JPH07116054B2 - 豚下痢症ワクチン - Google Patents
豚下痢症ワクチンInfo
- Publication number
- JPH07116054B2 JPH07116054B2 JP19097786A JP19097786A JPH07116054B2 JP H07116054 B2 JPH07116054 B2 JP H07116054B2 JP 19097786 A JP19097786 A JP 19097786A JP 19097786 A JP19097786 A JP 19097786A JP H07116054 B2 JPH07116054 B2 JP H07116054B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- diarrhea
- parvovirus
- strain
- virus
- pigs
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- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は豚下痢症ワクチンに関するものである。
1985年にこの発明の発明者等が大阪府下の養豚場で発生
した豚の下痢症例の下痢便から分離したウイルスを、こ
の発明ではパルボウイルスの所定株として使用するが、
この株は豚甲状腺（PT）と豚腎臓（SK）の各初代培養細
胞で細胞変性効果を伴つて良く増殖し、また培養液にト
リプシンを0.5γ/ml加えることによつてその増殖に増強
効果が見られる。そしてこの株は詳細に同定され、つぎ
に示す性状が確認された。
した豚の下痢症例の下痢便から分離したウイルスを、こ
の発明ではパルボウイルスの所定株として使用するが、
この株は豚甲状腺（PT）と豚腎臓（SK）の各初代培養細
胞で細胞変性効果を伴つて良く増殖し、また培養液にト
リプシンを0.5γ/ml加えることによつてその増殖に増強
効果が見られる。そしてこの株は詳細に同定され、つぎ
に示す性状が確認された。
すなわち、この株は５−ヨード−２′−デオキシウリジ
ン（IUDR）を50γ/ml含む培養液中で増殖が抑制される
ことから核酸型はDNAであり、20％エーテルおよびpH3.0
の酸によつて不活化されることなく、56℃、30分の加熱
に対してもウイルス価の低下は見られず、50nmの孔径の
フイルターも通過する。そしてさらにこの株を勾配濃度
超遠心分離精製法によつて精製し、得られたウイルス粒
子の形態を電子顕微鏡で観察したところパルボウイルス
の形態にきわめて類似したものであることが認められ
た。このようにこの株は、パルボウイルス類似の性状を
有する一方で、既知のパルボウイルスである豚パルボウ
イルス、犬パルボウイルス、猫パルボウイルスおよび牛
パルボウイルスとは血清学的性状および赤血球凝集性状
において容易に区別され、その存在はこの発明の発明者
等によつて初めて明らかにされたのである。
ン（IUDR）を50γ/ml含む培養液中で増殖が抑制される
ことから核酸型はDNAであり、20％エーテルおよびpH3.0
の酸によつて不活化されることなく、56℃、30分の加熱
に対してもウイルス価の低下は見られず、50nmの孔径の
フイルターも通過する。そしてさらにこの株を勾配濃度
超遠心分離精製法によつて精製し、得られたウイルス粒
子の形態を電子顕微鏡で観察したところパルボウイルス
の形態にきわめて類似したものであることが認められ
た。このようにこの株は、パルボウイルス類似の性状を
有する一方で、既知のパルボウイルスである豚パルボウ
イルス、犬パルボウイルス、猫パルボウイルスおよび牛
パルボウイルスとは血清学的性状および赤血球凝集性状
において容易に区別され、その存在はこの発明の発明者
等によつて初めて明らかにされたのである。
この株の病原性は初乳未摂取初生豚を用いて調べた結果
によると、106.0TCID50のウイルスの経口もしくは経鼻
接種した初生豚はいずれも下痢を呈し、接種後２〜６日
目に死亡し、下痢便および死亡豚の臓器から接種ウイル
スの回収を試みたところ下痢便および小腸のほか呼吸気
