JPH0662676B2 - 精製されたプロテインｇ - Google Patents

精製されたプロテインｇ

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JPH0662676B2
JPH0662676B2 JP59128398A JP12839884A JPH0662676B2 JP H0662676 B2 JPH0662676 B2 JP H0662676B2 JP 59128398 A JP59128398 A JP 59128398A JP 12839884 A JP12839884 A JP 12839884A JP H0662676 B2 JPH0662676 B2 JP H0662676B2
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クロンバール ゴーラン
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ファーマシア アクチーボラグ
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    • C07K14/70535—Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64 (CD2314/705F)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C07K1/36—Extraction; Separation; Purification by a combination of two or more processes of different types
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Description

【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は、連鎖状球菌より細胞壁蛋白を回収する方法及
び精製された連鎖状球菌のFcリセプター第III型（精製
されたプロテインＧ）に関するものであり、酵素による
可溶化とその後おそらくは可溶化蛋白を単離することに
より成る。
特に本発明は精製されたFcリセプター第III型（精製さ
れたプロテインＧ）に関する。
発明の背景 細菌のFcリセプターとそれを回収する方法は公知であり
文献に記載されている。
たとえば米国特許明細書第３８５０７９８号には、トリ
プシンという酵素を用いる酵素的可溶化によつて、ブド
ウ状球菌よりFcリセプターであるプロテインＡを回収す
る方法が記載されている。
又Ａ群連鎖状球菌のFc反応性蛋白の可溶化に、フアツグ
（fag）より誘導した細胞壁分解酵素を用いる類似の方
法も示唆されている。
この後者の方法は、細胞壁中の長い糖の高分子および架
橋するペプチドブリツジを分解することにより、この構
造に結合した全ての物質の可溶化が可能になるという原
理のひとつの例である。細胞壁の残りは可溶化した分子
上に残る。又可溶化と同時に連鎖状球菌の全ての可溶性
の細胞内物質は得られる液体中に放出されるためこの液
は非常に複雑である。
前記の米国特許においてブドウ状球菌に使用されるとい
う前者の方法は、もつと選択性の高い方法である。しか
し本発明者の知るかぎりでは、この方法は連鎖状球菌に
関連して使用されたことも記載されたこともない。逆に
Fcリセプターの蛋白の性質とこれらの表面構造の蛋白分
解酵素に対する感受性に関し知られている事実を考える
と、この方法は役に立たないと見なされてきた。ふつう
は蛋白が完全に分解されてアミノ酸になり、全ての生物
活性が失なわれてしまう。
このような経験に対し、本発明によると前者の方法が連
鎖状球菌にも使用が可能であり、この方法が連鎖状球菌
のFcリセプター第III型（以下プロテインＧと記載す
る）の回収に特に有用であることが明らかになつた。
プロテインＡやプロテインＧなどのFcリセプターは免疫
グロブリンのFc部分に結合できるという有用な特徴を有
しており、治療や分析面への使用に有効である。その有
効な応用例のひとつはいくつかの自己免疫疾患に関する
血液の対外処理であり、そこではFcリセプターは血液か
らいわゆる免疫複合体を除去するのに使用できる。しか
しプロテインＧはプロテインＡに比較していくつかの利
点を有しており、プロテインＡよりはるかにすぐれてい
る。たとえばプロテインＡはヒトのIgG３に結合できな
いが、プロテインＧはIgGの全てのサブクラスに結合で
きる。さらにプロテインＧはIgAやIgMには結合しないた
め、これらの免疫グロブリンにも結合するプロテインＡ
に比較してより選択性の高いFcリセプターということが
できる。
本発明者の知る限りにおいては、連鎖状球菌からFcリセ
プターを回収する簡便な方法がないため、そのような方
法を見つけるべき必要性は大きいと考えられる。
発明の記述 本発明によれば、連鎖状球菌から細胞壁蛋白を回収する
方法が与えられ、その方法は酵素的可溶化とおそらくは
