JPS62235207A - アシル化ポリエチレンイミン結合相シリカ生成物のスルホン酸誘導体類 - Google Patents

アシル化ポリエチレンイミン結合相シリカ生成物のスルホン酸誘導体類

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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野コ 本発明は新規な結合相シリカ類に、またタンパク、特に
約５以下の等電点をもつタンパクの分離精製におけるそ
れらの使用、及びそれらの調製に関する。更に詳しくは
、本発明はドアシル化された共有結合の非架橋ポリエチ
レンイミン結合相シリカ生成物のスルホン化誘導体類と
、タンパク類、特に約５以下の等電点をもつタンパク類
の分離精製用に液体クロマトグラフィのカラム充填剤に
適した固体相としてのそれらの使用、及びそれらの製造
に間する。
［先行技術］ アルバート（Ａｌｐｅｒｔ）及びレイニエ（Ｒｅｇｎｉ
ｅｒ）は、Ｊ、　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ、　　１８５巻
３７５−３９２頁（１９７９年）で、ポリエチレンイミ
ン（ＰＥＩ）がシリカ表面に吸着され、それによって多
官能価オキシラン類によって重合体層へ架橋される隣接
吸着ＰＥ１分子へ十分な第−級及び第二級イミノ基が提
供されることを示した。最近、架橋ポリエチレンイミン
で被覆された微粒子シリカのカラムによる高性能液体ク
ロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を用いた合成オリゴヌクレ
オチドの分離がティー・ジー・ローソン（Ｔ、Ｇ、　Ｌ
ａ豐５ｏｎ）ら、Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　　１
３３巻８５−９３頁（１９８３年）による文献中に報告
された。
もっと最近では、１９８５年９月１０日に交付された合
衆国特許第４，５４０，４８６号でヒユー・ラムスデン
（）Ｉｕｇｈ　Ｒａｍ５ｄｅｎ）により、新しい共有結
合された非架橋ポリエチレンイミノプロビルトリメトキ
シシランシリカゲル（ＰＣＩ−ＰｒＳｉ−シリカゲル）
及びポリエチレンイミノプロピルトリメトキシシラン制
御多孔ガラス（ＰＥＩ−ＰｒＳｉ−ＣＰＧ）結合相生成
物が、タンパク混合物の分離及び分析に有用であると記
述された。
ラムスデンの共有結合された非架１１ｊＰＥｌ−ＰｒＳ
ｉ−シリカゲル及びＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−ＣＰＧ生成物は
、本発明によってＮ−アシル化される基質を構成してい
るから、同合衆国特許第４　、５４０　、４８６号の開
示は、これへの参照によって完全な形で本明細書へ取入
れられている。
［発明が解決しようとする問題点］ ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−シリカゲル及びＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−
ＣＰＧ結合相生成物はタンパク類の分離精製用液体クロ
マトグラフィのカラム充填用固体相として極めて有用で
あることがわかったが、これらの結合相生成物は、ある
タンパク類には十分に強力な陽イオン交換体ではないこ
とがわかり、従ってそのようなタンパク類の分離精製は
困難ないし不可能となっていた。
特に低い等電点、すなわち約５以下の等電点をもつタン
パク類の分離精製には、これが問題であることがわかっ
た０例えば、この結合相は卵白アルブミンや牛血清アル
ブミンのようなタンパク類については、十分に受入れら
れる分離精製を提供しない。
従って、約５以下の等電点をもつタンパク類の適切な分
離を可能とし、かつあるタンパク類に対して強力な陽イ
オン交換体であるような固体結合相生成物を提供するこ
とは、非常に望ましい。更に、２以上の種々のｐＨで実
質的に完全に荷電され、これまで可能なものより大きな
選択性を提供するような固体結合相生成物を提供するこ
とは、非常に望ましい。更に、これまでより強力にタン
パク類を結合させ、各Ｃ００−の位置に隣接するＳＯ３
−基を導入することによフて、より高い能力を提供する
ような固体結合相生成物を提供することは有利であろう
。また、スルホン酸基があるので５以下の等電点をもつ
タンパク類を結合させ、スルホン酸基とカルボン酸基の
両方を合わせた結合力のため５より大きい等電点をもつ
タンパクをも結合させるような固体結合相タンパク類を
提供することは、非常に有利であろう。
［問題点を解決する手段］ 上記ラムスデンの合衆国特許第４　、５４０　、４８６
号の共有結合された非架ｔ！ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−シリカ
ゲル及びＰＥ１−Ｐｒ５ｉ−ＣＰＧ結合相生成物のイミ
ノ及びアミノ官能基をＮ−アシル化し、更にＮ−アシル
化反応生成物を重亜硫酸カリウム又はナトリウムのよう
な水溶性重亜硫酸塩又は水溶性重亜硫酸塩前駆体と反応
させると、タンパク類、特に低い等電点をもつタンパク
類の分離精製に固体相として有用なアシル化ポリエチレ
ンイミン結合相シリカ生成物のスルホン化誘導体類が提
供される。
本発明のアシル化ポリエチレンイミン結合相シリカ生成
物のスルホン化誘導体類は、次式のものである。
ｎはポリエチレンイミノプロピルシラン基の平均分子量
を約４００ないし約１８００とするような整数であり、
ｑは０ないしｌの整数であり、Ｒは水素、−（−Ｃ）Ｉ
２−）、−Ｈ又は−（ＣＨ２−）、−ＣＯＯＨからなる
