JPH07501312A - 保護されたアミノ酸構成単位、生産と使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 保護されたアミノ酸構成単位、生産と使用分子生物学や医学の研究に於いて化学 的に合成されたべブチト類（オリゴペプチドとポリペプチド）は現在重要な補助 材料の一つになっており、免疫アフィニティークロマトグラフィー用の特異性の 抗体の生産、未知の遺伝子産物の同定、及びは病原体に対するワクチンの開発に 於いて、アゴニスト作用又はアンタゴニスト作用を有するペプチドホルモン及び その類似体として、タンパク質の構造研究に於けるモデル化合物として、その他 数多くの目的に使用されている。

これらのべブチトはアミト結合（ペプチド結合）で連結されたアミノ酸のオリゴ マー又はポリマー（ｎは約１５０まで）である。

以下の説明に於いてベブチ１・類とは、２０個の天然し一αーアミノ酸の他にα −アミノ酸以外のアミノ酸、Ｄ−アミノ酸又は化学的に修飾したアミノ酸（任意 のＲ）を含むものを言う。ペブチト類の化学的合成は、適当に保護したアミノ酸 、ジペプチド又はオリゴペプチドの構成単位を段階的に連結（結合）させて行う 。保護基の種類や結合の化学を異にした種々の合成方法か公知であり、その概要 は次の文献に記載されている。

一アール・ビー・メリフィールド（Ｒ．　Ｂ．　Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）、）ヤ ーナル・アメリカン・ケミカル・ソサエティー（Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓ ａｃ、）、　８５゜２１４９　（１９６３）。

一ニー・ヴエーンンユ（Ｅ、　Ｗｕｎｓｃｈ）他、ホウベンーヴエイルにおいて （ｉｎ　Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ）：存機化学の方法（Ｍｅｔｈｏｄｅ　ｄｅｒ 　ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎＣｈｅｍｉｅ）　、第４版、１５巻（編者ニー・ミュ ーシー（Ｅ、　Ｍｕｌｌｅｒ）　、出版社ソーム（Ｔｈｉｅｍｅ）、スタットガ ルト（Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ）、　１９７４゜−ジー・バラニー（Ｇ、　Ｂａｒａ ｎｙ）　、アール・ビー・メリフィールド（Ｒ、Ｂ、　Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ） 、ペプチド類（Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）　２巻ｃｍ者イー・グロス（Ｅ、　 Ｇｒｏｓｓ）、ノエイ・マイエンホフｙ　−（Ｊ、　Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ）　 、出版社　アカデミツク・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）、ニュー・ ヨーク（Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）、１９７９．ページ１０多くの合成を進めて行く際 に、ある段階以降で結合の収率か急速に減少するという問題の段階に達すること があり、この現象は個々のペプチドによってはごく僅か結合した後で既に発生す る（困難な配列）。その原因は主としてペプチド鎖のひた折りか分子間及び分子 内の水素結合に′よりβ−構造になるためであり、そうなるとＮ−末端のアミノ 機能は化学反応に対して完全には関与しなくなる。このペプチドのひだ折りには ペプチド結合のアミドプロトンか関与して決定的な役割を果たすアール・ノー・ デュ・エル・ミルトン、ニス・シー・エフ・ミルトン、ビー・エイ・アダムス（ Ｒ，Ｃ，ｄｅ　Ｌ、　Ｍｉｌｔｏｎ、　Ｓ、　Ｃ，Ｆ、　Ｍｉｌｔｏｎ、　Ｐ、 　Ａ、　Ａｄａｍｓ）、ジャーナル・アメリカン・ケミカル・ソサエティー（Ｊ 、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、）　１１２．６０３９　（１９９０））。

これまてにも既にβ−構造の形成を避けるために一連の研究がなされた。温度や 溶剤を変え、担体への添加量を減少した他に、塩類や尿素なとの種々の添加剤を 合成中に加えることも試みられた（例えばエフ・シー・ウニストール、エイ・ビ ー・ロビンソン（Ｆ、Ｃ，Ｗｅｓｔａｌｌ、　Ａ、　Ｂ、　Ｒｏｂｉｎｓｏｎ　 ）ジャーナル・オーガナイゼイション・ケミカル（Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、 ）　３５．２８４２　（１９７０）、アール・シー・デュ・エル・ミルトン（Ｒ ，Ｃ，ｄｅ　Ｌ、　Ｍｉｌｔｏｎ）他１９９０　、前出）。

