JP3153212B2 - イソクロマン化合物およびその製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規イソクロマン化
合物またはその製薬的に許容し得る塩に関し、該化合物
はアミロイド凝集阻害剤として、あるいはアルツハイマ
ー病の治療に有用である。特に、本発明はＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−６３５７として寄託されている真菌ペニシリウム・
シンプリシッシマム（Penicillium simplicissimum）の
醗酵により製造される新規イソクロマン化合物に関す
る。また、本発明は該イソクロマン化合物の製造方法お
よびその製薬組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】アルツハイマー病（ＡＤ）は細胞内神経
原繊維濃縮体の蓄積およびアミロイド原繊維の細胞外沈
着により病理学的に特徴づけられる神経変性疾患であ
る。アミロイド原繊維の主要成分はベータ−アミロイド
（Ａβ）ペプチドであり、アミロイド前駆体タンパク質
（ＡＰＰ）から誘導される。タンパク質−タンパク質相
互作用を非特異的に中断させることなくＡβペプチドが
アミロイド原繊維に組み上げるのを防止するかあるいは
遅延させる薬物は、アミロイドプラーク沈着を阻止する
ことにより、患者の神経変性および進行性認識力衰微を
阻むか、あるいは遅らせると考えられる。

【０００３】パイク（C. J. Pike）らの示唆によると、
Ａβタンパク質凝集阻害剤はアルツハイマー病の治療に
有用である（European Journal of Pharmacology−分子
薬理学セクション、２０７巻、３６７〜３６８頁、１９
９１）。

【０００４】

【本発明が解決しようとする課題】本発明はＡβタンパ
ク質凝集阻害剤として、あるいはアルツハイマー病治療
に有用な新規イソクロマン化合物およびその塩、ならび
に該化合物の製薬組成物を目的とするものである。本発
明の今一つの目的はイソクロマン化合物の製造方法を提
供することである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は、式（Ｉ）：

【０００６】

【化２】

【０００７】で示されるイソクロマン化合物またはその
製薬的に許容し得る塩を提供する。

【０００８】本発明の他の側面は、該イソクロマン化合
物を産生し得るペニシリウム・シンプリシッシマムＦＥ
ＲＭ ＢＰ−６３５７の培養株を提供することにある。

【０００９】本発明の他の側面は、ペニシリウム・シン
プリシッシマムＦＥＲＭ ＢＰ−６３５７と同一の特性
を有する微生物またはその突然変異体もしくは組換え型
を培養することを特徴とする該イソクロマン化合物の製
造法を提供することにある。当該製造法はさらに醗酵ブ
ロスから当該イソクロマン化合物を単離する次工程を含
んでもよい。

【００１０】本発明の他の側面は、Ａβタンパク質の凝
集を阻害し、アルツハイマー病を治療または予防するた
めの製薬組成物であって、式（Ｉ）で示されるイソクロ
マン化合物またはその製薬的に許容し得る塩および製薬
的に許容し得る担体を含んでなることを特徴とする製薬
組成物を目的とする。

【００１１】本発明の他の側面は、Ａβタンパク質の凝
集を阻害し、アルツハイマー病を治療または予防するた
めの方法であって、かかる治療または予防を必要とする
ヒトを含む哺乳動物に、有効量の式（Ｉ）で示されるイ
ソクロマン化合物またはその製薬的に許容し得る塩を投
与することを特徴とする方法を目的とする。

【００１２】

【発明の実施の形態】本発明にて用いる微生物はフィリ
ピン採取の土壌から単離したペニシリウム・シンプリシ
ッシマム株である。この菌株は工業技術院、生命工学工
業技術研究所（住所：日本国３０５茨城県つくば市東１
丁目１−３）にブダペスト条約のもと寄託番号ＦＥＲＭ
ＢＰ−６３５７として１９９８年５月１４日に寄託し
た。

【００１３】培養株の記載／特性化 フィリピンにて採取した土壌サンプルからＣＬ３９４６
１株を単離した。馬鈴薯デキストロース寒天平板上の３
週令培養株を同定用培地平板に３点接種し、５、２５お
よび３７℃にて１ないし２週間培養した。結果は特にこ
とわりのない限り１週目に培養特性化のために、また、
１４日目に温度検討のために読み取った。色調は色基準
および色命名（ロバート・リッジウエイ（Robert Ridgw
ay）１９１２）からの色片と比較して決定した。

