がｍＲＮＡ標的に含まれた遺伝子
メッセージの意味（センス）に対して相補的（アンチ）
であったため、この新たな方法は「アンチセンスＤＮ
Ａ」技術と呼ばれるようになった。
本鎖ＤＮＡとの間の特異性の高い相互作用は、分子生物
学における多くの応用につながった。オリゴヌクレオチ
ドは、クローニングのためのハイブリダイゼーションプ
ローブ、診断検定及びポリメラーゼ鎖反応技術（ＰＣ
Ｒ）に不可欠なプライマー試薬として使用される。結合
の特異性は、ワトソン−クリック塩基対規則によって支
配される。この特徴は、オリゴヌクレオチド試薬の設計
を、容易にし、標的ＲＮＡ又はＤＮＡ配列の知識のみを
必要とするものにしている。この魅力的な原理をさらに
拡大したものとして、オリゴヌクレオチドとその相補的
ｍＲＮＡ配列との結合が、特定のタンパク質生成物の翻
訳過程を阻害するための新たな手段として研究されてき
た。１９７８年には、Zamecnik及びStephensonが、ラウ
ス肉腫ウイルスに感染したニワトリ繊維芽細胞における
その発現の阻害でのこの方法の有用性を実証した（Zame
cnik, P.C.; Stephenson, M.L. Proc. Natl Acad. Sci.
U.S.A. 1978 75, 280）。この開拓的な仕事が、この分
野の研究の開花につながり、この概念を展開して治療に
応用することに多大な関心を呼び起こした。使用された
オリゴヌクレオチド剤がｍＲＮＡ標的に含まれた遺伝子
メッセージの意味（センス）に対して相補的（アンチ）
であったため、この新たな方法は「アンチセンスＤＮ
Ａ」技術と呼ばれるようになった。
【０００２】ホスホロチオエートは広く知られるアンチ
センス化合物である。これらは、ホスホジエステル基中
の１個の酸素が硫黄によって置換されている主鎖類似体
である。この小さな変更がこの分子をヌクレアーゼ耐性
にし、それらが細胞培養及び動物モデルにおいて生物学
的活性を示すことを可能にしている。ホスホロチオエー
トアンチセンス薬は、抗ウイルス剤及び抗ガン剤として
の臨床試用の段階に入っている。
センス化合物である。これらは、ホスホジエステル基中
の１個の酸素が硫黄によって置換されている主鎖類似体
である。この小さな変更がこの分子をヌクレアーゼ耐性
にし、それらが細胞培養及び動物モデルにおいて生物学
的活性を示すことを可能にしている。ホスホロチオエー
トアンチセンス薬は、抗ウイルス剤及び抗ガン剤として
の臨床試用の段階に入っている。
【０００３】しかし、ホスホロチエートアンチセンス薬
の可能性は依然として有望ではあるが、その副作用のた
め、新たなタイプのアンチセンス剤が求められている。
具体的には、ホスホロチオエートのポリチオエート主鎖
がイオン性であるため、非−アンチセンス副活性がホス
ホロチオエートによって示される。これらの副活性は、
タンパク質結合（Stein, C.A.; Narayanan, R. Current
Opinion in Oncology, 6 （1994）584 ）、免疫細胞の
活性化及び転写因子（Branda, R.F.; Moore, A.L.; Mat
hews, L.; Mathews, L.; McCormack, J.J.; Zon, G. Bi
ochem. Pharmacol. 1993, 8, 33; and McIntyre, K.W.
et al. Antisense Res. Devel, 1993, 3, 309 ）並びに
部分的な相補的結合による非−標的配列のＲＮａｓｅ
Ｈ開裂（Giles, R.V.; Spiller, D.G.; Tidd, D.M. Ant
icancer Drug Design 1993, 8, 33 ）に影響する。
の可能性は依然として有望ではあるが、その副作用のた
め、新たなタイプのアンチセンス剤が求められている。
具体的には、ホスホロチオエートのポリチオエート主鎖
がイオン性であるため、非−アンチセンス副活性がホス
ホロチオエートによって示される。これらの副活性は、
タンパク質結合（Stein, C.A.; Narayanan, R. Current
Opinion in Oncology, 6 （1994）584 ）、免疫細胞の
活性化及び転写因子（Branda, R.F.; Moore, A.L.; Mat
hews, L.; Mathews, L.; McCormack, J.J.; Zon, G. Bi
ochem. Pharmacol. 1993, 8, 33; and McIntyre, K.W.
et al. Antisense Res. Devel, 1993, 3, 309 ）並びに
部分的な相補的結合による非−標的配列のＲＮａｓｅ
Ｈ開裂（Giles, R.V.; Spiller, D.G.; Tidd, D.M. Ant
icancer Drug Design 1993, 8, 33 ）に影響する。
【０００４】イオン性主鎖による非−アンチセンス活性
を減らすために、ホスホジエステル結合がアミドで置換
されたいくつかの改質残基を含むオリゴヌクレオチドが
合成された（Burgess, K.; Gibbs, R.A.; Metzker, M.
L.; Raghavachari, R.J., C.S. Chem. Commun. 1994, 9
15; Chur, A.; Holst, B.; Dahl, O.; Valentin-Hanse
n, P.; Pedersen, E.B. Nucleic Acid Res. 1993, 21,
5179; Idziak, I.; Just, G.; Damha, M.; Giannaris,
P. Tet. Lett. 1993, 34, 5417; De Mesmaeker,A.; Wal
dner, A.; Lebreton, J.; Hoffmann, P.; Fritsch, V.;
Wolf. R.; Freier, S. Angew. Chem. Intl. Ed. Engl.
1994, 33, 226 ）。これらの改質結合を一本鎖ＤＮＡ
分子に組み込むと、普通、相補的ＲＮＡ又はＤＮＡのい
ずれかとの結合親和性が結果的に低下する。しかし、ア
ミド基によるホスホジエステル基の全置換の例は報告さ
れていない。
を減らすために、ホスホジエステル結合がアミドで置換
されたいくつかの改質残基を含むオリゴヌクレオチドが
合成された（Burgess, K.; Gibbs, R.A.; Metzker, M.
L.; Raghavachari, R.J., C.S. Chem. Commun. 1994, 9
15; Chur, A.; Holst, B.; Dahl, O.; Valentin-Hanse
n, P.; Pedersen, E.B. Nucleic Acid Res. 1993, 21,
5179; Idziak, I.; Just, G.; Damha, M.; Giannaris,
P. Tet. Lett. 1993, 34, 5417; De Mesmaeker,A.; Wal
dner, A.; Lebreton, J.; Hoffmann, P.; Fritsch, V.;
Wolf. R.; Freier, S. Angew. Chem. Intl. Ed. Engl.
1994, 33, 226 ）。これらの改質結合を一本鎖ＤＮＡ
分子に組み込むと、普通、相補的ＲＮＡ又はＤＮＡのい
ずれかとの結合親和性が結果的に低下する。しかし、ア
ミド基によるホスホジエステル基の全置換の例は報告さ
れていない。
【０００５】より高い結合親和性をもつ別のタイプの類
似体は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）である（Nielsen, P.;
Egholm, M.; Berg, R.; Buchardt, O. Science, 1991,
254, 1497）。これらの分子は、糖−リン酸エステル主
鎖ではなくペプチド主鎖に結合したよく知られた核酸塩
基、すなわちアデニン、グアニン、チミン及びシトシン
を含有する。このタイプの化合物はＤＮＡ及びＲＮＡに
対する高い結合親和性を有しているが、ＲＮＡの平行な
相補的配列に結合するだけでなく、逆平行な相補的配列
にも結合することにより、特異性に劣る。そのうえ、こ
れらの分子の水溶性が乏しいことは、それらの実用を妨
げる欠点となっている。
似体は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）である（Nielsen, P.;
Egholm, M.; Berg, R.; Buchardt, O. Science, 1991,
254, 1497）。これらの分子は、糖−リン酸エステル主
鎖ではなくペプチド主鎖に結合したよく知られた核酸塩
基、すなわちアデニン、グアニン、チミン及びシトシン
を含有する。このタイプの化合物はＤＮＡ及びＲＮＡに
対する高い結合親和性を有しているが、ＲＮＡの平行な
相補的配列に結合するだけでなく、逆平行な相補的配列
にも結合することにより、特異性に劣る。そのうえ、こ
れらの分子の水溶性が乏しいことは、それらの実用を妨
げる欠点となっている。
【０００６】したがって、いくつかの特徴を有する、す
なわち、酵素的開裂に対して結合が安定であり、ポリア
ニオン性構造に伴う副作用を避けるために中性であり、
ＲＮＡとのその結合に受け入れられる親和性及び特異性
を有し、望ましい物理化学的性質、例えば水溶性を有す
るべきである主鎖結合をもつアンチセンス分子が求めら
れている。本発明のアンチセンス分子はこれらの要求を
満たす。既存の技術に対比して、本発明のアンチセンス
分子は、ホスホジエステル結合主鎖全体がアミド結合主
鎖によって置換されている新規な分類のオリゴヌクレオ
チドである。
なわち、酵素的開裂に対して結合が安定であり、ポリア
ニオン性構造に伴う副作用を避けるために中性であり、
ＲＮＡとのその結合に受け入れられる親和性及び特異性
を有し、望ましい物理化学的性質、例えば水溶性を有す
るべきである主鎖結合をもつアンチセンス分子が求めら
れている。本発明のアンチセンス分子はこれらの要求を
満たす。既存の技術に対比して、本発明のアンチセンス
分子は、ホスホジエステル結合主鎖全体がアミド結合主
鎖によって置換されている新規な分類のオリゴヌクレオ
チドである。
【０００７】本発明は、アミド結合によって結合した改
質リボヌクレオシドモノマー単位からなる新規なタイプ
のオリゴマー（オリゴリボヌクレオチド）を提供する。
これらの化合物の合成は、例えば固相又は溶液カップリ
ング法を使用して、同じく本発明の一部であるモノマー
性中間体のオリゴマー化によって達成することができ
る。本発明の特定の構造により、本明細書に開示するア
ンチセンス分子は、安定性及び水溶性の利点を有し、イ
オン性副作用及び非特異的タンパク質結合を回避してい
る。
質リボヌクレオシドモノマー単位からなる新規なタイプ
のオリゴマー（オリゴリボヌクレオチド）を提供する。
これらの化合物の合成は、例えば固相又は溶液カップリ
ング法を使用して、同じく本発明の一部であるモノマー
性中間体のオリゴマー化によって達成することができ
る。本発明の特定の構造により、本明細書に開示するア
ンチセンス分子は、安定性及び水溶性の利点を有し、イ
オン性副作用及び非特異的タンパク質結合を回避してい
る。
【０００８】具体的には、本発明は、式（Ｉ）：
【０００９】
【化５】
【００１０】（式中、Ｒ1 は、Ｈ、炭素原子１〜４個を
有する（Ｃ1 〜Ｃ4 ）低級アルキル、炭素原子１〜１８
個を有する（Ｃ1 〜Ｃ18）アシル又はヒドロキシ−低級
アルキルであることができ、Ｒ2 は、Ｈ、アラルキル又
は炭素原子１〜４個を有する（Ｃ1 〜Ｃ4 ）低級アルキ
ルであり、Ｂは、アデニン、シトシン、グアニン、チミ
ン及びウラシルからなる群より選択されるヌクレオシド
塩基残基であり、Ｘは、Ｈ、ＯＲ1 、ＮＨＲ2 又はＮＨ
−アシルであることができ、Ｙは、ＯＲ1 又はＮＨＲ2
であることができ、そしてｎは、５〜２５のいかなる数
であることもできる）示されるオリゴマーに関する。
有する（Ｃ1 〜Ｃ4 ）低級アルキル、炭素原子１〜１８
個を有する（Ｃ1 〜Ｃ18）アシル又はヒドロキシ−低級
アルキルであることができ、Ｒ2 は、Ｈ、アラルキル又
は炭素原子１〜４個を有する（Ｃ1 〜Ｃ4 ）低級アルキ
ルであり、Ｂは、アデニン、シトシン、グアニン、チミ
ン及びウラシルからなる群より選択されるヌクレオシド
塩基残基であり、Ｘは、Ｈ、ＯＲ1 、ＮＨＲ2 又はＮＨ
−アシルであることができ、Ｙは、ＯＲ1 又はＮＨＲ2
であることができ、そしてｎは、５〜２５のいかなる数
であることもできる）示されるオリゴマーに関する。
【００１１】このオリゴマーは、選択されたｍＲＮＡ配
列に結合することができる。好ましくは、該オリゴヌク
レオチド化合物は、選択されたＲＮＡ配列に対して相補
的な塩基の配列を有している。同じく含まれるものは、
本発明の化合物の塩である。
列に結合することができる。好ましくは、該オリゴヌク
レオチド化合物は、選択されたＲＮＡ配列に対して相補
的な塩基の配列を有している。同じく含まれるものは、
本発明の化合物の塩である。
【００１２】Ｒ1 は、具体的には、メチル、アセチル又
はヒドロキシエチルであることができる。特定の実施態
様においては、Ｒ2 は、Ｈであり、Ｘは、Ｈ、ＯＲ1 又
はＮＨＲ2 であり、そしてＲ1 、Ｂ及びＹは、上記の式
（Ｉ）に定義したとおりである。好ましい化合物におい
ては、Ｒ1 及びＲ2 は、両方ともＨであるか、Ｒ1 がメ
チルであり、そしてＲ2 がＨである。
はヒドロキシエチルであることができる。特定の実施態
様においては、Ｒ2 は、Ｈであり、Ｘは、Ｈ、ＯＲ1 又
はＮＨＲ2 であり、そしてＲ1 、Ｂ及びＹは、上記の式
（Ｉ）に定義したとおりである。好ましい化合物におい
ては、Ｒ1 及びＲ2 は、両方ともＨであるか、Ｒ1 がメ
チルであり、そしてＲ2 がＨである。
【００１３】好ましい組み合わせにおいては、Ｘは、Ｎ
Ｈ2 又はＮＨ−アシルであり、Ｙは、ＯＨ又はＮＨ2 で
あり、Ｒ1 は、Ｈ又はアセチルであり、Ｒ2 は、Ｈであ
り、そしてｎは、６〜１３である。
Ｈ2 又はＮＨ−アシルであり、Ｙは、ＯＨ又はＮＨ2 で
あり、Ｒ1 は、Ｈ又はアセチルであり、Ｒ2 は、Ｈであ
り、そしてｎは、６〜１３である。
【００１４】さらに、上記の構造で示される、適当に保
護されたヌクレオシド塩基残基（以下、Ｂ′と定める）
をＢの位置に有し、そしてｍ（ｎではなく）が０〜５、
特に０、１又は２であるオリゴマーも、また、本発明の
目的である。このようなオリゴマーは、ｎが５〜２５で
あるオリゴマーの中間体として有用である。
護されたヌクレオシド塩基残基（以下、Ｂ′と定める）
をＢの位置に有し、そしてｍ（ｎではなく）が０〜５、
特に０、１又は２であるオリゴマーも、また、本発明の
目的である。このようなオリゴマーは、ｎが５〜２５で
あるオリゴマーの中間体として有用である。
【００１５】式（Ｉ）のオリゴマーは、アミド結合によ
って結合した改質リボヌクレオシドモノマーからなる。
本発明のオリゴマーは、特に、未改質の結合をもつオリ
ゴマーを上回る安定性並びに他のタイプの改質結合をも
つオリゴマーを上回る特異性及び水溶性の理由から、オ
リゴマーを伴う用途に有用である。加えて、本発明によ
り、そのヌクレオシド成分すべてがアミド結合によって
結合しているオリゴマーを得ることが可能である。
って結合した改質リボヌクレオシドモノマーからなる。
本発明のオリゴマーは、特に、未改質の結合をもつオリ
ゴマーを上回る安定性並びに他のタイプの改質結合をも
つオリゴマーを上回る特異性及び水溶性の理由から、オ
リゴマーを伴う用途に有用である。加えて、本発明によ
り、そのヌクレオシド成分すべてがアミド結合によって
結合しているオリゴマーを得ることが可能である。
【００１６】それらのアミド結合のために、本オリゴマ
ーは、安定であり、水溶性であり、また特にヌクレアー
ゼ耐性であるアンチセンス化合物に構成することができ
る。したがって、本発明のオリゴマーは、標的ｍＲＮＡ
に結合して標的タンパク質の産生を妨げるか、又は減少
させるアンチセンス療法に有用である。アンチセンス療
法は、Akhtar及びIvinson のNature Genetics, 1993 4,
215に記載のように用いられる。アンチセンスオリゴマ
ーを設計する例として、望ましくない症状を引き起こす
か又はそれに寄与する標的タンパク質を選択することが
できる。そして、そのタンパク質に相当する遺伝子又は
ｍＲＮＡのヌクレオチド配列を公知の方法によって得た
のち、この配列の一部と相補的なオリゴマーを設計する
ことができる。ｍＲＮＡ配列は、ｍＲＮＡが、翻訳を妨
げることを望むタンパク質をコードして、そのタンパク
質の産生を減らすか又は無くして、タンパク質の存在に
よって対象中に生じる望ましくない効果を緩和するとい
うことに基づいて決定することができる。未知のｍＲＮ
Ａ配列は、遺伝子コードを使用して、コードされている
タンパク質の配列を翻訳することによって決定すること
ができる。タンパク質の配列がわからないならば、公知
の技術によってそのタンパク質を単離し、配列決定する
ことによって決定することができる。あるいは、また、
タンパク質をコードするｍＲＮＡ又はＤＮＡ化を、公知
の方法によって識別し、単離し、配列決定してもよい。
ーは、安定であり、水溶性であり、また特にヌクレアー
ゼ耐性であるアンチセンス化合物に構成することができ
る。したがって、本発明のオリゴマーは、標的ｍＲＮＡ
に結合して標的タンパク質の産生を妨げるか、又は減少
させるアンチセンス療法に有用である。アンチセンス療
法は、Akhtar及びIvinson のNature Genetics, 1993 4,
215に記載のように用いられる。アンチセンスオリゴマ
ーを設計する例として、望ましくない症状を引き起こす
か又はそれに寄与する標的タンパク質を選択することが
できる。そして、そのタンパク質に相当する遺伝子又は
ｍＲＮＡのヌクレオチド配列を公知の方法によって得た
のち、この配列の一部と相補的なオリゴマーを設計する
ことができる。ｍＲＮＡ配列は、ｍＲＮＡが、翻訳を妨
げることを望むタンパク質をコードして、そのタンパク
質の産生を減らすか又は無くして、タンパク質の存在に
よって対象中に生じる望ましくない効果を緩和するとい
うことに基づいて決定することができる。未知のｍＲＮ
Ａ配列は、遺伝子コードを使用して、コードされている
タンパク質の配列を翻訳することによって決定すること
ができる。タンパク質の配列がわからないならば、公知
の技術によってそのタンパク質を単離し、配列決定する
ことによって決定することができる。あるいは、また、
タンパク質をコードするｍＲＮＡ又はＤＮＡ化を、公知
の方法によって識別し、単離し、配列決定してもよい。
【００１７】そのようなオリゴマーの好ましい大きさ
は、モノマー（ｎ＝７〜１３）約７〜約２７個、特に約
８〜約１５個分である。
は、モノマー（ｎ＝７〜１３）約７〜約２７個、特に約
８〜約１５個分である。
【００１８】これらのアンチセンスオリゴマーは、以下
に記す本発明の方法によって、本発明のアミド結合を有
するように製造すると、標的タンパク質の存在に伴う症
状を緩和するために投与することができる安定なアンチ
センス化合物を形成する。本発明のオリゴマーは、望ま
しくないか又は過剰のタンパク質（生得のものか異物か
にかかわらず）の産生に関連する症状を治療するための
アンチセンス化合物として特に有用であり、また、ウイ
ルスやガン細胞の増殖を妨げるのにも有用である。アン
チセンスオリゴマーは、標的遺伝子のｍＲＮＡに対して
相補的になり、そのＲＮＡに結合してその翻訳を防ぎ、
その結果、標的遺伝子によってコードされるタンパク質
の合成を減少するか又は防ぐように構成されている。し
たがって、生理的条件下で核酸に安定的に結合する能力
がアンチセンス有用性を表す。加えて、アンチセンス化
合物は、標的遺伝子の特定のｍＲＮＡに結合するため
に、適切な配列結合特異性を有していなければならな
い。最後に、アンチセンス化合物は、生理的に有効であ
り、標的ｍＲＮＡに到達するのに十分な可溶性をもたな
ければならない。これらのオリゴマーは、また、ＰＣＲ
反応に使用するためのＰＣＲプライマーとしても有用で
あり、ＰＣＲにおける安定で特異的な結合の利点を有
し、核酸ハイブリダイゼーションを用いる診断試験にお
けるプローブとしても有用である。
に記す本発明の方法によって、本発明のアミド結合を有
するように製造すると、標的タンパク質の存在に伴う症
状を緩和するために投与することができる安定なアンチ
センス化合物を形成する。本発明のオリゴマーは、望ま
しくないか又は過剰のタンパク質（生得のものか異物か
にかかわらず）の産生に関連する症状を治療するための
アンチセンス化合物として特に有用であり、また、ウイ
ルスやガン細胞の増殖を妨げるのにも有用である。アン
チセンスオリゴマーは、標的遺伝子のｍＲＮＡに対して
相補的になり、そのＲＮＡに結合してその翻訳を防ぎ、
その結果、標的遺伝子によってコードされるタンパク質
の合成を減少するか又は防ぐように構成されている。し
たがって、生理的条件下で核酸に安定的に結合する能力
がアンチセンス有用性を表す。加えて、アンチセンス化
合物は、標的遺伝子の特定のｍＲＮＡに結合するため
に、適切な配列結合特異性を有していなければならな
い。最後に、アンチセンス化合物は、生理的に有効であ
り、標的ｍＲＮＡに到達するのに十分な可溶性をもたな
ければならない。これらのオリゴマーは、また、ＰＣＲ
反応に使用するためのＰＣＲプライマーとしても有用で
あり、ＰＣＲにおける安定で特異的な結合の利点を有
し、核酸ハイブリダイゼーションを用いる診断試験にお
けるプローブとしても有用である。
【００１９】本発明のオリゴマーの３′及び５′末端残
基は、固相合成により適合した化合物を製造したり、望
ましい物理化学的性質を付与したりするために、いかな
る従来の方法で改質してもよい。
基は、固相合成により適合した化合物を製造したり、望
ましい物理化学的性質を付与したりするために、いかな
る従来の方法で改質してもよい。
【００２０】本発明の結合をもつオリゴマーの具体的な
用途は、色素増強のアンチセンス治療である。色素増強
は、メラノサイト（色素細胞）中の酵素チロシナーゼの
過剰産生の結果として起こる。チロシナーゼをコードす
るｍＲＮＡの該当部分に相当する配列を有する本発明の
