JPH0647454B2 - アシル化ポリエチレンイミン結合相シリカ生成物のスルホン酸誘導体類 - Google Patents

アシル化ポリエチレンイミン結合相シリカ生成物のスルホン酸誘導体類

Info

Publication number
JPH0647454B2
JPH0647454B2 JP62049000A JP4900087A JPH0647454B2 JP H0647454 B2 JPH0647454 B2 JP H0647454B2 JP 62049000 A JP62049000 A JP 62049000A JP 4900087 A JP4900087 A JP 4900087A JP H0647454 B2 JPH0647454 B2 JP H0647454B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
integer
cooh
hydrogen
silica gel
microns
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
JP62049000A
Other languages
English (en)
Other versions
JPS62235207A (ja
Inventor
イー．ラムスデン ヒュー
アール．ノウ デビッド
Original Assignee
ジェイ ティー ベイカー インコーポレーテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ジェイ ティー ベイカー インコーポレーテッド filed Critical ジェイ ティー ベイカー インコーポレーテッド
Publication of JPS62235207A publication Critical patent/JPS62235207A/ja
Publication of JPH0647454B2 publication Critical patent/JPH0647454B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction
    • B01D15/361—Ion-exchange
    • B01D15/362—Cation-exchange
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/02—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material
    • B01J20/10—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material comprising silica or silicate
    • B01J20/103—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material comprising silica or silicate comprising silica
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B01J20/262—Synthetic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. obtained by polycondensation
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B01J20/265—Synthetic macromolecular compounds modified or post-treated polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28002—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their physical properties
    • B01J20/28004—Sorbent size or size distribution, e.g. particle size
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28014—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their form
    • B01J20/28047—Gels
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
    • B01J20/28078—Pore diameter
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/291—Gel sorbents
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/3092—Packing of a container, e.g. packing a cartridge or column
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
    • B01J20/3204—Inorganic carriers, supports or substrates
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3214—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the method for obtaining this coating or impregnating
    • B01J20/3217—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3214—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the method for obtaining this coating or impregnating
    • B01J20/3217—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond
    • B01J20/3219—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond involving a particular spacer or linking group, e.g. for attaching an active group
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3244—Non-macromolecular compounds
    • B01J20/3246—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3268—Macromolecular compounds
    • B01J20/3272—Polymers obtained by reactions otherwise than involving only carbon to carbon unsaturated bonds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3268—Macromolecular compounds
    • B01J20/328—Polymers on the carrier being further modified
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/54—Sorbents specially adapted for analytical or investigative chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/58—Use in a single column