【００１４】株の特性化およびその組成物の参照用に使
用した同定用培地は以下のとおりである。 １． コーンミール寒天培地：カーマイケル（Carmicha
el, J. W.）１９５７、Mycologia ４９：８２０〜８３
０。 ２． ツァペック−スクロース寒天培地：レイパーおよ
びフェンネル（Raper,K. B. and D. I. Fennell）１９
６５。アスペルギルス属、ウイリアムスおよびウイルキ
ンス（the Williams & Wilkins）、ボルチモア、３６頁 ３． 麦芽エキス寒天培地：同上、３８頁。 ４． ツァペック酵母自己分解物寒天培地：ピッツ（Pi
tt, J. I.）１９７９。ペニシリウムとその完全世代状
態ユーペニシリウムおよびタラロマイセス、アカデミッ
ク・プレス、ニューヨーク、１８頁。 ５． ２５％硝酸グリセリン寒天培地：同上 ６． 馬鈴薯デキストロース寒天：ＡＴＣＣ培地＃３３
６、ＡＴＣＣ培地ハンドブック、１９８４、１７頁。 ７． Ｖ−８汁寒天培地：ＡＴＣＣ培地＃３４３、同
上。 ８． 温度検討：麦芽エキス寒天培地。

【００１５】培養特性：２５℃ツァペック酵母自己分解
物寒天培地−コロニーは直径５．６ｃｍ、白色だがある
部分ではややオリーブ灰色（LI）；盛り上がって放射状
に褶曲、ビロード状ないし貧弱な羊毛状、胞子形成は無
いか僅か；背面淡黄色ないし暖黄色（XV）；可溶性色素
なし。

【００１６】２５℃ツァペック−スクロース寒天培地−
コロニーは直径４．４ｃｍ、白色ないし僅かに灰色、１
２日で淡オリーブ灰色（LI）となり、放射状に白色しま
模様；僅かに盛り上がり、平坦、ビロード状ないし貧弱
な羊毛状、胞子形成は無い；背面白色ないしクリーム色
（XVI）；可溶性色素なし。

【００１７】２５℃麦芽エキス寒天培地−コロニーは直
径４．５ｃｍ、白色ないし僅かにセランディン（クサノ
オウ）緑色ないしセランディン緑色（XLVII）、１２日
でピー（マメ）緑色ないしアルテミシア（ヨモギ）緑色
（XLVII）となる；盛り上がり、平坦、羊毛状、胞子形
成は僅かないし中庸；背面ピナード黄色（IV）ないしコ
ハク黄色（XVI）であるが、辺縁に向かって無色；可溶
性色素なし。

【００１８】２５℃、２５％硝酸グリセリン寒天培地−
コロニーは直径２．３ｃｍ、白色；盛り上がって放射状
に褶曲、ビロード状ないし僅かで貧弱な羊毛状、胞子形
成は無い；背面暖黄色、アンチモニー黄色ないし黄土色
（XV）；可溶性色素なし。５℃ツァペック酵母自己分解
物寒天培地−ミクロコロニー中に発芽。

【００１９】３７℃ツァペック酵母自己分解物寒天培地
−コロニーは直径６．７ｃｍ、白色だがある部分ではや
やオリーブ灰色（LI）；盛り上がって放射状に褶曲、ビ
ロード状ないし貧弱な羊毛状、胞子形成は無いか僅か；
背面暖黄色ないしオーキラシアス（ochraceous）黄色
（XV）；可溶性色素なし。

【００２０】２５℃コーンミール寒天培地−コロニーは
直径４．５ｃｍ、中心はティー緑色ないしセージ（sag
e）緑色だが、辺縁に向かって無色であり、１２日後に
はベチベル緑色（XLVII）となる；薄く、深部ではビロ
ード状、平坦；接種中心部での胞子形成良好、辺縁に向
かって不良；背面、中心部でセージ緑色（XLVII）ない
しオリーブ灰色（LI）だが、辺縁に向かって無色；可溶
性色素なし。

