JPH06504989A - 新規の抗凝固作用を有するペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 新規の抗凝固作用を有するペプチド ヒルジンは、医用ヒル、薬用ヒル（旧ｒｕｄｏ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｓ）の唾 液腺中で形成される血液凝固を阻害する性質を有する天然物質である。ヒルジン は、アミノ酸６４〜６６個を存するポリペプチドからなる混合物として存在する 。前記混合物の主要成分は、アミノ酸６５個を有するポリペプチドであり、チロ シン−６３に、０−スルフェート基を有する： Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−５ｅｒ− Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ− ５ｅｒ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ− Ｃｙｓ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−５ｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ− Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｃ：ｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ −Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−５ｅｔ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ −Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−［１ｅ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ （ＳＯｓ）Ｉ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｎヒルジンは、極めて強力かつ高い特異性を持っ てトロンビン、凝固カスケードの鍵酵素と結合している。

トロンビン−ヒルジン複合体は、もはやフィブリノーゲン、トロンビンの天然物 質を分離できない。

ポテンシャル剤としてのヒルジンは、抗凝固作用を見せる。確かに、天然の（０ −スルフェート化）ヒルジンは、医用ヒルから単離することが極めて困難であり 、かつ極めて少ない収量でしか単離できない。組換ヒルジンは、スルフェート化 されたチロシン基を有しておらず、トロンビンに対する明らかに劣った結合定数 を有する。

医療用の使用に定められ、かつ細胞物質から単離されたヒルジンは、より一層入 念に精製されなければならない。基−ＤＮＡ、異種蛋白質、毒素またはウィルス 汚染は、全ての場合において排除されなければならない。その上更に、前記の大 きさのポリペプチドのための再現可能な経口または経皮投与は、生薬の助剤の使 用下においてすら、はとんど考えられない。

記載された理由により、既に早い時期に、ヒルジン配列から、同様に、抗凝固性 の性質を提供するが、しかし、完全に合成され、ひいては安価でかつ高い純度製 造されていなければならないオリゴペプチドを誘導しようと試みられた。

前記の文献により公知のペプチドの多くは、実際にトロンビンを阻害する性質を 示している（Ｊ　、Ｍｅｄ　、Ｃｈｅ　。

第３１巻、第１００９頁（１９８８年）、欧州特許第２９１９８１号明細書）６ 確かに、前記化合物の作用の強さは、鎖長が短くなるにつれて著しく低下する。

Ｃ−末端のデカペプチドヒルジン、６〜６．のＥＣ，、。は、ヒルジンのものよ り約２０００陪大きい。

ところで、適当な置換の場合に、ヒルジンのＣ−末端から誘導される短いペプチ ドのトロンビン阻害作用は、ヒルジンと同じ程度の大きさの作用の強さを達成す ることができることが見出された。

本発明の対象は、式Ｉ： Ｘは、Ｈ原子、アセチル、スクシニル、マレオイル、フタロイルまたはフマリル を表し、 Ａ１は、Ｐｈｅ、　ＴｙｔまたはＣｈａを表し、Ａ２は、ＧｌｕまたはＤ−Ｇ　 ｌ　ｕを表し、Ａ３は、Ｇｌｕ、　Ｐｒｏまたはｏｙｐを表し、Ａ４は、Ｉｌｅ 、　Ｌｅｕ、　ＶａｌまたはＣｈａを表し、Ａ５は、ＰｒｏまたはＨＹＰを表し 、 Ａ６は、ＧｌｕまたはＤ−Ｌｅｕを表し、Ａ７は、Ｌｅｕ、Ｄ−Ｌｅｕ、ｌｉｅ 、　Ｄ−１１ｅ、ＣｈｉまたはＤ−Ｃｈａを表し、 Ｙは、０１１、Ｇｌｎ−０１１、Ｇｌｎ−ＮＨｔ、Ｄ−Ｇ　ｌ　ｎ−０Ｒ１Ｄ− Ｇｌｎ−Ｎｌｌｚ、Ｇｌｕ−ＯＨ１Ｇｌｕ−ＮＨ，、Ｄ−Ｇｌｕ−ＯＲまたはＤ −Ｇｌｕ−ＮＨｔを表し、Ｗは、基ＳＯ，ＨまたはＰ　Ｏ２Ｈｚを表す〕で示さ れるペプチド並びに生理学的に認容性の塩基または酸を有する該ペプチドの塩。

アミノ酸の略記には、常用の三文字記号が使用され、Ｃｈａは、シクロヘキシル アラニンを表し、Ｈｙｐは、トランス−４−ヒドロキシプロリンを表す。別に規 定されていない場合、アミノ酸は、Ｌ立体配置中に存在する。

フェニルアラニンから誘導された、基Ｗを有する非天然のアミノ酸は、Ｌ並びに Ｄ立体配置中に存在することができる。

式１の場合、Ｘは、有利にスクシニル、Ａ１は、有利にＴｙｒ、Ａ２は、有利に Ｇｌｕ、Ａ３は、有利にＰｒｏまたはＨＹＩＩ、　Ａ４は、有利にｌｌｅ、　Ｖ ａｌまたはＣｈｘ、Ａ５は、有利に）ＩＹＩＩ、　Ａ’は、有利にＧｌｕ、Ａ７ は、有利にＬｅｕ、ｌｌｅまたはＣｈａおよびＹは、有利に０■、Ｇｌｎ−ＯＨ ，Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＨ１Ｇｌｕ−ＯＨまたはＤ−Ｇ　ｌ　ｕ−ＯＨを表す。

生理学的に認容性の酸としては、殊に次のものが記載される。塩酸、クエン酸、 酒石酸、乳酸、リン酸、メタンスルホン酸、酢酸、蟻酸、マレイン酸、フマル酸 、りんご酸、琥珀酸、マロン酸、硫酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸 、無性ぶどう酸、粘液酸、安息香酸、グルクロン酸、蓚酸、アスコルビン酸、ア セチルグリシン。

生理学的に認容性の塩基としては、次の物質の水酸化物および炭酸水素が該当す る゛アルミニウム、カルシウム、カリウム、リチウム、マグネシウム、ナトリウ ム、ジェタノールアミン、エチレンジアミンおよびメグルミン（Ｍｅｇｌｕｍｉ ｎ）。

新規化合物は、ペプチド化学に公知の方法により製造できる。

従って、ペプチドを、逐次アミノ酸から構成することができるかまたは適当なペ プチドのフラグメント結合によって構成することができる。逐次構成の場合、ペ プチド鎖は、Ｃ−末端から開始して、段階的にそれぞれのアミノ酸だけ長くなる 。フラグメントカップリングの場合、種々の長さのフラグメントは、互いに結合 することができ、この場合、フラグメントは、再度、アミノ酸からの逐次構成に よってかまたは該フラグメントの側で、フラグメントカップリングによって取得 することができる。

逐次構成並びにフラグメントカップリングの場合に、構成要素は、アミド結合の 形成によって結合されていなければならない。このためには、酵素的および化学 的方法が好適である。