オリゴマーを加えると（Muller, G.; Ruppert, S.; Sch
mid, E.; Schutz, G. EMBO 1988, 7, 2723-30 ）、チロ
シナーゼ産生が阻害され、影響を受けた細胞の色素増強
が除かれる（Ando, S.; Ando, O.; Suemoto, Y.; Mishi
ma, Y. J. Invest. Dermatol. 1993, 100, 1505-1555）
（Kuzumaki, T.; Matsuda, A.; Wakamatsu, K.; Ito,
S.; Ishikawa, K. Expt. Cell Res. 1993, 207, 33-4
0）。色素増強を軽減するアンチセンスオリゴマーの効
力は、細胞ベースのアンチセンス検定、例えば実施例１
１の検定を用いて判定することができる。
用途は、色素増強のアンチセンス治療である。色素増強
は、メラノサイト（色素細胞）中の酵素チロシナーゼの
過剰産生の結果として起こる。チロシナーゼをコードす
るｍＲＮＡの該当部分に相当する配列を有する本発明の
オリゴマーを加えると（Muller, G.; Ruppert, S.; Sch
mid, E.; Schutz, G. EMBO 1988, 7, 2723-30 ）、チロ
シナーゼ産生が阻害され、影響を受けた細胞の色素増強
が除かれる（Ando, S.; Ando, O.; Suemoto, Y.; Mishi
ma, Y. J. Invest. Dermatol. 1993, 100, 1505-1555）
（Kuzumaki, T.; Matsuda, A.; Wakamatsu, K.; Ito,
S.; Ishikawa, K. Expt. Cell Res. 1993, 207, 33-4
0）。色素増強を軽減するアンチセンスオリゴマーの効
力は、細胞ベースのアンチセンス検定、例えば実施例１
１の検定を用いて判定することができる。
【００２１】低級アルキルとは、メチル、エチル、プロ
ピル又はブチルをいう。アラルキルとは、芳香族置換ア
ルキル、例えばベンジルをいう。アシルとは、有機酸か
らヒドロキシル基の除去によって誘導される有機残基、
例えば脂肪族又は芳香族の酸、例えば、それぞれ望むな
らば置換された形態にある酢酸若しくは安息香酸又は少
なくとも１個のヘテロ原子Ｏ、Ｓ若しくはＮを含む５〜
６員環を含むことが好ましいヘテロポリ酸、例えば２−
フラン−カルボン酸若しくは２−ピリジン−カルボン酸
をいう。ヒドロキシ低級アルキルとは、ヒドロキシル基
が遊離状態であってもよいし、従来の保護基、例えばア
シル基、若しくはシリル基をはじめとするエーテル形成
基によって保護されていてもよいヒドロキシエチル、ヒ
ドロキシプロピルのような基をいう。
ピル又はブチルをいう。アラルキルとは、芳香族置換ア
ルキル、例えばベンジルをいう。アシルとは、有機酸か
らヒドロキシル基の除去によって誘導される有機残基、
例えば脂肪族又は芳香族の酸、例えば、それぞれ望むな
らば置換された形態にある酢酸若しくは安息香酸又は少
なくとも１個のヘテロ原子Ｏ、Ｓ若しくはＮを含む５〜
６員環を含むことが好ましいヘテロポリ酸、例えば２−
フラン−カルボン酸若しくは２−ピリジン−カルボン酸
をいう。ヒドロキシ低級アルキルとは、ヒドロキシル基
が遊離状態であってもよいし、従来の保護基、例えばア
シル基、若しくはシリル基をはじめとするエーテル形成
基によって保護されていてもよいヒドロキシエチル、ヒ
ドロキシプロピルのような基をいう。
【００２２】式（Ｉ）の塩基Ｂは、公知の天然又は改質
ピリミジン及びプリンヌクレオチド塩基の組み合わせを
含むことができる。好ましいヌクレオチド塩基残基は、
塩基アデニン、シトシン、グアニン、チミン及びウラシ
ルの天然残基である。当該技術において公知である改質
塩基、例えば７−デアザアデニン、５−アザシトシン又
は６−メルカプトプリンを用いてもよい。アンチセンス
オリゴマーの塩基の配列は、オリゴマーが、選択された
ｍＲＮＡに対して相補的である塩基配列を示すように選
択される。
ピリミジン及びプリンヌクレオチド塩基の組み合わせを
含むことができる。好ましいヌクレオチド塩基残基は、
塩基アデニン、シトシン、グアニン、チミン及びウラシ
ルの天然残基である。当該技術において公知である改質
塩基、例えば７−デアザアデニン、５−アザシトシン又
は６−メルカプトプリンを用いてもよい。アンチセンス
オリゴマーの塩基の配列は、オリゴマーが、選択された
ｍＲＮＡに対して相補的である塩基配列を示すように選
択される。
【００２３】ひとたび望みの塩基配列を得ると、本発明
の中間体を使用して、本発明のアンチセンスオリゴマー
を相応に調製することができる。これらの中間体は、同
じく本発明の一部である以下の方法によって調製したの
ち、適当に結合させる。オリゴマーのＲＮＡ結合特性
は、従来の熱融解技術によって判定することができる。
の中間体を使用して、本発明のアンチセンスオリゴマー
を相応に調製することができる。これらの中間体は、同
じく本発明の一部である以下の方法によって調製したの
ち、適当に結合させる。オリゴマーのＲＮＡ結合特性
は、従来の熱融解技術によって判定することができる。
【００２４】もう一つの態様においては、本発明は、式
（II）：
（II）：
【００２５】
【化６】
【００２６】（式中、Ｒ1'は、従来のヒドロキシ保護
基、例えば炭素原子１〜４個を有する（Ｃ1 〜Ｃ4 ）低
級アルキル、炭素原子１〜１８個を有する（Ｃ1 〜
Ｃ18）アシル、ヒドロキシ低級アルキル又はベンジルで
あり、Ｒ2 は、Ｈ、アラルキル又はＣ1 〜Ｃ4 アルキル
であり、Ｒ3 は、アミノ保護基であり、Ｒ4 は、Ｈ又は
アシル保護基であり、そしてＢ′は、適当に保護された
ヌクレオシド塩基残基、例えばＮ−ベンゾイル若しくは
Ｎ−アセチルシトシン、Ｎ−ベンゾイルアデニン、チミ
ン、ウラシル又はＮ−アセチル若しくはＮ−イソブチリ
ルグアニンである）で示される中間体化合物に関する。
基、例えば炭素原子１〜４個を有する（Ｃ1 〜Ｃ4 ）低
級アルキル、炭素原子１〜１８個を有する（Ｃ1 〜
Ｃ18）アシル、ヒドロキシ低級アルキル又はベンジルで
あり、Ｒ2 は、Ｈ、アラルキル又はＣ1 〜Ｃ4 アルキル
であり、Ｒ3 は、アミノ保護基であり、Ｒ4 は、Ｈ又は
アシル保護基であり、そしてＢ′は、適当に保護された
ヌクレオシド塩基残基、例えばＮ−ベンゾイル若しくは
Ｎ−アセチルシトシン、Ｎ−ベンゾイルアデニン、チミ
ン、ウラシル又はＮ−アセチル若しくはＮ−イソブチリ
ルグアニンである）で示される中間体化合物に関する。
【００２７】式（II）の化合物は、成分ヌクレオシドの
すべてがアミド結合によって結合しているオリゴマーの
合成を可能にする新規な中間体である。したがって、こ
れら式（II）の重要中間体及び式（II）の中間体を使用
する式（Ｉ）の化合物を製造する方法が本発明の目的で
ある。
すべてがアミド結合によって結合しているオリゴマーの
合成を可能にする新規な中間体である。したがって、こ
れら式（II）の重要中間体及び式（II）の中間体を使用
する式（Ｉ）の化合物を製造する方法が本発明の目的で
ある。
【００２８】好ましい式（II）の化合物においては、Ｒ
3 は、９−フルオレニルメトキシカルボニル、tert−ブ
チルオキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ア
リルオキシカルボニル、トリフェニルメチル又は４，
４′−ジメトキシトリチルである。もう一つの好ましい
化合物においては、Ｒ4 は、tert−ブチル、炭素原子１
〜４個を有する低級アルキル、ベンジル、フェニル又は
２−トリメチルシリルエチルである。好ましいＲ3 とＲ
4 との組み合わせが本発明の化合物を形成する。式（I
I）の各化合物は、そのヌクレオシド塩基として、上述
の塩基から選択される１個の塩基を有している。特定の
実施態様においては、Ｒ2 は、Ｈである。
3 は、９−フルオレニルメトキシカルボニル、tert−ブ
チルオキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ア
リルオキシカルボニル、トリフェニルメチル又は４，
４′−ジメトキシトリチルである。もう一つの好ましい
化合物においては、Ｒ4 は、tert−ブチル、炭素原子１
〜４個を有する低級アルキル、ベンジル、フェニル又は
２−トリメチルシリルエチルである。好ましいＲ3 とＲ
4 との組み合わせが本発明の化合物を形成する。式（I
I）の各化合物は、そのヌクレオシド塩基として、上述
の塩基から選択される１個の塩基を有している。特定の
実施態様においては、Ｒ2 は、Ｈである。
【００２９】本発明のもう一つの中間体化合物は、式
（III ）：
（III ）：
【００３０】
【化７】
【００３１】（式中、Ｒ7 は、ヒドロキシ保護基であ
り、Ｒ4 は、Ｈ又はアシル保護基であり、Ｒ1 ′は、従
来のヒドロキシ保護基であり、そしてＢ′は、適当に保
護されたヌクレオシド塩基残基である）の化合物であ
る。
り、Ｒ4 は、Ｈ又はアシル保護基であり、Ｒ1 ′は、従
来のヒドロキシ保護基であり、そしてＢ′は、適当に保
護されたヌクレオシド塩基残基である）の化合物であ
る。
【００３２】式（Ｉ）のオリゴマー及びそれらの医薬的
に許容しうる塩は、例えば医薬製剤の形態にある薬剤と
して使用することができる。
に許容しうる塩は、例えば医薬製剤の形態にある薬剤と
して使用することができる。
【００３３】アンチセンスオリゴマーを含有する医薬製
剤は、局所的に、例えば皮内的に、又は軟膏として皮膚
に投与することもできるし、注射又は徐々に時間をかけ
ての輸液によって非経口的に投与することもできる。こ
れらは、静脈内的に、腹腔内的に、筋内的に、皮下的
に、又は経口的に投与することができる。
剤は、局所的に、例えば皮内的に、又は軟膏として皮膚
に投与することもできるし、注射又は徐々に時間をかけ
ての輸液によって非経口的に投与することもできる。こ
れらは、静脈内的に、腹腔内的に、筋内的に、皮下的
に、又は経口的に投与することができる。
【００３４】医薬製剤の製造のために、式（Ｉ）のオリ
ゴマー及びそれらの医薬的に許容しうる塩は、治療上不
活性の担体と配合することができる。非経口的投与に用
いる製剤には、無菌又は水性若しくは非−水性の溶液、
懸濁液及び乳濁液がある。非−水性担体の例は、プロピ
レングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例
えばオリーブ油及び注射可能な有機エステル、例えばオ
レイン酸エチルである。水性担体には、食塩水及び緩衝
媒体を含む、水、アルコール溶液／水溶液、乳濁液又は
懸濁液がある。非経口的担体には、塩化ナトリウム溶
液、リンゲルデキストロース、デキストロース及び塩化
ナトリウム、ラクテート化リンゲル又は固定油がある。
静脈内賦形剤には、流体及び栄養素補充物、電解質補充
物、例えばリンゲルデキストロースに基づくものなどが
ある。特に、オリゴマーを細胞及びその内部に運ぶこと
ができる担体、例えばリポソーム、ＰＥＧ化リポソーム
又はカチオン性脂質を使用することができる。防腐剤及
び他の添加物、例えば抗菌剤、酸化防止剤、キレート化
剤、不活性ガスなどを含めてもよい。例えば、Remingto
n's Pharmaceutical Science, 18th Ed., Mack Eds., 1
990 を参照するとよい。
ゴマー及びそれらの医薬的に許容しうる塩は、治療上不
活性の担体と配合することができる。非経口的投与に用
いる製剤には、無菌又は水性若しくは非−水性の溶液、
懸濁液及び乳濁液がある。非−水性担体の例は、プロピ
レングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例
えばオリーブ油及び注射可能な有機エステル、例えばオ
レイン酸エチルである。水性担体には、食塩水及び緩衝
媒体を含む、水、アルコール溶液／水溶液、乳濁液又は
懸濁液がある。非経口的担体には、塩化ナトリウム溶
液、リンゲルデキストロース、デキストロース及び塩化
ナトリウム、ラクテート化リンゲル又は固定油がある。
静脈内賦形剤には、流体及び栄養素補充物、電解質補充
物、例えばリンゲルデキストロースに基づくものなどが
ある。特に、オリゴマーを細胞及びその内部に運ぶこと
ができる担体、例えばリポソーム、ＰＥＧ化リポソーム
又はカチオン性脂質を使用することができる。防腐剤及
び他の添加物、例えば抗菌剤、酸化防止剤、キレート化
剤、不活性ガスなどを含めてもよい。例えば、Remingto
n's Pharmaceutical Science, 18th Ed., Mack Eds., 1
990 を参照するとよい。
【００３５】特に、本発明は、細胞中の標的タンパク質
の産生を減らす医薬組成物であって、該細胞中の標的タ
ンパク質をコードする核酸（例えばｍＲＮＡ）配列に結
合し、該タンパク質の産生を減らすのに有効な量の、上
述の式（Ｉ）の化合物のいずれかと、医薬的に許容しう
る担体とを含む組成物を含む。
の産生を減らす医薬組成物であって、該細胞中の標的タ
ンパク質をコードする核酸（例えばｍＲＮＡ）配列に結
合し、該タンパク質の産生を減らすのに有効な量の、上
述の式（Ｉ）の化合物のいずれかと、医薬的に許容しう
る担体とを含む組成物を含む。
【００３６】式（Ｉ）の化合物若しくはその医薬的に許
容しうる塩及び治療上許容しうる担体を含有する薬剤並
びにそのような薬剤を製造する方法も、また、本発明の
目的である。この方法は、式（Ｉ）の化合物若しくはそ
の医薬的に許容しうる塩を、治療上不活性な担体物質と
混合し、その混合物をガレヌス剤形にすることを含む。
容しうる塩及び治療上許容しうる担体を含有する薬剤並
びにそのような薬剤を製造する方法も、また、本発明の
目的である。この方法は、式（Ｉ）の化合物若しくはそ
の医薬的に許容しうる塩を、治療上不活性な担体物質と
混合し、その混合物をガレヌス剤形にすることを含む。
【００３７】上述したように、式（Ｉ）の化合物及びそ
れらの医薬的に許容しうる塩は、細胞中の標的タンパク
質の産生を減らすために使用することができる。アンチ
センスオリゴマーの投与用量範囲は、不必要な実験を行
わなくても、当業者であれば決定することができる。一
般に、適当な用量は、所望の効果をもたらすのに十分で
ある用量である。用量は、副作用、例えば不要な交差反
応、アナフィラキシー反応などを引き起こすほど大量で
あるべきではない。一般に、用量は、患者の年齢、症
状、性別及び病気の進行の程度、対指標、場合によって
は免疫寛容及び個々の医師によって調節されるその他の
変動要素に応じて異なる。
れらの医薬的に許容しうる塩は、細胞中の標的タンパク
質の産生を減らすために使用することができる。アンチ
センスオリゴマーの投与用量範囲は、不必要な実験を行
わなくても、当業者であれば決定することができる。一
般に、適当な用量は、所望の効果をもたらすのに十分で
ある用量である。用量は、副作用、例えば不要な交差反
応、アナフィラキシー反応などを引き起こすほど大量で
あるべきではない。一般に、用量は、患者の年齢、症
状、性別及び病気の進行の程度、対指標、場合によって
は免疫寛容及び個々の医師によって調節されるその他の
変動要素に応じて異なる。
【００３８】本発明をさらに説明するために以下の実施
例を提供する。ただし、本発明をいかなるふうにも限定
するつもりはない。
例を提供する。ただし、本発明をいかなるふうにも限定
するつもりはない。
【００３９】モノマー構成単位の合成 式（II）の重要中間体を得るためのもっとも直接的な合
成は、リボヌクレオシド、例えばアデノシン、ウリジ
ン、グアノシン及びシチジンを出発原料として用い、次
いで、Ｃ−３′のヒドロキシ基を炭素置換基で置換する
方法を考えることである。同様な戦略が、ラジカル化学
反応を利用する２′−デオキシ類自体の合成に応用され
ている（Fiandor, J.; Tam, S. Tet. Lett. 1990, 31,
597 ）。しかし、リボヌクレオシド系では、その同じラ
ジカル反応が望みの立体特異性を与えない。
成は、リボヌクレオシド、例えばアデノシン、ウリジ
ン、グアノシン及びシチジンを出発原料として用い、次
いで、Ｃ−３′のヒドロキシ基を炭素置換基で置換する
方法を考えることである。同様な戦略が、ラジカル化学
反応を利用する２′−デオキシ類自体の合成に応用され
ている（Fiandor, J.; Tam, S. Tet. Lett. 1990, 31,
597 ）。しかし、リボヌクレオシド系では、その同じラ
ジカル反応が望みの立体特異性を与えない。
【００４０】以下の新規な合成がこの問題を具体的に扱
うことができる（一般スキームＡ）。出発原料は、市販
のＤ−キシロースである。Ｃ−１及びＣ−２のＯＨ基を
ケタールとして保護し、Ｃ−５のヒドロキシル基を第一
級アルコール（Ｒ7 ）の従来の保護基、例えばトリチル
若しくはジメチル−tert−ブチルシリル又は好ましくは
スルホニル基、例えばトルエンスルホニル（Ｔｓ）、メ
タンスルホニル（Ｍｓ）若しくはトリフルオロメチルス
ルホニル（Ｔｆ）で保護したのち、残るＯＨ基を従来の
方法、例えばＤＭＳＯ／酢酸無水物又はＴＥＭＰＯで、
ケトン（IV）に酸化する。ウィッテヒ又はホーナータイ
プ試薬による（IV）のケトンのオレフィン化は、シス及
びトランス不飽和エステルの混合物（Ｖ）を与える。Ｒ
4 は、従来のアシル保護基である。本発明にしたがって
使用することができるアシル保護基には、Ｒ4 が、それ
に結合した酸素と一緒になって、加水分解性エステルを
形成するそれらである。混合物（Ｖ）が接触水素化を受
けて、望みの生成物（VI）にリボ配置を付与する。この
高い立体特異性は、試薬のエキソ攻撃をのみ許す二環系
の剛性配座によって制御される。（VI）のケタール基を
加水分解したのちアシル化することにより、Ｒ8 がアル
キル又はアリール基である酢酸グリコシル（VII ）が得
られ、これを、従来の方法により、ヌクレオシドカップ
リング反応に直接使用することができる。シリル化した
形態の適当に保護されたヌクレオ塩基、酢酸フラノシル
及び活性化剤、例えばトリフルオロメタンスルホン酸ト
リメチルシリル、塩化第二スズ又はルイス酸触媒をβ−
ヌクレオシドの合成に使用する手順が当該技術において
周知である。例えば、中間体（VII ）を、天然のヌクレ
オ塩基、例えばシトシン、ウラシル、チミン、グアニン
及びアデニンをもつもの並びに非天然の塩基、例えば７
−デアザアデニン、５−アザシトシン、６−メルカプト
プリンをもつものなどを含む多様なヌクレオシド（VII
I）の調製に使用することができる。（VIII）のＣ−
５′位置への窒素原子の導入は、アジド又はフタルイミ
ド基によるスルホネートの置換により、容易に達成され
る。続いて、例えば選択的な水素化によってアジドを還
元するか、又はフタルイミド基を脱保護するかして、ア
ミン（IX）を生成させる。
うことができる（一般スキームＡ）。出発原料は、市販
のＤ−キシロースである。Ｃ−１及びＣ−２のＯＨ基を
ケタールとして保護し、Ｃ−５のヒドロキシル基を第一
級アルコール（Ｒ7 ）の従来の保護基、例えばトリチル
若しくはジメチル−tert−ブチルシリル又は好ましくは
スルホニル基、例えばトルエンスルホニル（Ｔｓ）、メ
タンスルホニル（Ｍｓ）若しくはトリフルオロメチルス
ルホニル（Ｔｆ）で保護したのち、残るＯＨ基を従来の
方法、例えばＤＭＳＯ／酢酸無水物又はＴＥＭＰＯで、
ケトン（IV）に酸化する。ウィッテヒ又はホーナータイ
プ試薬による（IV）のケトンのオレフィン化は、シス及
びトランス不飽和エステルの混合物（Ｖ）を与える。Ｒ
4 は、従来のアシル保護基である。本発明にしたがって
使用することができるアシル保護基には、Ｒ4 が、それ
に結合した酸素と一緒になって、加水分解性エステルを
形成するそれらである。混合物（Ｖ）が接触水素化を受
けて、望みの生成物（VI）にリボ配置を付与する。この
高い立体特異性は、試薬のエキソ攻撃をのみ許す二環系
の剛性配座によって制御される。（VI）のケタール基を
加水分解したのちアシル化することにより、Ｒ8 がアル
キル又はアリール基である酢酸グリコシル（VII ）が得
られ、これを、従来の方法により、ヌクレオシドカップ
リング反応に直接使用することができる。シリル化した
形態の適当に保護されたヌクレオ塩基、酢酸フラノシル
及び活性化剤、例えばトリフルオロメタンスルホン酸ト
リメチルシリル、塩化第二スズ又はルイス酸触媒をβ−
ヌクレオシドの合成に使用する手順が当該技術において
周知である。例えば、中間体（VII ）を、天然のヌクレ
オ塩基、例えばシトシン、ウラシル、チミン、グアニン
及びアデニンをもつもの並びに非天然の塩基、例えば７
−デアザアデニン、５−アザシトシン、６−メルカプト
プリンをもつものなどを含む多様なヌクレオシド（VII
I）の調製に使用することができる。（VIII）のＣ−
５′位置への窒素原子の導入は、アジド又はフタルイミ
ド基によるスルホネートの置換により、容易に達成され
る。続いて、例えば選択的な水素化によってアジドを還
元するか、又はフタルイミド基を脱保護するかして、ア
ミン（IX）を生成させる。
【００４１】Ｒ2 が水素である一般式（Ｘ）の化合物の
場合、式（IX）の化合物から、試薬、例えば９−フルオ
レニルメチルクロロホルメート、Ｎ−（９−フルオレニ
ルメトキシカルボニルオキシ）スクシンイミド、２−te
rt−ブトキシカルボニルオキシイミノ）−２−フェニル
アセトニトリル（ＢＯＣ−ＯＮ）、ベンジルクロロホル
メート又は塩化４，４′−ジメトキシトリチルを用いる
一般に知られる方法によって容易に得ることができる。
Ｒ2 が低級アルキル又はアラルキルである一般式（Ｘ）
の化合物の場合、式（IX）の化合物から、還元アミノ化
及びアミノ保護処理によって容易に得ることができる。
場合、式（IX）の化合物から、試薬、例えば９−フルオ
レニルメチルクロロホルメート、Ｎ−（９−フルオレニ
ルメトキシカルボニルオキシ）スクシンイミド、２−te
rt−ブトキシカルボニルオキシイミノ）−２−フェニル
アセトニトリル（ＢＯＣ−ＯＮ）、ベンジルクロロホル
メート又は塩化４，４′−ジメトキシトリチルを用いる
一般に知られる方法によって容易に得ることができる。
Ｒ2 が低級アルキル又はアラルキルである一般式（Ｘ）
の化合物の場合、式（IX）の化合物から、還元アミノ化
及びアミノ保護処理によって容易に得ることができる。
【００４２】この時点で、（Ｘ）中のエステル基の最終
