JPH07149637A - ジアシルグリセロールキナーゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 ジアシルグリセロールキナーゼ阻害剤を提供
する。 【構成】 ドレクスレラ（Drechslera）属に属する微生
物を培養して、下記一般式（Ｉ）で表される生理活性キ
ノン類を培養物中に精製蓄積せしめ、その培養物から前
記生理活性キノン類を採取し、これをジアシルグリセロ
ールキナーゼ阻害剤の有効成分として配合する。 【化１】 但し、上記一般式中（Ｉ）中、Ｒは下記式（II）又は下
記式（III）で表される基を表わす。 【化２】 【化３】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ジアシルグリセロール
キナーゼ阻害剤及びその製造法に関し、詳しくは生理活
性キノン類を有効成分とするジアシルグリセロールキナ
ーゼ阻害剤とその製造法に関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、ホルモンや細胞増殖因子などで細
胞を処理するとホスファチジン酸（ＰＡ）が蓄積するこ
とに加え、ＰＡ自身も強い細胞増殖作用を有することが
わかってきた（Nature, 323, 171-173(1986)）。

【０００３】また、ＰＡがｒａｓ蛋白のＧＴＰａｓｅ活
性を調節することも報告され（Science, 243, 522-526,
(1989)；Science, 250, 982-985,(1990)）、セカンドメ
ッセンジャーとしてｒａｓ蛋白をターゲットとする新た
なシグナル伝達機構も予想される。

【０００４】さらに、ＰＡは好中球や血小板の活性化に
も深く関与していることが知られている。このＰＡの産
生経路としては、現在２つの経路が考えられている。１
つは、ホスホリパーゼＣ（ＰＬＣ）により生じたジアシ
ルグリセロール（ＤＧ）がジアシルグリセロールキナー
ゼ（以下、「ＤＧキナーゼ」という）によりリン酸化さ
れてＰＡに変換するルートであり、もう１つは、ホスホ
リパーゼＤ（ＰＬＤ）により直接ＰＡが産生する経路で
ある。

【０００５】したがって、このような反応を阻害するＤ
Ｇキナーゼ阻害剤は、好中球や血小板の活性化を抑える
ことにより、新しいメカニズムの抗炎症剤や抗動脈硬化
剤となることが期待される。

【０００６】現在、癌の化学療法の分野において、多く
の化学物質が医薬品として実用化されているが、多くの
場合薬効が不十分なだけでなく、これらの薬剤に対する
腫瘍細胞の耐性化の問題も、臨床上の使用法を複雑にし
ている（第４７回日本癌学会総会記事、１２〜１５頁
（１９８８年）参照）。このような状況下にあって、癌
治療の分野においては常に新規な抗腫瘍性物質の開発が
求められている。

【０００７】また、従来の抗腫瘍性物質は、その作用機
序が細胞の分裂増殖の基本機構に対する抑制作用に基づ
いていることから、その作用は癌細胞のみに限定される
ものではなく、正常細胞に対しても非特異的に細胞毒作
用を与え、結果として薬物投与時に副作用をもたらすこ
とが臨床上の大きな問題となっており、必ずしも満足す
べき状況ではない。従って、癌細胞に特異的に作用し、
正常細胞に副作用を持たない抗腫瘍剤の登場が望まれて
いる。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記観点か
らなされたものであり、新しいタイプの抗腫瘍剤、抗炎
症剤あるいは抗動脈硬化剤の開発を最終的な目的とし、
そのためにＤＧキナーゼ阻害剤を提供することを課題と
する。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者は、微生物が抗
生物質等の生理活性物質を生産することに着目し、自然
界より多数の微生物を採取して、それらの微生物から分
離された多種類の培養物について検討を重ねた結果、ド
レクスレラ サッカリ（Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒａｓａｃｃ
ｈａｒｉ）の培養物中に、ＤＧキナーゼ阻害作用を有す
る物質が含有していることを見出し、その物質の構造を
明らかにして、本発明を完成するに至った。