水素結合を妨げる最も有効ではあるか最も困難な考え方は第２のＮ−プロトン、 特にαＮ−プロトンに対して保護基を追加する、アミノ酸の化学的修飾によるも のである（エイチ・エラカート、シー・サイデル（Ｈ，Ｅｃｋｅｒｔ、　Ｃ，５ ｅｉｄｅｌ）、アンゲラ・ケミカル（Ａｎｇｅｗ、　Ｃｈｅｍ、　）。

９８、１６８　（１９８６））。この合成の適性に対する重要な前提条件の一つ は新たに導入した保護基か既存の保護基とは無関係に除去し得ることである。更 にこの保護基がアミノ機能に対して（立体的又は電子的に）不利な影響を与える ものであってはならない。この保護基は合成の間保持され、ペプチドか完全に合 成された後で始めて除去される。

実施態様の一つによれば、本発明の基礎をなす課題はペプチド合成用の一種のア ミノ酸構成単位により解決される。このアミノ酸の構成単位に於いてはペプチド 合成に関与するアミノ基の一つの水素原子か、非酸性条件下で除去可能の一時的 のアミノ保護基によって保護され、且つこのアミノ酸構成単位は（ａ）前記アミ ノ基の第２の水素原子か、マンニッヒ反応により導入可能のもう一つの保護基に より保護され、且つ（ｂ）前記アミノ酸構成単位が一つのジペプチド構成単位で ある場合には、そのペプチド結合の水素原子も同様のもう一つの保護基で保護さ れ、又は （Ｃ）前記アミノ酸構成単位か一つのオリゴペプチド構成単位である場合には、 そのペプチド結合の一つ乃至全ての水素原子も同様の保護基で保護されている ことを特徴としている。

本発明の前記アミノ酸構成単位としては、一つの個々のアミノ酸に対して一つの 構成単位、一つのジペプチドの構成単位、或いは一つのオリゴペプチドの構成単 位であることかできる。

前記のペプチド結合に関与するアミノ基としては、一つのα−炭素又はβ−炭素 に結合しているアミノ基であってもよい。

前記の一時的アミノ保護基としては、ウレタン基、例えばフルオレニルメトキシ カルボニル（Ｆｍｏｃ）であることができる。

前記アミノ酸構成単位のカルボキシル基は遊離、保護又は活性化（活性エステル ）の状態であることができる。

前記アミノ酸構成単位は更に、ホルムアルデヒドと一つのプロトン供与化合物（ Ｒ″’−Ｘ−Ｈ：　Ｒ”°はマンニッヒ反応成分の残基）とを使用してマンニッ ヒ反応により導入することかできるもう一つの保護基（Ｒ“’−Ｘ−ＣＨ，−） を特徴とすることができ、この場合このプロトン供与化合物の酸性水素原子は遊 離の電子対により一つのへテロ原子（Ｘ）、例えばアルコール（Ｒ”−０Ｈ）　 、チオフルコール（Ｒ”−３Ｈ）又１！第２級アミン（Ｒ”’−ＮＲ”ＨｌＲ” はもう一つのマンニッヒ反応成分の残基て水素ではない）のへテロ原子と結合し ている。

更にもう一つの実施態様によれば、本発明はペプチド合成用の一つのアミノ酸構 成単位を生産する方法に関し、本方法は、ペプチド結合に関与するアミノ基の一 つの水素原子が、非酸性条件下で除去可能の一つの一時的のアミノ保護基によっ て保護され、もう一つの水素原子か遊離であるような通常のアミノ酸構成単位を 基にして、二のアミノ酸構成単位に、一つのプロトン供与化合物の酸性水素原子 か例えばアルコール、チオアルコール又は第２級アミンの使用によって遊離の電 子対により一つのへテロ原子（Ｘ）と結合しているようなプロトン供与化合物（ Ｒ”’−Ｘ−Ｈ）を使用してマンニッヒ反応を行わせることを特徴とする。

本発明の前記アミノ酸構成単位はペプチド合成、特にメリフィールド（Ｍｅｒｒ ｉｆｉｅｌｄ）によるペプチド合成及び例えばＦｍｏｃ−ｔＢｕ−法によるペプ チド合成に使用することができる。

