JPH06506459A

JPH06506459A - プラスミノーゲン活性化剤を含有する多重ボーラス投与用医薬パッケージユニット

Info

Publication number: JPH06506459A
Application number: JP4507994A
Authority: JP
Inventors: マーティン，ウルリッヒ; ケニク，レインハルト
Original assignee: ロシュダイアグノスティックスゲーエムベーハー
Priority date: 1991-04-16
Filing date: 1992-04-15
Publication date: 1994-07-21
Also published as: WO1992018157A1; US6235279B1; HK117096A; ATE132373T1; EP0580685B1; CA2107476C; CA2107476A1; US5500411A; ES2082465T3; DK0580685T3; EP0709096A2; GR3018740T3; DE59204945D1; US5690931A; EP0709096A3; EP0580685A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明の主題は、プラスミノーゲン活性化剤を含む、多重ポーラス（ｂｏｌｕｓ）投与用医薬パッケージユニットである。

本発明は、特に血栓性疾患の治療のための医薬パッケージユニットに関するものであって、このパッケージユニットは本質的に２つの構成要素を含んでおり、１番目の構成要素はプラスミノーゲン活性化因子様の作用を有し、ｔ−ＰＡに比較して半減期が長期化された通常の医薬投与形態のタンパク質からなっており、２番目の構成要素はこのタンパク質の投与を２回またはそれ以上のポーラス注射に分割投与するよ！うにとの指示書からなっている。

心筋梗塞の血栓溶解治療法は、医学的に十分試験され立証された心臓の冠状動脈中の閉塞性血栓を除去する効果的な治療法である。ＤＮＡ技術によって製造されたｔ−ＰＡ（組織型プラスミノーゲン活性化剤）はこの疾病の治療のために世界中で使用され、冠血栓の溶解に効果的であることが立証済みである（ｙ６ｒ５ｔｒａｅｔｅｅＬ　ａｌ、、　Ｌａｎｃｅｔｌｌ、１９８５；９６５−９６９　）　、心筋梗塞の早期溶解治療によって、他の治療法に比較して心筋梗塞後桟された機能が増進され（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、Ａｍ、Ｃｏ１１．Ｃａｒｄｉｏｌ、、１９８９；１３：１４６９−１４７６）　、また池の治療法に比較して、より高い生存率が得られる（Ｗｉｌｃｏｘ　ｅｔ　ａｔ、、　Ｌａｎｃｅｔ　ＩＩ　、１９８８；５２５−５３９　）。

総計数千人の患者に関する数多くの血栓溶解研究は、心筋組織への早期血行再開（ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）をもたらす迅速な血栓溶解を行なうことによって、心筋組織を救い、したがって生存率を上昇させる結果となることを示している（ＧＩＳＳＩ　５ｔｕｄｙ　ｇｒｏｕｐ、　Ｌａｎｃｅｔｌ　、１９８６．３９７ −４０１　’）。この理由によって、冠閉塞部の背後の組織が不可逆的に損傷を受けてしまう前の短時間に、血栓溶解治療を実施することが必要となる。

一般に、冠閉塞の治療の場合、梗塞を起こした血管の血栓溶解に一度成功した後、再閉塞を起こす危険を回避するという課題が存在する。この不都合な効果は、ｔ−ＰＡ（アルテプラーゼ（Ａｌｔｅｐｌａｓｅ））について観察された（Ｃｈｅｓｅｂｒｏ　ｅｔ　ａｌ、、Ｃ１ｒｃｕ−Ｉａｔｉｏｎ、　１９８７；７６：１４２−１５４）　、梗塞血管の再閉塞は、疾病率および死亡率の増加につながる。再閉塞を防止するために、ヘパリン（Ｂｌｅｉｃｈ　ｅｔ　ａｌ、、　Ａｍ、Ｊ、Ｃａｒｄｉｏｌ、、１９９０；６６：１４１２−１４１７）やアセチルサリチル酸（Ｈｓｉａ　ｅｔ　ａｌ、、　ＮＢ、Ｅｎｇｌ、Ｊ、Ｍｅｄ、、　１９９０；　３２３：　１４３３−１４３７）等の異なる薬理作用原理に基づく物質が利用されている。

ｔ−ＰＡ（アルテブラーゼ）の長時間にわたる注入も、より長期間の血栓溶解のため、梗塞血管の再閉塞を防止すると言われている（Ｇｏｌｄ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｃ１ｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１９８６；　７３：　３４７−３５２；　Ｖｅｒｓｔｒａｅｔｅｅｔ　ａｌ、、　Ａｍｊ、Ｃａｒｄｉｏｌ、、　１９８７　；６０　：２３１−２３７；　Ｊｏｈｎｓ　ｅｔ　ａｌ、。