【００１０】すなわち、本発明は、下記一般式（Ｉ）で
表される生理活性キノン類を有効成分として含有するＤ
Ｇキナーゼ阻害剤である。

【００１１】

【化４】

【００１２】但し、上記一般式（Ｉ）中、Ｒは下記式
（II）又は下記式（III）で表される基を表わす。

【００１３】

【化５】

【００１４】

【化６】

【００１５】尚、本明細書において、「培養物」とは、
菌体及び／又は培養上清をいうものとする。以下、本発
明を詳細に説明する。

【００１６】＜１＞本発明のＤＧキナーゼ阻害剤 本発明のＤＧキナーゼ阻害剤は、上記一般式（Ｉ）で表
される生理活性キノン類（以下、単に「生理活性キノン
類」という。）を有効成分として含有する。この生理活
性キノン類は、真菌が産生する黄色色素として既に知ら
れている（Chem. Commun., 1971, 164-166、Tetrahedro
n Letters, 29, 2545-2548 (1974))。また、その生理活
性については、抗菌作用を有するという報告がある（Ca
nadian J. Microbiol., 14, 1015-1016 (1968)）。しか
しながら、上記生理活性キノン類が、ＤＧキナーゼ阻害
作用を有することは未だ報告されていない。本発明は、
生理活性キノン類がＤＧキナーゼ阻害作用を有すること
を初めて見出し、その知見に基づいてなされたものであ
る。尚、生理活性キノン類の物理化学的性質及びＤＧキ
ナーゼ阻害作用は、後記実施例に示した。

【００１７】本発明のＤＧキナーゼ阻害剤は、これを医
薬として用いるに当たり、通常の製剤担体とともに投与
経路に応じた製剤とする事が出来る。例えば、経口投与
では錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤等の形態に
調剤される。経口投与用固形製剤に調製するに当たり、
慣用の賦形剤、結合剤、滑沢剤、その他着色剤、崩壊剤
等を用いることができる。

【００１８】賦形剤としては、例えば、乳糖、デンプ
ン、タルク、ステアリン酸マグネシウム、結晶セルロー
ス、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、
グリセリン、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム等が
挙げられ、結合剤としてはポリビニルアルコール、ポリ
ビニルエーテル、エチルセルロース、アラビアゴム、シ
エラック、白糖等が挙げられ、滑沢剤としてはステアリ
ン酸マグネシウム、タルク等が挙げられる。その他、着
色剤、崩壊剤も通常公知のものを用いることができる。

【００１９】尚、錠剤は周知の方法によりコーティング
してもよい。また液状製剤は水性または油性の懸濁液、
溶液、シロップ、エリキシル剤、その他であってもよ
く、通常用いられる方法にて調製される。注射剤を調製
する場合は、生理活性キノン類にｐＨ調整剤、緩衝剤、
安定化剤、等張剤、局所麻酔剤等を添加し、常法により
皮下、筋肉内、静脈内用注射剤を製造することができ
る。また、坐剤を製造する際の基剤としては、例えばカ
カオ脂、ポリエチレングリコール、ラノリン、脂肪酸ト
リグリセライド、ウイテプゾール（ダイナマイトノーベ
ル社の登録商標）等の油脂性基剤を用いることができ
る。

【００２０】かくして調製される製剤は、各種ガンある
いは腫瘍、各種炎症、動脈硬化症等に対して治療効果が
期待される。投与量としては、患者の症状、体重、年齢
等によって異なり、一様に服用することは出来ないが、
生理活性キノン類の量として、通常成人１日当たり約１
０〜２０００ｍｇの範囲が好ましく、これを通常１日１
〜４回に分けて投与するのが望ましい。