アミド結合形成のための化学的方法は、詳細には、Ｍｕｅｌｌｅ＋、　Ｍｅｌｈ ｏｄｅｎ　ｄｅ＋　Ｏ＋ｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅｍｉｅ第ＸＶ／２巻、１〜 ３６４頁、Ｔｈｉｅｍｅ　Ｖｅ＋ｌａｇ、Ｓｆｕｌ１ｇａ＋ｌ、１９７４年；　 Ｓｌｅｗａ＋ｌ、Ｙｏｕｎｇ、　５ｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐｌｉｄｅ　５ ｙｎｌｈｅｓｉｓ、第３１〜３４頁、第７１〜８２頁、ＰｉｅｒｃｅＣｈｍｉｃ ａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ、　Ｒｏｃｋ篩【ｄ、１９８４年：　ＢｏｄａｎｓｚｋＹ 、　ＫＩａｕｓｎｅ＋、０ｎｄｅｌｌｉ、Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｌ’ｎ１ｈｅｓｉ ｓ、第８５〜１２８頁、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ＆　５ｏｎｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｌ ｋ、１９７６年およびペプチド化学の他の基本的文献で扱われている。アジド法 、対称的および混合無水物法は、特に有利であり、原位置で製造されたかまたは 前調製された活性エステルおよびカップリング試薬（活性化物質）、殊にジシク ロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）　、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩ Ｃ）　、１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ ＥＥＤＱ）　、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイ ミドヒドロクロリド（ＥＤＣＩ）、ｎ−プロパンホスホン酸無水物（ＰＰＡ）　 、　Ｎ、　Ｎ−ヒス（２−オフソー３−オキサゾリジニル）アミドリン酸クロリ ド（ＢＯＰ−ＣＩ）　、ジフェニルホスホリルアジド（ＤＰＰ＾）、カスドロの 試薬（Ｃｉｓｌｒｏ’ｓ　Ｒｅａｇｅｎり　（ＢＯＰ）、２（ＩＨ−ベンゾトリ アゾール−（１）−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム塩（）Ｉ ＢＴＵ）、２，５−ジフェニル−２，３−ジヒドロ−３−オフソー４−ヒドロキ シチオフェンジオキシド（ステグリノヒの試薬（Ｓ＋ｅｇｌｉｃｈｓ　ＲＣａｇ ｅｎｚ）　：　ＨＯＴＤＯ）および１゜１′−カルボニル−ジイミダゾール（Ｃ ＤＩ）を用いるアミド結合形成である。カップリング試薬は、単独または添加剤 、例えばＮ、Ｎ’　−ジメチル−４−アミノピリジン（ＤＭＡＰ）　、　Ｎ−ヒ ドロキシベンゾトリアゾール（ＩＩＯＢＩ）　、　Ｎ−ヒドロキシベンゾトリア ジン（ＨＯＯＢｌ）　、　Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ｔｌＯ３ｕ）または ２−ヒドロキシピリジンと組合せて使用することができる。

酵素的ペプチド合成の場合、通常、保護基を不要にできるのに対し、化学合成の ためには、アミド結合の形成に関与しない反応性官能基の可逆的保護が、双方の 反応成分に必要である。式Ｉの請求項記載の化合物の場合、誘導されたＮ−末端 には、付加的に、作用の強さを変化させる意味が付与される。

化学的ペプチド合成の場合、３つの文献により公知の保護基技術が有利である： ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）−１ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｈｏｅ）− および９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−（Ｆｍ６Ｃ）−保護基技術。

それぞれ、鎖長構成要素のαアミノ官能基の保護基が特徴づけられる。三官能ア ミノ酸の側鎖保護基は、該側鎖保護基が、必然的にαアミノ保護基と一緒に分離 されないように選択されている。

アミノ酸保護基に関する詳細な展望は、Ｍｕｅｌｌｅｒ、Ｍｅｌｈｏｄｅｎ　ｄ ｅｔ　Ｏ＋ｇｓｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅｍｉｅ第ＸＶ／１巻、２０〜９０６頁、 Ｔｈｉｅｍｅ　Ｖｅ＋ｌａｇ、５ｌｕｌ＋ｇａ＋１．１９７４年およびＢｏｄａ ｎｓｘｋｙ、Ｔｈｅ　ＰＩａＣｌｉＣｅ　ｏｌ　Ｐｅｐｌｉｄｅ　５ｙｎｌｈｅ ｓｉｓ、　Ｓｐｔｉｎｇｅ＋−Ｖｅ＋Ｉａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ　１９８４年に記載 されている。ペプチド鎖の構成に有用である構成要素は、溶液、懸濁液中でかま たはＭｅａｔ百１ｅｌｄによってＪ、Ａｍｅ＋Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ第８５巻、第２ １４９頁、１９６３年に記載されているのと同様の方法により反応させることが できる。ペプチドが、逐次構成されるかまたはフラグ特表千６−５０４９８９　 （４） メントカップリングによって２−１Ｂｅ−またはＦｍｏｃ−保護基技術を使用下 に構成される方法、この場合、反応成分は、溶液中で反応され、並びに記載され たＭｅｒｒｉｌｉｅ１ｄ技術と同様に、反応成分が、不溶性重合体支持体（以下 においては樹脂（Ｈｘｒｔ）とも記載される）に結合されて反応される方法は、 特に有利である。この場合、ペプチドは、典型的には、Ｂｏｃ−またはＦｍｏ　 ｃ−保護基技術の使用下に、逐次重合体の支持体に接して構成され、この場合、 成長するペプチド鎖は、Ｃ−末端で、不溶性樹脂粒子と共有結合している。前記 処理方法は、試薬および副産物を濾別することができるようにし、従って、中間 生成物の再結晶が過剰になる。

保護アミノ酸は、専ら、使用された溶剤中に不溶性であり、かつ容易な濾過を可 能にする安定した物理学的形態を有していなければならない任意の適当な重合体 に結合することができる。この重合体は、官能基に、第一の保護されたアミノ酸 は、共有結合によって堅固に結合することができる官能基を含有していなければ ならない。前記の目的のためには、種々の重合体、例えばセルロース、ポリビニ ルアルコール、ポリメタクリレート、スルホン化したポリスチロール、スチロー ルおよびビニルペンゾールのクロルメチル化した共重合体（Ｍｃ＋＋１ｌｉｅｌ ｄ−樹脂）、４−メチルベンズヒドリルアミン−樹脂（ＭＢ）ＩＡ−樹脂）、フ ェニルアセトアミドメチル−樹脂（Ｐａｍ−樹脂）、Ｐ−ベンジルオキシベンジ ルアルコール−樹脂、ベンズヒドリルアミン−樹脂（ＢＨＡ−樹脂）、４−（ヒ ドロキシメチル）−ベンゾイルオキシメチル−樹脂、Ｂｔｅｉｐｏｈｌほかによ る樹脂（Ｔｅｌｏｒｘｈｅ’ｄ＋ｏｎ　Ｌｅｌｌ、第２８巻、第５６５頁、１９ ８７年ｉＦａ。