Ｃ１ｒｃｕｌａｔｉｏｎ、　１９８８；　７８：　５４６−５５６）　、しかし、注入の終了後、しばしば再閉塞の出現が観察される。

ＤＮＡ組み換え技術により製造されたｔ−ＰＡ　（ｒｔ−ＰＡ）が臨床上の予備試験の範囲で、すでに２．３の患者に二重または多重投与形態で投与されている。明らかに、短時間、すなわち最初のポーラス投与後９０分までに、高い血栓溶解率が見られたが、高投与量のため、広範囲で全身的なプラスミノーゲンの活性化が生じ、その結果、はぼ完全なフィブリノーゲンの減少が観察された（初期値のわずか１５．５から５．２％）　（Ｊ、Ａｍ、Ｃｏ１１．Ｃａｒｄｉｏｌ、、１９９１゜１７（２）、　１５２Ａ）。フィブリノーゲン値のこうした好ましくない減少は、緊急手術の際、出血傾向が高く、患者の徹底的な管理が必要であるという問題を生じる。さらに、ｒｔ−ＰＡの二重または三重のポーラス投与の場合、好ましくないことに、再閉塞傾向、すなわち血管の再閉塞が観察された（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１９９０．８２（４）　５ｕｐｐｌ。

ＩＩＩ、５３８．　ａｂｓｔｒａｃｔ　２１３７；　Ｂｒｉ、Ｈａｅｍａｔｏｌ、、　１９９１．７７、５ｕｐｐ１．１゜４７、　ａｂｓｔｒａｃｔ　ＰＯ３０）　ｏアルテブラーゼについて、多重ポーラス投与がより詳細に調査された研究も行なわれている（ＣｏｒｏｎａｒｙＡｒｔｅｒｙ　Ｄｉｓｅａｓｅ、　１９９０．１（１）、　８３−８８）。

上に述べた不都合な効果のため、ｒｔ−ＰＡの二重または多重のポーラスの形態の投与は実施で・きないことがわかった。さらに、ｒｔ−ＰＡの半減期が比較的短く、わずかに３−６分である事実だけからも、ｒｔ−ＰＡのポーラス投与は不適当であると考えられてきた（Ｇａｒａｂｅｄｉａｎ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、Ａｍ、Ｃｏ１１．Ｃａｒｄｉｏｌ、、　１９８７；　９：　５９９−６０７）。このことは、血栓溶解の成功を確実にするには、効果的な血漿レベルを保つため、かなり長時間継続した注入を行なう必要があることを意味している。しかし、緊急の場合、この物質の長時間連続注入（３０分から６時間）は、明らかに治療上不利益となる。さらにその上、この際、出血の危険性も増大する（Ｍａｒｄｅｒａｎｄ　５ｈｅｒｒｙ、　Ｎ、Ｅｎｇｌ、Ｊ、Ｍｅｄ、、　１９８８；　３１８：　１５１２−１５２０　）。

驚くべきことに、プラスミノーゲン活性化因子様作用を持ちｔ−ＰＡと比較して長期化した半減期を有するタンパク質を２回またはそれ以上のポーラス注射の分割投与形態で投与した場合、このタンパク質が冠状閉塞の治療に有効に使用できることがわかった。この方法によって、プラスミノーゲン活性化因子様の特性を有するタンパク質を単に急速に投与するだけで、血栓性疾患の効果的な治療が可能となる。

本発明の意味としては、用語”分割投与”は、プラスミノーゲン活性化剤の治療上効果的な量を２またはそれ以上に分けた二重または多重のポーラスの形態での投与を意味する。

ポーラス投与とは急速静脈注射であり、これは、１つには臨床上の症状の出現から治療までの時間、そしてもう一方では治療の開始から冠状血栓の溶解までの時間が短縮されて、より多くの心筋組織が不可逆的破壊から免れるため、非常に有効である。本発明による二重または多重のポーラス投与は、使用したプラスミノーゲン活性化剤の血栓溶解能を！より高める結果となる。このことによって、アルテブラーゼに比較して投与量を減らすことができるばかりでなく、ポーラス注射後、驚くべきことに、注入形態での同様の投与後に比較して、より迅速な血行再開が見られる。その上二重または多重ポーラス投与は、累積開放時間（血行再開後冠血流が見られる時間の総計）の著しい延長と、同時に明らかな冠血流の増加をもたらし、しかもこれは、投与後より長期にわたって比較的高レベルで安定に保たれる。さらに、二重または多重ポーラス注射は１回のポーラス注射に比べて、血漿フィブリノーゲンの減少量が少ないという驚くべき利点を有する。しかし、二重または多重ポーラス投与のこれらの有益な特性は、合計同じ量のプラスミノーゲン活性化剤を１回のポーラス注射で投与した場合には発現されない。

本発明の意味する血栓性疾患とは、特に心筋梗塞または冠状動脈の再閉塞の原因となる疾患である。この再閉塞は心臓部梗塞の治療に血栓溶解剤を使用する場合のすべてに生ずる。心筋梗塞の原因は冠状動脈内の血栓の形成である。この血栓はフィブリンと血小板との結合物から成り立っている。心臓梗塞の治療の場合の第一の目的は、この血栓の迅速な溶解と血流の回復（血行再開）である。効果的な治療法とは血栓を可能な限り迅速に溶解し、血栓の再形成（再閉塞）を防止することである。本発明による二重または多重ポーラス投与は脳卒中の治療に特に有効である。