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Macromolecular Compounds Obtained By Forming Nitrogen-Containing Linkages In General (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Surface Treatment Of Glass (AREA)
  • Silicon Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Polymers With Sulfur, Phosphorus Or Metals In The Main Chain (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は新規な結合相シリカ類に、またタンパク、特に
約5以下の等電点をもつタンパクの分離精製におけるそ
れらの使用、及びそれらの調製に関する。更に詳しく
は、本発明はN-アシル化された共有結合の非架橋ポリエ
チレンイミン結合相シリカ生成物のスルホン化誘導体類
と、タンパク類、特に約5以下の等電点をもつタンパク
類の分離精製用に液体クロマトグラフィのカラム充填剤
に適した固体相としてのそれらの使用、及びそれらの製
造に関する。
［先行技術］ アルパート(Alpert)及びレイニエ(Regnier)は、J. Chro
matogr. 185巻375-392頁（1979年）で、ポリエチレンイ
ミン(PEI)がシリカ表面に吸着され、それによって多官
能価オキシラン類によって重合体層へ架橋される隣接吸
着PEI分子へ十分な第一級及び第二級イミノ基が提供さ
れることを示した。最近、架橋ポリエチレンイミンで被
覆された微粒子シリカのカラムによる高性能液体クロマ
トグラフィ(HPLC)を用いた合成オリゴヌクレオチドの分
離がティー・ジー・ローソン(T.G. Lawson)ら、Anal. B
iochem. 133巻85-93頁(1983年)による文献中に報告され
た。
もっと最近では、1985年9月10日に交付された合衆国特
許第4,540,486号でヒュー・ラムスデン(Hugh Ramsden)
により、新しい共有結合された非架橋ポリエチレンイミ
ノプロピルトリメトキシシランシリカゲル(PEI-PrSi-シ
リカゲル)及びポリエチレンイミノプロピルトリメトキ
シシラン制御多孔ガラス(PEI-PrSi-CPG)結合相生成物
が、タンパク混合物の分離及び分析に有用であると記述
された。
ラムスデンの共有結合された非架橋PEI-PrSi-シリカゲ
ル及びPEI-PrSi-CPG生成物は、本発明によってN-アシル
化される基質を構成しているから、同合衆国特許第4,54
0,486号の開示は、これへの参照によって完全な形で本
明細書へ取入れられている。
［発明が解決しようとする問題点］ PEI-PrSi-シリカゲル及びPEI-PrSi-CPG結合相生成物は
タンパク類の分離精製用液体クロマトグラフィのカラム
充填用固体相として極めて有用であることがわかった
が、これらの結合相生成物は、あるタンパク類には十分
に強力な陽イオン交換体ではないことがわかり、従って
そのようなタンパク類の分離精製は困難ないし不可能と
なっていた。特に低い等電点、すなわち約5以下の等電
点をもつタンパク類の分離精製には、これが問題である
ことがわかった。例えば、この結合相は卵白アルブミン
や牛血清アルブミンのようなタンパク類については、十
分に受入れられる分離精製を提供しない。
従って、約5以下の等電点をもつタンパク類の適切な分
離を可能とし、かつあるタンパク類に対して強力な陽イ
オン交換体であるような固体結合相生成物を提供するこ
とは、非常に望ましい。更に、2以上の種々のpHで実質
的に完全に荷電され、これまで可能なものより大きな選
択性を提供するような固体結合相生成物を提供すること
は、非常に望ましい。更に、これまでより強力にタンパ
ク類を結合させ、各COO-の位置に隣接するSO3 -基を導入
することによって、より高い能力を提供するような固体
結合相生成物を提供することは有利であろう。また、ス
ルホン酸基があるので5以下の等電点をもつタンパク類
を結合させ、スルホン酸基とカルボン酸基の両方を合わ
せた結合力のため5より大きい等電点をもつタンパクを
も結合させるような固体結合相タンパク類を提供するこ
とは、非常に有利であろう。
［問題点を解決する手段］ 上記ラムスデンの合衆国特許第4,540,486号の共有結合
された非架橋PEI-PrSi-シリカゲル及びPEI-PrSi-CPG結
合相生成物のイミノ及びアミノ官能基をN-アシル化し、
更にN-アシル化反応生成物を重亜硫酸カリウム又はナト
リウムのような水溶性重亜硫酸塩又は水溶性重亜硫酸塩
前駆体と反応させると、タンパク類、特に低い等電点を
もつタンパク類の分離精製に固体相として有用なアシル
化ポリエチレンイミン結合相シリカ生成物のスルホン化
誘導体類が提供される。
本発明のアシル化ポリエチレンイミン結合相シリカ生成
物のスルホン化誘導体類は、次式のものである。