【００２１】２５℃馬鈴薯デキストロース寒天培地−コ
ロニーは直径４．３ｃｍ、グナファリウム（gnaphaliu
m）緑色ないしピー緑色（XLVII）であるが、辺縁に向か
って白色、１２日後にはスレート(slate)オリーブない
しアンドーバー（andover）緑色（XVII）となる；盛り
上がり、平坦、羊毛状、胞子形成は中庸ないし良好；背
面はレーゼル（razel）（XIV）麦わら黄色ないしコハク
黄色（XVI）であるが、辺縁では無色；可溶性色素はな
し、ないしクリーム色（XVI）。

【００２２】２５℃Ｖ−８汁寒天培地−コロニーは直径
３．９ｃｍ、ティー緑色（tea green）、ピー緑色(pea
green)ないしセージ緑色（XLVII）、１２日後には淡灰
オリーブ色（XLVI）となる；緩やかに盛り上がり、放射
状に褶曲、ビロード状ないし羊毛状、胞子形成は良好な
いし抜群；背面はガーネット褐色（Ｉ）ないしあかね褐
色（XIII）；可溶性色素なし。

【００２３】形態学的性質：形態学的性質は培養７日後
に、麦芽エキス寒天培地およびツァペック酵母自己分解
物寒天培地上で観察した。麦芽エキス寒天培地上では、
分生子柄がざらざらした壁をもち、大きさがばらばら
で、大きなものでは１００ないし７００μｍまたはそれ
以上の長さ、幅が１．５ないし３．０μｍ、非常に短い
もので４０〜８０×１．５〜２．０μｍである；長く分
岐したものからゆるく絡み合った鎖状の分生子、単輪生
または二輪生散開型によって特徴づけられるほうき状体
はフィアリドの輪生体をもつ２〜４分岐基底梗子からな
る；基底梗子はなめらかまたはざらざらした壁をもち、
１２〜２０×２〜３μｍである；フィアリドは殆ど４〜
８個のクラスター中にあり、８〜１１×２．０〜２．５
μｍである；分生子は球形ないし準球形、ある場合には
卵形ないし楕円形であり、その直径が２．５〜３．２
（〜３．５）μｍまたは３．０〜３．５（〜４．０）×
（２．０〜）２．５〜３．０μｍで、はっきりとしたい
がぐり状の壁をもつ。ツァペック酵母自己分解物寒天培
地上の分生子構造は散生であるが、実質的には麦芽エキ
ス寒天培地上のものと同じであった。

【００２４】温度の関係 増殖は２０、２８および２７℃で良好であった。４５お
よび５０℃では増殖しなかった。３９４６１株は急速な
増殖、ビロード状ないし羊毛状のコロニー、ざらざらし
た壁をもつ非常に長い分生子柄、およびはっきりとした
いがぐり状球形ないし準球形の分生子により特徴づけら
れる。このものは２０〜３７℃で増殖するが、４５また
は５０℃では増殖しない。胞子形成はＶ−８汁寒天培地
および馬鈴薯デキストロース寒天培地上良好であり、麦
芽エキス寒天培地上で中程度、ツァペック酵母自己分解
物寒天培地およびツァペックスクロース寒天培地上では
不良であるか形成しない。ほうき状体は単輪生であるか
二輪生であるが、後者が優先する。これはレイパーおよ
びトームが定義したペニシリウム・シンプリシッシマム
についての記載［Raper, K. B. and Thom, C. １９４
９。ペニシリアの手引書（A Manual of the Penicilli
a）、ウイリアムズおよびウイルキンズ、ボルチモア、
３０４〜３０５頁］およびピットの記載［Pitt、J. I.
１９７９。ペニシリウム属およびそのテレオモルフ状態
のユーペニシリウムおよびタラロマイセス。アカデミッ
ク・プレス、ニューヨーク、２７６〜２８０頁］に合致
する。この種の株はしばしば野外条件下での織物製品の
劣化と関連しており、多くの型の腐食物から単離されて
いる。また、このものは共通の土壌生息物として存在す
る。このように、このものはペニシリウム・シンプリシ
ッシマムの新規株とされる。