即ち、本発明の合成の考え方に対して、一般式Ｒ“−Ｘ−ＣＨｔ−のアミノメチ ル化した化合物を基にして保護基を開発した。ここてＸは遊離の電子対を有する ヘテロ原子で、Ｒ“はマンニッヒ反応成分の任意の残基である。この保護基は酸 性で除去することができる。

本発明のアミノ酸構成単位の生産には次の一般式の通常のアミノ酸構成単位を基 にすることができる。

Ｒ−Ｃｏ−ＮＨ−ＣＨＲ’−ＣＯＯＲ’する。ここてＲ−Ｃｏは非酸性条件で除 去し得る従来技術によるα−アミノ保護基、Ｒ゛はアミノ酸（ＡＳ）の側鎖、Ｒ ”はＯＨ、活性エステル　も又は保護基、Ｒ“は新しい保護基の残基、ＸはＯ， Ｓ、　ＮＲＮ（Ｒ”≠Ｈ）である。

マンニッヒ反応による保護基の導入（例えば　エム・トラモンティーニ、エル・ アンギオイーニ（Ｍ、　Ｔｒａｍｏｎｔｉｎｉ、　Ｌ、Ａｎｇｉｏｌｉｎｉ）、 テラヘドロン（Ｔｅｒａｈｅｄｒｏｎ）、　４６．　１７９１　（１９９０）（ リヴユ−（Ｒｅｖｉｅｗ））は次のように実施される。

この種のマンニッヒ反応は原理的には完全に保護されたジペプチド又はオリゴペ プチドに就いても実施でき、その場合新たな保護基はＮ−末端のみならず中央に 位置するペプチド結合にも導入される。

こうしてペプチド合成用に用いられる溶剤に不溶なオリゴペプチドフラグメント が可溶の形に移行する。保護基の除去は逆反応として行われる。

Ｆｍｏｃ−技法に於けるこの考え方の応用を次に示すジー・ビー・フィールズ、 アール−ｘル・ノープル（Ｇ、　Ｂ、　Ｆｉｅｌｄｓ、　Ｒ，Ｌ、　Ｎｏｂｌｅ ）、インターナショナル・ペプチド・プロティン・リサーチ（［ｎｔ、　Ｊ、　 Ｐ保護されたＦｍｏｃ−アミノ酸 保護基の多様な種類の例は次の通りで、Ｆｍｏｃ−（Ｐｔｍ）Ｇｌｙ−ＯＨＰｔ ｍ：　フェニルチオメチル−Ｆｍｏｃ−（Ｐｔｍ）Ａｌａ−ＯＨ Ｆｍｏｃ−（Ｐｔｍ）Ｖａｌ−ＯＨ Ｆｍｏｃ−（Ｅｔｍ）Ａｌａ−ＯＨＥｔｍエチルチオメチル−Ｆｍｏｃ−（Ｅｔ ｍ）ｖａ、ｌ−ＯＨ Ｆｍｏｃ−（Ｍｏｍ）Ｇ１−０ＨＦ　Ｍｏｍ：　メチルオキシメチル−Ｆｍｏｃ −（Ｍｏｍ）Ａｌａ−ＯＨ Ｆｍｏｃ−（Ｂｏｍ）Ｖａｌ−ＯＨ’　Ｂｏｍ：ベンジルオキシメチル−これら は無色の粘度の高い油状物として得られる。簡略化した線状の表現法（示性式） では追加したαＮ〜保護基を丸括弧でアミノ酸の記号の前に記載した。

新しい保護基の導入により、この新しいアミノ酸はＣ０−Ｎ−結合の回りの回転 を阻害された配座異性体の混合物となる（核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルの信 号重複）が、これはペプチド合成に対しては重要ではない。

このアミノ酸誘導体がペプチド合成に対して使用可能であることは、完全に保護 したトリペプチドの調製により示すことができた。

Ｆｍｏｃ−（Ｍｏｍ）Ｇｌｙ−（Ｍｏｍ）Ｇｌｙ−Ｖａｌ−ＯＢｚの合成は溶液 中で行った。

一つの困難なモデル配列（Ａｌａ）　ｌ　１の合成の過程での結合収率の検討に 対しては固相合成法を用いた。第２のα−Ｎ−保護基にはフェニルチオメチル基 （Ｐｔｍ）を選定した。通常のＦｍｏｃ−Ａ　Ｉａ−ＯＨによる合成の場合には 直ちに収率か徐々に低下するか、新法で保護したアミノ酸Ｆｍｏｃ−（Ｐｔｍ） Ａｌａ−ＯＨを使用した場合には同じ反応条件で収率の低下は認められない。