的な除去、例えばベンジルエステルの水素化が、オリゴ
マー合成のための適当に保護されたモノマー構成単位
（（Ｘ）、Ｒ4 ＝（II）と同様Ｈ、Ｒ1'＝−ＣＯＲ8 ）
を提供する。
的な除去、例えばベンジルエステルの水素化が、オリゴ
マー合成のための適当に保護されたモノマー構成単位
（（Ｘ）、Ｒ4 ＝（II）と同様Ｈ、Ｒ1'＝−ＣＯＲ8 ）
を提供する。
【００４３】ヌクレオシド形成段階の前にＣ−５アミノ
官能基を導入しうることを指摘すべきである。このよう
に、（XI）は、Ｒ1'＝−ＣＯＲ8 である一般式（II）の
種々のヌクレオシドのためのより進んだ共通の中間体で
ある。
官能基を導入しうることを指摘すべきである。このよう
に、（XI）は、Ｒ1'＝−ＣＯＲ8 である一般式（II）の
種々のヌクレオシドのためのより進んだ共通の中間体で
ある。
【００４４】Ｒ1'＝低級アルキル、ベンジル、保護され
たアルカノール（ヒドロキシ−アルキル）であり、Ｒ4
＝Ｈである式（II）の化合物は、一般スキームＢにした
がって調製される。このスキームの要点は、式（VI）の
化合物からの４−ペンテニルグリコシド中間体（XIV ）
の調製（一般スキームＡを参照）である。したがって、
中間体（VI）を４−ペンテニル−１−オール及びトリフ
ルオロメタンスルホン酸ＴＭＳで処理して、ラクトン
（XII ）を得る。次に、このラクトンを、トリエチルア
ミン−メタノール−水の混合物での処理によって開裂さ
せてヒドロキシ酸を得ることができ、これを従来のアル
キル化方法によって一般構造（XIII）の化合物に転換す
る。（XIII）におけるアノマー中心のペンテニルアルコ
キシ基が、Ｃ−２のＯＨ基のこの簡単なアルキル化（例
えば、ナトリウム水素化物の存在においてハロゲン化ア
ルキル又はω−ＯＨ−ハロゲン化アルキルの誘導体を使
用する）の間に保護基として作用することができるが、
ヌクレオシドカップリング段階で再活性化することがで
きる。（XIII）における酸保護基、例えばベンジル基を
加えたのち、ヌクレオ塩基を、すでに望みのアルキル置
換基をＣ−２に含む炭水化物成分に導入する（式（XIV
）を参照）。このペンテニルグリコシドは、また、当
該技術において周知である方法により、他の脱離基、例
えばアセタート又はハロゲンに容易に転換することがで
きる。この方法の例をスキーム１０に示す。
たアルカノール（ヒドロキシ−アルキル）であり、Ｒ4
＝Ｈである式（II）の化合物は、一般スキームＢにした
がって調製される。このスキームの要点は、式（VI）の
化合物からの４−ペンテニルグリコシド中間体（XIV ）
の調製（一般スキームＡを参照）である。したがって、
中間体（VI）を４−ペンテニル−１−オール及びトリフ
ルオロメタンスルホン酸ＴＭＳで処理して、ラクトン
（XII ）を得る。次に、このラクトンを、トリエチルア
ミン−メタノール−水の混合物での処理によって開裂さ
せてヒドロキシ酸を得ることができ、これを従来のアル
キル化方法によって一般構造（XIII）の化合物に転換す
る。（XIII）におけるアノマー中心のペンテニルアルコ
キシ基が、Ｃ−２のＯＨ基のこの簡単なアルキル化（例
えば、ナトリウム水素化物の存在においてハロゲン化ア
ルキル又はω−ＯＨ−ハロゲン化アルキルの誘導体を使
用する）の間に保護基として作用することができるが、
ヌクレオシドカップリング段階で再活性化することがで
きる。（XIII）における酸保護基、例えばベンジル基を
加えたのち、ヌクレオ塩基を、すでに望みのアルキル置
換基をＣ−２に含む炭水化物成分に導入する（式（XIV
）を参照）。このペンテニルグリコシドは、また、当
該技術において周知である方法により、他の脱離基、例
えばアセタート又はハロゲンに容易に転換することがで
きる。この方法の例をスキーム１０に示す。
【００４５】式（XV）の化合物は、また、一般スキーム
Ａに論じた方法により、重要中間体（XVI ）（Ｒ1'＝低
級アルキル、ベンジル、保護されたヒドロキシ−アルキ
ルであり、Ｒ4 ＝Ｈである式（II）の化合物）に転換す
ることができる。
Ａに論じた方法により、重要中間体（XVI ）（Ｒ1'＝低
級アルキル、ベンジル、保護されたヒドロキシ−アルキ
ルであり、Ｒ4 ＝Ｈである式（II）の化合物）に転換す
ることができる。
【００４６】さらなる変形として、ヌクレオ塩基を導入
する前に、（XVI ）を、まず、より進んだ共通の中間体
である（XVII）に転換することもできる。
する前に、（XVI ）を、まず、より進んだ共通の中間体
である（XVII）に転換することもできる。
【００４７】アルキル基を２′−ＯＨ位置に導入するた
めの別の合成経路を一般スキームＣに示す。この経路で
は、もっとも有用な中間体は（XIX ）であり、これは、
（VIII）のエステル基の加水分解から調製される（XVII
I ）のカルボキシル基の選択的アルキル化によって得ら
れる。ヌクレオ塩基の保護基の付随的な加水分解を避け
るには、酵素的方法又はより選択性の塩基、例えばカリ
ウムトリメチルシラノエートを用いることができる。望
みの置換基を２′−ＯＨ位置に導入したのち、一般スキ
ームＡに論じる手順により、化合物（XV）を、Ｒ1'＝低
級アルキル、ベンジル、保護されたヒドロキシ−アルキ
ルであり、Ｒ4 ＝Ｈである重要中間体（II）に転換する
ことができる。
めの別の合成経路を一般スキームＣに示す。この経路で
は、もっとも有用な中間体は（XIX ）であり、これは、
（VIII）のエステル基の加水分解から調製される（XVII
I ）のカルボキシル基の選択的アルキル化によって得ら
れる。ヌクレオ塩基の保護基の付随的な加水分解を避け
るには、酵素的方法又はより選択性の塩基、例えばカリ
ウムトリメチルシラノエートを用いることができる。望
みの置換基を２′−ＯＨ位置に導入したのち、一般スキ
ームＡに論じる手順により、化合物（XV）を、Ｒ1'＝低
級アルキル、ベンジル、保護されたヒドロキシ−アルキ
ルであり、Ｒ4 ＝Ｈである重要中間体（II）に転換する
ことができる。
【００４８】
【化８】
【００４９】
【化９】
【００５０】
【化１０】
【００５１】オリゴマーの合成 一般式（II）の適当に保護されたモノマー構成単位のオ
リゴマーへの構成は、固相方法又は従来の溶液相カップ
リング方法によって実施することができる。適当なリン
カ又は樹脂を選択することにより、オリゴマーを、遊離
Ｃ末端カルボン酸（Ｙ＝ＯＨ）又はアミド（Ｙ＝ＮＨ
2 ）のいずれかとして合成することができる。例えばヒ
ドロキシメチルタイプの樹脂（例えばWang樹脂）を用い
る場合、酸性開裂はオリゴマーを酸として与えるが、ア
ミノリシスはアミドを与える。あるいはまた、Rink酸リ
ンカ及びRinkアミドリンカを使用することにより、固体
支持体からのオリゴマーの簡単な弱酸性開裂により、酸
生成物又はアミド生成物をそれぞれ得ることができる。
これらの方法は当業者に周知である。参考として、９−
フルオレニルメトキシカルボニルで保護されたアミノ酸
を用いるものを含め、固相法に関する多数のレビユウが
発表されている（Field, G. and Noble, R. Int. J. Pe
ptide Protein Res. 35, 1990, 161-214）。溶液相法に
よるダイマーの合成を実施例５及び６に例示する。
リゴマーへの構成は、固相方法又は従来の溶液相カップ
リング方法によって実施することができる。適当なリン
カ又は樹脂を選択することにより、オリゴマーを、遊離
Ｃ末端カルボン酸（Ｙ＝ＯＨ）又はアミド（Ｙ＝ＮＨ
2 ）のいずれかとして合成することができる。例えばヒ
ドロキシメチルタイプの樹脂（例えばWang樹脂）を用い
る場合、酸性開裂はオリゴマーを酸として与えるが、ア
ミノリシスはアミドを与える。あるいはまた、Rink酸リ
ンカ及びRinkアミドリンカを使用することにより、固体
支持体からのオリゴマーの簡単な弱酸性開裂により、酸
生成物又はアミド生成物をそれぞれ得ることができる。
これらの方法は当業者に周知である。参考として、９−
フルオレニルメトキシカルボニルで保護されたアミノ酸
を用いるものを含め、固相法に関する多数のレビユウが
発表されている（Field, G. and Noble, R. Int. J. Pe
ptide Protein Res. 35, 1990, 161-214）。溶液相法に
よるダイマーの合成を実施例５及び６に例示する。
【００５２】固相合成の詳細な手順を実施例８に例示す
る。この実施例では、分析の目的に、リシンをＣ末端に
カップリングした。
る。この実施例では、分析の目的に、リシンをＣ末端に
カップリングした。
【００５３】Ｘ＝Ｈ、ＯＨ又はＯＲ1 である一般式
（Ｉ）のオリゴマーの調製の場合、一般式（III ）のモ
ノマー構成単位をオリゴマーアセンブリの最終段階に使
用することができる。この一般的なタイプの化合物（II
I ）は、当該技術において公知の従来の方法により、式
（VIII）及び（XV）（それぞれ一般スキームＡ及びＢに
示す）から容易に得ることができる。例えば、スルホネ
ート基を、還元反応（例えばリチウムアルミニウム水素
化物）によって水素に還元したり、安息香酸ナトリウム
の置換反応によって酸素官能基に交換したりすることが
できる。ＸがＮＨアシルである式（Ｉ）のオリゴマーの
調製の場合、従来の固相オリゴマー合成のキャッピング
工程中に、選択したアシル基を導入することができる。
（Ｉ）のオリゴマーの調製の場合、一般式（III ）のモ
ノマー構成単位をオリゴマーアセンブリの最終段階に使
用することができる。この一般的なタイプの化合物（II
I ）は、当該技術において公知の従来の方法により、式
（VIII）及び（XV）（それぞれ一般スキームＡ及びＢに
示す）から容易に得ることができる。例えば、スルホネ
ート基を、還元反応（例えばリチウムアルミニウム水素
化物）によって水素に還元したり、安息香酸ナトリウム
の置換反応によって酸素官能基に交換したりすることが
できる。ＸがＮＨアシルである式（Ｉ）のオリゴマーの
調製の場合、従来の固相オリゴマー合成のキャッピング
工程中に、選択したアシル基を導入することができる。
【００５４】
【化１１】
【００５５】
【化１２】
【００５６】
【化１３】
【００５７】
【化１４】
【００５８】
【化１５】
【００５９】
【化１６】
【００６０】
【化１７】
【００６１】
【化１８】
【００６２】
【化１９】
【００６３】
【化２０】
【００６４】
【化２１】
【００６５】
実施例１ チミン構成単位１１の合成 工程１：化合物２の合成 ＣＨ2 Ｃｌ2 １２５ml中の１，２−イソプロピリデン−
ａ−Ｄ−キシロフラノース１（pfanstiehl）４０．０g
の溶液を乾燥ピリジン４０mlで処理し、−５℃に冷却し
た。次に、それを、ＣＨ2 Ｃｌ2 １４０ml中の塩化トシ
ル４４．２g の溶液で３０分間処理した。反応混合物を
室温まで温めながら一夜攪拌したのち、反応混合物をＣ
Ｈ2 Ｃｌ2 ５００mlで希釈し、水８００mlで洗浄し、最
後に食塩水４００mlで洗浄した。有機相をＮａ2 ＳＯ4
上で乾燥し、ろ過し、濃縮し、さらに高減圧下に一夜乾
燥して、粗生成物７５．０g を灰色がかった白色の固体
として得た。ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ヘキサンを使用して粗生成
物を結晶化させて、純粋なトシレート２（５６．７g ）
を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．４４（３Ｈ、トシル−ＣＨ
3 ）、５．８９（１Ｈ、アノマー性Ｈ−１）、７．３４
及び７．８０（４Ｈ、トシル−フェニル）
ａ−Ｄ−キシロフラノース１（pfanstiehl）４０．０g
の溶液を乾燥ピリジン４０mlで処理し、−５℃に冷却し
た。次に、それを、ＣＨ2 Ｃｌ2 １４０ml中の塩化トシ
ル４４．２g の溶液で３０分間処理した。反応混合物を
室温まで温めながら一夜攪拌したのち、反応混合物をＣ
Ｈ2 Ｃｌ2 ５００mlで希釈し、水８００mlで洗浄し、最
後に食塩水４００mlで洗浄した。有機相をＮａ2 ＳＯ4
上で乾燥し、ろ過し、濃縮し、さらに高減圧下に一夜乾
燥して、粗生成物７５．０g を灰色がかった白色の固体
として得た。ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ヘキサンを使用して粗生成
物を結晶化させて、純粋なトシレート２（５６．７g ）
を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．４４（３Ｈ、トシル−ＣＨ
3 ）、５．８９（１Ｈ、アノマー性Ｈ−１）、７．３４
及び７．８０（４Ｈ、トシル−フェニル）
【００６６】工程２：化合物３の合成 ＤＭＳＯ１３０ml中のトシレート２（７．２４g ）の溶
液を酢酸無水物８４mlで処理し、反応混合物を室温で一
夜攪拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ２５０ml及び水１
００mlで希釈し、３０分間攪拌し、有機相を分離した。
水相をＥｔＯＡｃ２５０mlで洗浄した。有機相を合わ
せ、水８００mlで洗浄し、続いて飽和ＮａＨＣＯ3 ４０
０mlで洗浄した。有機相を分離し、最後に食塩水２００
mlで洗浄した。次に、それをＮａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、
濃縮して、粗生成物を得た。溶離剤としてヘキサン／Ｅ
ｔＯＡｃを１．１：１の比率で使用したシリカゲルカラ
ムで精製して、ケトン３（５．５４g ）を非常に薄い黄
色の油状物として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．４４（３Ｈ、トシル−ＣＨ
3 ）、６．１５（１Ｈ、アノマー性Ｈ−１） ＩＲ（cm-1）１７８３（ケトン振動） （＋）ＥＩ（ＭＷ）３４２
液を酢酸無水物８４mlで処理し、反応混合物を室温で一
夜攪拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ２５０ml及び水１
００mlで希釈し、３０分間攪拌し、有機相を分離した。
水相をＥｔＯＡｃ２５０mlで洗浄した。有機相を合わ
せ、水８００mlで洗浄し、続いて飽和ＮａＨＣＯ3 ４０
０mlで洗浄した。有機相を分離し、最後に食塩水２００
mlで洗浄した。次に、それをＮａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、
濃縮して、粗生成物を得た。溶離剤としてヘキサン／Ｅ
ｔＯＡｃを１．１：１の比率で使用したシリカゲルカラ
ムで精製して、ケトン３（５．５４g ）を非常に薄い黄
色の油状物として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．４４（３Ｈ、トシル−ＣＨ
3 ）、６．１５（１Ｈ、アノマー性Ｈ−１） ＩＲ（cm-1）１７８３（ケトン振動） （＋）ＥＩ（ＭＷ）３４２
【００６７】工程３：化合物４の合成（ａ及びｂ） ＣＨ3 ＣＮ８０ml中のケトン３（４．０１g ）の溶液を
酢酸メチル（トリフェニルホスホルアニリデン）７．８
３g で処理した。この薄黄色の反応混合物を還流状態で
３．５時間加熱したのち、室温に冷却し、濃縮乾固し
た。得られた残渣を再び最小量のＣＨ2 Ｃｌ2 に溶解
し、シリカゲルカラムに充填し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ
（１．９：１）を溶離剤として使用して溶離して、アル
ケン４ａ及び４ｂ合わせて２．７４g を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．４４（３Ｈ、トシル−ＣＨ
3 ）、５．８〜５．９（１Ｈ、アルケンーＨ） ＩＲ（cm-1）１７２５（エステル振動） （＋）ＥＩ（ＭＷ）３９８
酢酸メチル（トリフェニルホスホルアニリデン）７．８
３g で処理した。この薄黄色の反応混合物を還流状態で
３．５時間加熱したのち、室温に冷却し、濃縮乾固し
た。得られた残渣を再び最小量のＣＨ2 Ｃｌ2 に溶解
し、シリカゲルカラムに充填し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ
（１．９：１）を溶離剤として使用して溶離して、アル
ケン４ａ及び４ｂ合わせて２．７４g を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．４４（３Ｈ、トシル−ＣＨ
3 ）、５．８〜５．９（１Ｈ、アルケンーＨ） ＩＲ（cm-1）１７２５（エステル振動） （＋）ＥＩ（ＭＷ）３９８
【００６８】工程４：化合物５の合成 ＥｔＯＡｃ２０ml中のアルケン４（１．６５g ）の溶液
を１０％Ｐｄ／Ｃと共に水素雰囲気下に７時間、ＳＴＰ
条件下で攪拌した。次に、この溶液をセライトパッドに
通してろ過した。ろ液を濃縮して、粗生成物を白色の固
体として得た。ＭｅＯＨ／Ｅｔ2 Ｏを使用して生成物を
結晶化させて、飽和エステル５（１．１８g ）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．４５（３Ｈ、トシル−ＣＨ
3 ）、３．７１（３Ｈ、ＣＯＯＣＨ 3 ）、５．７１（１
Ｈ、アノマー性Ｈ−１） ＩＲ（cm-1）１７３４（エステル振動） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）４０１
を１０％Ｐｄ／Ｃと共に水素雰囲気下に７時間、ＳＴＰ
条件下で攪拌した。次に、この溶液をセライトパッドに
通してろ過した。ろ液を濃縮して、粗生成物を白色の固
体として得た。ＭｅＯＨ／Ｅｔ2 Ｏを使用して生成物を
結晶化させて、飽和エステル５（１．１８g ）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．４５（３Ｈ、トシル−ＣＨ
3 ）、３．７１（３Ｈ、ＣＯＯＣＨ 3 ）、５．７１（１
Ｈ、アノマー性Ｈ−１） ＩＲ（cm-1）１７３４（エステル振動） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）４０１
【００６９】工程５：化合物６の合成 ＴＨＦ７０ml中のメチルエステル５（７．３g ）の溶液
を室温で０．５N のＮａＯＨ４０mlで処理し、３時間攪
拌した。反応が完了したのち、それを濃縮乾固し、残渣
を０℃でＤＭＦ７０mlに取った。次に、この溶液をＮａ
ＨＣＯ3 ５．２g 及び臭化ベンジル３．３mlで処理し
た。反応物を、室温まで温めながら一夜攪拌した。
を室温で０．５N のＮａＯＨ４０mlで処理し、３時間攪
拌した。反応が完了したのち、それを濃縮乾固し、残渣
を０℃でＤＭＦ７０mlに取った。次に、この溶液をＮａ
ＨＣＯ3 ５．２g 及び臭化ベンジル３．３mlで処理し
た。反応物を、室温まで温めながら一夜攪拌した。
【００７０】反応混合物を濃縮乾固し、残渣をＣＨ2 Ｃ
ｌ2 ２００mlとＨ2 Ｏ（５０ml）とに分配した。有機相
を分離し、食塩水で洗浄したのち、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾
燥し、濃縮して粗生成物を得た。次に、これをヘキサン
１００mlずつで２回洗浄し、ヘキサン相をデカントし、
高減圧下に固体を乾燥して、純粋なベンジルエステル６
（７g ）を白色の固体として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．７０（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．１４及び５．１６（２Ｈ、ＰｈＣＨ 2 ） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）４７７ ＩＲ（cm-1）１７３３（エステル振動）
ｌ2 ２００mlとＨ2 Ｏ（５０ml）とに分配した。有機相
を分離し、食塩水で洗浄したのち、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾
燥し、濃縮して粗生成物を得た。次に、これをヘキサン
１００mlずつで２回洗浄し、ヘキサン相をデカントし、
高減圧下に固体を乾燥して、純粋なベンジルエステル６
（７g ）を白色の固体として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．７０（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．１４及び５．１６（２Ｈ、ＰｈＣＨ 2 ） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）４７７ ＩＲ（cm-1）１７３３（エステル振動）
【００７１】工程６：化合物７の合成 ＣＨ2 Ｃｌ2 １０５ml中のベンジルエステル６（８．４
８g ）の溶液を、−７８℃でブロモジメチルボラン５ml
で処理し、２時間攪拌した。冷却浴を取り除き、反応物
をさらに３時間攪拌した。１０分間かけて、反応混合物
を、十分に攪拌したＮａＨＣＯ3 ／ＴＨＦ（４：１）の
飽和溶液１５０mlにゆっくりと注加した。次に、この溶
液をさらに１５分間攪拌した。そして、これをＣＨ2 Ｃ
ｌ2 ２５０ml及びＨ2 Ｏ（１０ml）で希釈した。有機相
を分離し、食塩水１００mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で
乾燥し、濃縮して、粗生ジヒドロキシ中間体７．８g を
得た。
８g ）の溶液を、−７８℃でブロモジメチルボラン５ml
で処理し、２時間攪拌した。冷却浴を取り除き、反応物
をさらに３時間攪拌した。１０分間かけて、反応混合物
を、十分に攪拌したＮａＨＣＯ3 ／ＴＨＦ（４：１）の
飽和溶液１５０mlにゆっくりと注加した。次に、この溶
液をさらに１５分間攪拌した。そして、これをＣＨ2 Ｃ
ｌ2 ２５０ml及びＨ2 Ｏ（１０ml）で希釈した。有機相
を分離し、食塩水１００mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で
乾燥し、濃縮して、粗生ジヒドロキシ中間体７．８g を
得た。
【００７２】粗生成物を乾燥酢酸無水物１８mlに溶解
し、０℃に冷却した。次に、それをピリジン８．５mlで
処理し、室温まで温めながら一夜攪拌した。反応混合物
を０℃のＨ2 Ｏ（１０ml）で反応を止め、１５分間攪拌