群から選ばれ、ここでＸはｌ又は２の整数、慣は０又は
ｌの整数であり、Ｒが水素又は−（−ｃｕ２−）、−Ｈ
の時には、Ｒ１は−（−ＣＨ２−）ｐ−ＣＯＯ）Ｉ　（
＋）はＯ又はｌの整数）であり、またＲが−（−ＣＨ２
−）ｍ−ＣＯＯ）Ｉの時には、Ｒ１は水素又は−（ＣＨ
２−）ｙ−１（（ｙは０又はｌの整数）からなる群から
選ばれる。ガラスは制御された多孔ガラス（ｃｏｎｔｒ
ｏｌ　１ｅｄｐｏｒｅ　ｇｌａｓｓ＋　ＣＰＧ）である
のが好ましい。
本発明のスルホン化誘導体類は、上記の合衆国特許第４
，５４０，４８６号の共有結合した非架橋ＰＥｌ−Ｐｒ
５１−シリカゲル及びＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−ＣＰＧ結合相
生成物から、式 Ｒ１−Ｃ）Ｉ＝Ｃ−（−ＣＨｚ−）ｑ−ＣＯＯＨ式■［
式中ｑ、　Ｒ及びＲ１は式！で定義されたとおり］の酸
、又はそのｒ１１無水物又は酸ハライドであるアシル化
剤でのＮ−アシル化によって容易につくられ、式 ％式％ ［式中ｎ、　ｑ、　Ｒ及びＲ１は式■で定義されたとお
り］のＮ−アシル化ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−シリカゲル及び
Ｎ−アシル化ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−ＣＰＧ反応生成物が提
供される。
次にアシル官能基上にスルホン基を導入するために、式
■のＮ−アシル化反応生成物を酸素給源の存在下に、水
溶性重亜硫酸塩又は水溶性重亜硫酸塩形成試薬（重亜硫
酸ナトリウム前駆体）、例えばメタ重亜硫酸ナトリウム
と反応させろと、それによって本発明の式■の新規なス
ルホン化誘導体類が提供される。
慣用の元素分析によって容易に決定できるＰＥｌ−Ｐｒ
５ｉ−シリカゲル又はＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−ＣＰＧ反応体
基質中の窒素％は、ＰＥ１部分の上のイミノ及びアミノ
官能基の相対的総数を表わす。ＰＥ１部分の上の実質′
　　的に全部のイミノ及びアミノ官能基と反応するのに
十分なアシル化剤が使用される。概してＮ−アシル化段
階は、不活性で非プロトン性の有機溶媒中で等量又はや
や過剰量のアシル化剤で容易に達成される。典型的な非
プロトン性溶媒は、例えばベンゼン、トルエン、キシレ
ン等のような芳香族炭化水素；テトラヒドロプラン、ジ
オキサン等のようなエーテル；及びヘキサン、ヘプタン
等のような脂肪族炭化水素を包含する。アシルハライド
を使用する時に、アシル化反応中に放出される酸を取り
上げるために、等量又はやや過剰量の酸除去剤、例えば
第三級アミン、好ましくは第三級アルキルアミンを有利
に使用できる。
典型的なアシル化剤は、例えばマレイン酸、フマール酸
、メサコン酸、シトラコン酸、グルタコン酸、イタコン
酸等のような式Ｈの酸類と、それらの酸無水物、酸ハラ
イド類、特に酸塩化物を包含する。アシル化剤として特
に好ましいのは、これらの酸の無水物、特に無水マレイ
ン酸である。
従って本発明は第一に、プロピルシリル（１’ｒｓｉ）
結合を経てシリカゲル又はガラスに共有結合された非架
橋ポリエチレン、イミン（ＰＣＩ）官能基を提供してい
る。この場合、ＰＥ１部分のイミノ及びアミノ官能基の
実質的に全部、すなわち８０％及び好ましくは９５１以
上がアシル官能基でアシル化され、このアシル官能基を
次に重亜硫酸塩形成反応体と反応させると、本発明の新
規なスルホン誘導体類が提供される。
Ｎ−アシル化ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−シリカゲル及びＮ−ア
シル化ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−ＣＰＧ反応生成物と重亜硫酸
塩又は重亜硫酸塩前駆体との反応は、酸素、空気、過硫
酸カリウム、過酸化ベンゾイル等のような酸素給源の存
在下に実施される。
本発明の固体相結合シリカ生成物の主鎖（バックボーン
）をなすシリカゲルとガラスは、約１ないし約７０ミク
ロンの平均粒径と約Ｏ１好ましくは約５０ないし約１０
００オングストローム単位の平均孔径をもつシリカゲル
であるか、又は約３７ないし約１７７ミクロンの平均粒
径と約０、好ましくは４０ないし約１０００オングスト
ローム単位の平均孔径をもつガラス、好ましくは粒状の
制御多孔ガラスと、約４００ないし約１８００の平均分
子量をもつポリエチレンイミノプロビルトリメトキシシ
ランとのものである。
式■のＮ−アシル化ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−シリカゲル及び
Ｎ−アシル化ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−ＣＰＧ結合相生成物の
スルホン化誘導体類は、カラムクロマトグラフィによる
タンパク類の分離精製用の新しい有用な結合相となるも
のであり、新式のＩ（ＰＬＣ計装化に特に適している。
充填剤は種々のメツシュサイズのものがあり、例えば約
５０ないし約６００メツシユでありうる。
式ｌのＮ−アシル化ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−シリカゲル結合
相生成物の好ましいスルホン化誘導体類は、約５ないし
約４０ミクロンの平均粒径と約５０ないし約３３０オン
グストローム単位の平均孔径をもつ粒状シリカゲルと約
４００ないし約６００の平均分子量をもつポリエチレン
イミノプロビルトリメトキシシランとの反応生成物から
得られるもの、及び約４０ないし約６２ミクロンの平均