アミノ酸の一般的調製方法 従来の方法で保護したアミノ酸１　ｍｍｏｌ（場合によってはアルカリ塩として 触媒量のクエン酸を添加）と約３〜６倍過剰のパラホルムアルデヒド及び約１０ 倍過剰のプロトン供与化合物とを気密の耐圧反応容器中に密閉し、９０〜１００ °Ｃで２日間攪拌する。精製はＣ−１８ノリカケルを担体とした液体クロマトグ ラフィーを用いて酸を含まないアセトニトリル／水の勾配で行う。

ｈｏｅ−（Ｍｏｍ）Ｇｌｙ−（Ｍｏｍ）Ｇｌｙ−Ｖａｔ−ＯＢｚの調製Ｆｍｏｃ −（Ｍａｍ）Ｇｌｙ−ＯＬｉ Ｆｍｏｃ−Ｇ　１ｙ−ＯＨを好ましくはリチウム塩として上記の方法に使用する 。Ｆｍｏｃ−（Ｍｏｍ）Ｇｌｙ−ＯＬｉはほぼ定量的に得られる。

ＭＳ：　Ｃ、，８，９ＮＯ８（３４１）εＩ：　ｍ／ｅ（％）＝３４１（１，Ｍ ″″）、　３０（２，Ｍ　”　−ＣＨ。

ＯＨ）、　２６６　（＜＋、　３０９−ＣＯ２＋）Ｉ”″）、１７８（１００， フルオレニル）Ｆｍｏｃ−（Ｍｏｍ）Ｇｌｙ−Ｖａｌ−ＯＢｚＦｍｏｃ−（Ｍｏ ｍ）Ｇｌｙ−ＯＬｉ　４８．６．ｃ＋ｍｏｌとＨＯＢｔ　５０μｍｏｌとをＤＭ Ｆ　２００μｌに溶解し、ＤＩＰＣ４８，６μｍｏｌにて１５分子備活性化する 。Ｈ−Ｖａｌ−ＯＢｚ　−ＨＣＩ　＋２１　μｍｏｌとＤＭＡＰ　１００　μｍ ｏｌ　とをＤＭＦ　２００μｌに溶解し、両方の溶液を合わせる。１時間後にい くらか水を加え、溶液を真空で蒸発する。Ｃ−１８シリカゲルを担体とした液体 クロマトグラフィーを用い、アセトニトリル／水で分離すれば約５０％のジペプ チドか得られる。

Ｈ−（Ｍｏｍ）Ｇｌｙ−Ｖａｌ−ＯＢｚＦｍｏｃて保護したジペプチドを２０％ のピペリジン／ＤＭＦ約３００μｌにて２０分処理し、真空で溶剤を除去した後 で上記のようにクロマトグラフィーにより分離する（定量的）。

ＭＳ：　Ｃ、、Ｈ、、Ｎ　２０　、　（３０８）　ＦＡＢ＋：　ｍ／ｅ＝２７７ （９，Ｍ−ＣＨ，０−）、　２６５（１００，２７７−ＣＨ２） Ｆｍｏｃ−（Ｍｏｍ）Ｇｌｙ−（Ｍｏｍ）Ｇｌｙ−Ｖａｌ−ＯＢｚＦｍｏｃ−（ Ｍｏｍ）Ｇｌｙ−ＯＬｉ　７０μｍｏｌをＨＯＢｔ　２等量とＤＩＰＣ１，１等 量とのＤＭＦ溶液２００μｌにて１５分子備活性化し、ジペプチド２３μｍｏｌ のＤＭＦ溶液２００μβを加える。１時間後幾らか水を加えてから分析のため） ＩＰＬＣて分離する。