本発明の医薬パッケージユニットは、１つはプラスミノーゲン活性化剤を含む投与形態、もう１つはそのプラスミノーゲン活性化剤の治療上有効な量の投与を二重または多重ポーラス投与にすると効果的であるとする、例え・ば医薬処方を記載した添付書（ｐａｃｋａｇｅ　１ｅａｆｌｅｔ）などの形式での指示書、の２つから成り立っている。この使用法についての説明は、本発明の意味において、市販用の医薬製剤のパッケージ上に印刷してもよいし、プラスミノーゲン活性化剤を含む医薬製剤と一緒に入手できるようにした説明書によるものでもよい。プラスミノーゲン活性化剤に適した投与形態としては、先行技術から、例えば凍結乾燥品やアンプルなどの適当な容器に入れた溶液などの既知の調剤処方が対象となる。

一般に、これらの処方品は、等張液剤の製剤に適した通常の医薬用補助薬や、さらには安定化剤や可溶化剤を含んでいる。

プラスミノーゲン活性化因子様作用を有するタンパク質（本発明の意味では、短く”プラスミノーゲン活性化剤”とも称している）としては、ｔ−ＰＡに比較して長期化した半減期を有するタンパク質が使用される。プラスミノーゲン活性化剤は、血栓の溶解を行い、それによって血液がその血管中を再び流れるようにするものである。すでに上に示したように、ヒト血液中でのｔ−ｐＡの半減期はおよそ３−６分である。本発明の意味では、ｔ−ＰＡに比較して、半減期が少なくとも２倍、好ましくは３−７倍、特に３−５倍長期化したプラスミノーゲン活性化剤が対象として好適である。特に、半減期は少なくとも約１０分、例えば１０ −９０．１Ｏ−４０または１０−２０分となるべきである。ｔ−ＰＡの半減時間よりも半減期が３−３０倍長いもの、特に５−２０倍のタンパク質が好ましく使用される。

本発明の意味では、プラスミノーゲン活性化因子様作用を有するタンパク質として、例えば次のようなプラスミノーゲン活性化剤が対象となる：　Ｌ　Ｙ２１０８２５　（！”シリアンハムスター細胞系”からのＫ　２　Ｐ、　Ｃ１ｒｃ、　１９９０．８２，９３０−９４０）　；　ＤｅｌｔａＦ　Ｅ　３　ｘおよびＤｅｌｔａ　Ｆ　Ｅ　ｌ　ｘ　（”チャイニーズハムスターの卵巣細胞”からのＫ　Ｉ　Ｋ　２　Ｐ、　Ｂｌｏｏｄ、１９８８，７１．２１６−２１９　）　；　ＤｅｌｔａＦ　ＥＫ　１　（″マウスＣ１２７細胞”からのＫ　２　Ｐ　、Ｊ、　Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　。

１９９０．１６，１９７−２０３　）　；　Ｅ−６０１０（Ｊａｐ、Ｃ１ｒｃ、Ｊ、、１９８９，５３．ｐ、９１８　）；ｔ−ＰＡバリアント（ｖａｒｉａｎｔｓ）　（Ｔｈｒｏｍｂ、Ｈａｅｍｏｓｔ、、１９８９，６２゜ｐ、５４２　）　；　Ｋ２　ＰおよびＤ　−Ｋ　２　Ｐ　（Ｔｈｒｏｍｂ、　Ｈａｅｍｏｓｔ、　、　１９８９．６２゜ｐ、３９３　）　；　ＭＢ−１０１８（Ｆ　Ｋ　２　Ｋ　２　Ｐ、　Ｔｈｒｏｍｂ、Ｈａｅｍｏｓｔ、、　１９８９゜６２、　ｐ、　５４３）　；　Ｆ　Ｋ　２　Ｐ　（ＦＡＳＥＢ　Ｊ、　、　１９Ｂ９．３．　Ａ１０３１．　ａｂｓｔｒａｃｔ　４７９１）G Ｄｅｌｔａ　ｌ　ｘ　（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１９８８，４．　ｌｌ−１５）；　Ｋ　Ｉ　Ｋ　２　Ｐ　（ＴｈｒｏＩｒｌｂ。

Ｒｅｓ、、　１９８８，５０．３３−４１）　；　Ｆ　Ｋ　Ｉ　Ｋ　２　Ｐ　（Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、　１９８８，２６３゜１５９９−１６０２　）。特に、例えばＢＭ　０６．０２２（ＥＰ−Ａ−０３８２１７４に記載）のようなＫＺＰタイプの組み換え体プラスミノーゲン活性化剤が使用される。さらに、この種類のｔ−ＰＡ変換体（ｍｕｔｅｉｎｓ）が次の特許出願に記載されている　：ＥＰ−Ａ−０，１９６，９２０；ＥＰ−Ａ−０，２０７，５８９；ＡＵ　６１８０４／８６　；ＥＰ−Ａ−０，２３１，６２４。

ＥＰ−Ａ−０，２８９，５０８，ＪＰ　６３１３３９８８．ＥＰ−Ａ−０，２３４，０５１、ＥＰ−Ａ−０，２６３，１７２゜［！Ｐ−Ａ−０．２４１．２０８　；ＨＰ−Ａ−０，２９２，００９，１ＥＰ−Ａ−０，２９７，０６６゜ＥＰ− Ａｏ、３０２，４５６　、８Ｐ−Ａ−０，３７９，８９０゜ｒｔ−ＰＡ（アルテブラーゼ）の薬理動力学図は２または３コンパートメントモデルによって典型的に特性づけられる（Ｔｈｒｏｍｂ。