式中 はシリカゲル又はガラスの主鎖であり、 nはポリエチレンイミノプロピルシラン基の平均分子量
を約 400ないし約1800とするような整数であり、qは0な
いし1の整数であり、Rは水素、-(-CH2-)x-H又は-(CH2-)
m-COOHからなる群から選ばれ、ここでxは1又は2の整
数、mは0又は1の整数であり、Rが水素又は-(-CH2-)x-H
の時には、R1は-(-CH2-)p-COOH（pは0又は1の整数）で
あり、またRが-(-CH2-)m-COOHの時には、R1は水素又は-
(CH2-)y-H（yは0又は1の整数）からなる群から選ばれ
る。ガラスは制御された多孔ガラス(controlled pore g
lass, CPG)であるのが好ましい。
本発明のスルホン化誘導体類は、上記の合衆国特許第4,
540,486号の共有結合した非架橋PEI-PrSi-シリカゲル及
びPEI-PrSi-CPG結合相生成物から、式 ［式中q、R及びR1は式Ｉで定義されたとおり］の酸、又
はその酸無水物又は酸ハライドであるアシル化剤でのN-
アシル化によって容易につくられ、式 ［式中n、q、R及びR1は式Ｉで定義されたとおり］のN-
アシル化PEI-PrSi-シリカゲル及びN-アシル化PEI-PrSi-
CPG反応生成物が提供される。
次にアシル官能基上にスルホン基を導入するために、式
IIIのN-アシル化反応生成物を酸素給源の存在下に、水
溶性重亜硫酸塩又は水溶性重亜硫酸塩形成試薬（重亜硫
酸ナトリウム前駆体）、例えばメタ重亜硫酸ナトリウム
と反応させると、それによって本発明の式Ｉの新規なス
ルホン化誘導体類が提供される。
慣用の元素分析によって容易に決定できるPEI-PrSi-シ
リカゲル又はPEI-PrSi-CPG反応体基質中の窒素％は、PE
I部分の上のイミノ及びアミノ官能基の相対的総数を表
わす。PEI部分の上の実質的に全部のイミノ及びアミノ
官能基と反応するのに十分なアシル化剤が使用される。
概してN-アシル化段階は、不活性で非プロトン性の有機
溶媒中で等量又はやや過剰量のアシル化剤で容易に達成
される。典型的な非プロトン性溶媒は、例えばベンゼ
ン、トルエン、キシレン等のような芳香族炭化水素；テ
トラヒドロフラン、ジオキサン等のようなエーテル；及
びヘキサン、ヘプタン等のような脂肪族炭化水素を包含
する。アシルハライドを使用する時に、アシル化反応中
に放出される酸を取り上げるために、等量又はやや過剰
量の酸除去剤、例えば第三級アミン、好ましくは第三級
アルキルアミンを有利に使用できる。
典型的なアシル化剤は、例えばマレイン酸、フマール
酸、メサコン酸、シトラコン酸、グルタコン酸、イタコ
ン酸等のような式IIの酸類と、それらの酸無水物、酸ハ
ライド類、特に酸塩化物を包含する。アシル化剤として
特に好ましいのは、これらの酸の無水物、特に無水マレ
イン酸である。
従って本発明は第一に、プロピルシリル(PrSi)結合を経
てシリカゲル又はガラスに共有結合された非架橋ポリエ
チレンイミン(PEI)官能基を提供している。この場合、P
EI部分のイミノ及びアミノ官能基の実質的に全部、すな
わち80%及び好ましくは95%以上がアシル官能基でアシル
化され、このアシル官能基を次に重亜硫酸塩形成反応体
と反応させると、本発明の新規なスルホン誘導体類が提
供される。
N-アシル化PEI-PrSi-シリカゲル及びN-アシル化PEI-PrS
i-CPG反応生成物と重亜硫酸塩又は重亜硫酸塩前駆体と
の反応は、酸素、空気、過硫酸カリウム、過酸化ベンゾ
イル等のような酸素給源の存在下に実施される。
本発明の固体相結合シリカ生成物の主鎖（バックボー
ン）をなすシリカゲルとガラスは、約1ないし約70ミク
ロンの平均粒径と約0、好ましくは約50ないし約1000オ
ングストローム単位の平均孔径をもつシリカゲルである
か、又は約37ないし約177ミクロンの平均粒径と約0、好
ましくは40ないし約1000オングストローム単位の平均孔
径をもつガラス、好ましくは粒状の制御多孔ガラスと、
約400ないし約1800の平均分子量をもつポリエチレンイ
ミノプロピルトリメトキシシランとのものである。
式ＩのN-アシル化PEI-PrSi-シリカゲル及びN-アシル化P
EI-PrSi-CPG結合相生成物のスルホン化誘導体類は、カ
ラムクロマトグラフィによるタンパク類の分離精製用の
新しい有用な結合相となるものであり、新式のHPLC計装
化に特に適している。充填剤は種々のメッシュサイズの
ものがあり、例えば約50ないし約600メッシュでありう
る。
式ＩのN-アシル化PEI-PrSi-シリカゲル結合相生成物の
好ましいスルホン化誘導体類は、約5ないし約40ミクロ
ンの平均粒径と約50ないし約330オングストローム単位
の平均孔径をもつ粒状シリカゲルと約400ないし約600の
平均分子量をもつポリエチレンイミノプロピルトリメト
キシシランとの反応生成物から得られるもの、及び約40
ないし約62ミクロンの平均粒径と約250ないし約500オン
グストローム単位の平均孔径をもつ粒状シリカゲルと約
1000の平均分子量をもつポリエチレンイミノプロピルト
リメトキシシランから得られるものである。
式ＩのN-アシル化PEI-PrSi-シリカゲル及びPEI-PrSi-CP
G結合相生成物の本スルホン化誘導体類は強弱両方のイ
オンの相互作用に基づいてタンパク類を分離するものと
考えられる。これに基づいて分離を行なう現在入手され
るクロマトグラフィ基剤は、一般に選択性の悪い巾の広
いピークを与え、安定性が悪く、低能力で、タンパク類
の回収が非定量的であるので、本生成物でタンパク類を
分離する上での著しい利点は驚異的かつ異例のものと考
えられる。これと対照的に、本発明のクロマトグラフィ
基剤は良好な選択性をもち、くっきりとした明確なピー
クを提供し、非常に安定であり、高能力をもち、両方の
タンパク塊の定量的な回収を示し、酵素分離の場合に
は、酵素活性の著しい損失を生じない。
更に、本発明の新規な結合相生成物により、緩衝液組成
物を変化させ、緩衝液pHを変化させると種々のタンパク
混合物の相対的な溶離プロフィールを変えられる。
通常、本明細書に記載のクロマトグラフィ混合物は、高
イオン強度水溶液中でのシリカの固有の溶解度特性のた
めに、疎水性相互作用クロマトグラフィに使用される水
性の高イオン強度移動相で加水分解に不安定であると通
常は考えられているため、本発明はいっそう驚異的でさ
えある。このように、通常、シリカ基材を使用すると、
カラム寿命が必ず短くなると考えられている。しかし、
式ＩのN-アシル化PEI-PrSi-シリカゲル及びPEI-PrSi-CP
G結合相生成物の本スルホン化誘導体類の場合は、これ
とは逆である。
そのほか、式ＩのN-アシル化PEI-PrSi-シリカゲル及びP
EI-PrSi-CPG結合相生成物のスルホン化誘導体類は、タ
ンパクの分離精製においてより高度の選択性を提供し、
タンパクをより強力に結合し、充填剤として使用するカ
ラムにより高い能力を提供するという利点をもってい
る。その上、これらの式Ｉ生成物は、約2以上のpHで実
質的に完全に荷電され、低い等電点すなわち約5以下の
等電点をもつタンパク、特に卵白アルブミンや牛血清ア
ルブミン等のようなタンパク類の分離精製用に容易に使
用できるほど十分強力な陽イオン交換体である。
式Ｉの結合相生成物によって提供される別の利点は、こ
のような結合相がタンパク分離精製段階に使用される緩
衝液系のpH変化を容易に許容する点である。
式IIIのN-アシル化PEI-PrSi-シリカゲル及びN-アシル化
PEI-PrSi-CPG反応生成物も、式Ｉのスルホン化誘導体類
の調製用中間体として有用性をもった新しい結合相生成
物である。
以下の実施例では、以下の調製例でつくったPEI-PrSi-
シリカゲル及びPEI-PrSi-CPGが出発反応体として使用さ
れる。この反応体は単なる例示的なものであり、以下の
説明と上記合衆国特許第4,540,486号の開示に従って、
他のPEI-PrSi-シリカゲル及びPEI-PrSi-CPG結合相を以
下の実施例に従って使用すると、本発明の式Ｉの他のス
ルホン化誘導体類が提供されることが認められよう。
調製例Ａ PEI-PrSi-シリカゲル 約40ミクロンの平均粒径と250オングストロームの平均
孔径をもつシリカゲル100 gに、プロパノール500 mlと
約500の平均分子量をもつポリエチレンイミノプロピル
トリメトキシシラン49.5 g(47.1モル)をかきまぜながら
加え、混合物を室温で約48時間放置する。次に反応混合
物を真空ろ過し、ろ液を2-プロパノール各400 mlで2回
及びメタノール各400 mlで2回洗ってから、約80℃で約4
時間炉内乾燥した。生成物を脱イオン水500 mlで再スラ
リー化し、再びろ過し、メタノールで数回洗い、次に約
80℃で二度目に4時間オーブン乾燥すると共有結合したP
EI-PrSi-シリカゲル生成物約95.5 gを生ずる。分析：C
5.08%，H 1.43%,及びN 2.22%調製例Ｂ PEI-PrSi-シリ
カゲル 約5.25ミクロンの平均粒径と約330オングストロームの
平均孔径をもつシリカゲル100 gに、トルエン500 ml、
水2 ml及び約500の平均分子量をもつポリエチレンイミ
ノプロピルトリメトキシシランの50% w/wイソプロパノ
ール溶液50 mlを加え、混合物をかきまぜ、室温に約48
時間放置する。次に混合物をろ過し、ろ液をトルエン各
500 mlで2回、メタノール各500 mlで2回洗い、約80℃で
約2時間45分炉内で乾燥する。生成物を水に再スラリー
化し、ろ過し、水とメタノールで洗い、再び約80℃で約
1.5時間炉内乾燥する。収量93.0 g。分析：C 3.31%，H
1.30%及びN 1.25%。
調製例Ｃ PEI-PrSi-CPG 125ミクロンの平均粒径と240オングストロームの平均孔
径をもつ制御多孔ガラス10 gのヘキサン50 ml中におけ
るスラリーに、平均分子量500のポリエチレンイミノプ
ロピルトリメトキシシランの50% w/wイソプロパノール
溶液19.71 gを添加する。混合物を室温で5分かきまぜ、
次いで還流温度に約2時間加熱する。混合物を室温に冷
却し、ろ過し、50 mlヘキサンで2回、メタノールで2回
洗う。次にろ液を約80℃で3時間炉内乾燥すると、共有
結合された非架橋PEI-PrSi-CPG生成物を生ずる。