した。次に、反応混合物を高減圧下に５０℃で濃縮乾固
した。残渣をＥｔＯＡｃ３００mlに溶解し、まずＨ2 Ｏ
（１２５ml）、次に食塩水１２５mlで洗浄した。次に、
ＥｔＯＡｃ層をＮａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濃縮して、ジ
アセタート７（８．６g ）を泡状固体として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）６．２２（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、２．０１及び２．０４（６Ｈ、ＯＣＯＣＨ 3 ） （＋）ＦＡＢ ＭＷ５２０ ＩＲ（cm-1）１７４６（エステル振動）
し、０℃に冷却した。次に、それをピリジン８．５mlで
処理し、室温まで温めながら一夜攪拌した。反応混合物
を０℃のＨ2 Ｏ（１０ml）で反応を止め、１５分間攪拌
した。次に、反応混合物を高減圧下に５０℃で濃縮乾固
した。残渣をＥｔＯＡｃ３００mlに溶解し、まずＨ2 Ｏ
（１２５ml）、次に食塩水１２５mlで洗浄した。次に、
ＥｔＯＡｃ層をＮａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濃縮して、ジ
アセタート７（８．６g ）を泡状固体として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）６．２２（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、２．０１及び２．０４（６Ｈ、ＯＣＯＣＨ 3 ） （＋）ＦＡＢ ＭＷ５２０ ＩＲ（cm-1）１７４６（エステル振動）
【００７３】工程７：化合物８の合成 ジクロロエタン１０５ml中のジアセタート７（８．６g
）及びＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）−チミン
７．２１g の懸濁液を、蒸留直後の塩化スズ（IV）２．
６mlで処理し、反応混合物を室温で２時間攪拌し、その
後、９０℃で１時間穏和に還流した。次に、反応混合物
を室温に冷却し、ＣＨ2 Ｃｌ2 ２５mlで希釈し、Ｈ2 Ｏ
（１０ml）で反応を止めた。３０分間攪拌したのち、Ｃ
Ｈ2 Ｃｌ2 ３００ml及びＨ2 Ｏ（１５０ml）でさらに希
釈した。次に、有機相を分離し、食塩水１５０mlで洗浄
し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濃縮して、ヌクレオシド
８（８．８g ）を白色の泡状固体として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．８０（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、７．９２（ｓ、１Ｈ、ＣＯＮＨＣＯ） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）５８７ ＩＲ（cm-1）１６９４（アミド振動）
）及びＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）−チミン
７．２１g の懸濁液を、蒸留直後の塩化スズ（IV）２．
６mlで処理し、反応混合物を室温で２時間攪拌し、その
後、９０℃で１時間穏和に還流した。次に、反応混合物
を室温に冷却し、ＣＨ2 Ｃｌ2 ２５mlで希釈し、Ｈ2 Ｏ
（１０ml）で反応を止めた。３０分間攪拌したのち、Ｃ
Ｈ2 Ｃｌ2 ３００ml及びＨ2 Ｏ（１５０ml）でさらに希
釈した。次に、有機相を分離し、食塩水１５０mlで洗浄
し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濃縮して、ヌクレオシド
８（８．８g ）を白色の泡状固体として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．８０（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、７．９２（ｓ、１Ｈ、ＣＯＮＨＣＯ） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）５８７ ＩＲ（cm-1）１６９４（アミド振動）
【００７４】工程８：化合物９の合成 ＤＭＦ８０ml中のヌクレオシド８（８．８g ）の溶液を
ＮａＮ3 ４．９４g と共に激しく攪拌し、反応混合物を
７５℃に温めた。反応混合物をこの温度で６時間攪拌し
た。次に、これを室温に冷却し、回転エバポレータ上５
０℃で濃縮乾固した。残渣をＥｔＯＡｃ３００mlとＨ2
Ｏ（２００ml）とに分配した。有機相を分離し、食塩水
溶液１００mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濃縮
し、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ１９：１を用いたクロマト
グラフィーに付して、アジド９（５．７g ）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．７７（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）４５８ ＩＲ（cm-1）２１０７（Ｎ3 ）
ＮａＮ3 ４．９４g と共に激しく攪拌し、反応混合物を
７５℃に温めた。反応混合物をこの温度で６時間攪拌し
た。次に、これを室温に冷却し、回転エバポレータ上５
０℃で濃縮乾固した。残渣をＥｔＯＡｃ３００mlとＨ2
Ｏ（２００ml）とに分配した。有機相を分離し、食塩水
溶液１００mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濃縮
し、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ１９：１を用いたクロマト
グラフィーに付して、アジド９（５．７g ）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．７７（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）４５８ ＩＲ（cm-1）２１０７（Ｎ3 ）
【００７５】工程９：化合物１０の合成 ＭｅＯＨ５０ml中のアジド９（４．１４g ）と１０％Ｐ
ｄ／Ｃ１．０６g との混合物をＨ2 雰囲気下にＳＴＰ条
件で攪拌した。反応混合物を２０時間攪拌したのち、セ
ライトパッドに通してろ過した。ろ過ケークをＭｅＯＨ
２５mlで洗浄し、合わせたろ液を濃縮して、アミノ酸１
０（３．０８g ）を得て、これをそのまま次の工程に使
用した。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．７７（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）３４２ ＩＲ（cm-1）３０００（ＣＯＯＨ振動）
ｄ／Ｃ１．０６g との混合物をＨ2 雰囲気下にＳＴＰ条
件で攪拌した。反応混合物を２０時間攪拌したのち、セ
ライトパッドに通してろ過した。ろ過ケークをＭｅＯＨ
２５mlで洗浄し、合わせたろ液を濃縮して、アミノ酸１
０（３．０８g ）を得て、これをそのまま次の工程に使
用した。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．７７（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）３４２ ＩＲ（cm-1）３０００（ＣＯＯＨ振動）
【００７６】工程１０：化合物１１の合成 １，４−ジオキサン／Ｈ2 Ｏ（１：１）５０ml中のアミ
ノ酸１０及びＮ−（９−フルオレニルメトキシカルボニ
ルオキシ）−スクシンミド３．３９g の溶液を０℃に冷
却した。次に、これをＮａＨＣＯ3 １．９５g で処理
し、４時間攪拌した。冷却浴を取り除き、室温でさらに
４時間攪拌を続けた。処理の間、反応混合物を回転エバ
ポレータ上５０℃で濃縮乾固した。残渣をＨ2 Ｏ（２０
０ml）及びＥｔＯＡｃ７５mlに取った。水相を分離し、
１．０N のＨＣｌでpH４の酸性とし、凍結乾燥した。粗
生成物を、Ｈ2 Ｏ／ＣＨ3 ＣＮを１．８６：１の比率で
溶離剤として用いた逆相シリカゲルカラム上で精製し
て、純粋な化合物１１（２g ）を白色の固体として得
た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．６４（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、１１．４（１Ｈ、ＦｍｏｃＨＮ） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）５６４ ＩＲ（cm-1）１６９６（アミド振動）、３４０１（ＣＯ
ＯＨ振動）
ノ酸１０及びＮ−（９−フルオレニルメトキシカルボニ
ルオキシ）−スクシンミド３．３９g の溶液を０℃に冷
却した。次に、これをＮａＨＣＯ3 １．９５g で処理
し、４時間攪拌した。冷却浴を取り除き、室温でさらに
４時間攪拌を続けた。処理の間、反応混合物を回転エバ
ポレータ上５０℃で濃縮乾固した。残渣をＨ2 Ｏ（２０
０ml）及びＥｔＯＡｃ７５mlに取った。水相を分離し、
１．０N のＨＣｌでpH４の酸性とし、凍結乾燥した。粗
生成物を、Ｈ2 Ｏ／ＣＨ3 ＣＮを１．８６：１の比率で
溶離剤として用いた逆相シリカゲルカラム上で精製し
て、純粋な化合物１１（２g ）を白色の固体として得
た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．６４（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、１１．４（１Ｈ、ＦｍｏｃＨＮ） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）５６４ ＩＲ（cm-1）１６９６（アミド振動）、３４０１（ＣＯ
ＯＨ振動）
【００７７】実施例２ アデニン構成単位１７の合成 工程１１：化合物１２の合成 ＤＭＦ６．６ml中のトシレート６（７１２mg）の溶液
を、アジ化ナトリウム５１２mgと共に激しく攪拌し、反
応混合物を６５℃に温めた。反応混合物をこの温度で５
時間攪拌した。次に、これを室温に冷却し、回転エバポ
レータ上４５℃で濃縮乾固した。残渣をＥｔＯＡｃ１５
０mlとＨ2 Ｏ（７５ml）とに分配した。有機相を分離
し、食塩水溶液４０mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥
し、濃縮し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ２：１を用いたクロ
マトグラフィーに付して、アジド１２（４６７mg）を得
た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．８２（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．１５（２Ｈ、ＰｈＣＨ 2 ） ＩＲ（cm-1）２１００（Ｎ3 ）
を、アジ化ナトリウム５１２mgと共に激しく攪拌し、反
応混合物を６５℃に温めた。反応混合物をこの温度で５
時間攪拌した。次に、これを室温に冷却し、回転エバポ
レータ上４５℃で濃縮乾固した。残渣をＥｔＯＡｃ１５
０mlとＨ2 Ｏ（７５ml）とに分配した。有機相を分離
し、食塩水溶液４０mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥
し、濃縮し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ２：１を用いたクロ
マトグラフィーに付して、アジド１２（４６７mg）を得
た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．８２（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．１５（２Ｈ、ＰｈＣＨ 2 ） ＩＲ（cm-1）２１００（Ｎ3 ）
【００７８】工程１２：化合物１３の合成 ＥｔＯＡｃ５ml中のアジド１２（１３０mg）の溶液を、
リンドラー触媒５８mgと共に、Ｈ2 雰囲気下にＳＴＰ条
件で攪拌した。反応混合物を６時間攪拌したのち、セラ
イトパッドに通してろ過した。ろ過ケークをＥｔＯＡｃ
２５mlで洗浄し、合わせたろ液を濃縮して、アミノ酸１
３（１００mg）を得て、これをそのまま次の工程に使用
した。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．７７（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．１５（２Ｈ、ＰｈＣＨ 2 ） ＩＲ（cm-1）アジド振動は見られず。
リンドラー触媒５８mgと共に、Ｈ2 雰囲気下にＳＴＰ条
件で攪拌した。反応混合物を６時間攪拌したのち、セラ
イトパッドに通してろ過した。ろ過ケークをＥｔＯＡｃ
２５mlで洗浄し、合わせたろ液を濃縮して、アミノ酸１
３（１００mg）を得て、これをそのまま次の工程に使用
した。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．７７（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．１５（２Ｈ、ＰｈＣＨ 2 ） ＩＲ（cm-1）アジド振動は見られず。
【００７９】工程１３：化合物１４の合成 アセトニトリル２ml中のアミン１３（１００mg）の溶液
を、まずトリエチルアミン０．０７ml、次にＦＭＯＣ−
Ｃｌ（８８mg）で処理し、反応混合物を室温で３時間攪
拌した。次に、反応混合物を濃縮乾固した。得られた残
渣をＣＨ2 Ｃｌ2 ２mlに再び溶解し、シリカゲルカラム
に充填し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ２：１を使用して溶離
させて、純粋な化合物１４（９５mg）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．８０（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．１５（２Ｈ、ＰｈＣＨ 2 ）、４．２０〜４．
４０（３Ｈ、Ｆｍｏｃ−ＣＨ 2 ＣＨ） ＩＲ（cm-1）３４５１（ＮＨ振動）、１７２５（ＣＯＯ
Ｂｎ振動） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）５４４
を、まずトリエチルアミン０．０７ml、次にＦＭＯＣ−
Ｃｌ（８８mg）で処理し、反応混合物を室温で３時間攪
拌した。次に、反応混合物を濃縮乾固した。得られた残
渣をＣＨ2 Ｃｌ2 ２mlに再び溶解し、シリカゲルカラム
に充填し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ２：１を使用して溶離
させて、純粋な化合物１４（９５mg）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．８０（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．１５（２Ｈ、ＰｈＣＨ 2 ）、４．２０〜４．
４０（３Ｈ、Ｆｍｏｃ−ＣＨ 2 ＣＨ） ＩＲ（cm-1）３４５１（ＮＨ振動）、１７２５（ＣＯＯ
Ｂｎ振動） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）５４４
【００８０】工程１４：化合物１５の合成 ＣＨ2 Ｃｌ2 ５５ml中の化合物１４の溶液を、−７８℃
でブロモジメチルボラン２．９mlで処理し、１．５時間
攪拌した。反応混合物を０℃に温め、さらに１時間攪拌
した。これを飽和ＮａＨＣＯ3 １０mlで反応を止め、３
０分間攪拌した。次に、反応混合物をＥｔＯＡｃ３００
ml及びＨ2 Ｏ（７５ml）で希釈した。有機相を分離し、
飽和ＮａＨＣＯ3 １００ml及び食塩水１００mlで洗浄
し、Ｎａ2ＳＯ4 上で乾燥し、濃縮して、粗生ジヒドロ
キシ中間体を得た。
でブロモジメチルボラン２．９mlで処理し、１．５時間
攪拌した。反応混合物を０℃に温め、さらに１時間攪拌
した。これを飽和ＮａＨＣＯ3 １０mlで反応を止め、３
０分間攪拌した。次に、反応混合物をＥｔＯＡｃ３００
ml及びＨ2 Ｏ（７５ml）で希釈した。有機相を分離し、
飽和ＮａＨＣＯ3 １００ml及び食塩水１００mlで洗浄
し、Ｎａ2ＳＯ4 上で乾燥し、濃縮して、粗生ジヒドロ
キシ中間体を得た。
【００８１】粗生成物を乾燥酢酸無水物５．４mlに溶解
し、０℃に冷却した。次に、それを乾燥ピリジン１２．
０mlで処理し、室温まで温めながら一夜攪拌した。それ
を０℃のＨ2 Ｏ（１０ml）で反応を止め、１５分間攪拌
した。次に、反応混合物を高減圧下に５０℃で濃縮乾固
した。残渣をＥｔＯＡｃ３００mlに溶解し、まずＨ2Ｏ
（１２５ml）、次に食塩水１２５mlで洗浄した。ＥｔＯ
Ａｃ相をＮａ2 ＳＯ4上で乾燥し、濃縮して粗生成物を
得て、これを、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ９：５を用いてク
ロマトグラフィーに付して、ジアセタート１５（３．８
５g ）を泡状固体として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）４．２３〜４．４２（３Ｈ、Ｆｍ
ｏｃ−ＣＨ 2 ＣＨ）、６．３６（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１） ＩＲ（cm-1）３４００（幅広なＮＨ振動）、１７４０
（ＣＯＯＢｎ振動） （＋）ＦＡＢ ＭＷ５８７
し、０℃に冷却した。次に、それを乾燥ピリジン１２．
０mlで処理し、室温まで温めながら一夜攪拌した。それ
を０℃のＨ2 Ｏ（１０ml）で反応を止め、１５分間攪拌
した。次に、反応混合物を高減圧下に５０℃で濃縮乾固
した。残渣をＥｔＯＡｃ３００mlに溶解し、まずＨ2Ｏ
（１２５ml）、次に食塩水１２５mlで洗浄した。ＥｔＯ
Ａｃ相をＮａ2 ＳＯ4上で乾燥し、濃縮して粗生成物を
得て、これを、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ９：５を用いてク
ロマトグラフィーに付して、ジアセタート１５（３．８
５g ）を泡状固体として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）４．２３〜４．４２（３Ｈ、Ｆｍ
ｏｃ−ＣＨ 2 ＣＨ）、６．３６（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１） ＩＲ（cm-1）３４００（幅広なＮＨ振動）、１７４０
（ＣＯＯＢｎ振動） （＋）ＦＡＢ ＭＷ５８７
【００８２】工程１５：化合物１６の合成 トルエン２０ml中のジアセタート１５（１．５１g ）及
びＮ−６，７−ビス（トリメチルシリル）−Ｎ−６−ベ
ンゾイルアデニン９．５g の懸濁液を、ＴＭＳＯＴｆ
１．０mlで処理し、反応混合物を室温で一夜攪拌した。
次に、反応混合物を高減圧下に４５℃で濃縮乾固した。
残渣をＥｔＯＡｃ２５０mlとＨ2 Ｏ（１２５ml）とに分
配した。有機相を分離し、飽和ＮａＨＣＯ3 １００ml及
び食塩水１００mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、
濃縮し、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ６５：１を用いてクロ
マトグラフィーに付して、純粋な１６（９２０mg）を白
色の固体として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．０２（１Ｈ、ＯＣＯＣＨ
3 ）、４．２０〜４．４０（３Ｈ、Ｆｍｏｃ−ＣＨ 2 Ｃ
Ｈ）、５．９５（１Ｈ、アノマー性Ｈ−１）、６．９２
（１Ｈ、Ｆｍｏｃ−ＨＮ）、８．０６（１Ｈ、アデニン
−Ｃ−２Ｈ）、８．７１（１Ｈ、アデニン−Ｃ−８
Ｈ）、８．９７（１Ｈ、ＮＨＣＯＰｈ） ＩＲ（cm-1）３４００（幅広なＮＨ振動）、１７３７
（ＣＯＯＢｎ振動）、１７１４（ＮＨＣＯＯ−ウレタン
振動） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）７６７
びＮ−６，７−ビス（トリメチルシリル）−Ｎ−６−ベ
ンゾイルアデニン９．５g の懸濁液を、ＴＭＳＯＴｆ
１．０mlで処理し、反応混合物を室温で一夜攪拌した。
次に、反応混合物を高減圧下に４５℃で濃縮乾固した。
残渣をＥｔＯＡｃ２５０mlとＨ2 Ｏ（１２５ml）とに分
配した。有機相を分離し、飽和ＮａＨＣＯ3 １００ml及
び食塩水１００mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、
濃縮し、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ６５：１を用いてクロ
マトグラフィーに付して、純粋な１６（９２０mg）を白
色の固体として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．０２（１Ｈ、ＯＣＯＣＨ
3 ）、４．２０〜４．４０（３Ｈ、Ｆｍｏｃ−ＣＨ 2 Ｃ
Ｈ）、５．９５（１Ｈ、アノマー性Ｈ−１）、６．９２
（１Ｈ、Ｆｍｏｃ−ＨＮ）、８．０６（１Ｈ、アデニン
−Ｃ−２Ｈ）、８．７１（１Ｈ、アデニン−Ｃ−８
Ｈ）、８．９７（１Ｈ、ＮＨＣＯＰｈ） ＩＲ（cm-1）３４００（幅広なＮＨ振動）、１７３７
（ＣＯＯＢｎ振動）、１７１４（ＮＨＣＯＯ−ウレタン
振動） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）７６７
【００８３】工程１６：化合物１７の合成 ＭｅＯＨ１５ml中のヌクレオシド１６（７６０mg）と、
ＨＣＯＯＨ５滴との混合物を、１０％Ｐｄ／Ｃ３１０mg
と共に、Ｈ2 雰囲気下にＳＴＰ条件で攪拌した。反応混
合物を１８時間攪拌したのち、セライトパッドに通して
ろ過した。ろ過ケークをＭｅＯＨ２５mlで洗浄し、合わ
せたろ液を濃縮して粗生成物を得て、これを、Ｈ2 Ｏ／
