JPH07246092A - カタラーゼ及びその製造方法 - Google Patents
カタラーゼ及びその製造方法Info
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- JPH07246092A JPH07246092A JP6086745A JP8674594A JPH07246092A JP H07246092 A JPH07246092 A JP H07246092A JP 6086745 A JP6086745 A JP 6086745A JP 8674594 A JP8674594 A JP 8674594A JP H07246092 A JPH07246092 A JP H07246092A
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- catalase
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- strain
- bacillus subtilis
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0065—Oxidoreductases (1.) acting on hydrogen peroxide as acceptor (1.11)
-
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- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 ｐＨ７において、０℃におけるカタラーゼ活
性が３０℃におけるカタラーゼ活性の９５％以上の値を
示し、以下の性質を有する微生物由来のカタラーゼ及び
バチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis ）ＩＡＭ１
０２６株によるその製造方法。（１）至適温度が０〜３
０℃；（２）至適ｐＨが７〜１０；（３）１０ｍＭのフ
ッ化カリウムに対する耐性を有する；（４）ＳＤＳポリ
アクリルアミドゲル電気泳動法により測定した分子量が
65,000±3,000 ；（５）等電点電気泳動により測定した
等電点が約４．８。 【効果】 本発明のカタラーゼは低温領域でも高いカタ
ラーゼ活性を有するため、冬季や寒冷地における過酸化
水素を含む排水の処理等に有効である。
性が３０℃におけるカタラーゼ活性の９５％以上の値を
示し、以下の性質を有する微生物由来のカタラーゼ及び
バチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis ）ＩＡＭ１
０２６株によるその製造方法。（１）至適温度が０〜３
０℃；（２）至適ｐＨが７〜１０；（３）１０ｍＭのフ
ッ化カリウムに対する耐性を有する；（４）ＳＤＳポリ
アクリルアミドゲル電気泳動法により測定した分子量が
65,000±3,000 ；（５）等電点電気泳動により測定した
等電点が約４．８。 【効果】 本発明のカタラーゼは低温領域でも高いカタ
ラーゼ活性を有するため、冬季や寒冷地における過酸化
水素を含む排水の処理等に有効である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は低温において高いカタラ
ーゼ活性を有する新規なカタラーゼ及びその製造方法に
関する。本発明のカタラーゼは低温条件下でも過酸化水
素分解能を持つため、常温以上での用途に加えて、例え
ば冬季の排水処理、数の子漂白後の水処理等においても
有利である。
ーゼ活性を有する新規なカタラーゼ及びその製造方法に
関する。本発明のカタラーゼは低温条件下でも過酸化水
素分解能を持つため、常温以上での用途に加えて、例え
ば冬季の排水処理、数の子漂白後の水処理等においても
有利である。
【０００２】
【従来の技術】半導体プロセスでの過酸化水素含有排水
の処理、繊維漂白プロセスでの残存過酸化水素の分解、
また食品分野では数の子の漂白に伴う残存過酸化水素の
分解等カタラーゼは広く利用されている。カタラーゼは
過酸化水素を分解する酵素であり、多くの生物によって
生産されることが知られている。微生物由来のものとし
ては、例えばサ−マス（Thermus ）属細菌由来の耐熱性
カタラーゼ（特開昭５５−１３５５８）、ミクロコッカ
ス（Micrococcus ）属細菌由来のフッ化物イオン耐性カ
タラーゼ（特開平４−２０２８８）、ハンセヌラ（Hans
ennula）属酵母由来の耐塩性カタラーゼ（特開昭６３−
３７８８）、アスペルギルス（Aspergillus ）等の糸状
菌由来の耐熱性カタラーゼ（特開平５−１５３９７５）
などが報告されている。
の処理、繊維漂白プロセスでの残存過酸化水素の分解、
また食品分野では数の子の漂白に伴う残存過酸化水素の
分解等カタラーゼは広く利用されている。カタラーゼは
過酸化水素を分解する酵素であり、多くの生物によって
生産されることが知られている。微生物由来のものとし
ては、例えばサ−マス（Thermus ）属細菌由来の耐熱性
カタラーゼ（特開昭５５−１３５５８）、ミクロコッカ
ス（Micrococcus ）属細菌由来のフッ化物イオン耐性カ
タラーゼ（特開平４−２０２８８）、ハンセヌラ（Hans
ennula）属酵母由来の耐塩性カタラーゼ（特開昭６３−
３７８８）、アスペルギルス（Aspergillus ）等の糸状
菌由来の耐熱性カタラーゼ（特開平５−１５３９７５）
などが報告されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従来のカタラーゼは、
低温条件下でのカタラーゼ活性は充分ではない。本発明
の目的は、従来のカタラーゼと比較して優れた低温カタ
ラーゼ活性を有するカタラーゼを提供することにある。
低温条件下でのカタラーゼ活性は充分ではない。本発明
の目的は、従来のカタラーゼと比較して優れた低温カタ
ラーゼ活性を有するカタラーゼを提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは低温で高い
カタラーゼ活性を有するカタラーゼについて鋭意検討を
行い、保存菌株及び自然界より微生物を探索した。その
結果、バチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis ）Ｉ
ＡＭ１０２６株由来のカタラーゼが低温でも高いカタラ
ーゼ活性を示すことを見出し本発明に至った。
カタラーゼ活性を有するカタラーゼについて鋭意検討を
行い、保存菌株及び自然界より微生物を探索した。その
結果、バチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis ）Ｉ
ＡＭ１０２６株由来のカタラーゼが低温でも高いカタラ
ーゼ活性を示すことを見出し本発明に至った。