Ｈａｅｍｏｓｔ、　、　１９８９．６１．４９７−５０１）　ｏこのうち曲線下の総面積（曲線下の面積−ＡＵＣ）の６６％に寄与しているので、初期半減期がもつとも重要である。したがって、この半減期が主要半減期と称される。ｔ−ＰＡから誘導され、長・期化した半減期を有するプラスミノーゲン活性化剤の場合、薬理動力学図も当然変化している。ここで”長期化した半減期”は主要半減期をいうものとする。なぜならば、この主要半減期が総ＡＵＧに対して量的にもつとも寄与しているため、薬理動力学図を特性づけるからである。この半減期の測定は、先行技術によって知られている方法にしたがって行なわれる（Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ、Ｃｈ、２．　Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ。

１９８２）。プラスミノーゲン活性化剤としては、特にＤＮＡ組換え技術によって製造された、天然タンパク質のうちの血栓フィブリン溶解作用に関与するタンパク質領域を基本的に含んでいる、ｔ−ＰＡ誘導体が対象となる。このとき、ｔ −ＰＡの配列の中で１つまたは数個のアミノ酸の欠失または置換が見られるものも、ｔ−ＰＡに関する、上記の意味で半減期が長期化しているならば、使用できる。これらとして、特にＫＺＰタイプのｔ−ＰＡ誘導体がある。

本発明の意味で対象となるプラスミノーゲン活性化剤の例として、ヨーロッパ特許出願Ｅ　Ｐ−Ａ−０，３８２，１７４にさらに詳細に記載されている、プラスミノーゲン活性化剤Ｋ　２　Ｐ　（ＢＭ　０６．０２２）が使用された。これはヒトｔ−ＰＡのクリングル（ｋｒｉｎｇｌｅ）　２　（Ｋ）およびプロテアーゼ（Ｐ）　ドメインからなっており、エシェリキアコリ　（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）細胞中で発現されたため、非配糖体構造となっている。Ｋ２Ｐの比活性は５５０．０００＋／−ＩＵ／ｍｇ（＝５５０＋／−２００ＫＵ／ｍｇ）である。Ｋ２Ｐは血栓性疾患（心筋梗塞、肺塞栓症、卒中およびその他の閉塞性血管疾患）の血栓溶解治療に使用される。グリコジル化（ｇｌｙｃｏｓｉｌａｔｉｏｎ）を欠いているために、クリアランスが減少し、その結果、ｔニーＰＡに関して半減期が少なくとも３−４倍長期化されている。半減期が長期化されると、この物質を臨床上望ましい多重ポーラス投与に使用することが可能となる。この物質のポーラス投与による血栓溶解効果を種々の動物モデルで調べた。このとき、アルテプラーゼに比較しておよそ５倍増加した血栓溶解効果を示した。ここで特に印象的だったのは、アルテプラーゼやその他の血栓溶解剤に比べて、血栓によって閉塞した血管の速やかな開通があったことで、これは、他の血栓溶解剤に比べて血管の開通に要する時間の短縮と、そして梗塞の生じた心筋組織へのより迅速な血行再開を意味する。

Ｋ２Ｐの薬理動力学特性が改善されているので、投与すべき有効量を減らすことができ、またに２Ｐを静脈内多重ポーラス注射で投与することができる。これによって、きわめて急速な最大血行再開が達成される。さらに、二重または多重ポーラス投与によって、血行再開後の冠状動脈内の血行の減退（再閉塞傾向）が著しく減少するか、または防止される。それに加えて、二重または多重ボーリ（ｂｏｌｉ）後、血漿フィブリノーゲンの減少量は、同じ総投与量の１回のポーラス注射後よりも少ない。

血栓性閉塞を起こした血管の急速な開通に加え、その開通した血管の再閉塞の防止は、臨床上極めて重要である。なぜならば、梗塞を起こした血管の再閉塞は、その結果として臨床上の合併症を伴った臨床上重大な再梗塞を引き起こし得るからである。

アルテプラーゼの注入に比較して同有効量のに２Ｐのポーラス投与は、動物モデルにおいて、梗塞血管の驚くほど急速な開通をもたらし、したがって梗塞を起こした心筋組織の急速な血行再開が可能となる。血栓溶解に関し１ての現在の知見では、観察されたこのような効果は、臨床上の観点から極めて積極的に評価されるべきものである。

動物実験データによれば、血栓溶解した梗塞血管の再閉塞の問題は、Ｋ２Ｐの１回のポーラスの場合でも、他の血栓溶解剤と比較できる程度束しる。驚いたことに、そのに２Ｐの総投与量を２またはそれ以上にわけて時間的にずらしてポーラス注射すると、血行再開後の冠状動脈の血行の減損が減少されるか、あるいは予防もされることが示される。