【００２１】＜２＞本発明に用いる生理活性キノン類の
製造法 本発明に用いる上記生理活性キノン類は、例えば、これ
を産生する微生物を培養し、その培養物、すなわち菌体
及び／又は培養上清から生理活性キノン類を単離するこ
とによって得られる。本発明の生理活性キノン類の製造
法においては、使用される微生物は、ドレクスレラ属に
属する微生物であって、生理活性キノン類を産生する能
力があればいかなるものであってもよい。例えば、ドレ
クスレラ・サッカリ等が挙げられ、より好ましくは後述
のドレクスレラ・サッカリ Ｄ２５９７株が挙げられ
る。

【００２２】以下に、上記微生物の培養、生理活性キノ
ン類の単離、精製について詳しく例示する。

【００２３】（１）培養 本発明においては、ドレクスレラ属に属し生理活性キノ
ン類を産生する微生物を、通常の微生物が利用しうる栄
養物を含有する培地で培養する。炭素源としては、クル
コース、水アメ、デキストリン、シコクロース、デンプ
ン、糖蜜、動・植物油等を使用できる。また窒素源とし
ては、大豆粉、小麦胚芽、コーンスティープ・リカー、
綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモ
ニウム、硝酸ソープ、尿素等を使用できる。その他必要
に応じて、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネ
シウム、コバルト、塩素、リン酸、硝酸およびその他の
イオンを生成することのできる無機塩類を添加すること
は有効である、また菌の生育を助け生理活性キノン類の
生産を促進するような有機および無機物を適当に添加す
ることができる。

【００２４】培養法としては、好気的条件下での培養
法、特に寒天培地等を用いた表面培養法が最も適してい
る。培養に適当な温度は１０〜３０℃であるが、多くの
場合、２０〜２７℃付近で培養する。生理活性キノン類
の生産は、培地や培養条件により異なるがフラスコ内の
寒天培地表面培養法では、通常７〜２１日の間、その蓄
積が最高に達する。培養物中の生理活性キノン類の蓄積
量が最高になった時に培養を停止し、培養物から生理活
性キノン類を単離精製する。

【００２５】（２）生理活性キノン類の単離、精製 本発明に用いる生理活性キノン類は、脂溶性物質である
ので、培養物から単離精製するにあたっては、この特性
を利用して行うことができる。すなわち、例えば酢酸エ
チル、クロロルホルム等による溶媒抽出法；シリカゲ
ル、アルミナ、ＯＤＳ、ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱
化成（株）製）等の合成吸着剤や、セファデックスＬＨ
−２０（ファルマシア社製）等のゲルろ過剤等を用いた
カラムクロマトグラフィー、あるいは高速液体クロマト
グラフィー；さらにシリカゲル等を担体とした分取薄層
クロマトグラフィー等が有効である。

【００２６】＜３＞生理活性キノン類の製造に用いる新
規菌株 上記生理活性キノン類を産生するドレクスレラ属に属す
る微生物として、本発明者により新たに植物落葉落枝上
より分離された不完全菌類ドレクスレラ・サッカリ Ｄ
２５９７株（以下、「本菌株」または「Ｄ２５９７株」
と略記する。）について説明する。本菌株の微生物学的
性質は下記の通りである。

【００２７】（１）形態学的性状 本菌株を、ＬＣＡ（三浦培地）上で２７℃、７日間培養
したときのコロニーの生育は旺盛であり、コロニー表面
は綿毛状であり、培養初期はオリーブ色、培養が長くな
ると暗い黄茶色を呈する。また、コロニーの裏面は灰色
がかった黄茶色を呈する。

【００２８】基底菌糸は分岐し、巾は４．５−６．６μ
ｍであり、隔壁を有し、無色〜淡褐色を呈する。気生菌
糸は豊富に生じ、分岐し、無色〜淡褐色を呈し、巾は
５．６−７．８μｍである。

【００２９】分生子柄は、基底菌糸あるいは気生菌糸よ
り単生し、通常無分岐であるがまれに分岐し、まっすぐ
又はやや屈曲した形状であり、先端でジグザグ状とな
り、数個〜１５個の分生子をつける。分生子柄は、３１
２〜９３８×５．６×７．２μｍの大きさであり、淡褐
色を呈し、表面は平滑であり、隔壁を有する。また、分
離痕（Ｓｃａｒ）は明瞭である。

【００３０】分生子はポロ型分子であり、通常倒棍棒形
であり、先端に向って細まり、やや湾曲するが、ときに
円筒形〜細長い楕円形で真っ直ぐである。また、表面は
平滑であり、黄金褐色を呈し、３〜９個の偽隔壁を有
す。大きさは２４．６〜８７×１０．８〜１７μｍであ
り、分生子基部のへそ（ｈｉｌｕｍ）は小形で不明瞭で
ある。

【００３１】（２）各種培地上における特徴 ボテト・デキストロース寒天培地（ＰＤＡ）上で２７
℃、２週間培養したときの性状 コロニーの生育は旺盛であり、表面は綿毛状を呈し、培
養初期は明るいオリーブ色〜オリーブ色、培養が長くな
ると黄褐色を呈する。また、コロニーの裏面は茶灰色を
呈する。基底菌糸は分岐し、隔壁を有し、無色〜淡褐色
を呈する。気性菌糸は豊富に生じ、分岐し、淡褐色を呈
し、分生子を豊富に形成する。

【００３２】麦芽寒天培地上で２７℃、２週間培養し
たときの性状 コロニーの生育は旺盛であり、表面は綿毛状を呈し、培
養初期は明るいオリーブ色〜オリーブ色、培養が長くな
ると黄褐色となる。コロニーの裏面は、黄褐色〜暗い黄
色を呈する。

【００３３】基底菌糸は分岐し、隔壁を有し、無色〜褐
色を呈する。気性菌糸は豊富に生じ、分岐し、淡褐色〜
褐色を呈する。分生子形成は中程度である。

【００３４】（３）生理学的性状 生育の範囲 生育温度：１０〜３７℃（ＰＤＡ上、５日間培養） 生育ｐＨ：３〜９（ＬＣＡ液体培地上、２７℃、５日間
培養）

【００３５】至適生育範囲 至適温度：２７〜３０℃ 至適ｐＨ：４〜６

【００３６】（４）分類学的考察 本菌株は、分生子柄は通常無分岐であり、まれに分岐
し、真っ直ぐか又はジグザグ状に屈曲する、分生子形
成細胞は、頂生であり、形状は円筒形で先端部がやや膨
れ、多数の分生子をつける、分生子形成様式はポロ
型、分生子は偽隔壁を有し、黄金褐色を呈する。以上
の性状より、本菌株は、不完全菌亜門（Deuteromycotin
a）−不完全糸状菌綱（Hyphomycetes）のドレクスレラ
（Drechslera）属に帰属する。

【００３７】M.B.EllisのDematiaceous Hyphomycetes
P.403〜452 (1971)によれば、ドレクスレラ属には４８
種が含まれており、その後、Ellisは、more Dematiaceo
us Hyphomycetes, P.396〜403 (1976)において、本属に
９種を記載している。これらの菌種は、分生子の形状、
大きさ、隔壁数、分生子基部に形成されるへそ（hilu
m）の発達度合、分生子柄の特徴（分岐、二次分生子柄
の形成）によって区別されている。

【００３８】一方、本菌株は、イ）分生子は２４．６〜
８．７μｍ×１０．８〜１７μｍ（平均６１．７μｍ×
１４．３μｍ）であり、倒棍棒形で先端に向って細ま
り、やや湾曲し、時々円筒形〜細長いだ円形で真っ直ぐ
であり、表面は平滑で、黄金褐色を呈する、ロ）３〜９
個の偽隔壁（通常８隔壁）を有する、ハ）分生子基部の
へそ（hilum）は小形で不明瞭である、ニ）二次分生子
柄を形成しない特徴を有する。