道からもウイルスが検出され、また病理学的検査により
小腸の充出血および上皮細胞の剥離が顕著に認められ
た。
によると、106.0TCID50のウイルスの経口もしくは経鼻
接種した初生豚はいずれも下痢を呈し、接種後２〜６日
目に死亡し、下痢便および死亡豚の臓器から接種ウイル
スの回収を試みたところ下痢便および小腸のほか呼吸気
道からもウイルスが検出され、また病理学的検査により
小腸の充出血および上皮細胞の剥離が顕著に認められ
た。
この発明の発明者等による1983年以降に得られた豚血清
の抗体調査によれば５〜６カ月齢豚では80％以上に中和
抗体の保有が確認されており、わが国のいずれの地区に
おいても同様に高率な抗体が検出される状況にある。
の抗体調査によれば５〜６カ月齢豚では80％以上に中和
抗体の保有が確認されており、わが国のいずれの地区に
おいても同様に高率な抗体が検出される状況にある。
このように、従来の技術においては、豚パルボウイルス
に起因する豚の下痢症を予防するための有効かつ安全な
ワクチンはないという問題点があり、この病原ウイルス
が大阪府下の養豚場をはじめとし、わが国の豚に広く伝
播している状況下で、養豚場を経営する者は安定した生
産を行なうことについて大きな不安があった。
に起因する豚の下痢症を予防するための有効かつ安全な
ワクチンはないという問題点があり、この病原ウイルス
が大阪府下の養豚場をはじめとし、わが国の豚に広く伝
播している状況下で、養豚場を経営する者は安定した生
産を行なうことについて大きな不安があった。
上記の問題点を解決するために、この発明は豚の下痢便
から分離したパルボウイルスＨ−45株を組織培養で増殖
させ、それを不活化した抗原を豚下痢症ワクチンの有効
成分とする手段を採用したものである。以下その詳細を
述べる。
から分離したパルボウイルスＨ−45株を組織培養で増殖
させ、それを不活化した抗原を豚下痢症ワクチンの有効
成分とする手段を採用したものである。以下その詳細を
述べる。
まず、この発明のパルボウイルスＨ−45株は豚腎臓（S
K）培養細胞、豚甲状腺（PT）培養細胞および豚腎株化
（ESK）継代培養細胞のいずれの培養細胞においても増
殖するので、既知の方法によりこれらの単層細胞を調製
し、これにパルボウイルスＨ−45株を接種し、たとえば
37℃で約60分吸着させた後、10％トリプトース・フオス
フエイト・ブロス,L−グルタミンを含有するイーグルME
M培地を加え、６〜14日間37℃で培養する。この際0.5〜
1.0γ/mlのトリプシンを培地に加えてもよい。このよう
な操作を経て得られたウイルス含有培養液にホルマリン
を0.2容量％添加し、30℃で７日間感作して不活化し、
不活化されたウイルス液をそのまま豚下痢症ワクチンと
するか、または抗原性の促進のためにアルミニウムゲル
アジユバントを20容量％以下、または鉱油、有機物油も
しくは親水性油性のアジユバントを10〜70容量％を加え
てアジユバント添加不活化ワクチンとすることができ
る。
K）培養細胞、豚甲状腺（PT）培養細胞および豚腎株化
（ESK）継代培養細胞のいずれの培養細胞においても増
殖するので、既知の方法によりこれらの単層細胞を調製
し、これにパルボウイルスＨ−45株を接種し、たとえば
37℃で約60分吸着させた後、10％トリプトース・フオス
フエイト・ブロス,L−グルタミンを含有するイーグルME
M培地を加え、６〜14日間37℃で培養する。この際0.5〜
1.0γ/mlのトリプシンを培地に加えてもよい。このよう
な操作を経て得られたウイルス含有培養液にホルマリン
を0.2容量％添加し、30℃で７日間感作して不活化し、
不活化されたウイルス液をそのまま豚下痢症ワクチンと
するか、または抗原性の促進のためにアルミニウムゲル
アジユバントを20容量％以下、または鉱油、有機物油も
しくは親水性油性のアジユバントを10〜70容量％を加え
てアジユバント添加不活化ワクチンとすることができ
る。
パルボウイルスＨ−45株（1985年にこの発明の発明者等
が大阪府下の養豚場で発生した豚の下痢症例の下痢便か
ら採取し、豚甲状腺（PT）と豚腎臓（SK）の各初代培養