【００２５】本発明においては、式（Ｉ）で示されるイ
ソクロマン化合物の産生能力を有するペニシリウム・シ
ンプリシッシマムＦＥＲＭ ＢＰ−６３５７の突然変異
体または組換え体もまた使用することができる。突然変
異体または組換え体は自然発生的な突然変異、紫外線照
射による人工的突然変異、またはＮ−メチル−Ｎ’−ニ
トロ−Ｎ−ニトロソグアニジンもしくはメタンスルホン
酸エチルなどの変異誘発物質での処理、または細胞融合
などの細胞技術、遺伝子操作など、既知方法に従って得
ることができる。

【００２６】本発明によると、式（Ｉ）で示されるイソ
クロマン化合物は、ペニシリウム・シンプリシッシマム
ＦＥＲＭ ＢＰ−６３５７またはその突然変異体または
組換え体を、一般に醗酵による生物活性物質産生に採用
する条件と同様の条件下、好気的に醗酵することにより
製造することができる。

【００２７】ＦＥＲＭ ＢＰ−６３５７またはその突然
変異体または組換え体は、不溶性物質と水性栄養培地と
を含む固形培地上で通常醗酵させる。不溶性物質の量は
１０ないし５０％(w/v)の範囲である。醗酵に有用な適
切な不溶性物質は砂、砕石、木片チップ、およびふす
ま、オートミール、破砕トウモロコシ、キビ粒などの砕
いた穀粒である。本発明において、イソクロマノン化合
物を産生するＦＥＲＭＢＰ−６３５７の培養は、かかる
不溶物質と水性栄養培地を用い、２０ないし３５℃の温
度で、３ないし２０日間実施する。培地のｐＨは４．０
ないし９．０の範囲、好ましくは５．０ないし７．５の
範囲に調整する。

【００２８】醗酵に有用な栄養培地は資化し得る炭素
源、例えば、糖類、デンプンおよびグリセリン；および
有機窒素源、例えば、カゼイン、カゼインの酵素消化
物、大豆粕、綿実粉、落花生粉、コムギグルテン、大豆
粉、肉エキスおよび魚粉などである。増殖物質源、例え
ば、無機塩、塩化ナトリウムおよび炭酸カルシウム；微
量要素、例えば、鉄、マグネシウム、銅、亜鉛、コバル
トおよびマンガンなどもより好適な結果が得られる。利
用すれば醗酵に際し過剰の気泡が生じる場合には、抗気
泡剤、例えば、ポリプロピレングリコールまたはシリコ
ンなどを醗酵培地に添加してもよい。

【００２９】深部での増殖のために醗酵槽の培地に通気
するが、通気は培地容積あたり毎分３ないし２００％、
好ましくは５０ないし１５０％の無菌状態に維持する。
攪拌速度は採用した攪拌機の型により異なる。フラスコ
の振盪は通常１５０ないし２５０ｒｐｍで実施するが、
醗酵槽の場合は通常３００ないし２，０００ｒｐｍであ
る。無菌条件は微生物の継代と増殖の間中勿論維持しな
ければならない。

【００３０】このように産生させたイソクロマン化合物
は標準的な技法、例えば、抽出および種々のクロマトグ
ラフィー技法により単離することができる。該イソクロ
マン化合物は実質的に純粋な形状で醗酵混合物から単離
された。該イソクロマン化合物は種々のスペクトル分析
技術、例えば、ＵＶ分光測光法、ＮＭＲおよびマススペ
クトル法により同定した。本発明イソクロマン化合物の
生産量は下記の標準的in vitroプロトコールにより測定
した。

【００３１】アミロイド凝集阻害活性 ベータ−アミロイド凝集アッセイ ベータ−アミロイド（１〜４０）ペプチドを濾過蒸留水
に溶かし、２４０μM原液濃度とする。この溶液を浸式
超音波処理器により５分間超音波処理し、次いで４℃１
０分間、２，０００ｇで遠心する。上清を採り、使用時
まで−２０℃に貯蔵する。このペプチド溶液は−２０℃
にて少なくとも３週間は安定である。

【００３２】アッセイバッファー（１０×）は１．４５
M ＮａＣｌ、２７ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ
_２、１２ｍＭ ＣａＣｌ_２および２０ｍＭ Ｎａ_２ＨＰ
Ｏ_４からなり、貯蔵用として１ｍｌ／ｌ濃度のＨ_３ＰＯ
_４にて酸性とする。

