JPH07206702A - 歯石防止剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 （ａ）分子量分布が５００〜１，０００であ
ること、（ｂ）窒素／リンの分子数比が５．０以下であ
ること、（ｃ）アミノ酸残基の数が５〜１０であって、
グルタミン酸、セリン、アスパラギン酸及びイソロイシ
ンを主たる構成アミノ酸とすること、（ｄ）カルシウム
不溶化防止効果を有すること、（ｅ）エライザ(ELISA:E
nzyme linked immunosorbent assay) 抑制試験法により
測定した抗原性残存活性が１０^-5以下であること、及び
（ｆ）ｐＨ５．０以下の酸性溶液に溶解しても沈澱及び
混濁を生成しないこと、の理化学的性質を有するカゼイ
ンホスホオリゴペプチドを、少なくとも有効成分として
含有する歯石防止剤。 【効果】 口腔用製品として加工する場合、沈澱及び混
濁を生ぜず、長期間使用しても安全であり、優れた歯石
防止作用を有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、歯石防止剤に関するも
のである。詳しくは、本発明は、少なくとも特定の理化
学的性質を有するカゼインホスホオリゴペプチド混合物
（以下ＣＰＯＰと記載することがある）を有効成分とし
て含有する歯石防止剤、に関するものである。

【０００２】本明細書において百分率の表示は、特に断
りのない限り、重量によるものである。

【０００３】

【従来の技術】歯石は、唾液及び血清中の無機塩類が歯
の表面に沈着したものであり、歯肉辺縁上部に沈着した
ものは歯肉辺縁上歯石、歯肉辺縁下部に沈着したものは
歯肉辺縁下歯石と呼ばれている。歯石の形成は、先ず非
晶質のリン酸カルシウムが沈着し、次に微細なハイドロ
キシアパタイトへの転移、更にハイドロキシアパタイト
結晶の成長、の過程によるといわれている。

【０００４】歯石の化学的組成は、両歯石ともほぼ同じ
であり、リン酸カルシウム７５．９７％、炭酸カルシウ
ム３．１７％、リン酸マグネシウム３．７７％等の無機
成分、タンパク質８．３４％、脂肪２．７１％の有機成
分、水分及びその他６．０４％からなっている。歯石
は、歯肉炎、辺縁性歯周炎の原因の一つであり、これら
の疾患を悪化させる有力な因子となることが知られてい
る。

【０００５】そのため従来から、歯石を防止する薬剤に
ついて種々の研究がなされており、例えば、ピロリン酸
ナトリウム及びトリポリリン酸ナトリウム（日本歯周病
学会誌、第３０巻、第３号、第８６０〜８６７ページ、
１９８８年）、カゼインホスホペプチド（特開平４−７
７４１５号公報）、ホスホペプチド（特表昭６３−５０
３４５９号公報）等が開示されている。

【０００６】本発明者らは、カゼインホスホペプチド
（以下ＣＰＰと記載することがある）とは全く異なるＣ
ＰＯＰ、それの製造法、及びそれの健康食品への利用に
ついて既に特許出願（特開平５−１７６７１４号公報）
した。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、ＣＰＯ
Ｐ、それの製造法、及びそれの健康食品への利用につい
て特許出願後、その他の用途について鋭意研究を行った
結果、ＣＰＯＰが、ＣＰＰよりも格段に優れた歯石防止
作用を有することを見出し、本発明を完成した。

【０００８】本発明の目的は、安全かつ効果的な歯石防
止剤を提供することである。

【０００９】本発明の他の目的は、口腔用製品の加工及
び製品の保存において沈澱、混濁等を生じない歯石防止
剤を提供することである。

【００１０】

【課題を解決するための手段】前記課題を解決する本発
明は、次の（ａ）〜（ｆ）の理化学的性質を有するカゼ
インホスホオリゴペプチド混合物を、少なくとも有効成
分として含有する歯石防止剤であり、（ａ）分子量分布
が５００〜１，０００であること、（ｂ）窒素／リンの
分子数比が５．０以下であること、（ｃ）アミノ酸残基
の数が５〜１０であって、グルタミン酸、セリン、アス
パラギン酸及びイソロイシンを主たる構成アミノ酸とす
ること、（ｄ）カルシウム不溶化防止効果を有するこ
と、（ｅ）エライザ(ELISA:Enzyme linked immunosorbe
nt assay) 抑制試験法により測定した抗原性残存活性が
１０^-5以下であること、（ｆ）ｐＨ５．０以下の酸性溶
液に溶解しても沈澱及び混濁を生成しないこと、有効成
分が、少なくとも０．０１％（重量）の割合で含有され
ていることを望ましい態様としてもいる。