以下の実施例は本発明を例示するために提示されてい
る。
実施例１ トルエン250 ml中の調製例AのPEI-PrSi-シリカゲル生成
物50 gに、かきまぜながら無水マレイン酸20 gを加え
る。反応混合物を約65℃に4.5時間加熱する。反応生成
物をろ過しメタノールで2回洗い、次に約80℃で約1.5時
間炉内乾燥する。収量：57.7 g。分析：C 8.78%，H 1.4
7%，N 2.13%，滴定：0.65 meq/g．次にこの反応生成物2
0 gと1N NaOH 13 mlとを水100 ml中のメタ重亜硫酸ナト
リウム9.5 gと混合し、十分に混合する。反応混合物を
空気中で約80℃の熱浴中に約6時間置く。反応生成物を
ろ過し、水で2回とメタノールで2回次々に洗い、乾燥の
ため約80℃の炉に約3.5時間入れる。収量：20.62 g．分
析：C 7.26%，H 1.56%，N 1.94%，S 2.03%，スルホン酸
0.634 meq/g。
実施例２ 実施例1の手順をくり返すが、調製例AのPEI-PrSi-シリ
カゲル生成物の代わりに調製例BのPEI-PrSi-シリカゲル
生成物50 gを使用すると、対応するN-アシル化PEI-PrSi
-シリカゲル結合相のスルホン化誘導体を生ずる。
実施例３ 実施例1の手順をくり返すが、調製例AのPEI-PrSi-シリ
カゲル生成物の代わりに調製例CのPEI-PrSi-CPG生成物
の相当量を使用して、対応するN-アシル化PEI-PrSi-CPG
結合相のスルホン化誘導体を生ずる。
実施例４ 実施例1の手順をくり返すが、無水マレイン酸の代わり
に無水シトラコン酸の相当量を使用して、対応するN-ア
シル化PEI-PrSi-シリカゲル結合相のスルホン化誘導体
を生ずる。
実施例５ 実施例1の手順をくり返すが、無水マレイン酸の代わり
に無水グルタコン酸の相当量を使用して、対応するN-ア
シル化PEI-PrSi-シリカゲル結合相のスルホン化誘導体
を生ずる。
実施例６ 実施例1の手順をくり返すが、無水マレイン酸の代わり
に無水イタコン酸の相当量を使用して、対応するN-アシ
ル化PEI-PrSi-シリカゲル結合相のスルホン化誘導体を
生ずる。
実施例７ 結合相として実施例1で得られるPEI-PrSi-シリカゲルの
スルホン化誘導体(約40ミクロン、約250オングストロー
ム)を標準的な分析カラム（4.6mm内径×250 mm長さ）に
高圧(7500 psi)でスラリー充填する。スラリーは、メタ
ノール25 ml中におけるPEI-PrSi-シリカゲルのスルホン
化誘導体3.0 gからなる。スラリーをカラムへポンプ送
りしてから、メタノールの追加100 mlを同じ圧力でカラ
ムに圧入する。カラムを高圧液体クロマトグラフィ装置
に取り付け、280 nmで一定の基線が観察されるまで、12
00 psiで1 ml/分の流量で500ミリモルNaOAc溶液(pH 7)
をカラムに圧入する。次に25 mMKH2PO4(pH 6)溶液を、
安定な基線が達成されるまで同じ流量でカラムに圧入す
る。25 mMKH2PO4からなる低塩緩衝液A中に溶解されたタ
ンパク混合物の溶液(100μl)をカラムに注入し、塩濃度
を30分間に1 ml/分で500 mM NaOAc，pH 7(緩衝液B)まで
高めることによってタンパク成分を溶離する。タンパク
混合物はチトクロームＣ500μg、ヘモグロビン500μg、
リゾチーム500μg及び卵白アルブミン500μgを含有し
た。各タンパクは互いによく分離された濃縮バンドとし
て溶離する。個々のタンパク類の典型的な量的回収率
は、例えばチトクロームＣ97%、ヘモグロビン96%、リゾ
チーム95%及び卵白アルブミン95%と、元の量の90%より
高かった。本実施例のカラムは、タンパク分離への100
時間のクロマトグラフィ使用後でも、クロマトグラフィ
性能に有意の低下を示さない。
実施例８ 結合相として実施例1で得られるPEI-PrSi-シリカゲルの
スルホン化誘導体(約40ミクロン、約300オングストロー
ム)を標準的な分析カラム（4.6mm内径×250 mm長さ）に
高圧(7500 psi)でスラリー充填する。スラリーは、メタ
ノール25 ml中におけるPEI-PrSi-シリカゲルのスルホン
化誘導体3.0 gからなる。スラリーをカラムへポンプ送
りしてから、メタノールの追加100 mlを同じ圧力でカラ
ムに圧入する。カラムを高圧液体クロマトグラフィ装置
に取り付け、280 nmで一定の基線が観察されるまで、12
00 psiで1 ml/分の流量で500ミリモルNaOAc溶液(pH 7)
をカラムに圧入する。次に25 mMKH2PO4(pH 6)溶液を、
安定な基線が達成されるまで同じ流量でカラムに圧入す
る。25 mM KH2PO4からなる低塩緩衝液A中に4倍希釈され
たハイブリドーマ細胞培地溶液(100μl)をカラムに注入
し、塩濃度を60分間に1 ml/分で500 mM NaOAc(緩衝液B)
まで高めることによってタンパク成分を溶離する。抗体
は、他のタンパク成分より後の勾配中に〉80%純度で溶
離される。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭61−264254（ＪＰ，Ａ)