【００３９】このような本菌株の特徴から、上記Ellis
(1971、1976)の文献に従って種の検索を行なったとこ
ろ、本菌株は、ドレクスレラ・サッカリ、ドレクスレラ
・ユーフォルビア（Drechslera euphorbiae）及びドレ
クスレラ・セタリア（Drechslera setaria）に類縁の種
であることが示唆された。

【００４０】本菌株と後者の３種を比較したところ、表
１に示すように、本菌株はドレクスレラ・サッカリの変
異の巾の中に含まれることが判った。従って本菌株は、
ドレクスレラ・サッカリと同定された。

【００４１】

【表１】

【００４２】尚、Ｄ２５９７株は、工業技術院生命工学
工業技術研究所に、ＦＥＲＭ Ｐ−１３７１９として寄
託されている。一般に、ドレクスレラ属菌は他の菌類の
場合にみられるように、その性状が変化しやすいが、Ｄ
２５９７株に由来する突然変異株（自然発生または人為
誘発性）も、本発明に使用することができる。また、本
菌株に由来する形質接合体や遺伝子組換え体であって
も、生理活性キノン類の産生能を有するものは、すべて
本発明の方法に使用することができる。

【００４３】

【作用】本発明に用いる生理活性キノン類は、後記実施
例で示すように低濃度でＤＧキナーゼ阻害活性を有する
ことから、これを含有するＤＧキナーゼ阻害剤は、抗腫
瘍剤、抗炎症剤、抗動脈硬化剤となることが期待され
る。

【００４４】

【実施例】以下に、本発明の実施例を説明する。 ＜１＞生理活性キノン類の製造 ポテトデキストロース寒天培地（ｐＨ６．０）を４０ｌ
ずつ２００ｍｌの三角フラスコ２０本に分注し、１２１
℃において２０分間高圧滅菌した。これに、ドレクスレ
ラ・サッカリ Ｄ２５９７株を５白金耳ずつ植菌し、２
６℃において１４日間静置培養した。

【００４５】得られた培養物に、フラスコ１本当たり８
０ｍｌの５０％アセトン水を添加し、撹拌抽出して、１
ｌのアセトン水溶液を得た。これを減圧下でアセトンを
留去した後、水５００ｍｌと酢酸エチル５００ｍｌを加
え、水層を塩酸でｐＨ２に調整して抽出した。酢酸エチ
ル層を分取し、減圧留去して４００ｍｇの残渣を得た。
これを蒸留水に溶解し、シリカゲル１００ｇを充填した
カラムに通した後、クロロホルム５００ｍｌ、メタノー
ル−クロロホルム混液（１：９９）５００ｍｌ、メタノ
ール−クロロホルム混液（１：４９）５００ｍｌ、メタ
ノール−クロロホルム混液（１：１９）３００ｍｌで洗
った後、メタノール−クロロホルム混液（１：１９）２
００ｍｌで溶出した画分を減圧下濃縮し、２４０ｍｇの
粗生理活性キノン類混合物を得た。

【００４６】これを、さらにＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ
₁₈カラム（３０ｍｍ×２５０ｍｍ）（資生堂（株）製）
を装着した分取高速液体クロマトグラフィーにより精製
した。上記で得られた粗生理活性キノン類混合物を、上
記カラムに注入し、アセトニトリル−水のグラジエント
（アセトニトリル濃度５０〜９０％、流速９ｍｌ／分）
で、９５分間溶出を行った。溶出液を、溶出開始３０分
後から１分毎のフラクションに分画し、画分１（フラク
ション３６〜３８）と画分２（フラクション４５〜５
２）を得た。

【００４７】（１）コクリオキノンＡの精製 上記で得られた画分２のフラクションを集めて減圧濃縮
し、ｎ−ヘキサンから結晶化して、７０ｍｇの黄色針状
晶を得た。こうして精製された生理活性キノン類は、下
記の理化学性質より構造解析をした結果、前記化４中、
Ｒが化６で表されるコクリオキノンＡ（Cochlioquinone
A）であると同定された。