【００１１】本発明に使用するＣＰＯＰは、特開平５−
１７６７１４号公報記載の方法により次のようにして製
造することができる。

【００１２】使用する出発原料は、各種酸カゼイン、カ
ゼインナトリウム、カゼインカルシウム等の市販品であ
り、牛乳、脱脂乳等も使用することができる。牛乳、脱
脂乳等はそのまま、原料カゼインは５〜１８％、望まし
くは１０〜１５％、の濃度で水に溶解し、蛋白分解酵素
により蛋白質を加水分解する。

【００１３】酵素は、パンクレアチンとエキソペプチダ
ーゼ、パンクレアチンと他のプロテアーゼ及びエキソペ
プチダーゼとを組合わせて使用する。例えば、トリプシ
ン、キモトリプシン、ズブチリシン、エラスターゼ、プ
ロリン特異性プロテアーゼ、スタフィロコッカス・プロ
テアーゼ、パパイン、ペプシン、サーモリシン等が使用
できる。又エキソペプチダーゼとしては、カルボキシペ
プチダーゼ、アスペルギルス・プロテアーゼ、ストレプ
トコッカス・プロテアーゼ、リゾープス・プロテアー
ゼ、乳酸菌プロテアーゼ等が使用できる。

【００１４】酵素量は、使用する蛋白分解酵素の活性単
位の総和が蛋白質１ｇ当り１，２００〜６，０００単位
の範囲、望ましくは１，５００〜５，０００単位の範
囲、である。酵素処理は、ｐＨ５．０〜８．０、望まし
くは６．５〜７．５、に調整し、４０〜５５℃、望まし
くは４５〜５２℃、の温度で、１２時間、望ましくは１
６〜１８時間、保持する。酵素処理は、過度の分解を避
けるのが望ましく、停止は加熱により行う。

【００１５】加水分解物から、分子量５００〜１，００
０の画分を分別する方法としては、分子量分画が望まし
い。分子量分画には限外濾過、ゲル濾過等の方法が採用
できるが、ゲル濾過による方法が特に推奨される。尚、
分子量分画は、必要に応じ反復して行われる。ゲル瀘過
は、排除限界分子量１０，０００以下、望ましくは１，
０００以下、のゲル瀘過剤を使用するが、望ましくは芳
香族アミノ酸に吸着性を有する疎水性側鎖（例えば、カ
ルボキシル基、ブチル基、フェニル基など）又は疎水的
部位を有するゲル瀘過剤［例えば、オクチルセファロー
スＣＬ−４Ｂ、フェニルセファロースＣＬ−４Ｂ、ブチ
ルセファロース４Ｂ（いずれもファルマシア社製）］を
使用する。溶出液は、水又は芳香族アミノ酸に吸着性を
高めるために２〜１５％濃度のエタノール溶液を用い、
カラム高１０〜３０ｃｍのカラムで分画する。

【００１６】得られた分画からＣＰＯＰを次のようにし
て精製する。分画を陰イオン交換体、望ましくは弱塩基
性陰イオン交換体［例えば、ＤＥＡＥセファデックスＡ
−２５（ファルマシア社製）等］、に吸着させ、１．０
〜５．０％、望ましくは２．０〜４．０％、の塩溶液
（例えば、食塩水溶液）を通液し、ＣＰＯＰを溶出させ
る。得られた溶出液を公知の方法で脱塩し、濃縮し、液
状のＣＰＯＰを得る。濃縮後、公知の方法で乾燥し、粉
末状のＣＰＯＰを得ることもできる。

【００１７】得られたＣＰＯＰを特開平５−１７６７１
４号公報記載の試験例と同一の方法により測定した理化
学的性状は、アミノ酸残基数が５〜１０であり、主たる
構成アミノ酸はグルタミン酸、セリン、アスパラギン酸
及びイソロイシンであり、分子量分布が５００〜１，０
００、窒素／リンの分子数比が５．０以下あり、エライ
ザ試験法で測定した抗原残存活性が１０^-5以下であり、
カルシウム不溶化防止効果を有し、従来のＣＰＰの約２
倍のリンを含有している。

【００１８】以上のようにして製造されたＣＰＯＰは、
牛乳タンパク質の加水分解物であり、通常体内で行われ
ている消化メカニズムと実質的に同一のメカニズムによ
り製造されるので、人体に安全であることはいうまでも
ない。

【００１９】本発明のＣＰＯＰを有効成分とする歯石防
止剤は、他の成分とともに歯みがき、マウスウォッシ
ュ、トローチ等の口腔用製品、チューインガム、キャン
ディー等の食品等として使用し得る。本発明の歯石防止
剤のＣＰＯＰ含量は、少なくとも０．０１％、望ましく
は０．１〜１０％である。

【００２０】次に試験例を示して本発明を詳述する。 試験例１ この試験は、歯石形成の第１段階である非晶質リン酸カ
ルシウムの沈澱形成防止に対するＣＰＯＰの作用を調べ
るために行った。

【００２１】１）試料の調製 実施例１と同一の方法により調製したＣＰＯＰ及び大谷
らの方法［ミルヒビッセンシャフト(Milchwissenschaf
t) 、第４２巻、第８号、第５０５〜５０８ページ、１
９８７年］に基づいて参考例２により調製したβ−ＣＰ
Ｐを、表１に示す濃度で精製水に溶解した。

【００２２】２）試験方法 ２０ｍＭ塩化カルシウム（和光純薬工業社製。試薬特級
の塩化カルシウム・２水塩を使用）１．０ｍｌ及び各試
料溶液１．０ｍｌを試験管内で混合し、更に２０ｍＭリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７．０）２．０ｍｌを添加して混合
し、３７℃で２時間保持した。のち反応液を０．４５μ
ｍの水系フィルター（コーニング社製。ナイロンメンブ
レム）で瀘過し、瀘液０．５ｍｌに０．１規定塩酸溶液
０．１ｍｌを添加し、のち溶液中のカルシウム含量をＣ
ａ−Ｍｇカウンター（平沼産業社製）で測定し、最初の
塩化カルシウム溶液のカルシウム量に対する塩化カルシ
ウム溶液のカルシウム量と瀘液中のカルシウム量の差の
百分率を算出し、リン酸カルシウムの沈澱形成防止効果
を試験した。

【００２３】３）試験結果 この試験の結果は、表１に示すとおりである。表１から
明らかなように、ＣＰＯＰは０．０４％（最終濃度換算
では０．０１％）以上の濃度でほぼ１００％のリン酸カ
ルシウムの沈澱形成阻止率を示した。これに対して精製
したβ−ＣＰＰは、１００％の阻止率を示すのは０．０
７５％（最終濃度換算では約０．０２％）以上であり、
ＣＰＯＰの約２倍の濃度でほぼ同等の効果が認められ
た。更に、０．０４％未満の濃度におけるＣＰＰは、Ｃ
ＰＯＰよりも顕著に阻止率が低ことが認められた。この
ことは、ＣＰＯＰはＣＰＰよりも低濃度で同等の効果を
得ることができることを示している。

【００２４】尚、他の製造法によるＣＰＯＰについても
試験を行ったが、ほぼ同様の結果が得られた。

【００２５】

【表１】 試験例２ この試験は、歯石形成の第２段階であるハイドロシキア
パタイト形成防止に対するＣＰＯＰの作用を調べるため
に行った。

【００２６】１）試料の調製 試験例１と同一の方法により調製した各試料を、表２に
示す濃度で精製水に溶解した。

【００２７】２）試験方法 各試料溶液１０ｍｌと０．０３Ｍアジ化ナトリウム（和
光純薬工業社製）を含む５０ｍＭリン酸カリウム水溶液
１ｍｌとを試験管内で混合し、更に５０ｍＭ塩化カルシ
ウム溶液１ｍｌを添加し、添加直後から経時的に溶液の
ｐＨをｐＨメーター（堀場製作所製。Ｆ−１１型）で測
定し、ハイドロシキアパタイト形成までの時間を測定
し、ハイドロシキアパタイト形成防止効果を試験した。