ＣＨ3 ＣＮを１．５：１の比率で溶離剤として用いた逆
相シリカゲルカラム上で精製して、純粋な化合物１７を
白色の固体４３２mgとして得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．１６（１Ｈ、ＯＣＯＣＨ
3 ）、４．２８〜４．４５（３Ｈ、Ｆｍｏｃ−ＣＨ 2 Ｃ
Ｈ）、６．０３（１Ｈ、アノマー性Ｈ−１）、７．２０
（１Ｈ、Ｆｍｏｃ−ＨＮ）、８．１６（１Ｈ、アデニン
−Ｃ−２Ｈ）、８．７５（１Ｈ、アデニン−Ｃ−８
Ｈ）、９．４２（１Ｈ、ＮＨＣＯＰｈ） ＩＲ（cm-1）３４００（幅広なＮＨ振動）、１７０９及
び１７２０（酸及びエステルの幅広な振動） ＬＲ−ＥＩ（Ｍ＋１）６７７
ＨＣＯＯＨ５滴との混合物を、１０％Ｐｄ／Ｃ３１０mg
と共に、Ｈ2 雰囲気下にＳＴＰ条件で攪拌した。反応混
合物を１８時間攪拌したのち、セライトパッドに通して
ろ過した。ろ過ケークをＭｅＯＨ２５mlで洗浄し、合わ
せたろ液を濃縮して粗生成物を得て、これを、Ｈ2 Ｏ／
ＣＨ3 ＣＮを１．５：１の比率で溶離剤として用いた逆
相シリカゲルカラム上で精製して、純粋な化合物１７を
白色の固体４３２mgとして得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．１６（１Ｈ、ＯＣＯＣＨ
3 ）、４．２８〜４．４５（３Ｈ、Ｆｍｏｃ−ＣＨ 2 Ｃ
Ｈ）、６．０３（１Ｈ、アノマー性Ｈ−１）、７．２０
（１Ｈ、Ｆｍｏｃ−ＨＮ）、８．１６（１Ｈ、アデニン
−Ｃ−２Ｈ）、８．７５（１Ｈ、アデニン−Ｃ−８
Ｈ）、９．４２（１Ｈ、ＮＨＣＯＰｈ） ＩＲ（cm-1）３４００（幅広なＮＨ振動）、１７０９及
び１７２０（酸及びエステルの幅広な振動） ＬＲ−ＥＩ（Ｍ＋１）６７７
【００８４】実施例３ シトシン構成単位１９の合成 工程１７：化合物１８の合成 トルエン２ml中のジアセタート１５（９１mg）及びトリ
メチルシリル−Ｎ−６−ベンゾイルシトシン７６mgの溶
液をＴＭＳＯＴｆ０．０７mlで処理し、反応混合物を室
温で一夜攪拌した。反応物をＣＨ2 Ｃｌ2 ５０mlで希釈
し、食塩水２５mlで洗浄し、続いて飽和ＮａＨＣＯ3 ２
５mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濃縮乾固し
た。残渣をメタノールから再結晶して、純粋な１８（６
９mg）を白色の固体として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．０２（３Ｈ、ＯＣＯＣＨ
3 ）、４．２５〜４．５０（３Ｈ、Ｆｍｏｃ−ＣＨ 2 Ｃ
Ｈ）、５．１１（２Ｈ、ＣＨ 2 Ｐｈ）、５．６３（１
Ｈ、Ｃ−１′−Ｈ）、８．６６（１Ｈ、ＮＨＣＯＰｈ） ＦＡＢ ＭＷ７４２
メチルシリル−Ｎ−６−ベンゾイルシトシン７６mgの溶
液をＴＭＳＯＴｆ０．０７mlで処理し、反応混合物を室
温で一夜攪拌した。反応物をＣＨ2 Ｃｌ2 ５０mlで希釈
し、食塩水２５mlで洗浄し、続いて飽和ＮａＨＣＯ3 ２
５mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濃縮乾固し
た。残渣をメタノールから再結晶して、純粋な１８（６
９mg）を白色の固体として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．０２（３Ｈ、ＯＣＯＣＨ
3 ）、４．２５〜４．５０（３Ｈ、Ｆｍｏｃ−ＣＨ 2 Ｃ
Ｈ）、５．１１（２Ｈ、ＣＨ 2 Ｐｈ）、５．６３（１
Ｈ、Ｃ−１′−Ｈ）、８．６６（１Ｈ、ＮＨＣＯＰｈ） ＦＡＢ ＭＷ７４２
【００８５】工程１８：化合物１９の合成 ベンジルエステル１８（０．６５g ）をジオキサン６５
ml及び０．１％ギ酸に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ２８５mg
と共に、Ｈ2 雰囲気下にＳＴＰ条件で攪拌した。反応物
を６４時間攪拌したのち、セライトパッドに通してろ過
した。ろ過ケークをＣＨ2 Ｃｌ2 ２００mlで洗浄し、合
わせたろ液を濃縮して粗生成物を得て、これを、ＣＨ2
Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨを用いたクロマトグラフィーに付し
て、純粋な１９（３５６mg）を白色の固体として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．１０（３Ｈ、ＣＯＣＨ 3 ）、
４．２０〜４．４０（３Ｈ、Ｆｍｏｃ−ＣＨ 2 ＣＨ）、
５．４９（１Ｈ、Ｃ−２′−Ｈ）、５．６８（１Ｈ、Ｃ
−１′−Ｈ）、８．２３（１Ｈ、シトシン−Ｃ−６−
Ｈ） ＵＶ（ＭｅＯＨ）max ２６１nm、Ｅ＝３７，６００、
max ２８８nm、Ｅ＝１１，９００ ＩＲ（cm-1）１７０６（酸振動）、１６７１（アミド振
動） （＋）ＦＡＢ ＭＷ６５２ Ｃ35Ｈ32Ｎ4 Ｏ9 ・１Ｈ2 ＯのＣＨＮ 計算値Ｃ＝６２．６８、Ｈ＝５．１１、Ｎ＝８．３５ 実測値Ｃ＝６２．２９、Ｈ＝４．９２、Ｎ＝８．２０
ml及び０．１％ギ酸に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ２８５mg
と共に、Ｈ2 雰囲気下にＳＴＰ条件で攪拌した。反応物
を６４時間攪拌したのち、セライトパッドに通してろ過
した。ろ過ケークをＣＨ2 Ｃｌ2 ２００mlで洗浄し、合
わせたろ液を濃縮して粗生成物を得て、これを、ＣＨ2
Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨを用いたクロマトグラフィーに付し
て、純粋な１９（３５６mg）を白色の固体として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．１０（３Ｈ、ＣＯＣＨ 3 ）、
４．２０〜４．４０（３Ｈ、Ｆｍｏｃ−ＣＨ 2 ＣＨ）、
５．４９（１Ｈ、Ｃ−２′−Ｈ）、５．６８（１Ｈ、Ｃ
−１′−Ｈ）、８．２３（１Ｈ、シトシン−Ｃ−６−
Ｈ） ＵＶ（ＭｅＯＨ）max ２６１nm、Ｅ＝３７，６００、
max ２８８nm、Ｅ＝１１，９００ ＩＲ（cm-1）１７０６（酸振動）、１６７１（アミド振
動） （＋）ＦＡＢ ＭＷ６５２ Ｃ35Ｈ32Ｎ4 Ｏ9 ・１Ｈ2 ＯのＣＨＮ 計算値Ｃ＝６２．６８、Ｈ＝５．１１、Ｎ＝８．３５ 実測値Ｃ＝６２．２９、Ｈ＝４．９２、Ｎ＝８．２０
【００８６】実施例４ グアニン構成単位２３の合成 工程１９：化合物２０の合成 トルエン４ml中のトシルジアセタート７（０．２６g ）
及びトリメチルシリル−Ｎ−２−アセチル−６−Ｏ−ジ
フェニルカルバモイルグアニン０．３９g の溶液をＴＭ
ＳＯＴｆ０．１２mlで処理し、５０℃で２時間攪拌し
た。混合物を室温まで冷却し、トリエチルアミン０．９
mlで処理し、溶媒を蒸発させて油状物を得た。この粗生
成物を、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／酢酸エチル１：１を用いたクロ
マトグラフィーに付して、純粋なヌクレオシド２０（２
１６mg）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．００（３Ｈ、ＣＯＣＨ 3 ）、
２．２９（３Ｈ、ＣＯＣＨ 3 ）、２．３７（３Ｈ、Ｐｈ
ＣＨ 3 ）、５．１１（２Ｈ、ＯＣＨ 2 Ｐｈ）、５．６２
（１Ｈ、Ｃ−２′−Ｈ）、５．８１（１Ｈ、Ｃ−１′−
Ｈ）、７．８９（１Ｈ、プリンＣ−８−Ｈ）、８．０３
（１Ｈ、ＮＨＯＣＨ3 ） （＋）ＦＡＢ ＭＷ８４８ ＵＶ（ＭｅＯＨ）max ２２６nm、Ｅ＝３８，４００、
max ２７８nm、Ｅ＝１１，２００ ＩＲ（cm-1）３４２８〜３３９６（幅広アミド振動）、
１７４０（エステル振動）、１６９５（アセタート及び
アミド振動） Ｃ43Ｈ40Ｎ6 Ｏ11ＳのＣＨＮ 計算値Ｃ＝６０．８４、Ｈ＝４．７５、Ｎ＝９．９０ 実測値Ｃ＝６０．８９、Ｈ＝４．６５、Ｎ＝９．８３
及びトリメチルシリル−Ｎ−２−アセチル−６−Ｏ−ジ
フェニルカルバモイルグアニン０．３９g の溶液をＴＭ
ＳＯＴｆ０．１２mlで処理し、５０℃で２時間攪拌し
た。混合物を室温まで冷却し、トリエチルアミン０．９
mlで処理し、溶媒を蒸発させて油状物を得た。この粗生
成物を、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／酢酸エチル１：１を用いたクロ
マトグラフィーに付して、純粋なヌクレオシド２０（２
１６mg）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．００（３Ｈ、ＣＯＣＨ 3 ）、
２．２９（３Ｈ、ＣＯＣＨ 3 ）、２．３７（３Ｈ、Ｐｈ
ＣＨ 3 ）、５．１１（２Ｈ、ＯＣＨ 2 Ｐｈ）、５．６２
（１Ｈ、Ｃ−２′−Ｈ）、５．８１（１Ｈ、Ｃ−１′−
Ｈ）、７．８９（１Ｈ、プリンＣ−８−Ｈ）、８．０３
（１Ｈ、ＮＨＯＣＨ3 ） （＋）ＦＡＢ ＭＷ８４８ ＵＶ（ＭｅＯＨ）max ２２６nm、Ｅ＝３８，４００、
max ２７８nm、Ｅ＝１１，２００ ＩＲ（cm-1）３４２８〜３３９６（幅広アミド振動）、
１７４０（エステル振動）、１６９５（アセタート及び
アミド振動） Ｃ43Ｈ40Ｎ6 Ｏ11ＳのＣＨＮ 計算値Ｃ＝６０．８４、Ｈ＝４．７５、Ｎ＝９．９０ 実測値Ｃ＝６０．８９、Ｈ＝４．６５、Ｎ＝９．８３
【００８７】工程２０：化合物２１の合成 ＤＭＦ２５ml中のトシルヌクレオシド２０（０．８５g
）及びアジ化リチウム２．３g の溶液を６０℃で５時
間攪拌した。反応混合物から溶媒を蒸発させ、ＣＨ2 Ｃ
ｌ2 と食塩水とに分配した。有機相をＮａ2 ＳＯ4 上で
乾燥し、蒸発し、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ２５：１を用
いたクロマトグラフィーに付して、アジド２１（２６５
mg）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．０８（３Ｈ、ＣＯＣＨ 3 ）、
２．２７（３Ｈ、ＣＯＣＨ 3 ）、５．１４（２Ｈ、ＯＣ
Ｈ 2 Ｐｈ）、５．８０（１Ｈ、Ｃ−１′−Ｈ）、５．９
１（１Ｈ、Ｃ−２′−Ｈ）、７．７９（１Ｈ、プリン−
Ｃ−８−Ｈ）、８．８８（１Ｈ、ＮＨ） （＋）ＦＡＢ ＭＷ５２４ ＵＶ（pH１）max ２６０nm、Ｅ＝１７，４００、（pH
７）max ２５８nm、Ｅ＝１６，８５０、（pH１２）max
２６４nm、Ｅ＝１３，９００ ＩＲ（cm-1）２１０２（アジド振動）、１７４１（エス
テル振動）、１６７８（アミド振動） Ｃ23Ｈ24Ｎ8 Ｏ7 のＣＨＮ 計算値Ｃ＝５２．６７、Ｈ＝４．６１、Ｎ＝２１．３６ 実測値Ｃ＝５２．１１、Ｈ＝４．４７、Ｎ＝２０．９５
）及びアジ化リチウム２．３g の溶液を６０℃で５時
間攪拌した。反応混合物から溶媒を蒸発させ、ＣＨ2 Ｃ
ｌ2 と食塩水とに分配した。有機相をＮａ2 ＳＯ4 上で
乾燥し、蒸発し、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ２５：１を用
いたクロマトグラフィーに付して、アジド２１（２６５
mg）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．０８（３Ｈ、ＣＯＣＨ 3 ）、
２．２７（３Ｈ、ＣＯＣＨ 3 ）、５．１４（２Ｈ、ＯＣ
Ｈ 2 Ｐｈ）、５．８０（１Ｈ、Ｃ−１′−Ｈ）、５．９
１（１Ｈ、Ｃ−２′−Ｈ）、７．７９（１Ｈ、プリン−
Ｃ−８−Ｈ）、８．８８（１Ｈ、ＮＨ） （＋）ＦＡＢ ＭＷ５２４ ＵＶ（pH１）max ２６０nm、Ｅ＝１７，４００、（pH
７）max ２５８nm、Ｅ＝１６，８５０、（pH１２）max
２６４nm、Ｅ＝１３，９００ ＩＲ（cm-1）２１０２（アジド振動）、１７４１（エス
テル振動）、１６７８（アミド振動） Ｃ23Ｈ24Ｎ8 Ｏ7 のＣＨＮ 計算値Ｃ＝５２．６７、Ｈ＝４．６１、Ｎ＝２１．３６ 実測値Ｃ＝５２．１１、Ｈ＝４．４７、Ｎ＝２０．９５
【００８８】工程２１：化合物２２の合成 ＭｅＯＨ１５ml中のアジド２１（０．２８g ）の溶液
を、１０％Ｐｄ／Ｃ１１４mgと共に、Ｈ2 雰囲気下にＳ
ＴＰ条件で攪拌した。反応物を５時間攪拌し、セライト
パッドに通してろ過した。ろ過ケークをメタノールで洗
浄し、次に水で洗浄した。ろ液から溶媒を蒸発させて、
粗アミノ酸２２（１９２mg）を得た。
を、１０％Ｐｄ／Ｃ１１４mgと共に、Ｈ2 雰囲気下にＳ
ＴＰ条件で攪拌した。反応物を５時間攪拌し、セライト
パッドに通してろ過した。ろ過ケークをメタノールで洗
浄し、次に水で洗浄した。ろ液から溶媒を蒸発させて、
粗アミノ酸２２（１９２mg）を得た。
【００８９】工程２２：化合物２３の合成 ＣＨ3 ／ＣＮ／ＴＨＦ（１：１）５０ml中のアミノ酸２
２（１９２mg）の溶液を、トリエチルアミン０．２１ml
及びＦｍｏｃ−ヒドロキシ−スクシンイミド１９９mg
で、まず４℃で、次に室温で、１時間処理した。反応混
合物を濃縮乾固し、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ（５：２）
に溶解して、純粋な化合物２３（１３９mg）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．０８（３Ｈ、ＣＯＣＨ 3 ）、
２．１５（３Ｈ、ＣＯＣＨ 3 ）、４．１９（３Ｈ、Ｆｍ
ｏｃ ＣＨＣＨ 2 ）、５．６１（１Ｈ、Ｃ−２′−
Ｈ）、５．８７（１Ｈ、Ｃ−１′−Ｈ） （＋）ＦＡＢ ＭＷ６３０ ＵＶ（ＭｅＯＨ）max ２６１nm、Ｅ＝２７，６００、
max ２８８nm、Ｅ＝１２，５００ ＩＲ（cm-1）２８８０〜３５００（幅広なＯＨ及びＮＨ
振動）
２（１９２mg）の溶液を、トリエチルアミン０．２１ml
及びＦｍｏｃ−ヒドロキシ−スクシンイミド１９９mg
で、まず４℃で、次に室温で、１時間処理した。反応混
合物を濃縮乾固し、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ（５：２）
に溶解して、純粋な化合物２３（１３９mg）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）２．０８（３Ｈ、ＣＯＣＨ 3 ）、
２．１５（３Ｈ、ＣＯＣＨ 3 ）、４．１９（３Ｈ、Ｆｍ
ｏｃ ＣＨＣＨ 2 ）、５．６１（１Ｈ、Ｃ−２′−
Ｈ）、５．８７（１Ｈ、Ｃ−１′−Ｈ） （＋）ＦＡＢ ＭＷ６３０ ＵＶ（ＭｅＯＨ）max ２６１nm、Ｅ＝２７，６００、
max ２８８nm、Ｅ＝１２，５００ ＩＲ（cm-1）２８８０〜３５００（幅広なＯＨ及びＮＨ
振動）
【００９０】実施例５ ダイマー３０の合成 工程２３：化合物２４の合成 ＣＨ2 Ｃｌ2 １２ml中のメチルエステル５（１．０４g
）の溶液を、−７８℃でブロモジメチルボラン１．１m
lで処理し、２時間攪拌した。冷却浴を取り除き、反応
物をさらに１時間攪拌した。１０分間かけて、反応混合
物を、十分に攪拌したＮａＨＣＯ3 ／ＴＨＦ（２：１）
の飽和溶液７５mlに注加した。次に、この溶液をさらに
２０分間攪拌した。次に、これをＣＨ2 Ｃｌ2 １５０ml
及びＨ2 Ｏ（１００ml）で希釈した。有機相を分離し、
食塩水１００mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濃
縮して、粗生ジヒドロキシ中間体７．８g を得た。
）の溶液を、−７８℃でブロモジメチルボラン１．１m
lで処理し、２時間攪拌した。冷却浴を取り除き、反応
物をさらに１時間攪拌した。１０分間かけて、反応混合
物を、十分に攪拌したＮａＨＣＯ3 ／ＴＨＦ（２：１）
の飽和溶液７５mlに注加した。次に、この溶液をさらに
２０分間攪拌した。次に、これをＣＨ2 Ｃｌ2 １５０ml
及びＨ2 Ｏ（１００ml）で希釈した。有機相を分離し、
食塩水１００mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濃
縮して、粗生ジヒドロキシ中間体７．８g を得た。
【００９１】粗生成物を乾燥酢酸無水物１０．０mlに溶
解し、０℃に冷却した。次に、これを乾燥ピリジン５．
０mlで処理し、室温まで温めながら一夜攪拌した。それ
を０℃のＨ2 Ｏ（１０ml）で反応を止め、１５分間攪拌
した。次に、反応混合物を高減圧下に５０℃で濃縮乾固
した。残渣をＥｔＯＡｃ１５０mlに溶解し、まずＨ2Ｏ
（５０ml）、次に食塩水１２５mlで洗浄した。次に、Ｅ
ｔＯＡｃ相をＮａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濃縮して、ジア
セタート２４（１．０７g ）を泡状固体として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）６．０３及び６．２０（１Ｈ、ア
ノマー性Ｈ−１−ａ及びｂ）、３．７０（ｓ、３Ｈ、Ｃ
ＯＯＣＨ 3 ）、２．０６及び２．０９（ｓ、６Ｈ、ＯＣ
ＯＣＨ 3 ） ＩＲ（cm-1）１７４５（エステル振動）
解し、０℃に冷却した。次に、これを乾燥ピリジン５．
０mlで処理し、室温まで温めながら一夜攪拌した。それ
を０℃のＨ2 Ｏ（１０ml）で反応を止め、１５分間攪拌
した。次に、反応混合物を高減圧下に５０℃で濃縮乾固
した。残渣をＥｔＯＡｃ１５０mlに溶解し、まずＨ2Ｏ
（５０ml）、次に食塩水１２５mlで洗浄した。次に、Ｅ
ｔＯＡｃ相をＮａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濃縮して、ジア
セタート２４（１．０７g ）を泡状固体として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）６．０３及び６．２０（１Ｈ、ア
ノマー性Ｈ−１−ａ及びｂ）、３．７０（ｓ、３Ｈ、Ｃ
ＯＯＣＨ 3 ）、２．０６及び２．０９（ｓ、６Ｈ、ＯＣ
ＯＣＨ 3 ） ＩＲ（cm-1）１７４５（エステル振動）
【００９２】工程２４：化合物２５の合成 ジクロロエタン３３ml中のジアセタート２４（２．８５
g ）及びＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）−チミン
２．３７g の懸濁液を、蒸留直後の塩化スズ（IV）０．
７５mlで処理し、反応混合物を室温で２時間攪拌し、そ
の後、１時間還流した。次に、反応混合物を室温に冷却
し、ＣＨ2 Ｃｌ2 ２５mlで希釈し、Ｈ2 Ｏ（１０ml）で
反応を止めた。
g ）及びＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）−チミン
２．３７g の懸濁液を、蒸留直後の塩化スズ（IV）０．
７５mlで処理し、反応混合物を室温で２時間攪拌し、そ
の後、１時間還流した。次に、反応混合物を室温に冷却
し、ＣＨ2 Ｃｌ2 ２５mlで希釈し、Ｈ2 Ｏ（１０ml）で
反応を止めた。
【００９３】３０分間攪拌したのち、ＣＨ2 Ｃｌ2 ５０
ml及びＨ2 Ｏ（１００ml）でさらに希釈した。次に、有
機相を分離し、食塩水溶液１５０mlで洗浄し、Ｎａ2 Ｓ
Ｏ4上で乾燥し、濃縮して粗生成物を得て、これを、Ｃ
Ｈ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ（３０：１）を溶離剤として使用
したクロマトグラフィーに付して、ヌクレオシド２５
（３．１５g ）を白色の泡状固体として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．６９（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．４０（１Ｈ、Ｈ−２）、３．６４（３Ｈ、Ｃ
ＯＯＣＨ 3 ）、２．０６（３Ｈ、ＯＣＯＣＨ 3 ）、１．
８９（３Ｈ、チミン−ＣＨ 3 ） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）５１１ ＩＲ（cm-1）１６９３（ラクタム振動）、１７３９（エ
ステル振動）
ml及びＨ2 Ｏ（１００ml）でさらに希釈した。次に、有
機相を分離し、食塩水溶液１５０mlで洗浄し、Ｎａ2 Ｓ
Ｏ4上で乾燥し、濃縮して粗生成物を得て、これを、Ｃ
Ｈ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ（３０：１）を溶離剤として使用
したクロマトグラフィーに付して、ヌクレオシド２５
（３．１５g ）を白色の泡状固体として得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．６９（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．４０（１Ｈ、Ｈ−２）、３．６４（３Ｈ、Ｃ
ＯＯＣＨ 3 ）、２．０６（３Ｈ、ＯＣＯＣＨ 3 ）、１．
８９（３Ｈ、チミン−ＣＨ 3 ） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）５１１ ＩＲ（cm-1）１６９３（ラクタム振動）、１７３９（エ
ステル振動）
【００９４】工程２５：化合物２６の合成 ＤＭＦ３．０ml中ヌクレオシド２５（２６３mg）の溶液
を、アジ化ナトリウム２３４mgと共に激しく攪拌し、反
応混合物を７５℃に温めた。反応混合物をこの温度で３
時間攪拌した。次に、これを室温に冷却し、回転エバポ
レータ上５０℃で濃縮乾固した。残渣をＥｔＯＡｃ１０
０mlとＨ2 Ｏ（５０ml）とに分配した。有機相を分離
し、食塩水溶液２５mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥
し、濃縮し、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ３０：１を用いた
クロマトグラフィーに付して、アジド２６（１９０mg）
を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．７３（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．４８（１Ｈ、Ｈ−２）、３．７０（３Ｈ、Ｃ
ＯＯＣＨ 3 ）、１．９０（３Ｈ、チミン−ＣＨ 3） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）３８２ ＩＲ（cm-1）２１０７（Ｎ3 ）、１７３９（エステル振
動）、１６９４（ラクタム振動）
を、アジ化ナトリウム２３４mgと共に激しく攪拌し、反