ＢＡＣ）ＩＥＭ）　）ＩＹＣＲＡＭ−樹脂（Ｆａ　、０ＲＰＥＧＥＮ）または５ ＡＳＲＩＮ−樹脂（Ｆａ、ＢＡＣＯＥＭ）。

溶液中でのペプチド合成のためには、反応条件下で不活性であることが判明して いる全ての溶剤、殊（こ水、Ｎ、Ｎ’−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）　、ジ メチルスルホキシドＣＤＭＳＯ）　、アセトニトリル、ジクロルメタンＣＤＣＭ ）　、　１　、４−ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）　、Ｎ−メチル −２−ピロリドン（ＮＭＰ）並びに記載された溶剤の混合物が好適である。重合 体の支持体でのペプチド合成は、使用された全てのアミノ酸誘導体が不溶性であ る全ての不活性有機溶剤中で実施することができ：しかしながら、付加的（こ樹 月旨膨潤性の性質を有する溶剤、ＤＭＦ、　ＤＣＭ、ＮＭＰ、アセトニトリルお よびＤＭＳＯ並びに前記溶剤の混合物力ζ有ｆ１である。

上首尾の合成後に、ペプチドは重合体の支持イ本力）ら分離される。種々の樹脂 型が分離できる条１！ｔ−１よ、文献により公知である。最も頻繁には、酸性お よびノくラジウム触媒した分離反応、殊に、液状の無水フン化水素、無水トリフ ルオルメタンスルホン酸、稀薄また１ま濃厚なトリフルオル酢酸中での分離また は、例えばモルホリンのような弱塩基の存在下でのＴＨＦまたはＴＨＦ−ＤＣλ １混合物中のパラジウム触媒された分離が使用される。保護基の選択に応じて、 前記樹脂型は、分離条件下に得ることができるかまたは同様に分離することがで きる。

また、ペプチドの部分的な脱保護が重要であるかまたは化合物の性質が脱保護に よって有用な影響を及ぼされる場合には、分離の際に遊離されたＮ−末端の後合 成的誘導は重要である。

ペプチド合成に使用された全ての成分は、アセトアミドマロンエステル合成また は別の文献により公知の方法（Ｅ、Ｍｕｅｌｌｅｔ、Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　ｄｅｔ 　ｏＢｓｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅｍｉｅ。

第ＸＩ／２巻；　１９５８年）を介してアミノ酸の製造のために入手可能である 式ＩＩ： 〔式中、Ｗは、式Ｉで記載された意味を有する〕で示されるアミノ酸を除いて、 市販のものが使用可能である。

エダクトおよび反応条件に応じて、式１１のアミノ酸は、定義された立体化学を 有して生じるかまたはラセミ体的に生じる。式１］のラセミ体のアミノ酸は、文 献により公知の方法によってその対常体中に分離することができるかまたはラセ ミ体をペプチド合成に使用し、かつ生じたジアステレオマーのペプチド混合物を 分離する。

トロンビン阻害剤としての新規ペプチドの生物学的特性決定は、次の試験系にお いて行なった。

１、試験管内のトロンビン時間（ＴＴ）クエン酸血漿を取得するために、ヒトの 血液を、腕の静脈穿刺によって採血し、クエン酸ナトリウム（０゜１１モル／１ ）と混合しく血液９部十ツクエン酸ナトリウム１）、引続き、１０分間、１６０ ０ｘｇで室温で遠心分離する。物質溶液もしくは溶剤５０μｌに、クエン酸血漿 ５ＣＭｚ　Ｉを添加し、３７℃で２分間恒温保持する。この後、３７℃に温度調 節したトロンビン試薬（ベーリンガー　マンハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍ ａｎｎｈｅｉｍ））１００μｍを、ピペットで添加し、かつ測光型凝固測定器中 で凝固が生じるまでの時間を測定する。

相対的な有効性の尺度としては、ＥＣ，。。とじて、血漿−トロンビン時間が１ ００％だけ延長されるモル／ｌでの試験物質の凝固を計算する。

血漿−トロンビン時間は、フィブリノーゲンからのトロンビンを誘導したフィブ リン形成およびフィブリン凝集体、即ち、凝固の最終工程に影響を及ぼす。

２　トロンビンの活量のアミド分解的測定（Ａｍｉｄｏｌｌ’１ｉｓｃｈｅ　Ｂ ｅｓｌｉｍｍｕｎｇ）　（池のセリンプロテアーゼ°トリプシン、キモトリプシ ン、プラスミン、Ｘａ因子、活性蛋白質Ｃについても同様） 試験原理： セリンプロテアーゼ 色素原基質−−−一一一一−−−Ｅ〉ペプチド＋ｐ−ニトロアニリン（黄色） 微小板中に、それぞれ、トリス−緩衝剤（トリス５゜ミリモル／　］　、　Ｎａ Ｃ１１５４ミリモル／１、ｐＨ８，０）中のトロンビン（０，１２４１０／ｍｌ 、ＥＫｏ、１１０／ｍ１）２５０μｌを挿入する。前記溶液に、溶剤（対照）も しくは試験物質１０μｌを添加し、１分間混合し、かつ２５℃で４分間恒温保持 する。この後、基質溶液（Ｓ−２２３８，０，６２ミ！Ｊ％ル／Ｉ、ＥＫＯ１１ ミリモル／Ｉ）５０μｍの添加して反応を開始させ、短時間の混合後に２５℃で 恒温保持する。５分後に、３５％の酢酸５０μＩの添加によって反応を停止させ 、４０５ｎｍで（６３０ｎｍと比べて）吸光度を測定する。反応完結後に測定し た吸光度は、酵素活量に比例している。

相対的な有効性の尺度としては、ＩＣｇｏとして、酵素活量が５０％だけ縮小さ れるモル／ｌでの試験物質の濃度を計算する。

また、トロンビンと同様に、他のセリンプロテアーゼのアミド分解活量への作用 を、 トリプシン（０，１１ｍｇ／　ｌ）　Ｓ−２２２２（０，１ミリモル／１）キモ トリプシン（０，２ｍｇ／　ｌ）　Ｓ−２５８６（０，１ミリモル／１）血漿（ ０，０４ＣＵ／ｍｌ）　Ｓ−２２５１（０，１ミリモル／１）Ｘａ因子　Ｓ−２ ７６５（０，１ミリモル／ｌ）活性蛋白質ＣＳ−２３６６（０，２ミリモル／１ ）（試験でのそれぞれの最終濃度）で試験する。前記試験の結果は、試験物質の 作用の選択性について記載できるようにする。

３、試験管内でのトロンビン誘導した血小板凝固新鮮なヒトのクエン酸血液（血 液９部十ツクエン酸ナトリウム１．０．１１モル／ｌ）を、血小板の豊富な血漿 （ＰＲＰ）および血小板の乏しい血漿（ＰＰＰ）を取得するために、２５０ｘｇ で１６分間もしくは３６７０Ｘｇで２０分間遠心分離する。