細胞で細胞変性効果を伴って良く増殖し、また培養液に
トリプシンを0.5γ/ml加えることによってその増殖に増
強効果が見られた株である。）を初代PT培養細胞に接種
後トリプシン（TypeIII）を0.5γ/ml添加したイーグルM
EM培地（トリプトース・フオスフエイト・ブロス,L−グ
ルタミン含有）を加え、37℃で６日間培養して、HA力価
2048倍のウイルス含有培養液を得た。これにホルマリン
を0.2容量％加えて30℃で７日間放置し、ウイルスを不
活化し、さらにりん酸アルミニウムゲルアジユバントを
20容量％、親水性油性アジユバントを70容量％それぞれ
添加した二種類の不活化ワクチンを調製した。これらワ
クチンを１カ月齢の豚に2mlずつ３週間隔で２回皮下に
注射して免疫の産生を調べた。その結果は第１表に示し
たが、りん酸アルミニウムゲル（APG）添加ワクチンで
約３カ月以上、親水性油性アジユバント（OIW）添加ワ
クチンで約５カ月以上それぞれの免疫が持続されること
がわかつた。また、親水性油性アジユバント添加ワクチ
ンを初乳未摂取初生豚８頭のうち６頭に生後24時間と16
日齢 備考：注射量2mlずつ、３周間隔で２回皮下時の２回に2
mlずつを皮下に注射し、その後30日齢時にパルボウイル
スＨ−45株を104.5TCID50/ml含む培養液3mlでほかの対
照用の２頭と共に経鼻攻撃し、下痢症状の発現と糞便か
らのウイルスの排泄を攻撃後７日間について調査した。
その結果は第２表に示したが、豚番号20〜25の免疫群の
６頭全例には下痢症状を示したものはなく、また攻撃後
１日目に糞便からウイルスが検出 された豚番号23の豚を除いて免疫群の糞便からのウイル
ス排泄は認められなかつた。一方、豚番号26および27の
攻撃対照群の２頭の豚のうち１頭は攻撃２日目から下痢
症状が認められ、その下痢は４日間続いた。他の１頭は
下痢症状は現われなかつた。しかしこれら２頭の糞便か
らは攻撃後１日目から４〜５日目に至るまでウイルスの
排泄が確認された。以上の成績からワクチン注射によつ
て豚にパルボウイルスＨ−45株感染症に対する免疫が付
与されることが明らかとなつた。
が大阪府下の養豚場で発生した豚の下痢症例の下痢便か
ら採取し、豚甲状腺（PT）と豚腎臓（SK）の各初代培養
細胞で細胞変性効果を伴って良く増殖し、また培養液に
トリプシンを0.5γ/ml加えることによってその増殖に増
強効果が見られた株である。）を初代PT培養細胞に接種
後トリプシン（TypeIII）を0.5γ/ml添加したイーグルM
EM培地（トリプトース・フオスフエイト・ブロス,L−グ
ルタミン含有）を加え、37℃で６日間培養して、HA力価
2048倍のウイルス含有培養液を得た。これにホルマリン
を0.2容量％加えて30℃で７日間放置し、ウイルスを不
活化し、さらにりん酸アルミニウムゲルアジユバントを
20容量％、親水性油性アジユバントを70容量％それぞれ
添加した二種類の不活化ワクチンを調製した。これらワ
クチンを１カ月齢の豚に2mlずつ３週間隔で２回皮下に
注射して免疫の産生を調べた。その結果は第１表に示し
たが、りん酸アルミニウムゲル（APG）添加ワクチンで
約３カ月以上、親水性油性アジユバント（OIW）添加ワ
クチンで約５カ月以上それぞれの免疫が持続されること
がわかつた。また、親水性油性アジユバント添加ワクチ
ンを初乳未摂取初生豚８頭のうち６頭に生後24時間と16
日齢 備考：注射量2mlずつ、３周間隔で２回皮下時の２回に2
mlずつを皮下に注射し、その後30日齢時にパルボウイル
スＨ−45株を104.5TCID50/ml含む培養液3mlでほかの対
照用の２頭と共に経鼻攻撃し、下痢症状の発現と糞便か
らのウイルスの排泄を攻撃後７日間について調査した。
その結果は第２表に示したが、豚番号20〜25の免疫群の
６頭全例には下痢症状を示したものはなく、また攻撃後
１日目に糞便からウイルスが検出 された豚番号23の豚を除いて免疫群の糞便からのウイル
ス排泄は認められなかつた。一方、豚番号26および27の
攻撃対照群の２頭の豚のうち１頭は攻撃２日目から下痢
症状が認められ、その下痢は４日間続いた。他の１頭は