ＭＳ：　Ｃ２１Ｈ４１Ｎ　３０　＊　（６３１）　ＦＡＢ十：　ｍ／ｅ＝５５６ （８８，Ｍ”　＋２８−フェニル）。

Ｐｔｒｎ−ＡＳ　Ｆｍｏｃ−（Ｐｔｍ）Ａｌａ−ＯＨの調製Ｆｍｏｃ−（Ｐｔｍ ）Ａｌａ−ＯＨ−Ｈ２０１０９，７ｍｇ　（０，３３ｍｍｏｌ）、パラホルムア ルデヒド５０　ｍｇ　（１，５６ｍｍｏｌ）、チオフェノール４００ｕｌ！を上 記のように反応させる。クロマトグラフィーにより４０％の産物か無色の粘度の 高い油状物として得られる。

（Ａｌａ）　＋１の合成はセルロースディスク（フィルター）の上で、予・フラ ンク、アール・デーリンク（Ｒ，Ｆｒａｎｋ、　Ｒ，ＤＯｒｉｎｇ）　、テトラ ヘドロン（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ）　４４．６０３１　（＋９８８））により 行った。残りのアミノ酸の結合はフィルター添加用に約４倍過剰のアミノ酸を加 えたＤＭＦ溶液２０ｍＭの中で実施した。

相当するアミノ酸の各１等量をＨＯＢｔ　１．５等量とＤＩＰＣ１，２等量とて １５分子備活性化してから、ブロモフェノールブルー（１ｍｇ／ＩｍｆＤＭＦ） 　１０μｌて着色したフィルタに加えた。フィルターを反応溶液の中で１時間振 り動かしてから、尚着色しているフィルタを順々にＤＭＦ、　ＣＨ２Ｃ１２、Ｄ ＭＰでそれぞれ３回ずつ洗浄し、再度アミノ酸溶液の中で１時間処理した。尚着 色しているフィルタを再度洗浄してから、１００μｌのＤλ（Ｆに溶解した３０ μｌのＡｃ　２０／ＤＩＰＥＡ（１：Ｉ）によりアセチル化した。続いて各３０ ０μｌの２０％ピペリジン／ＤＭＦによりＦｍｏｃ−保護基を除去した。結合収 率の測定にはＣＨｚ　Ｃ１！の中でジベンゾフルベン・ピペリジンの紫外分光法 （ε、。、、、　＝　８５５０）を用いた。

その後のペプチドの分解は９５％ＴＦＡ、　３％システィン、２％Ｈｔ　ｏによ り行った。凍結乾燥した産物を次にＩＩＰＬｃにより分離し、ＦＡＢ−ＭＳによ り検出した。

略号の説明 ＡＣ２０無水酢酸 Ｂｏｍ　ベンジルオキシメチル ＤＩＰＥＡ　ジイソプロピルエチルアミンＤＭＡＰ　ジメチルアミノピリジン ＤＭＦ　ジメチルホルムアミド Ｅｌ　を子衝撃イオン化法 Ｅｔｍ　エチルチオメチル ＦＡＢ十　高速原子衝撃、正のイオン Ｆｍｏｃ　９−フルオレニルメ１−キソ力ルボニルＨＯＢｔ　ヒドロキシベンゾ トリアゾールＨＰＬＣ高性能液体クロマトグラフィーＭＳ　質量分析法 Ｍｏｍ　メチルオキシメチル ＮＭＲ核磁気共鳴 Ｐｔｍ　フェニルチオメチル ＴＦＡ　ｈリフルオロ酢酸 Ｕ■　紫外分光法 Ｆｍｏｃ−（Ｍｏｍ）Ｇｌｙ−Ｏｈ ’　Ｈ−ＮＭＲ（３００Ｍｔ（ｚ、ＣＤＣ１ｚ　）δ（ｐｐｍ）　分離　Ｊ　（ Ｈｚ）　積分　位置４．８２／４．５９　ｓ、２　２Ｈ３−Ｈ４，５５／４．３ ９　ｄ、２　６．０／７．０　２Ｈ６−Ｈ４，２５ｄｔ　〜６．５／６．５　１ Ｈ７−Ｈ４，０４／３．９８　ｓ、２　２Ｈ２−Ｈ３，２３／３．０１　ｓ、２ 　３Ｈ４−Ｈ１７１，２１／１７１．１０　ｓ、２　Ｃ−１１５６，０９／１５ ５．７１．ｓ、２　Ｃ−５１４３，７０ｓ　Ｃ−８，Ｃ−１３ １４１，２３／１４１．１１　Ｓ、２　Ｃ−１４，Ｃ−１９７９，４４／７８． ９１　ｔ、２　Ｃ−３６７，９０／６７．３０　ｔ、２　Ｃ−２５５，７５１５ ５，＋５　ｑ、２　Ｃ−７Ｓ−一重項、ｄ−二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、 ｄｔ＝　三重項の二重項、゛＝微細分離補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８の規定による補正書）平成５年１２月１３日