血小板凝固の測定のために、ＰＲＰ４４５μｌに溶剤（対Ｐ＠＞　もしくは試験 物質５μｌを添加し、かつ室温で５分間恒１区保持する。この後、この配合物を 、３７℃で３分間、凝固測定機（ＥＬＶＩ　８４０）中で恒温保持し、かつ１１ ０００ＲＰで４分間撹拌する。トロンビン溶液（配合物中の最終濃度：　０．　 １５１Ｕ／ｍ　ｌ）　５０μｌの添加によって凝固を開始させる。血小板凝固を 、試料中で単位時間当りに測定した透過の変動を介して測定する（スロープ法（ Ｓｌｏｐｅ−Ｍｅｌｈｏｄｅ）。

相対的な有効性の尺度としては、■Ｃ５゜とじて、血小板凝固が５０％だけ阻害 されるモル／１での試験物質の濃度を計算する。

４、ラットの動脈静脈分路での抗トロンビン作用前記実験の場合、ガラス細管は 動脈静脈分路中で人工的なトロンボーゲンの表面として有用であり、かっ血栓症 を触発する。

麻酔（ウレタン２５％、２　ｘ　８　ｍ　ｇ　／　ｋ　Ｐ腹腔内）をかけられた ラットを、仰向けにして温度調節された（３７℃）ホットテーブル（Ｗａｅ＋ｍ ｅｂａｎｋ）上に固定する。任意に解剖された右側の頚動脈および頚静脈中に、 短いポリエチレンカテーテル（Ｐｏ＋Ｉｅｘ、　ＰＥ　５０）を移植し、生理的 Ｎ　ａ　Ｃｌ溶液で充填し、かつ鉗子で閉鎖した。カテーテルの自由な末端部を 、トロンボーゲン表面として働＜２０ｍｍの長さのガラス細管（内径１゜Ｏｍ　 ｍ　）を通して接続する。

試験物質の投与は、静脈内、皮下的、経口的に行なわれるかまたは注入として行 なわれる。試験物質または溶剤（対照）を用いる望ましい恒温保持時間（５゜６ ０または３６０分間）後に、分路を鉗子の除去によって開放する。分路を通る血 流は、ガラス細管の中央で測定した分路温度の迅速な上昇をまねく。室温から体 温への上昇は、分路の通過性のためのインジケーターである。この温度を、分路 の閉塞まで、長くともせいぜい３０分間継続的に記録する。

分路の開放および実験の終了時に、付加的に血液試料を、血漿中のアンチ−Ｆｌ ｌａ−活量の測定のために採取する。

試験評価を、量的に行なう。ｌｏｇ投与量および（処置した群と対照群との閉塞 時間の差としての）時間で、線形の回沸を計算する。種々の試験物質の有効性の 比較のために、ＥＤ１５分間についての値の回帰線の方程式（対照群に対して、 １５分間だけ閉塞時間の延長を生じる投与量）から計算する。

新規化合物は、簡単かつ高い純度で製造され、化学的に安定性であり、免疫原の 能力を示さず、かつ心筋梗塞のような血栓塞栓症、冠状動脈閉塞症、深度静脈血 栓症、肺塞栓症の治療および予防並びに動脈管および静脈管の再開放後の再閉塞 の阻止に好適である。更に、該化合物は、血液または血漿と接触している人工の 表面（例えば、人工透析膜）の被覆に好適である。

新規化合物は、既に記載された、同様にヒルジンから誘導されたペプチド、例え ばＭＤ　２８０５０　（Ｔｈ＋。

ｍｂｏｓｉｓ　ａｎｄ　Ｈａｅｍｏｓｌａｓｉｓ　第６３巻（１９９０年）第２ ０８〜２１４頁、欧州特許第０３７２５０３号明細書）　、　Ｈｉ＋ｕｌｏｇ− １（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｌ＋ｙ　第２９巻（１９９０年）第７０９５〜７１０１ 頁１国際公開番号ＷＯ９１１０２７５０）およびｐ７９　（ＦＥＢＳ　Ｌｅ　ｔ 　ｔｅｒｓ　第２８２号（１９９１年）第４７〜５２頁）に比べて、良好な有効 性を有する。式１１に記載された合成のアミノ酸と置換基ｗｓｏｓｈとの使用に よって。

その他は同様の配列のペプチド中の で示される合成のアミノ酸の使用によるよりも著しく効果的なペプチドが合成さ れる。前記アミノ酸は、別のヒルジンから誘導されたペプチド中で、既に使用さ れていた（欧州特許第０４４３５９８号明細書）。前記の新規化合物の作用強さ は、組換えられたヒルジンの作用強さの程度の大きさである。

実施例 １８式１１のアミノ酸の合成 式１１の合成アミノ酸を、文献に記載された合成法（ＬＯ＋ｇ、Ｃｈｅｍ第５３ 巻（１９８８年）第３６２１〜３６２４頁：欧州特許第０３５４１０８号明細書 ）により製造した。

２、　式■のペプチドの合成 ２．１　共通の作業工程 式■のペプチドを、固定相ペプチド合成の標準法を用いて、ラオボテック社（Ｆ ｉ＋ｍａ　ＬＡ［１ＯＲＴＥＣ）の半自動ペプチド合成機モデル５Ｐ６５０で合 成した。使用した試薬の量比および体積を、別記しない限り、使用手引書に相応 して使用した。全てのカンプリングおよび分離工程の完全性を点検し、場合によ っては繰り返した。

２、　１．　１　ＢＯＣ−保護基技術のための典型的な合成サイクル。

１、トリフルオロ酢酸およびＤＣＭ中のアニソール（４８０：２０：５００） １×　５分間 ２．１と同様。　１×１５分間 ３、ＤＣＭで洗浄　３×　５分間 ４、ＤＣＭ中のジイソプロピルアミン （１００＋９００）　３　Ｘ　３分間 ５、ＤＣＭで洗浄　３×　５分間 ６　カップリング、アミノ酸１．５当量、ＤＭＦ中０．５ＭのＴＢＴＵｌ、５当 量、ＤＣＭ中０．５Ｍのジインプロピルエ チルアミン１．５当量 １×　３分間 ７、ＤＣＭで洗浄　３×　５分間 ８、不完全な反応の場合には、カップリングを繰り返すか（即ち、６に戻る） またはキャッピングする。

９．１に戻る。

２、　１．２　Ｆｍｏｃ−保護基技術のための典型的な合成サイクル １、ＤＭＦ中のピペリジン（２００＋８００）１×　５分間 ２．１と同様。　１×１５分間 ３、ＤＭＦで洗浄　２×　５分間 ４、ＤＣＭで洗浄　２×　５分間 ５．２．１．１．に記載されたのと同様のカンプリング　ｌＸｌ０分間 ６、ＤＣＭで洗浄　２×　５分間 ７、ＤＭＦで洗浄　２×　５分間 ８、不完全な反応の場合には、カップリングを繰り返すか（即ち、５に戻る） またはキャッピングする ９、１に戻る。

２．１．３　２．１．１により得られたペプチド樹脂の後加工 ２．１．１により得られたペプチド樹脂を、真空下で乾燥させ、ＴＥＦＬＯＮ− ＨＦ−装置（ベニンスラ社（Ｆａ、ＰＥＮｌＮ５ＵＬＡ）　）の反応容器中に移 動させた。掃去剤、有利にアニソール（１ｍｌ／樹脂ｇ）の添加後に、液体Ｎ、 を用いて冷却しながら、フッ化水素を濃縮した（１０ｍｌ／ｍ脂ｇ）。この混合 物を、０℃に加熱し、前記温度で４５分間撹拌した。引続き、フッ化水素を、真 空に引き、かつ残分を酢酸で洗浄し、残余の掃去剤を除去した。このペプチドを ３０％の酢酸で抽出し、濾過し、かつ濾液を凍結乾燥させた。

２．１．４　２．１．２により得られたペプチド樹脂の後加工 ２．１．２の記載により得られたペプチド樹脂を真空下に乾燥させ、引続き、ア ミノ酸組成物に応じて、次の分離過程の１つを施した（Ｗａｄｅ、　Ｔｒｅｇｅ ａ＋、　Ｈｏｖａ＋ｄＦｌｏ＋ｅｙ　Ｆ＋ｎｏｃ−Ｗｏｒｋｓｈｏｐ　Ｍｘｎｕ ｇｌ、Ｍｅｌｂｏｕｔｎｅ　１９８５年）。

特表十６−５０４９８９　（７） 適当なＴＥＡ混合物中のペプチド樹脂の懸濁液を、室温で記載された時間撹拌し 、この後、この樹脂を濾別し、かつＴＦＡ並びにＤＣＭで洗浄した。この濾液お よび洗浄液を、更に濃縮し、かつペプチドを、ジエチルエーテルの添加によって 沈殿させた。水浴中での冷却後に、沈殿物を濾別し、３０％の酢酸中に入れ、か つ凍結乾燥した。

２．１．５　ペプチドの精製および特性決定粗製ペプチド並びに精製されたペプ チドの品質を、ＨＰＬＣを用いて評価し；精製を、ＭＰＬＣまたはゲルクロマト グラフィーとＭＰＬＣとを組合せて行なった。

ＨＰＬＣ’ 装置　ＨＰ　１０９０　液体クロマトグラフ 固定相：　１００Ｘ２．１ｍｍ　ＶＹＤＡＣＣ１８（ＴＰ８２１８）　：５μｍ ；３００Ａ移動相　（Ａ）Ｈ，０中のＴＦＡｏ、１％；　（Ｂ）ＣＨｊＣＮ中の ＴＦＡｏ、１％： 流速：０．２ｍｌ／分間；温度４０°Ｃ勾配。

（ａ）　・　０．５％分間−１で　０％から（Ｂ） （ｂ）：１．０％分間−１で　５％から（Ｂ） （ｃ）：１．０％分間−１で３５％から（Ｂ） 試料の廃棄：　３　ＩＩ　ｌ　；溶離剤巾約０．０３％の溶液 検出：２０５ｍｍ ＭＰＬＣ： 装置： ラボマチックーグラディエントーミッテルドルッククロマトグラフィー−ステー ション（Ｌａｂｏｍａｌｉｃ−Ｇｒａｄｉｅｌｅｎ−１目ｅｌｆｒｕｃｋｃｈｔ ｏｍ＊＋ｏｇｒｉｐｈ　１ｅ−３ｔａｔｉｏｎ）固定相：　２６Ｘ４５０ｍｍ〜 ３７Ｘ４５０ｍｍオイロジル　バイオセレクト社 （Ｅｕ＋ｏｓｉｌ　Ｂｉｏｓｅｌｅｃｌ）　１００　／　３０Ｃ１８；２０〜４ ５ｕｍ；１００Ａ 移動相　（Ａ＞　Ｈｘｏ中ＴＦＡ０．１％；（Ｂ）ＣＨｓＣＮ 勾配、溶離相の間で０．２５％分間−１での段階的勾配 検出　２０５〜２２０ｍｍ ゲルクロマトグラフィー： 固定相：　５ＥＰＨ八ＤＥＸ　（登録商標）Ｇ−１０もしくは−ＬＨ２０ 移動相　Ａ　ｃ　ＯＨもしくはＭｅＯＨ１０％ 検出　連続して接続されたＵＶ−およびＩＲ−検出器。

精製されたペプチドの特性決定のために、アミノ酸分析（ＡＡＡ）、高速原子衝 撃質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ）および時折の配列決定（ＳＱ）またはＮＭＲ分光分 析（ＮＭＲ）を採用した。

２．２　特殊な作業工程 ２．２．１［Ｐ−スルホ−Ｐｈｅ”］　−］Ｎａ−アセチルーヒルジン６〜．。

Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−Ｐ＊ｍ樹脂１．ＯＯｇ　（０，４７ｍｅｑ　）を、２．１．１ の記載により、次のものと反応させた： Ｂａｃ−Ｌｅｕ−ＯＨＢｏｃ−１１ｅ−ＯＨＢｏｃ−（Ｐ−スルホ）Ｐｈｅ−Ｏ ＨＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＣｈｘ）−０ＨＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＣｈｘ）−０ＨＢｏｅ −Ｇｌｕ（ＯＣｈｘ）−０８Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＣｈｘ）−０ＨＢｏｃ−Ｐｈｅ −ＯＨＢｏｃ−Ｐｒｏ−０１１ 無水酢酸を用いるＮ−アセチル化後に、２．１．３の記載により後加工した。

粗製収量：凍結乾燥物３０５　ｍ　ｇ 粗製ペプチドを、２．１．５の記載により、ＭＰＬＣによって精製した。

ＨＰＬＣ−滞留時間（勾配ｂ）　１９゜５分間　ＡＡＡ　ニ一致；　ＦＡＢ−Ｍ Ｓ　：２、　２．　２　［Ｄ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ６３］　−Ｈａ−アセ チル−ヒルジン、６〜６．および ［Ｌ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ”］　−］Ｎα−アセ特表十６−５０４９８９ （８） チル−ヒルジン１．〜６゜ Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−Ｐｓｍ樹脂２．０ｇ　（１，５４ｍｅｑ）を、２．１．１の記 載により、次のものと反応させた。

Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨＢａｃ−１１ｅ−ＯＨＢｏｃ−Ｄ、　Ｌ（Ｐ−スルホ）Ｐ ｈｅ−ＯＨＢｏｅ−Ｇｌｕ（ＯＣｈｘ）−０ＨＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＣｈｘ）−０ ＨＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＣｈｘ）−０ＨＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＣｈｘ）−０ＨＢｏｃ −Ｐｈｅ−ＯＨＢｏｃ−Ｐ＋ｏ−ＯＨ 無水酢酸を用いるＮ−アセチル化後に、２．１．３の記載により後加工した。