【００２８】３）試験結果 この試験の結果は、表２に示すとおりである。表２から
明らかなように、０．０１％の濃度において、ＣＰＯＰ
は精製したβ−ＣＰＰとほぼ同等の高いハイドロシキア
パタイト形成防止効果を示した。しかしながら、０．０
１％未満の濃度におけるＣＰＯＰのハイドロシキアパタ
イト形成防止効果は、β−ＣＰＰのそれよりも格段に高
いことが認められた。この試験結果からＣＰＯＰの有効
量は、０．０１％以上、望ましくは０．１〜１０％であ
ることが判明した。

【００２９】尚、他の製造法によるＣＰＯＰについても
試験を行ったが、ほぼ同様の結果が得られた。

【００３０】

【表２】 参考例１ 市販のラクトバチルス・ヘルベティカスを常法により脱
脂乳を用いて培養し、得られた培養液を遠心分離して乳
酸菌を集めた。培地と等量の滅菌水に菌体を懸濁し、遠
心分離して乳酸菌を集め、この操作を２回反復して菌体
を洗浄した。得られた菌体を滅菌水に２０％の濃度で懸
濁し、ダイノミル［商標。ワイリー・バハンフェン・エ
ンジニアリング・ワークス（Willy Bachnfen Engineeri
ng Works）社製。ＫＤＬ型］を用いて菌体を破壊し、遠
心分離して不溶物を除去し、凍結乾燥し、粉末の菌体破
壊物を得た。この菌体破壊物は、１ｇ当たり２５，００
０単位の蛋白分解活性を有していた。

【００３１】参考例２ 牛乳β−カゼイン（シグマ社製）２．０ｇを脱イオン水
１００ｍｌに懸濁し、１規定水酸化ナトリウムを添加し
て溶解し、のちｐＨを８．０に調整し、トリプシン（ノ
ボ・インダストリー社製）９．１ｍｇを添加し、２０℃
で６０分間加水分解し、得られた分解液に１規定塩酸を
添加してｐＨを４．７に調整し、酵素を失活させ、３，
０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、上澄液を得た。

【００３２】この上澄液に１０％塩化バリウム溶液を添
加し、塩化バリウムの最終濃度を０．２５％に調整し、
次いで同容量のエチルアルコールを添加し、均一に混合
し、のち３，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、沈澱
物を得た。この沈澱物を１５ｍｌの脱イオン水に溶解
し、１規定塩酸でｐＨを３．５に調整し、同容量のアセ
トンを添加し、均一に混合し、のち３，０００ｒｐｍで
３０分間遠心分離し、沈澱物を得た。更にこの沈澱物を
７ｍｌの脱イオン水に溶解し、１規定塩酸でｐＨを２．
０に調整し、のち３，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離
し、上澄を集め、１規定水酸化ナトリウムでｐＨを３．
５に調整し、同容量のアセトンを添加し、舞え記と同様
の方法により沈澱物を得た。

【００３３】この沈澱物を少量の５０％酢酸に溶解し、
ゲル瀘過クロマトグラフィー（バイオ・ラッドラボラト
リー社製。バイオゲルＰ１０を使用）にかけ、精製β−
ＣＰＰ約２４ｍｇを得た。

【００３４】次に実施例を示して本発明を更に詳述する
が、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

【００３５】

【実施例】

実施例１ 市販の乳酸カゼイン（ニュ−ジ−ランド・デイリー・ボ
ード製）２００ｇを１０％水酸化ナトリウム水溶液に１
０％の濃度で加温しながら溶解し、得られた溶液のｐＨ
を８．０に調整し、９０℃で１０分間加熱殺菌し、４５
℃に冷却した。このカゼイン溶液にパンクレアチンＦ
（商標。天野製薬社製）１０ｇ、プロテアーゼＮアマノ
（商標。天野製薬社製）２ｇ及び参考例１と同一の方法
で調製した乳酸菌抽出物４ｇを加え（合計４９０，００
０活性単位）、４５℃で２４時間加水分解し、のち９０
℃で５分間加熱して酵素を失活させ、瀘過して沈殿物を
除去し、凍結乾燥し、分解物約１７０ｇを得た。この分
解物１８ｇを２０％の濃度で水に溶解し、不溶物を除去
し、セファデックスＧ−１０（ファルマシア社製）を充
填したカラム（１０×１２ｃｍ）に通液して吸着させ、
イオン交換水を用いて１０ｍｌ/ 分の流速で溶出し、２
００〜５００ｍｌの分画を集め、凍結乾燥し、低分子量
ペプチド粉末約６ｇを得た。

【００３６】前記の方法を反復して得られた低分子量ペ
プチド粉末７０ｇを、１４％（重量／容量）の濃度で水
に溶解し、ｐＨを８．０に調整し、予め弱塩基性陰イオ
ン交換体であるＤＥＡＥファデックスＡ−２５（ファル
マシア社製）１００ｇを膨潤させ、ｐＨを８．０に調整
し、充填したカラム（直径１０ｃｍ、高さ１０ｃｍ）に
ＳＶ＝２で通液し、ＣＰＯＰを交換体に吸着させ、水洗
した。のち１．８％（重量／容量）の濃度の食塩水溶液
２ｌをＳＶ＝２で通液し、ＣＰＯＰ以外のペプチドを溶
出させ、次いで３．０％（重量／容量）の食塩水溶液２
ｌをＳＶ＝２で通液し、ＣＰＯＰを溶出させた。この溶
出液を常法により電気透析機を用いて脱塩し、濃縮し、
凍結乾燥し、ＣＰＯＰ約９ｇを得た。

【００３７】得られたＣＰＯＰについて特開平５−１７
６７１４号公報記載の試験例と同一の方法で測定した分
子量分布、窒素とリンの比率、アミノ酸及び抗原性残存
活性の結果は、分子量分布が５００〜１，０００、窒素
／リンの比が４．１、グルタミン酸、セリン、アスパラ
ギン酸及びイソロイシンを主たる構成アミノ酸とする５
〜１０のアミノ酸残基からなり、抗原性残存活性が１０
^-5であった。

【００３８】実施例２ ＤＥＡＥファデックスＡ−２５（ファルマシア社製）を
ＤＥＡＥセファセル（ファルマシア社製）に変更したこ
とを除き、実施例１と同一の方法によりＣＰＯＰ約８．
５ｇを得た。

【００３９】得られたＣＰＯＰについて特開平５−１７
６７１４号公報記載の試験例と同一の方法で測定した分
子量分布、窒素とリンの比率、アミノ酸及び抗原性残存
活性の結果は、分子量分布が５００〜１，０００、窒素
／リンの比が４．０、グルタミン酸、セリン、アスパラ
ギン酸及びイソロイシンを主たる構成アミノ酸とする５
〜１０のアミノ酸残基からなり、抗原性残存活性が１０
^-5であった。

【００４０】実施例３ 低分子量ペプチド粉末溶液のｐＨを８．５に調整したこ
とを除き、実施例１と同一の方法によりＣＰＯＰ約８．
９ｇを得た。

【００４１】得られたＣＰＯＰについて特開平５−１７
６７１４号公報記載の試験例と同一の方法で測定した分
子量分布、窒素とリンの比率、アミノ酸及び抗原性残存
活性の結果は、分子量分布が５００〜１，０００、窒素
／リンの比が３．９、グルタミン酸、セリン、アスパラ
ギン酸及びイソロイシンを主たる構成アミノ酸とする５
〜１０のアミノ酸残基からなり、抗原性残存活性が１０
^-5であった。

【００４２】実施例４ 実施例１と同一の方法により得たＣＰＯＰを用い、次の
組成の練歯みがきを常法により製造した。尚、ＣＰＯＰ
以外の成分は、市販品を用いた。

【００４３】 水酸化アルミニウム ４０．０（％） カラゲナン １．０ グリセリン ２５．０ ラウリル硫酸ナトリウム １．５ サッカリンナトリウム ０．１ 安息香酸ナトリウム ０．５ 香料 ０．５ ＣＰＯＰ ０．５ 精製水 ３０．９

【００４４】実施例５ 実施例１と同一の方法により得たＣＰＯＰを用い、次の
組成の液状歯みがきを常法により製造した。尚、ＣＰＯ
Ｐ以外の成分は、市販品を用いた。

【００４５】 グリセリン ３５．０（％） プロピレングリコール ５．０ ポリアクリル酸ナトリウム ３．０ 香料 １．０ ＣＰＯＰ ０．２ 精製水 ５５．８

【００４６】実施例６ 実施例２と同一の方法により得たＣＰＯＰを用い、次の
組成のマウスウォッシュを常法により製造した。尚、Ｃ
ＰＯＰ以外の成分は、市販品を用いた。

【００４７】 エチルアルコール １０．０（％） グリセリン １５．０ クエン酸 ０．０５ クエン酸ナトリウム ０．２ ラウリル硫酸ナトリウム ０．２ 安息香酸ナトリウム ０．２ 香料 ０．５ ＣＰＯＰ ０．２ 精製水 ７３．６５

【００４８】実施例７ 実施例２と同一の方法により得たＣＰＯＰを用い、次の
組成のチューインガムを常法により製造した。尚、ＣＰ
ＯＰ以外の成分は、市販品を用いた。

【００４９】 ガムベース ３０．０（％） 粉糖 ５１．５ グルコース １０．０ 水飴 ６．０ グリセリン １．０ 香料 １．０ ＣＰＯＰ ０．５

【００５０】実施例８ 実施例２と同一の方法により得たＣＰＯＰを用い、次の
組成のトローチを常法により製造した。尚、ＣＰＯＰ以
外の成分は、市販品を用いた。

【００５１】 ショ糖 ７５．０（％） グルコース ２０．０ ショ糖脂肪酸エステル ０．２ ＣＰＯＰ ０．５ 精製水 ４．３

【００５２】実施例９ 実施例３と同一の方法により得たＣＰＯＰを用い、次の
組成のハードキャンディーを常法により製造した。尚、
ＣＰＯＰ以外の成分は、市販品を用いた。

【００５３】 グラニュー糖 ５２．０（％） 水飴 ４６．０ クエン酸 １．０ 香料 ０．５ ＣＰＯＰ ０．５

【００５４】実施例１０ 実施例３と同一の方法により得たＣＰＯＰを用い、次の
組成のグミキャンディーを常法により製造した。尚、Ｃ
ＰＯＰ以外の成分は、市販品を用いた。

【００５５】 ショ糖 ３２．０（％） 水飴 ４５．０ ソルビトール １０．０ ゼラチン ６．０ 果汁 ４．０ クエン酸 ２．０ 香料 ０．５ ＣＰＯＰ ０．５

【００５６】

【発明の効果】以上詳述したように、本発明は、少なく
とも特定の理化学的性質を有するＣＰＯＰを有効成分と
して含有する歯石防止剤であり、本発明によって奏せら
れる効果は、次のとおりである。 １）口腔用製品として加工する場合、沈澱及び混濁を生
じない。 ２）長期間の使用又は誤飲に対しても安全である。 ３）優れた歯石防止作用を有する。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 次の（ａ）〜（ｆ）の理化学的性質を有
   するカゼインホスホオリゴペプチド混合物を、少なくと
   も有効成分として含有する歯石防止剤、 （ａ）分子量分布が５００〜１，０００であること （ｂ）窒素／リンの分子数比が５．０以下であること （ｃ）アミノ酸残基の数が５〜１０であって、グルタミ
   ン酸、セリン、アスパラギン酸及びイソロイシンを主た
   る構成アミノ酸とすること （ｄ）カルシウム不溶化防止効果を有すること （ｅ）エライザ(ELISA:Enzyme linked immunosorbent a
   ssay) 抑制試験法により測定した抗原性残存活性が１０
   ^-5以下であること （ｆ）ｐＨ５．０以下の酸性溶液に溶解しても沈澱及び
   混濁を生成しないこと。
2. 【請求項２】 有効成分が、少なくとも０．０１％（重
   量）の割合で含有されている請求項１に記載の歯石防止
   剤。