【０００５】すなわち、本発明は １）ｐＨ７において、０℃におけるカタラーゼ活性が３
０℃におけるカタラーゼ活性の９５％以上の値を示す微
生物由来のカタラーゼ、 ２）下記の性質を有する前記１）記載のカタラーゼ、 （ａ）作用温度及び至適温度 ０〜６０℃の範囲で測定した場合の作用温度が０〜６０
℃、至適温度が０〜３０℃、 （ｂ）至適ｐＨ 至適ｐＨが７〜１０、 （ｃ）阻害 １０ｍＭのフッ化カリウムに対する耐性を有する、 （ｄ）分子量 ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動法により測定し
た分子量が65,000±3,000 、 （ｅ）等電点 等電点電気泳動により測定した等電点が約４．８、 ３）細菌由来の前記１）または前記２）記載のカタラー
ゼ、 ４）細菌がバチルス（Bacillus）属細菌である前記３）
記載のカタラーゼ、 ５）細菌がバチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis
）である前記３）記載のカタラーゼ、 ６）細菌がバチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis
）ＩＡＭ１０２６株もしくはその変異株である前記
３）記載のカタラーゼ、 ７）バチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis ）ＩＡ
Ｍ１０２６株もしくはその変異株を培養してなる前記
１）または前記２）記載のカタラーゼを製造する方法を
提供するものである。
０℃におけるカタラーゼ活性の９５％以上の値を示す微
生物由来のカタラーゼ、 ２）下記の性質を有する前記１）記載のカタラーゼ、 （ａ）作用温度及び至適温度 ０〜６０℃の範囲で測定した場合の作用温度が０〜６０
℃、至適温度が０〜３０℃、 （ｂ）至適ｐＨ 至適ｐＨが７〜１０、 （ｃ）阻害 １０ｍＭのフッ化カリウムに対する耐性を有する、 （ｄ）分子量 ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動法により測定し
た分子量が65,000±3,000 、 （ｅ）等電点 等電点電気泳動により測定した等電点が約４．８、 ３）細菌由来の前記１）または前記２）記載のカタラー
ゼ、 ４）細菌がバチルス（Bacillus）属細菌である前記３）
記載のカタラーゼ、 ５）細菌がバチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis
）である前記３）記載のカタラーゼ、 ６）細菌がバチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis
）ＩＡＭ１０２６株もしくはその変異株である前記
３）記載のカタラーゼ、 ７）バチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis ）ＩＡ
Ｍ１０２６株もしくはその変異株を培養してなる前記
１）または前記２）記載のカタラーゼを製造する方法を
提供するものである。
【０００６】まず、カタラーゼを選抜する際に用いたカ
タラーゼ活性測定法について述べるが、本発明のカタラ
ーゼのカタラーゼ活性測定法はこれらに限られるもので
はない。
タラーゼ活性測定法について述べるが、本発明のカタラ
ーゼのカタラーゼ活性測定法はこれらに限られるもので
はない。
【０００７】（活性測定法−１）過酸化水素を基質と
し、カタラーゼを作用させることによる過酸化水素の分
解による過酸化水素濃度の減少を２４０ｎｍでの吸光度
によって測定するAebi等の方法に従う（H.Aebi et al,M
ethod Enzyme Analysis vol 2 p675(1974)）。すなわ
ち、２５℃恒温セル槽内のブランク側に５０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）３ｍｌを入れておく。サンプル側
には過酸化水素４６０ｐｐｍを含む５０ｍＭリン酸緩衝
液３ｍｌを入れ、検体酵素液を適度に希釈して調製した
調整酵素液１００μｌを添加し酵素反応を開始する。反
応は２４０ｎｍでの吸光度を記録し、過酸化水素の減少
速度を計算する。検体酵素液のカタラーゼ活性は以下の
計算式に従い計算する。なお、１Ｕは１分間に１μｍｏ
ｌの過酸化水素を分解する活性を示している。
し、カタラーゼを作用させることによる過酸化水素の分
解による過酸化水素濃度の減少を２４０ｎｍでの吸光度
によって測定するAebi等の方法に従う（H.Aebi et al,M
ethod Enzyme Analysis vol 2 p675(1974)）。すなわ
ち、２５℃恒温セル槽内のブランク側に５０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）３ｍｌを入れておく。サンプル側
には過酸化水素４６０ｐｐｍを含む５０ｍＭリン酸緩衝
液３ｍｌを入れ、検体酵素液を適度に希釈して調製した
調整酵素液１００μｌを添加し酵素反応を開始する。反
応は２４０ｎｍでの吸光度を記録し、過酸化水素の減少
速度を計算する。検体酵素液のカタラーゼ活性は以下の
計算式に従い計算する。なお、１Ｕは１分間に１μｍｏ
ｌの過酸化水素を分解する活性を示している。
【０００８】カタラーゼ活性（Ｕ／ｍｌ）＝〔△Ｅ÷４
３．６×１０００×（３０００＋１００）／１００〕×
ｎ＝△Ｅ×７１１×ｎ ここで、 △Ｅ：１分間の吸光度の減少 ４３．６：１ｍｏｌ／ｌ（＝１ｍｍｏｌ／ｍｌ）の過酸
化水素溶液の吸光度係数 １０００：１分間に１ｍｍｏｌの過酸化水素を分解する
カタラーゼ活性（Ｕ） （３０００＋１００）／１００：調整酵素液を基質溶液
に加えることによる酵素調整液の希釈倍率 ｎ：酵素液を適度に希釈して調整酵素液とする際の希釈
倍率
３．６×１０００×（３０００＋１００）／１００〕×
ｎ＝△Ｅ×７１１×ｎ ここで、 △Ｅ：１分間の吸光度の減少 ４３．６：１ｍｏｌ／ｌ（＝１ｍｍｏｌ／ｍｌ）の過酸
化水素溶液の吸光度係数 １０００：１分間に１ｍｍｏｌの過酸化水素を分解する
カタラーゼ活性（Ｕ） （３０００＋１００）／１００：調整酵素液を基質溶液
に加えることによる酵素調整液の希釈倍率 ｎ：酵素液を適度に希釈して調整酵素液とする際の希釈
倍率
【０００９】（活性測定法−２）酵素反応後の残存過酸
化水素をチオ硫酸ナトリウムで滴定する方法に従う（小
崎道雄監修「酵素利用ハンドブック」、地人書館昭和６
０年版、ｐ４０４〜４１０）。すなわち、市販の３０重
量％過酸化水素を５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）
で８００倍に希釈した基質溶液５ｍｌを容器にとり、３
０℃の恒温水槽に浸し、恒温とする。これに３０℃に保