【００３３】１０×アッセイバッファーを蒸留水に希釈
して１．５×とし、ＨＥＰＥＳおよびグルコースをそれ
ぞれ１．５ｍＭおよび９０ｍｇ／ｍｌとなるように添加
する。この溶液を１０Ｍ ＮａＯＨにてｐＨ７．３に調
整し、０．２２μｍフィルターユニットにより濾過する
（１．５×アッセイバッファー）。

【００３４】チオフラビンＴを蒸留水に溶かして６ｍＭ
原液濃度とし、０．２２μｍフィルターで濾過して４℃
にて貯蔵する。

【００３５】アッセイは９６穴マイクロタイタープレー
ト中で実施する。薬物１０μｌを通常の９６穴Ｕ底プレ
ートにて調製する。１．５×アッセイバッファー７０μ
ｌをＤ７、８および９以外のすべてのウエルにピペット
で入れる。Ｄ７、８および９のウエルには、濾過蒸留水
７０μｌを分配する。原液ベータ−アミロイド（１〜４
０）ペプチド２０μｌをアッセイプレートの各ウエルに
加える。原液チオフラビンＴを蒸留水で希釈して６０μ
Ｍとし、２０μｌをアッセイプレートのすべてのウエル
に加える。直ちにプレートをフルオロスカンII（ラブシ
ステムズ・リサーチ・センター、フィンランド）により
励起４４０ｎｍ／発光４８５ｎｍで読み取る。被いをし
たアッセイプレートをシェーカー上激しく攪拌しながら
１２０分間培養し、次いでフルオロスカンIIにより４４
０／４８５ｎｍで再度読み取る。シグナルは１２０分読
取りから０時読取りを差し引くことにより得る。凝集阻
害活性を次の式により計算する：

【００３６】

【数１】

【００３７】本発明化合物は０．３ないし３３μｇ／ｍ
ｌの範囲の阻害を示した。

【００３８】投与 本発明のイソクロマン化合物はアルツハイマー病等の治
療に有用である。該イソクロマン化合物は単独または製
薬的に許容し得る担体と組合わせて単回または複数回の
投与形態で投与することができる。適切な製剤担体は不
活性な固形希釈剤または充填剤、滅菌水溶液および種々
の有機溶媒である。該イソクロマン化合物と製薬的に許
容し得る担体とを組合わせることにより形成される製薬
組成物は種々の投与形態、例えば、錠剤、粉末、ロゼン
ジ、シロップ、注射溶液などの形態で容易に投与され
る。これらの製薬組成物は、要すれば、さらなる成分、
例えば、矯味剤、結合剤、賦形剤などを含んでもよい。
このように、経口投与を目的とする場合には、種々の賦
形剤、例えば、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、
およびリン酸カルシウムなどを含む錠剤が、種々の崩壊
剤、例えば、デンプン、アルギン酸およびある種の複合
珪酸塩などと、結合剤、例えば、ポリビニルピロリド
ン、スクロース、ゼラチンおよびアラビアゴムなどとと
もに採用される。さらに、潤滑剤、例えば、ステアリン
酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムおよびタルク
などが錠剤調製の目的にしばしば有用である。同様物質
の固形組成物もまた軟質および硬質充填ゼラチンカプセ
ルの充填剤として採用し得る。この組成物に好適な物質
はラクトースまたは乳糖および高分子量ポリエチレング
リコールである。水性懸濁液またはエリキシルが経口投
与に望ましい場合には、そこでの必須の活性成分は、種
々の甘味剤または矯味剤、着色剤または色素、および、
要すれば、乳化剤または懸濁剤を、希釈剤、例えば、
水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリンお
よびそれらの組合わせ物などとともに組合わせて用いて
もよい。

【００３９】非経口投与の場合には、イソクロマン化合
物をゴマ油または落花生油、水性プロピレングリコー
ル、または滅菌水溶液に溶かした溶液を採用する。かか
る水溶液は要すれば適宜緩衝化すべきであり、液体希釈
剤は先ず十分な塩溶液またはグルコースにより等張化す
る。これら特定の水溶液は動脈内、筋肉内、皮下および
腹腔内投与にとりわけ適している。これと関連して、採
用される滅菌水性媒体はすべて当業者既知の標準技法に
より容易に入手し得るものである。