Claims (34)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】式 ［式中 はシリカゲル又はガラスの主鎖であり、nはポリエチレ
    ンイミノプロピルシラン基の平均分子量を約 400ないし
    約1800とするような整数であり、qは0ないし1の整数で
    あり、Rは水素、-(-CH2-)x-H又は-(CH2-)m-COOHからな
    る群から選ばれ、ここでxは1又は2の整数であり、mは0
    又は1の整数であり、Rが水素又は-(-CH2-)x-Hの時に
    は、R1は-(-CH2-)p-COOH（pは0又は1の整数）であり、
    またRが-(-CH2-)m-COOHの時には、R1は水素又は-(CH2-)
    y-H（yは0又は1の整数）からなる群から選ばれる］の共
    有結合された非架橋ポリエチレンイミン結合相シリカの
    スルホン化誘導体。
  2. 【請求項２】結合相のシリカ主鎖が、約3ないし約70ミ
    クロンの平均粒径と約50ないし約1000Åの平均孔径をも
    つ粒状シリカゲル、又は約37ないし約177ミクロンの平
    均粒径と約40ないし約1000Åの平均孔径をもつ粒状の制
    御多孔ガラスから選ばれる、特許請求の範囲第1項のス
    ルホン化誘導体。
  3. 【請求項３】結合相のシリカ主鎖が約3ないし約70ミク
    ロンの平均粒径と約50ないし約1000Åの平均孔径をもつ
    粒状シリカゲルである、特許請求の範囲第2項のスルホ
    ン化誘導体。
  4. 【請求項４】粒状シリカゲルが約5ないし約40ミクロン
    の平均粒径と約50ないし約330Åの平均孔径をもち、nが
    ポリエチレンイミノプロピルシラン部分の平均分子量を
    約400ないし約600とするような整数である、特許請求の
    範囲第2項のスルホン化誘導体。
  5. 【請求項５】粒状シリカゲルが約40ないし約62ミクロン
    の平均粒径と約210ないし約520Ａの平均孔径をもち、n
    がポリエチレンイミノプロピルシラン部分の平均分子量
    を約1000とするような整数である、特許請求の範囲第2
    項のスルホン化誘導体。
  6. 【請求項６】q＝0、Rが水素、R1が-(-CH2-)p-COOHで、p
    が0である、特許請求の範囲第3項のスルホン化誘導体。
  7. 【請求項７】qが0、Rが-(-CH2-)x-H（xが1）、及びR1が
    -(-CH2-)p-COOH（pは0）である、特許請求の範囲第3項
    のスルホン化誘導体。
  8. 【請求項８】qが1、Rが水素、R1が-(-CH2-)p-COOHで、p
    が0である、特許請求の範囲第3項のスルホン化誘導体。
  9. 【請求項９】qが0、Rが-(CH2-)m-COOH（mは1）で、R1が
    水素である、特許請求の範囲第3項のスルホン化誘導
    体。
  10. 【請求項１０】式 ［式中 はシリカゲル又はガラスの主鎖であり、nはポリエチレ
    ンイミノプロピルシラン基の平均分子量を約 400ないし
    約1800とするような整数であり、qは0ないし1の整数で
    あり、Rは水素、-(-CH2-)x-H又は-(CH2-)m-COOHからな
    る群から選ばれ、ここでxは1又は2の整数、mは0又は1の
    整数であり、Rが水素又は-(-CH2-)x-Hの時には、R1は-
    (-CH2-)p-COOH（pは0又は1の整数）であり、又Rが-(-CH
    2-)m-COOHの時、R1は水素又は-(CH2-)y-H（yは0又は1の
    整数）からなる群から選ばれる］の共有結合された非架
    橋ポリエチレンイミン結合相シリカのN-アシル化誘導
    体。
  11. 【請求項１１】結合相のシリカ主鎖が、約3ないし約70
    ミクロンの平均粒径と約50ないし約1000Åの平均孔径を
    もつ粒状シリカゲル、又は約37ないし約177ミクロンの
    平均粒径と約40ないし約1000Åの平均孔径をもつ粒状制
    御多孔ガラスから選ばれる、特許請求の範囲第10項のN-
    アシル化誘導体。
  12. 【請求項１２】結合相のシリカ主鎖が約3ないし約70ミ
    クロンの平均粒径と約50ないし約1000Åの平均孔径をも
    つ粒状シリカゲルである、特許請求の範囲第12項のN-ア
    シル化誘導体。
  13. 【請求項１３】式 ［式中 はシリカゲル又はガラスの主鎖であり、nはポリエチレ
    ンイミノプロピルシラン基の平均分子量を約 400ないし
    約1800とするような整数であり、qは0ないし1の整数で
    あり、Rは水素、-(-CH2-)x-H又は-(CH2-)m-COOHからな
    る群から選ばれ、ここでxは1又は2の整数であり、mは0
    又は1の整数であり、Rが水素又は-(-CH2-)x-Hの時に
    は、R1は-(-CH2-)p-COOH（pは0又は1の整数）であり、
    またRが-(-CH2-)m-COOHの時には、R1は水素又は-(CH2-)
    y-H（yは0又は1の整数）からなる群から選ばれる］の共
    有結合された非架橋ポリエチレンイミン結合相シリカの
    スルホン化誘導体を充填したカラムからなる、液体クロ
    マトグラフィに適したクロマトグラフィカラム。
  14. 【請求項１４】結合相のシリカ主鎖が、約3ないし約70
    ミクロンの平均粒径と約50ないし約1000Åの平均孔径を
    もつ粒状シリカゲル、又は約37ないし約177ミクロンの
    平均粒径と約40ないし約1000Åの平均孔径をもつ粒状の
    制御多孔ガラスから選ばれる、特許請求の範囲第13項の
    クロマトグラフィカラム。
  15. 【請求項１５】結合相のシリカ主鎖が約3ないし約70ミ
    クロンの平均粒径と約50ないし約1000Åの平均孔径をも
    つ粒状シリカゲルである、特許請求の範囲第14項のクロ
    マトグラフィカラム。
  16. 【請求項１６】粒状シリカゲルが約5ないし約40ミクロ
    ンの平均粒径と約50ないし約330Åの平均孔径をもち、n
    がポリエチレンイミノプロピルシラン部分の平均分子量
    を約400ないし約600とするような整数である、特許請求
    の範囲第14項のクロマトグラフィカラム。
  17. 【請求項１７】粒状シリカゲルが約40ないし約62ミクロ