温した検体酵素液１ｍｌを加え、正確に５分後に１Ｎ硫
酸２ｍｌを急激に加え酵素作用を止める。これに１０％
ヨウ化カリウム溶液１ｍｌと１％モリブデン酸アンモニ
ウム１滴を加え、遊離したヨウ素を澱粉指示薬を用い、
０．００５Ｎチオ硫酸ナトリウム溶液で滴定する。０．
００５Ｎチオ硫酸ナトリウム溶液１ｍｌは過酸化水素
２．５μｍｏｌに相当する。一方、１Ｎ硫酸を加えてか
ら酵素液を加えて同様に操作したものを盲検とし、盲検
の値から検体の値を差し引いてカタラーゼ作用によって
分解された過酸化水素の量を算出し、図１に示す作用標
準曲線から検体酵素液のカタラーゼ活性を求める。な
お、１Ｕは１分間に１μｍｏｌの過酸化水素を分解する
活性を示している。
化水素をチオ硫酸ナトリウムで滴定する方法に従う（小
崎道雄監修「酵素利用ハンドブック」、地人書館昭和６
０年版、ｐ４０４〜４１０）。すなわち、市販の３０重
量％過酸化水素を５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）
で８００倍に希釈した基質溶液５ｍｌを容器にとり、３
０℃の恒温水槽に浸し、恒温とする。これに３０℃に保
温した検体酵素液１ｍｌを加え、正確に５分後に１Ｎ硫
酸２ｍｌを急激に加え酵素作用を止める。これに１０％
ヨウ化カリウム溶液１ｍｌと１％モリブデン酸アンモニ
ウム１滴を加え、遊離したヨウ素を澱粉指示薬を用い、
０．００５Ｎチオ硫酸ナトリウム溶液で滴定する。０．
００５Ｎチオ硫酸ナトリウム溶液１ｍｌは過酸化水素
２．５μｍｏｌに相当する。一方、１Ｎ硫酸を加えてか
ら酵素液を加えて同様に操作したものを盲検とし、盲検
の値から検体の値を差し引いてカタラーゼ作用によって
分解された過酸化水素の量を算出し、図１に示す作用標
準曲線から検体酵素液のカタラーゼ活性を求める。な
お、１Ｕは１分間に１μｍｏｌの過酸化水素を分解する
活性を示している。
【００１０】（カタラーゼの性質）次に、本発明のカタ
ラーゼの性質を示す。
ラーゼの性質を示す。
【００１１】（１）作用温度及び至適温度 前記の活性測定法−２に基づき、ｐＨ７．０で０〜６０
℃の範囲の種々の温度におけるカタラーゼ活性を測定
し、３０℃における活性を１００として比較した。図２
に示すとおり、０〜６０℃の範囲において測定した場
合、本発明のカタラーゼは０〜６０℃で作用し、０〜３
０℃に至適温度を持つ。更に、０〜１０℃の低温域でも
３０℃におけるカタラーゼ活性の９５％以上の活性を示
した。
℃の範囲の種々の温度におけるカタラーゼ活性を測定
し、３０℃における活性を１００として比較した。図２
に示すとおり、０〜６０℃の範囲において測定した場
合、本発明のカタラーゼは０〜６０℃で作用し、０〜３
０℃に至適温度を持つ。更に、０〜１０℃の低温域でも
３０℃におけるカタラーゼ活性の９５％以上の活性を示
した。
【００１２】（２）熱安定性 前記の活性測定法−２に基づき、種々の温度においてｐ
Ｈ７．０で３０分間保持した後の残存カタラーゼ活性
を、３０℃の場合を１００として求めた。図３に示した
とおり、本発明のカタラーゼは５０℃までは安定である
が、６０℃での残存活性は３４％であった。
Ｈ７．０で３０分間保持した後の残存カタラーゼ活性
を、３０℃の場合を１００として求めた。図３に示した
とおり、本発明のカタラーゼは５０℃までは安定である
が、６０℃での残存活性は３４％であった。
【００１３】（３）作用ｐＨ及び至適ｐＨ 前記の活性測定法−２に基づき、３０℃で種々のｐＨに
おけるカタラーゼ活性を測定し、ｐＨ７．０における活
性を１００として比較した。図４に示すとおり、ｐＨ４
〜１２の範囲で活性測定した場合、本発明のカタラーゼ
はｐＨ４〜１２で作用し、ｐＨ７〜１０に至適ｐＨを持
つ。
おけるカタラーゼ活性を測定し、ｐＨ７．０における活
性を１００として比較した。図４に示すとおり、ｐＨ４
〜１２の範囲で活性測定した場合、本発明のカタラーゼ
はｐＨ４〜１２で作用し、ｐＨ７〜１０に至適ｐＨを持
つ。
【００１４】（４）ｐＨ安定性 前記の活性測定法−２に基づき、３０℃において種々の
ｐＨ条件下で３０分間保持した後の残存活性を、ｐＨ
７．０の場合を１００として求めた。図５に示すとお
り、本発明のカタラーゼは、ｐＨ６〜１０で安定であ
る。
ｐＨ条件下で３０分間保持した後の残存活性を、ｐＨ
７．０の場合を１００として求めた。図５に示すとお
り、本発明のカタラーゼは、ｐＨ６〜１０で安定であ
る。
【００１５】（５）フッ化物イオン耐性 前記の活性測定法−１に基づき、フッ化カリウム１０ｍ
Ｍを含む５０ｍＭリン酸緩衝液に調整酵素液を添加して
活性を非存在下の活性を１００として求めた。本発明の
カタラーゼはフッ化カリウム１０ｍＭ存在下でも９６％
の活性を示し、１０ｍＭフッ化カリウムに対する耐性を
有する。
Ｍを含む５０ｍＭリン酸緩衝液に調整酵素液を添加して
活性を非存在下の活性を１００として求めた。本発明の
カタラーゼはフッ化カリウム１０ｍＭ存在下でも９６％
の活性を示し、１０ｍＭフッ化カリウムに対する耐性を
有する。
【００１６】（６）分子量 ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により測定
した結果、本発明のカタラーゼの分子量は６５，０００
±３，０００であった。なお分子量マーカーとしては、
Ｂｉｏ Ｒａｄ社のプレステインドＳＤＳ−ポリアクリ
ルアミド電気泳動用スタンダードを用いた。その構成
は、ウサギ筋肉フォスフォリラーゼＢ（分子量１０６，
０００）、ウシ血清アルブミン（分子量８０，００
０）、鶏卵白オボアルブミン（４９，５００）、カルボ
ニックアンヒドラ−ゼ（分子量３２，５００）、大豆ト
リプシンインヒビター（分子量２７，５００）、鶏卵白
リゾチーム（分子量１８，５００）である。
した結果、本発明のカタラーゼの分子量は６５，０００
±３，０００であった。なお分子量マーカーとしては、
Ｂｉｏ Ｒａｄ社のプレステインドＳＤＳ−ポリアクリ
ルアミド電気泳動用スタンダードを用いた。その構成
は、ウサギ筋肉フォスフォリラーゼＢ（分子量１０６，
０００）、ウシ血清アルブミン（分子量８０，００
０）、鶏卵白オボアルブミン（４９，５００）、カルボ
ニックアンヒドラ−ゼ（分子量３２，５００）、大豆ト
リプシンインヒビター（分子量２７，５００）、鶏卵白
リゾチーム（分子量１８，５００）である。
【００１７】（７）等電点 等電点電気泳動により測定した結果、本発明のカタラー
ゼの等電点は約４．８である。
ゼの等電点は約４．８である。
【００１８】（カタラーゼ生産菌）本発明のカタラーゼ
は微生物により生産される。微生物としては、バチルス
（Bacillus）属、サーマス（Thermus ）属、ミクロコッ
カス（Micrococcus ）属等の細菌、ハンセヌラ（Hansen
nula）属等の酵母、アスペルギルス（Aspergillus）属