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．ペプチド合成に関与するアミノ基の一つの水素原子が、非酸性条件下で除去 可能の一時的のアミノ保護基によって保護されている、ペプチド合成用のアミノ 酸構成単位に於いて、該アミノ酸構成単位が、 （ａ）前記アミノ基の第２の水素原子が、マンニッヒ反応により導入可能のもう 一つの保護基により保護され、且つ（ｂ）前記アミノ酸構成単位が一つのジペプ チド構成単位である場合には、そのペプチド結合の水素原子も同様のもう一つの 保護基で保護され、又は （ｃ）前記アミノ酸構成単位が一つのオリゴペプチド構成単位である場合には、 そのペプチド結合の一つ乃至全ての水素原子も同様の保護基で保護されている ことを特徴とする前記アミノ酸構成単位。
2. ２．前記アミノ酸構成単位として、一つの個々のアミノ酸に対して一つの構成単 位、一つのジペプチドの構成単位、或いは一つのオリゴペプチドの構成単位であ ることを特徴とする請求の範囲第１項記載のアミノ酸構成単位。
3. ３．前記のペプチド結合に関与するアミノ基として、一つのα−炭素又はβ−炭 素に結合しているアミノ基であることを特徴とする請求の範囲第１項又は第２項 記載のアミノ酸構成単位。
4. ４．前記の一時的アミノ保護基として、ウレタン基、例えばフルオレニルメトキ シカルボニル（Ｆｍｏｃ）であることを特徴とする前記請求の範囲のいずれか１ 項記載のアミノ酸構成単位。
5. ５．前記アミノ酸構成単位のカルボキシル基が遊離、同様に保護又は活性化（活 性エステル）の状態であることを特徴とする前記請求の範囲のいずれか１項記載 のアミノ酸構成単位。
6. ６．前記アミノ酸構成単位が、ホルムアルデビトと、一つのプロトン供与化合物 （Ｒ′′′−Ｘ−Ｈ；Ｒ′′′はマンニッヒ反応成分の残基）の酸性水素原子が 遊離の電子対により一つのヘテロ原子（Ｘ）、例えばアルコール（Ｒ′′′−Ｏ Ｈ）、チオアルコール（Ｒ′′′ＳＨ）又は第２級アミン（Ｒ′′′−ＮＲ′′ ′′Ｈ；Ｒ′′′′はもう一つのマンニッヒ反応成分の残基で水素ではない）の ヘテロ原子と結合しているようなプロトン供与化合物とを使用してマンニッヒ反 応により導入することができるもう一つの保護基（Ｒ′′′−Ｘ−ＣＨ２−）を 特徴とする前記請求の範囲のいずれか１項記載のアミノ酸構成単位。
7. ７．ペプチド結合に関与するアミノ基の一つの水素原子が非酸性条件下で除去す ることができる一つの一時的のアミノ保護基によって保護され、もう一つの水素 原子が遊離であるような通常のアミノ酸構成単位を基にして、一つのプロトン供 与化合物の酸性水素原子が例えばアルコール、チオアルコール又は第２級アミン の使用によって遊離の電子対により一つのヘテロ原子（Ｘ）と結合しているよう なプロトン供与化合物（Ｒ′′′−Ｘ−Ｈ）を使用して、該アミノ酸構成単位に マンニッヒ反応を行わせることを特徴とするペプチド合成用の一つのアミノ酸構 成単位を生産する方法。
8. ８．請求の範囲第１項乃至第６項のいずれか１項記載の一つのアミノ酸構成単位 の使用。
9. ９．メリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）によるペプチド合成に於ける請求 の範囲第８項記載の使用。
10. １０．Ｆｍｏｃ−ｔＢｕ−法を用いたメリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ） によるペプチド合成に於ける請求の範囲第９項記載の使用。