応混合物を７５℃に温めた。反応混合物をこの温度で３
時間攪拌した。次に、これを室温に冷却し、回転エバポ
レータ上５０℃で濃縮乾固した。残渣をＥｔＯＡｃ１０
０mlとＨ2 Ｏ（５０ml）とに分配した。有機相を分離
し、食塩水溶液２５mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥
し、濃縮し、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ３０：１を用いた
クロマトグラフィーに付して、アジド２６（１９０mg）
を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．７３（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．４８（１Ｈ、Ｈ−２）、３．７０（３Ｈ、Ｃ
ＯＯＣＨ 3 ）、１．９０（３Ｈ、チミン−ＣＨ 3） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）３８２ ＩＲ（cm-1）２１０７（Ｎ3 ）、１７３９（エステル振
動）、１６９４（ラクタム振動）
【００９５】工程２６：化合物２７の合成 メタノール３ml中のアジド２６（９８mg）の溶液を０℃
に冷却し、無水アンモニアガスを約５分間この溶液に通
した。反応フラスコを封止し、得られた溶液を約１２時
間攪拌し、その後、溶剤を除去し、粗生ヒドロキシアミ
ドを、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ９：１を溶離剤として用
いてクロマトグラフィーに付して、純粋な生成物６８mg
を得た。
に冷却し、無水アンモニアガスを約５分間この溶液に通
した。反応フラスコを封止し、得られた溶液を約１２時
間攪拌し、その後、溶剤を除去し、粗生ヒドロキシアミ
ドを、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ９：１を溶離剤として用
いてクロマトグラフィーに付して、純粋な生成物６８mg
を得た。
【００９６】次に、この化合物をピリジン１．０mlに溶
解し、酢酸無水物０．１mlで０℃で処理した。１２時間
攪拌したのち、反応を水数滴で止め、濃縮乾固した。得
られた粗生アセタートを、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ１
２：１を溶離剤として用いたクロマトグラフィーに付し
て、純粋な２７（６３mg）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．７７（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．４４（１Ｈ、Ｈ−２）、２．１０（３Ｈ、Ｏ
ＣＯＣＨ 3 ）、１．９０（３Ｈ、チミン−ＣＨ 3） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）３６７ ＩＲ（cm-1）３４０８（幅広なＮＨ振動）、２１２２
（アジド振動）、１７５０（エステル振動）、１７１９
（ラクタム振動）、１６６５（アミド振動）
解し、酢酸無水物０．１mlで０℃で処理した。１２時間
攪拌したのち、反応を水数滴で止め、濃縮乾固した。得
られた粗生アセタートを、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ１
２：１を溶離剤として用いたクロマトグラフィーに付し
て、純粋な２７（６３mg）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．７７（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．４４（１Ｈ、Ｈ−２）、２．１０（３Ｈ、Ｏ
ＣＯＣＨ 3 ）、１．９０（３Ｈ、チミン−ＣＨ 3） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）３６７ ＩＲ（cm-1）３４０８（幅広なＮＨ振動）、２１２２
（アジド振動）、１７５０（エステル振動）、１７１９
（ラクタム振動）、１６６５（アミド振動）
【００９７】工程２７：化合物２８の合成 ＭｅＯＨ３．５ml中のアジド２７（６０mg）と、１０％
Ｐｄ／Ｃ２０mgとの混合物を、Ｈ2 雰囲気下にＳＴＰ条
件で攪拌した。反応混合物を３０分間攪拌したのち、セ
ライトパッドに通してろ過した。ろ過ケークをＭｅＯＨ
２５mlで洗浄し、合わせたろ液を濃縮して粗生成物を得
て、これを、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ／イソプロピルア
ミン９：１：０．１を使用してクロマトグラフィーに付
して、純粋なアミン２８（３９mg）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．６６（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．４１（１Ｈ、Ｈ−２）、２．１０（３Ｈ、Ｏ
ＣＯＣＨ 3 ）、１．８９（３Ｈ、チミン−ＣＨ 3） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）３４１ ＩＲ（cm-1）３４００（幅広なＮＨ振動）、１７４０
（エステル振動）、１６９２（幅広なラクタム及びアミ
ド振動）
Ｐｄ／Ｃ２０mgとの混合物を、Ｈ2 雰囲気下にＳＴＰ条
件で攪拌した。反応混合物を３０分間攪拌したのち、セ
ライトパッドに通してろ過した。ろ過ケークをＭｅＯＨ
２５mlで洗浄し、合わせたろ液を濃縮して粗生成物を得
て、これを、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨ／イソプロピルア
ミン９：１：０．１を使用してクロマトグラフィーに付
して、純粋なアミン２８（３９mg）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．６６（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．４１（１Ｈ、Ｈ−２）、２．１０（３Ｈ、Ｏ
ＣＯＣＨ 3 ）、１．８９（３Ｈ、チミン−ＣＨ 3） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）３４１ ＩＲ（cm-1）３４００（幅広なＮＨ振動）、１７４０
（エステル振動）、１６９２（幅広なラクタム及びアミ
ド振動）
【００９８】工程２８：化合物２９の合成 ＭｅＯＨ２．０ml中のベンジルエステル８（３２mg）の
溶液を、１，４−シクロヘキサジエン０．１２mlで処理
し、１０％Ｐｄ／Ｃ１５mgと共に激しく攪拌し、反応混
合物を室温で１６時間攪拌した。次に、これを回転エバ
ポレータ上で濃縮乾固して、カルボン酸２９（２８mg）
を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．７０（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．００（１Ｈ、Ｈ−２）、２．４３（３Ｈ、ト
シル−ＣＨ 3 ）、２．０７（３Ｈ、ＯＣＯＣＨ 3） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）４９６ ＩＲ（cm-1）１７４７（エステル振動）、１６９５及び
１７００（酸及びラクタム振動）
溶液を、１，４−シクロヘキサジエン０．１２mlで処理
し、１０％Ｐｄ／Ｃ１５mgと共に激しく攪拌し、反応混
合物を室温で１６時間攪拌した。次に、これを回転エバ
ポレータ上で濃縮乾固して、カルボン酸２９（２８mg）
を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．７０（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．００（１Ｈ、Ｈ−２）、２．４３（３Ｈ、ト
シル−ＣＨ 3 ）、２．０７（３Ｈ、ＯＣＯＣＨ 3） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）４９６ ＩＲ（cm-1）１７４７（エステル振動）、１６９５及び
１７００（酸及びラクタム振動）
【００９９】工程２９：化合物３０の合成 ＤＭＦ１．５ml中の酸２９（１９．５mg）及びアミン２
８（１４．５mg）の溶液を、室温で、ジイソプロピルエ
チルアミン０．０２７mlで処理し、続いてＨＢＴＵ２４
mgで処理した。反応混合物を１６時間攪拌したのち、濃
縮乾固し、得られた残渣を最小量のＭｅＯＨに溶解し、
シリカゲルカラムに充填し、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＣＮ／Ｍ
ｅＯＨ／Ｈ2 Ｏ７：１：１：１を用いて溶離し、純粋な
ダイマー３０（２５mg）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．５９及び５．６８（２Ｈ、ア
ノマー性Ｈ−１）、５．００及び５．０４（２Ｈ、Ｈ−
２）、２．４２及び２．８１（６Ｈ、２個のトシル−Ｃ
Ｈ 3 ）、２．０８及び２．０９（６Ｈ、２個のＯＣＯＣ
Ｈ 3 ）、１．８７及び１．８９（６Ｈ、２個のチミン−
ＣＨ 3 ） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）８１９ ＩＲ（cm-1）１６９０〜１７００（幅広なアミド、エス
テル及びラクタム振動）
８（１４．５mg）の溶液を、室温で、ジイソプロピルエ
チルアミン０．０２７mlで処理し、続いてＨＢＴＵ２４
mgで処理した。反応混合物を１６時間攪拌したのち、濃
縮乾固し、得られた残渣を最小量のＭｅＯＨに溶解し、
シリカゲルカラムに充填し、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＣＮ／Ｍ
ｅＯＨ／Ｈ2 Ｏ７：１：１：１を用いて溶離し、純粋な
ダイマー３０（２５mg）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．５９及び５．６８（２Ｈ、ア
ノマー性Ｈ−１）、５．００及び５．０４（２Ｈ、Ｈ−
２）、２．４２及び２．８１（６Ｈ、２個のトシル−Ｃ
Ｈ 3 ）、２．０８及び２．０９（６Ｈ、２個のＯＣＯＣ
Ｈ 3 ）、１．８７及び１．８９（６Ｈ、２個のチミン−
ＣＨ 3 ） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）８１９ ＩＲ（cm-1）１６９０〜１７００（幅広なアミド、エス
テル及びラクタム振動）
【０１００】実施例６ ダイマー構成単位３２の合成 工程３０：化合物３１の合成 ＥｔＯＡｃ７ml中アジド９（３５０mg）の溶液を、リン
ドラー触媒６００mgと共に、Ｈ2 雰囲気下にＳＴＰ条件
で攪拌した。反応混合物を６時間攪拌したのち、パール
水素化装置に移し、５０psi のＨ2 圧で６時間振とうし
た。次に、反応混合物をセライトパッドに通してろ過し
た。ろ過ケークをＥｔＯＡｃ５０mlで洗浄し、合わせた
ろ液を濃縮して粗生成物を得て、これを、ＥｔＯＡｃ／
ＭｅＣＮ／ＭｅＯＨ／Ｈ2 Ｏ（７：１：１：１）を用い
たクロマトグラフィーに付して、純粋なアミン３１（１
６５mg）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．４５及び５．６３（２Ｈ、ア
ノマー性Ｈ−１及びＨ−２）、５．１２〜５．１６（２
Ｈ、ＰｈＣＨ 2 ） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）４３２ ＩＲ（cm-1）３３９３（ＮＨ 2 振動）、１７３８（エス
テル振動）、１６９２（ラクタム振動）
ドラー触媒６００mgと共に、Ｈ2 雰囲気下にＳＴＰ条件
で攪拌した。反応混合物を６時間攪拌したのち、パール
水素化装置に移し、５０psi のＨ2 圧で６時間振とうし
た。次に、反応混合物をセライトパッドに通してろ過し
た。ろ過ケークをＥｔＯＡｃ５０mlで洗浄し、合わせた
ろ液を濃縮して粗生成物を得て、これを、ＥｔＯＡｃ／
ＭｅＣＮ／ＭｅＯＨ／Ｈ2 Ｏ（７：１：１：１）を用い
たクロマトグラフィーに付して、純粋なアミン３１（１
６５mg）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．４５及び５．６３（２Ｈ、ア
ノマー性Ｈ−１及びＨ−２）、５．１２〜５．１６（２
Ｈ、ＰｈＣＨ 2 ） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）４３２ ＩＲ（cm-1）３３９３（ＮＨ 2 振動）、１７３８（エス
テル振動）、１６９２（ラクタム振動）
【０１０１】工程３１：化合物３２の合成 ＤＭＦ３．０ml中の酸２９（１７９mg）及びアミン３１
（１６０mg）の溶液を、室温で、ジイソプロピルエチル
アミン０．１８mlで処理し、続いてＨＢＴＵ１４６mgで
処理した。反応混合物を３時間攪拌したのち、濃縮乾固
し、得られた残渣を最小量のＭｅＯＨに溶解し、シリカ
ゲルカラムに充填し、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＣＮ／ＭｅＯＨ
／Ｈ2 Ｏ（７：１：１：１）を用いて溶離して、純粋な
ダイマー３２（２００mg）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．４５（２Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．８２（２Ｈ、Ｈ−２）、２．４３及び２．１
２（１２Ｈ、２個のトシル−ＣＨ 3 及び２個のＯＣＯＣ
Ｈ 3 ）、１．９０及び１．９３（６Ｈ、２個のチミン−
ＣＨ 3 ） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）９１０ ＩＲ（cm-1）１７３８（エステル振動）、１６９３（幅
広なアミド及びラクタム振動）
（１６０mg）の溶液を、室温で、ジイソプロピルエチル
アミン０．１８mlで処理し、続いてＨＢＴＵ１４６mgで
処理した。反応混合物を３時間攪拌したのち、濃縮乾固
し、得られた残渣を最小量のＭｅＯＨに溶解し、シリカ
ゲルカラムに充填し、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＣＮ／ＭｅＯＨ
／Ｈ2 Ｏ（７：１：１：１）を用いて溶離して、純粋な
ダイマー３２（２００mg）を得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．４５（２Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．８２（２Ｈ、Ｈ−２）、２．４３及び２．１
２（１２Ｈ、２個のトシル−ＣＨ 3 及び２個のＯＣＯＣ
Ｈ 3 ）、１．９０及び１．９３（６Ｈ、２個のチミン−
ＣＨ 3 ） （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）９１０ ＩＲ（cm-1）１７３８（エステル振動）、１６９３（幅
広なアミド及びラクタム振動）
【０１０２】実施例７ ２′−ＯＭｅ−類似体３５の合成 工程３２：化合物３３の合成 ＤＭＦ２．５ml中トシレート２５（２１８mg）の溶液
を、０℃で、アルゴン下にＤＢＵ０．０９５mlで処理
し、続いて塩化ベンゾイルオキシメチル０．１５mlで処
理し、１．５時間攪拌した。Ｈ2 Ｏ（２ml）で反応を止
め、２０分間攪拌したのち、濃縮乾固した。残渣をＥｔ
ＯＡｃ１５０ml及びＨ2 Ｏ（５０ml）に取った。有機相
を分離し、まず１N のＨＣｌ（２５ml）、次にＨ2 Ｏ
（５０ml）、そして食塩水５０mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ
4 上で乾燥し、濃縮して粗生成物を得て、これを、ＣＨ
2 Ｃｌ2 ：ＭｅＯＨ４９：１を用いたクロマトグラフィ
ーに付して、純粋な生成物２５０mgを得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．８０（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．４１〜５．５３（３Ｈ、Ｈ−２及びＮＣＨ 2
Ｏ）、４．６７（２Ｈ、ＣＨ 2 Ｐｈ）、３．６７（３
Ｈ、ＣＯＯＣＨ 3 ）、２．４３（３Ｈ、トシル−ＣＨ
3 ）、２．０９（３Ｈ、ＣＯＯＣＨ 3 ）、１．９０（３
Ｈ、チミン−ＣＨ3 ）
を、０℃で、アルゴン下にＤＢＵ０．０９５mlで処理
し、続いて塩化ベンゾイルオキシメチル０．１５mlで処
理し、１．５時間攪拌した。Ｈ2 Ｏ（２ml）で反応を止
め、２０分間攪拌したのち、濃縮乾固した。残渣をＥｔ
ＯＡｃ１５０ml及びＨ2 Ｏ（５０ml）に取った。有機相
を分離し、まず１N のＨＣｌ（２５ml）、次にＨ2 Ｏ
（５０ml）、そして食塩水５０mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ
4 上で乾燥し、濃縮して粗生成物を得て、これを、ＣＨ
2 Ｃｌ2 ：ＭｅＯＨ４９：１を用いたクロマトグラフィ
ーに付して、純粋な生成物２５０mgを得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．８０（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．４１〜５．５３（３Ｈ、Ｈ−２及びＮＣＨ 2
Ｏ）、４．６７（２Ｈ、ＣＨ 2 Ｐｈ）、３．６７（３
Ｈ、ＣＯＯＣＨ 3 ）、２．４３（３Ｈ、トシル−ＣＨ
3 ）、２．０９（３Ｈ、ＣＯＯＣＨ 3 ）、１．９０（３
Ｈ、チミン−ＣＨ3 ）
【０１０３】工程３３：化合物３４の合成 ＴＨＦ４．０ml中の化合物３３（２４５mg）の溶液を、
室温で０．５N のＮａＯＨ２．４mlで処理し、３時間攪
拌した。次に、これを１N のＨＣｌ（１．３ml）で中和
し、Ｈ2 Ｏ（１０ml）で希釈し、凍結乾燥して粗ヒドロ
キシ酸２２０mgを得て、これをさらに精製することなく
使用した。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．６５（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．３３〜５．３４（２Ｈ、ＮＣＨ 2 Ｏ）、４．
５９（２Ｈ、ＣＨ 2 Ｐｈ）、４．２６及び４．２７（１
Ｈ、Ｈ−２）、２．４０（３Ｈ、トシル−ＣＨ 3 ）、
１．８２（３Ｈ、チミン−ＣＨ 3 ） （＋）ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋１）５７５ ＩＲ（cm-1）１７０８（酸振動）、１６６１（幅広なア
ミド及びラクタム振動）
室温で０．５N のＮａＯＨ２．４mlで処理し、３時間攪
拌した。次に、これを１N のＨＣｌ（１．３ml）で中和
し、Ｈ2 Ｏ（１０ml）で希釈し、凍結乾燥して粗ヒドロ
キシ酸２２０mgを得て、これをさらに精製することなく
使用した。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．６５（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．３３〜５．３４（２Ｈ、ＮＣＨ 2 Ｏ）、４．
５９（２Ｈ、ＣＨ 2 Ｐｈ）、４．２６及び４．２７（１
Ｈ、Ｈ−２）、２．４０（３Ｈ、トシル−ＣＨ 3 ）、
１．８２（３Ｈ、チミン−ＣＨ 3 ） （＋）ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋１）５７５ ＩＲ（cm-1）１７０８（酸振動）、１６６１（幅広なア
ミド及びラクタム振動）
【０１０４】工程３４：化合物３５の合成 ＴＨＦ１．５ml及びＤＭＦ０．１１ml中のヒドロキシ酸
３４（５０mg）の懸濁液を−１０℃に冷却し、ＮａＨ８
mgで処理し、２０分間攪拌した。次に、これをＭｅＩ
（０．０６ml）で処理し、攪拌を６時間続けると、その
間、温度が２０℃に上昇した。処理の間、これを０℃に
冷却し、ＥｔＯＡｃ１５mlで希釈し、飽和ＮＨ4 Ｃｌ
（２ml）で反応を止め、１５分間攪拌した。これをさら
にＥｔＯＡｃ５０ml及びＨ2 Ｏ（１０ml）で希釈した。
有機相を分離し、０．０１N のＨＣｌ（２５ml）及び食
塩水２５mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥した。Ｅｔ
ＯＡｃを除去したのち、粗生成物を、ＥｔＯＡｃ／Ｍｅ
ＣＮ／ＭｅＯＨ／Ｈ2 Ｏ（７：１：０．５：０．５）を
用いたシリカゲルクロマトグラフィーに付して、純粋な
メチルエーテル酸２６mgを得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．８８（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．４８〜５．４９（２Ｈ、ＮＣＨ 2 Ｏ）、４．
７１（２Ｈ、ＣＨ 2 Ｐｈ）、３．９４及び３．９６（１
Ｈ、Ｈ−２）、３．５４（３Ｈ、ＯＣＨ 3 ）、２．４５
（３Ｈ、トシル−ＣＨ 3 ）、１．９１（３Ｈ、チミン−
ＣＨ 3 ）
３４（５０mg）の懸濁液を−１０℃に冷却し、ＮａＨ８
mgで処理し、２０分間攪拌した。次に、これをＭｅＩ
（０．０６ml）で処理し、攪拌を６時間続けると、その
間、温度が２０℃に上昇した。処理の間、これを０℃に
冷却し、ＥｔＯＡｃ１５mlで希釈し、飽和ＮＨ4 Ｃｌ
（２ml）で反応を止め、１５分間攪拌した。これをさら
にＥｔＯＡｃ５０ml及びＨ2 Ｏ（１０ml）で希釈した。
有機相を分離し、０．０１N のＨＣｌ（２５ml）及び食
塩水２５mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥した。Ｅｔ
ＯＡｃを除去したのち、粗生成物を、ＥｔＯＡｃ／Ｍｅ
ＣＮ／ＭｅＯＨ／Ｈ2 Ｏ（７：１：０．５：０．５）を
用いたシリカゲルクロマトグラフィーに付して、純粋な
メチルエーテル酸２６mgを得た。1 Ｈ−ＮＭＲ（ppm ）５．８８（１Ｈ、アノマー性Ｈ−
１）、５．４８〜５．４９（２Ｈ、ＮＣＨ 2 Ｏ）、４．
７１（２Ｈ、ＣＨ 2 Ｐｈ）、３．９４及び３．９６（１