その後の可溶化蛋白の単離より成る。この方法は蛋白分
解酵素を使用して可溶化を行なうことを特徴とする。
本発明による蛋白分解酵素はパパイン、トリプシン、ペ
プシンの中から選ばれ、パパインが最も好ましい。
前記した通り、連鎖状球菌より回収したこのFcリセプタ
ーはIgGの全てのサブクラスに結合することができる。
実験によるとこのFcリセプター（酵素による前処理を行
わないで得たプロテインＧ）は、血液蛋白中のひとつの
有効な蛋白であるアルブミンにも結合することが分つ
た。これは、前記したように免疫複合体を除去するため
の血液の体外処理にプロテインＧを使用した場合、プロ
テインＧの結合表面に対しIgGとアルブミンの間で競合
が起きることを意味している。
本発明によれば、連鎖状球菌を可溶化に先立ち酵素によ
る前処理を行なうと、さらに選択性の高い本発明のプロ
テインＧ（すなわちIgGのみに結合しアルブミンに結合
しないプロテインＧ）が得られることが分つた。
本発明によれば、この酵素による前処理に蛋白分解酵素
が使用され、トリプシンとペプシンが現在のところ最も
好ましい蛋白分解酵素である。
この可溶化した細胞壁蛋白は、ヨーロツパ特許公報第０
０４６９１５号に記載の方法により単離し回収すること
ができる。つまりこの公知の方法では、可溶化した蛋白
をおそらく大きな不純物を濾過した後で、可溶性の担体
に固定化したこの蛋白に対する親和性を有するリガンド
と接触させて複合体を形成させ、次におそらくこの複合
体から濾過により小さな不純物を除き、次にこの蛋白を
放出させる。次にこの放出された蛋白を濾過により分離
回収する（この方法の詳細については前記のヨーロツパ
の特許公報を参照。）。
スウエーデンの特許出願第８３０２６３８−５号にも、
本発明に使用可能な同様の方法が記載されている。
本発明によれば、酵素は浮遊液の形で用いるのが好まし
く、この場合酵素浮遊液の好ましい濃度は、１０％の細
菌浮遊液１mlにつき５０−２５０μｇ、好ましくは７５
−１５０μｇである。
以下の例において本発明を具体的に説明するが、本発明
はこれらに限定されるものではない。
例１ 酵素による可溶化 ヒトＧ群連鎖状球菌Ｇ１４８をトツド／ヒユーイツトブ
ロース（Todd／Hewitt-broth）中で培養、0.01Ｍトリス
−HCl、pH8.0に浮遊させた（１０％浮遊液）。この浮遊
液１mlにつき、同じ緩衝液中の0.4ＭＬ−システイン１
００μｌと種々の濃度のパパインを１０μｌ加え、この
混合液を３７℃で１時間反応させた。ヨードアセトアミ
ドを最終濃度が６mMになるように加えた。
単離 こうして得られた細菌の浮遊液を３０分間遠心分離（２
０００ｇ）し、次に上澄液を超遠心分離（５００００
ｇ）し、ただちに−８０℃で凍結した。これを出発物質
としてDEAE−セルロースゲルでイオン交換クロマトグラ
フイーを、セフアデツクスＧ１００でゲル濾過を、そし
てセフアロース４Ｂ結合IgGでアフイニテイクロマトグ
ラフイーを連続して行ない蛋白を単離した。
分析 単離した蛋白はSDS-PAGEの分析で均一のバンドとして泳
動し、アガロースゲル電気泳動ではアルフア１領域に単
一のバンドが観察され、非常に純度が高いことが証明さ
れた。
デイスク及びロツドのSDS-PAGE（プロテインＧを標識）
において見かけの分子量３０５００が得られた。この蛋
白を２−メルカプトエタノールで処理しても結果に影響
はなかつた。
例２ 酵素による前処理 １０％の細菌の浮遊液（前記と同じ連鎖状球菌）１mlに
つき0.5mgのペプシンを0.1Ｍの酢酸緩衝液、pH4.0、に
加えて混合液を３７℃で３０分間反応させた。残つてい
る細菌について公知の方法で試験した結果、アルブミン
に結合する能力は全く消失し、IgGに結合する能力は影
響を受けなかつた。
酵素による可溶化 ペプシンで処理した細菌を0.1Ｍトリス-HCl、pH8.0、で
洗浄し、この同じ緩衝液で１０％浮遊液になるように希
釈した。次に前記の方法と同じ方法でパパインによる酵
素的可溶化を行なつて、IgGに選択的に結合する能力を
有するプロテインＧを回収した。
工業的応用 本発明による方法は連鎖状球菌の細胞壁蛋白（特にFcリ
セプター）を回収するのに使用可能であり、特に連鎖状
球菌のFcリセプター第III型（プロテインＧ）の回収に
有効である。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】IgGの全てのサブクラスに結合することが
    できるがIgAとIgMに結合することはできず、かつアルブ
    ミンに結合しないことを特徴とする精製されたプロテイ
    ンＧであって、さらにアガロースゲル電気泳動ではアル
    ファ領域に単一のバンドを示し、2-メルカプトエタノー
    ルにより還元されないことを特徴とする上記精製された
    プロテインＧ。
JP59128398A 1983-06-22 1984-06-21 精製されたプロテインｇ Expired - Lifetime JPH0662676B2 (ja)