等の糸状菌などがあげられるが、その中でも細菌、特に
バチルス（Bacillus）属細菌が好ましい。より好ましく
はバチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis ）が、更
により好ましくはバチルス・ズブチリス（Bacillus sub
tilis ）ＩＡＭ１０２６株があげられる。
は微生物により生産される。微生物としては、バチルス
（Bacillus）属、サーマス（Thermus ）属、ミクロコッ
カス（Micrococcus ）属等の細菌、ハンセヌラ（Hansen
nula）属等の酵母、アスペルギルス（Aspergillus）属
等の糸状菌などがあげられるが、その中でも細菌、特に
バチルス（Bacillus）属細菌が好ましい。より好ましく
はバチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis ）が、更
により好ましくはバチルス・ズブチリス（Bacillus sub
tilis ）ＩＡＭ１０２６株があげられる。
【００１９】バチルス・ズブチリス（Bacillus subtili
s ）ＩＡＭ１０２６株は東京大学応用微生物研究所（現
分子細胞生物学研究所）より譲渡された菌株であり、一
般に入手可能であり、またその菌学的性質は広く知られ
ており安全性も高い。
s ）ＩＡＭ１０２６株は東京大学応用微生物研究所（現
分子細胞生物学研究所）より譲渡された菌株であり、一
般に入手可能であり、またその菌学的性質は広く知られ
ており安全性も高い。
【００２０】また、上記菌株を原菌株として自然または
誘発突然変異により、上記菌株が生産する前記の性質を
有するカタラーゼを生産する変異株を得ることができ、
本発明によるカタラーゼの生産菌として用いることがで
きる。これらの変異株の調製法としては、例えば慣用の
方法として、原菌株を人工の変異処理を施さず、あるい
は紫外線照射処理またはＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ
−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）等の薬剤による人工的
突然変異処理を施して、希望する変異のかかった株をそ
の変化した性質を利用して選抜する方法があげられる。
選抜する方法としては、例えばカタラーゼ生産性の向上
したものを希望する場合、過酸化水素を含む培地で良く
生育してくる株を釣るという方法がある。
誘発突然変異により、上記菌株が生産する前記の性質を
有するカタラーゼを生産する変異株を得ることができ、
本発明によるカタラーゼの生産菌として用いることがで
きる。これらの変異株の調製法としては、例えば慣用の
方法として、原菌株を人工の変異処理を施さず、あるい
は紫外線照射処理またはＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ
−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）等の薬剤による人工的
突然変異処理を施して、希望する変異のかかった株をそ
の変化した性質を利用して選抜する方法があげられる。
選抜する方法としては、例えばカタラーゼ生産性の向上
したものを希望する場合、過酸化水素を含む培地で良く
生育してくる株を釣るという方法がある。
【００２１】（製造方法）上記カタラーゼ生産菌は菌株
が増殖できる条件下で常法により培養される。培地成分
としては菌株が利用し得るものであれば良く、例えば炭
素源としてはグルコース、水飴、可溶性澱粉などが望ま
しい。また窒素源としては、例えば、アンモニウム塩
類、硝酸塩類、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コー
ンスティープリカー、大豆粉などが利用される。さらに
ミネラル類としては、例えば、リン酸塩類、マグネシウ
ム塩類、カリウム塩類、カルシウム塩類、コバルト塩
類、亜鉛塩類、鉄塩類、硼酸塩類、モリブデン塩類、銅
塩類等を使用することが出来る。また必要に応じて、過
酸化水素を２０〜１，０００ｐｐｍ、好ましくは５０〜
２００ｐｐｍ添加しても良い。
が増殖できる条件下で常法により培養される。培地成分
としては菌株が利用し得るものであれば良く、例えば炭
素源としてはグルコース、水飴、可溶性澱粉などが望ま
しい。また窒素源としては、例えば、アンモニウム塩
類、硝酸塩類、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コー
ンスティープリカー、大豆粉などが利用される。さらに
ミネラル類としては、例えば、リン酸塩類、マグネシウ
ム塩類、カリウム塩類、カルシウム塩類、コバルト塩
類、亜鉛塩類、鉄塩類、硼酸塩類、モリブデン塩類、銅
塩類等を使用することが出来る。また必要に応じて、過
酸化水素を２０〜１，０００ｐｐｍ、好ましくは５０〜
２００ｐｐｍ添加しても良い。
【００２２】培養温度は該生産菌が増殖できる温度であ
れば良く、通常２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５℃
である。培養ｐＨについても該生産菌が増殖できるｐＨ
であれば良く、通常ｐＨ５〜９、好ましくはｐＨ６〜８
である。
れば良く、通常２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５℃
である。培養ｐＨについても該生産菌が増殖できるｐＨ
であれば良く、通常ｐＨ５〜９、好ましくはｐＨ６〜８
である。
【００２３】（分離精製法）培養終了後培養液からカタ
ラーゼを採取するには、一般の酵素採取法を用いること
ができる。すなわち、培養液から遠心分離または濾過に
より菌体を集め、超音波、高圧ホモジナイザー、フレン
チプレスあるいは機械的磨砕による破砕、またはシクロ
ヘキサン、トルエン、酢酸エチルなどによる菌体処理、
またはリゾチームによる溶菌を行うことによって、カタ
ラーゼを菌体外に排出、可溶化させ粗酵素標品が得られ
る。これをさらに精製する場合には、ケイソウ土濾過等
により残菌体を除去し、イオン交換クロマトグラフィ
ー、ゲル濾過、限外濾過膜による濾過・濃縮あるいは硫
安塩析、有機溶媒沈殿など通常の酵素精製技術から適宜
選択した精製法を単独で、または組合わせて実施すれば
よい。
ラーゼを採取するには、一般の酵素採取法を用いること
ができる。すなわち、培養液から遠心分離または濾過に
より菌体を集め、超音波、高圧ホモジナイザー、フレン
チプレスあるいは機械的磨砕による破砕、またはシクロ
ヘキサン、トルエン、酢酸エチルなどによる菌体処理、
またはリゾチームによる溶菌を行うことによって、カタ
ラーゼを菌体外に排出、可溶化させ粗酵素標品が得られ
る。これをさらに精製する場合には、ケイソウ土濾過等