Ｈ、Ｈ−２）、３．５４（３Ｈ、ＯＣＨ 3 ）、２．４５
（３Ｈ、トシル−ＣＨ 3 ）、１．９１（３Ｈ、チミン−
ＣＨ 3 ）
【０１０５】工程３５：化合物３６の合成 ＣｌＣ2 Ｈ4 Ｃｌ（１５０ml）中のメチルエステル５
（３７．０g ）及び４−ペンテン−１−オール２３．５
mlの溶液を、アルゴン下に０℃で、ＣｌＣ2 Ｈ4Ｃｌ
（１００ml）中ＴＭＳＯＴｆ３７mlで処理し、３０分間
攪拌した。氷浴を取り除き、反応物をさらに１時間攪拌
した。次に、反応混合物にＮａＨＣＯ3 飽和水溶液２０
０mlを０℃で加えた。この溶液をさらに３０分間攪拌し
た。次に、これをＣＨ2 Ｃｌ2 ２００mlで希釈した。有
機相を分離し、食塩水１００mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4
上で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。この粗生成物
を、ヘキサン／酢酸エチルを用いたクロマトグラフィー
に付して、純粋な化合物３６（２５．７g ）を得た。 （＋）ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋１）３９７ Ｃ19Ｈ24Ｏ7 ＳのＣＨ 計算値Ｃ＝５７．５６、Ｈ＝６．１０ 実測値Ｃ＝５７．３２、Ｈ＝６．０９
（３７．０g ）及び４−ペンテン−１−オール２３．５
mlの溶液を、アルゴン下に０℃で、ＣｌＣ2 Ｈ4Ｃｌ
（１００ml）中ＴＭＳＯＴｆ３７mlで処理し、３０分間
攪拌した。氷浴を取り除き、反応物をさらに１時間攪拌
した。次に、反応混合物にＮａＨＣＯ3 飽和水溶液２０
０mlを０℃で加えた。この溶液をさらに３０分間攪拌し
た。次に、これをＣＨ2 Ｃｌ2 ２００mlで希釈した。有
機相を分離し、食塩水１００mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4
上で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。この粗生成物
を、ヘキサン／酢酸エチルを用いたクロマトグラフィー
に付して、純粋な化合物３６（２５．７g ）を得た。 （＋）ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋１）３９７ Ｃ19Ｈ24Ｏ7 ＳのＣＨ 計算値Ｃ＝５７．５６、Ｈ＝６．１０ 実測値Ｃ＝５７．３２、Ｈ＝６．０９
【０１０６】工程３６：化合物３７の合成 ＭｅＯＨ／Ｈ2 Ｏ／Ｅｔ3 Ｎ（５００ml／４００ml／１
００ml）中の化合物３６（２５．７g ）の懸濁液を室温
で３時間攪拌した。次に、反応混合物を回転エバポレー
タ上で濃縮乾固して、ヒドロキシ酸２８g を得た。得ら
れたヒドロキシ酸を０℃で乾燥ＴＨＦ３５０mlに溶解
し、ＮａＨ４．７g で処理し、ＴＨＦ１００mlですす
ぎ、３０分間攪拌した。次に、これをＭｅＩ（６０ml）
で処理し、攪拌を２時間続けると、その間、温度が室温
に上昇した。処理の間、これを０℃に冷却し、ＥｔＯＡ
ｃ４００ml及び水２００mlで希釈した。ＴＨＦを留去し
たのち、溶液を１．０N のＨＣｌでpH５の酸性とし、Ｅ
ｔＯＡｃ５００mlずつで３回抽出した。有機相を分離
し、食塩水２５０mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し
た。ＥｔＯＡｃを除去したのち、粗生成物をＤＭＦ２２
０mlに取った。次に、この溶液をＫ2 ＣＯ3 ９．９５g
及び臭化ベンジル７．５mlで処理した。反応物を３時間
攪拌した。反応混合物を濃縮乾固し、残渣をＥｔＯＡｃ
１０００mlとＨ2 Ｏ（２００ml）とに分配した。有機相
を分離し、食塩水で洗浄したのち、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾
燥し、濃縮して粗生成物を得た。この生成物を、ヘキサ
ン／酢酸エチルを用いたクロマトグラフィーに付して、
純粋な化合物３７（２５．１g ）を得た。 ＦＡＢ（Ｍ）５１８
００ml）中の化合物３６（２５．７g ）の懸濁液を室温
で３時間攪拌した。次に、反応混合物を回転エバポレー
タ上で濃縮乾固して、ヒドロキシ酸２８g を得た。得ら
れたヒドロキシ酸を０℃で乾燥ＴＨＦ３５０mlに溶解
し、ＮａＨ４．７g で処理し、ＴＨＦ１００mlですす
ぎ、３０分間攪拌した。次に、これをＭｅＩ（６０ml）
で処理し、攪拌を２時間続けると、その間、温度が室温
に上昇した。処理の間、これを０℃に冷却し、ＥｔＯＡ
ｃ４００ml及び水２００mlで希釈した。ＴＨＦを留去し
たのち、溶液を１．０N のＨＣｌでpH５の酸性とし、Ｅ
ｔＯＡｃ５００mlずつで３回抽出した。有機相を分離
し、食塩水２５０mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し
た。ＥｔＯＡｃを除去したのち、粗生成物をＤＭＦ２２
０mlに取った。次に、この溶液をＫ2 ＣＯ3 ９．９５g
及び臭化ベンジル７．５mlで処理した。反応物を３時間
攪拌した。反応混合物を濃縮乾固し、残渣をＥｔＯＡｃ
１０００mlとＨ2 Ｏ（２００ml）とに分配した。有機相
を分離し、食塩水で洗浄したのち、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾
燥し、濃縮して粗生成物を得た。この生成物を、ヘキサ
ン／酢酸エチルを用いたクロマトグラフィーに付して、
純粋な化合物３７（２５．１g ）を得た。 ＦＡＢ（Ｍ）５１８
【０１０７】工程３７：化合物３８の合成 ＣＨ3 ＣＮ７０ml中のペンテニルグリコシド３７（３．
８g ）の溶液を、Ｎ−ヨードスクシンイミド１．８１g
及びトリメチルシリル−Ｎ−６−ベンゾイルシトシン
４．６８g と共に１５分間攪拌した。次に、これを、１
０分間かけて、ＣＨ3 ＣＮ２５ml中ＴＭＳＯＴｆ２．８
mlの溶液で処理した。３時間後、反応物をＥｔＯＡｃ３
００ml及びＮａ2 Ｓ2 Ｏ3 の１０％水溶液５０mlで希釈
した。次に、反応混合物をセライトパッドに通してろ過
した。ろ過ケークをＥｔＯＡｃ２００mlで洗浄し、合わ
せたろ液を５％ＮａＨＣＯ3 ２５mlで洗浄し、続いて食
塩水２５mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濃縮乾
固した。この生成物を、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨを用い
たクロマトグラフィーに付して、化合物３８（２．９g
）を得た。この生成物をエタノールから再結晶して、
純粋な３８（２．２g ）を白色の固体として得た。 （＋）ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋１）６４８ Ｃ33Ｈ33Ｎ3 Ｏ9 ＳのＣＨＮ 計算値Ｃ＝６１．２０、Ｈ＝５．１４、Ｎ＝６．４９ 実測値Ｃ＝６０．８６、Ｈ＝５．１２、Ｎ＝６．３９
８g ）の溶液を、Ｎ−ヨードスクシンイミド１．８１g
及びトリメチルシリル−Ｎ−６−ベンゾイルシトシン
４．６８g と共に１５分間攪拌した。次に、これを、１
０分間かけて、ＣＨ3 ＣＮ２５ml中ＴＭＳＯＴｆ２．８
mlの溶液で処理した。３時間後、反応物をＥｔＯＡｃ３
００ml及びＮａ2 Ｓ2 Ｏ3 の１０％水溶液５０mlで希釈
した。次に、反応混合物をセライトパッドに通してろ過
した。ろ過ケークをＥｔＯＡｃ２００mlで洗浄し、合わ
せたろ液を５％ＮａＨＣＯ3 ２５mlで洗浄し、続いて食
塩水２５mlで洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、濃縮乾
固した。この生成物を、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨを用い
たクロマトグラフィーに付して、化合物３８（２．９g
）を得た。この生成物をエタノールから再結晶して、
純粋な３８（２．２g ）を白色の固体として得た。 （＋）ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋１）６４８ Ｃ33Ｈ33Ｎ3 Ｏ9 ＳのＣＨＮ 計算値Ｃ＝６１．２０、Ｈ＝５．１４、Ｎ＝６．４９ 実測値Ｃ＝６０．８６、Ｈ＝５．１２、Ｎ＝６．３９
【０１０８】工程３８：化合物３９の合成 ＤＭＦ３２ml中のトシルヌクレオシド３８（２．１g ）
及びアジ化リチウム０．９５g の溶液を８０℃で４時間
攪拌した。反応混合物から溶媒を蒸発させ、ＥｔＯＡｃ
と水とに分配した。有機相をＮａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、
溶媒を蒸発させ、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨを用いたクロ
マトグラフィーに付して、アジド３９（２６５mg）を得
た。 （＋）ＦＡＢ ＭＷ５１９
及びアジ化リチウム０．９５g の溶液を８０℃で４時間
攪拌した。反応混合物から溶媒を蒸発させ、ＥｔＯＡｃ
と水とに分配した。有機相をＮａ2 ＳＯ4 上で乾燥し、
溶媒を蒸発させ、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨを用いたクロ
マトグラフィーに付して、アジド３９（２６５mg）を得
た。 （＋）ＦＡＢ ＭＷ５１９
【０１０９】工程３９：化合物４０の合成 ジオキサン４０ml中のアジド３９（１．６８g ）と水２
０mlとの混合物を、２０％Ｐｄ（ＯＨ）2 ０．１３４g
で処理し、Ｈ2 雰囲気下にＳＴＰ条件で攪拌した。反応
混合物を２．５時間攪拌したのち、セライトパッドに通
してろ過した。ろ過ケークをジオキサン／水（１：１）
１００mlで洗浄し、合わせたろ液を濃縮して、望みのア
ミノ酸を得た。ＤＭＦ／Ｈ2 Ｏ（１：１）９０ml中得ら
れたアミノ酸及びＮ−（９−フルオレニルメトキシカル
ボニルオキシ）−スクシンイミド１．３９g の溶液を０
℃に冷却した。次に、これをＮａＨＣＯ3 ０．８g で処
理し、室温で４時間攪拌した。反応混合物を回転エバポ
レータ上３５℃で濃縮乾固した。残渣をＨ2 Ｏ（５０m
l）及びＥｔＯＡｃ５００mlに取った。水相を１．０N
のＨＣｌでpH４の酸性とし、ＥｔＯＡｃ５００mlずつで
３回抽出した。ＥｔＯＡｃを除去したのち、粗生成物
を、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨを用いたシリカゲルカラム
で精製して、純粋な化合物４０（１．５g ）を白色の固
体として得た。 （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）６２５
０mlとの混合物を、２０％Ｐｄ（ＯＨ）2 ０．１３４g
で処理し、Ｈ2 雰囲気下にＳＴＰ条件で攪拌した。反応
混合物を２．５時間攪拌したのち、セライトパッドに通
してろ過した。ろ過ケークをジオキサン／水（１：１）
１００mlで洗浄し、合わせたろ液を濃縮して、望みのア
ミノ酸を得た。ＤＭＦ／Ｈ2 Ｏ（１：１）９０ml中得ら
れたアミノ酸及びＮ−（９−フルオレニルメトキシカル
ボニルオキシ）−スクシンイミド１．３９g の溶液を０
℃に冷却した。次に、これをＮａＨＣＯ3 ０．８g で処
理し、室温で４時間攪拌した。反応混合物を回転エバポ
レータ上３５℃で濃縮乾固した。残渣をＨ2 Ｏ（５０m
l）及びＥｔＯＡｃ５００mlに取った。水相を１．０N
のＨＣｌでpH４の酸性とし、ＥｔＯＡｃ５００mlずつで
３回抽出した。ＥｔＯＡｃを除去したのち、粗生成物
を、ＣＨ2 Ｃｌ2 ／ＭｅＯＨを用いたシリカゲルカラム
で精製して、純粋な化合物４０（１．５g ）を白色の固
体として得た。 （＋）ＦＡＢ（Ｍ＋１）６２５
【０１１０】工程４０：化合物４１の合成 酢酸１％を含有するＭｅＯＨ１０ml中アミン１３（１mm
ol、式３を参照）及びアルデヒドの溶液に、４０分かけ
て、室温で、ＮａＢＨ3 ＣＮ（１mmol）を加えた。反応
が完了し、反応を止めたのち、溶液を濃縮乾固し、残渣
をＥｔＯＡｃと飽和ＮａＨＣＯ3 とに分配した。次に、
有機相を分離し、食塩水で洗浄し、その後、Ｎａ2 ＳＯ
4 上で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。
ol、式３を参照）及びアルデヒドの溶液に、４０分かけ
て、室温で、ＮａＢＨ3 ＣＮ（１mmol）を加えた。反応
が完了し、反応を止めたのち、溶液を濃縮乾固し、残渣
をＥｔＯＡｃと飽和ＮａＨＣＯ3 とに分配した。次に、
有機相を分離し、食塩水で洗浄し、その後、Ｎａ2 ＳＯ
4 上で乾燥し、濃縮して粗生成物を得た。
【０１１１】工程４１：化合物４２の合成 アセトニトリル２ml中のアミン４１（１００mg）の溶液
を、まずトリエチルアミン０．０７ml、次にＦＭＯＣ−
Ｃｌ（８８mg）で処理し、反応混合物を室温で数時間攪
拌した。次に、反応混合物を濃縮乾固した。残渣をＣＨ
2 Ｃｌ2 ２mlに再び溶解し、シリカゲルカラムに充填
し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いて溶離させて純粋な生
成物を得た。
を、まずトリエチルアミン０．０７ml、次にＦＭＯＣ−
Ｃｌ（８８mg）で処理し、反応混合物を室温で数時間攪
拌した。次に、反応混合物を濃縮乾固した。残渣をＣＨ
2 Ｃｌ2 ２mlに再び溶解し、シリカゲルカラムに充填
し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いて溶離させて純粋な生
成物を得た。
【０１１２】工程４２〜４４は、工程１４〜１６（スキ
ーム３）に記載のものと同様な実験手順にしたがって実
施した。
ーム３）に記載のものと同様な実験手順にしたがって実
施した。
【０１１３】実施例８ オリゴマーの固相合成 ベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂上にＦｍｏｃ保護
されたモノマーを用いた固相法により、オリゴマー（Ｈ
−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−
Ｔ−ｌｙｓ−ＮＨ2 ）〔配列番号：３〕を合成した。樹
脂を膨潤させ、中和し、洗浄し、ｐ−〔（Ｒ，Ｓ）−ａ
−〔１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−メトキシホ
ルムアミド〕−２，４−ジメトキシベンジル〕−フェノ
キシ酢酸又は５−（９−Ｆｍｏｃ−アミノキサンテン−
３−オキシ）バレリアン酸とカップリングさせた。Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中２０％ピペリシ
ンによる処理によって樹脂結合Rink（又はXal ）リンカ
からＦｍｏｃ基を除去したのち、得られたアミンをＦｍ
ｏｃ−Ｎ−ε−tert−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−リ
シンでアシル化して、Ｆｍｏｃ−ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ri
nk（又はXal ）−ＢＨＡ樹脂を得た。ＤＦＭ中で、カッ
プリング試薬ＨＡＴＵ〔Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾ
ール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロ
ニウムヘキサフルオロホスフェート〕４．５当量及び塩
基Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）
１０当量を使用して１５分間、第一のモノマーであるＦ
ｍｏｃチミンモノマー（５当量）をＦｍｏｃ脱保護樹脂
にカップリングさせた。カップリング及び洗浄が完了し
たのち、一時的なＦｍｏｃ保護基を、ＤＭＦ中の１，８
−ジアザビシクロ〔５．４．０〕ウンデス−７−エン
（ＤＢＵ）２％の脱保護溶液で除去した（１分、７分、
７分）。脱保護に続いて、樹脂を塩化メチレン（ＣＨ2
Ｃｌ2 ）及びＤＭＦで洗浄した。第一のモノマーである
Ｆｍｏｃチミンモノマーと同様にして、後続のモノマー
を樹脂にカップリングさせた。ＤＭＦ中の５％の酢酸無
水物を用いて場合によりキャッピングを実施した。配列
の構成が完了したのち、樹脂を洗浄し、末端のＦｍｏｃ
基を除去した。次に、樹脂をＤＭＦ、塩化メチレン及び
メタノールで洗浄し、開裂に備えて減圧下に乾燥した。
完全に保護されたオリゴマーをＣＨ2 Ｃｌ2 中５０％ト
リフルオロ酢酸で開裂し、逆相ＨＰＬＣを用いて精製し
た。最終の脱保護は、オリゴヌクレオチドを、室温で４
時間、濃水酸化アンモニウムで処理することによって実
施した。等容量の２０％エチレンジアミン／フェノール
を反応物に加え、さらに１時間混合した。speedvac濃縮
装置中で試料を濃縮することによって反応を終了させて
混合物を得、これを逆相ＨＰＬＣカラムで精製した。分
析ＨＰＬＣによる測定によると、精製されたオリゴマー
は均質であり、予想された分子量をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ
質量分析法によって確認した〔実測値（計算値）３７１
１．７（３７１２．１）〕。同様なプロトコルを用いる
固相法により、２′−ＯＭｅ−類似体のオリゴマー化を
同様に実施した。
されたモノマーを用いた固相法により、オリゴマー（Ｈ
−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−
Ｔ−ｌｙｓ−ＮＨ2 ）〔配列番号：３〕を合成した。樹
脂を膨潤させ、中和し、洗浄し、ｐ−〔（Ｒ，Ｓ）−ａ
−〔１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−メトキシホ
ルムアミド〕−２，４−ジメトキシベンジル〕−フェノ
キシ酢酸又は５−（９−Ｆｍｏｃ−アミノキサンテン−
３−オキシ）バレリアン酸とカップリングさせた。Ｎ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中２０％ピペリシ
ンによる処理によって樹脂結合Rink（又はXal ）リンカ
からＦｍｏｃ基を除去したのち、得られたアミンをＦｍ
ｏｃ−Ｎ−ε−tert−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−リ
シンでアシル化して、Ｆｍｏｃ−ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ri
nk（又はXal ）−ＢＨＡ樹脂を得た。ＤＦＭ中で、カッ
プリング試薬ＨＡＴＵ〔Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾ
ール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロ
ニウムヘキサフルオロホスフェート〕４．５当量及び塩
基Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）
１０当量を使用して１５分間、第一のモノマーであるＦ
ｍｏｃチミンモノマー（５当量）をＦｍｏｃ脱保護樹脂
にカップリングさせた。カップリング及び洗浄が完了し
たのち、一時的なＦｍｏｃ保護基を、ＤＭＦ中の１，８
−ジアザビシクロ〔５．４．０〕ウンデス−７−エン
（ＤＢＵ）２％の脱保護溶液で除去した（１分、７分、
７分）。脱保護に続いて、樹脂を塩化メチレン（ＣＨ2
Ｃｌ2 ）及びＤＭＦで洗浄した。第一のモノマーである
Ｆｍｏｃチミンモノマーと同様にして、後続のモノマー
を樹脂にカップリングさせた。ＤＭＦ中の５％の酢酸無
水物を用いて場合によりキャッピングを実施した。配列
の構成が完了したのち、樹脂を洗浄し、末端のＦｍｏｃ
基を除去した。次に、樹脂をＤＭＦ、塩化メチレン及び
メタノールで洗浄し、開裂に備えて減圧下に乾燥した。
完全に保護されたオリゴマーをＣＨ2 Ｃｌ2 中５０％ト
リフルオロ酢酸で開裂し、逆相ＨＰＬＣを用いて精製し
た。最終の脱保護は、オリゴヌクレオチドを、室温で４
時間、濃水酸化アンモニウムで処理することによって実
施した。等容量の２０％エチレンジアミン／フェノール
を反応物に加え、さらに１時間混合した。speedvac濃縮
装置中で試料を濃縮することによって反応を終了させて
混合物を得、これを逆相ＨＰＬＣカラムで精製した。分
析ＨＰＬＣによる測定によると、精製されたオリゴマー
は均質であり、予想された分子量をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ
質量分析法によって確認した〔実測値（計算値）３７１
１．７（３７１２．１）〕。同様なプロトコルを用いる
固相法により、２′−ＯＭｅ−類似体のオリゴマー化を
同様に実施した。
【０１１４】同様に、リシンカップリング工程を省いた
ことを除いて上記の手順のとおりにオリゴマー（Ｈ−Ｔ
−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−
ＮＨ2 ）〔配列番号：３〕を調製した。換言するなら
ば、第一のモノマーをリンカ〔すなわちＨ−Rink（又は
Xal ）−ＢＨＡ樹脂〕に直接カップリングした。この一
般的な手順により、本発明のオリゴマーを調製すること
ができた。
ことを除いて上記の手順のとおりにオリゴマー（Ｈ−Ｔ
−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−
ＮＨ2 ）〔配列番号：３〕を調製した。換言するなら
ば、第一のモノマーをリンカ〔すなわちＨ−Rink（又は
Xal ）−ＢＨＡ樹脂〕に直接カップリングした。この一
般的な手順により、本発明のオリゴマーを調製すること
ができた。
【０１１５】実施例９ オリゴマーのハイブリダイゼーション特性 熱融解実験 電熱式温度制御装置を備え、ＩＢＭ ＰＳ２／５０Ｚコ
ンピュータにインタフェースされたCary 3分光計を使用
して、吸光度対温度の曲線を２６０nmで測定した。オリ
ゴヌクレオチド濃度は１．４μM であり、緩衝剤はpH７
で１００mMのＮａＣｌ、１０mMのリン酸ナトリウム及び
０．１mMのＥＤＴＡを含むものであった。Ｔｍ値は、Sa
vitzky-Golayアルゴリズム（Savitzky, A.; Golay, M.
J.E. Analytical Chemistry 1964, 36, 1627-39）を利
用したReducep プログラム（Koerber, S.C.; Fink, A.
L. Analytical Biochemistry 1987, 165, 75-87）を使
用して、第一の誘導プロットの最大値から決定し、熱力
学的定数は、線形傾斜ベースラインをもつ二−状態モデ
ルに対するデータの適合から得た（Petersheim, M.; Tu
rner, D.H. Biochemistry 1983, 22, 256-263 ）。
ンピュータにインタフェースされたCary 3分光計を使用
して、吸光度対温度の曲線を２６０nmで測定した。オリ
ゴヌクレオチド濃度は１．４μM であり、緩衝剤はpH７
で１００mMのＮａＣｌ、１０mMのリン酸ナトリウム及び
０．１mMのＥＤＴＡを含むものであった。Ｔｍ値は、Sa
vitzky-Golayアルゴリズム（Savitzky, A.; Golay, M.
J.E. Analytical Chemistry 1964, 36, 1627-39）を利
用したReducep プログラム（Koerber, S.C.; Fink, A.
L. Analytical Biochemistry 1987, 165, 75-87）を使
用して、第一の誘導プロットの最大値から決定し、熱力
学的定数は、線形傾斜ベースラインをもつ二−状態モデ
ルに対するデータの適合から得た（Petersheim, M.; Tu
rner, D.H. Biochemistry 1983, 22, 256-263 ）。
【０１１６】
【表１】
【０１１７】上記表に示すように、新規なオリゴマー
（Ｒ−ＰＮＡ）の結合特性はホスホロチオエートのそれ
に非常に類似している。これらは、同様な結合親和性、
結合の極性及びＤＮＡよりもＲＮＡを優先する結合性を
有している。比較すると、Danish−ＰＮＡ配列はより強
い結合親和性を示した。しかし、これは、また、非常に
有意なヒステリシスを示し、ＤＮＡ及びＲＮＡの平行鎖
に対する好ましくない結合を識別することに劣る。した
がって、Danish−ＰＮＡの異常な結合親和性は、配列特
異性の乏しいための欠点であるということができる。
（Ｒ−ＰＮＡ）の結合特性はホスホロチオエートのそれ
に非常に類似している。これらは、同様な結合親和性、
結合の極性及びＤＮＡよりもＲＮＡを優先する結合性を
有している。比較すると、Danish−ＰＮＡ配列はより強
い結合親和性を示した。しかし、これは、また、非常に
有意なヒステリシスを示し、ＤＮＡ及びＲＮＡの平行鎖
に対する好ましくない結合を識別することに劣る。した
がって、Danish−ＰＮＡの異常な結合親和性は、配列特
異性の乏しいための欠点であるということができる。
【０１１８】Ｒ−ＰＮＡの２′−ＯＭｅ誘導体（同じ配
列）と、その相補的な逆平行ＲＮＡとの間の対のＴｍ
は、４３．７℃であることがわかった。
列）と、その相補的な逆平行ＲＮＡとの間の対のＴｍ
は、４３．７℃であることがわかった。
【０１１９】実施例１０ オリゴマーの塩基対特異性 熱融解実験
【０１２０】
【表２】
【０１２１】上記表の結果は、Ｃ−Ａ、Ｃ−Ｃ及びＣ−
Ｕの不適正が、結合親和性で予想された大きな低下を示
したため、新規なＲ−ＰＮＡ系の結合がワトソン−クリ
ック相補的塩基対規則に従うことを明らかに示してい
る。
Ｕの不適正が、結合親和性で予想された大きな低下を示
したため、新規なＲ−ＰＮＡ系の結合がワトソン−クリ
ック相補的塩基対規則に従うことを明らかに示してい
る。
【０１２２】実施例１１ 細胞ベースのアンチセンス検定 下記の方法により、アンチセンス分子がメラノサイト中
の酵素チロシナーゼのレベルを減らすことが実証され
た。これらのアンチセンス分子は、カフェオレ色の斑
点、扁平母斑、炎症後黒色症（発疹、薬疹）及び強皮症
をはじめとする色素過剰（Hypermelanosis）のいくつか
の疾病の治療に用いることができる。
の酵素チロシナーゼのレベルを減らすことが実証され
た。これらのアンチセンス分子は、カフェオレ色の斑
点、扁平母斑、炎症後黒色症（発疹、薬疹）及び強皮症
をはじめとする色素過剰（Hypermelanosis）のいくつか
の疾病の治療に用いることができる。
【０１２３】一般的に使用されるマウス黒色腫の細胞系
（例えばＢ−１６）を、１０％ウシ胎児血清及び５０μ
g/mlゲンタマイシンで補足したダルベッコＭＥＭを使用
する細胞培養プレートで成長させた。実験を始めるため
に、アンチセンス及び対照のオリゴヌクレオチドを低密
度（すなわち準密集的な）培養細胞に加え、処理を数日
続けた。次に、細胞を食塩水ですすぎ、スクレーピング
によって収集し、抽出し、タンパク質のレベルをブラッ
ドフォード法（Bradford, M.M. Anal. Biochem. 1976,
72: 248 ）によって分析した。
（例えばＢ−１６）を、１０％ウシ胎児血清及び５０μ
g/mlゲンタマイシンで補足したダルベッコＭＥＭを使用
する細胞培養プレートで成長させた。実験を始めるため
に、アンチセンス及び対照のオリゴヌクレオチドを低密
度（すなわち準密集的な）培養細胞に加え、処理を数日
続けた。次に、細胞を食塩水ですすぎ、スクレーピング
によって収集し、抽出し、タンパク質のレベルをブラッ
ドフォード法（Bradford, M.M. Anal. Biochem. 1976,
72: 248 ）によって分析した。
【０１２４】一定量の抽出したタンパク質から得られる
標的酵素チロシナーゼのレベルを、公表された手法（Po
merantz, S.H. J. Biol. Chem. 1966, 241: 161 ）に記
載のようにして測定した。簡潔に述べるならば、抽出物
をチロシン及び補因子ＤＯＰＡ（３，４−ジヒドロキシ
フェニルアラニン）でインキュベートした。このチロシ
ンを、チロシナーゼ活性が生成したトリチウム水の量に
よって測定されるように、３及び５の位置でトリチウム
標識した。トリチウム水を液シンチレーション計測によ
って定量した。チロシナーゼ検定の目的は、チロシナー
ゼレベルの５０％阻害を生じさせるのに必要な濃度を計
算することにより、各アンチセンス分子の能力を立証す
ることであった。
標的酵素チロシナーゼのレベルを、公表された手法（Po
merantz, S.H. J. Biol. Chem. 1966, 241: 161 ）に記
載のようにして測定した。簡潔に述べるならば、抽出物
をチロシン及び補因子ＤＯＰＡ（３，４−ジヒドロキシ
フェニルアラニン）でインキュベートした。このチロシ
ンを、チロシナーゼ活性が生成したトリチウム水の量に
よって測定されるように、３及び５の位置でトリチウム
標識した。トリチウム水を液シンチレーション計測によ
って定量した。チロシナーゼ検定の目的は、チロシナー
ゼレベルの５０％阻害を生じさせるのに必要な濃度を計
算することにより、各アンチセンス分子の能力を立証す
ることであった。
【０１２５】非特異的毒性による効果を制御するため、
黒色腫細胞を９６ウェルの培養板に低密度で播種し、数
日間、アンチセンス及び対照のオリゴヌクレオチドの存
在下に成長させた。広く使用されているテトラゾリウム
染料法（Mosmann, T. J. Immunol. Meth. 1983, 65, 5
5）によって細胞増殖を検定した。成長速度の５０％阻
害をもたらす各オリゴヌクレオチドの濃度を、チロシナ
ーゼレベルの５０％阻害をもたらすオリゴヌクレオチド
の濃度と比較した。アンチセンス効果は、以下の条件を
指標として判定した。ａ）活性オリゴヌクレオチドが配
列において標的ｍＲＮＡに対して相補的である。ｂ）セ
ンス及び不適正対照が、完全に適正なアンチセンスオリ
ゴヌクレオチドよりも活性が低い。ｃ）チロシナーゼ活
性が、細胞成長を抑制しないアンチセンスオリゴヌクレ
オチドの濃度によって阻害されている。
黒色腫細胞を９６ウェルの培養板に低密度で播種し、数
日間、アンチセンス及び対照のオリゴヌクレオチドの存
在下に成長させた。広く使用されているテトラゾリウム
染料法（Mosmann, T. J. Immunol. Meth. 1983, 65, 5
5）によって細胞増殖を検定した。成長速度の５０％阻
害をもたらす各オリゴヌクレオチドの濃度を、チロシナ
ーゼレベルの５０％阻害をもたらすオリゴヌクレオチド
の濃度と比較した。アンチセンス効果は、以下の条件を
指標として判定した。ａ）活性オリゴヌクレオチドが配
列において標的ｍＲＮＡに対して相補的である。ｂ）セ
ンス及び不適正対照が、完全に適正なアンチセンスオリ
ゴヌクレオチドよりも活性が低い。ｃ）チロシナーゼ活
性が、細胞成長を抑制しないアンチセンスオリゴヌクレ
オチドの濃度によって阻害されている。
【０１２６】
（１）一般的情報： （ｉ）出願人： （Ａ）名称：エフ・ホフマン−ラ ロシュ アーゲー （Ｂ）通り：グランツアーヘルストラッセ１２４ （Ｃ）市：バーゼル （Ｄ）州：ＢＳ （Ｅ）国：スイス （Ｆ）郵便番号（ＺＩＰ）：ＣＨ−４００２ （Ｇ）電話：０６１−６８８ ３９ ４３ （Ｈ）ファックス：０６１−６８８ １３ ９５ （Ｉ）テレックス：９６２２９２／９６５５４２ ｈｌ
ｒ ｃｈ （ii）発明の名称：アミド主鎖を有するオリゴリボヌク
レオチド （iii ）配列の数：６ （iv）コンピュータ読み取り状態： （Ａ）媒体のタイプ：フロッピーディスク （Ｂ）コンピュータ：アップルマッキントッシュ （Ｃ）操作システム：システム７．１（マッキントッシ
ュ） （Ｄ）ソフトウェア：ワード５．１
ｒ ｃｈ （ii）発明の名称：アミド主鎖を有するオリゴリボヌク
レオチド （iii ）配列の数：６ （iv）コンピュータ読み取り状態： （Ａ）媒体のタイプ：フロッピーディスク （Ｂ）コンピュータ：アップルマッキントッシュ （Ｃ）操作システム：システム７．１（マッキントッシ
ュ） （Ｄ）ソフトウェア：ワード５．１
【０１２７】 （２）配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）：１の情報 （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：１３塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：他の核酸 （iii ）ハイポセティカル：ＮＯ （iv）アンチセンス：ＹＥＳ （xi）配列の記載：配列番号：１： AGAGAGAGGA AGA
【０１２８】 （２）配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）：２の情報 （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：１３塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：他の核酸 （iii ）ハイポセティカル：ＮＯ （iv）アンチセンス：ＹＥＳ （xi）配列の記載：配列番号：２： AGAAGGAGAG AGA
【０１２９】 （２）配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）：３の情報 （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：１３塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：他の核酸 （iii ）ハイポセティカル：ＮＯ （iv）アンチセンス：ＮＯ （xi）配列の記載：配列番号：３： TCTCTCTCCT TCT
【０１３０】 （２）配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）：４の情報 （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：１３塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：他の核酸 （iii ）ハイポセティカル：ＮＯ （iv）アンチセンス：ＹＥＳ （xi）配列の記載：配列番号：４： AGAAGAAGAG AGA
【０１３１】 （２）配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）：５の情報 （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：１３塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：他の核酸 （iii ）ハイポセティカル：ＮＯ （iv）アンチセンス：ＹＥＳ （xi）配列の記載：配列番号：５： AGAAGCAGAG AGA
【０１３２】 （２）配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）：６の情報 （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：１３塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：他の核酸 （iii ）ハイポセティカル：ＮＯ （iv）アンチセンス：ＹＥＳ （xi）配列の記載：配列番号：６： ＡＧＡＡＧＵＡＧＡＧ ＡＧＡ
フロントページの続き (72)発明者 スティーブ・イク−カイ・タム アメリカ合衆国、ニュージャージー 07006、ウエスト・コールドウェル、エバ ーグリーン・ロード 13
Claims (18)
- 【請求項１】 式（Ｉ）： 【化１】 （式中、Ｒ1 は、Ｈ、Ｃ1 〜Ｃ4 アルキル、Ｃ1 〜Ｃ18
アシル又はヒドロキシ低級アルキルであり、Ｒ2 は、
Ｈ、アラルキル又はＣ1 〜Ｃ4 アルキルであり、Ｂは、
アデニン、シトシン、グアニン、チミン及びウラシルか
らなる群より選択されるヌクレオシド塩基残基であり、
Ｘは、Ｈ、ＯＲ1 、ＮＨＲ2 又はＮＨ−アシルであり、
Ｙは、ＯＲ2 又はＮＨＲ2 であり、そしてｎは、５〜２
５の数である）の構造を有するオリゴマー及びその塩。 - 【請求項２】 Ｒ2 が、Ｈであり、そしてＸが、Ｈ、Ｏ
Ｒ1 又はＮＨＲ2 である請求項１記載のオリゴマー。 - 【請求項３】 Ｒ1 が、メチル、アセチル又はヒドロキ
シエチルである請求項１又は２記載のオリゴマー。 - 【請求項４】 Ｒ1 及びＲ2 が、それぞれ、Ｈである請
求項１記載のオリゴマー。 - 【請求項５】 Ｒ1 が、メチルであり、そしてＲ2 が、
Ｈである請求項１記載のオリゴマー。 - 【請求項６】 ｎが、６〜１３の数である請求項１〜５
のいずれか１項記載のオリゴマー。 - 【請求項７】 Ｘが、ＮＨ2 又はＮＨアシルであり、Ｙ
が、ＯＨ又はＮＨ2であり、Ｒ1 が、Ｈ又はアセチルで
あり、Ｒ2 が、Ｈであり、そしてｎが、６〜１３である
請求項１記載のオリゴマー。 - 【請求項８】 式（Ｉａ）： 【化２】 （式中、Ｒ1 は、Ｈ、Ｃ1 〜Ｃ4 アルキル、Ｃ1 〜Ｃ18
アシル又はヒドロキシ−低級アルキルであり、Ｒ2 は、
Ｈ、アラルキル又はＣ1 〜Ｃ4 アルキルであり、Ｂ′
は、アデニン、シトシン、グアニン、チミン及びウラシ
ルからなる群より選択される適当に保護されたヌクレオ
シド塩基残基であり、Ｘは、Ｈ、ＯＲ1 、ＮＨＲ2 又は
ＮＨ−アシルであり、Ｙは、ＯＲ2 又はＮＨＲ2 であ
り、そしてｍは、０〜５の数である）の構造を有するオ
リゴマー及びその塩。 - 【請求項９】 ｍが、０、１又は２である請求項８項記
載のオリゴマー。 - 【請求項１０】 式（II）： 【化３】 （式中、Ｒ1'は、ヒドロキシ保護基であり、Ｒ2 は、
Ｈ、アラルキル又はＣ1 〜Ｃ4 アルキルであり、Ｒ3
は、アミノ保護基であり、Ｒ4 は、Ｈ又はアシル保護基
であり、そしてＢ′は、適当に保護されたヌクレオシド
塩基残基である）で示される化合物。 - 【請求項１１】 Ｂ′が、Ｎ−アセチルシトシン、Ｎ−
ベンゾイルシトシン、Ｎ−ベンゾイルアデニン、チミ
ン、ウラシル、Ｎ−アセチルグアニン又はＮ−イソブチ
リルグアニン残基である請求項１０記載の化合物。 - 【請求項１２】 Ｒ1'が、Ｃ1 〜Ｃ4 アルキル、Ｃ1 〜
Ｃ18アシル、ヒドロキシ−低級アルキル又はベンジルで
ある請求項１０又は１１記載の化合物。 - 【請求項１３】 Ｒ3 が、９−フルオレニルメトキシカ
ルボニル、tert−ブチルオキシカルボニル、ベンジルオ
キシカルボニル、アリルオキシカルボニル、トリフェニ
ルメチル又は４，４′−ジメトキシトリチルである請求
項１０〜１２のいずれか１項記載の化合物。 - 【請求項１４】 Ｒ4 が、tert−ブチル、Ｃ1 〜Ｃ4 ア
ルキル、ベンジル、フェニル又は２−トリメチルシリル
エチルである請求項１０〜１３のいずれか１項記載の化
合物。 - 【請求項１５】 式（III ）： 【化４】 （式中、Ｒ7 は、ヒドロキシ保護基であり、Ｒ4 は、Ｈ
又はアシル保護基であり、Ｒ1'は、ヒドロキシ保護基で
あり、そしてＢ′は、適当に保護されたヌクレオシド塩
基残基である）で示される化合物。 - 【請求項１６】 請求項１〜７のいずれか１項記載のオ
リゴマー及び治療上不活性な担体物質を含有する薬剤。 - 【請求項１７】 細胞中の標的タンパク質の産生を減ら
す薬剤であって、該細胞中の標的タンパク質をコードす
るｍＲＮＡ配列に結合し、該タンパク質の生産を減らす
のに有効な量の、請求項１〜７のいずれか１項記載のオ
リゴマー及び医薬的に許容しうる担体を含有することを
特徴とする薬剤。 - 【請求項１８】 特に細胞中の標的タンパク質の産生を
減らすための薬剤の製造方法であって、請求項１〜７の
いずれか１項記載のオリゴマー又はその医薬的に許容し
うる塩を、治療上不活性な担体物質と混合し、その混合
物をガレヌス剤形にすることを特徴とする方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US34754194A | 1994-11-30 | 1994-11-30 | |
| US08/347541 | 1994-11-30 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08208686A true JPH08208686A (ja) | 1996-08-13 |
Family
ID=23364154
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7308739A Pending JPH08208686A (ja) | 1994-11-30 | 1995-11-28 | アミド主鎖を有するオリゴリボヌクレオチド |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0714907A1 (ja) |
| JP (1) | JPH08208686A (ja) |
| CN (1) | CN1128269A (ja) |
| AR (1) | AR002003A1 (ja) |
| BR (1) | BR9505571A (ja) |
| CA (1) | CA2163392A1 (ja) |
| FI (1) | FI955767A (ja) |
| TR (1) | TR199501521A2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6166197A (en) * | 1995-03-06 | 2000-12-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds having pyrimidine nucleotide (S) with 2'and 5 substitutions |
| US6222025B1 (en) | 1995-03-06 | 2001-04-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Process for the synthesis of 2′-O-substituted pyrimidines and oligomeric compounds therefrom |
| US7820810B2 (en) | 2007-03-19 | 2010-10-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Process for the synthesis of 2′-O-substituted purine nulceosides |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU3340797A (en) * | 1996-06-28 | 1998-01-21 | Novartis Ag | Modified oligonucleotides |
| US6586178B1 (en) * | 1999-03-05 | 2003-07-01 | Tosoh Corporation | Nucleic acid probe |
| FR2804960B1 (fr) * | 2000-02-11 | 2005-06-24 | Lvmh Rech | Nouveaux oligonucleotides et utilisation d'oligonucleotides modulant l'expression de la tyrosinase et de la tyrosinase- related-protein 1 comme agents depigmentants |
| WO2005092907A2 (en) * | 2004-03-26 | 2005-10-06 | Ranbaxy Laboratories Limited | Monosaccharide derivatives as anti-cancer and anti-inflammatory agents |
| FR2864540B1 (fr) * | 2005-02-22 | 2010-10-22 | Lvmh Rech | Nouveaux oligonucleotides et utilisation d'oligonucleotides modulant l'expression de la tyrosinase et de la tyrosinase-related-protein 1 comme agents depigmentants |
| GB201700595D0 (en) * | 2017-01-13 | 2017-03-01 | Univ Oxford Innovation Ltd | Oligonucleotide ligation |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5378825A (en) * | 1990-07-27 | 1995-01-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Backbone modified oligonucleotide analogs |
| AU6412794A (en) * | 1993-03-31 | 1994-10-24 | Sterling Winthrop Inc. | Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages |
-
1995
- 1995-11-18 EP EP95118193A patent/EP0714907A1/en not_active Withdrawn
- 1995-11-21 CA CA002163392A patent/CA2163392A1/en not_active Abandoned
- 1995-11-28 JP JP7308739A patent/JPH08208686A/ja active Pending
- 1995-11-28 AR ARP950100349A patent/AR002003A1/es unknown
- 1995-11-29 BR BR9505571A patent/BR9505571A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-11-30 CN CN95119988A patent/CN1128269A/zh active Pending
- 1995-11-30 FI FI955767A patent/FI955767A/fi unknown
- 1995-11-30 TR TR95/01521A patent/TR199501521A2/xx unknown
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6166197A (en) * | 1995-03-06 | 2000-12-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds having pyrimidine nucleotide (S) with 2'and 5 substitutions |
| US6222025B1 (en) | 1995-03-06 | 2001-04-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Process for the synthesis of 2′-O-substituted pyrimidines and oligomeric compounds therefrom |
| US6642367B2 (en) | 1995-03-06 | 2003-11-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Process for the synthesis of 2′-O-substituted pyrimidines and oligomeric compounds therefrom |
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
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