【００４８】１）融点： １３０〜１３２℃

【００４９】２）ＥＩ マススペクトル： 532(M⁺), 514, 499, 473, 441, 43

【００５０】 ３）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ₃ ）８ｐｐｍ： 〜0.78(6H,m,26,28-H) 0.91(3H,S,20-H) 〜1.06(9H,m,18,19,27-H) 1.22(3H,S,21-H) 1.62(1H,d,J=10.5Hz,8-H) 1.87(3H,S,30-H) 2.51(1H,S,17-OH) 3.05〜3.15(3H,m,12,16,22-H) 3.73(1H,S,7-OH) 4.82(1H,d,J=10.5Hz,7-H) 4.91(1H,dd,J=6Hz,6Hz,23-H) 6.43(1H,S,2-H)

【００５１】４）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ
₃ ）δｐｐｍ： 181.35(s,1-C) 133.49(d,2-C) 148.10(s,3-C) 188.4
8(s,4-C) 151.93(s,5-C) 118.74(s,6-C) 62.77(d,7-C) 51.4
6(d,8-C) 82.86(s,9-C) 38.28(t,10-C) 21.28(t,11-C) 84.49
(d,12-C) 36.46(s,13-C) 37.22(t,14-C) 24.97(t,15-C) 83.49
(d,16-C) 71.58(s,17-C) 23.62(q,18-C) 25.80(q,19-C) 12.34
(q,20-C) 20.81(q,21-C) 34.21(d,22-C) 78.05(d,23-C) 35.94
(d,24-C) 26.11(t,25-C) 13.04(q,26-C) 17.13(q,27-C) 11.21
(q,28-C) 170.32(s,29-C) 20.58(q,30-C)

【００５２】上記物理化学的データは、コクリオキノン
Ａの文献値（J. C. S. Perkin I, 2837-2839(1972)）と
一致した。

【００５３】（２）ステンフォンの精製 前記で得られた画分１を濃縮して、２４ｍｇの固形物を
得た。これを、ＹＭＣ−Ｐａｃｋ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｃ₁₈
カラム（３０ｍｍ×３００ｍｍ）（ＹＭＣ社製）を装着
した分取高速液体クロマトグラフィーにより精製した。
アセトニトリル−水のグラジエント（アセトニトリル濃
度５０〜７０％、流速９ｍｌ／分）で、６０分間溶出を
行った。溶出液を、溶出開始１０分後から１分毎のフラ
クションに分画し、画分３（フラクション４０〜４１）
を得た。これを減圧濃縮し、ｎ−ヘキサンから結晶化し
て、８ｍｇの黄色針状晶を得た。こうして精製された生
理活性キノン類は、下記の理化学性質より構造解析をし
た結果、前記化４中、Ｒが化５で表されるステンフォン
（Stemphone）であると同定された。

【００５４】１）融点： １６０〜１６２℃

【００５５】２）ＥＩマススペクトル： 530(M+), 497, 471, 454, 439, 43

【００５６】 ３）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（Ｃ₆ Ｄ₆ ）δｐｐｍ： 0.78(3H,s,20-H) 0.83(3H,d,J=7.5Hz,27-H) 0.89(3H,s,21-H) 1.15,1.17(各3H,s,18,19-H) 1.36(3H,d,J=6.5Hz,26-H) 1.49(3H,d,J=6.5Hz,28-H) 1.52(3H,s,30-H) 1.61(1H,d,J=10.5Hz,8-H) 3.24(1H,m,22-H) 4.10(1H,brs,7-OH) 4.80(1H,d,J=10.5Hz,7-H) 5.39(1H,d,J=9.5Hz,23-H) 5.51(1H,m,J=6.5Hz,25-H) 6.51(1H,s,2-H)