により残菌体を除去し、イオン交換クロマトグラフィ
ー、ゲル濾過、限外濾過膜による濾過・濃縮あるいは硫
安塩析、有機溶媒沈殿など通常の酵素精製技術から適宜
選択した精製法を単独で、または組合わせて実施すれば
よい。
【００２４】
【実施例】次に、実施例により本発明をさらに具体的に
説明する。なお本発明は実施例に限定されるものではな
い。
説明する。なお本発明は実施例に限定されるものではな
い。
【００２５】実施例１：カタラーゼの調製 ５リットルジャーファーメンターに下記組成培地２リッ
トルを入れ、１２１℃で、２０分間滅菌した後、あらか
じめ２本の２４ｍｍφ試験管中でＳｃｈｅａｆｆｅｒの
寒天斜面培地に生育させたバチルス・ズブチリス（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＩＡＭ１０２６株の
菌体全量を該ジャーファーメンターに植菌し、ｐＨ７．
０、３０℃、通気量１リットル／ｍｉｎ、および１，０
００ｒｐｍの条件下で４０時間培養した。なおグルコ−
スおよびアンモニア水を適宜添加し、過酸化水素を培養
途中に７０ｐｐｍ添加した。 培地組成 グルコ−ス ３．０ ％ ペプトン ０．５ ％ 酵母エキス ０．２ ％ リン酸二水素ナトリウム・２水和物 ０．５７％ リン酸水素二カリウム ０．６１％ 硫酸アンモニウム ０．３ ％ 硫酸マグネシウム・７水和物 ０．３ ％ Ｆｅ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｃｕ、Ｃｏ、Ｍｏ、Ｂを含む無機塩
類が各々０．３〜２０ｐｐｍ
トルを入れ、１２１℃で、２０分間滅菌した後、あらか
じめ２本の２４ｍｍφ試験管中でＳｃｈｅａｆｆｅｒの
寒天斜面培地に生育させたバチルス・ズブチリス（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＩＡＭ１０２６株の
菌体全量を該ジャーファーメンターに植菌し、ｐＨ７．
０、３０℃、通気量１リットル／ｍｉｎ、および１，０
００ｒｐｍの条件下で４０時間培養した。なおグルコ−
スおよびアンモニア水を適宜添加し、過酸化水素を培養
途中に７０ｐｐｍ添加した。 培地組成 グルコ−ス ３．０ ％ ペプトン ０．５ ％ 酵母エキス ０．２ ％ リン酸二水素ナトリウム・２水和物 ０．５７％ リン酸水素二カリウム ０．６１％ 硫酸アンモニウム ０．３ ％ 硫酸マグネシウム・７水和物 ０．３ ％ Ｆｅ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｃｕ、Ｃｏ、Ｍｏ、Ｂを含む無機塩
類が各々０．３〜２０ｐｐｍ
【００２６】培養終了後、遠心分離により菌体を回収
し、２０％湿菌体量／全重量になるように５０ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁し、リゾチ−ムを３００
ｐｐｍとなるように添加し、３０℃で、１時間溶菌させ
た。次にケイソウ土を用いた濾過処理の後、濾液を更に
除菌膜で除菌し、次いで分画分子量６，０００の限外濾
過膜で濃縮した。この結果、精製収率８６％で１５，０
００Ｕ／ｍｇ蛋白の酵素液（１２０，０００Ｕ／ｍｌ）
を２５０ｍｌ得た。
し、２０％湿菌体量／全重量になるように５０ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁し、リゾチ−ムを３００
ｐｐｍとなるように添加し、３０℃で、１時間溶菌させ
た。次にケイソウ土を用いた濾過処理の後、濾液を更に
除菌膜で除菌し、次いで分画分子量６，０００の限外濾
過膜で濃縮した。この結果、精製収率８６％で１５，０
００Ｕ／ｍｇ蛋白の酵素液（１２０，０００Ｕ／ｍｌ）
を２５０ｍｌ得た。
【００２７】次に硫安塩析により硫安濃度３５〜５０％
飽和での画分を取得した後、ＤＥＡＥセルロファインＡ
−５００カラム（生化学工業（株）製）を使用し、５０
ｍＭリン酸緩衝液を用い、０〜０．５Ｍの塩化ナトリウ
ムによるグラディエントをかけて溶出し精製した。更に
セルロースチューブ３０（和光純薬工業（株）製）を用
い、５０ｍＭリン酸緩衝液で透析、脱塩した。最終的に
５７，０００Ｕ／ｍｇ蛋白の酵素液（７４０，０００Ｕ
／ｍｌ）を３４ｍｌ得た。なお蛋白質の定量はＢｒａｄ
ｆｏｒｄ等の色素を用いる方法（M.Bradford、Anal.Bio
chem. 、vol.72，p248〜254(1976) ）により、牛アルブ
ミンを標準蛋白質として行った。カタラーゼ活性は前述
の活性測定法−１により測定した。
飽和での画分を取得した後、ＤＥＡＥセルロファインＡ
−５００カラム（生化学工業（株）製）を使用し、５０
ｍＭリン酸緩衝液を用い、０〜０．５Ｍの塩化ナトリウ
ムによるグラディエントをかけて溶出し精製した。更に
セルロースチューブ３０（和光純薬工業（株）製）を用
い、５０ｍＭリン酸緩衝液で透析、脱塩した。最終的に
５７，０００Ｕ／ｍｇ蛋白の酵素液（７４０，０００Ｕ
／ｍｌ）を３４ｍｌ得た。なお蛋白質の定量はＢｒａｄ
ｆｏｒｄ等の色素を用いる方法（M.Bradford、Anal.Bio
chem. 、vol.72，p248〜254(1976) ）により、牛アルブ
ミンを標準蛋白質として行った。カタラーゼ活性は前述
の活性測定法−１により測定した。
【００２８】比較例１ 他のカタラーゼ生産菌であるバチルス・ズブチリス（Ba
cillus subtilis ）１６８株を実施例１で示したのと同
じ条件で培養し、限外濾過膜による濃縮によりカタラー
ゼ液を調製したところ、得られたカタラーゼ液２５０ｍ
ｌの酵素濃度は１９，０００Ｕ／ｍｌだった。
cillus subtilis ）１６８株を実施例１で示したのと同
じ条件で培養し、限外濾過膜による濃縮によりカタラー
ゼ液を調製したところ、得られたカタラーゼ液２５０ｍ
ｌの酵素濃度は１９，０００Ｕ／ｍｌだった。
【００２９】実施例２：至適温度の測定 前述の活性測定法−２に従って測定した。すなわち、
０、１０、２０、３０、４０、５０および６０℃のいず
れかの温度に保持した基質溶液５ｍｌに実施例１で得ら
れた酵素液を希釈したもの（５Ｕ／ｍｌ）１ｍｌを添加
し、５分後に１Ｎ硫酸２ｍｌを添加し反応を停止させ
た。ブランクは酵素液添加直前に１Ｎ硫酸２ｍｌを添加
し、５分間各温度で保持したものを用いた。反応終了液
の残存過酸化水素を０．００５Ｎチオ硫酸ナトリウム溶
液で滴定し、３０℃で反応させた場合のカタラーゼ活性
を１００とし各温度での相対活性を求めた。図２に示す
とおり、本発明のカタラーゼは低温領域でも作用し、０
℃及び１０℃でも３０℃の場合の９５％以上（約１００
％）のカタラーゼ活性を示した。
０、１０、２０、３０、４０、５０および６０℃のいず
れかの温度に保持した基質溶液５ｍｌに実施例１で得ら
れた酵素液を希釈したもの（５Ｕ／ｍｌ）１ｍｌを添加