下痢症状は現われなかつた。しかしこれら２頭の糞便か
らは攻撃後１日目から４〜５日目に至るまでウイルスの
排泄が確認された。以上の成績からワクチン注射によつ
て豚にパルボウイルスＨ−45株感染症に対する免疫が付
与されることが明らかとなつた。
以上述べたことからこの発明のワクチンはつぎのような
効果を現わす。すなわち、パルボウイルスＨ−45株に対
する抗体を保有しない１〜３カ月齢の豚に2mlずつ２〜
４週間隔で皮下もしくは筋肉内に２回注射すれば豚は何
等の異常を示さず、２回注射後１週目にはHI抗体価128
〜4096倍の抗体を産生し、このようにワクチン注射を受
けた豚はパルボウイルスＨ−45株の経鼻接種による下痢
の発病を充分な有効性と安全性のもとに阻止するのであ
る。したがつて、パルボウイルスＨ−45株に起因する豚
の下痢症を有効かつ安全に予防し、従来の養豚場経営の
不安をも充分に解消することができるので、この発明の
意義はきわめて大きいということができる。
効果を現わす。すなわち、パルボウイルスＨ−45株に対
する抗体を保有しない１〜３カ月齢の豚に2mlずつ２〜
４週間隔で皮下もしくは筋肉内に２回注射すれば豚は何
等の異常を示さず、２回注射後１週目にはHI抗体価128
〜4096倍の抗体を産生し、このようにワクチン注射を受
けた豚はパルボウイルスＨ−45株の経鼻接種による下痢
の発病を充分な有効性と安全性のもとに阻止するのであ
る。したがつて、パルボウイルスＨ−45株に起因する豚
の下痢症を有効かつ安全に予防し、従来の養豚場経営の
不安をも充分に解消することができるので、この発明の
意義はきわめて大きいということができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 中井 正久 大阪府枚方市楠葉野田１丁目15番20号
Claims (1)
- 【請求項１】豚の下痢便から分離したパルボウイルスＨ
−45株を組織培養して増殖させ、これを不活化して得ら
れる抗原を有効成分としたことを特徴とする豚下痢症ワ
クチン。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19097786A JPH07116054B2 (ja) | 1986-08-12 | 1986-08-12 | 豚下痢症ワクチン |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19097786A JPH07116054B2 (ja) | 1986-08-12 | 1986-08-12 | 豚下痢症ワクチン |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6344533A JPS6344533A (ja) | 1988-02-25 |
| JPH07116054B2 true JPH07116054B2 (ja) | 1995-12-13 |
Family
ID=16266816
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19097786A Expired - Fee Related JPH07116054B2 (ja) | 1986-08-12 | 1986-08-12 | 豚下痢症ワクチン |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07116054B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0739131B2 (ja) * | 1989-03-30 | 1995-05-01 | キヨーラク株式会社 | 輸液用プラスチック容器の製造方法 |
-
1986
- 1986-08-12 JP JP19097786A patent/JPH07116054B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6344533A (ja) | 1988-02-25 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |