JPH07149796A - Ｈｔｌｖ−ｉｉｉ ｄｎａのクローニングおよび発現 - Google Patents

Ｈｔｌｖ−ｉｉｉ ｄｎａのクローニングおよび発現

Info

Publication number
JPH07149796A
JPH07149796A JP6098231A JP9823194A JPH07149796A JP H07149796 A JPH07149796 A JP H07149796A JP 6098231 A JP6098231 A JP 6098231A JP 9823194 A JP9823194 A JP 9823194A JP H07149796 A JPH07149796 A JP H07149796A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
htlv
iii
dna
cdna
polypeptide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP6098231A
Other languages
English (en)
Inventor
Nancy T Chang
ナンシー・ティー・チャン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Janssen Biotech Inc
Original Assignee
Centocor Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27097813&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JPH07149796(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Centocor Inc filed Critical Centocor Inc
Publication of JPH07149796A publication Critical patent/JPH07149796A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C12Q1/702—Specific hybridization probes for retroviruses
    • C12Q1/703—Viruses associated with AIDS
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
    • C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
    • C07K16/1054—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV gag-pol, e.g. p17, p24
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
    • C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
    • C07K16/1063—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV env, e.g. gp41, gp110/120, gp160, V3, PND, CD4 binding site
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/40—Fusion polypeptide containing a tag for immunodetection, or an epitope for immunisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/61—Fusion polypeptide containing an enzyme fusion for detection (lacZ, luciferase)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/80—Fusion polypeptide containing a DNA binding domain, e.g. Lacl or Tet-repressor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/14011—Deltaretrovirus, e.g. bovine leukeamia virus
    • C12N2740/14022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
    • C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
    • C12N2740/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

(57)【要約】 【目的】 ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのクローニングに
基づいて、エイズの診断、治療および予防に有用な方法
を提供する。 【構成】 ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ｃＤＮＡを含む組換えベ
クターを用いて形質転換した細胞により発現される免疫
反応性ＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプチド、該ポリペプチド
の製造方法、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ遺伝子をコードする単離
されたｃＤＮＡ、ＨＴＬＶ−ＩＩＩウイルスに特異的な
ＨＴＬＶ−ＩＩＩゲノムの部分と本質的に相同であるＤ
ＮＡ配列からなるＤＮＡプローブ、およびＨＴＬＶ−Ｉ
ＩＩポリペプチドが少なくとも１つの他のポリペプチド
に結合してなるハイブリッドタンパク質。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は分子生物学およびウイル
ス学の分野、特にヒトＴ細胞白血病ウイルス−ＩＩＩ型
（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ）に関する。
【０００２】
【従来の技術】ヒトＴ細胞白血病−リンパ腫ウイルス
（ＨＴＬＶ）という用語は、Ｔ細胞トロピックレトロウ
イルスの特定の属を意味する。これらのウイルスはある
種のＴ細胞新生物の発生において重要な役割を演ずる。
現在、３つの型のＨＴＬＶが知られている。この属の１
つの亜属であるＨＴＬＶ−Ｉ型（ＨＴＬＶ−Ｉ）は、日
本、カリブ海沿岸およびアフリカのある地域に発生する
成人Ｔ細胞白血病−リンパ腫（ＡＴＬＬ）の原因と関係
がある。ＨＴＬＶ−ＩＩ型（ＨＴＬＶ−ＩＩ）は毛状細
胞白血病のＴ細胞変異型をもつ患者から単離された。
Ｍ．ポポビック（Ｐｏｐｏｖｉｃ）らの「エイズおよず
プレエイズ患者からの細胞変性レトロウイルス（ＨＴＬ
Ｖ−ＩＩＩ）の検出、単離および連続生産」、サイエン
ス，２２４：４９７−５００（１９８４）を参照された
い。
【０００３】ＨＴＬＶ−ＩＩＩ型（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ）
は後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ，エイズ）にかかっ
た多数の患者から単離された。ＨＴＬＶ−ＩＩＩはエイ
ズ患者から単離されたプロトタイプのウイルスである。
このエイズに対して最も危険な立場にあると報告された
人々には、同性愛または両性愛の男性、静脈内薬物使用
者および米国のハイチ人移民が含まれる。提供者から集
めた血液製剤を受容する血友病患者および頻繁に輸血を
受ける人々も危険な立場にある。エイズの臨床上の症状
は、一般にヘルパーＴリンパ球の減少をともなう今だ解
明されていない恐ろしい免疫不全を包含する。これらは
悪性腫瘍および感染症をともなうことがある。エイズ患
者の死亡率は高い。あまり恐ろしくない型のエイズも存
在し、これはリンパ腫および低下したヘルパーＴ細胞数
をともなうことがあるが、成熟したエイズの破壊的症状
を示さない。これらの徴候を呈する初期エイズ（プレエ
イズ）患者も多数存在する。これらの人々のなかで誰が
一層恐ろしい症状へ進行するかを予言することは今のと
ころ不可能である。
【０００４】伝染性エイズの病因としてＨＴＬＶ−ＩＩ
Ｉが含まれることは多くのことから証明されている。第
一に、首尾一貫した疫学が存在し、すなわちエイズ患者
の９５％以上がＨＴＬＶ−ＩＩＩに対して特異的な抗体
を有する。第二に、この病気において再現できるウイル
スの同定および単離がなされ、ＨＴＬＶ−ＩＩＩの１０
０種以上の変異型がエイズ患者から単離された。第三
に、エイズに感染した血液提供者から輸血を受けた正常
な健康人がエイズに感染する。
【０００５】ＨＴＬＶ−ＩＩＩはＨＴＬＶ−ＩおよびＨ
ＴＬＶ−ＩＩといくつかの特性を共有するが、形態学
的，生物学的および抗原的に区別し得ることがわかっ
た。Ｒ．Ｃ．ガロ（Ｇａｌｌｏ）らの「危険な状態にあ
るエイズ患者からの細胞変性レトロウイルスの検出およ
び単離」、サイエンス，２２４：５００−５０３（１９
８４）を参照されたい。例えば、ＨＴＬＶ−ＩおよびＨ
ＴＬＶ−ＩＩのコアタンパク質ｐ２４およびｐ１９、な
らびにエンベロープ抗原に対する抗体との交差反応性を
証明するか、あるいはクローニングしたＨＴＬＶ−Ｉお
よびＨＴＬＶ−ＩＩのＤＮＡとの核酸交差ハイブリダイ
ゼーション実験を行うことにより、ＨＴＬＶ−ＩＩＩが
ＨＴＬＶ−ＩおよびＨＴＬＶ−ＩＩと抗原的に関係のあ
ることがわかった。しかしながら、ＨＴＬＶ−Ｉおよび
ＨＴＬＶ−ＩＩと異なって、ＨＴＬＶ−ＩＩＩは正常人
の臍帯血液および骨髄からのＴ細胞にインビトロで感染
しかつそれを形質転換する能力を欠いており、感染細胞
に対してのみ細胞変性作用を有していた。
【０００６】他のレトロウイルスのＲＮＡゲノムと同様
に、ＨＴＬＶ−ＩＩＩのＲＮＡゲノムはウイルスタンパ
ク質をコードする３つの遺伝子を含んでいる：すなわち
１）内部構造（ヌクレオカプシドまたはコア）タンパク
質をコードするｇａｇ遺伝子；２）ＲＮＡ依存性ＤＮＡ
ポリメラーゼ（逆転写酵素）をコードするｐｏｌ遺伝
子；および３）ウイルス粒子のエンベロープ糖タンパク
質をコードするｅｎｖ遺伝子。さらに、ＨＴＬＶ−ＩＩ
Ｉゲノムはｅｎｖ遺伝子と３′側ＬＴＲとの間に位置す
るＰｘと呼ばれる領域を含んでおり、これはウイルスの
機能的死亡と関連があるように思われる。
【０００７】現在のところ、エイズの症状が現われる以
前にエイズを診断することはまだ困難である。この病気
の予防に利用できる方法も目下のところ存在しない。一
般にエイズ患者の治療は成功せず、そしてＨＴＬＶ−Ｉ
ＩＩが身体に及ぼす破壊的作用に多数の犠牲者が出てい
る。
【０００８】
【発明が解決しようとする問題点】本発明は、免疫反応
性ＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプチドを発現できる組換え体
／ベクター宿主系内でのＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのク
ローニングに基づいている。免疫反応性ポリペプチドを
発現する系内でのＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのクローニ
ングに基づいて、本出願人はエイズの診断、治療および
予防に有用な方法を開発した。本出願人は体液（例えば
血液、唾液、精液）中のＨＴＬＶ−ＩＩＩおよびその抗
体を検出する方法、ならびに免疫療法（例えばエイズの
予防接種や受動免疫）において有用な方法を開発した。
さらに、本出願人は体液中のＨＴＬＶ−ＩＩＩの検出に
有用なＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡプローブおよびＲＮＡ
プローブの作製方法を開発した。
【０００９】ＨＴＬＶ−ＩＩＩゲノムのセグメントによ
ってコードされるポリペプチドは、これらの組換えＤＮ
Ａ法を使って生産した。例えば、ＨＴＬＶ−ＩＩＩゲノ
ムの３つの領域（ｅｎｖ遺伝子配列、ｅｎｖ−ｌｏｒ遺
伝子配列、およびＨＴＬＶ−ＩＩＩ ｃＤＮＡからの
１．１ＫｂのＥｃｏＲＩ制限断片）によってコードされ
るポリペプチドを生産した。発現されたポリペプチドは
単離した。これらのポリペプチドはエイズ患者の血清お
よびＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体と免疫反応性であ
り、従ってＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体の有無につい
て血液およびその他の体液をスクリーニングするのに有
用である。それ故、本発明はエイズの診断方法ばかりで
なく、ＨＴＬＶ−ＩＩＩを含む血液または血液成分を通
じて他の人々へのこの病気が伝染するのを予防する方法
をも提供するものである。特に後者は、血液成分（例え
ば血友病の治療のための第ＶＩＩＩ因子；第ＩＸ因子）
を得るために提供された血液を輸血または使用するに先
立って、その血液をスクリーニングするのに価値があ
る。
【００１０】組換えＤＮＡ法によって生産されたポリペ
プチドは、このウイルスに対する抗体（モノクローナル
抗体を含む）の生産に利用できる。この種の抗体は血
液、唾液、精液などの体液中のＨＴＬＶ−ＩＩＩを直接
検出するためのイムノアッセイおよび診断技術の基礎を
なすものである。このウイルスに対する中和抗体は、こ
の病気に対して受動免疫を与えるのに使用できる。
【００１１】このような組換え体／ベクター宿主系内で
のＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのクローニングは、さらに
ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレオチド塩基配列を決
定するための基礎を提供する。ＤＮＡプローブはＨＴＬ
Ｖ−ＩＩＩゲノムに特異的なＤＮＡ領域と相同であり、
これらのＤＮＡプローブは血液、唾液または他の体液中
のＨＴＬＶ−ＩＩＩを検出する別の方法を提供する。Ｈ
ＴＬＶ−ＩＩＩゲノムに特異的な領域を含むＲＮＡプロ
ーブも作製され、体液中のＨＴＬＶ−ＩＩＩの検出に使
用される。
【００１２】
【問題点を解決するための手段】ＨＴＬＶ−ＩＩＩとＨ
ＴＬＶ−ウシ白血病ウイルス（ＢＬＶ）属の他のウイル
スとの間の類似性にもかかわらず、ＨＴＬＶ−ＩＩＩの
生物学および病理学は実質的に異なっている。例えば、
比較的乏しい相同がＨＴＬＶ−Ｉまたは−ＩＩゲノムの
それと比較したときＨＴＬＶ−ＩＩＩゲノムに見られ
た。ＨＴＬＶ−ＩＩＩによる感染はしばしば強い免疫抑
制（エイズ）をもたらし、その結果ＯＫＴ４（＋）細胞
集団の減少をきたす。この作用はインビトロでのリンパ
球培養において、ＯＫＴ４（＋）細胞へのＨＴＬＶ−Ｉ
ＩＩ感染の、形質転換作用というよりむしろ、著しい細
胞変性作用によって反映される。これとは対照的に、Ｈ
ＴＬＶ−Ｉによる感染はＴ細胞白血病−リンパ腫（ＯＫ
Ｔ４（＋）細胞の悪性化）の低い発生率をもたらす。Ｈ
ＴＬＶ−Ｉ患者の場合もある程度の免疫不全を示す。Ｈ
ＴＬＶ−Ｉおよび−ＩＩによる一次リンパ球培養物の感
染は、主にＯＫＴ４（＋）細胞のインビトロ形質転換を
引き起こす。リンパ球へのＨＴＬＶ−Ｉ感染の細胞変性
作用は明らかに起こるが、ＨＴＬＶ−ＩＩＩの場合に観
察されるものほど顕著な細胞変性作用ではない。
【００１３】ＨＴＬＶ−ＩＩＩはさらにインビボおよび
インビトロでの伝染性ウイルス粒子生産の程度において
もＨＴＬＶ−Ｉおよび−ＩＩと異なっている。細胞不含
の高力価伝染性ウイルス粒子はエイズ患者の精液および
唾液、ならびにＨＴＬＶ−ＩＩＩを感染させた培養物の
上清から得ることができる。成人Ｔ細胞白血病−リンパ
腫（ＡＴＬＬ）患者またはＨＴＬＶ−Ｉもしくは−ＩＩ
を感染させた培養物からは、もし存在するとしても、き
わめて少数の細胞不含伝染性ウイルス粒子を回収できる
にすぎない。
【００１４】エンベロープ糖タンパク質はエイズ患者の
抗血清によって認識される主な抗原である。この点で、
ＨＴＬＶは他のレトロウイルスと類似しており、そのた
めにエンベロープ糖タンパク質は一般に最も抗原的なウ
イルスポリペプチドである。さらに、中和抗体は一般に
レトロウイルスのエンベロープ糖タンパク質に対して向
けられる。エイズ患者からの血清試料の８８〜１００％
はＨＴＬＶ−ＩＩＩの抗原と反応する抗体を含むことが
見出され、主な免疫反応はＨＴＬＶ−ＩＩＩの推定上の
エンベロープ抗原であるｐ４１に対して向けられた。コ
アタンパク質に対する抗体もエイズ患者の血清に見出さ
れたが、エンベロープ抗原に対する抗体の存在ほど感染
指示剤として有効であるとは思われない。
【００１５】ＨＴＬＶ−ＩＩＩのｐ４１抗原は、ウイル
スエンベロープがウイルスの不活化および精製過程で部
分的に破壊されるので、その性状決定が難しかった。本
発明はＨＴＬＶ−ＩＩＩウイルスのの抗原成分の性状を
決定しかついくつかの方法で他のウイルス抗原成分の存
在および特性を決定するという大いなる要求に答えるも
のである。それはＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプチド、その
ポリペプチドに対する抗体、ＲＮＡプローブおよびＤＮ
Ａプローブのような産物を提供し、またそれらの生産方
法も提供する。これらはスクリーニング、診断および治
療を行う際に役立つ。
【００１６】本発明は、ＨＴＬＶ−ＩＩＩタンパク質を
コードする組換えＤＮＡ塩基配列の翻訳によって生産さ
れるＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプチドに関する。この方法
で生産され、エイズ患者からの血清またはＨＴＬＶ−Ｉ
ＩＩに対する抗体と免疫反応性のポリペプチドは、組換
えＤＮＡ−生産による免疫反応性ＨＴＬＶ−ＩＩＩポリ
ペプチドと称される。これらにはＨＴＬＶ−ＩＩＩコア
タンパク質およびエンベロープ糖タンパク質をそれぞれ
コードするｇａｇおよびｅｎｖＤＮＡ配列に特異的な組
換えＤＮＡ配列の翻訳によって生産される抗原ＨＴＬＶ
−ＩＩＩコアポリペプチドおよびエンベロープポリペプ
チドが含まれるが、これらに限定されない。それらはま
たＨＴＬＶ−ＩＩＩ ｃＤＮＡの１．１ＫｂのＥｃｏＲ
Ｉ制限断片に含まれる組換えＤＮＡ配列の翻訳、および
ＨＴＬＶ−ＩＩＩのｓｏｒ遺伝子およびＰｘ遺伝子に特
異的な組換えＤＮＡ配列の翻訳によって生産されるポリ
ペプチドをも包含する。ｓｏｒＤＮＡ配列は複製感応Ｈ
ＴＬＶ−ＩＩＩウイルスに共通している。Ｐｘ遺伝子は
ＨＴＬＶ−ＩＩＩゲノムのｅｎｖ遺伝子と３′末端との
間に位置し、１つの大きな読み取り枠を有するコーディ
ング配列（ｌｏｒ）を含む。ｅｎｖＤＮＡ配列とｌｏｒ
ＤＮＡ配列とは共にＨＴＬＶ−ＩＩＩゲノムの同じ読み
取り枠内に位置するため、この遺伝子領域はｅｎｖ−ｌ
ｏｒと称される。
【００１７】ＨＴＬＶ−ＩＩＩのこれらの領域によりコ
ードされるポリペプチドは、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ感染およ
びＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体を検出する免疫化学検
定法において使用することができる。これらの方法はエ
イズを診断する際に役立つ。さらに、これらは血液成分
（例えば血友病の治療のための第ＶＩＩＩ因子）の輸血
または生産のために血液を使用するのに先立って、その
血液をスクリーニングする際にも利用できる。スクリー
ニング技術の利用可能性はエイズ伝染の危険を減ずるで
あろう。
【００１８】ポリペプチドと反応する抗体の検出は多く
の確立された方法によって実施できる。例えば、免疫反
応性ＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプチドをポリスチレンビー
ズや他の固体支持体のような固相に付着させる。次にそ
の固相をＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体について試験し
ようとする血液試料とインキュベートする。適当なイン
キュベーション期間の経過後固相と血液試料とを分離す
る。固相に結合した抗体は、標識ポリペプチドまたはヒ
ト免疫グロブリンに対する標識抗体を用いて検出でき
る。
【００１９】ＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプチドはエイズの
ワクチン予防にも使用される。このウイルスに対する予
防接種のためには中和抗体を誘導する免疫原性ポリペプ
チドが利用されるであろう。その第一の候補はウイルス
エンベロープポリペプチドである。
【００２０】これらのポリペプチドはＨＴＬＶ−ＩＩＩ
ポリペプチドに対する抗体（モノクローナル抗体を含
む）の生産にも使用できる。これらの抗体は体液（血
液，唾液，精液など）中のウイルスを直接検出する免疫
化学検定法において使用される。特異的ＨＴＬＶ−ＩＩ
Ｉ抗原決定基に対するモノクローナル抗体を使用する検
定法は、偽陽性の結果を減少させることによってウイル
ス検定の正確さを改善するであろう。また、ウイルスに
対する抗体は免疫療法にも利用でき、例えばウイルスに
対する受動免疫を与えることができる。
【００２１】ポリペプチドの生産方法、ならびにこれら
のポリペプチドに基づく診断方法も本発明の主題であ
る。
【００２２】さらに、本発明は免疫反応性ポリペプチド
をコードするＨＴＬＶ−ＩＩＩの遺伝子の単離方法；こ
れらの遺伝子のヌクレオチド塩基配列の同定方法；ウイ
ルスＲＮＡを生産させるべく適当なベクター内へのウイ
ルスＤＮＡに特異的なＤＮＡ配列の導入方法、およびＤ
ＮＡプローブの作製方法を提供する。これらのプローブ
はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡに特異的な塩基配列で構成
され、例えば血液のような体液中の相補的ＨＴＬＶ−Ｉ
ＩＩ ＤＮＡ配列を検定するのに有用である。 ＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプチド 免疫反応性ＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプチドをコードする
ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのセグメントを単離するため
に、遺伝子操作法が使用される。これらのポリペプチド
はエイズ患者からの血清またはＨＴＬＶ−ＩＩＩに対す
る抗体と免疫反応性であり、これらにはコアタンパク
質、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡの１．１Ｋｂ ＥｃｏＲ
Ｉ制限断片によりコードされる１５Ｋｄのペプチド、お
よびエンベロープ糖タンパク質が含まれる。これらの方
法はまたポリペプチドをコードする断片の塩基配列決定
にも使用できる。宿主細胞ＤＮＡ内に組み込まれたプロ
ウイルス遺伝子は分子的にクローニングされ、そしてク
ローニングされたプロウイルスのヌクレオチド塩基配列
を決定する。
【００２３】ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡの大腸菌発現ラ
イブラリーを作製する。ＨＴＬＶ−ＩＩＩゲノムをクロ
ーニングし、その後制限酵素を用いてクローニングした
ＨＴＬＶ−ＩＩＩゲノムを切断し、それによりＤＮＡ断
片を得る。（第１図および第２図を参照されたい。）約
２００〜５００ｂｐのＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡ断片を
アガロースゲルから単離し、Ｔ4 ポリメラーゼで末端修
復し、そしてリンカーＤＮＡに連結させる。リンカー連
結ＤＮＡを次に制限酵素で処理し、アガロースゲルから
精製して発現ベクター内でクローニングする。使用する
発現ベクターの例はｏｍｐＡ，ｐＩＮ（Ａ，Ｂおよび
Ｃ）、ラムダｐＬ，Ｔ７，ｌａｃ，Ｔｒｐ，ＯＲＦおよ
びラムダｇｔ１１である。さらに、ｐＳＶ２８ｐｔ，ｐ
ＳＶ２ｎｅｏ，ｐＳＶｄｈｆｒおよびＶＰＶベクターの
ような哺乳動物細胞、ならびにＧＡＬＩおよびＧＡＬ１
０のよう酵母ベクターも使用できる。
【００２４】細菌ベクターはｌａｃコーディング配列を
含み、この中にβ−ガラクトシダーゼ融合タンパク質を
生成させるためにＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡを挿入す
る。次に、この組換えベクターを細菌（例えば大腸菌）
内に導入する（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡを含むベクタ
ーを取り込んだこれらの細胞は形質転換されたと言われ
る）。その後、融合タンパク質を発現する形質転換細胞
を同定するために、これらの細胞をスクリーニングす
る。例えば、細菌をマッコンキー（ＭａｃＣｏｎｋｅ
ｙ）寒天平板に置いてクローンの表現型を確かめる。も
しβ−ガラクトシダーゼが生産されているならば、コロ
ニーが赤く見えるだろう。
【００２５】また、細菌コロニーはＨＴＬＶ−ＩＩＩ
ＤＮＡプローブを用いてスクリーニングすることによ
り、興味あるＤＮＡ領域（例えば、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ
ｇａｇ，ｐｏｌおよびｅｎｖ ＤＮＡ配列）を含むクロ
ーンを同定できる。ＤＮＡプローブを用いたスクリーニ
ングにおいて陽性であり、かつマッコンキー寒天平板に
おいて陽性であるクローンを単離する。
【００２６】ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡ配列を含む細胞
の同定は、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ特異的抗体と免疫反応性で
あるＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプチドの生産を可能にす
る。選択されたコロニーからの細胞は、ハイブリッドタ
ンパク質を発現させる条件下に培養して増殖させる。そ
の後、当分野で知られた方法により細胞タンパク質を得
る。例えば、培養物を遠心分離し、得られた細胞沈殿物
を破壊する。宿主細胞によって分泌されたポリペプチド
を細胞培養物の上清から（細胞を破壊することなく）得
ることもできる。
【００２７】全細胞タンパク質はＳＤＳポリアクリルア
ミドゲル電気泳動を行うことにより分析する。他のタン
パク質を全く含まないゲル上の一箇所で融合タンパク質
を同定する。また、ウェスターンブロット分析が陽性の
クローンに対して行われる。このような分析はエイズ患
者からの血清を用いて行われ、その結果ＨＴＬＶ−ＩＩ
Ｉ特異的抗体と交差反応するＨＴＬＶ−ＩＩＩ−β−ガ
ラクトシダーゼ融合タンパク質（抗原）を発現するクロ
ーンを同定することが可能になる。
【００２８】ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡを含むラムダ10
クローンはウイルスの複製型からクローニングされる。
レトロウイルスが複製するとき、二重鎖ＤＮＡが生産さ
れる。クローニングされたＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡは
制限酵素ＳｓｔＩで消化する。（図１．ａ参照）ＨＴＬ
Ｖ−ＩＩＩ ＤＮＡのＬＴＲ内に２つのＳｓｔＩ認識部
位が存在するので、ラムダ10ベクターから取り出された
クローン化ＤＮＡ配列には一方のＬＴＲ領域が存在しな
い。その結果、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡの小さな（約
２００ｂｐ）断片が欠失する。
【００２９】得られたＤＮＡを線状化し、ｅｎｖ遺伝子
領域を含む線状ゲノムＤＮＡを制限酵素で消化していく
つかの断片を得る。例えば、図１．ｂに示すようにＫｐ
ｎまたはＥｃｏＲＩプラスＨｉｎｄＩＩＩを使って断片
をつくる。得られた２．３Ｋｂ ＫｐｎＩ−ＫｐｎＩ断
片；１．０Ｋｂ ＥｃｏＲＩ−ＥｃｏＲＩ断片；および
２．４Ｋｂ ＥｃｏＲＩ−ＨｉｎｄＩＩＩ断片はゲル電
気泳動および電気溶出により単離する。これらの断片を
ランダムにせん断してさらに小さい断片をつくる。こう
して得られた断片はアガロースゲルから分離し、そして
約２００〜５００ｂｐのＤＮＡ断片を溶出する。
【００３０】溶出された２００〜５００ｂｐ ＤＮＡ断
片は大腸菌Ｔ4 ポリメラーゼの使用により末端修復し、
そして平滑末端を読み取り枠発現（ＯＲＦ）ベクター
（例えばｐＭＲ１００）に連結させる。この連結はｐＭ
Ｒ１００ベクターのＳｍａＩ部位で起こり、ｐＭＲ１０
０ベクターは２つのプロモーター領域、ラムダＣＩ遺伝
子のハイブリッドコーディング配列およびｌａｃＩ−ｌ
ａｃＺ遺伝子融合配列を含む。このベクターにおいて、
これらは読み取り枠の塩基配列からはずれており、その
結果このベクターは非生産性である。ＨＴＬＶ−ＩＩＩ
ＤＮＡをこのベクターに挿入することにより、正しい
ＤＮＡ断片が読み取り枠を修正し、その結果ＣＩ−ＨＴ
ＬＶ−ＩＩＩ−β−ガラクトシダーゼ融合タンパク質が
生産されるだろう。このハイブリッドの発現はｌａｃプ
ロモーターの制御下にある。ｐＭＲ１００の塩基配列に
基づくと、ＳｍａＩ部位にクローニングされたＤＮＡ断
片挿入物がラムダＣＩ遺伝子断片とｌａｃ−Ｚ断片との
間に適当な読み取り枠を生ずる場合、その挿入ＤＮＡは
ラムダＣＩ遺伝子の枠により定められる読み取り枠に停
止コドンを含むべきでないと考えられる。
【００３１】次いで、組換えｐＭＲ１００ベクターを大
腸菌の中に導入する。細菌はマッコンキー寒天平板上に
置いてクローンの表現型を確かめる。β−ガラクトシダ
ーゼが生産されている場合は、コロニーが赤く見えるだ
ろう。また、ＤＮＡ挿入物を含むクローンを同定するた
めに、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡプローブを用いてコロ
ニーをスクリーニングする。ＤＮＡプローブを用いてス
クリーニングしたとき陽性でありかつマッコンキー寒天
平板上で陽性であるクローンを単離する。
【００３２】選択されたコロニーからの細胞を培養して
増殖させる。この培養物は遠心分離にかけ、そして細胞
沈殿物を破壊する。全細胞タンパク質はＳＤＳポリアク
リルアミドゲルによる電気泳動を行って分析する。融合
タンパク質は他のタンパク質を全く含まないゲルの上の
一箇所で同定される。（図１５参照） ウエスターンブロット分析もスクリーニングしたとき陽
性であったクローンに対して行われる。エイズ患者から
の血清が使用され、こうしてＨＴＬＶ−ＩＩＩ特異的抗
体と交差反応するＨＴＬＶ−ＩＩＩ−β−ガラクトシダ
ーゼ融合タンパク質を発現するクローンを同定すること
が可能になる。この方法によって１０００個のクローン
がスクリーニングされ、そして６個のクローンが陽性で
あった。
【００３３】ｐＭＲ１００クローニングベクターの性質
ゆえに、生産性ＤＮＡ挿入物は大きな融合ポリペプチド
の一部として発現されるべきである。ＨＴＬＶ−ＩＩＩ
ｅｎｖ遺伝子を含む組換えクローンは、コロニーハイ
ブリダイゼーションによって同定した。β−ガラクトシ
ダーゼ活性を有する大きな融合ポリペプチドの生産は、
マッコンキー寒天平板上での表現型同定、β−ガラクト
シダーゼ酵素検定および７５％ＳＤＳ−ポリアクリルア
ミドゲルの分析によって確かめた。この大きな融合タン
パク質とＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体との免疫反応
は、エイズ患者からの血清を用いるウエスターンブロッ
ト分析によって評価した。また、大きな融合タンパク質
は抗β−ガラクトシダーゼおよび抗ＣＩ抗血清とも反応
した。この発見はそれらがＣＩ−ＨＴＬＶ−ＩＩＩ−ｌ
ａｃＩＺのタンパク質であるという仮説と一致する。
【００３４】ＨＴＬＶ−ＩＩＩの読み取り枠挿入物断片
は、さらにＤＮＡ塩基配列決定によって分析する。ｐＭ
Ｒ１００のＳｍａＩクローニング部位の両側にある２つ
のＢａｍＨＩ部位のうち一方はクローニング段階で破壊
されるので、陽性クローンはＨｉｎｄＩＩＩおよびＣｌ
ａＩ制限酵素で消化して挿入ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡ
断片を遊離させる。融合組換え体からＨＴＬＶ−ＩＩＩ
ＯＲＦ挿入物を単離し、そしてＨｉｎｄＩＩＩおよび
ＡｃｃＩで消化したＭ１３クローニングベクターｍｐ１
８およびｍｐ１９内でクローニングする。その後、陽性
クローンのＤＮＡ塩基配列を決定する。
【００３５】約２００〜５００ｂｐのＨＴＬＶ−ＩＩＩ
ＤＮＡ断片をアガロースゲルから単離し、Ｔ4 ポリメ
ラーゼで末端修復し、そしてＥｃｏＲＩリンカーへ連結
させる。次にＥｃｏＲＩリンカーへ連結させたＤＮＡを
ＥｃｏＲＩで処理し、１％アガロースゲルから精製して
発現ベクターラムダｇｔ１１内でクローニングする。こ
のベクターはｌａｃＺ遺伝子コーディング配列を含み、
このベクター内にβ−ガラクトシダーゼ融合タンパク質
を生成させるべく外来性ＤＮＡを挿入することができ
る。ハイブリッド遺伝子の発現はｌａｃリプレッサーの
制御下にある。ｌａｃリプレッサー遺伝子ｌａｃＩは宿
主細胞の大腸菌Ｙ１０９０内の別のプラスミドｐＭＣ９
によって運ばれる。１．５×１０4 の組換えファージを
含むＨＴＬＶ−ＩＩＩゲノムＤＮＡのラムダｇｔ１１ラ
イブラリーを調べるためにエイズ患者の血液を使用し
た。５０００の組換え体のスクリーニングにおいて、強
力なシグナルを発する１００の独立クローンを単離し
た。陽性の組換えＤＮＡクローンはさらにそれらの特定
の遺伝子発現について明らかにされた。ｇａｇ遺伝子特
異的クローンを同定するために、Ｐ２４に対するウサギ
高度免疫血清を使用した。特定のＨＴＬＶ−ＩＩＩ遺伝
子（詳細にはｇａｇ遺伝子，ｅｎｖ遺伝子およびＰｘ遺
伝子）のニックトランスレーションされたＤＮＡプロー
ブは、陽性の免疫反応性クローンを特定の遺伝子領域に
グループ分けするのに使用した。
【００３６】エイズ血清によって強力なシグナルを発し
かつＨＴＬＶ−ＩＩＩのｇａｇ，ｐｏｌ，ｓｏｒおよび
ｅｎｖ−ｌｏｒ遺伝子領域を有する挿入物ＤＮＡを含む
組換えクローンは、制限酵素によるマッピングおよびＤ
ＮＡ塩基配列決定によって詳細に調べた。ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレオチド配列決定 ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレオチド配列決定には
遺伝子操作法を使用した。この配列決定に使用すること
ができる１つの技術は、ショットガン／ランダム配列決
定法である。ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡを約３００〜５
００ｂｐの大きさの断片にランダムにせん断する。これ
らの断片は例えばＭ１３を使ってクローニングし、次い
でコロニーはＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡ断片挿入物を含
むものを同定するためにスクリーニングする。その後塩
基配列に重複部分が生ずるような多数の分析を行って、
そのヌクレオチド配列を決定する。ＨＴＬＶ−ＩＩＩ
ＤＮＡの両鎖の塩基配列を決定してその向きを定める。
制限酵素マッピングを用いて得られた塩基配列決定デー
タを調べる。
【００３７】１つのクローニングされたＨＴＬＶ−ＩＩ
Ｉゲノム（ＢＨ１０）のヌクレオチド配列を図３〜図１
４に示す。ここにはｇａｇタンパク質ｐ１７およびｇａ
ｇｐ２４のＮ末端およびｇａｇ ｐ１５のＣ末端（これ
はｐｏｌタンパク質のＮ末端と重なり合う）をコードす
る塩基配列位置が示されている。また、ｐｏｌ，ｓｏｒ
およびｅｎｖ−ｌｏｒの読み取り枠（ＯＲＦ）も示され
る。クローンＢＨ１０（Ｒの一部，Ｕ５，ｔＲＮＡプラ
イマー結合部位およびリーダー配列の一部を含む）に存
在しないＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡの残りの１８２塩基
対の配列はクローンＨＸＢ２から誘導された。別の２つ
のクローン（ＢＨ８およびＢＨ５）の塩基配列も示され
る。制限酵素部位はヌクレオチド配列の上に示し、クロ
ーンＢＨ８に存在するがクローンＢＨ１０に存在しない
部位はカッコ内に示す。ヌクレオチド２５１，２５４，
５６７１および６９８７−７００１に決失が見られる
（〔 〕）。ヌクレオチドの位置（各線の右側）は転写
開始部位からスタートしている。アミノ酸残基は４つの
最も大きな読み取り枠に対して番号が付けられており
（各線の右側）、各々の場合先行する終止コドンの後か
らスタートするが、ｇａｇの場合は最初のメチオニンコ
ドンから数えている。提案されたペプチド切断部位
（Ｖ）および起こりうるアスパラギン−結合グリコシル
化部位（＊）をｅｎｖ−ｌｏｒ読み取り枠に対して示
す。図３の最初に示したクローンＢＨ８およびＢＨ１０
から誘導されるＬＴＲの塩基配列は各クローンの３′部
分から誘導され、これらのウイルスゲノムの組み込まれ
たコピーの５′−ＬＴＲに存在するものと同一であると
推定される。
【００３８】クローンＨＸＢ２はラムダＪ１内でクロー
ニングされたＨＴＬＶ−ＩＩＩ感染Ｈ９細胞からのＸｂ
ａＩ消化ＤＮＡの組換えファージライブラリーから誘導
された。Ｈ９細胞はエイズ患者の血液から得られたＨＴ
ＬＶ−ＩＩＩのプールによって感染させたヒト白血病細
胞である〔Ｆ．ワング−スタール（Ｗｏｎｇ−Ｓｔａａ
ｌ）のネイチャー，３１２，１９８４年１１月を参照さ
れたい）。クローニングベクタークローンＢＨ１０，Ｂ
Ｈ８およびＢＨ５はランダムｇｔＷｅｓ．ラムダＢ内で
クローニングされたＨＴＬＶ−ＩＩＩ感染Ｈ９細胞のＨ
ｉｒｔ上清分画からのＳｓｔＩ消化ＤＮＡのライブラリ
ーより誘導された。両方のライブラリーはプライマーと
してオリゴｄＴを使ってウイルス粒子ＲＮＡから合成さ
れたｃＤＮＡプローブを用いてスクリーニングした。ク
ローンＢＨ８，ＢＨ５およびＨＸＢ２の一部はマクサム
−ギルバード法〔Ａ．Ｍ．ＭａｘａｍおよびＧｉｌｂｅ
ｒｔ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，
６５：４９９−５６０（１９８０）を参照〕によって塩
基配列を決定した。クローンＢＨ１０はプライマーとし
てＭ１３挿入物の塩基配列に相補的なオリゴヌクレオチ
ドを使用しかつポリメラーゼとしてＤＮＡポリメラーゼ
Ｉのクレノウ（Ｋｌｅｎｏｗ）断片または逆転写酵素を
使用することにより変更したサンガー（Ｓａｎｇｅｒ）
の方法によって塩基配列を決定した。ＨＴＬＶ−ＩＩＩに特異的なＲＮＡ，ＲＮＡプローブお
よびＤＮＡプローブの作製 ＨＴＬＶ−ＩＩＩからの全遺伝子または遺伝子セグメン
トであるＤＮＡ配列をＴ７ベクターのようなベクターに
挿入する。この具体例は、ベクターがＴ細胞遺伝子１０
プロモーターからのＴｃｅｕプロモーターおよびＴ細胞
遺伝子１０タンパク質からの１１個のアミノ酸をコード
するＤＮＡ配列を含む。
【００３９】次に、このベクターを用いて大腸菌のよう
細胞を形質転換する。Ｔ７ベクターはＴ７ポリメラーゼ
を利用する。Ｔ７ポリメラーゼはＲＮＡ形成を触媒し、
ＲＮＡポリメラーゼが転写開始のために結合する部位で
あるＴ７プロモーターのみを認識する。このＴ７ポリメ
ラーゼは大腸菌プロモーターを認識しない。その結果、
ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡ配列をＴ７ベクターのプロモ
ーターおよびポリメラーゼ遺伝子の後に挿入し、かつタ
ーミネーターをＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡ配列の直後に
配置する場合、Ｔ７ベクターはＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮ
Ａ挿入物に相補的なＲＮＡを直接製造するであろう。
【００４０】また、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレ
オチド配列の決定は、ＤＮＡプローブを作るための基礎
を提供する。ＲＮＡプローブとＤＮＡプローブは共に、
体液中のＨＴＬＶ−ＩＩＩの検出に利用できるようにＨ
ＴＬＶ−ＩＩＩゲノムの特定領域を含まねばならない。
ＨＴＬＶ−ＩＩＩゲノムとＨＴＬＶ−Ｉおよび−ＩＩゲ
ノムとの間の相同は比較的少なく、プローブはＨＴＬＶ
−ＩＩＩに独特の領域（すなわちＨＴＬＶ−Ｉまたは−
ＩＩと共有しない領域）を含む。例えば、ＨＴＬＶ−Ｉ
ＩＩのｅｎｖ遺伝子領域のヌクレオチド配列が使用され
る。
【００４１】ウイルスＲＮＡまたはＤＮＡは、非常に高
い濃度のウイルスを含むことが知られている。例えば唾
液中のＨＴＬＶ−ＩＩＩを検出するのに用いられる。こ
れは、例えば唾液試料を変性し、これを濾紙に移し、ど
ちらかの型のプローブを用いてスクリーニングするドッ
トブロット（ｄｏｔ ｂｌｏｔ）の手段によって行うこ
とができる。試験体液として唾液を使用する場合、ＨＴ
ＬＶ−ＩＩＩの検出は血液を試験する場合よりも迅速か
つ容易であると考えられる。ＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプチドと反応するモノクローナ
ル抗体の生産 ＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプチドと反応するモノクローナ
ル抗体は、抗体産生細胞株によって生産される。抗体産
生細胞株は普通ハイブリドーマとして知られるハイブリ
ッド細胞株でありうる。このハイブリッド細胞は、ＨＴ
ＬＶ−ＩＩＩポリペプチドに対する抗体を生産する細胞
と、不滅性細胞（すなわちハイブリッド細胞に組織培養
の長期安定性を付与する細胞）との融合によって作られ
る。ハイブリッド細胞株を作る場合、その第一の融合パ
ートナー（抗体産生細胞）はＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプ
チドに対して免疫化した動物の脾臓細胞でありうる。こ
れとは別に、抗体産生細胞はＨＴＬＶ−ＩＩＩ抗原に対
する抗体を産生するところの単離されたＢリンパ球であ
りうる。このリンパ球は脾臓、末梢血液、リンパ節また
はその組織から得ることができる。第二の融合パートナ
ー（不滅細胞）はリンパ芽細胞または形質細胞腫細胞