し、５分後に１Ｎ硫酸２ｍｌを添加し反応を停止させ
た。ブランクは酵素液添加直前に１Ｎ硫酸２ｍｌを添加
し、５分間各温度で保持したものを用いた。反応終了液
の残存過酸化水素を０．００５Ｎチオ硫酸ナトリウム溶
液で滴定し、３０℃で反応させた場合のカタラーゼ活性
を１００とし各温度での相対活性を求めた。図２に示す
とおり、本発明のカタラーゼは低温領域でも作用し、０
℃及び１０℃でも３０℃の場合の９５％以上（約１００
％）のカタラーゼ活性を示した。
【００３０】また、実施例１の限外濾過膜による濃縮に
より得た本発明のカタラーゼと、比較例１のバチルス・
ズブチリス（Bacillus subtilis ）１６８株を培養し
て、同様に限外濾過膜による濃縮を施して得たカタラー
ゼと比較した結果を表１に示す。
より得た本発明のカタラーゼと、比較例１のバチルス・
ズブチリス（Bacillus subtilis ）１６８株を培養し
て、同様に限外濾過膜による濃縮を施して得たカタラー
ゼと比較した結果を表１に示す。
【００３１】
【表１】
【００３２】表１に示す通り、限外濾過膜による濃縮に
より得た本発明のカタラーゼは、低温領域において、バ
チルス・ズブチリス（Bacillus subtilis ）１６８株を
培養して、同様に限外濾過膜により濃縮して得たカタラ
ーゼより高いカタラーゼ活性を示す。
より得た本発明のカタラーゼは、低温領域において、バ
チルス・ズブチリス（Bacillus subtilis ）１６８株を
培養して、同様に限外濾過膜により濃縮して得たカタラ
ーゼより高いカタラーゼ活性を示す。
【００３３】実施例３：熱安定性の測定 実施例１で得られた酵素液を希釈したもの（２００Ｕ／
ｍｌ）を種々の温度（２０、３０、４０、５０、６０
℃）のいずれかにおいてｐＨ７．０で３０分間保持した
後、前記の活性測定法−２に基づき、残存活性を測定し
た。３０℃の場合を１００として計算した相対値を図３
に示す。本酵素は５０℃までは安定であるが、６０℃で
の残存活性は３４％であった。
ｍｌ）を種々の温度（２０、３０、４０、５０、６０
℃）のいずれかにおいてｐＨ７．０で３０分間保持した
後、前記の活性測定法−２に基づき、残存活性を測定し
た。３０℃の場合を１００として計算した相対値を図３
に示す。本酵素は５０℃までは安定であるが、６０℃で
の残存活性は３４％であった。
【００３４】実施例４：至適ｐＨの測定 前述の活性測定法−２に従って測定した。すなわち、ｐ
Ｈ４、５、６、７、８、９、１０、１１、１１．５、１
２のいずれかの緩衝液を用いて作成し、３０℃に保持し
た基質溶液５ｍｌに実施例１で得られた酵素液を希釈し
たもの（５Ｕ／ｍｌ）１ｍｌを添加し、５分後に１Ｎ硫
酸２ｍｌを添加し反応を停止させた。ブランクは酵素液
添加直前に１Ｎ硫酸２ｍｌを添加し、３０℃で５分間保
持したものを用いた。反応終了液の残存過酸化水素を
０．００５Ｎチオ硫酸ナトリウム溶液で滴定し、ｐＨ
７．０で反応させた場合のカタラーゼ活性を１００とし
て各ｐＨでの相対活性を求めた。図４に示すとおり、本
発明のカタラーゼは至適ｐＨがｐＨ７〜１０であり、ｐ
Ｈ７〜１０の範囲でｐＨ７の場合の９５％以上の活性を
示す。なお用いた緩衝液は、ｐＨ４〜５（５０ｍＭ酢酸
緩衝液）、ｐＨ５〜９（５０ｍＭリン酸緩衝液）、ｐＨ
９〜１２（５０ｍＭグリシン緩衝液）である。
Ｈ４、５、６、７、８、９、１０、１１、１１．５、１
２のいずれかの緩衝液を用いて作成し、３０℃に保持し
た基質溶液５ｍｌに実施例１で得られた酵素液を希釈し
たもの（５Ｕ／ｍｌ）１ｍｌを添加し、５分後に１Ｎ硫
酸２ｍｌを添加し反応を停止させた。ブランクは酵素液
添加直前に１Ｎ硫酸２ｍｌを添加し、３０℃で５分間保
持したものを用いた。反応終了液の残存過酸化水素を
０．００５Ｎチオ硫酸ナトリウム溶液で滴定し、ｐＨ
７．０で反応させた場合のカタラーゼ活性を１００とし
て各ｐＨでの相対活性を求めた。図４に示すとおり、本
発明のカタラーゼは至適ｐＨがｐＨ７〜１０であり、ｐ
Ｈ７〜１０の範囲でｐＨ７の場合の９５％以上の活性を
示す。なお用いた緩衝液は、ｐＨ４〜５（５０ｍＭ酢酸
緩衝液）、ｐＨ５〜９（５０ｍＭリン酸緩衝液）、ｐＨ
９〜１２（５０ｍＭグリシン緩衝液）である。
【００３５】実施例５：ｐＨ安定性の測定 実施例１で得られた酵素液を希釈したもの（２００Ｕ／
ｍｌ）を種々のｐＨ（４、５、６、７、８、９、１０、
１１．５、１２）のいずれかにおいて３０℃で３０分間
保持した後、前記の活性測定法−２基づき残存活性を測
定した。ｐＨ７の場合を１００として計算した相対値を
図５に示す。本酵素はｐＨ６〜１０で安定である。
ｍｌ）を種々のｐＨ（４、５、６、７、８、９、１０、
１１．５、１２）のいずれかにおいて３０℃で３０分間
保持した後、前記の活性測定法−２基づき残存活性を測
定した。ｐＨ７の場合を１００として計算した相対値を
図５に示す。本酵素はｐＨ６〜１０で安定である。
【００３６】実施例６：フッ化物イオン耐性の測定 前述の活性測定法−１に従って測定した。すなわちフッ
化カリウム１０ｍＭを含む５０ｍＭリン酸緩衝液を用い
て調製した過酸化水素基質溶液３ｍｌに実施例１で得ら
れた酵素液を希釈したもの（４０Ｕ／ｍｌ）１００μｌ
を添加し、２４０ｎｍにおける吸光度の１分間での減少
を測定し、フッ化カリウム非存在下の場合と比較した。
本発明のカタラーゼはフッ化カリウムが１０ｍＭ存在下
でも非存在下の場合の９６％の活性を示し、１０ｍＭの
フッ化カリウムに対する耐性を有する。
化カリウム１０ｍＭを含む５０ｍＭリン酸緩衝液を用い
て調製した過酸化水素基質溶液３ｍｌに実施例１で得ら
れた酵素液を希釈したもの（４０Ｕ／ｍｌ）１００μｌ
を添加し、２４０ｎｍにおける吸光度の１分間での減少
を測定し、フッ化カリウム非存在下の場合と比較した。
本発明のカタラーゼはフッ化カリウムが１０ｍＭ存在下
でも非存在下の場合の９６％の活性を示し、１０ｍＭの
フッ化カリウムに対する耐性を有する。
【００３７】実施例７：等電点の測定 実施例１で得られた酵素液（７４０，０００Ｕ／ｍｌ）
をサンプルとし、Ｐｈａｓｔ ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｈａｒ
ｍａｃｉａ社製）を用いて、本発明のカタラーゼの等電
点を測定した。ゲルはｐＨ４〜６．５のグラジエントゲ
ルを用い、酵素量は約１ユニット、温度は２４℃で行っ
た。ゲル中のカタラーゼは活性染色法（Ｄ．Ａ．Ｃｌａ
ｒｅ、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ、140 ：532-537(1984) ）により検出した。すなわ
ち、ゲルを５０μｇ／ｍｌホースラディッシュ・ペルオ
キシダーゼ含有５０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７）に