粗製収量：凍結乾燥物３０４ｍｇ 粗製ペプチドを、２．１．５の記載により、ＭＰＬＣによって精製した。

ＨＰＬＣ−滞留時間（勾配ｂ）：１８゜５分間および１９．５分間：　ＡＡＡ　 一致；ＦＡＢ−ＭＳ　：１４１６および１４同様に、［Ｄ−ｐ−ホスホノメチル −Ｐｈｅ”］−］Ｎα−アセチルーヒルジン６〜，６および［Ｌ−ｐ−ホスホノ メチル−Ｐｈｅ６３］　−Ｎａ−アセチル−ヒルジン１．〜６．を［ＨＰＬＣ滞 留時間（勾配ｂ）：１９．５分間および２１．０分間；　ＡＡＡ　ニ一致；ＦＡ Ｂ−ＭＳ　：１４１８および１４１８］製造した。

２、　２．　３　［Ｄ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ”］　−］Ｎａ−スクシニル ーヒルジン１ｓ−ａｓおよび ［Ｌ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ６３コーＮａ−スクシニル−ヒルジン５．〜６ ゜ Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−Ｐｉｍ樹脂２．０ｇ　（１，５４ｍｅＱ）を、２．１．１の記 載により、次のものと反応させた： Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨＢｏｃ−ｌ　１ｅ−ＯＨＢｏｃ−Ｄ、　Ｌ（ｐ−スルホ） Ｐｈｅ−０）Ｉ　Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＣｈｘ）−０ＨＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＣｈｘ ）−Ｏｆ（Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＣｈｘ）−０ＨＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＣｈｘ）−０ ）Ｉ　Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨＢｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ 無水コハク酸を用いるＮ−スクシニル化後に、２．１．３の記載により後加工し た： 粗製収量　凍結乾燥物３６４　ｍ　ｇ 粗製ペプチドを、２．１．５の記載により、ＭＰＬＣによって精製した。

ＨＰＬＣ−滞留時間（勾配ｂ）：１８゜５分間および１９．５分間：　ＡＡＡ： 　一致；　ＦＡＢ−ＭＳ　：　１４１７４よび１４同様に製造できる ［ｐ−スルホ−Ｐｈｅ６３］−Ｎａ−スクシニルーヒＨＰＬＣ滞留時間（勾配ｂ ）：２３．０分間；　ＡＡＡ　ニ一致；　ＦＡＢ−ＭＳ　：　１［Ｈｙｐ”、　 ｐ−スルホ−Ｐｈｅ”］−］Ｎａ−スクシニルーヒルジン５ｓａｓ ＨＰＬＣ滞留時間（勾配ｂ）：２０．０分間；ＡＡＡ　ニ一致；　ＦＡＢ−ＭＳ 　１４［）１ｙｐ’°、ｐ−スルホ−Ｐｈｅ”、　Ｃｈｉ”］　−Ｈａ−スクシ ニルーヒルジン５．〜６６ ＨＰＬＣ滞留時間（勾配ｂ）：２５．０分間；　ＡＡＡ　ニ一致；　ＦＡＢ−Ｍ Ｓ　１５［Ｔｙ＋”、　Ｄ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ”、　Ｃｈｘ６４］　− Ｈａ−スクシニル−ヒルジン、６〜６゜［Ｔｙ＋”＋　Ｌ−ｐ−スルホメチル− Ｐｈｅ”、　Ｃｈｓ８４］−Ｎａ−スクシニル−ヒルジン、６〜６゜）（ＰＬＣ 滞留時間（勾配ｂ）＋２３．０分間および２６．５分間；　ＡＡＡ　一致：ＦＡ Ｂ−ＭＳ　：　１５３０および１５３０［Ｔｙ＋”、　Ｐｒｏ５８．　Ｄ−ｐ− スルホメチル−Ｐｈｅ”、Ｃｈａ”］　−］Ｎａ−スクシニルーヒルジン６〜６ ．および ［Ｔｙ＋５６．　Ｐ＋ｏ５８．　Ｌ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ”、Ｃｈａ”］ −Ｈａ−スクシニル−ヒルジン５ＨＰＬＣ滞留時間（勾配ｂ）：１８．０分間お よび１９．５分間；　ＡＡＡ　＋一致；ＦＡＢ−ＭＳ　：　１４９８および１４ ９８［Ｔ７ｒ５６．　Ｐｒｏ”、　８７Ｆ”ｔ　ｏ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ ”、　Ｃｈａ”］　−］Ｎａ−スクシニルーヒルジン５．〜６および ［７，，５６，Ｐｒｏ”、　Ｈｙｐ’°、　Ｌ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ”、 　Ｃｈａ”］　−］Ｎａ−スクシニルーヒルジン６〜＠６ ＨＰＬＣ滞留時間（勾配ｂ）：１９．０分間および２０．０分間；　ＡＡＡ　ニ 一致：ＦＡＢ−ＭＳ　：　１５１４および１５１４［Ｔｙｒ”、　Ｐｒｏ５８． １１ｙｐ’°、　Ｄ−１ｆ−スルホメチル−Ｐｈｅ”、　Ｃｈｉ”、　Ｇｌｕ６ ５コーＮａ−スクシニル−ヒルジン、６〜０．および ［ＴＹＴ”、　Ｐｒｏ５８．　ＨＹＰ６°、　Ｌ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ６ ３．　Ｃｈａ”、　Ｇｌｕ６５］　−Ｎａ−スクシニル−ヒルジン。６〜６゜ ＨＰＬＣ滞留時間（勾配ｂ）＋２０．０分間および２３．０分間；　ＡＡＡ　一 致；ＦＡＢ−ＭＳ　：　１５１５および１５１５ペプチド合成に式ＩＩのアミノ 酸のラセミ体を使用する場合に、生じるジアステレオマーのペプチド混合物を、 ＭＰＬＣを用いて分離した。通常この場合、長いＨＰＬＣ滞留時間を有するジア ステレオマーのペプチドは、短いＨＰＬＣ滞留時間を有するジアステレオマーよ りも２倍だけ良好な作用強さを示した。式ＩＩの人工のアミノ酸のそれぞれ含有 するエナンチオマーに関連する分類は、これまでなお行なうことができなかった 。

２．３　式１のペプチドのための他の例２．２のところで記載したように、式■ の次のペプチドを合成することができる：［Ｄ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ６３ ．　Ｃｈ、６４］　−Ｈａ−スクシニル−ヒルジン６６〜ｌ ［Ｌ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ”、　Ｃｈａ”］　−Ｎ　ａ−スクシニル−ヒ ルジン、６〜６゜ ［Ｈｙｐ”、　Ｄ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ”］−］Ｎａ−スクシニルーヒル ジン＠６〜＠ １Ｈｙｐ”、　Ｌ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ”］−］Ｎａ−スクシニルーヒル ジン６〜６゜ ［Ｈｙｐ’°、　Ｄ−Ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ”、　Ｃｈｉ”ｌ　−Ｈａ−ス クシニル−ヒルジン５．〜６゜ ［Ｈｙｐ”、　Ｌ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ”、　Ｃｈａ”］　−］Ｎａ−ス クシニルーヒルジン５．〜。

［Ｔ）’＋”、　Ｈｙｐ６°、　Ｄ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ”、　Ｃｈａ” ］　−］Ｎα−スクシニルーヒルジンＩ６〜ｓ６［丁ｙ、５６．　Ｈｙｐ６０． 　Ｌ−Ｐ−スルホメチル−］Ｎαースクシニルーヒルジン、〜６。

［Ｔｙｒ５６，　Ｈ，、５１１，　ＨＹｐ６Ｇ，　Ｄ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈ ｅ”、　Ｃｈａ”］　−］Ｎαースクシニルーヒルジン、〜６。

［Ｔｙｒ”、　Ｈｙｐ”、　Ｈｙｐ６０，　Ｌ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ”、 　Ｃｈａ”］　−］Ｈａースクシニルーヒルジンｓｓａｓ［Ｔｙｔ”、　Ｐ＋ｏ ５８，　Ｖａ１５９，　ＪＰ”＋　Ｄ−Ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ”、Ｃｈａ” ］　−］Ｎａースクシニルーヒルジンｓｓａｓ［７，、６６、　Ｐｒｏ５８，　 Ｖａ１５９，　Ｈｙｐ”＋　ｔ．−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ６３＋　Ｃｈｉ” ツーＮａ−スクシニル−ヒルジンｓｓ−ｓｓ［Ｔｙ＋５６＋　Ｐｒｏ５８，　Ｃ ｈａ”、　Ｈｙｐ”＋　Ｄ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ”、　ｌｉｅ”ツーＮａ −スクシニル−ヒルジンｓｓ−ｓｓ［丁ｙｒ５６，　Ｐｒｏ５８，　Ｃｈａ”、 　Ｈｙｐ”、　Ｌ−ｐ−スルホメチル−ｈｅ”、Ｉｌｅ”］−］Ｎａースクシニ ルーヒルジンｓｓａｓ［Ｔ７＋”、　Ｐｔｏ５８．　Ｈｙｐ”、　Ｄ−ｐ−スル ホメチル−Ｐｈｅ６３，　Ｃｈ！６４コーＮα−スクシニル−ヒルジン、、〜６ ４［Ｔｙｔ”、　Ｐｒｏ５８＋　ＨＹＰ６０＋　Ｌ−Ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ ６３．　Ｃｈａ６４コーＮα−スクシニル−ヒルジン、、〜，。

［Ｔｙｒ”、　Ｐ「ｏ５８，　Ｈｙｐ’°，　Ｄ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ” 、　Ｃｈａ”、　Ｄ−Ｇｌｎ６５］−Ｎａ−スクシニル−ヒルジン６８−８１１ ［Ｔｙ＋５６，　Ｐｒｏ５８，　Ｈｙｐ６°，　Ｌ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ ”、　Ｃｈｘ”、　Ｄ−Ｇｌｎ６５］　−Ｎａ−スクシニル−ヒルジンｓｓ−ｓ ｓ［Ｔｙｒ”、　Ｐ＋ｏ５８，　Ｈｙｐ６°，　Ｄ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ ”、　Ｃ［Ｔｙｒ”、　Ｐｔｏ”＋　Ｈｌ’Ｐ”、　ｔ．−ｐ−スルホメチル− Ｐｈｅ６３，　Ｃｈａ”、　Ｄ−Ｇｌｕ”］　−］Ｎａースクシニルーヒルジン ｓｉａｓ［Ｔｙ　Ｉ　”　＋　８７　Ｉｔ”　Ｔ　Ｖｉ　Ｉ”　、　ｌ（７　ｐ ”　＋　Ｄ−ｐ−　ス）’ｌ／　＊　メチル−ｐｈｅ”、Ｃｈｉ”］−］Ｎａー スクシニルーヒルジン８＠＠＠［７，１６ｇ．　Ｈｙｐ５８＋　Ｖａ１５９，　 ＪＰ”ｌ　ｔ−Ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ”、　Ｃｈｉ”ｌ−Ｈａ−スクシニル −ヒルジンｓｓ−ｓｓ［７ｙ，５６，　Ｈ，２５ｇ．　ｖａｌ”、　Ｈ，、６０ ，　ｏ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ”、ｌｌｅ”］　−］Ｎａースクシニルーヒ ルジン６＠６ｍ［７，「５Ｇ，　Ｈｙｐ”、　Ｖ！＋”、　Ｈ，ｐ６Ｇ，　ｔ． −ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ”、　Ｉｌｅ”］　−］Ｎαースクシニルーヒルジ ンｓｓａｓＣＤ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ６３］−Ｈａ−スクシニル−ヒル ジン、、〜６６ ［Ｌ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”］−］Ｎαースクシニルーヒルジン６〜６ 。

［Ｄ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”、　Ｃｈｉ”］　−］Ｎａースクシニルー ヒルジン６〜６。

［Ｌ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”、　Ｃｈｉ”］−］Ｎαースクシニルーヒ ルジン６〜６６ ［Ｔｙｒ”＋　Ｄ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”、　Ｃｈｉ”ツーＮａ−スク シニル−ヒルジンｓ６〜６６ ［ＴＹ）”、　Ｌ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”、　Ｃｈａ”］　−］Ｎａー スクシニルーヒルジンｓ６〜６ ６Ｔｙ＋５６，　Ｐｒｏ５８．　Ｄ−Ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”、　Ｃｈａ ”］−］Ｎαースクシニルーヒルジン６〜６。

［Ｔ＋゛＋”、　Ｐｒｏ”、　Ｌ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ６３．　Ｃｈａ ６４］−Ｎａ−スクシニル−ヒルジン５６〜６６［Ｈｙｐ６０．　Ｄ−ｐ−ホス ホノメチル−Ｐｈｅ”］−］Ｎａ−スクシニルーヒルジン６．〜。

［Ｈｙｐ６０．　Ｌ−Ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”］　−］Ｎａ−スクシニル ーヒルジン８．〜。

［Ｈｙｐ”、　Ｄ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”、　Ｃｈ、”］　−］Ｎａ− スクシニルーヒルジン■〜 ｌ１（ｙｐ”、　Ｌ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”、　Ｃｈｉ”］　−］Ｎａ −スクシニルーヒルジン６６〜６ ＩＴ７ｒ”、　ｎｙｐ”、　ｏ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”、　Ｃｈｉ”］ −］Ｎα−スクシニルーヒルジン６〜６Ｂ［Ｔｙｒ５６＋　ＨｙＰ”、　Ｌ−ｐ −ホスホノメチル−Ｐｈｅ”、　Ｃｈａ”］−］Ｎα−スクシニルーヒルジンＢ 、〜６［Ｔｙｔ”＋　Ｐｒｏ５８．　Ｈｙｐ”＋　ｏ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐ ｈｅ６３゜Ｃｈａ”］　−］Ｎα−スクシニルーヒルジン６〜６゜［Ｔｙｒ”、 　Ｐｒｏ”、　Ｈｙｐ”、　Ｌ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”。

Ｃｈ２”］−］Ｎα−スクシニルーヒルジン６〜６゜［Ｔｙｒ５６．　Ｈｙｐ” 、　ｕｙｐ’°、　Ｄ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”。