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SE8303578A SE451596B (sv) 1983-06-22 1983-06-22 Forfarande for utvinning av protein g
SE8303578-2 1983-06-22

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JPS6037996A JPS6037996A (ja) 1985-02-27
JPH0662676B2 true JPH0662676B2 (ja) 1994-08-17

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Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE8300693L (sv) * 1983-02-09 1984-08-10 Sven Lofdahl Sett att framstella och isolera proteiner och polypeptider samt en hybridvektor for detta
US4766065A (en) * 1984-08-23 1988-08-23 Becton Dickinson And Company Detection of cell membrane protein
SE459503B (sv) * 1985-05-03 1989-07-10 Excorim Kommanditbolag Hybrid-dna-molekyl innefattande dna-sekvens som kodar foer protein g samt foerfarande foer framstaellning av protein g
US4954618A (en) * 1986-02-14 1990-09-04 Genex Corporation Cloned streptococcal genes encoding protein G and their use to construct recombinant microorganisms to produce protein G
US4956296A (en) * 1987-06-19 1990-09-11 Genex Corporation Cloned streptococcal genes encoding protein G and their use to construct recombinant microorganisms to produce protein G
US4977247A (en) * 1986-02-14 1990-12-11 Genex Corporation Immobilized protein G variants and the use thereof
US5082773A (en) * 1986-02-14 1992-01-21 Pharmacia Lkb Biotechnology Ab Cloned streptococcal genes encoding protein G and their use to construct recombinant microorganisms to produce protein G
US5229492A (en) * 1986-02-14 1993-07-20 Pharmacia Lkb Biotechnology Ab Cloned streptococcal genes encoding protein G and their use to construct recombinant microorganisms to produce protein G
US5312901A (en) * 1986-02-14 1994-05-17 Pharmacia Lkb Biotechnology Ab Cloned streptococcal genes encoding protein G and their use to construct recombinant microorganisms to produce protein G
JPS62205597A (ja) * 1986-03-05 1987-09-10 Toshiba Corp 半導体感知増幅回路
SE459662B (sv) * 1986-03-21 1989-07-24 Pharmacia Ab Hybrid-dna-molekyl som kodar foer ett protein med samma igg specificitet som protein g, plasmid innehaallande densamma samt foerfarande foer framstaellning av proteinet
US5985599A (en) * 1986-05-29 1999-11-16 The Austin Research Institute FC receptor for immunoglobulin
AU595623B2 (en) * 1986-05-29 1990-04-05 Ilexus Pty Ltd Fc receptor for immunoglobulin
US5451669A (en) * 1986-05-29 1995-09-19 The University Of Melbourne DNA encoding for an Fc receptor for immunoglobulin
US4945157A (en) * 1988-05-27 1990-07-31 University Of Florida Novel Extraction procedure for protein G
US5122449A (en) * 1988-10-07 1992-06-16 Eastman Kodak Company Use of a protease in the extraction of chlamydial, gonococcal and herpes antigens
SE466259B (sv) * 1990-05-31 1992-01-20 Arne Forsgren Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal
SE9002212D0 (sv) * 1990-06-21 1990-06-21 Hightech Receptor Ab Igg binding protein
US6255059B1 (en) 1993-03-31 2001-07-03 Cadus Pharmaceutical Corporation Methods for identifying G protein coupled receptor effectors
US6864060B1 (en) 1993-03-31 2005-03-08 Cadus Technologies, Inc. Yeast cells expressing modified G proteins and methods of use therefor