４５分間浸し、過酸化水素を５ｍＭになるように加えて
１０分間浸し、水で２度洗った後に、０．５ｍｇ／ｍｌ
ジアミノベンジジン含有５０ｍＭリン酸バッファー（ｐ
Ｈ）に浸し、カタラーゼ由来のバンドが出現するまで反
応させた。さらに５％グリセリン溶液に浸し、風乾し
た。等電点マーカーはクーマシー（Ｃｏｏｍａｓｓｉ
ｅ）染色をした。その結果、本発明のカタラーゼの等電
点は約４．８だった。
をサンプルとし、Ｐｈａｓｔ ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｈａｒ
ｍａｃｉａ社製）を用いて、本発明のカタラーゼの等電
点を測定した。ゲルはｐＨ４〜６．５のグラジエントゲ
ルを用い、酵素量は約１ユニット、温度は２４℃で行っ
た。ゲル中のカタラーゼは活性染色法（Ｄ．Ａ．Ｃｌａ
ｒｅ、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ、140 ：532-537(1984) ）により検出した。すなわ
ち、ゲルを５０μｇ／ｍｌホースラディッシュ・ペルオ
キシダーゼ含有５０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７）に
４５分間浸し、過酸化水素を５ｍＭになるように加えて
１０分間浸し、水で２度洗った後に、０．５ｍｇ／ｍｌ
ジアミノベンジジン含有５０ｍＭリン酸バッファー（ｐ
Ｈ）に浸し、カタラーゼ由来のバンドが出現するまで反
応させた。さらに５％グリセリン溶液に浸し、風乾し
た。等電点マーカーはクーマシー（Ｃｏｏｍａｓｓｉ
ｅ）染色をした。その結果、本発明のカタラーゼの等電
点は約４．８だった。
【００３８】
【発明の効果】本発明のカタラーゼは低温領域でも高い
カタラーゼ活性を有するため、過酸化水素の低温での除
去が好ましい処理に有効である。また、酵素を効率よく
作用させるための温度上昇過程を省略できるので、特に
冬季や寒冷地の水処理に有効である。さらにアルカリ領
域でも作用しフッ化物イオン耐性を有しているので、例
えば半導体工業の過酸化水素を含む排水の処理に有効で
あり、また繊維漂白後や数の子漂白後の残存過酸化水素
の分解にも利用する事ができる。
カタラーゼ活性を有するため、過酸化水素の低温での除
去が好ましい処理に有効である。また、酵素を効率よく
作用させるための温度上昇過程を省略できるので、特に
冬季や寒冷地の水処理に有効である。さらにアルカリ領
域でも作用しフッ化物イオン耐性を有しているので、例
えば半導体工業の過酸化水素を含む排水の処理に有効で
あり、また繊維漂白後や数の子漂白後の残存過酸化水素
の分解にも利用する事ができる。
【００３９】更にまた、バチルス・ズブチリス（Bacill
us subtilis ）ＩＡＭ１０２６株を培養することによ
り、その菌体から本発明のカタラーゼを効率よく取得で
きる。
us subtilis ）ＩＡＭ１０２６株を培養することによ
り、その菌体から本発明のカタラーゼを効率よく取得で
きる。
【図１】カタラーゼ活性測定の際に用いる作用標準曲線
を表わすグラフである。
を表わすグラフである。
【図２】本発明のカタラーゼの作用温度及び至適温度を
表わすグラフである。
表わすグラフである。
【図３】本発明のカタラーゼの熱安定性を表わすグラフ
である。
である。
【図４】本発明のカタラーゼの作用ｐＨ及び至適ｐＨを
表わすグラフである。
表わすグラフである。
【図５】本発明のカタラーゼのｐＨ安定性を表わすグラ
フである。
フである。
Claims (7)
- 【請求項１】 ｐＨ７において、０℃におけるカタラー
ゼ活性が３０℃におけるカタラーゼ活性の９５％以上の
値を示す微生物由来のカタラーゼ。 - 【請求項２】 下記の性質を有する請求項１記載のカタ
ラーゼ。 （１）作用温度及び至適温度 ０〜６０℃の範囲で測定した場合の作用温度が０〜６０
℃、至適温度が０〜３０℃。 （２）至適ｐＨ 至適ｐＨが７〜１０。 （３）阻害 １０ｍＭのフッ化カリウムに対する耐性を有する。 （４）分子量 ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動法により測定し
た分子量が65,000±3,000 。 （５）等電点 等電点電気泳動により測定した等電点が約４．８。 - 【請求項３】 細菌由来の請求項１または請求項２記載
のカタラーゼ。 - 【請求項４】 細菌がバチルス（Bacillus）属細菌であ
る請求項３記載のカタラーゼ。 - 【請求項５】 細菌がバチルス・ズブチリス（Bacillus
subtilis ）である請求項３記載のカタラーゼ。 - 【請求項６】 細菌がバチルス・ズブチリス（Bacillus
subtilis ）ＩＡＭ１０２６株もしくはその変異株であ
る請求項３記載のカタラーゼ。 - 【請求項７】 バチルス・ズブチリス（Bacillus subti
lis ）ＩＡＭ１０２６株もしくはその変異株を培養して
なる請求項１または請求項２記載のカタラーゼを製造す
る方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6086745A JPH07246092A (ja) | 1994-01-18 | 1994-04-25 | カタラーゼ及びその製造方法 |
| EP94119181A EP0663405A1 (en) | 1994-01-18 | 1994-12-05 | Catalase and production process thereof |
| US08/354,721 US5486467A (en) | 1994-01-18 | 1994-12-06 | Catalase from Bacillus subtilis IAM 1026 (Ferm BP-4844) |
| US08/517,545 US5622849A (en) | 1994-01-18 | 1995-08-21 | Catalase from bacillus and process for producing the same |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6-3698 | 1994-01-18 | ||
| JP369894 | 1994-01-18 | ||
| JP6086745A JPH07246092A (ja) | 1994-01-18 | 1994-04-25 | カタラーゼ及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07246092A true JPH07246092A (ja) | 1995-09-26 |
Family
ID=26337331