【００４０】さらに、該イソクロマン化合物は皮膚の症
状を治療する場合に局所的に投与することも可能であ
り、その場合、標準的な製薬慣例に従い、クリーム、ジ
ェリー、ゲル、ペースト、軟膏などとして投与すること
ができる。

【００４１】一般に、該イソクロマン化合物は上記投与
形態中に５ないし７０重量％の範囲、好ましくは１０〜
５０重量％の濃度レベルで存在する。

【００４２】一般に、該活性化合物の治療上有効な日用
量は０．０１ないし１００ｍｇ／ｋｇの範囲、一般に約
１ないし約５ｍｇ／ｋｇの範囲である。一般に知られる
ように、活性化合物の有効投与量は意図する投与経路お
よび一般に医師が知っているような他の要素、例えば、
患者の年齢および体重により決まる。また、投与量は治
療すべき病状にも依存する。

【００４３】

【実施例】本発明を以下の実施例により説明する。しか
し、本発明はこの実施例の特定の細部に限定されないも
のと理解すべきである。スペクトルデータは以下の機器
により入手した：ＩＲ、島津ＩＲ−４７０；ＵＶ、ＪＡ
ＳＣＯ Ｕｂｅｓｔ−３０；旋光度、ＪＡＳＣＯ ＤＩ
Ｐ−３７０、５ｃｍセル；ＮＭＲ、ＪＥＯＬ ＪＮＭ−
ＧＸ２７０、装備品：ＬＳＩ−１１／７３ホストコンピ
ューター、ＴＨ−５整調可能プローブおよびバージョン
１．６ソフトウエア；およびＦＡＢ−ＭＳ、ＪＥＯＬ
ＪＭＳ−７００。ＮＭＲスペクトルはすべて特にことわ
らない限りＣＤ_３ＯＤ中で測定し、ピークの位置は百万
分の部分（ｐｐｍ）で表し、ＣＤ_３ＯＤのピーク、^１Ｈ
ＮＭＲでは３．３ｐｐｍ、^１３Ｃ ＮＭＲでは４９．
８ｐｐｍを基準とした。ピークの形状は以下のように示
す：ｓ（シングレット）、ｄ（ダブレット）、ｔ（トリ
プレット）、ｑ（カルテット）、ｍ（マルチプレット）
およびbr（幅広）。ＦＡＢ−ＭＳスペクトルはグリセリ
ン−マトリックスを用い測定した。

【００４４】ペニシリウム・シンプリシッシマムＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−６３５７の醗酵 ５００ｍｌ容量フラスコに１００ｍｌの培地−１（馬鈴
薯デキストロース・ブロス２．４％、酵母エキス０．５
％および寒天０．１％）を入れ、これにペニシリウム・
シンプリシッシマムＦＥＲＭ ＢＰ−６３５７斜面培養
物からの増殖型細胞懸濁液を接種した。フラスコを２６
℃、４日間、ロータリーシェーカー上７ｃｍの動程、２
１０ｒｐｍで振盪し、種子培養株を得た。種子培養株を
用いて、１００ｍｌの培地−２（グリセリン８．５％、
大豆粉０．５％、トウモロコシ粉１．０％、コーンステ
ィープリカー粉末０．２５％、ｐＨ５．０）を容れた５
個の５００ｍｌフラスコに接種した。フラスコを２６
℃、１４日間、ロータリーシェーカー上７ｃｍの動程、
２１０ｒｐｍで振盪した。

【００４５】抽出と単離 醗酵ブロス（６００ｍｌ）にエタノール６００ｍｌを添
加し、濾過した。濾液を濃縮して水溶液（５００ｍｌ）
とし、これを次いで５００ｍｌのｎ−ブタノールで抽出
した。抽出液を蒸発させ、油状残渣を得た。油状残渣を
ｎ−へキサンとメタノールに振り分け、メタノール層
（２５０ｍｇ）をＹＭＣ−パックＯＤＳＡＭ−３４３カ
ラム（２０×２５０ｍｍ、山村商標）に載せ、メタノー
ル／水（２０：８０〜１００：０、５０分間）により８
ｍｌ／分の流速で溶出した。検出は２２０ｎｍのＵＶ吸
収で実施した。活性を示す溶出ピークを集め、イソクロ
マン（９ｍｇ）を得た。

