JPH07260693A - イオン性検体のスポットテスト法 - Google Patents
イオン性検体のスポットテスト法Info
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Abstract
操作が簡易で高感度に検体を検出する方法を提供する。 【構成】 イオン性検体と錯体を形成する呈色剤をイオ
ン性検体を含有すると思われる試料液に添加し、次いで
当該試料液を疎水性担体上に滴下し、蒸発、濃縮した
後、試料液滴下箇所の錯体の発色を測定することにより
試料液中のイオン性検体を検出する。 【効果】 従来のスポットテスト法に較べ、スポットサ
イズが小さく制御されることから、試料中の検体が高感
度で測定することが可能となり、ミクロ試料の高感度簡
易測定法として使用できる。
Description
テスト法に関し、詳細にはミクロ試料の高感度簡易計測
法である、新規なイオン性検体のスポットテスト法に関
する。
より、溶液中の金属(イオン)等の試料濃度を光学的に
測定する手段として、原子吸光法、発光分析法や、金属
に配位子を結合させて特異的な呈色を起こさせ、その吸
光度を測定する吸光光度法や、蛍光を測定する蛍光分析
法等が用いられてきた。また金属(イオン)以外の測定
対象物においても、試料の特異的な吸収波長を利用した
吸光光度法や、蛍光を利用した蛍光光度法は幅広く利用
されてきた。
や試料に対する特異性にも優れるものの、高価な専用機
器を必要としたり、操作に熟練を要するなどの点で問題
があった。一方、簡便な測定手段の一つとして、呈色し
た溶液を濾紙上に滴下し、その色や大きさを目視判定す
るというスポットテスト法が知られている。しかし従来
の古典的スポットテスト法においては、濾紙上に滴下し
た溶液が大きく広がり、滴下試料の体積あたりの面積が
大きくなってしまい、検出感度が低いという問題があっ
た。
ズを制御する方法としてリングオブン法がある。リング
オブン法は、濾紙中央に滴下した試料溶液が浸透、拡散
していく状況において、濾紙の外周部から加熱すること
で溶媒、拡散液を蒸発させ、濾紙中央部からの拡散と外
周部での蒸発とのバランスからスポットリングのサイズ
を制御する方法である。これは試料の呈色をリング状に
濃縮し、目視による高感度な検出を可能とした手法であ
るが、加熱に用いる装置が複雑であり操作性に難がある
こと、リングのサイズは制御できるが、未だ直径が20
mm程度と大きく、十分な感度が得られないという問題
があった。
を解決するためスポットテスト法につき検討を重ねた結
果、試料液を疎水性の担体に滴下することによりスポッ
トリングの広がりを抑えることができ、さらにかかるス
ポットリングの周辺部にリング状に錯体が濃縮されるこ
とから目視でも十分な検出感度を有するばかりでなく、
反射型の吸光光度計、蛍光光度計等を用いることにより
定量性、精度を向上させることのできる新しい測定方法
を始めて見出し、本発明を完成するに至った。
を形成し得る呈色剤をイオン性検体を含有すると思われ
る試料液に添加し、次いで当該試料液を疎水担体上に滴
下し、蒸発、濃縮した後、試料滴下箇所の錯体の発色を
測定することを特徴とするイオン性検体のスポットテス
ト法に存する。本発明において測定の対象となるイオン
性の検体としては、その水溶液中でイオンを形成する能
力を有するものであれば特に制限はされない。具体的に
は、比色定量法が適用できるFe,Cu,Pb,Ni,
Co,Ca,Al,Zn,V等の種々の金属(イオ
ン)、F- ,CN- ,S2-等のイオン、トリクロロ酢
酸,サリチル酸等が解離した有機酸のイオン、各種アル
カロイド等のイオン化物等、現在吸光光度法、蛍光光度
法等により測定されている多くの試料が挙げられる。
剤は特に制限はされないが、具体的には2−ニトロソ−
5−[N−プロピル−N−(3−スルホプロピル)アミ
ノ]フェノール、2,2’−ジヒドロキシアゾベンゼ
ン、ルモガリオン、メチレンブルー等が挙げられる。か
かる呈色剤は、測定対象の検体と錯体を形成するのに十
分な量が添加される。それは呈色反応を妨げない範囲
で、通常は過剰量が添加される。
ては、当該担体の表面が少なくとも疎水性部を有してい
れば特に制限はされない。図1に、本願のスポットテス
ト法の模式図を示す。リングが形成された後のスポット
を、リングの直径方向にスキャンしながらその吸光光度
もしくは蛍光光度を測定した場合、次の5通りのパター