US6100042A (en) * 1993-03-31 2000-08-08 Cadus Pharmaceutical Corporation Yeast cells engineered to produce pheromone system protein surrogates, and uses therefor
US7235648B1 (en) 1993-03-31 2007-06-26 Cadus Technologies, Inc. Yeast cells engineered to produce pheromone system protein surrogates, and uses therefor
US20030054402A1 (en) * 1993-03-31 2003-03-20 Cadus Pharmaceutical Corporation Methods and compositions for identifying receptor effectors
US6410775B1 (en) * 1995-06-07 2002-06-25 La Jolla Pharmaceutical Company APL immunoreactive peptides, conjugates thereof and methods of treatment for APL antibody-mediated pathologies
US6355473B1 (en) 1998-05-06 2002-03-12 Cadus Pharmaceutical Corp. Yeast cells having mutations in stp22 and uses therefor
US7081360B2 (en) * 1998-07-28 2006-07-25 Cadus Technologies, Inc. Expression of G protein-coupled receptors with altered ligand binding and/or coupling properties
US7273747B2 (en) * 1998-08-27 2007-09-25 Cadus Technologies, Inc. Cell having amplified signal transduction pathway responses and uses therefor
US6251605B1 (en) 1998-10-27 2001-06-26 Cadus Pharmaceutical Corporation Yeast cells having mutations in Cav1 and uses therefor
WO2000031261A2 (en) * 1998-11-25 2000-06-02 Cadus Pharmaceutical Corporation Methods and compositions for identifying effectors of the formyl peptide receptor like-1 (fprl-1) receptor
US6504008B1 (en) 1999-02-01 2003-01-07 Cadus Technologies, Inc. Cell based signal generation
US6555325B1 (en) 1999-06-14 2003-04-29 Cadus Technologies, Inc. System for detection of a functional interaction between a compound and a cellular signal transduction component
US7223533B2 (en) 1999-09-10 2007-05-29 Cadus Technologies, Inc. Cell surface proteins and use thereof as indicators of activation of cellular signal transduction pathways
WO2004062619A2 (en) 2003-01-13 2004-07-29 Macrogenics, Inc. SOLUBLE FcϜR FUSION PROTEINS AND METHODS OF USE THEREOF

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3850798A (en) * 1972-11-06 1974-11-26 J Sjoquist Method for separating a polypeptide from microorganisms
EP0046915A2 (en) * 1980-09-02 1982-03-10 Gambro Lundia AB A method for the recovery of a peptide-containing compound, and an apparatus for the realization of the method

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0078556B1 (en) * 1981-11-03 1986-03-12 Shell Internationale Researchmaatschappij B.V. Process for cell disruption
SE451843B (sv) * 1983-05-09 1987-11-02 Gambro Lundia Ab Forfarande for utvinning av en forening

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3850798A (en) * 1972-11-06 1974-11-26 J Sjoquist Method for separating a polypeptide from microorganisms
US3850798B1 (ja) * 1972-11-06 1986-05-20
EP0046915A2 (en) * 1980-09-02 1982-03-10 Gambro Lundia AB A method for the recovery of a peptide-containing compound, and an apparatus for the realization of the method

Also Published As

Publication number Publication date
SE451596B (sv) 1987-10-19
JPS6037996A (ja) 1985-02-27
SE8303578L (sv) 1984-12-23
SE8303578D0 (sv) 1983-06-22
US4948874A (en) 1990-08-14
EP0131142A2 (en) 1985-01-16
EP0131142A3 (en) 1986-02-26

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