最初のポーラス注射の開始から次のポーラス注射までに必要な間隔は、適用によるが、１０分から６時間、好ましくは２０分から２−３時間、特に３０−９０分とすることができる。注射期間自体は比較的短く、投与容量にもよるが、およそ０．５−３分で、注射速度でおよそ５−１０ｍ１／ｗｉｎ、が好都合である。本発明の意味における多重ポーラス投与の用語を、間隔をおいた治療の範囲で投与されるポーラス注射を２回またはそれ以上の個々の累積投与（ｃｕｍｕｌａｔｅｄａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）と理解する者もある。ポーラス注射を２回またはそれ以上、好ましくは３回、毎日実施し、この療法を数日間継続することができる。この治療様式は、ポーラス注射の形態での投与を、たとえば全治療期間中２日毎に行うようにして、１日か２日間隔をとることも可能である。この１回のポーリの累積投与は、基本的に、投与を毎日、数日にわたって繰り返す公知の１回ポーラス投与とは区別される。最初とその次のポーラス投与との間隔が比較的短く、約１０分から１時間までならば、二重または多重ポーラス投与と称する。この間隔が数時間の大きさの規模ならば、１回のボーりの累積投与と１称してもよい。

プラスミノーゲン活性化因子様作用を有するタンパク質に関する医薬投与形態の製造には、通常の医薬用補助薬や添加剤が使用される。さらに、安定化剤または例えば塩基性アミノ酸（アルギニン、リジンまたはオルニチン）などの公知の可溶化剤を添加してもよい。好適な投与の調剤形態は、先行技術によって知ることができ、また一般の通常の方法にしたがって製造することができる（ＥＰ　Ｏ，２１７，３７９，ＥＰ　Ｏ，２２８，８６２，Ｗｏ　９１１０８７６３．ＷＯ９１１０８７６４：　ｗｏ　９１１０８７６５；Ｗｏ　９１１０８７６６；ＷＯ９１１０８７６７またはＷｏ　９０１０１３３４参照）。投与形態は凍結乾燥品の形態でも、あるいはすぐ使用できる注射溶液の形態でもよい。ポーラス注射は静脈、筋肉または皮下注射でも行い得るが、静脈注射が好ましい。

医薬パッケージユニットの製造においては、２または多重ポーラス注射のための投与するタンパク質の量を、■またはそれ以上、好ましくは２つの、例えばアンプルなどの容器に分けて容れたものが利用される。特定の所望量の夕〉・バク質を適当な注射器に回収して取り出せるようにした、多重投与量形態とすることもできる。アンプルは、すでに注射用の溶液を含有することができ、またはそのタンパク質の凍結乾燥品とさらに医薬用の通常の補助薬または担体物質を含有することもできる。その凍結乾燥品は投与の直前に、通常の注射溶液と況合し、て、直接投与できる溶液とする。

プラスミノーゲン活性化因子様作用を有するタンパク質の量としては、それぞれの必要に応じて、１番目と２番目の容器で同じでも異なってもよい。一般には、１容器あたり３−３−５Ｏが使用される。最初のポーラス注射に１よ、２回目のポーラス注射よりもタンパク質を多量に投与することが好ましい。特に、最初のポーラス注射には５−５−２Ｏ、特に５１５ＭＵが使用され、２回目には：ｌ１５ＭＵ、特に３−３−１Ｏが使用される。特に好ましくは、最初の注射でおよそＩＯＭ　Ｕ、そして２回目におよそ５ＭＵ使用される。累積投与量は好ま］２くは１５１５−４Ｏの範囲である。

以下の実施例にしたがって、本発明をさらに詳細に説明する。

実施例　ｌ実験のため、心筋梗塞のシミュレーション用にイヌのモデルを使用した。雌雄のピーグル成人をパルピッレートで麻酔し、管を挿入（７、人工呼吸を行った。血圧モニター、物質の投与または血液サンプルの採取のため、動脈および静脈カテーテルをつけた。

胸を開き、心臓を露出させた。左冠状動脈の回旋技の短い切片を分離して準備した。続いて冠状動脈に中心部から末梢部にかけて、以下の器具をとりつけた：冠状動脈内の血流を測定するための電磁血流プローブ、刺激用電極、適合するスクリューと糸。刺激用電極のチップを冠状動脈の壁から通して、血管内に入れ、針状チップが血管の内壁表面に接するようにした。冠状動脈の血流を短時間中断したとき生じる反応性充血の９０％を排除するように、スクリューをとりつけた。

心筋梗塞を起こさせる冠状動脈の血栓を、ＲｏＩｌｌｓｏｎらによって最初に記載された方法（Ｔｈｒｏｍｂ、Ｒｅｓ、、　１９８０；　１７：　８４１−８５３）にしたがって形成した。その方法は、５ｈｅｂｕｓｋｉらの修正法（Ｊ、Ｐｈａｒｍ＋ａｃｏｌ。

Ｂｘｐ、　Ｔｈｅｒ、　、　１９８８；２４６：７９０−７９６）に採用された。刺激用電極を通じて冠状動脈に１５０マイクロアンペアの直流を通し、冠状動脈内の血流がＯ＋ｎｌ／ｍｉｎに下がるまで保持し、少なくとも３分間そのままニジた。つづいて、血栓を３０分間養生させた。この間、動物にはヘパリンを１動物あたり１０００ｕｎ　ｉ　ｔ／ｈｏｕｒ量投与した。血栓形成の３０分後、フィブリン溶解剤またはその溶媒を、ｌグループあたり６匹の動物に、１分間静脈ポーラス注射で投与した。ＢＭ　０６．０２２を４種類の量：　５０．１００．１４０．及び２００ＫＵ／ｋｇずつ投与した。アルテプラーゼも４種類の量：　２００．８００．１１３０．及び１６００ＫＵ／ｋｇ（＝２＋ｎｇ／ｋｇ）ずつ投与した。アルテブラーゼの比活性は８００．０００１０／ｍｇ（＝８００ＫＵ／ｍｇ）であった。ＢＭ　０６．０２２およびアルテブラーゼの活性の濃度をＶｅｒｈｅｉｊｅｎらの方法（Ｔｈｒｏｍｂ、　Ｈａｅｍｏｓｔａｓ、　、　１９８２；４８：２６６−２６９）にしたがって測定するために、血漿試料をフィブリン溶解剤の注射前そして注射後にも再び採取した。冠状動脈内の初期の血流の少なくとも３３％が再び得られた場合に、血行再開があったものと推定した。

これにしたがって、注射の開始からこの血流量が得られる血行再開までの時間が定義された。以後の実験グループのそれぞれにおいて、ＢＭ　０６．０２２を１４０ＫＵ／ｋｇおよびアルテブラーゼを８００ＫＩＪ／ｋｇ　（・ｌ＋＋ｇ／ｋｇ）の投与量で９０分以上静脈内連続注入により投与した（最初の静脈内ポーラスの総投与量の１０％）。

第１図はＢＭ　Ｏ６，０２２またはアルテプラーゼのポーラス投与後の血行再開率に対する投与量の効果の関係を示す。ＢＭ　０６．０２２の場合、２００　ＫＵ／ｋｇの静脈ポーラス注射で１００％の血行再開率（６匹の動物の内６匹）が得られた。同量の投与では、アルテブラーゼを注射したどの動物も血行再開が見られなかった。同じ最大効果を得るには、アルテプラーゼ１６００ＫＵ／ｋｇ（＝２ｍｇ／ｋｇ）の注射が必要だった。この注射投与量は、現在臨床において注入で使用されるアルテプラーゼの投与量（約１　ｍｇ／ｋｇ）のおよそ２倍である。投与量効果曲線の左移動で示されるような、ＢＭ　Ｏ６，０２２のより高い血栓溶解傾向は、８Ｍ　Ｏ６，０２２の薬理動力学特性の改善によるものと解釈される（第２図参照）。ＢＭ　０６．０２２の総血漿クリアランスは４．４　＋　０．４、アルテプラーゼでは２０．４　＋　２．０ｏ１／ｌｌ１ｎ−’　ｘ　ｋｇ−’である。このように、ＢＭ　０６．０２２の総血漿クリアランス（血漿からの物質の除去の尺度）はアルテブラーゼよりもおよそ４．６倍遅い。

さらに、アルテプラーゼは注入後同じ投与量（８００ＫＵ／ｋｇ）の１回のポーラス注射後よりも、２倍高い血行再開率が得られることがわかった。８Ｍ　Ｏ６，０２２は１４０ＫＵ／ｋｇの投与量では注射後でも注入後でも同じ血行再開率（６匹中４匹）を示すが、血行再開までの時間は注射後の方が著しく短かった（表１）。

この結果によると、アルテブラーゼは注射後よりも注入後の方がより好ましい血栓溶解結果を示すことがわかる。この知見はアルテブラーゼが通常注入法で投与されるという臨床実態と合致している（Ｃｈｅｓｅｂｒｏ　ｅｔ　ａｌ、、Ｃ１ｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１９８７；７６：１４２−２５４　）　ｏアルテブラーゼに比較して、ＢＭ　０６．０２２の血漿からの遅い排出は、ＢＭ　０６．０２２のより高い血栓溶解傾向を導いた。これにより、投与量の減量が可能なばかりでなく、１回静脈ポーラス注射後の方が、注入後よりも驚くほど急速な血行再開が起きる。

実施例２実施例２の実験には、実施例１と同じ冠状動脈血栓症の動物モデルを使用した。

しかし、実施例１の実験と異なって、物質を投与する場合の血栓養生時間を３０分ではなく１時間とした。ＢＭＯ６゜０２２を１回の静脈ポーラス注射または二重ポーラス注射で、それぞれ１分以上かけて投与した。、１回のポーラス投与量は１４０または２８０ＫＵ／ｋｇとした。二重ポーラス投与グループの両方に最初のポーラス投与量をそれぞれ１４０に０７ｋｇとし、っぎの２番目のポーラスを１４０ＫＵ／ｋｇまたは５０ＫＵ／ｋｇ　（４４分後）とした。この４種の実験グループをそれぞれ６匹のイヌで構成した。評価のために追加したパラメータは血行再開後測定した冠血流の最大値と、注射３時間後実験の終了時の冠血流量である。さらに、累積開放時間を計算した；これによって、血行再開後冠血流が見られる時間の総和がわかる。動物モデルは、血行再開後典型的に再閉塞がおきて、循環流が変化するように設定されている。実験終了時に、残存する血栓を取り出して、その湿潤重量を測定した。