ンが観測される。 (1)p、r共に大きいもの (2)p大、r小のもの (3)p小、r大のもの (4)p、r共に小さいもの (5)pが極めて小さいもの (但し、pはピーク高さ/半値幅、rは中央部の強度/
ピーク高さを表す)
場合に応じて適宜選択することが好ましい。例えば
(1)のケースにおいては疎水性濾紙や疎水コートした
合成紙などが、(2)のケースにおいては陶器タイルや
ポリ塩化ビニルなどが、(3)のケースにおいては樹脂
コーティングした紙などが、(4)のケースにおいては
塩化ビニリデンフィルムやアクリル酸エステル系のフィ
ルムなどが、(5)のケースにおいては無色透明な樹脂
シートなどが好適に使用される。
は、小さいリング状に濃縮することによりバックグラウ
ンドとのコントラストを上げ、目視による検出を感度良
くする効果もあることから、少量であることが望まし
い。実際には担体、試料溶液の組成、粘度等の関係から
定められるものであり、一概には決められないが、通常
は5〜500μl、より好ましくは20〜200μlで
ある。例えば100μl程度の試料を疎水性濾紙上に滴
下した場合、濾紙上には直径約5mmのスポットが形成
される。
される錯体を安定化させる目的で、適宜緩衝剤を加える
こともできる。具体的にはトリス緩衝液、グッド緩衝
液、MES緩衝液、ホウ酸緩衝液等のいわゆるpH緩衝
液が好適に使用される。担体上に滴下された試料溶液
は、続いて蒸発、濃縮される。これは自然乾燥でもよい
し、また60〜100℃程度で10〜3時間程度、強制
的に乾燥させてもよい。
グが形成される。かかるリングの周辺部には、測定対象
とする検体と呈色剤との錯体がハロー状に形成される。
かかる錯体は着色性または発蛍光性であるので、これを
目視により、またはその吸光光度もしくは蛍光強度を既
知の分析手段を用いて測定することにより、目的とする
検体を定性的に、あるいは定量的に測定することができ
る。
明するが、本発明はその要旨を超えない限り、以下の実
施例により限定されるものではない。 実施例1 ポリ塩化ビニル(以下、「PVC」と略す)のテトラヒ
ドロフラン溶液に、フタル酸ジオクチルに二酸化チタン
を分散させたものを加え、攪拌した後、シャーレ上に展
開して、可塑化白色PVCフィルムを作製した。鉄を含
有する試料溶液に、2−ニトロソ−5−[N−プロピル
−N−(3−スルホプロピル)アミノ]フェノール(以
下、「NPSAP」と略す)溶液を2×10-5mol/
dm3 、L−アスコルビン酸を5×10-4mol/dm
3 、及びホウ酸緩衝液(pH9.2)を加え、水で定容
した。
PVCフィルム上に滴下し、60℃で1時間乾燥した。
その後フィルム上に形成された、Fe−NPSAP錯体
の着色リングを、目視または反射型の吸光度測定装置
(フライングスポットスキャニングデンシトメーター
CS−9300PC,島津製作所)を用いて700nm
の吸光度を計測した。目視による測定では、鉄の濃度に
伴い、色調が赤から緑へと変化し、検出限界は1.0×
10-7Mであった。吸光度計測法による検量線を、図2
に示す。試料溶液中の鉄の濃度が高くなるに従って、吸
光度のピーク面積が大きくなることが分かる。
ロキシアゾベンゼン(以下、「DHAB」と略す)溶液
を3×10-6mol/dm3 、及びトリス緩衝液(pH
8.0)を加え、水で定容した。
DVANTEC 2S)上に滴下し、80℃で30分間
乾燥させた。濾紙上に形成されたAl−DHAB錯体の
赤色の着色リングを、目視または反射型の吸光度測定装
置(フライングスポットスキャニングデンシトメーター
CS−9300PC,島津製作所)を用いて495n
mの吸光度を計測した。その結果、目視による検出限界
は2×10-7mol/dm3 で、吸光度計測では1×1
0-6mol/dm3 であった。
×10-5mol/dm 3 、及びPIPES−KOH緩衝
液(pH6.5)を加え、水で定容した。試料の混合液
100μlを疎水性ロ紙(ADVANTEC 2S)上
に滴下し、70℃で30分間乾燥させた。ロ紙上に形成
されたAl−DHAB錯体を目視、または発蛍光性の着
色リングを紫外ランプ(TOPCON FI−5S)照
射下、反射型の蛍光光度計(フライングスポットスキャ
ニングデンシトメーターCS−9300PC,島津製作
所)を用いて測定した。
試料溶液中のアルミニウム濃度に伴って、良好な直線性
を示す蛍光強度が得られていることがわかる。なお目視
による検出限界は、2×10-8mol/dm3 であっ
た。
モガリオン溶液1×10-3mol/dm3 を25μl、