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6086745A Pending JPH07246092A (ja) | 1994-01-18 | 1994-04-25 | カタラーゼ及びその製造方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5486467A (ja) |
| EP (1) | EP0663405A1 (ja) |
| JP (1) | JPH07246092A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20040037009A (ko) * | 2002-10-25 | 2004-05-04 | (주) 피엘바이오 | 과산화수소수 분해 능력과 저항성이 이 뛰어난 신규미생물과 이들이 생산하는 카타라아제 |
| JP2009051853A (ja) * | 2008-10-17 | 2009-03-12 | Mitsubishi Tanabe Pharma Corp | 免疫グロブリン製剤 |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2791998B1 (fr) * | 1999-04-07 | 2001-06-08 | Agronomique Inst Nat Rech | Lactocoques modifies exprimant une catalase et leurs utilisations |
| US6879606B1 (en) | 1999-07-26 | 2005-04-12 | Laser Vision Technologies | Intracavity doubled laser |
| CA2543442A1 (en) * | 2003-11-05 | 2005-05-19 | Battelle Energy Alliance, Llc | High temperature and alkaline stable catalase |
| CN100422313C (zh) * | 2006-07-31 | 2008-10-01 | 江南大学 | 一种碱性过氧化氢酶高产菌及用该菌株发酵法生产碱性过氧化氢酶 |
| US8753513B2 (en) | 2010-11-09 | 2014-06-17 | International Business Machines Corporation | Ammonia-peroxide wastewater treatment system |
| CN114752576B (zh) * | 2022-04-06 | 2023-04-28 | 鲁东大学 | 过氧化氢酶突变体及其应用 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE220332C (ja) * | ||||
| US3123539A (en) * | 1964-03-03 | Process for recovering catalase from | ||
| DE2911192A1 (de) * | 1979-03-22 | 1980-10-02 | Boehringer Sohn Ingelheim | Neuartiges immobilisiertes glucoseoxidase-katalasepraeparat und seine verwendung zur enzymatischen glucoseoxidation |
| JPS55135588A (en) * | 1979-04-03 | 1980-10-22 | Mitsubishi Petrochem Co Ltd | Preparation of heat-resistant catalase |
| JP2508001B2 (ja) * | 1986-06-25 | 1996-06-19 | 三菱瓦斯化学株式会社 | 耐塩性カタラ−ゼおよび過酸化水素の分解法 |
| JPH01168281A (ja) * | 1986-12-11 | 1989-07-03 | Nippon Peroxide Co Ltd | カタラーゼの製造方法 |
| JPH0276579A (ja) * | 1988-09-08 | 1990-03-15 | Novo Ind As | 耐塩性カタラーゼ |
| JPH0616704B2 (ja) * | 1990-05-14 | 1994-03-09 | 栗田工業株式会社 | フッ化物イオンに耐性な細菌カタラーゼ及びそれを生産するミクロコッカスｓｐ．ｋｗｉ‐５菌株 |
| US5155041A (en) * | 1990-10-31 | 1992-10-13 | Korea Research Institute Of Chemical Technology | Culture of Bacillus subtilis |
| ATE167229T1 (de) * | 1991-03-27 | 1998-06-15 | Novo Nordisk As | Katalase, ihre herstellung und verwendung |
| JP3063800B2 (ja) * | 1991-12-07 | 2000-07-12 | 三菱瓦斯化学株式会社 | 耐熱性カタラーゼ |
-
1994
- 1994-04-25 JP JP6086745A patent/JPH07246092A/ja active Pending
- 1994-12-05 EP EP94119181A patent/EP0663405A1/en not_active Withdrawn
- 1994-12-06 US US08/354,721 patent/US5486467A/en not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-08-21 US US08/517,545 patent/US5622849A/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20040037009A (ko) * | 2002-10-25 | 2004-05-04 | (주) 피엘바이오 | 과산화수소수 분해 능력과 저항성이 이 뛰어난 신규미생물과 이들이 생산하는 카타라아제 |
| JP2009051853A (ja) * | 2008-10-17 | 2009-03-12 | Mitsubishi Tanabe Pharma Corp | 免疫グロブリン製剤 |
Also Published As
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| EP0663405A1 (en) | 1995-07-19 |
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