    ンの平均粒径と約210ないし約520Åの平均孔径をもち、
    nがポリエチレンイミノプロピルシラン部分の平均分子
    量を約1000とするような整数である、特許請求の範囲第
    14項のクロマトグラフィカラム。
  18. 【請求項１８】q＝0、Rが水素、R1が-(-CH2-)p-COOH
    で、pが0である、特許請求の範囲第15項のクロマトグラ
    フィカラム。
  19. 【請求項１９】qが0、Rが-(-CH2-)x-H（xが1）、及びR1
    が-(-CH2-)p-COOH（pは0）である、特許請求の範囲第15
    項のクロマトグラフィカラム。
  20. 【請求項２０】qが1、Rが水素、R1が-(-CH2-)p-COOH
    で、pが0である、特許請求の範囲第15項のクロマトグラ
    フィカラム。
  21. 【請求項２１】qが0、Rが-(CH2-)m-COOH（mは1）で、R1
    が水素である、特許請求の範囲第15項のクロマトグラフ
    ィカラム。
  22. 【請求項２２】試料からタンパクを分離精製するための
    固体相抽出方法において、式 ［式中 はシリカゲル又はガラスの主鎖であり、nはポリエチレ
    ンイミノプロピルシラン基の平均分子量を約 400ないし
    約1800とするような整数であり、qは0ないし1の整数で
    あり、Rは水素、-(-CH2-)x-H又は-(CH2-)m-COOHからな
    る群から選ばれ、ここでxは1又は2の整数であり、mは0
    又は1の整数であり、Rが水素又は-(-CH2-)x-Hの時に
    は、R1は-(-CH2-)p-COOH（pは0又は1の整数）であり、
    またRが-(-CH2-)m-COOHの時には、R1は水素又は-(CH2-)
    y-H（yは0又は1の整数）からなる群から選ばれる］の共
    有結合された非架橋ポリエチレンイミン結合相シリカの
    スルホン化誘導体を固体相として使用することからなる
    方法。
  23. 【請求項２３】結合相のシリカ主鎖が、約3ないし約70
    ミクロンの平均粒径と約50ないし約1000Åの平均孔径を
    もつ粒状シリカゲル、又は約37ないし約177ミクロンの
    平均粒径と約40ないし約1000Åの平均孔径をもつ粒状の
    制御多孔ガラスから選ばれる、特許請求の範囲第22項の
    方法。
  24. 【請求項２４】結合相のシリカ主鎖が約3ないし約70ミ
    クロンの平均粒径と約50ないし約1000Åの平均孔径をも
    つ粒状シリカゲルである、特許請求の範囲第23項の方
    法。
  25. 【請求項２５】粒状シリカゲルが約5ないし約40ミクロ
    ンの平均粒径と約50ないし約330Åの平均孔径をもち、n
    がポリエチレンイミノプロピルシラン部分の平均分子量
    を約400ないし約600とするような整数である、特許請求
    の範囲第23項の方法。
  26. 【請求項２６】粒状シリカゲルが約40ないし約62ミクロ
    ンの平均粒径と約210ないし約520Åの平均孔径をもち、
    nがポリエチレンイミノプロピルシラン部分の平均分子
    量を約1000とするような整数である、特許請求の範囲第
    23項の方法。
  27. 【請求項２７】q＝0、Rが水素、R1が-(-CH2-)p-COOH
    で、pが0である、特許請求の範囲第24項の方法。
  28. 【請求項２８】qが0、Rが-(-CH2-)x-H（xが1）、及びR1
    が-(-CH2-)p-COOH（pは0）である、特許請求の範囲第24
    項の方法。
  29. 【請求項２９】qが1、Rが水素、R1が-(-CH2-)p-COOH
    で、pが0である、特許請求の範囲第24項の方法。
  30. 【請求項３０】qが0、Rが-(CH2-)m-COOH（mは1）で、R1
    が水素である、特許請求の範囲第24項の方法。
  31. 【請求項３１】約5以下の等電点をもつタンパクを分離
    精製することからなる特許請求の範囲第22〜30項の何れ
    か一に記載の方法。
  32. 【請求項３２】卵白アルブミンと牛血清アルブミンから
    選ばれるタンパクの分離精製用の、特許請求の範囲第31
    項による固体相抽出法。
  33. 【請求項３３】共有結合された非架橋ポリエチレンイミ
    ノプロピルシリカゲル又はポリエチレンイミノプロピル
    ガラスを、式 ［式中qは0ないし1の整数であり、Rは水素、-(-CH2-)x-
    H又は-(CH2-)m-COOHからなる群から選ばれ、ここでxは1
    又は2の整数であり、mは0又は1の整数であり、Rが水素
    又は-(-CH2-)x-Hの時には、R1は-(-CH2-)p-COOH（pは0
    又は1の整数）であり、またRが-(-CH2-)m-COOHの時に
    は、R1は水素又は-(CH2-)y-H（yは0又は1の整数）から
    なる群から選ばれる］の酸又はその酸無水物又は酸ハラ
    イドであるアシル化剤と反応させ、生ずるN-アシル化ポ
    リエチレンイミノプロピル結合相反応生成物を酸素給源
    の存在下に水溶性重亜硫酸塩又は水溶性重亜硫酸塩前駆
    体と反応させることからなる、 式 ［式中 はシリカゲル又はガラスの主鎖であり、nはポリエチレ
    ンイミノプロピルシラン基の平均分子量を約 400ないし
    約1800とするような整数であり、q、R及びR1は上に定義
    されたとおり］の共有結合された非架橋ポリエチレンイ
    ミン結合相シリカのスルホン化誘導体の製法。
  34. 【請求項３４】アシル化試薬が無水マレイン酸であり、
    水溶性重亜硫酸塩前駆体がメタ重亜硫酸ナトリウムであ
    る、特許請求の範囲第33項の方法。
JP62049000A 1986-03-06 1987-03-05 アシル化ポリエチレンイミン結合相シリカ生成物のスルホン酸誘導体類 Expired - Lifetime JPH0647454B2 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/837,051 US4661248A (en) 1986-03-06 1986-03-06 Sulfonic derivatives of acylated polyethyleneimine bonded phase silica products
US837051 1986-03-06

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS62235207A JPS62235207A (ja) 1987-10-15
JPH0647454B2 true JPH0647454B2 (ja) 1994-06-22

Family

ID=25273379

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP62049000A Expired - Lifetime JPH0647454B2 (ja) 1986-03-06 1987-03-05 アシル化ポリエチレンイミン結合相シリカ生成物のスルホン酸誘導体類

Country Status (12)

Country Link
US (1) US4661248A (ja)
EP (1) EP0237301B1 (ja)
JP (1) JPH0647454B2 (ja)
KR (1) KR910005189B1 (ja)
AT (1) ATE52711T1 (ja)
AU (1) AU586533B2 (ja)
CA (1) CA1291593C (ja)
DE (1) DE3762706D1 (ja)
DK (1) DK173805B1 (ja)
IE (1) IE59567B1 (ja)
IL (1) IL81740A (ja)
NZ (1) NZ219033A (ja)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3465192D1 (en) * 1983-03-16 1987-09-10 Hoffmann La Roche Liquid crystal components having an alkenyl chain
US5066395A (en) * 1986-03-06 1991-11-19 J. T. Baker Inc. N-acylated derivatives of polyethyleneimine bonded phase silica products
US4904632A (en) * 1987-06-19 1990-02-27 Pesek Joseph J Surface-modified chromatographic separation material
IL86767A (en) * 1987-09-04 1993-02-21 Jerald S Bradshaw Reed M Izatt Recovery of ions present at low concentrations in solutions containing other ions
US5153166A (en) * 1988-08-18 1992-10-06 Trustees Of At Biochem Chromatographic stationary supports
US5085779A (en) * 1989-06-07 1992-02-04 J. T. Baker, Inc. Polyethyleneimine matrixes for affinity chromatography
US5092992A (en) * 1989-06-07 1992-03-03 J. T. Baker Inc. Polyethyleneimine matrixes for affinity chromatography
EP0403700B1 (en) * 1989-06-20 1992-08-05 J.T. Baker Inc. Polyethyleneimine matrixes for affinity chromatography
US5087359A (en) * 1989-08-07 1992-02-11 J. T. Baker Inc. Quaternized PEI silica solid supports for chromatography
US5017540A (en) * 1989-09-15 1991-05-21 Sandoval Junior E Silicon hydride surface intermediates for chemical separations apparatus
WO1991009117A1 (en) * 1989-12-20 1991-06-27 The Procter & Gamble Company Process for isolating galactose oxidase
US5149646A (en) * 1989-12-20 1992-09-22 The Procter & Gamble Company Process for isolating galactose oxidase
US5243471A (en) * 1991-01-10 1993-09-07 Hewlett-Packard Company Method and apparatus for detecting a start of data position in differing tracks
US5695882A (en) * 1995-08-17 1997-12-09 The University Of Montana System for extracting soluble heavy metals from liquid solutions
JP5059312B2 (ja) * 2005-09-16 2012-10-24 Ｈｏｙａ株式会社 高分散性リン酸カルシウム系化合物ナノ粒子及びその製造方法
FR2917733B1 (fr) * 2007-06-22 2011-05-06 Commissariat Energie Atomique Particules inorganiques organomodifiees, procede de preparation de celles-ci et utilisation dans un materiau composite pour membrane de pile a combustible.
KR102196230B1 (ko) 2012-09-17 2020-12-29 더블유.알. 그레이스 앤드 캄파니-콘. 크로마토그래피 매질 및 장치
CN107847907A (zh) 2014-05-02 2018-03-27 格雷斯公司 官能化载体材料以及制备和使用官能化载体材料的方法
KR102566292B1 (ko) * 2015-06-05 2023-08-10 더블유.알. 그레이스 앤드 캄파니-콘. 흡착성 바이오프로세싱 정화제와 이의 제조 및 사용 방법

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3987058A (en) * 1975-02-27 1976-10-19 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Preparation and uses of stable, bound stationary phases
JPS5380291A (en) * 1976-12-24 1978-07-15 Maruzen Oil Co Ltd Filler for high speed liquid chromatography
JPS5956161A (ja) * 1982-09-24 1984-03-31 Hitachi Chem Co Ltd 液体クロマトグラフイ−用カラム充てん剤
US4560704A (en) * 1982-11-12 1985-12-24 Purdue Research Foundation Polyamine based bonded phase chromatography
US4540486A (en) * 1983-11-25 1985-09-10 J. T. Baker Chemical Company Polyethylenimine bound chromatographic packing
US4523997A (en) * 1984-03-02 1985-06-18 J. T. Baker Chemical Company Affinity chromatography matrix with built-in reaction indicator
US4551245A (en) * 1985-04-22 1985-11-05 J. T. Baker Chemical Co. Acylated polyethylenimine bound chromatographic packing
US4606825A (en) * 1985-04-22 1986-08-19 J. T. Baker Chemical Company Purification of immunoglobulin G

Also Published As

Publication number Publication date
DK114087D0 (da) 1987-03-05
IL81740A (en) 1990-06-10
NZ219033A (en) 1990-03-27
DE3762706D1 (de) 1990-06-21
DK114087A (da) 1987-09-07
ATE52711T1 (de) 1990-06-15
KR870008932A (ko) 1987-10-22
DK173805B1 (da) 2001-11-05
US4661248A (en) 1987-04-28
JPS62235207A (ja) 1987-10-15
EP0237301A2 (en) 1987-09-16
IE59567B1 (en) 1994-03-09
AU586533B2 (en) 1989-07-13
AU6857587A (en) 1987-09-10
EP0237301B1 (en) 1990-05-16
CA1291593C (en) 1991-10-29
IE870190L (en) 1987-09-06
EP0237301A3 (en) 1988-02-03
IL81740A0 (en) 1987-10-20
KR910005189B1 (ko) 1991-07-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH0647454B2 (ja) アシル化ポリエチレンイミン結合相シリカ生成物のスルホン酸誘導体類
US4551245A (en) Acylated polyethylenimine bound chromatographic packing
EP0143423B1 (en) Polyethylenimide bound chromatographic packing
US4721573A (en) Use of sulfonic derivatives of acylated polyethyleneimine bonded phase silica products
KR20060125788A (ko) 기재에 결합하는 극성 실란 및 크로마토그래피에서 결합된기재의 용도
KR100975451B1 (ko) 극성 실란 및 실리카 지지체 상의 이의 용도
KR20050105496A (ko) 금속 킬레이트 친화성 리간드의 형성 방법
US5066395A (en) N-acylated derivatives of polyethyleneimine bonded phase silica products
US9925522B2 (en) Doped materials for reverse phase chromatography
JP4570052B2 (ja) 疎水性相互作用クロマトグラフィー用リガンドの製造法
US9610576B2 (en) Hydrolytically stable ion-exchange stationary phases and uses thereof
US8138306B2 (en) Separation method
DK173826B1 (da) Fast-fase-ekstraktionsproces til rensning og fraskillelse af protein fra en prøve
CN114618451A (zh) 一种弱阳离子交换色谱固定相及其制备及应用
WO2024068682A1 (en) Chromatography ligand and chromatography material, and uses thereof
CN114618460A (zh) 一种含氟色谱固定相及其制备和应用

Legal Events

Date Code Title Description
R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

EXPY Cancellation because of completion of term