１回のポーラス注射のどちらのグループでも、血行再開率は６回申４匹だった。

二重ポーラスグループでは、もっと高く、６匹中６匹または６匹中５匹だった（表２）。累積開放時間、冠血流および残存血栓重量についての表３の結果は、ＢＭ　０６．０２２の二重ポーラス投与によって、１４０ＫＵ／ｋｇの１回のポーラス注射に比較し、累積開放時間が著しく延長され、冠血流が著しく増加し１、（７かも実験の終了時でも著しく増加したままであり、そ（２て残存血栓重量が著（７く減少し、たことを示している。第３図は、１回のポーラス注射を１４０から２８０Ｋｔｌ／ｋｇに増Ｉしても冠血流が大して改善されないことを示している。強い循環流の変化が依然として見られる。

それに対して、第４図によれば、ＢＭ　０６．０２２の１４０および１４０ＫＵ／ｋｇのニー重ポーラス投与は、ＢＭ　０６．０２２の１４０Ｆ、０７ｋｇの１回のポーラス注射に比較して、明らかに冠血流を改善することがわかる。ＢＭＯ６，０２２の１４０および５０ＫＵ／ｋｇの二重ポーラス投与によっても、冠血流に対する同様の効果が達成される（第５図）。表４が示すように、ＢＭＯ６，０２２の総計投与量２８０に０７ｋｇを１回のポーラス注射の代わりに、同じ総計量を１４０および１４０ＫＵ／ｋｇに分けると、血漿フィブリノーゲンの著しい減少が防止される。

この結果によれば、患者のシミュレーションにおいてこのモデルではどうしても再閉塞傾向となる、血行再開後の冠血流量の低下は、１回のポーラス注射では、投与量を増加させても防止できないことが示される。他方、二重ポーラス投与では、驚くべきことに、累積開放時間を延長させるばかりでなく、流量を増加させ、その増加量を実験の終了時まで維持することができる。さらに、二重ポーラス注射は、同じ総投与量の１回のポーラス注射と対照的に、血漿フィブリノーゲンの減少量が少ないという驚くべき利点を有している。二重ポーラス投与における２回目のポーラスの量は、この結果に限定されることなく、変化させることができる。

図面の説明第１図は、冠血栓症のイヌにおりる、ＢＭ　０６．０２２およびアルテブラーゼの１分間静脈注射後の、血栓溶解に対する投与量効果の程度を示す。血行再開率（％）は、ある投与量グループ内での血行再開がおきたイヌの百分率を表す（ｌ投与量たりｎ−６）。この投与量効果曲線は片対数回帰分析によって作成した。

血行再開がなかったアルテプラーゼグループ（２００ＫＵ／ｋｇ）は回帰分析から除外した。

第２図は、麻酔したイヌにおける、ＢＭ　０６．０２２およびアルテブラーゼの活性に関する、血漿中濃度の時間曲線の薬理動力学的比較を示ず。ＢＭ　０６．０２２の１４０ＫＵ／ｋｇまたはアルテブラーゼ８００ＫＵ／ｋｇ（・１ｍｇ／ｋｇ）の１分間静脈注射を−ｌ物質あたり６匹づつのイヌに行なった。データは相加平均値を表している。出発濃度はその後測定した濃度に基づいたものである。

第３図は、時間１＝０分におけるＢＭ　０６．０２２の１４０または２８０ＫＵ／ｋｇでの１回の静脈ポーラス注射前および後の、冠血流量の時間経過を示す。

データは平均値＋ＳＥＭ、ｌグループ当たり血行再開があったイヌ、ｎ＝４である。Ｐｒｅは初期の血流量を表す。

第４図は、ＢＭ　０６．０２２の時間１＝０分における１４０ＫＵ／ｋｇの１回の静脈ポーラス注射（ｎ＝４）　、または時間１＝０およびｔ：４４分における１４０および１４０ＫＵ／ｋｇの二重ポーラス注射（ｎ＝６）前および後の、冠血流量の時間経過を示す。データは平均値＋ＳＥＭ；　Ｐｒｅは初期の血流量を表す。

第５図は、ＢＭ　０６．０２２の時間１＝０およびｔ：４４分における１４０および１４０ＫＵ／ｋｇ　（ｎ　＝　６　）　、または１４０および５０に０７ｋｇ　（ｎ　＝５）の二重ポーラス投与前および後の、冠血流量の時間経過を示表１アルテプラーゼおよびＢＭ　Ｏ６，０２２の冠血栓溶解特性投与量　血行　血行再開　再閉塞　再閉塞＋ｐ＜、０５　対ＢＭ　Ｏ６，０２２注射゛グループ、Ｍａｎｎ−Ｔｈｉｔｎｅｙ検定法による。