（例えば、それ自身抗体産生能を有する悪性の骨髄腫細
胞）でありうる。
【００４２】ＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプチドに対するモ
ノクローナル抗体を産生するネズミハイブリドーマは、
マウス骨髄腫細胞とポリペプチドに対して免疫化したマ
ウスからの脾臓細胞との融合によって作られる。マウス
を免疫化するために、種々の異なる免疫感作方法を行う
ことができる。例えば、マウスは精製ポリペプチドの一
次および二次免疫感作を受ける。融合は標準方法におい
て行われる。コーラー（Ｋｏｈｌｅｒ）およびミルスタ
イン（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ）のネイチャー（ロンドン）２
５６，４９５−４９７（１９７５）；Ｒ．ケネット（Ｋ
ｅｎｎｅｔ）のモノクローナル抗体（ケネットら編集，
３６５−３６７頁，プレナム・プレス，ニューヨーク，
１９８０年）を参照されたい。
【００４３】次いで、ハイブリドーマをポリペプチドと
反応する抗体の産生についてスクリーニングする。これ
は当分野で知られたスクリーニング方法により行われ
る。
【００４４】抗体産生細胞株を作る別の方法は、抗体産
生細胞の形質転換による。例えば、ＨＴＬＶ−ＩＩＩポ
リペプチドに対して免疫化した動物から得られたＢリン
パ球を、ヒトＢリンパ球の場合にはエプスタイン−バー
ルウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ）
のようなウイルスを感染させて形質転換し、それにより
不滅性抗体産生細胞を得る。例えば、コズボー（Ｋｏｚ
ｂｏｒ）およびロドー（Ｒｏｄｏｒ）のＩｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４（３），７２−７９（１９８
３）を参照されたい。これとは別に、形質転換遺伝子ま
たは形質転換遺伝子産物を用いてＢリンパ球を形質転換
してもよい。
【００４５】ＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプチドに対するモ
ノクローナル抗体は、抗体産生ハイブリドーマをマウス
の腹腔内に注入し、適当な時間の経過後非常に高力価の
均一抗体を含む腹水を採取し、そして腹水からモノクロ
ーナル抗体を単離することにより大量に生産することが
できる。異種ハイブリドーマは照射マウスまたは胸腺欠
損ヌードマウスに注入すべきである。また、ＨＴＬＶ−
ＩＩＩポリペプチドを生産する細胞をインビトロで培養
し、その細胞培養基から分泌されたモノクローナル抗体
を単離する方法によっても抗体を得ることができる。こ
れらの方法により産生された抗体は診断検定法（例えば
体液中のＨＴＬＶ−ＩＩＩを検出する）および受動免疫
療法において使用できる。ＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプチ
ドと反応する抗体は、エイズまたは体液（例えば血液、
精液、唾液）中のＨＴＬＶ−ＩＩＩの存在を検出するた
めの診断試験、ならびに受動免疫療法のための基礎を提
供する。例えば、抗ｐ４１を生産し、慣用技術によりこ
れを固相に付着させ、そして試験すべき体液を固定化抗
体と接触させることが可能である。このようにして、体
液中のＨＴＬＶ−ＩＩＩ（抗原）を検出することがで
き、この方法はＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体を検出す
る試験よりもはるかに少ない偽陽性の試験結果をもたら
すだろう。
【００４６】本発明はさらに次の実施例により説明され
るであろう。実施例１ 超音波処理されたＤＮＡ断片の作製 ゲルにより精製したＨＴＬＶ−ＩＩＩ制限酵素断片１０
μｇを超音波処理して、平均５００ｂｐの大きさに断片
化した。超音波処理後、容量を減らすためにＤＮＡを
０．１×ＴＢＥ中のＤＥＡＥ−セルロースカラムに通し
た。ＤＥＡＥ結合ＤＮＡは０．２Ｍ ＮａＣｌ−ＴＥ
（２Ｍ ＮａＣｌ，１０ｍｍ トリス−ＨＣｌ ｐＨ
７．５、１ｍＭ ＥＤＴＡ）５ｍｌで洗い、次に１Ｍ
ＮａＣｌ−ＴＥで溶出してエタノール沈殿させた。超音
波処理したＤＮＡの大きさを１．２％アガロースゲルに
より測定した。所望の長さ（２００〜５００ｂｐ）のＤ
ＮＡ断片をゲルから溶出した。Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼ
を使って、超音波処理法によって生じた一本鎖ＤＮＡ末
端を修復および／または切り取った。ＤＮＡ断片をＴ４
ポリメラーゼと共にヌクレオチドを添加することなく３
７℃で５分間インキュベートして３′末端からヌクレオ
チドを除き、次に４種のヌクレオチド前駆体を最終濃度
が１００μＭとなるように加え、この反応混合物をさら
に３０分インキュベートして５′末端の一本鎖のつき出
た部分を修復した。６８℃で１０分間酵素を熱不活化す
ることによりこの反応を停止させた。ＤＮＡは１度フェ
ノール抽出し、エタノール沈殿させ、そしてＴＥ中に再
懸濁した。実施例２ ランダムにせん断したＤＮＡ断片のクローニング 超音波処理しかつ平滑末端に修復したＨＴＬＶ−ＩＩＩ
ＤＮＡ断片を、ＯＲＦ発現ベクターｐＭＲ１００のＳ
ｍａＩ部位に連結し、そして標準形質転換法を使って宿
主細胞ＬＧ９０を形質転換した。形質転換細胞のβ−ガ
ラクトシダーゼ陽性表現型は、その形質転換細胞をアン
ピシリン（２５μｇ／ｍｌ）含有マッコンキー寒天平板
上に採置して、表現型を３７℃で２０時間後に評価する
ことによって同定した。実施例３ ハイブリッドタンパク質分析 アンピシリン（２５μｇ／ｍｌ）含有Ｌブイヨン中で一
晩増殖させた飽和培養物からの細胞１０ｍｌ試料を遠心
分離し、細胞沈殿物を１．２倍に濃縮したレムリ（Ｌａ
ｅｍｍｌｉ）サンプル緩衝液５００μｌに再懸濁した。
細胞は渦巻混合し、１００℃で３分間沸騰させることに
より再懸濁した。次に、この溶菌液を２２ゲージ針を使
って繰り返しせん断し、溶菌液の粘度を低下させた。タ
ンパク質試料約１０μｌは７．５％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
（ＳＤＳ−ポリアクリルアミド）ゲルによる電気泳動処
理を行った。
【００４７】タウビン（Ｔｏｗｂｉｎ）らの方法に従っ
て、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルからニトロセルロース紙へタ
ンパク質を移行させた。移行後、このフィルターを０．
１％消泡剤Ａおよび０．０００１％メルチオレート（ｍ
ｅｒｔｈｉｏｌａｔｅ）を含有するＰＢＳ中の５％（ｗ
／ｖ）脱脂牛乳の溶液中で３７℃において２時間インキ
ュベートし、それにより全ての利用しうるタンパク質結
合部位を飽和させた。エイズ抗血清との反応は、大腸菌
溶菌液をあらかじめ吸収させた１％エイズ患者抗血清含
有の上記牛乳緩衝液中で行った。この反応は回転攪拌機
上の密閉プラスチック袋中で４℃において１８〜２４時
間実施した。このインキュベーション後、０．５％デオ
キシコール酸、０．１Ｍ ＮａＣｌ、０．５％トリトン
Ｘ−１００、１０ｍｍ燐酸塩緩衝液ｐＨ７．５および
０．１ｍＭ ＰＭＳＦを含有する溶液で室温において２
０分づつ３回フィルターを洗浄した。
【００４８】抗原−抗体反応を視覚化するために、 125
Ｉでヨウ素化した第二のヤギ抗ヒト抗体とニトロセルロ
ースとをインキュベートした。ヨウ素化抗体との反応
は、第一の抗体のときに使用したものと同じ牛乳緩衝液
中室温で３０分間実施した。その後先に述べたようにし
てニトロセルロースを洗浄し、コダックＸＡＲ５フィル
ムおよび増感スクリーンを使って−７０℃で感光した。実施例４ コロニーハイブリダイゼーションによるＨＴＬＶ−ＩＩ
Ｉ ＯＲＦライブラリーのスクリーニング 大腸菌ＬＧ９０形質転換体は意図するＤＮＡ領域（例え
ばＨＴＬＶ−ＩＩＩｇａｇ，ｅｎｖまたはＰｘ遺伝子の
特定配列）を含むＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡプローブを
用いてスクリーニングした。ニトロセルロースフィルタ
ー上でコロニーを増殖させ、ハイブリダイゼーションプ
ローブとしてニックトランスレーションされたＨＴＬＶ
−ＩＩＩ ＤＮＡを使い、グルンスタイン（Ｇｒｕｎｓ
ｔｅｉｎ）およびホグネス（Ｈｏｇｎｅｓｓ）の方法に
従ってスクリーニングした。
【００４９】一般には、制限エンドヌクレアーゼ消化に
よってＤＮＡ断片を切り取り、これをゲル精製し、そし
てニックトランスレーションにより０．５×１０8 ｃｐ
ｍ／μｇの比活性に32Ｐで標識した。〔Ｐ．Ｗ．Ｊ．リ
グビー（Ｒｉｇｂｙ）らのＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１
１３，２３７（１９７７）を参照〕ＤＮＡが固定された
ニトロセルロースフィルターは６×ＳＳＣ（０．９Ｍ
ＮａＣｌ／０．０９Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ７．
０）、５×デンハート溶液（Ｄｅｎｈａｒｄｔ’ｓ ｓ
ｏｌｕｔｉｏｎ：ポリビニルピロリドン，フイコルおよ
びウシ血清アルブミン各々０．０２％）、１０μｇ／ｍ
ｌの変性した超音波処理大腸菌ＤＮＡを用いて５５℃で
３〜５時間プレハイブリダイゼーションを行った。次い
で、変性ハイブリダイゼーションプローブを加えた同じ
溶液の新しい試料中にこのフィルターを入れた。ハイブ
リダイゼーションは６８℃で１６時間行った。その後フ
ィルターを５５℃において０．３×ＳＳＣで繰り返し洗
浄し、Ｘ線フィルムを使用して感光した。実施例５ エイズ患者からの血清と免疫反応するＨＴＬＶ−ＩＩＩ
の組換えＤＮＡによって生産されたペプチド 発現ベクターとしてｐＩＮ−ＩＩＩ−ｏｍｐＡ（ｏｍｐ
Ａ）を使用した。ｏｍｐＡはリポタンパク質（大腸菌中
で最も豊富なタンパク質）遺伝子プロモーター（ｌｐ
ｐ）およびｌａｃＵＶ５プロモーター−オペレーターを
有する（図１６参照）。ｏｍｐＡベクターはさらにｌａ
ｃリプレッサーをコードするＤＮＡセグメントを含み、
これは挿入ＤＮＡの発現をＩＰＴＧのようなｌａｃオペ
ロン誘導物質により調節させる。ｏｍｐＡクローニング
ベクターは３つの読み取り枠の全てに３つの特異な制限
酵素部位ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＢａｍＨＩ
を含み、そしてこれらの制限酵素部位のいずれかにＤＮ
Ａが挿入される。
【００５０】ベクターラムダｇｔＷＥＳラムダＢのＳｓ
ｔＩ部位に９Ｋｂの長いＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡ挿入
物を含む組換えクローンのラムダＢＨ１０から、種々の
制限断片を切り取った。次に、これらの制限断片を３つ
の読み取り枠の全てでｏｍｐＡベクターに挿入し、そし
て大腸菌ＪＡ２２１細胞を形質転換するのに使用した。
形質転換細胞は、ニックトランスレーションされたＨＴ
ＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡプローブを使用するｉｎ ｓｉｔ
ｕコロニーハイブリダイゼーションにより、ＨＴＬＶ−
ＩＩＩ ＤＮＡについてスクリーニングした。陽性クロ
ーンはＨＴＬＶ−ＩＩＩに特異的な抗体を使用してＨＴ
ＬＶ−ＩＩＩ抗原ペプチドの発現についてスクリーニン
グした。このために、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡ組換え
プラスミドを含む大腸菌細胞の溶菌液を１２．５％ＳＤ
Ｓ−ポリアクリルアミドゲルによる電気泳動にかけ、そ
してニトロセルロースフィルター上へ移行した。その
後、このフィルターを最初にエイズ患者からの十分の性
状決定された血清とインキュベートし、次に 125Ｉで標
識したヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体とインキュベートした。洗
浄したフィルターをオートラジオグラフィーにかけ、抗
ＨＴＬＶ−ＩＩＩ抗体と反応性のペプチドを同定した。
【００５１】抗ＨＴＬＶ−ＩＩＩ抗体と免疫反応性であ
るペプチドをコードするいくつかの遺伝子セグメントが
見出された。これらのうちの１つに１．１ＫｂのＥｃｏ
ＲＩ制限断片がある。この断片は３つの読み取り枠の全
てでｏｍｐＡベクター内に挿入した（図１６参照）。細
胞は１００ｍｇ／ｍｌのアンピシリンを含むＬブイヨン
中３７℃でＯＤ600 ＝０．２へと増殖させた。この時点
で細胞培養物を２つのアリコートに分割した。一方のア
リコートに最終濃度が２ｍＭとなるようにＩＰＴＧを加
えた（誘導）。他方のアリコートにはＩＰＴＧを加えな
かった（非誘導）。ＩＰＴＧ誘導の際に、３つのプラス
ミド構成物〔ＯｍｐＡ1 −Ｒ−６（Ｏ１Ｒ６），Ｏｍｐ
Ａ2 −Ｒ−７（Ｏ２Ｒ７）およびＯｍｐＡ3 −Ｒ−３
（Ｏ３Ｒ３）と命名される〕の全ての形質転換細胞は、
エイズ患者の血清中の抗ＨＴＬＶ−ＩＩＩ抗体と強く反
応する１５Ｋｄのペプチドを生産した（図１７参照、レ
ーン１は精製したＨＴＬＶ−ＩＩＩウイルス粒子；レー
ン２および３は非誘導および誘導のＯ１Ｒ６；レーン４
および５は非誘導および誘導のＯ２Ｒ７；レーン６およ
び７は非誘導および誘導のＯ３Ｒ３である）。この反応
性は正常人から採取した血清を用いた場合検出されな
い。
【００５２】ＨＴＬＶ−ＩＩＩゲノムのＤＮＡ配列デー
タは、ＥｃｏＲＩ断片の５′末端に位置するｐｏｌ遺伝
子内に１つの読み取り枠が存在することを示す。３つの
組換え構成物Ｏ１Ｒ６，Ｏ２Ｒ７およびＯ３Ｒ３のＤＮ
Ａ塩基配列決定は、これらの組換え体の各々が各ベクタ
ーのコーディング配列に結合したＨＴＬＶ−ＩＩＩプラ
スＤＮＡ鎖の異なる読み取り枠を有するということを証
明した。Ｏ３Ｒ３の場合のみ、挿入ＤＮＡの読み取り枠
がＯｍｐＡベクター内のシグナルペプチドによって定め
られるそれと一致するが、Ｏ１Ｒ６およびＯ２Ｒ７の場
合ｐｏｌ遺伝子セグメントＤＮＡの読み取り枠がベクタ
ーにより定められるそれと不一致である。（図１８参
照） ヌクレオチド位置２４−２９には６ｂｐのリボソーム結
合部位ＡＡＧＧＡＧ（シャイン−ダルガルノの配列、Ｓ
ｈｉｎｅ−Ｄａｌｇａｒｎｏ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）があ
り、これにより１１ｂｐ下流（位置４１−４３）には開
始コドンＡＴＧが存在する。３つの組換え体の全てによ
って合成される１５Ｋｄのペプチドは、この内部開始コ
ドンを使用して転写物から翻訳されると考えられる。こ
のことが真実である場合には、ペプチドは位置４１−４
３に存在するＡＴＧから出発して、位置４４６−４４８
に存在する停止コドンで終り、それによりＨＴＬＶ−Ｉ
ＩＩのｐｏｌ遺伝子の３′末端セグメントによりコード
される１３５アミノ酸残基から成るペプチドが生産され
る。
【００５３】ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡｐｏｌ遺伝子の
読み取り枠がベクターにより定められるそれと一致する
Ｏ３Ｒ３構成物は、１５Ｋｄペプチドの他に、１９Ｋｄ
と１６．５Ｋｄの大きさの２つの別のペプチドを生産し
た（図１７参照）。１９Ｋｄペプチドはさらに３５個の
アミノ酸残基を含み、そのうちの２１個はＯｍｐＡ3ベ
クターによってコードされるシグナルペプチドからのも
のであり、残りの１４個は挿入ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮ
Ａそれ自体によってコードされると思われる。１６．５
Ｋｄペプチドはプロセッシングを受けた１９Ｋｄペプチ
ド（シグナルペプチドが開裂している）でありうる。
【００５４】Ｏ１Ｒ６およびＯ２Ｒ７構成物もエイズ患
者の血清と弱く反応する約１７．５Ｋｄの別のペプチド
を生産する（図１７参照）。このペプチドの開始点は明
らかでない。１．１ＫｂのＥｃｏＲＩ断片は、ヌクレオ
チド位置３６０−９６５の間に延びるＳＯＲ（短い読み
取り枠）と呼ばれる第二のコーディング領域を含む（図
１６参照）。この領域内の５つのＡＵＧメチオニンコド
ンのうち４つがこの読み取り枠の５′末端の近くに存在
する。このＤＮＡセグメントは１９２，１８５，１７７
または１６４個のアミノ酸残基から成るペプチドをコー
ドできるだろう。しかしながら、この読み取り枠の５′
末端にははっきりと認めうるリボソーム結合部位が存在
しない。
【００５５】さらに、１５Ｋｄペプチドは実際にｐｏｌ
遺伝子から誘導されるという決定が多くの証拠により支
持された。第一に、Ｏ１Ｒ６、Ｏ２Ｒ７およびＯ３Ｒ３
（図１６）からの１．１Ｋｂ ＥｃｏＲＩ挿入物からの
３′末端ＳｔｕＩ／ＥｃｏＲＩ断片の欠失は１５Ｋｄペ
プチドの合成に影響を与えない。第二に、５′末端Ｅｃ
ｏＲＩ／ＮｄｅＩ断片のみを含むクローンがまだ同じ１
５Ｋｄペプチドを生産する。最後に、読み取り枠クロー
ニングベクターｐＭＲ１００内に適切に挿入されたＳＯ
Ｒコーディング配列をもつ種々のＤＮＡ断片を含む組換
えクローンは、エイズ患者の血清中に存在する抗ＨＴＬ
Ｖ−ＩＩＩ抗体との免疫反応性が非常に乏しいラムダＣ
Ｉ−ＨＴＬＶ−ＩＩＩ−β−ガラクトシダーゼ３分節融
合タンパク質を生産した。
【００５６】エイズ患者の血清中でウイルスｐｏｌ遺伝
子から誘導された１５Ｋｄペプチドに対する有意な免疫
反応性を検出した。この免疫反応性ペプチドの特性は、
ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動におけるＨＴ
ＬＶ−ＩＩＩウイルス粒子抗原の結合パターンに関し
て、拮抗阻害免疫検定法を用いて決定した。精製ＨＴＬ
Ｖ−ＩＩＩウイルス粒子をＳＤＳで処理し、電気泳動に
かけ、そしてニトロセルロースフィルターの上に移し
た。破壊したＨＴＬＶ−ＩＩＩウイルス粒子を含む同一
のフィルター細片を、Ｏ１Ｒ６，Ｏ２Ｒ７または対照細
菌クローンの溶菌液の存在下または不存在下に、十分に
性状決定がなされたエイズ患者の血清とインキュベート
した。エイズ患者の血清に含まれる抗ＨＴＬＶ−ＩＩＩ
抗体とフィルターにしみ込ませたウイルス粒子のタンパ
ク質との間の特異的免疫反応は、 125Ｉで標識したヤギ
抗ヒト抗体によって明らかにした。図１９に示すよう
に、Ｏ１Ｒ６の溶菌液はウイルスｐ３１タンパク質とエ
イズ血清との免疫反応を阻害するが、対照細胞の溶菌液
は阻害しない。この結果は、ウイルスｐｏｌ遺伝子の
３′末端によってコードされる組換え１５Ｋｄタンパク
質が他のウイルス粒子タンパク質ｐ３１の一部であると
いうことを示唆しており、ｐ３１がＨＴＬＶ−ＩＩＩウ
イルス粒子と一緒に同時精製される細胞タンパク質であ
るというある人々によって共有された考え方と対照をな
している。
【００５７】１５Ｋｄペプチドに対する抗体がエイズ患
者の血清中に広く含まれるかについても評価した。抗原
の源としてＯ１Ｒ６の溶菌液を使用するウエスターンブ
ロット分析において、エイズ患者と正常な人々からのコ
ード化血清のパネルを試験した。２０のエイズ血清の全
てが１５Ｋｄペプチドと反応し、８の正常対照はどれも
１５Ｋｄペプチドと反応しなかった。代表的な結果を図
２０に示す。これらのデータは、全部ではないにして
も、大部分のエイズ患者がウイルスｐ３１タンパク質に
対する抗体を産生することを示している。実施例６ ＨＴＬＶ−ＩＩＩの読み取り枠遺伝子セグメントの大腸
菌内での発現 ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡをラムダＢＨ１０から切り取
った。このラムダＢＨ１０はベクターラムダｇｔＷＥＳ
ラムダＢ内に挿入したＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡの９Ｋ
ｂセグメントを含む先に作製した組換えラムダファージ
である。このＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡを超音波処理
し、約０．５ＫｂのＤＮＡ断片をゲル電気泳動により精
製し、末端修復し、そしてＯＲＦベクターｐＭＲ１００
のＳｍａＩ部位に挿入した（図２１参照）。このベクタ
ーはハイブリッドコーディング配列〔バクテリオファー
ジラムダのラムダＣＩ遺伝子のＮ末端（５′セグメン
ト）がＮ末端欠失ｌａｃＩＺ遺伝子（３′セグメント）
に融合される〕を含む第二ＤＮＡ断片に結合した細菌ｌ
ａｃプロモーターＤＮＡセグメントを含む。ＳｍａＩク
ローニング部位を含む短いリンカーＤＮＡ断片を、ｌａ
ｃＩＺコーディングＤＮＡの上流でフレームシフト変異
が起こるような方法で、これらの２つの断片の間に挿入
した。その結果、ｐＭＲ１００はＬａｃ- 宿主大腸菌Ｌ
Ｇ９０の細胞内に導入したとき検出可能なβ−ガラクト
シダーゼ活性を示さない。ＳｍａＩクローニング部位に
読み取り枠を含む外来性ＤＮＡ（この場合はＨＴＬＶ−
ＩＩＩ ＤＮＡ）を挿入すると、その挿入コーディング
配列がラムダＣＩリーダーおよびｌａｃＩＺ遺伝子の双
方に関して正しい読み取り枠内にある場合、フレームシ
フト変異を逆転させることができる。形質転換細胞はマ
ッコンキー平板上でスクリーニングして、β−ガラクト
シダーゼ酵素活性をその場で発現する個々のクローンを
検出した。
【００５８】スクリーニングされた６０００のアンピシ
リン耐性形質転換細胞のうち、約３００がβ−ガラクト
シダーゼ活性を発現するとわかった。32Ｐで標識し、ニ
ックトランスレーションされたＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮ
Ａをプローブとして使用するコロニーハイブリダイゼー
ションは、これらＬａｃ+ クローンの全てがＨＴＬＶ−
ＩＩＩ ＤＮＡを含むことを明らかにした。Ｌａｃ+ ク
ローンにおいて、ｐＭＲ１００のＳｍａＩ部位に挿入さ
れたＨＴＬＶ−ＩＩＩ断片はラムダＣＩリーダーセグメ
ントによって定められる読み取り枠に停止コドンを含ん
ではならず、またｌａｃＩＺ遺伝子も正しい翻訳読み取
り枠で存在しなければならない。３要素融合遺伝子は、
Ｎ末端にラムダＣＩタンパク質の一部をもち、中間にＨ
ＴＬＶ−ＩＩＩセグメントをもち、そしてＣ末端にｌａ
ｃＩＺポリペプチドをもつ３分節融合タンパク質として
発現された。
【００５９】Ｌａｃ+ クローンによって生産されたタン
パク質は、ラムダＣＩ−β−ガラクトシダーゼ融合タン
パク質を生産する対照Ｌａｃ+ クローンｐＭＲ２００の
溶菌液と共に７．５％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル
上でその溶菌液を分割することにより分析した。ｐＭＲ
２００のｌａｃＩＺ遺伝子は、ｐＭＲ１００のｌａｃＩ
Ｚ遺伝子が活性β−ガラクトシダーゼを生産するために
ラムダＣＩ遺伝子と同じ読み取り枠になるべく１個の塩
基対を欠失している点を除いてｐＭＲ１００のそれと同
じである。β−ガラクトシダーゼおよびその融合タンパ
ク質の非常に大きな寸法に基づいて、それらはＳＤＳ−
ポリアクリルアミドゲル上で溶菌液中の大部分のタンパ
ク質から分離され、そして図２２．Ａに示すようにクー
マシーブリリアントブルー染色によって簡単に同定する
ことができる。ＨＴＬＶ−ＩＩＩＤＮＡを含むＬａｃ+
クローンのいくつかは、ラムダＣＩ−ｌａｃＩＺ融合タ
ンパク質よりも大きな（１５０００〜２７０００ダルト
ン）ポリペプチドを生産する。これらの発見はＤＮＡ挿
入物の長さが７００ｂｐ以下であるというデータと一致
する。β−ガラクトシダーゼ融合タンパク質は全細胞タ
ンパク質の約１〜２％を占めた。
【００６０】Ｌｚｃ+ クローンにより生産されたペプチ
ドは、エイズ患者の血清との免疫反応についてウエスタ
ーンブロット分析により試験した。Ｌａｃ+ クローンの
溶菌液をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルで電気泳動処
理した後、それらをニトロセルロースフィルターへ移行
させた。これらのタンパク質ブロットを最初にエイズ患
者の血清と反応させ、次に 125Ｉで標識したヤギ抗ヒト
ＩｇＧと反応させた。図２２．Ｂのオートラジオグラフ
は代表的な融合タンパク質とエイズ患者血清との免疫反
応性を示す。組換えペプチドはこの他に抗β−ガラクト
シダーゼ抗血清とも反応し、それらが一般構造式ラムダ
ＣＩ−ＨＴＬＶ−ＩＩＩペプチド−ＬａｃＩＺを有する
という提案と一致した。ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡ挿入
物を含まない陰性対照のｐＭＲ１００およびｐＭＲ２０
０の免疫反応パターンから、この特別のエイズ血清は宿
主大腸菌のいくつかの細菌タンパク質と反応する抗体を
含むことが明白である。このことはエイズ患者が通常多
数の細菌に感染していることからして驚くにあたらな
い。大腸菌抽出物を結合させたセファロース４Ｂを用い
てエイズ患者の血清を吸着させると、バックグランド免
疫反応がある程度減少するが、それは完全には消失しな
かった。
【００６１】約３００の独立したＨＴＬＶ−ＩＩＩ Ｄ
ＮＡ含有Ｌａｃ+ コロニーは、クーマシーブリリアント
ブルー染色およびウエスターンブロッティングを使用し
てＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルにより分析した。そ
れらのうち約半数は長さが３００〜６００ｂｐのＤＮＡ
挿入物に対応して、約１００〜２００個のアミノ酸から
なる付加的ペプチドを含む融合タンパク質を発現するこ
とがわかった。これらの融合タンパク質のうち２０はエ
イズ患者からの血清と特異的に反応することが見出され
た。非反応性クローンは恐らく、抗体と反応しないよう
な状態に折り重なったペプチドを含むか、あるいはエイ
ズ患者の体内で免疫原性がないＨＴＬＶ−ＩＩＩタンパ
ク質分子の領域に相当するペプチドを含むであろう。Ｌ
ａｃ+ クローンの残りの半数は、大きさがラムダＣＩ−
β−ガラクトシダーゼタンパク質と明らかに異なる融合
タンパク質を発現した。このグループの融合タンパク質
からはエイズ患者の血清と反応するものが全く見出せな
かった。
【００６２】Ｌａｃ+ ＯＲＦクローンからのＨＴＬＶ−
ＩＩＩ ＤＮＡ挿入物は、サザンブロッティング法を使
ってＨＴＬＶ−ＩＩＩゲノムの特定セグメントへマッピ
ングされた。これらの実験において、各プラスミドクロ
ーンはニックトランスレーションにより32Ｐで標識し、
そして一群のＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡ制限断片とハイ
ブリダイゼーションを行った。このハイブリダイゼーシ
ョン分析は、ＤＮＡ塩基配列決定データと一致するＯＲ
Ｆ−Ａ，ＯＲＦ−Ｂ，ＯＲＦ−ＣおよびＯＲＦ−Ｄ（図
２．Ａ参照）と名づけた４つの読み取り枠セグメントへ
と全てのＬａｃ+ ＯＲＦクローンをマッピングした。ｇ
ａｇおよびｐｏｌ遺伝子のコーディング領域に相当する
読み取り枠ＯＲＦ−Ａおよび−Ｂは、それぞれ１．５Ｋ
ｂおよび３．０Ｋｂの長さである。ＯＲＦ−Ｃは約０．
６Ｋｂの長さであり、ＯＲＦ−Ｂ領域とわずかに重なっ
ており、そして２１Ｋｄのポリペプチドをコードするこ
とができる。ＯＲＦ−Ｃの位置およびｐｏｌ遺伝子とそ
れとの重複部分は、ＨＴＬＶ−Ｉおよび−ＩＩのｅｎｖ
遺伝子構造を暗示する。しかしながら、ｓｏｒ（ｓｈｏ
ｒｔ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ，短い読
み取り枠）と命名したＯＲＦ−Ｃは完全なエンベロープ
タンパク質をコードするにはあまりに短かすぎる。第四
の読み取り枠のＯＲＦ−Ｄはその長さが２．５Ｋｂであ
り、主要エンベロープ糖タンパク質の大型前駆体と３′
末端から誘導される別のタンパク質（ＨＴＬＶ−Ｉおよ
び−ＩＩのｌｏｒ産物に類似している）との両方をコー
ドできるだろう。ｅｎｖ−ｌｏｒと命名したＨＴＬＶ−
ＩＩＩのこの遺伝子領域は、ＨＴＬＶ−ＩおよびＨＴＬ
Ｖ−ＩＩのｌｏｒの少なくとも２倍の長さであり、この
領域に１つまたは２つ以上のタンパク質がコードされて
いるかどうか現在のところはっきりしない。
【００６３】多数のクローンを分析するために、サザン
ブロッティングおよびＤＮＡ塩基配列決定の両方法を使
用した。図２．Ｂに示すように、エイズ患者の血清と免
疫反応する融合タンパク質を発現するＬａｃ+ ＯＲＦク
ローンは、ＯＲＦ−Ａ（例えば＃１７５および＃１９
１）、ＯＲＦ−Ｂ（例えば＃１３，３１および１６２）
またはＯＲＦ−Ｄ（例えば＃１１３，１２１および１２
７）の領域に位置し、ｓｏｒ領域には存在しなかった。
これらの領域の全てのタンパク質が免疫反応性であると
は限らない（例えばＯＲＦ−Ｄに位置するＯＲＦクロー
ン＃７６）。
【００６４】ＨＴＬＶ−ＩＩＩの読み取り枠構造の分析
は、どの読み取り枠がｅｎｖ遺伝子に相当するかについ
ての疑問を提起した。ＨＴＬＶ−ＩＩＩのｅｎｖ−ｌｏ
ｒ領域が推定されるｌｏｒ遺伝子の他にｅｎｖ遺伝子の
全部または一部を含むと考えられる。最近になって、Ｈ
ＴＬＶ−Ｉのｌｏｒ遺伝子はウイルス活性化および形質
転換の過程に関連した４２Ｋｄタンパク質をコードする
ことが示唆された。ＯＲＦクローンの１つ（図２．Ｂの
＃１２７）の溶菌液を、ウエスターンブロット法に基づ
くストリップラジオイムノアッセイで、２０人のエイズ
患者と１２人の正常人からの血清に対して試験した場
合、ラムダＣＩ−ＨＴＬＶ−ＩＩＩ−β−ガラクトシダ
ーゼ融合タンパク質に対する免疫反応は１９人のエイズ
患者血清において検出され、正常対照からは全く検出さ
れなかった。この結果は、ＯＲＦクローン＃１２７に含
まれるｅｎｖ−ｌｏｒ領域の部分によりコードされるタ
ンパク質がＨＴＬＶ−ＩＩＩ感染細胞内で生産され、そ
してエイズ患者の、全部ではないにしても、大部分に抗
体を産生させるということを示している。産業上の適用可能性 本発明は、体液中のＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡの存在に
関するスクリーニングおよびエイズの診断に利用され
る。均 等 物 本明細書で述べた特定の物質および方法に均等の多数の
物質および方法が、単に日常的な実験法を使用すること
により当業者によって認識され、また確認されるであろ
う。このような均等物は本発明の範囲内であると考えら
れ、先の特許請求の範囲に包含される。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡを表わす。図
１．ａはゲノムが制限酵素ＳｓｔＩによって切断される
部位を示し、図１．ｂは制限酵素Ｋｐｎ，ＥｃｏＲＩお
よびＨｉｎｄＩＩＩの作用により作られたＨＴＬＶ−Ｉ
ＩＩゲノムの断片を示す。
【図２】図２はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡを示す。図
２．Ａはゲノム内の制限酵素部位を示し、図２．Ｂは読
み取り枠クローン内のＤＮＡ挿入物のＨＴＬＶ−ＩＩＩ
ゲノム中での位置を示す。（＋）および（−）は、それ
ぞれＯＲＦベクターを用いて形質転換した細胞により発
現された融合タンパク質とエイズ患者の血清との反応性
および非反応性を示す。
【図３】図３はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレオチ
ド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定上のア
ミノ酸配列（その１）を示す。ヌクレオチド配列の上に
制限酵素部位を示す。
【図４】図４はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレオチ
ド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状のア
ミノ酸配列（その２）を示す。ヌクレオチド配列の上に
制限酵素部位を示す。
【図５】図５はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレオチ
ド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状のア
ミノ酸配列（その３）を示す。ヌクレオチド配列の上に
制限酵素部位を示す。
【図６】図６はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレオチ
ド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状のア
ミノ酸配列（その４）を示す。ヌクレオチド配列の上に
制限酵素部位を示す。
【図７】図７はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレオチ
ド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状のア
ミノ酸配列（その５）を示す。ヌクレオチド配列の上に
制限酵素部位を示す。
【図８】図８はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレオチ
ド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状のア
ミノ酸配列（その６）を示す。ヌクレオチド配列の上に
制限酵素部位を示す。
【図９】図９はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレオチ
ド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状のア
ミノ酸配列（その７）を示す。ヌクレオチド配列の上に
制限酵素部位を示す。
【図１０】図１０はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレ
オチド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状
のアミノ酸配列（その８）を示す。ヌクレオチド配列の
上に制限酵素部位を示す。
【図１１】図１１はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレ
オチド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状
のアミノ酸配列（その９）を示す。ヌクレオチド配列の
上に制限酵素部位を示す。
【図１２】図１２はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレ
オチド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状
のアミノ酸配列（その１０）を示す。ヌクレオチド配列
の上に制限酵素部位を示す。
【図１３】図１３はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレ
オチド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状
のアミノ酸配列（その１１）を示す。ヌクレオチド配列
の上に制限酵素部位を示す。
【図１４】図１４はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレ
オチド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状
のアミノ酸配列（その１２）を示す。ヌクレオチド配列
の上に制限酵素部位を示す。
【図１５】図１５はＨＴＬＶ−ＩＩＩｅｎｖ−β−ガラ
クトシダーゼ融合タンパク質のＳＤＳ−ポリアクリルア
ミドゲル上での位置を示すイムノブロットの写真であ
る。
【図１６】図１６はゲノムが制限酵素ＥｃｏＲＩによっ
て切断される部位、およびＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡを
保有する組換えプラスミドの作製を示す。
【図１７】図１７は組換え構成物ｏｍｐＡ１−Ｒ−６，
ｏｍｐＡ２−Ｒ−７およびｏｍｐＡ３−Ｒ−３（この中
に１．１ＫｂのＥｃｏＲＩ ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ｃＤＮ
Ａ制限断片が挿入された）を用いて形質転換した細菌細
胞により生産されたペプチドのニトロセルロースフィル
ター上での位置を示すイムノブロットの写真である。
【図１８】図１８はｏｍｐＡシグナルペプチドのヌクレ
オチド配列、および組換えプラスミドｏｍｐＡ１−Ｒ−
６，ｏｍｐＡ２−Ｒ−７，ｏｍｐＡ３−Ｒ−３の関連領
域を示す。
【図１９】図１９はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡ組換えプ
ラスミドｏｍｐＡ１−Ｒ−６を含む大腸菌の溶菌液によ
るＨＴＬＶ−ＩＩＩ抗原とエイズ血清との間の反応の阻
害（レーン１−５）、および大腸菌対照細胞の溶菌液に
よる上記反応の非阻害（レーン６−１０）を示すイムノ
ブロットの写真である。
【図２０】図２０は正常人（レーン１−３）およびエイ
ズ患者（レーン４−１１）からの血清中での、ＨＴＬＶ
−ＩＩＩ ｃＤＮＡの１．１Ｋｂ ＥｃｏＲＩ ＨＴＬ
Ｖ−ＩＩＩ制限断片によりコードされるペプチドに対す
る抗体の有無を示すイムノブロットの写真である。精製
したＨＴＬＶ−ＩＩＩウイルス（パネルＡ）、または細
菌クローンｏｍｐＡ１−Ｒ−６（Ｏ１Ｒ６）の全細胞溶
菌液（パネルＢ）を血清試料と反応させた。
【図２１】図２１はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡを有する
読み取り枠発現ベクターｐＭＲ１００を示す。
【図２２】図２２はラムダＣＩ−ＨＴＬＶ−ＩＩＩ−β
−ガラクトシダーゼ融合タンパク質を示す。図２２．Ａ
はラムダＣＩ−ＨＴＬＶ−ＩＩＩ−β−ガラクトシダー
ゼ融合タンパク質のＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上
での位置を示すイムノブロットの写真であり、図２２．
Ｂは上記タンパク質とエイズ患者血清との免疫反応を示
す写真である。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成６年５月１２日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正内容】
【特許請求の範囲】
【請求項６０】 標識がラジオアイソトープである、請
求項５９に記載の単離されたＲＮＡ転写物。 ─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成６年１１月４日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】図１はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡを表わす。図
１．ａはゲノムが制限酵素ＳｓｔＩによって切断される
部位を示し、図１．ｂは制限酵素Ｋｐｎ，ＥｃｏＲＩお
よびＨｉｎｄＩＩＩの作用により作られたＨＴＬＶ−Ｉ
ＩＩゲノムの断片を示す。
【図２】図２はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡを示す。図
２．Ａはゲノム内の制限酵素部位を示し、図２．Ｂは読
み取り枠クローン内のＤＮＡ挿入物のＨＴＬＶ−ＩＩＩ
ゲノム中での位置を示す。（＋）および（−）は、それ
ぞれＯＲＦベクターを用いて形質転換した細胞により発
現された融合タンパク質とエイズ患者の血清との反応性
および非反応性を示す。
【図３】図３はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレオチ
ド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定上のア
ミノ酸配列（その１）を示す。ヌクレオチド配列の上に
制限酵素部位を示す。
【図４】図４はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレオチ
ド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状のア
ミノ酸配列（その２）を示す。ヌクレオチド配列の上に
制限酵素部位を示す。
【図５】図５はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレオチ
ド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状のア
ミノ酸配列（その３）を示す。ヌクレオチド配列の上に
制限酵素部位を示す。
【図６】図６はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレオチ
ド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状のア
ミノ酸配列（その４）を示す。ヌクレオチド配列の上に
制限酵素部位を示す。
【図７】図７はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレオチ
ド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状のア
ミノ酸配列（その５）を示す。ヌクレオチド配列の上に
制限酵素部位を示す。
【図８】図８はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレオチ
ド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状のア
ミノ酸配列（その６）を示す。ヌクレオチド配列の上に
制限酵素部位を示す。
【図９】図９はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレオチ
ド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状のア
ミノ酸配列（その７）を示す。ヌクレオチド配列の上に
制限酵素部位を示す。
【図１０】図１０はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレ
オチド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状
のアミノ酸配列（その８）を示す。ヌクレオチド配列の
上に制限酵素部位を示す。
【図１１】図１１はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレ
オチド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状
のアミノ酸配列（その９）を示す。ヌクレオチド配列の
上に制限酵素部位を示す。
【図１２】図１２はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレ
オチド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状
のアミノ酸配列（その１０）を示す。ヌクレオチド配列
の上に制限酵素部位を示す。
【図１３】図１３はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレ
オチド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状
のアミノ酸配列（その１１）を示す。ヌクレオチド配列
の上に制限酵素部位を示す。
【図１４】図１４はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡのヌクレ
オチド配列、および４つの最も長い読み取り枠の推定状
のアミノ酸配列（その１２）を示す。ヌクレオチド配列
の上に制限酵素部位を示す。
【図１５】図１５はＨＴＬＶ−ＩＩＩｅｎｖ−β−ガラ
クトシダーゼ融合タンパク質のＳＤＳ−ポリアクリルア
ミドゲル上での位置を示すイムノブロットの写真（電気
泳動の写真）である。
【図１６】図１６はゲノムが制限酵素ＥｃｏＲＩによっ
て切断される部位、およびＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡを
保有する組換えプラスミドの作製を示す。
【図１７】図１７は組換え構成物ｏｍｐＡ１−Ｒ−６，
ｏｍｐＡ２−Ｒ−７およびｏｍｐＡ３−Ｒ−３（この中
に１．１ＫｂのＥｃｏＲＩ ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ｃＤＮ
Ａ制限断片が挿入された）を用いて形質転換した細菌細
胞により生産されたペプチドのニトロセルロースフィル
ター上での位置を示すイムノブロットの写真（電気泳動
の写真）である。
【図１８】図１８はｏｍｐＡシグナルペプチドのヌクレ
オチド配列、および組換えプラスミドｏｍｐＡ１−Ｒ−
６，ｏｍｐＡ２−Ｒ−７，ｏｍｐＡ３−Ｒ−３の関連領
域を示す。
【図１９】図１９はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡ組換えプ
ラスミドｏｍｐＡ１−Ｒ−６を含む大腸菌の溶菌液によ
るＨＴＬＶ−ＩＩＩ抗原とエイズ血清との間の反応の阻
害（レーン１−５）、および大腸菌対照細胞の溶菌液に
よる上記反応の非阻害（レーン６−１０）を示すイムノ
ブロットの写真（電気泳動の写真）である。
【図２０】図２０は正常人（レーン１−３）およびエイ
ズ患者（レーン４−１１）からの血清中での、ＨＴＬＶ
−ＩＩＩ ｃＤＮＡの１．１Ｋｂ ＥｃｏＲＩ ＨＴＬ
Ｖ−ＩＩＩ制限断片によりコードされるペプチドに対す
る抗体の有無を示すイムノブロットの写真（電気泳動の
写真）である。精製したＨＴＬＶ−ＩＩＩウイルス（パ
ネルＡ）、または細菌クローンｏｍｐＡ１−Ｒ−６（Ｏ
１Ｒ６）の全細胞溶菌液（パネルＢ）を血清試料と反応
させた。
【図２１】図２１はＨＴＬＶ−ＩＩＩ ＤＮＡを有する
読み取り枠発現ベクターｐＭＲ１００を示す。
【図２２】図２２はラムダＣＩ−ＨＴＬＶ−ＩＩＩ−β
−ガラクトシダーゼ融合タンパク質を示す。図２２．Ａ
はラムダＣＩ−ＨＴＬＶ−ＩＩＩ−β−ガラクトシダー
ゼ融合タンパク質のＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上
での位置を示すイムノブロットの写真（電気泳動の写
真）であり、図２２．Ｂは上記タンパク質とエイズ患者
血清との免疫反応を示す写真（電気泳動の写真）であ
る。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 9282−4Ｂ 21/08 9161−4Ｂ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 9453−4Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 33/569 Ｈ 33/58 Ａ 33/60 Ｚ // Ｃ１２Ｎ 1/21 8828−4Ｂ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims (34)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ｃＤＮＡを含む組換
    えベクターを用いて形質転換した細胞により発現される
    免疫反応性ＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプチド。
  2. 【請求項２】 ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ｃＤＮＡがｅｎｖ遺
    伝子配列をコードする、請求項１記載のポリペプチド。
  3. 【請求項３】 後天性免疫不全症候群の患者からの血清
    またはＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体を含む血清と免疫
    反応性である、請求項２記載のポリペプチド。
  4. 【請求項４】 ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ｃＤＮＡがｅｎｖ−
    ｌｏｒ遺伝子配列をコードする、請求項１記載のポリペ
    プチド。
  5. 【請求項５】 後天性免疫不全症候群の患者からの血清
    またはＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体を含む血清と免疫
    反応性である、請求項４記載のポリペプチド。
  6. 【請求項６】 ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ｃＤＮＡがＥｃｏＲ
    Ｉ制限断片である、請求項１記載のポリペプチド。
  7. 【請求項７】 後天性免疫不全症候群の患者からの血清
    またはＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体を含む血清と免疫
    反応性である、請求項６記載のポリペプチド。
  8. 【請求項８】 単離されたＨＴＬＶ−ＩＩＩエンベロー
    プポリペプチド。
  9. 【請求項９】 ｅｎｖ−ｌｏｒ遺伝子配列によりコード
    される単離されたＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプチド。
  10. 【請求項１０】 ＨＴＬＶ−ＩＩＩ遺伝子をコードする
    単離されたｃＤＮＡ。
  11. 【請求項１１】 ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ｅｎｖ遺伝子をコ
    ードする請求項１０記載のｃＤＮＡ。
  12. 【請求項１２】 ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ｅｎｖ−ｌｏｒ遺
    伝子配列をコードする請求項１０記載のｃＤＮＡ。
  13. 【請求項１３】 後天性免疫不全症候群の患者からの血
    清またはＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体を含む血清と免
    疫反応性であるポリペプチドをコードするＨＴＬＶ−Ｉ
    ＩＩ ｃＤＮＡのＥｃｏＲＩ制限断片をコードする、請
    求項１０記載のｃＤＮＡ。
  14. 【請求項１４】 免疫反応性のＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペ
    プチドをコードする単離ｃＤＮＡ。
  15. 【請求項１５】 後天性免疫不全症候群の患者からの血
    清またはＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体を含む血清と免
    疫反応性であるエンベロープポリペプチドをコードす
    る、請求項１４記載の単離ｃＤＮＡ。
  16. 【請求項１６】 ＥｃｏＲＩ制限断片である請求項１４
    記載の単離ｃＤＮＡ。
  17. 【請求項１７】 ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ウイルスに特異的
    なＨＴＬＶ−ＩＩＩゲノムの部分と本質的に相同である
    ＤＮＡ配列からなるＤＮＡプローブ。
  18. 【請求項１８】 ＤＮＡ配列がエイズ患者の血清と免疫
    反応性であるポリペプチドをコードするＨＴＬＶ−ＩＩ
    Ｉゲノムの部分と本質的に相同である、請求項１７記載
    のＤＮＡプローブ。
  19. 【請求項１９】 ＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプチドが少な
    くとも１つの他のポリペプチドに結合してなるハイブリ
    ッドタンパク質。
  20. 【請求項２０】 ＨＴＬＶ−ＩＩＩポリペプチドが指示
    ポリペプチドに結合してなる、請求項１９記載のハイブ
    リッドタンパク質。
  21. 【請求項２１】 指示ポリペプチドがβ−ガラクトシダ
    ーゼである請求項２０記載のハイブリッドタンパク質。
  22. 【請求項２２】 ＨＴＬＶ−ＩＩＩのｅｎｖ遺伝子の単
    離されたＲＮＡ転写物。
  23. 【請求項２３】 検出可能なシグナルを発する標識がつ
    いている、請求項２２記載のＲＮＡ転写物。
  24. 【請求項２４】 標識がラジオアイソトープからなる請
    求項２３記載のＲＮＡ転写物。
  25. 【請求項２５】 宿主細胞内へ挿入したとき発現可能な
    ＨＴＬＶ−ＩＩＩＤＮＡを含む組換えベクター。
  26. 【請求項２６】 ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ｃＤＮＡを含むｏ
    ｍｐＡベクター。
  27. 【請求項２７】 ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ｃＤＮＡを含むｐ
    ＭＲ１００ベクター。
  28. 【請求項２８】 （ａ）ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ｃＤＮＡを
    切断してｃＤＮＡ断片をつくり； （ｂ）該ｃＤＮＡ断片を発現ベクターに挿入して組換え
    ベクターを作製し； （ｃ）該組換えベクターを用いて適当な宿主細胞を形質
    転換させ；そして （ｄ）形質転換宿主細胞を、挿入したＨＴＬＶ−ＩＩＩ
    ｃＤＮＡによってコードされるポリペプチドを発現さ
    せるのに十分な条件下で培養する；ことから成るＨＴＬ
    Ｖ−ＩＩＩポリペプチドの生産方法。
  29. 【請求項２９】 切断工程がＨＴＬＶ−ＩＩＩ ｃＤＮ
    Ａを制限エンドヌクレアーゼで消化してｃＤＮＡの制限
    断片をつくることから成る、請求項２８記載の方法。
  30. 【請求項３０】 切断工程がＨＴＬＶ−ＩＩＩ ｃＤＮ
    Ａを剪断してｃＤＮＡ断片を得ることから成る、請求項
    ２８記載の方法。
  31. 【請求項３１】 （ａ）ＨＴＬＶ−ＩＩＩ ゲノムｃＤ
    ＮＡを制限エンドヌクレアーゼＳｓｔ１で切断し； （ｂ）切断したｃＤＮＡを制限エンドヌクレアーゼで十
    分に消化して、ｅｎｖ遺伝子の少なくとも一部分を包含
    する制限断片を生成し； （ｃ）該制限断片を単離し； （ｄ）該制限断片から長さが約２００〜５００塩基対の
    ＤＮＡ断片をつくり； （ｅ）約２００〜５００塩基対の該ＤＮＡ断片を単離
    し； （ｆ）ｅｎｖ遺伝子産物およびβ−ガラクトシダーゼか
    ら成るハイブリッドタンパク質を生産するために、読み
    取り枠発現ベクターｐＭＲ１００内に単離したＤＮＡ断
    片を挿入し； （ｇ）該ベクターを用いてｌａｃＺ- 大腸菌細胞を形質
    転換させ； （ｈ）形質転換細胞をマツコンキー（Ｍａｃ Ｃｏｎｋ
    ｅｙ）寒天平板上に採置し、コロニーを形成させるのに
    十分な条件下に該平板を保持し、そして赤色を示す細胞
    コロニーを選択し； （ｉ）選択したコロニーからの形質転換細胞を、ハイブ
    リッドタンパク質を発現させるのに十分な条件下で培養
    し； （ｊ）培養した形質転換細胞から細胞タンパク質を得； （ｋ）得られた細胞タンパク質を分離し； （ｌ）分離したタンパク質をエイズ患者の血清と接触さ
    せて、その血清と免疫反応性のタンパク質を同定し；そ
    して （ｍ）該免疫反応性タンパク質を単離する；ことから成
    るＨＴＬＶ−ＩＩＩ エンベロープポリペプチドの生産
    方法。
  32. 【請求項３２】 請求項３１記載の方法により生産され
    た融合タンパク質。
  33. 【請求項３３】 ｅｎｖ遺伝子発現産物をハイブリッド
    タンパク質の残部から分離する工程をさらに含む、請求
    項３１記載の方法。
  34. 【請求項３４】 請求項３３記載の方法により生産され
    たＨＴＬＶ−ＩＩＩエンベロープポリペプチド。
JP6098231A 1984-10-10 1994-04-12 Ｈｔｌｖ−ｉｉｉ ｄｎａのクローニングおよび発現 Pending JPH07149796A (ja)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US65933984A 1984-10-10 1984-10-10
US659339 1984-10-10
US06/693,866 US9328391B1 (en) 1984-08-22 1985-01-23 Cloning and expression of HIV-1 DNA
US693866 2000-10-23

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP60226658A Division JPS6226300A (ja) 1984-10-10 1985-10-11 Ｈｔｌｖ−３ｄｎａのクロ−ニングおよび発現

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2002137039A Division JP3569766B2 (ja) 1984-10-10 2002-05-13 Ｈｔｌｖ−ｉｉｉｄｎａのクローニングおよび発現

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPH07149796A true JPH07149796A (ja) 1995-06-13

Family

ID=27097813

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP6098231A Pending JPH07149796A (ja) 1984-10-10 1994-04-12 Ｈｔｌｖ−ｉｉｉ ｄｎａのクローニングおよび発現
JP2002137039A Expired - Lifetime JP3569766B2 (ja) 1984-10-10 2002-05-13 Ｈｔｌｖ−ｉｉｉｄｎａのクローニングおよび発現
JP2004076079A Pending JP2004224798A (ja) 1984-10-10 2004-03-17 Ｈｔｌｖ−ｉｉｉｄｎａのクローニングおよび発現

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2002137039A Expired - Lifetime JP3569766B2 (ja) 1984-10-10 2002-05-13 Ｈｔｌｖ−ｉｉｉｄｎａのクローニングおよび発現
JP2004076079A Pending JP2004224798A (ja) 1984-10-10 2004-03-17 Ｈｔｌｖ−ｉｉｉｄｎａのクローニングおよび発現

Country Status (6)

Country Link
US (1) US9328391B1 (ja)
EP (2) EP0552850B1 (ja)
JP (3) JPH07149796A (ja)
AT (2) ATE98992T1 (ja)
CA (1) CA1341409C (ja)
DE (3) DE3587697T4 (ja)

Families Citing this family (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3588254T2 (de) 1984-10-18 2008-06-26 Institut Pasteur GAG-Antigen und dessen Verwendung zum Nachweis von LAV-Infektion, sowie in immunogenen Zusammensetzungen
CA1341423C (en) * 1984-10-31 2003-03-04 Paul A. Luciw Recombinant proteins of viruses associated with lymphadenopathy syndrome and/or acquired immune deficiency syndrome
US7285271B1 (en) 1984-10-31 2007-10-23 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Antigenic composition comprising an HIV gag or env polypeptide
US7393949B1 (en) 1987-12-24 2008-07-01 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Human immunodeficiency virus (HIV) nucleotide sequences
US7273695B1 (en) * 1984-10-31 2007-09-25 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. HIV immunoassays using synthetic envelope polypeptides
US5008182A (en) * 1986-01-10 1991-04-16 Cetus Corporation Detection of AIDS associated virus by polymerase chain reaction
US5176995A (en) * 1985-03-28 1993-01-05 Hoffmann-La Roche Inc. Detection of viruses by amplification and hybridization
AU606043B2 (en) 1985-03-28 1991-01-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Detection of viruses by amplification and hybridization
IE64785B1 (en) * 1985-04-08 1995-09-06 Genetic Systems Corp Expression of immunologically reactive viral proteins
JP2869063B2 (ja) * 1985-04-08 1999-03-10 ジエネテイツク システムズ コ−ポレイシヨン ＬＡＶに対する抗体と免疫的に反応性であるｇａｇによりコードされたペプチドの発現及び使用
JP2564268B2 (ja) * 1985-08-28 1996-12-18 協和醗酵工業株式会社 融合抗原ポリペプチド
FR2593519B1 (fr) * 1985-09-25 1994-01-07 Oncogen Vaccin contre le syndrome immunodeficitaire acquis et intermediaires pour la preparation de ce vaccin
GR862412B (en) * 1985-09-25 1987-01-23 Oncogen Vaccines and immuinoassays for acquired immune deficiency syndrome
US4839288A (en) * 1986-01-22 1989-06-13 Institut Pasteur Retrovirus capable of causing AIDS, antigens obtained from this retrovirus and corresponding antibodies and their application for diagnostic purposes
US5364933A (en) 1986-03-03 1994-11-15 Institut Pasteur Methods of immunopurification of antigens of human immunodeficiency virus type 2 (HIV-2)
US6514691B1 (en) 1986-01-22 2003-02-04 Institut Pasteur Peptides of human immunodeficiency virus type 2 (HIV-2), antibodies against peptides of HIV-2, and methods and kits for detecting HIV-2
US4753873A (en) * 1986-02-03 1988-06-28 Cambridge Bioscience Corporation Peptides for the diagnosis of HTLV-III antibodies, their preparation and use
US4863730A (en) * 1986-03-21 1989-09-05 Cenfold Holdings, S.A. Immunotherapy for AIDS patients
US5075211A (en) * 1986-03-26 1991-12-24 Genetic Systems Corporation Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease
US4904581A (en) * 1986-05-06 1990-02-27 Epitope, Inc. Method of detecting AIDS virus infection
DK169582B1 (da) * 1986-06-23 1994-12-12 Squibb Bristol Myers Co Humant monoklonalt antistof, der er i stand til at reagere med en epitop på LAV/HTLV-III kappeglycoproteinet gp41, cellelinier, som producerer sådant antistof, farmaceutisk præparat indeholdende antistoffet samt fremgangsmåde til bestemmelse af nærværelsen af LAV/HTLV-III i en biologisk prøve og fremgangsmåde til separering af specifikke antigendeterminanter af LAV/HTLV-III under anvendelse af ant
US5087557A (en) * 1986-06-23 1992-02-11 Genetic Systems Corporation Human monoclonal antibody to lymphadenopathy-associated virus
EP0525828A3 (en) * 1986-08-01 1993-02-24 Repligen Corporation Recombinant polypeptides and their uses, including assay for aids virus
US5166050A (en) * 1986-08-20 1992-11-24 Bristol-Myers Squibb Company Monoclonal antibodies and peptides useful in treating and diagnosing HIV infections
NZ221440A (en) * 1986-08-20 1991-11-26 Genetic Systems Corp Composition containing monoclonal antibodies/peptides useful in treating and diagnosing hiv infections
US5079351A (en) * 1986-11-26 1992-01-07 Cetus Corporation Oligonucleotides and kits for detection of htlvi and htlvii viruses by hybridization
US5141867A (en) * 1987-02-02 1992-08-25 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleotide sequence encoding a human immunodeficiency virus antigen
US4861707A (en) * 1987-02-02 1989-08-29 E. I. Du Pont De Nemours And Company Human immunodeficiency virus antigen
AU620330B2 (en) * 1987-05-29 1992-02-20 Smithkline Beckman Corporation Immunodiagnostic assays using chimeric antigens
US6657050B1 (en) 1987-05-29 2003-12-02 Tanox, Inc. Chimeric viral-neutralizing immunoglobulins
US5981278A (en) * 1987-05-29 1999-11-09 Tanox, Inc. Chimeric monoclonal antibodies which neutralize HIV-1 infection and their applications in therapy and prevention for AIDS
DE3727137A1 (de) * 1987-08-14 1989-02-23 Behringwerke Ag Herstellung von antigenen des human immunodeficiency virus typ 1 sowie deren verwendung als diagnostisches mittel und therapeutikum
WO1989011285A1 (en) * 1988-05-23 1989-11-30 Steffen Gay Diagnostics and therapy for rheumatoid arthritis
JPH0292298A (ja) * 1988-09-30 1990-04-03 Olympus Optical Co Ltd Ｈｉｖ構成蛋白に対するモノクローナル抗体
FR2640877A1 (ja) * 1988-12-06 1990-06-29 Centre Nat Rech Scient
US5856088A (en) * 1989-07-11 1999-01-05 Gen-Probe Incorporated Detection of human immunodeficiency virus type 1
US6589734B1 (en) * 1989-07-11 2003-07-08 Gen-Probe Incorporated Detection of HIV
DE69130396T2 (de) * 1990-08-16 1999-06-24 Genelabs Diagnostics Pte Ltd., Singapore Vergrössertes western blot format und ein immunotestverfahren für die bestimmung von viralen antikörpern
KR100325554B1 (ko) 1993-03-26 2002-11-02 젠-프로브 인코포레이티드 사람의면역결핍 바이러스타입1의검출
DE4405810A1 (de) 1994-02-23 1995-08-24 Behringwerke Ag Von einem Retrovirus aus der HIV-Gruppe abgeleitete Peptide und deren Verwendung
US6525173B1 (en) * 1997-01-02 2003-02-25 Universidade Federal De Minas Gerais Process for expression and production of recombinant protein hybrid protein (p24/p17) derived from human immunodeficiency viruses (HIV-1)
US6235479B1 (en) 1999-04-13 2001-05-22 Bio Merieux, Inc. Methods and devices for performing analysis of a nucleic acid sample
US6420545B1 (en) * 1999-05-24 2002-07-16 The Trustees Of The University Of Pennsylvania CD4-independent HIV envelope proteins as vaccines and therapeutics
AU2003229666A1 (en) * 2002-05-08 2003-11-11 Pharmacia Italia Spa A chimeric reverse transcriptase and methods for identifying telomerase inhibitors
EP4063518A1 (en) 2010-07-09 2022-09-28 Cergentis B.V. V3-d genomic region of interest sequencing strategies
WO2015075691A1 (en) 2013-11-25 2015-05-28 Koninklijke Philips N.V. Compact electro-mechanical chest compression drive
CN103623399A (zh) * 2013-11-29 2014-03-12 遵义医学院 猪带绦虫tso45w-4b基因重组双歧杆菌疫苗制备及鉴定方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS55104887A (en) * 1978-12-22 1980-08-11 Biogen Nv Rearranged dna molecule and method
JPS61173782A (ja) * 1984-10-31 1986-08-05 カイロン・コーポレイション リンパ節疾患症候群および／または後天性免疫不全症候群に関連する組換えウイルスタンパク質

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4358535A (en) 1980-12-08 1982-11-09 Board Of Regents Of The University Of Washington Specific DNA probes in diagnostic microbiology
US4401756A (en) 1981-04-14 1983-08-30 Immunex Corporation Process for preparing human interleukin 2
GB8423659D0 (en) * 1984-09-19 1984-10-24 Pasteur Institut Cloned dna sequences
GB8324800D0 (en) * 1983-09-15 1983-10-19 Pasteur Institut Antigens
EP0138677A3 (fr) * 1983-09-21 1985-05-22 Office National d'Etudes et de Recherches Aérospatiales (O.N.E.R.A.) Perfectionnements apportés aux tubes échangeurs de chaleur, aux échangeurs réalisés avec de tel tubes, et aux installations à turbines à gaz comportant de tels échangeurs
IE58321B1 (en) * 1984-04-23 1993-09-08 Us Health Isolation of proteins of HTLV-III, serological detection of antibodies to HTLV-III in sera of patients with aids and pre-aids conditions, and detection of HTLV-III infection bi/immuno-assays using HTLV-III infection by immuno-assays using HTLV-III and its proteins
US4520113A (en) 1984-04-23 1985-05-28 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Serological detection of antibodies to HTLV-III in sera of patients with AIDS and pre-AIDS conditions
IL76082A (en) * 1984-08-22 1991-07-18 Us Health Molecular clones of the genome of htlv-iii and a process for the preparation thereof
DE3588254T2 (de) 1984-10-18 2008-06-26 Institut Pasteur GAG-Antigen und dessen Verwendung zum Nachweis von LAV-Infektion, sowie in immunogenen Zusammensetzungen
US4725669A (en) 1984-11-09 1988-02-16 President And Fellows Of Harvard College Assay for detecting infection by human T-cell lymphotropic virus-III
EP0187041B1 (en) 1984-12-24 1996-05-15 Genentech, Inc. Fusions of AIDS-related polypeptides
US4735896A (en) 1986-03-04 1988-04-05 United Biomedical, Inc. Synthetic peptide and process of using same for the detection and diagnosis of AIDS and pre-AIDS conditions

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS55104887A (en) * 1978-12-22 1980-08-11 Biogen Nv Rearranged dna molecule and method
JPS61173782A (ja) * 1984-10-31 1986-08-05 カイロン・コーポレイション リンパ節疾患症候群および／または後天性免疫不全症候群に関連する組換えウイルスタンパク質

Also Published As

Publication number Publication date
DE3587697T2 (de) 1994-06-30
DE3587697T4 (de) 1995-03-30
ATE98992T1 (de) 1994-01-15
EP0552850A1 (en) 1993-07-28
JP2003038190A (ja) 2003-02-12
ATE451462T1 (de) 2009-12-15
EP0552850B1 (en) 2009-12-09
JP2004224798A (ja) 2004-08-12
DE3588255D1 (de) 2010-01-21
EP0185444A2 (en) 1986-06-25
EP0185444B1 (en) 1993-12-22
JP3569766B2 (ja) 2004-09-29
CA1341409C (en) 2002-12-17
DE3587697D1 (de) 1994-02-03
US9328391B1 (en) 2016-05-03
EP0185444A3 (en) 1986-08-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP3569766B2 (ja) Ｈｔｌｖ−ｉｉｉｄｎａのクローニングおよび発現
US6858712B1 (en) Cloning and expression of HTLV-III DNA
JP3277045B2 (ja) Ｈｉｖ−グループのレトロウイルスおよびその使用
US6458527B1 (en) HIV immunoassays using gag polypeptides
US4784941A (en) Expression and diagnostic use of pENV-3 encoded peptides which are immunologically reactive with antibodies to LAV
USRE41158E1 (en) Human immunodeficiency virus (HIV) nucleotide sequences
NL8700795A (nl) Eiwit van het aids-virus.
JPS63503513A (ja) Ｌａｖウィルス変異株、これらのｄｎａおよびタンパク成分ならびに、特に診断目的および免疫原性組成物製造用のそれらの用途
EP0201716B1 (en) Expression of immunologically reactive viral proteins
JPH10500281A (ja) 非病原性ｈｉｖ−１種
Gendelman et al. Molecular characterization of a polymerase mutant human immunodeficiency virus
US7425428B1 (en) Recombinant DNA construct for HIV envelope polypeptides and polypeptides produced thereby
US6635752B2 (en) Variant of LAV viruses
JPS6226300A (ja) Ｈｔｌｖ−３ｄｎａのクロ−ニングおよび発現
US7285271B1 (en) Antigenic composition comprising an HIV gag or env polypeptide
EP0245456A1 (en) Aids virus gene expression
Goh et al. Expression of the art gene protein of human T-lymphotropic virus type III (HTLV-III/LAV) in bacteria
JPS63502242A (ja) エイズの原因となる新規なレトロウイルス及び該レトロウイルスのｉｎ　ｖｉｔｒｏ検出手段及び方法
JPS63254983A (ja) エイズの病原であるウイルスのｐ２５蛋白質をコードするウイルスベクター及び組換ＤＮＡ、感染された細胞培養物、得られる蛋白質、ワクチン及び得られる抗体
EP0293792A2 (en) Human immunodeficiency virus GAG-encoded proteins
EP0235923B1 (en) Sor gene product from human t-cell lymphotropic virus iii
WO1991004038A1 (en) Antigen and immunoassay for human immunodeficiency virus type 2
JPS62502723A (ja) ＬＡＶに対する抗体と免疫的に反応性であるｇａｇによりコ−ドされたペプチドの発現及び使用