粒径と約２５０ないし約３０オングストローム単位の平
均孔径をもつ粒状シリカゲルと約１０００の平均分子量
をもつポリエチレンイミノプロビルトリメトキシシラン
から得られるのもである。
式ＩのＮ−アシル化ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−シリカゲル及び
ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−ＣＰＧ結合相生成物の本スルホン化
誘導体類は強弱両方のイオンの相互作用に基づいてタン
パク類を分離するものと考えられる。これに基づいて分
離を行なう現在入手されるクロマトグラフィ基剤は、一
般に選択性の悪い巾の広いピークを与え、安定性が悪く
、低能力で、タンパク類の回収が非定量的であるので、
本生成物でタンパク類を分離する上での著しい利点は驚
異的かつ異例のものと考えられる。これと対照的に、本
発明のクロマトグラフィ基剤は良好な選択性をもち、く
っきりとした明確なピークを提供し、非常に安定であり
、高能力をもち、両方のタンパク塊の定量的な回収を示
し、酵素分離の場合には、防禦活性の著しい損失を生じ
ない。
更に、本発明の新規な結合相生成物により、緩衝液組成
物を変化させ、緩衝液ｐＨを変化させると種々のタンパ
ク混合物の相対的な溶離プロフィールを変えられる。
通常、本明細書に記載のクロマトグラフィ混合物は、高
イオン強度水溶液中でのシリカの固有の溶解度特性のた
めに、疎水性相互作用クロマトグラフィに使用される水
性の高イオン強度移動相で加水分解に不安定であると通
常は考えられているため、本発明はいっそう驚異的でさ
えある。このように、通常、シリカ基材を使用すると、
カラム寿命が必ず短くなると考えられている。しかし、
式ＩのＮ−アシル化ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−シリカゲル及び
ＰＥｌＰｒ５ｉ−ＣＰＧ結合相生成物の本スルホン化誘
導体類の場合は、これとは逆である。
そのほか、式ＩのＮ−アシル化ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−シリ
カゲル及びＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−ＣＰＧ結合相生成物のス
ルホン化誘導体類は、タンパクの分離精製においてより
高度の選択性を提供し、タンパクをより強力に結合し、
充填剤として使用するカラムにより高い能力を提供する
という利点をもっている。その上、これらの式Ｉ生成物
は、約２以上のｐＨで実質的に完全に荷電され、低い等
電点すなわち約５以下の等電点をもつタンパク、特に卵
白アルブミンや牛血清アルブミン等のようなタンパク類
の分離精製用に容易に使用できるほど十分強力な陽イオ
ン交換体である。
式Ｉの結合相生成物によって提供される別の利点は、こ
のような結合相がタンパク分離精製段階に使用される緩
衝液系のｐＨ変化を容易に許容する点である。
式■のＮ−アシル化ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−シリカゲル及び
Ｎ−アシル化ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−ＣＰＧ反応生成物も、
式Ｉのスルホン化誘導体類の調製用中間体として有用性
をもった新しい結合相生成物である。
以下の実施例では、以下の調製例でつくったＰＥ１−Ｐ
ｒ５ｉ−シリカゲル及びＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−ＣＰＧが出
発反応体として使用される。この反応体は単なる例示的
なものであり、以下の説明と上記合衆国特許第４゜５４
０　、４８６号の開示に従って、他のＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ
−シリカゲル及びＰＥ１ＰｒＳｉ−ＣＰＧ結合相を以下
の実施例に従って使用すると、本発明の式■の他のスル
ホン化誘導体類が提供されることが認められよう。
調製例Ａ　　ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−シリカゲル約４０ミク
ロンの平均粒径と２５０オングストロームの平均孔径を
もつシリカゲル１００ｇに、プロパツール５００１と約
５００の平均分子量をもつポリエチレンイミノプロピル
トリメトキシシラン４９．５　ｇ（４７，１モル）をか
きまぜながら加え、混合物を室温で約４８時間放置する
。次に反応混合物を真空ろ過し、ろ液を２−プロパツー
ル各４００１で２回及びメタノール各４００　ｍｌで２
回洗ってから、約８０℃で約４時間炉内乾燥した。生成
物を脱イオン水５００１で再スラリー化し、再びろ過し
、メタノールで数回洗い、次に約８０℃で二度目に４時
間オーブン乾燥すると共有結合したＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−
シリカゲル生成物的９５．５　ｇを生ずる。分析：　Ｃ
５，０８Ｘ、　Ｈ１，４３＄、及びＮ　２．２２Ｘ調製
例Ｂ　　ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−シリカゲル約５．２５ミク
ロンの平均粒径と約３３０オングストロームの平均孔径
をもつシリカゲル１００ｇに、トルエン５００１、水２
１及び約５００の平均分子量をもつポリエチレンイミノ
プロピルトリメトキシシランの５０χ冒／ジイソプロパ
ツール溶液５０１を加え、混合物をかきまぜ、室温に約
４８時間放置する。次に混合物をろ過し、ろ液をトルエ
ン各５００　ｍｌで２回、メタノール各５００１で２回
洗い、約８０℃で約２時間４５分炉内で乾燥する。生成
物を水に再スラリー化し、ろ過し、水とメタノールで洗
い、再び約８０℃で約１．５時間炉内乾燥する。収量９
３．０　ｇ、分析：　　Ｃ３，３１Ｘ、　Ｈ１，３０！
及び８１．２５＄。
調製例ＣＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−ＣＰＧ １２５ミクロンの平均粒径と２４０オングストロームの
平均孔径をもつ制御多孔ガラス１０　ｇのヘキサン５０
　ｍｌ中におけるスラリーに、平均分子量５００のポリ
エチレンイミノプロピルトリメトキシシランの５０χ−
７讐イソプロパツール溶液１９．７１　ｇを添加する。
混合物を室温で５分かきまぜ、次いて還流温度に約２時
間加熱する。混合物を室温に冷却し、ろ過し、５０　ｍ
ｌヘキサンで２回、メタノールで２回洗う。
次にろ液を約８０℃で３時閏炉内乾燥すると、共有結合
された非架橋ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−ＣＰＧ生成物を生ずる
。
以下の実施例は本発明を例示するために提示されている
。
実施例１ トルエン２５０１中の調製例ＡのＰＥＩ・Ｐｒ５ｉ−シ
リカゲル生成物５０　ｇに、かきまぜながら無水マレイ
ン酸２０　ｇを加える。反応混合物を約６５°Ｃに４．
５時間加熱する。反応生成物をろ過しメタノールで２回
洗い、次に約８０℃で約１．５時間炉内乾燥する。収ｊ
ｉ：　５７．７　ｇ、分析：　Ｃ８，７８Ｌ　１１１．
４７！、　Ｎ　２．１３Ｌ滴定：　０．６５　ｍｅｑ／
ｇ、　　次にこの反応生成物２０１ＨとＩＮ　Ｎａ０）
Ｉ　１３　ｍｌとを水１００１中のメタ重亜硫酸ナトリ
ウム９．５ｇと混合し、十分に混合する。反応混合物を
空気中で約８０℃の熱浴中に約６時間！＜。
反応生成物をろ過し、水で２回とメタノールで２回次々
に洗い、乾燥のため約８０℃の炉に約３．５時間入れる
。収量：　２０．６２　ｇ、分析：　Ｃ７，２６Ｌ　）
＋　１．５６Ｘ、　Ｎ　１．９４工、　Ｓ　２．０３Ｌ
スルホン酸０．６３４　ｍｅｑ／ｇ。
実施例２ 実施例１の手順をくり返すが、調製例＾のＰＥｌ−Ｐｒ
５１−シリカゲル生成物の代わりに調製例ＢのＰＥｌ−
Ｐｒ５１−シリカゲル生成物５０　ｇを使用すると、対
応するＮ−アシル化ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−シリカゲル結合
相のスルホン化誘導体を生ずる。
実施例３ 実施例１の手順をくり返すが、ＳＩＩ製例ＡのＰＥ１−
Ｐｒ５ｉ−シリカゲル生成物の代わりに調製例ＣのＰＥ
ｌ−Ｐｒ５１−ＣＰＧ生成物の相当量を使用して、対応
するＮ−アシル化Ｐεｌ−Ｐｒ５ｉ−ＣＰＧ結合相のス
ルホン化誘導体を生ずる。
実施例４ 実施例１の手順をくり返すが、無水マレイン酸の代わり
に無水シトラコン酸の相当量を使用して、対応するＮ−
アシル化ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−シリカゲル結合相のスルホ
ン化誘導体を生ずる。
実施例５ 実施例１の手順をくり返すが、無水マレイン酸の代わり
に無水グルタコン酸の相当量を使用して、対応するＮ−
アシル化ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−シリカゲル結合相のスルホ
ン化誘導体を生ずる。
実施例６ 実施例１０手順をくり返すが、無水マレイン酸の代わり
に無水イタコン酸の相当量を使用して、対応するＮ−ア
シル化ＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−シリカゲル結合相のスルホン
化誘導体を生ずる。
実施例７ 結合相として実施例１で得られるＰＥｌ−ＰｒＳｉ・シ
リカゲルのスルホン化誘導体（約４０ミクロン、約２５
０オングストローム）を標準的な分析カラム（４，６ｍ
ｍ内径ｘ２５０　ｍｍ長さ）に高圧（７５００ｐｓｉ）
でスラリー充填する。スラリーは、メタノール２５１中
におけるＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−シリカゲルのスルホン化誘
導体３．０ｇからなる。スラリーをカラムヘポンプ送り
してから、メタノールの追加１００１を同じ圧力でカラ
ムに圧入する。カラムを高圧液体クロマトグラフィ装置
に取り付け、２８０　ｎｍで一定の基線が観察されるま
で、１２００　ｐｓｉで１−１７分の流量で５００ミリ
モルＮａ０Ａｃ溶液（ｐＨ７）をカラムに圧入する。次
に２５１ＭＫＨ２ＰＯ４（１）Ｈ６）溶液を、安定な基
線が達成されるまで同じ流量でカラムに圧入する。　２
５　ａ＋ＭＫＨ２ＰＯ４ｂ）らなる低塩緩衝液Ａ中に溶
解されたタンパク混合物の溶液（１００μｍ）をカラム
に注入し、塩濃度を３０分間にＩ　ｍｌ／分で５００　
ｍＭ　Ｎａ０Ａｃ、　ｐＨ７（緩衝液Ｂ）まで高めるこ
とによってタンパク成分を溶離する。
タンパク混合物はチトクロームｃ　ｓｏｏμｇ、ヘモグ
ロビン５００μｇ、リゾチーム５００μｇ及び卵白アル
ブミン５００μｇを含有した。灸タンパクは互いによく
分離された濃縮バンドとして溶離する。個々のタンパク
類の典型的な量的回収率は、例えばチトクロームＣ９７
Ｌヘモグロビン９６ｚ、リゾチーム９５％及び卵白アル
ブミン９５χと、元の量の９０！より高かった。本実施
例のカラムは、タンパク分離への１００時間のクロマト
グラフィ使用後でも、クロマトグラフィ性能に有意の低
下を示さない。
実施例日 結合相として実施例１で得られるＰＥｌ４ｒＳｉ−シリ
カゲルのスルホン化誘導体（約４０ミクロン、約３００
オングストローム）を標準的な分析カラム（４，６ｍ＋
＋ｎ内径ｘ２５Ｏｎ＋ｍ長さ）に高圧（７５００ｐｓｉ
）でスラリー充填する。スラリーは、メタノール２５１
中におけるＰＥｌ−Ｐｒ５ｉ−シリカゲルのスルホン化
誘導体３．０　ｇからなる。スラリーをカラムへポンプ
送りしてから、メタノールの追加１００１を同じ圧力で
カラムに圧入する。カラムを高圧液体クロマトグラフィ
装置に取り付け、２８０　ｎｍで一定の基線が観察され
るまで、１２００　ｐｓｉで１　ｍｌ／分の流量で５０
０ミリモルＮａ０Ａｃ溶液（ｐＨ７）をカラムに圧入す
る０次に２５　ｍＭに８２ＰＯ４（＋）Ｈ６）溶液を、
安定な基線が達成されるまで同じ流量でカラムに圧入す
る＊　２５　ｍＭにＨ２ＰＯ４からなる低塩緩衝液Ａ中
に４倍希釈されたハイブリドーマ細胞培地溶液（１００
μＩ）をカラムに注入し、塩濃度を６０分間に１　ｍｌ
／分で５００　ｍＭ　Ｎａ０Ａｃ（緩衝液Ｂ）まで高め
ることによってタンパク成分を溶離する。
抗体は、他のタンパク成分より後の勾配中に〉８０！純
度で溶離される。
出願人　ジエイ　ティー　ペイカー　ケミカルカンパニ
ー

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中■はシリカゲル又はガラスの主鎖であり、ｎはポ
    リエチレンイミノプロピルシラン基の平均分子量を約４
    ００ないし約１８００とするような整数であり、ｑは０
    ないし１の整数であり、Ｒは水素、−（−ＣＨ＿２−）
    ＿ｘ−Ｈ又は−（ＣＨ＿２−）＿ｍ−ＣＯＯＨからなる
    群から選ばれ、ここでｘは１又は２の整数であり、ｍは
    ０又は１の整数であり、Ｒが水素又は−（−ＣＨ＿２−
    ）＿ｘ−Ｈの時には、Ｒ＾１は−（−ＣＨ＿２−）＿ｐ
    −ＣＯＯＨ（ｐは０又は１の整数）であり、またＲが−
    （−ＣＨ＿２−）＿ｍ−ＣＯＯＨの時には、Ｒ＾１は水
    素又は−（ＣＨ＿２−）＿ｙ−Ｈ（ｙは０又は１の整数
    ）からなる群から選ばれる］の共有結合された非架橋ポ
    リエチレンイミン結合相シリカのスルホン化誘導体。 ２、結合相のシリカ主鎖が、約３ないし約７０ミクロン
    の平均粒径と約５０ないし約１０００Åの平均孔径をも
    つ粒状シリカゲル、又は約３７ないし約１７７ミクロン
    の平均粒径と約４０ないし約１０００Åの平均孔径をも
    つ粒状の制御多孔ガラスから選ばれる、特許請求の範囲
    第１項のスルホン化誘導体。 ３、結合相のシリカ主鎖が約３ないし約７０ミクロンの
    平均粒径と約５０ないし約１０００Åの平均孔径をもつ
    粒状シリカゲルである、特許請求の範囲第２項のスルホ
    ン化誘導体。 ４、粒状シリカゲルが約５ないし約４０ミクロンの平均
    粒径と約５０ないし約３３０Åの平均孔径をもち、ｎが
    ポリエチレンイミノプロピルシラン部分の平均分子量を
    約４００ないし約６００とするような整数である、特許
    請求の範囲第２項のスルホン化誘導体。 ５、粒状シリカゲルが約４０ないし約６２ミクロンの平
    均粒径と約２１０ないし約５２０Ａの平均孔径をもち、
    ｎがポリエチレンイミノプロピルシラン部分の平均分子
    量を約１０００とするような整数である、特許請求の範
    囲第２項のスルホン化誘導体。 ６、ｑ＝０、Ｒが水素、Ｒ＾１が−（−ＣＨ＿２−）＿
    ｐ−ＣＯＯＨで、ｐが０である、特許請求の範囲第３項
    のスルホン化誘導体。 ７、ｑが０、Ｒが−（−ＣＨ＿２−）＿ｘ−Ｈ（ｘが１
    ）、及びＲ＾１が−（−ＣＨ＿２−）＿ｐ−ＣＯＯＨ（
    ｐは０）である、特許請求の範囲第３項のスルホン化誘
    導体。 ８、ｑが１、Ｒが水素、Ｒ＾１が−（−ＣＨ＿２−）＿
    ｐ−ＣＯＯＨで、ｐが０である、特許請求の範囲第３項
    のスルホン化誘導体。 ９、ｑが０、Ｒが−（ＣＨ＿２−）＿ｍ−ＣＯＯＨ（ｍ
    は１）で、Ｒ＾１が水素である、特許請求の範囲第３項
    のスルホン化誘導体。 １０、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中■はシリカゲル又はガラスの主鎖であり、ｎはポ
    リエチレンイミノプロピルシラン基の平均分子量を約４
    ００ないし約１８００とするような整数であり、ｑは０
    ないし１の整数であり、Ｒは水素、−（−ＣＨ＿２−）
    ＿ｘ−Ｈ又は−（ＣＨ＿２−）＿ｍ−ＣＯＯＨからなる
    群から選ばれ、ここでｘは１又は２の整数、ｍは０又は
    １の整数てあり、Ｒが水素又は−（−ＣＨ＿２−）＿ｘ
    −Ｈの時には、Ｒ＾１は−（−ＣＨ＿２−）＿ｐ−ＣＯ
    ＯＨ（ｐは０又は１の整数）であり、又Ｒが−（−ＣＨ
    ＿２−）＿ｍ−ＣＯＯＨの時、Ｒ＾１は水素又は−（Ｃ
    Ｈ＿２−）＿ｙ−Ｈ（ｙは０又は１の整数）からなる群
    から選ばれる］の共有結合された非架橋ポリエチレンイ
    ミン結合相シリカのＮ−アシル化誘導体。 １１、結合相のシリカ主鎖が、約３ないし約７０ミクロ
    ンの平均粒径と約５０ないし約１０００Åの平均孔径を
    もつ粒状シリカゲル、又は約３７ないし約１７７ミクロ
    ンの平均粒径と約４０ないし約１０００Åの平均孔径を
    もつ粒状制御多孔ガラスから選ばれる、特許請求の範囲
    第１０項のＮ−アシル化誘導体。 １２、結合相のシリカ主鎖が約３ないし約７０ミクロン
    の平均粒径と約５０ないし約１０００Åの平均孔径をも
    つ粒状シリカゲルである、特許請求の範囲第１２項のＮ
    −アシル化誘導体。 １３、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中■はシリカゲル又はガラスの主鎖であり、ｎはポ
    リエチレンイミノプロピルシラン基の平均分子量を約４
    ００ないし約１８００とするような整数であり、ｑは０
    ないし１の整数であり、Ｒは水素、−（−ＣＨ＿２−）
    ＿ｘ−Ｈ又は−（ＣＨ＿２−）＿ｍ−ＣＯＯＨからなる
    群から選ばれ、ここでｘは１又は２の整数であり、ｍは
    ０又は１の整数であり、Ｒが水素又は−（−ＣＨ＿２−
    ）＿ｘ−Ｈの時には、Ｒ＾１は−（−ＣＨ＿２−）＿ｐ
    −ＣＯＯＨ（ｐは０又は１の整数）であり、またＲが−
    （−ＣＨ＿２−）＿ｍ−ＣＯＯＨの時には、Ｒ＾１は水
    素又は−（ＣＨ＿２−）＿ｙ−Ｈ（ｙは０又は１の整数
    ）からなる群から選ばれる］の共有結合された非架橋ポ
    リエチレンイミン結合相シリカのスルホン化誘導体を充
    填したカラムからなる、液体クロマトグラフィに適した
    クロマトグラフィカラム。 １４、結合相のシリカ主鎖が、約３ないし約７０ミクロ
    ンの平均粒径と約５０ないし約１０００Åの平均孔径を
    もつ粒状シリカゲル、又は約３７ないし約１７７ミクロ
    ンの平均粒径と約４０ないし約１０００Åの平均孔径を
    もつ粒状の制御多孔ガラスから選ばれる、特許請求の範
    囲第１３項のクロマトグラフィカラム。 １５、結合相のシリカ主鎖が約３ないし約７０ミクロン
    の平均粒径と約５０ないし約１０００Åの平均孔径をも
    つ粒状シリカゲルである、特許請求の範囲第１４項のク
    ロマトグラフィカラム。 １６、粒状シリカゲルが約５ないし約４０ミクロンの平
    均粒径と約５０ないし約３３０Åの平均孔径をもち、ｎ
    がポリエチレンイミノプロピルシラン部分の平均分子量
    を約４００ないし約６００とするような整数である、特
    許請求の範囲第１４項のクロマトグラフィカラム。 １７、粒状シリカゲルが約４０ないし約６２ミクロンの
    平均粒径と約２１０ないし約５２０Åの平均孔径をもち
    、ｎがポリエチレンイミノプロピルシラン部分の平均分
    子量を約１０００とするような整数である、特許請求の
    範囲第１４項のクロマトグラフィカラム。 １８、ｑ＝０、Ｒが水素、Ｒ＾１が−（−ＣＨ＿２−）
    ＿ｐ−ＣＯＯＨで、ｐが０である、特許請求の範囲第１
    ５項のクロマトグラフィカラム。 １９、ｑが０、Ｒが−（−ＣＨ＿２−）＿ｘ−Ｈ（ｘが
    １）、及びＲ＾１が−（−ＣＨ＿２−）＿ｐ−ＣＯＯＨ
    （ｐは０）である、特許請求の範囲第１５項のクロマト
    グラフィカラム。 ２０、ｑが１、Ｒが水素、Ｒ＾１が−（−ＣＨ＿２−）
    ＿ｐ−ＣＯＯＨで、ｐが０である、特許請求の範囲第１
    ５項のクロマトグラフィカラム。 ２１、ｑが０、Ｒが−（ＣＨ＿２−）＿ｍ−ＣＯＯＨ（
    ｍは１）で、Ｒ＾１が水素である、特許請求の範囲第１
    ５項のクロマトグラフィカラム。 ２２、試料からタンパクを分離精製するための固体相抽
    出方法において、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中■はシリカゲル又はガラスの主鎖であり、ｎはポ
    リエチレンイミノプロピルシラン基の平均分子量を約４
    ００ないし約１８００とするような整数であり、ｑは０
    ないし１の整数であり、Ｒは水素、−（−ＣＨ＿２−）
    ＿ｘ−Ｈ又は−（ＣＨ＿２−）＿ｍ−ＣＯＯＨからなる
    群から選ばれ、ここでｘは１又は２の整数であり、ｍは
    ０又は１の整数であり、Ｒが水素又は−（−ＣＨ＿２−
    ）＿ｘ−Ｈの時には、Ｒ＾１は−（−ＣＨ＿２−）＿ｐ
    −ＣＯＯＨ（ｐは０又は１の整数）であり、またＲが−
    （−ＣＨ＿２−）＿ｍ−ＣＯＯＨの時には、Ｒ＾１は水
    素又は−（ＣＨ＿２−）＿ｙ−Ｈ（ｙは０又は１の整数
    ）からなる群から選ばれる］の共有結合された非架橋ポ
    リエチレンイミン結合相シリカのスルホン化誘導体を固
    体相として使用することからなる方法。 ２３、結合相のシリカ主鎖が、約３ないし約７０ミクロ
    ンの平均粒径と約５０ないし約１０００Åの平均孔径を
    もつ粒状シリカゲル、又は約３７ないし約１７７ミクロ
    ンの平均粒径と約４０ないし約１０００Åの平均孔径を
    もつ粒状の制御多孔ガラスから選ばれる、特許請求の範
    囲第２２項の方法。 ２４、結合相のシリカ主鎖が約３ないし約７０ミクロン
    の平均粒径と約５０ないし約１０００Åの平均孔径をも
    つ粒状シリカゲルである、特許請求の範囲第２３項の方
    法。 ２５、粒状シリカゲルが約５ないし約４０ミクロンの平
    均粒径と約５０ないし約３３０Åの平均孔径をもち、ｎ
    がポリエチレンイミノプロピルシラン部分の平均分子量
    を約４００ないし約６００とするような整数である、特
    許請求の範囲第２３項の方法。 ２６、粒状シリカゲルが約４０ないし約６２ミクロンの
    平均粒径と約２１０ないし約５２０Åの平均孔径をもち
    、ｎがポリエチレンイミノプロピルシラン部分の平均分
    子量を約１０００とするような整数である、特許請求の
    範囲第２３項の方法。 ２７、ｑ＝０、Ｒが水素、Ｒ＾１が−（−ＣＨ＿２−）
    ＿ｐ−ＣＯＯＨで、ｐが０である、特許請求の範囲第２
    ４項の方法。 ２８、ｑが０、Ｒが−（−ＣＨ＿２−）＿ｘ−Ｈ（ｘが
    １）、及びＲ＾１が−（−ＣＨ＿２−）＿ｐ−ＣＯＯＨ
    （ｐは０）である、特許請求の範囲第２４項の方法。 ２９、ｑが１、Ｒが水素、Ｒ＾１が−（−ＣＨ＿２−）
    ＿ｐ−ＣＯＯＨで、ｐが０である、特許請求の範囲第２
    ４項の方法。 ３０、ｑが０、Ｒが−（ＣＨ＿２−）＿ｍ−ＣＯＯＨ（
    ｍは１）で、Ｒ＾１が水素である、特許請求の範囲第２
    ４項の方法。 ３１、約５以下の等電点をもつタンパクを分離精製する
    ことからなる特許請求の範囲第２２〜３０項の何れか一
    に記載の方法。 ３２、卵白アルブミンと牛血清アルブミンから選ばれる
    タンパクの分離精製用の、特許請求の範囲第３１項によ
    る固体相抽出法。 ３３、共有結合された非架橋ポリエチレンイミノプロピ
    ルシリカゲル又はポリエチレンイミノプロピルガラスを
    、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中ｑは０ないし１の整数であり、Ｒは水素、−（−
    ＣＨ＿２−）＿ｘ−Ｈ又は−（ＣＨ＿２−）＿ｍ−ＣＯ
    ＯＨからなる群から選ばれ、ここでｘは１又は２の整数
    であり、ｍは０又は１の整数であり、Ｒが水素又は−（
    −ＣＨ＿２−）＿ｘ−Ｈの時には、Ｒ＾１は−（−ＣＨ
    ＿２−）＿ｐ−ＣＯＯＨ（ｐは０又は１の整数）であり
    、またＲが−（−ＣＨ＿２−）＿ｍ−ＣＯＯＨの時には
    、Ｒ＾１は水素又は−（ＣＨ＿２−）＿ｙ−Ｈ（ｙは０
    又は１の整数）からなる群から選ばれる］の酸又はその
    酸無水物又は酸ハライドであるアシル化剤と反応させ、
    生ずるＮ−アシル化ポリエチレンイミノプロピル結合相
    反応生成物を酸素給源の存在下に水溶性重亜硫酸塩又は
    水溶性重亜硫酸塩前駆体と反応させることからなる、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中■はシリカゲル又はガラスの主鎖であり、ｎはポ
    リエチレンイミノプロピルシラン基の平均分子量を約４
    ００ないし約１８００とするような整数であり、ｑ、Ｒ
    及びＲ＾１は上に定義されたとおり］の共有結合された
    非架橋ポリエチレンイミン結合相シリカのスルホン化誘
    導体の製法。 ３４、アシル化試薬が無水マレイン酸であり、水溶性重
    亜硫酸塩前駆体がメタ重亜硫酸ナトリウムである、特許
    請求の範囲第３３項の方法。
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NZ (1) NZ219033A (ja)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0326961A (ja) * 1989-06-20 1991-02-05 J T Baker Inc アフィニティークロマトグラフィー用のポリエチレンイミンマトリックス
JP2007076995A (ja) * 2005-09-16 2007-03-29 Pentax Corp 高分散性無機化合物ナノ粒子及びその製造方法
US11389783B2 (en) 2014-05-02 2022-07-19 W.R. Grace & Co.-Conn. Functionalized support material and methods of making and using functionalized support material

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0122389B1 (de) * 1983-03-16 1987-08-05 F. HOFFMANN-LA ROCHE & CO. Aktiengesellschaft Flüssigkristallkomponenten mit einer Alkenylseitenkette
US5066395A (en) * 1986-03-06 1991-11-19 J. T. Baker Inc. N-acylated derivatives of polyethyleneimine bonded phase silica products
US4904632A (en) * 1987-06-19 1990-02-27 Pesek Joseph J Surface-modified chromatographic separation material
IL86767A (en) * 1987-09-04 1993-02-21 Jerald S Bradshaw Reed M Izatt Recovery of ions present at low concentrations in solutions containing other ions
US5153166A (en) * 1988-08-18 1992-10-06 Trustees Of At Biochem Chromatographic stationary supports
US5085779A (en) * 1989-06-07 1992-02-04 J. T. Baker, Inc. Polyethyleneimine matrixes for affinity chromatography
US5092992A (en) * 1989-06-07 1992-03-03 J. T. Baker Inc. Polyethyleneimine matrixes for affinity chromatography
US5087359A (en) * 1989-08-07 1992-02-11 J. T. Baker Inc. Quaternized PEI silica solid supports for chromatography