及び0.1mol/dm3 MES−KOH緩衝液(pH
6.9)を1ml加え、水を加えて25mlに定容し
た。
DVANTEC 2S)上に滴下し、強制対流型乾燥器
内で80℃、30分間乾燥させた。濾紙上に形成された
Al−ルモガリオン錯体を目視、または発蛍光性の着色
リングを紫外ランプ(TOPCON FI−5S)照射
下、反射型の蛍光光度計(フライングスポットスキャニ
ングデンシトメーター CS−9300PC,島津製作
所)を用いて測定した。目視、蛍光光度計ともに、検出
限界は5×10-8mol/dm3 であった。
法は、従来法の簡便さに加え、そのスポットサイズが小
さく制御されることから、試料中の検体が高倍率で濃縮
され、ppbレベルでの感度による測定が可能となり、
ミクロ試料の高感度簡易計測法として使用できる。
的に表す。
度を反射吸光法で測定した結果を表す。
を反射蛍光法で測定した結果を表す。
Claims (4)
- 【請求項1】 イオン性検体と錯体を形成し得る呈色剤
をイオン性検体を含有すると思われる試料液に添加し、
次いで当該試料液を疎水担体上に滴下し、蒸発、濃縮し
た後、試料滴下箇所の錯体の発色を測定することを特徴
とするイオン性検体のスポットテスト法。 - 【請求項2】 疎水性担体が疎水性濾紙であることを特
徴とする請求項1記載の方法。 - 【請求項3】 錯体の発色を吸光度により測定すること
を特徴とする請求項1または2に記載の方法。 - 【請求項4】 錯体の発色を蛍光強度により測定するこ
とを特徴とする請求項1または2に記載の方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP04863294A JP3393701B2 (ja) | 1994-03-18 | 1994-03-18 | イオン性検体のスポットテスト法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP04863294A JP3393701B2 (ja) | 1994-03-18 | 1994-03-18 | イオン性検体のスポットテスト法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH07260693A true JPH07260693A (ja) | 1995-10-13 |
JP3393701B2 JP3393701B2 (ja) | 2003-04-07 |
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ID=12808758
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Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP04863294A Expired - Fee Related JP3393701B2 (ja) | 1994-03-18 | 1994-03-18 | イオン性検体のスポットテスト法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP3393701B2 (ja) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2003052404A1 (fr) * | 2001-12-19 | 2003-06-26 | Nomura Chemical Co.,Ltd | Procédé permettant d'analyser l'aluminium |
JP2011058881A (ja) * | 2009-09-08 | 2011-03-24 | Sumitomo Metal Mining Co Ltd | 粉塵に含まれる鉄の簡易分析方法および検査キット |
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-
1994
- 1994-03-18 JP JP04863294A patent/JP3393701B2/ja not_active Expired - Fee Related
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JP3393701B2 (ja) | 2003-04-07 |
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