Ｃｈａ”］　−］Ｎα−スクシニルーヒルジン６〜６゜［Ｔｙｒ”＋　）ｌｙｐ ”＋　Ｈｙｐ’°、　Ｌ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”。

Ｃｈｉ”］　−］Ｎα−スクシニルーヒルジン６〜．。

［７，，５６，Ｐｒｏ５８．　Ｖａ１５９．　Ｈｙｐ６０．　Ｄ−ｐ−ホスホノ メチル−Ｐｈｅ”、　Ｃｈａ６４］　−Ｎ　ａ−スクシニル−ヒルジン５ｓ−ｓ ｓ［Ｔｙｒ”、　Ｐｒｏ５８．　Ｖａｔ５９．　Ｈｙｐ”、　！、−ｐ−ホスホ ノメチルーＰｈｅ”、　Ｃｈａ”］−］Ｈａ−スクシニルーヒルジン５６６８［ Ｔｙ＋５６．　Ｐ＋ｏ５８．　Ｃｈａ５９．１（ｙｐ”、　Ｄ−ｐ−ホスホノメ チル−Ｐｈｅ６３．　ｌ１ｅ６４］　−Ｈａ−スクシニル−ヒルジン１ｓ−ｓｓ ［Ｔｙｒ”、　Ｐｒｏ”、　Ｃｈａ５９．　Ｈｙｐ”、　Ｌ−ｐ−ホスホノメチ ル−Ｐｈｅ”、　ｌｌｅ”］　−］Ｎａ−スクシニルーヒルジン５ｉｓｓ［Ｔｙ ｒ５６．　Ｐｔｏ”、　Ｈｙｐ６０．　ｏ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”。

Ｃｈｉ”］　−］Ｎａ−スクシニルーヒルジン１ｓｓｓ［Ｔｙｔ”、　Ｐｒｏ５ ８．　Ｈｙｐ’°、　Ｌ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”。

Ｃｈｉ”］−］Ｎα−スクシニルーヒルジン６〜．。

［Ｔｙｒ”、　Ｐｒｏ”、　Ｈｙｐ’°、　Ｄ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ” 。

Ｃｈｉ”、　Ｄ−Ｇｌｎ６５］−Ｎａ−スクシニル−ヒルジン５ｓ−ａｓ［Ｔｙ ＋５６．　Ｐｒｏ”、　Ｈｙｐ”、　Ｌ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”。

Ｃｈａ”、　Ｄ−Ｇｌｎ”］−］Ｎａ−スクシニルーヒルジン５ｓｓｉ［Ｔ７＋ ”、　Ｐｒｏ”、　Ｈｙｐ６０．　ｏ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”。

Ｃｈｉ”、　Ｇｌｕ６５］−Ｈａ−スクシニル−ヒルジン８８−ＩｔＢ［Ｔｙｒ ”、　Ｐｒｏ５８．　Ｈｙｐ’°、　Ｌ−１１−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”。

Ｃｈｉ”、　Ｇｌｕ”］−］Ｎａ−スクシニルーヒルジン５ａａｓ［Ｔｙ＋５６ ．　Ｐ［０５８，Ｈｙｐ”、　Ｄ−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”。

Ｃｈａ”、　Ｉ＞Ｇｌｕ６５］−Ｈａ−スクシニル−ヒルジン５ｓ−ｓｓ［Ｔ７ ＋５６．　Ｐｒｏ”、　）ｌｙｐ”、　ｔ、−ｐ−ホスホノメチル−Ｐｈｅ”。

Ｃｈｉ６４．　Ｄ−Ｇｌｕ６５］−Ｎａ−スクシニル−ヒルジン、６．。

［７ｙ、５６．　Ｈ，，６８，＼°！１５９．　ＨＹ、６０．０−ｐ−ホスホノ メチル−Ｐｈｃ”、　Ｃｈａ”］　−］Ｎａ−スクシニルーヒルジン５ｓｓｓ［ Ｔｙｒ”＋　Ｈｙｐ”＋　Ｖｘｌ”＋　Ｈｙｐ”、　Ｌ−ｐ−ホスホノメチル− Ｐｈｅ”、　Ｃｈａ”］　−］Ｎａ−スクシニルーヒルジン６ト６５７ｙ、５６ ．　ＨＹＰ５８．　Ｃｈａ５９．　Ｉ（ＹＰ”、　Ｄ−ρ−スルホメチルーＰｈ ｅ６３．　Ｉｌｅ”］−］Ｎａ−スクシニルーヒルジン５５６ｇ［”ｙｒ５６＋ 　Ｈｙｐ”’＋　Ｃｈａ”、　Ｈｙｐ”’＋　Ｌ−ｐ−スルホメチル−Ｐｈｅ６ ３．　ｌｌｅ”］−］Ｎａ−スクシニルーヒルジン８＠１１８国際調査報告 国際調査報告 フロントページの続き （７２）発明者　ホルンベルガー、　ヴイルフリートドイツ連邦共和国　Ｄ−６ ７００ルートヴイッヒス　ハーフエン　ムンデンハイマーシュトラーセ　１５２ （７２）発明者　ベルナルト、　ハラルトドイツ連邦共和国　Ｄ−６７０２パー ト　デュルク　ハイム　ヴアレンティーンーオスタータークーシュトラーセ　２

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. １．式Ｉ： ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ 〔式中、 Ｘは、Ｈ原子、アセチル、スクシニル、マレオイル、フタロイルまたはフマリル を表し、 Ａ１は、Ｐｈｅ、ＴｙｒまたはＣｈａを表し、Ａ２は、ＧｌｕまたはＤ−Ｇｌｕ を表し、Ａ３は、Ｃｌｕ，ＰｒｏまたはＨｙｐを表し、Ａ４は、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ 、ＶａｌまたはＣｈａを表し、Ａ５は、ＰｒｏまたはＨｙｐを表し、 Ａ６は、ＧｌｕまたはＤ−Ｌｅｕを表し、Ａ７は、Ｌｅｕ、Ｄ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ 、Ｄ−Ｉｌｅ、ＣｈａまたはＤ−Ｃｈａを表し、 Ｙは、ＯＨ、Ｇｌｎ−ＯＨ、Ｇｌｎ−ＮＨ２、Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＨ、Ｄ−Ｇｌｎ− ＮＨ２、Ｇｌｕ−ＯＨ、Ｇｌｕ−ＮＨ２、Ｄ−Ｇｌｕ−ＯＨまたはＤ−Ｇｌｕ− ＮＨ２を表し、Ｗは、基ＳＯ３ＨまたはＰＯ３Ｈ２を表す〕で示されるペプチド 並びに生理学的に認容性の塩基または酸を有する該ペプチドの塩。
2. ２．請求の範囲１記載の式Ｉのペプチドを製造するための方法において、該ペプ チドをペプチド化学において公知の方法により製造することを特徴とする、式Ｉ のペプチドの製造法。
3. ３．疾病の撲滅の場合に使用するための請求の範囲１記載の式Ｉのペプチド。