US5017540A (en) * 1989-09-15 1991-05-21 Sandoval Junior E Silicon hydride surface intermediates for chemical separations apparatus
US5149646A (en) * 1989-12-20 1992-09-22 The Procter & Gamble Company Process for isolating galactose oxidase
CA2069629C (en) * 1989-12-20 1995-08-29 Laura Jane Crane Process for isolating galactose oxidase
US5243471A (en) * 1991-01-10 1993-09-07 Hewlett-Packard Company Method and apparatus for detecting a start of data position in differing tracks
US5695882A (en) * 1995-08-17 1997-12-09 The University Of Montana System for extracting soluble heavy metals from liquid solutions
FR2917733B1 (fr) * 2007-06-22 2011-05-06 Commissariat Energie Atomique Particules inorganiques organomodifiees, procede de preparation de celles-ci et utilisation dans un materiau composite pour membrane de pile a combustible.
CA2885263C (en) 2012-09-17 2021-11-16 W. R. Grace & Co.-Conn. Chromatography media and devices
SG10201911134QA (en) * 2015-06-05 2020-01-30 Grace W R & Co Adsorbent bioprocessing clarification agents and methods of making and using the same

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3987058A (en) * 1975-02-27 1976-10-19 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Preparation and uses of stable, bound stationary phases
JPS5380291A (en) * 1976-12-24 1978-07-15 Maruzen Oil Co Ltd Filler for high speed liquid chromatography
JPS5956161A (ja) * 1982-09-24 1984-03-31 Hitachi Chem Co Ltd 液体クロマトグラフイ−用カラム充てん剤
US4560704A (en) * 1982-11-12 1985-12-24 Purdue Research Foundation Polyamine based bonded phase chromatography
US4540486A (en) * 1983-11-25 1985-09-10 J. T. Baker Chemical Company Polyethylenimine bound chromatographic packing
US4523997A (en) * 1984-03-02 1985-06-18 J. T. Baker Chemical Company Affinity chromatography matrix with built-in reaction indicator
US4551245A (en) * 1985-04-22 1985-11-05 J. T. Baker Chemical Co. Acylated polyethylenimine bound chromatographic packing
US4606825A (en) * 1985-04-22 1986-08-19 J. T. Baker Chemical Company Purification of immunoglobulin G

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0326961A (ja) * 1989-06-20 1991-02-05 J T Baker Inc アフィニティークロマトグラフィー用のポリエチレンイミンマトリックス
JP2007076995A (ja) * 2005-09-16 2007-03-29 Pentax Corp 高分散性無機化合物ナノ粒子及びその製造方法
US11389783B2 (en) 2014-05-02 2022-07-19 W.R. Grace & Co.-Conn. Functionalized support material and methods of making and using functionalized support material

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