【００４６】ＨＰＬＣ分析 イソクロマン化合物の分析用ＨＰＬＣは、ＯＤＳカラム
（ＹＭＣ−パックＦＬ−ＯＤＳ３ ＡＭ、４．６×５０
ｍｍ、山村商標）を使用し、０．０５％ＴＦＡ／アセト
ニトリル〜０．０５％ＴＦＡ／水（５：９５ないし８
０：２０、８分間）により０．９ｍｌ／分の流速で実施
した。イソクロマン化合物の保持時間は７．１分であっ
た。

【００４７】特性化 イソクロマン化合物のスペクトルデータは以下のとおり
であった。 無色粉末 分子式：Ｃ_１５Ｈ_２０Ｏ_６；ＨＲＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ
２７９．１２３３［計算値：ｍ／ｚ２７９．１２３３
（Ｍ−Ｈ_２Ｏ＋Ｈ）＋］ ［α］_Ｄ ^２４２６．４°（ｃ０．１８、ＭｅＯＨ） ＵＶ λmax（MeOH）ｎｍ ２５５、３２０ ＩＲ γmax（ＫＢｒ）ｃｍ^−１３３９０、２９３０、
１６２８、１５７８、１５０１、１４６３、１２６０、
１１９２、１０８４、９５９、８２１^１ Ｈ ＮＭＲ δ６．１９（ｓ、１Ｈ）、５．５０
（ｓ、１Ｈ）、４．０４（ｍ、１Ｈ）、２．６０（ｄ
ｄ、Ｊ＝１７．３および３．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．４８
（ｄｄ、Ｊ＝１７．３および１１．１Ｈｚ、１Ｈ）、
１．５８（ｍ、２Ｈ）、１．３５（ｍ、６Ｈ）、０．９
３（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）^１３ Ｃ ＮＭＲ δ １７３．９（ｓ）、１６２．１
（ｓ）、１６１．６（ｓ）、１４５．８（ｓ）、１１
５．５（ｓ）、１０８．０（ｄ）、１００．４（ｓ）、
９７．４（ｄ）、６８．１（ｄ）、３７．３（ｔ）、３
６．０（ｔ）、３３．７（ｔ）、２７．２（ｔ）、２
４．５（ｔ）、１５．２（ｑ）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｎ 1/14 Ａ 1/15 1/15 Ｃ１２Ｐ 17/06 Ｃ１２Ｐ 17/06 //(Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:80） (Ｃ１２Ｐ 17/06 Ｃ１２Ｒ 1:80） (56)参考文献 特開 平６−78752（ＪＰ，Ａ) 特開 平６−80659（ＪＰ，Ａ) Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏ ｌ．12，Ｎｏ．10，ｐ．1012−1016 （1994) Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．，Ｖｏｌ. 51，Ｎｏ．２，ｐ．112−116（1998) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07D 311/76 A61P 25/00 A61P 25/28 C12N 1/14 C12P 17/06 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (5)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式（Ｉ）： 【化１】 で示されるイソクロマン化合物またはその製薬的に許容
   し得る塩。
2. 【請求項２】 請求項１記載の化合物を産生し得るペニ
   シリウム・シンプリシッシマム（Penicillium simplici
   ssimum）ＦＥＲＭ ＢＰ−６３５７の培養株。
3. 【請求項３】 ペニシリウム・シンプリシッシマムＦＥ
   ＲＭ ＢＰ−６３５７を培養することを含む請求項１記
   載の化合物の製造法。
4. 【請求項４】 さらに次工程として醗酵ブロスから当該
   イソクロマン化合物を単離することを含む請求項３記載
   の製造法。
5. 【請求項５】 有効量の請求項１記載の化合物またはそ
   の製薬的に許容し得る塩、および製薬的に許容し得る担
   体を含んでなることを特徴とするアルツハイマー病治療
   用製薬組成物。