表２８Ｍ　Ｏ６，０２２治療を受けたイヌの血行再開特性１１４０　４／６　１８，３ミ、０　−２８０　１Ｊ７６　２６．５土４．９−ｔｑｏ　＋　１４０　６／６　２／６　２１，８二４，４　１６．Ｏ，ヰ、０１−４０　＋　５０　５／６　１／６　１８．肚４Ｊ　８．０１回目ポーラス：ｔ＝Ｏ−１分、２回目ポーラス：　ｔ　＝４４−４５分表３ＢＭ　０６．０２２治療を受けたイヌの血行再開後の冠血流特性と血栓重量ＩＡＣ４４７，５上１５．Ｌ　Ｌ２．５二５．２　（Ｊ、３二０．８　６．１工１．１２８０　４　８０．８＋３４．１　１１．８＋１．８　５．３＋１．９　５．５＋Ｏ，Ｂ”１４Ｃ＋１４０　６　１２１．５二１１．２”　１９，３二Ｌ５　６．８二１，８　２．４二〇、８＋１４０＋５０　５１−２７．セ１０．３　２１．２二２，２　８，４二Ｌ７　５．１４二〇、５＋血栓重量については、ｌグループ当たりｎ＝６累積開放時間：冠状動脈が開通していた時間の合計（冠血流の測定からめた）＋ｐ＜０．０５　対ＢＭ　Ｏ６，０２２１４０ＫＵ／ｋｇグループ、５ｔｕｄｅｎｔのｔ−検定法による表４８Ｍ　Ｏ６，０２２治療を受けたイヌの凝固変量８Ｍ　Ｏ６，０２２残存フィブ　残存プラス　残存α２−抗投与量　リノーゲン　ミノーゲン　プラスミン（Ｋｌ／ｋｇ）　（初期値に　（初期値に　（初期値に対する％）　対する％）　対する％）１４０　９５．７ニラ、７　％、７ｉ５．６　５２，２二６．５２８０　７４、超９．４　７６、セ２．４　５４．５土１９．５１４０＋１４０　９７−５二６，０　８２，５二２，４　６０．２土７．５１４０＋５０　９４．９ジ、５　８２．６±２，９　６２．０二１４．１データは１グループ当たりｎ＝６の平均値を表す。

凝固変量は初期値に対する２時間後の百分率で表す。

＋ｐ＜０．０５　対ＢＭ　Ｏ６，０２２１４０ＫＵ／ｋｇグループ、５ｔｕｄｅｎｔのｔ−検定法によるＦｉに、　１（２）　市圓岨卿Ｆｉｇ、　２ ’ｏｏｏｏｔ　’ｏｏｏｔ　’ｏａｔ　’ａｔ　’ｔｌ　Ｗ／ｎ　ＩＦｉｇ、　３（ｕＨｕｒハ山）　■旧２Ｆｉｇ、　４（ＬＪｊｕｌ／ｌ山）　ｗ翼ｗｇ三ｉｇ、５（ｕＨ山ハＬＬｌ）　ＩＷＴ［］ＴＨ国際調査報告　１哨＋鴫蓉−甲Ｉ購Ｎｎ国際調査報告フロントベージの続き（８１）指定図　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＰＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、　ＳＥ）、　ＣＡ、ＪＰ、　ＵＳ

Claims

【特許請求の範囲】

１．本質的に２つの構成要素を含み、１番目の構成要素は、１またはそれ以上の数の容器に入っており、プラスミノーゲン活性化因子様の作用を有し、ｔ−ＰＡに比較して半減期が長期化された通常の医薬投与形態のタンパク質であり、２番目の構成要素は、このタンパク質の投与を２回またはそれ以上のボーラス注射に分割投与とするようにとの指示書である、血栓性疾患の治療用医薬パッケージユニット。
２．プラスミノーゲン活性化因子様の作用を有するタンパク質が、ｔ−ＰＡに比較して、２−３０倍長期化した半減期を有するものであることを特徴とする、請求の範囲第１項記載のパッケージユニット。
３．半液期が１０−４０分であることを特徴とする、請求の範囲第２項記載のパッケージユニット。
４．プラスミノーゲン活性化因子様の作用を有するタンパク質の総量が３−５０ＭＵであることを特徴とする、請求の範囲第１項−第３項のいずれかに記載のパッケージユニット。
５．タンパク質の投与の指示書が、１番目と２番目のボーラス注射の間隔を１０分から３時間とする説明を含むことを特徴とする、請求の範囲第１項−第４項のいずれかに記載のパッケージユニット。
６．プラスミノーゲン活性化因子様の作用を有するタンパク質が２つの別容器に入っていることを特徴とする、請求の範囲第１項−第５項のいずれかに記載のパッケージユニット。
７．１番目の容器が５−２０ＭＵのタンパク質を含み、２番目の容器が３−１５ＭＵのタンパク質を含むことを特徴とする、請求の範囲第６項記載のパッケージユニット。
８．タンパク質がＫ２Ｐであることを特徴とする、請求の範囲第１項−第７項のいずれかに記載のパッケージユニット。
９．プラスミノーゲン活性化因子様の作用を有し、ｔ−ＰＡに比較して半減期が長期化されたタンパク質の投与を２回またはそれ以上のボーラス注射に分割投与の形態とすることを特徴とする、このタンパク質の血栓性疾患の治療のための使用。
１０．血栓性疾患として、心筋梗塞、肺塞栓症、卒中あるいは急性または慢性の動脈、静脈または末梢血管の閉塞性疾患の治療を対象とすることを特徴とする、請求の範囲第９項記載の使用。
１１．２回またはそれ以上のボーラス注射に分割投与とするような形態での投与の指示書とともに、プラスミノーゲン活性化因子様の作用を有し、ｔ−ＰＡに比較して半減期が長期化されたタンパク質を含む通常の医薬投与形態で利用できるようにすることを特徴とする、このタンパク質を含む血栓性疾患の治療用薬剤の製造方法。