【００５７】４）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（Ｃ₆ Ｄ₆ ）
δｐｐｍ： 181.45(s,1-C) 133.08(d,2-C) 148.76(s,3-C) 188.9
7(s,4-C) 151.88(s,5-C) 119.40(s,6-C) 63.53(d,7-C) 51.8
7(d,8-C) 82.82(s,9-C) 38.80(t,10-C) 21.68(t,11-C) 85.38
(d,12-C) 36.80(s,13-C) 37.71(t,14-C) 25.24(t,15-C) 83.79
(d,16-C) 71.49(s,17-C) 24.30(q,18-C) 26.26(q,19-C) 12.48
(q,20-C) 20.79(q,21-C) 35.27(d,22-C) 81.32(d,23-C) 132.40
(s,24-C) 125.60(d,25-C) 12.98(q,26-C) 16.70(q,27-C) 11.39
(q,28-C) 169.19(s,29-C) 20.42(q,30-C)

【００５８】上記物理化学的データは、ステンフォンの
文献値（Tetrahedron Letter 29, 2545-2548 (1974)）
と一致した。

【００５９】＜２＞生理活性キノン類のＤＧキナーゼ阻
害作用 上記で得られた生理活性キノン類について、ＤＧキナー
ゼの阻害活性を測定した。この測定は、F. Sakaneらの
方法（FEBS Lett., 255, 409-413 (1989)）に準じて、
牛の胸腺から精製したＤＧキナーゼを用いて行った。

【００６０】すなわち、１，２−ジラウロイルグリセロ
ール（Ｃ_12:0）219μM、[α-³²P]ATP(0.5〜1.0μCi）10
0μM、50mM Tris-HCl(pH7.5)、50mM NaCl、0.1% BSA、
0.5mMEGTA、5mM MgCl₂、0.04%デオキシコール酸ナトリ
ウム、40ngの牛胸腺部分精製ＤＧキナーゼ、並びに微生
物から抽出した生理活性キノン類試料を含む反応溶液５
０μｌを、３７℃で２０分間インキュベートした。

【００６１】５００μｌのクロロホルム／メタノール／
濃塩酸（200:100:1、(V/V/V)）を加え反応を停止させた
後、１２５μｌの１Ｎ塩酸を加え混合し、遠心分離（1
6,000rpm、１０秒）により２層に分離した。上層を除い
た後、下層の溶媒を留去し、得られた反応生成物をクロ
ロホルム１０μｌに溶解して薄層板（シリカゲル６０Ｆ
₂₅₄）にスポットした。

【００６２】スポット後、薄層板をクロロホルム／メタ
ノール／酢酸／水（170:25:25:6、(V/V/V/V)）により展
開した。展開後の薄層板におけるホスファチジン酸画分
をオートラジオグラフィーにより確認した。さらに、こ
の画分を切り出してバイアル瓶に入れ、メタノール４ｍ
ｌを加えた後、チェレンコフ効果により液体シンチレー
ションカウンターを用いて定量した。

【００６３】その結果、系にキャリアーのＡＴＰを加え
ずに測定したコクリオキノンＡの５０％阻害活性は２．
２６μＭ、ステンフォンの５０％阻害活性は３．３２μ
Ｍであった。この結果から明らかなように、本発明に用
いる生理活性キノン類は、低濃度でＤＧキナーゼ阻害活
性を有する。

【００６４】

【発明の効果】本発明に用いる生理活性キノン類は、低
濃度でＤＧキナーゼ阻害作用を示すので、これを含有す
るＤＧキナーゼ阻害剤は、抗腫瘍剤、抗炎症剤、抗動脈
硬化剤として期待される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 9/99 // Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｄ 7432−4Ｂ (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 千葉 紀子 神奈川県横浜市緑区鴨志田町1000番地三菱 化成株式会社総合研究所内 (72)発明者 吉川 展司 愛知県安城市日の出町４−15ワコウビル 402号

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記一般式（Ｉ）で表される生理活性キ
   ノン類を有効成分として含有するジアシルグリセロール
   キナーゼ阻害剤。 【化１】 但し、上記一般式（Ｉ）中、Ｒは下記式（II）又は下記
   式（III）で表される基を表わす。 【化２】 【化３】